Dopamien reseptor uitdrukking en verspreiding dinamiese verandering in die rat nucleus accumbens na onttrekking van kokaïen self-administrasie. (2010)

Proteïenkruiskoppeling

Hierdie metode is al voorheen beskryf (Boudreau en Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Die rotte is onthoof, hul brein is vinnig verwyder, en die hele NAc (of kern en dop subregio's) is op ys gesproke van 'n 2mm koronale gedeelte verkry deur gebruik te maak van 'n breinmatriks. Die hele NAc-weefsel is onmiddellik in 400μm snye gekap met behulp van 'n McIllwain weefselhacker (Vibratome, St Louis, MO), terwyl die kleiner kern- en dop subregio's met die hand met 'n skubbe gemaal is. Weefsel is dan by Eppendorf-buise gevoeg wat yskoue kunsmatige CSF bevat, gespik met 2 mM bis (sulfosuccinimidyl) suberaat (BS³; Pierce Biotegnologie, Rockford, IL). Die kruisbindingreaksie kan met sagte roering vir 30 min by 4 ° C voortgaan en word dan beëindig deur toevoeging van 100mM glikien (10 min by 4 ° C). Weefsel is gepelleteer deur kort sentrifugasie, weer opgeskort in yskoue lysisbuffer wat protease- en fosfataseremmers bevat, gesoneer vir 5 sek, en weer sentrifugeer. Alikotte van die supernatant is by -80 ° C gestoor totdat dit geanaliseer is deur Western blotting.

Western blot analise van DARs in verknoopt weefsel

Monsters (20-30μg totale proteïen / lysaat) is elektroforeseer op 4-15% Tris-HCl gels (Biorad, Hercules, CA). Proteïene is oorgedra na polivinilienfluoriedmembrane vir immunoblotting met konstante stroom (1.15mA) vir 1.5 h. 'N Koelspoel is gebruik om oormatige verhitting te voorkom. Volledige oordrag van hoë molekulêre gewig aggregate is bevestig deur gels te kleur na oordrag met Coomassie blou. Verder het ons geverifieer dat gekruiste DAR proteïene nie opgespoor is in die stapelgel nie (data nie getoon nie). Na oordrag is membrane in ddH gewas₂O, lugdroog vir 1 uur by kamertemperatuur (RT), gehidrateer met 100% MeOH, gewas in 1x Tris-gebufferde sout (TBS) en gedompel in 0.1M NaOH, pH 10 vir 15 min by RT. Daarna is hulle in TBS gewas, geblokkeer met 3% Bovine Serum Albumin (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) in TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, vir 1 uur by RT, en oornag geïncubeer by 4 ° C met teenliggaampies wat die D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P); D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA, Cat # AB5084P) en D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4- en D5-DAR's is nie ontleed nie weens die gebrek aan teenliggaampies wat beide verknoopte en intrasellulêre reseptore herken. Daar moet kennis geneem word dat die DAR-antilichaam baie wat in hierdie eksperimente gebruik is, in 2005-06 gekoop is; Huidige baie van hierdie teenliggaampies (2009-10) toon verskillende bandpatrone wat nie in weefsel verander word van DAR knockout-muise nie (ongepubliseerde waarnemings). Na die primêre teenliggaas-inkubasie is membrane met TBS-T-oplossing gewas, geïnkubeer vir 60-min met HRP-gekonjugeerde anti-konyn-IgG of anti-muis IgG (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), gewas met TBS- T, afgespoel met ddH₂O, en onderdompel in chemiluminescensie-opsporing substraat (Amersham GE, Piscataway, NJ). Nadat blots ontwikkel is, is beelde gevang met Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Diffuse digthede van oppervlak- en intracellulêre bande is bepaal met behulp van Quantity One-sagteware (Bio-Rad). Waardes vir oppervlak-, intrasellulêre en totale (oppervlak + intrasellulêre) proteïenvlakke is genormaliseer tot die totale proteïen in die baan wat bepaal is deur gebruik te maak van Ponceau S (Sigma-Aldrich) en geanaliseer met TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Die oppervlak / intrasellulêre verhouding het nie normaalweg vereis nie, aangesien beide waardes in dieselfde baan bepaal word. Om antilichaam-spesifisiteit te ondersoek, is preabsorptiestudies vir die DAR-teenliggaampies uitgevoer met die peptied wat gebruik word om elke teenliggaam te genereer. D1-, D2- of D3 DAR-antiliggaam is gekombineer met 'n 10-vou oormaat konsentrasie van peptied in 500μl TBS, gemeng vir 4 uur by 4 ° C, verdun tot 'n finale volume 20ml, by die membraan gevoeg en oornag geïncubeer by 4 ° C.

D1 DARs

Geen wesenlike verskille tussen kokaïen en soutgroepe is op WD45 gevind nie. Effekte van kokaïen selfadministrasie was egter op WD1 duidelik. Analise van die hele NAc het 'n aansienlik hoër D1 DAR oppervlak / intrasellulêre verhouding in die WD1-Coc-groep aangedui, in vergelyking met groepe wat self-toegediende sout (Fig. 2a). Dit was toe te skryf aan 'n beskeie toename in oppervlak D1 DAR, gekombineer met 'n beskeie afname in intrasellulêre D1 DARs (nie een van die laasgenoemde twee effekte was statisties betekenisvol nie), aangesien daar geen verandering in totale D1 DAR vlakke (oppervlak + intrasellulêre) was nie (Fig. 2a). Binne die NAc-kern is geen betekenisvolle effek gevind vir enige D1 DAR-maatreël nie (Fig. 2b). Die NAc-dop vertoon egter veranderinge wat soortgelyk is aan dié wat in die hele NAc waargeneem word, maar effens sterker (Fig. 2c). Die oppervlak / intrasellulêre D1 DAR verhouding is verhoog in die WD1-Coc groep as gevolg van 'n beduidende toename in oppervlak D1 DAR uitdrukking. Intrasellulêre vlakke was onveranderd, maar daar was 'n neiging tot verhoogde totale D1 DAR vlakke. Samevattend is 'n groter gedeelte van D1 DAR proteïene op die oppervlak uitgedruk in die NAc dop van WD1-Coc rotte in vergelyking met WD1-Sal rotte. D1 DAR verspreiding na die kontrole toestand na 45 dae van onttrekking uit kokaïen self-administrasie.

Fig 2

D1 DAR oppervlak uitdrukking is verhoog in die NAc dop na 1 dag van onttrekking uit kokaïen self-administrasie

D2 DARs

In die hele NAc was die belangrikste effek waargeneem, verminderde D2 DAR-uitdrukking by rotte wat kokaïen self toegedien het in vergelyking met soutkontroles (Fig. 3a). Dit was die mees uitgesproke op WD45, wanneer afname in die oppervlakband waargeneem is, al drie intracellulêre bande (~ 55, 75 en 100kDa) en in totaal D2 DAR vlakke in vergelyking met soutkontroles. Die oppervlak- / intrasellulêre D2 DAR-verhouding het effens toegeneem in die WD45-Coc-groep as gevolg van 'n groter afname in intrasellulêre as oppervlak D2 DARs, wat moontlik aandui dat die selle vergoed vir 'n verlaagde D2 DAR-uitdrukking deur 'n groter deel beskikbaar te stel. D2 DARs na die oppervlak. Dit is belangrik om in gedagte te hou dat die verhoogde oppervlak / intrasellulêre verhouding nie in hierdie spesifieke geval verhoogde D2 DAR-oordrag aanbeveel nie, omdat die absolute vlak van D2 DAR's op die oppervlak afgeneem is. In die WD1-Coc-groep was die enigste betekenisvolle effek 'n afname in intrasellulêre vlakke van die D2 DAR monomeer (~ 55kDa) in vergelyking met beide WD45-Sal en WD1-Sal groepe, hoewel verskeie ander maatreëls ook geneig was om af te neem (Fig. 3a).

Fig 3

Intrasellulêre en oppervlak D2 DAR vlakke in die NAc is verminder na 45 dae van onttrekking uit kokaïen self-administrasie

'N Algehele afname in D2 DAR-uitdrukking was ook duidelik in kern- en dop-subregio's van die NAc (Fig. 3b en 3c, onderskeidelik), hoewel effekte geneig was om meer uitgespreek in die dop te wees. Dus, oppervlak D2 DAR vlakke verminder in kokaïen rotte slegs op WD45 in kern, maar op WD1 en WD45 in dop. Totale D2 DAR's het aansienlik net in dop verminder. Afname in intracellulêre D2 DAR-bande het op beide onttrekkingsdae in beide kern en dop plaasgevind, alhoewel daar onttrekkings- en streekspesifieke verskille was waarvolgens die intrasellulêre band 'n statisties beduidende effek toon. Samevattend is D2 DAR-oppervlak- en intrasellulêre proteïenvlakke in die NAc verlaag ná kokaïen-selfadministrasie. Sommige afname was reeds duidelik deur WD1.

D1 DAR oppervlak uitdrukking vergroot transient byna in die NAc dop na die staking van kokaïen self-administrasie

Na kokaïen-selfadministrasie is D1 DAR-oppervlakuitdrukking verhoog in die NAc-dop op WD1, maar genormaliseer deur WD45, terwyl geen veranderinge in die kern waargeneem is nie, wat 'n oorgangsverhoging tot dop beperk. Soortgelyke resultate is verkry in vorige studies met behulp van reseptor-autoradiografie. Ben-Shahar et al. (2007) gevind toenemende D1 DAR digtheid in die NAc dop van rotte 20 min (maar nie 14 of 60 dae) na die beëindiging van verlengde toegang (6 hr / dag) kokaïen selfadministrasie, terwyl geen veranderinge in die kern of na kort toegang kokaïen self waargeneem is nie. -administrasie (2 uur / dag). Nader et al. (2002) 'n klein toename in D1 DAR digtheid in dop waargeneem, maar nie die kern van rhesus ape wat na die laaste 100-kokaïen-selfadministrasie sessies vermoor is nie. Monke geëvalueer 30 dae na die beëindiging van dieselfde behandeling toon verhoogde D1 DAR digtheid in rostral NAc en in beide kern en dop by meer kaudale vlakke, maar D1 DAR digtheid het genormaliseer teen 90 dae (Beveridge et al., 2009). Al hierdie resultate, soos ons s'n, dui op 'n oorgangsverhoging in D1 DAR vlakke, veral in dop, na die staking van kokaïen-selfadministrasie. 'N Vroeëre studie deur hierdie groep het egter 'n afname in D1 DAR-digtheid in die NAc (sterkste in die dop) van rhesus ape aangedui wat self-toegedien kokaïen vir 'n baie langer tydperk (18 maande; Moore et al., 1998a). Verlaagde D1 DAR binding in die NAc is ook gevind 18 uur na die beëindiging van 'n uitgebreide toegangsregimen by rotte, alhoewel totale kokaïen inname in hierdie studie hoër was as in rotstudies wat hierbo bespreek is (Die Montis et al., 1998). Hierdie resultate dui aan dat D1 DAR aanpassings afhang van baie aspekte van blootstelling aan kokaïen. Nog 'n oorweging is dat reseptor-autoradiografie totale sellulêre reseptore meet, terwyl ons proteïenverbindings eksperimente tussen oppervlak- en intrasellulêre reseptore kan onderskei. Interessant genoeg het 'n immunoblottende studie 'n neiging getoon na verhoogde D1 DAR vlakke in die NAc van menslike kokaïen gebruikers (Worsley et al., 2000).

Is die oorgangsverhoging in D1 DAR-oppervlakuitdrukking wat ons waargeneem het in die NAc-dop belangrik vir die inkubasie van cue-geïnduceerde kokaïen-drang? Dit is moeilik om te beoordeel, aangesien geen studies die effek van intra-NAc inspuiting van D1 DAR agoniste of antagoniste op cue-geïnduceerde kokaïen het nagegaan wat na die hok-onttrekking (of cue-geïnduceerde herstel van kokaïen op soek na uitwissing opleiding) soek. D1-reseptore in die mediale NAc (skulp- en mediale kern) word egter geïmpliseer in kokaïen-primêre herinstelling van kokaïen wat na uitsterwing soek, blykbaar deur middel van 'n meganisme wat samewerkende aktivering van D1 en D2 DARs vereis (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt en Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Saam met ons resultate, kan dit daarop dui dat neurone in die NAc-dop meer reageer op D1 DAR-gemedieerde kokaïen wat vroegtydig onttrek weens transient D1R-upregulasie. Waarskuwing moet egter gebruik word in ekstrapolasie vanaf herinstelling tot inkubasiestudies, omdat uitwissing opleiding en tuiskasonttrekking geassosieer word met verskillende neuro-aanpassings in die NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Wolf en Ferrario, 2010). Dit is belangrik om daarop te let dat D1 DARs in die basolaterale amygdala en prefrontale korteks ook belangrik is vir die kuiergeïnduceerde herstel van kokaïen-soek (bv. Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

Op sellulêre vlak kan beide presynaptiese en postsynaptiese DAR's die opwindbaarheid van medium-spinyneurone, die oorheersende seltipe en uitset-neuron van die NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Herhaalde nie-voorwaardelike kokaïenadministrasie is bekend om sommige effekte van D1 DAR-aktivering in die NAc te verbeter. So, een dag tot een maand na die staking van kokaïenbehandeling, het die verhoogde vermoë van D1 DAR-agoniste om die aktiwiteit van medium-spinyneurone (aangedryf deur ioontoforetiese glutamaat) te inhibeer, regdeur die NAc waargeneemHenry en White, 1991; 1995). Die verhoogde D1 DAR-oppervlak-uitdrukking wat hier gerapporteer word, is egter onwaarskynlik om hierdie vorige resultate te verduidelik, aangesien dit beperk is tot die dop en slegs op WD1 gedemonstreer is. Eendag nadat 'n kokaïenuitdaging 10-14 dae toegedien het nadat die herhaalde kokaïen-inspuitings gestaak is, Beurrier en Maleka (2002) 'n verbetering van DA-gemedieerde inhibisie van eksitatoriese sinaptiese reaksies in NAc-medium-spinyneurone waargeneem wat skynbaar deur middel van presynaptiese D1-agtige DAR's op glutamaat-senuweesterminale bemiddel is. Maar moontlike effekte van die uitdaging inspuiting (byvoorbeeld, sien Boudreau et al., 2007 en Kourrich et al., 2007), gekombineer met spesiesverskille en gebrek aan opnames in kern, maak dit moeilik om hul bevindings te vergelyk. Daar moet ook kennis geneem word dat die DAR agoniste en antagoniste wat gebruik word deur Henry en White (1991; 1995) en Beurrier en Malenka (2002) het nie onderskei tussen D1 en D5 DARs nie.

D2 DAR vlakke verminder in die NAc na die staking van kokaïen-selfadministrasie

Die hoof effek waargeneem in ons studie was 'n afname in D2 DAR proteïen in beide NAc kern en dop na die staking van kokaïen self-administrasie, in verhouding tot sout beheer. Dit was meer uitgespreek in die dop, waar intracellulêre, oppervlak- en totale bande op beide WD1 en WD45 afgeneem is. In kern is D2 DAR-oppervlakuitdrukking slegs op WD45 verminder en die totale D2 DAR-vlakke het nie beduidend verminder nie. Verskeie ander studies het op dieselfde wyse afgeneem D2 DAR uitdrukking na die beëindiging van kokaïen self-administrasie. In rhesus ape met 'n uitgebreide kokaïen self-administrasie ervaring, D2 DAR digtheid, gemeet met reseptor autoradiografie, is verminder in baie striatale gebiede insluitende NAc kern en dop wanneer weefsel verkry is onmiddellik na die laaste sessie (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Met behulp van PET is hierdie effek in die basale ganglia opgespoor binne die 1-week waarin kokaïen-selfadministrasie begin is (Nader et al., 2006). Die tempo waarteen D2 DAR vlakke herstel tydens onttrekking kan afhang van totale kokaïen inname. In 'n autoradiografie-studie het D2 DAR vlakke in die NAc herstel na waardes na 30 of 90 dae van onttrekking uit 100 sessies van kokaïen selfadministrasie (Beveridge et al., 2009). In 'n PET-studie van ape met langer blootstelling (1 jaar) en dus hoër totale kokaïeninname, het 3 van 5 ape herstel van D2 DAR vlakke na 90 dae, terwyl 2 ape nie herstel het nie, selfs na 12 maande (Nader et al., 2006). Oor die algemeen stem hierdie resultate goed ooreen met ons bevindinge van verminderde D2 DAR vlakke gedurende die onttrekking.

PET-studies van menslike kokaïenverslaafdes het ook verminderde D2 DAR-vlakke in baie striatale gebiede, insluitend ventrale striatum, gevind wat tydens vroeë onttrekking sowel as 3-4 maande van ontgifting voorkom (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Die betekenis van gedrag is egter onduidelik, aangesien D2 DAR beskikbaarheid nie korreleer met positiewe subjektiewe effekte van kokaïen of die besluit om meer kokaïen na 'n priming dosis te neem nie (Martinez et al., 2004). Dit is belangrik om daarop te let dat terwyl koekgeïnduceerde kokaïenbehoeftes 'n tydsafhanklike toename tydens onttrekking toon ("inkubasie"), gebeur dit nie vir kokaïen-gepresteerde kokaïen soekende (Lu et al., 2004a). Daarom, die resultate van Martinez et al. (2004) laat die moontlikheid oop dat D2 DAR beskikbaarheid korreleer met cue-geïnduceerde kokaïen soek, die fokus van die inkubasie model wat hierin bestudeer word. Lae D2 DAR beskikbaarheid in menslike kokaïengebruikers hou verband met verminderde frontale kortikale metabolisme (Volkow et al., 1993). Saam met ander veranderinge, kan dit bydra tot die verlies aan beheer wat voorkom wanneer verslaafdes aan dwelms of dwelmparke blootgestel word, en tot groter dwelmvermoë in vergelyking met nie-dwelmbelonings.Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Daar moet op gelet word dat verlaagde D2 DAR vlakke in 'n PET-studie verhoogde DA-vrystelling eerder as verlaagde D2 DAR vlakke kan aandui, maar onlangse resultate argumenteer teen hierdie verduideliking in die geval van kokaïen afhanklike pasiënte (Martinez et al., 2009). Verder het 'n postmortem studie van menslike kokaïen gebruikers 'n neiging getoon na verminderde D2 DAR vlakke in die NAc deur immunoblotting (Worsley et al., 2000).

Studies in menslike kokaïenverslaafdes kan nie bepaal of afgeneem D2 DAR beskikbaarheid 'n predisponerende eienskap of 'n gevolg van blootstelling aan kokaïen is nie, maar ander resultate dui daarop dat beide waar is. Aan die een kant het eksperimente in nie-dwelmmisbruikende mense 'n omgekeerde korrelasie tussen D2 DAR-beskikbaarheid en verslae van "dwelmvinding" gevind wanneer metielfenidaat toegedien is (Volkow et al., 1999; 2002). Hierdie bevindinge dui daarop dat lae D2 DAR beskikbaarheid die kwesbaarheid van verslawing kan verhoog. 'N Soortgelyke gevolgtrekking word ondersteun deur studies in rhesus ape. In sosiaal-gehuisvesde ape, verhoog die bereiking van sosiale dominansie D2 DAR beskikbaarheid in die striatum en dit word geassosieer met laer sensitiwiteit vir die versterkende effekte van kokaïen in vergelyking met ondergeskikte ape (Morgan et al., 2002). Sosiale status word ook gekorreleer met striatal D2 DAR beskikbaarheid in dwelmvrye menslike vrywilligers (Martinez et al., 2010). Aan die ander kant toon beide PET- en reseptor-autoradiografie-studies dat langtermyn kokaïen-selfadministrasie die striata D2 DAR-reseptor beskikbaarheid in individueel gehuisvesde ape verminder, soos hierbo bespreek (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Chroniese kokaïen-selfadministrasie blyk ook D2 DAR beskikbaarheid in dominante sosiaal-gehuisvesde ape te verlaag (Czoty et al., 2004). Dus, na langtermyn-kokaïen-selfadministrasie, was daar nie meer beduidende verskille in beskikbaarheid van D2-reseptore of versterkende effekte van kokaïen tussen dominante en ondergeskikte ape nie (Czoty et al., 2004). Verhoogde D2 DAR-vlakke het egter by die dominante ape tydens onthouding ontstaan ​​en dit was gekorreleer met langer vertraging in reaksie op nuwigheid, 'n eienskap wat voorspel dat die sensitiwiteit vir kokaïen se versterkende effekte verminder word (Czoty et al., 2010).

Soos in mense en ape, toon rotstudies dat lae D2 DAR beskikbaarheid 'n risikofaktor is vir die kwesbaarheid van kokaïene. PET-studies in rotte met hoë impulsiwiteit ('n eienskap wat verband hou met verhoogde kokaïen-selfadministrasie) toon dus verminderde D2 / D3 DAR beskikbaarheid in die ventrale striatum (Dalley et al., 2007). D2 DAR vlakke in die NAc word ook verminder in rotte wat 'n hoë lokomotoriese reaksie op nuwigheid toon, 'n ander eienskap wat verband hou met verslawing kwesbaarheid (Hooks et al., 1994). Ons resultate in rotte dui daarop dat verlaagde D2 DAR vlakke in die NAc ook 'n gevolg kan wees van herhaalde kokaïenblootstelling, in ooreenstemming met studies in ape en mense (hierbo). Twee reseptor-autoradiografie-studies in rotte het egter resultate gevind wat verskil van ons s'n. Ben-Shahar et al. (2007) het nie afgeneem D2 DAR vlakke in die NAc na onttrekking (20 min, 14 dae van 60 dae) vanaf 'n uitgebreide toegangskokaïen selfadministrasiestelsel soortgelyk aan ons eie (6 uur / dag), alhoewel afname waargeneem is in die NAc-dop na 'n beperkte toegangsregime (2 uur / dag) en 14 dae van onttrekking (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) gevind geen veranderinge in D2 DAR vlakke in kern of dop 24 h na die beëindiging van beperkte toegang kokaïen selfadministrasie (2 uur / dag), hoewel D2 DAR vlakke afgeneem het in die toegepaste kokaïenbeheer. Soos hierbo aangedui, meet reseptor-autoradiografie totale sellulêre reseptore, terwyl PET- en proteïenverbindingsstudies meetoppervlakreseptore meet.

Oor die algemeen ondersteun studies oor die verhouding tussen D2 DAR-vlakke en kokaïen-selfadministrasie 'n model waarin D2 DAR gewoonlik kokaïen-selfadministrasie beperk. Daarom stel ons voor dat die verlaagde D2 DAR vlakke waargeneem word in ons eksperimente, kan bydra tot cue-geïnduceerde kokaïen wat na kokaïen-onttrekking soek. In die besonder is die feit dat D2 DAR-oppervlak-uitdrukking in die NAc-kern afgeneem het op WD45, maar nie WD1, gekombineer met 'n sleutelrol vir die NAc-kern in cue-geïnduceerde kokaïen-soek nie. Dit dui daarop dat tyd-afhanklike D2 DAR-downregulasie in die NAc-kern dalk dra by tot die tyd afhanklike intensivering van cue-geïnduceerde kokaïen soek. Dit sal voorspel dat intra-NAc-infusie van 'n D2-agonis tydens die onttrekking die koekgeïnduceerde kokaïen soek sal verminder. Ongelukkig het geen studies die effekte van intra-NAc D2 DAR-middels in die inkubasiemodel ondersoek nie. Aan die ander kant dui studies van kokaïen-primêre herinstelling aan dat D1 en D2 DARs in die dop en mediale kernwerk saamwerk om kokaïen te soek (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt en Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Op grond van hierdie bevindings kan die afgeneem D2 DAR-uitdrukking waargeneem word in ons eksperimente voorspel word om kokaïen te soek, dit wil sê 'n effek wat teenoor die onttrekkingsafhanklike intensivering wat eintlik waargeneem word, produseer. Die teenstrydigheid kan die probleme weerspieël wat voorkom deur die veralgemening van kokaïen-primêre herinstelling na uitwissing opleiding na cue-geïnduceerde kokaïen soek na onttrekking.

'N Tydsafhanklike toename in D3 DAR-oppervlakuitdrukking vind plaas in die NAc-kern na die staking van kokaïen-selfadministrasie

Studies van D3 DAR-voorkeur dwelms in kokaïen self-administrasie en herinstellings paradigmas dui daarop dat D3 DAR antagoniste nuttig kan wees in die behandeling van kokaïenverslawing, en veral in die vermindering van reaktiwiteit vir kokaïenverwante leidrade (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi en Gardner, 2007). Hierdie resultate impliseer dat aktivering van D3 DAR deur endogene DA betrokke kan wees by die bemiddeling van cue-geïnduceerde kokaïen-soek. Ons resultate toon dat D3 DAR oppervlak uitdrukking in die NAc kern onveranderd is op WD1 van uitgebreide toegang kokaïen self-administrasie, maar toegeneem op WD45 in samewerking met die inkubasie van kokaïen drang. D3 DAR oppervlak uitdrukking het nie beduidend toegeneem in die dop nie, hoewel daar 'n klein maar beduidende toename in die oppervlak / intrasellulêre verhouding was. Gegewe die rol van D3 DAR-oordrag in reaksie op kokaïenverwante aanwysers en die belangrikheid van die kern vir cue-geïnduceerde kokaïen-soek, is dit aanloklik om te spekuleer dat die verhoogde D3 DAR-oppervlakuitdrukking in die NAc-kern bygedra het tot die inkubasie van cue-geïnduceerde kokaïen drang wat op WD45 waargeneem word. Die neurale terrein waarby D3 DAR-antagoniste optree om kokaïen te soek, is egter nie vasgestel nie. Spesifiek, geen studies het ondersoek ingestel na die effek van intra-NAc inspuiting van D3 DAR-voorkeurmiddels op cue-induced cocaine seeking. In 'n ander model, Schmidt et al. (2006) bevind dat die inspuiting van die D3-voorkeur-agonis PD 128,907 in kern of dop nie die herstel van kokaïen op soek na uitsterwingstraining produseer nie.

Ons resultate is oor die algemeen in ooreenstemming met reseptor-autoradiografie studies wat die totale D3 DAR vlakke in die NAc gemeet het nadat kokaïene blootgestel is. Staley en Mash (1996) het berig dat D3 DAR bindend hoër was in die NAc van oordosis slagoffers in vergelyking met ouderdom-ooreenstemmende kontrole. Na blootstelling aan kokaïen in 'n gekondisioneerde plek voorkeurparadigma en drie dae van onttrekking, het muise verhoogde D3 DAR binding in die NAc kern en dop vertoon (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) gemeet D3 DAR bindend in rotte met uitgebreide kokaïen self-administrasie ervaring wat getoets is vir kokaïen-primed herstel na verskeie onttrekking periodes en dan later 24 h gedood. D3 DAR binding in die NAc was onveranderd op WD1, maar het na 'n langer tyd (WD31-32) toegeneem, in ooreenstemming met ons waarneming van 'n tydafhanklike toename. Verder het 'n dwelmbehandeling tydens onttrekking wat kokaïen verminder het, ook die toename in D3 DAR bindend gedemp, wat daarop dui dat D3 DAR opregulasie funksioneel gekoppel is aan kokaïen-soek. Daar moet kennis geneem word dat D3 DAR toeneem in Neisewander et al. (2004) was beduidend in die kern, terwyl slegs neigings in die dop waargeneem word, maar die subregio's is ontleed in 'n rostrale deel van die NAc waar die kern en dop minder duidelik is. Ons analise is uitgevoer op kern en dop van rostral en caudale gedeeltes van die NAc.

Hierdie werk is ondersteun deur DA009621, DA00453 en 'n NARSAD Distinguished Investigator-toekenning aan MEW, DA020654 tot MM, en predoctorale National Research Service-toekenning DA021488 na KLC