Endogene opioïde-geïnduseerde neuroplastisiteit van dopaminerge neurone in die ventrale tegmentale area beïnvloed natuurlike en opiaatbeloning (2014)

KOMMENTAAR: Die DeltaFosB studies ons noem ons dikwels almal gefokus die kern sluit aan (beloningsentrum), en gevind dat seks amper dieselfde breinmeganismes as meth & kokaïne verdryf. Uit die besondere studie deur dieselfde navorser (Wet op natuurlike en dwelmbelonings op gemeenskaplike neurale plastisiteitsmeganismes met ΔFosB as 'n sleutelmediator (2013)):

Natuurlike en geneesmiddelbelonings kom dus nie net saam op dieselfde neurale baan nie, maar kom ook saam op dieselfde molekulêre bemiddelaars, en waarskynlik in dieselfde neurone in die Nucleus Accumbens, om die aansporing van die aansporing en die 'verlang' van beide soorte belonings te beïnvloed.

Die wegneem: Met, kokaïen en geslag, almal doen dieselfde fundamentele dinge vir dieselfde senuweeselle in die beloning sentrum (nucleus accumbens), wat hulle ook al elders in die brein anders kan doen. Dit het die gewone praatpunt afgebreek. Natuurlike belonings en dwelms verskil in meganismes en effekte.

Hierdie nuwe studie het ondersoek ingestel na wat seks aan die VTA doen. Die VTA begin waar die dopamienproduserende senuweeselle begin - en hulle vertak na die nucleus accumbens, frontale korteks en amygdala. Eintlik is die VTA die bron (bron) van die meeste van ons dopamien. Kyk na hierdie twee foto's van die beloningskring: Pic1, Pic2

Navorsers het bevind dat seks (klimaks) veroorsaak dat die selliggame in die VTA tydelik krimp (by mans). Selliggame en hul dendriete bestaan ​​uit die grys materie van die brein. Dit is presies wat heroïneverslawing aan die VTA doen (nie een keer gebruik van heroïne nie, maar chroniese heroïengebruik). Let daarop dat dieselfde krimping van die VTA-selliggame kom voor by menslike heroïenverslaafdes.

Die geslagsgeïnduceerde selkrimping duur ten minste 7 dae. Die veranderinge wat deur seks veroorsaak is, het op 30 dae normaalweg teruggekeer, maar die navorsers het net dae 1, 7 en 30 beoordeel.

Die inkrimping van die selliggame in heroïenverslawing lei tot laer dopamien in die nucleus accumbens - of wat ons noem desensitisering. Die navorsers het morfien aan die rotte toegedien om hul reaksie te bepaal (na seks), maar niks het gebeur nie. Gewoonlik hou die rotte baie van die morfien, maar hier is dit tydelik gedesensitiseer. Kortom, die beloningskring van die rotte na ejakulasie was nie reageer op die lae heroïenvlak nie. Navorsers het vermoed dat hoër dosisse nodig sou wees om 'n 'normale' rotreaksie uit te lok.

Om op te som: Seks (tydelik) doen presies dieselfde in die VTA as verslawing aan heroïne: krimp van die dopamienproduserende senuweeselliggame. Dit lei tot laer dopamien in die beloningsentrum, en minder reaksie op verdowingsmiddels - en dit neem minstens 7 dae voordat rotbreine herstel.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

kruike KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Koel LM5.

Abstract

Natuurlike beloning en dwelmmiddels kom ooreen met die mesolimbiese baan en aktiveer 'n gemeenskaplike meganisme van neurale plastisiteit in die nukleusbuis. Chroniese blootstelling aan opiate veroorsaak plastisiteit in dopaminerge neurone van die ventrale tegmentale area (VTA), wat morfienbeloningstoleransie reguleer.

Hier toets ons die hipoteses dat paring-geïnduseerde vrystelling van endogene opioïede in die VTA morfologiese veranderinge van VTA dopamien selle in manlike rotte veroorsaak, wat op sy beurt die langtermyn uitdrukking van ervaringsgeïnduceerde versterking van seksuele gedrag reguleer.

Eerstens het seksuele ervaring VTA dopamien soma grootte 1 en 7 dae verminder, maar nie 30 dae na die laaste paringsessie nie.. Hierdie effek is geblokkeer met naloksoon voor elke paringsessie; dus, VTA dopamien sel plastisiteit was afhanklik van die werking van endogene opioïede.

Op sy beurt was VTA-plastisiteit geassosieer met veranderde opiaatbeloning, aangesien seksueel ervare mans nie gekondisioneerde plekvoorkeur vir 0.5 mg / kg morfien gevorm het nie.

Vervolgens is vasgestel of endogene opioïede aksie seksuele beloning en geheue beman in manlike rotte wat met naloksoon behandel word tydens paringservaring, hetsy sistemies of intra-VTA. Naloksoon het nie die aanvanklike ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag oor herhaalde paringsessies of gekondisioneerde plekvoorkeur vir paring verhoed nie. Die naloksoonbehandeling het egter die langertermyn-uitdrukking van ervaringsgeïnduceerde fasilitering van seksuele gedrag en neurale aktivering in mesolimbiese gebiede geïmponeer deur mate-geassosieerde gekondisioneerde leidrade.

Saam toon hierdie data dat endogene opioïede tydens paring neurale plastisiteit in VTA-dopamienneurone induseer wat krities lyk vir morfienbeloning en langtermyngeheue vir natuurlike beloning.

 

Inleiding

Natuurlike beloning gedrag word bemiddel deur die mesokortikolimbiese stelsel (Meisel en Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Dwelms van misbruik veroorsaak neurale veranderinge in hierdie stelsel, wat op sy beurt bydra tot die ontwikkeling en uitdrukking van middelmisbruik (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Ons het voorheen vasgestel dat ervaring met natuurlike beloningsgedrag, dit wil sê seksuele ondervinding in manlike rotte, ook neurale plastisiteit in die nucleus accumbens (NAc) veroorsaak, insluitende verhoogde dendritiese stekelsPitchers et al., 2010a) en deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Op sy beurt is hierdie seksgeïnduceerde plastisiteit van kritieke belang vir die uitwerking van sekservaring op latere paring, gemanifesteer as die fasilitering van inisiasie en uitvoering van seksuele gedrag (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Daarbenewens verander seksuele ervaring die responsiwiteit van psigostimulante, insluitend sensibilisering van lokomotoriese aktiwiteit en verhoogde beloning (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

Die NAc is een stroomafwaartse teiken van die dopaminerge neurone in die ventrale tegmentale area (VTA). VTA dopamienneurone word geaktiveer tydens paring en gevolglike blootstelling aan gekondisioneerde leidrade wat voorspelbaar is van seksuele beloning (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), deur middel van endogene opioïede peptied (EOP) binding aan μ-opioïde reseptore (MORs; Matthews en German, 1984; Johnson en Noord, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Dus, blootstelling aan gekondisioneerde leidrade wat voorspelbaar is van seksuele gedrag, veroorsaak vrystelling van EOP- en VTA-dopamien-selaktivering, wat seksuele motivering vergemaklik (Mitchell en Stewart, 1990; van Furth et al., 1995; van Furth en van Ree, 1996) en dopamien vrystelling in die NAc (Fiorino et al., 1997).

Herhaalde blootstelling aan eksogene opiate veroorsaak morfologiese veranderinge in die VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison en Nestler, 2012), verminderde soma grootte van VTA dopamienneurone (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), verminderde vlakke van neurofilament proteïene (Beitner-Johnson et al., 1992), verhoogde opgewondenheid van dopamien selle, en verminderde aksoplasmiese vervoer en dopamien uitset na die NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Hierdie VTA dopamienneuron verander die morfienbeloningstoleransie en is oorlopend aangesien hulle binne 'n maand van dwelmafhanklikheid verdwyn (Russo et al., 2007). Dit is tans onduidelik of plastisiteit in die VTA-dopamienneurone uniek is vir die opiate van opiate of as dit ook deur die vrylating van EOP tydens natuurlike bevredigende gedrag geproduseer word.

Hier toets ons die hipotese dat natuurlike beloning ervaring neuroplastisiteit veroorsaak soortgelyk aan dié wat veroorsaak word deur opiate, en dus word daardie opiate gekonvergeer op 'n plastisiteitsmeganisme wat noodsaaklik is vir natuurlike beloning en geheue. Ons toets of seksuele ervaring in manlike rotte die soma grootte van VTA dopamienneurone verminder deur 'n proses wat afhanklik is van EOP-aksie in die VTA. Verder ondersoek ons ​​of EOP-geïnduseerde veranderinge in VTA-dopamienneurone geassosieer word met die versterking van natuurlike lonende gedrag en die toewysing van aansporingsvermoë vir leidrade wat met natuurlike beloning geassosieer word, terwyl kruistoleransie tot morfienbeloning veroorsaak word.

Materiaal en metodes

diere

Volwasse Sprague-Dawley-rotte (200-225 g) is verkry uit Charles River en is in pare gehuisves in kunsmatig verligte kamers op 'n 12 h lig / donker siklus in alle eksperimente (lig by 10: 00 AM behalwe vir die morfien toleransie eksperiment , lig af by 5: 00 PM). Kos en water was beskikbaar ad libitum behalwe tydens gedragstoetsing. Stimulus-wyfies is ovariectomized en ingeplant subcutaan met 5% 17-β-estradiolbenzoaat SILASTIC kapsules (1.98 mm binnediameter, 0.5 cm lengte, Dow-Corning). Inspuitings van progesteroon (subkutane, 500 μg in 0.1 ml sesamolie) is 3-6 h toegedien voordat dit getoets is om seksuele ontvanklikheid te bewerkstellig. Alle prosedures is goedgekeur deur die Universiteit van Wes-Ontario en die Universiteit van Michigan Animal Care Committees, en voldoen aan die Kanadese Raad op Diereversorging en Nasionale Institusies van Gesondheidsriglyne waarby gewerwelde diere in navorsing betrokke is.

Tydsberekening van VTA dopamien soma grootte veranderinge

Daaglikse paringsessies.

Om die tydsverloop van veranderinge in dopamienneuron soma grootte in die VTA te bestudeer, is seksueel ervare en naïefdiere by 1, 7, of 31 d vermoor (n = 5-8 per groep) na die laaste dag van paring (ervare) of hantering (naïef). Seksueel ervare groepe is ooreenstem met seksuele gedrag tydens die finale paringsessie, sowel as totale getalle van ejakulasies oor die vyf sessies (gemiddeld van 5 vir elke groep) en verskil nie in enige parameter van seksuele gedrag nie.

Paringsessies.

Seksueel naïewe mans is toegeskryf aan een van twee eksperimentele toestande: seksueel naïef of seksueel ervare. Seksueel ervare diere kon vyf keer op opeenvolgende dae met ontvanklike vroue in rektangulêre proefhokke (60 × 45 × 50 cm) tot op die uitstalling van ejakulasie of tot 1 h (wat ook al eerste gekom het) toegelaat word. Kooie is deeglik skoongemaak met 70% etanoloplossing en vars beddegoed is bygevoeg tussen paringsessies. Seksuele gedrag is tydens die donker fase uitgevoer (2-6 h na die aanvang van die donker). Slegs diere wat gedurende minstens vier van die vyf paringsessies geëkkakuleer is, is seksueel ervare en ingesluit in eksperimente. Alle paringsessies is waargeneem en seksuele gedrag is aangeteken. Die aantal mounts (M) intromissies (IMs), berg latensie (ML; tyd vanaf die bekendstelling van die vroulike na die eerste berg), intromissie latensie (IL; tyd vanaf die bekendstelling van die vroulike tot eerste intromissie) en ejakulasie latensie (EL; tyd vanaf eerste intromissie tot ejakulasie) is aangeteken (Agmo, 1997). Naïefdiere is saam met seksueel ervare mans in 'n skoon toetshok in dieselfde kamer geplaas, sodat hulle blootgestel is aan verre vroulike reuke en soortgelyke vlakke van steurnis en omgewingsnuus as ervare mans.

Immunofluorescens etikettering.

Diere is diep narkoseer met natriumpentobarbital (270 mg / kg, ip) en word intrakardiaal geperfuseer met 50 ml 0.9% sout, gevolg deur 500 ml 4% paraformaldehied in 0.1 m natriumfosfaatbuffer (PB). Hersiene is verwyder en vir 1 h by kamertemperatuur (RT) in dieselfde fixatief vasgelê en dan in 20% sucrose en 0.01% natriumazied in 0.1 m PB gedompel vir berging by 4 ° C. Koronale afdelings is by 35 μm op 'n vriesmikrotoom (H400R, Microm) gesny en in vier parallelle reekse in cryoprotectantoplossing (30% sucrose, 30% etileenglikol in 0.1 m PB) versamel en dan by 20 ° C gestoor. Alle inkubasies is by RT uitgevoer met sagte roering en oorvloedige spoeling met 0.1 m PBS, pH 7.35, tussen inkubasies. Artikels is blootgestel aan 1% H2O2 vir 10 min om endogene peroksidases te vernietig, dan geblokkeer vir 1 h in inkubasie oplossing (PBS +: PBS wat 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) en 0.1% bees serum albumien (Jackson Immuno Research Laboratories) bevat. Volgende is dele oorkoepelend by RT geïnkubeer in 'n muis tyrosienhidroksilase (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Na primêre antilichaam-inkubasie is gedeeltes geïnkubeer in AlexaFluor 555-gekonjugeerde bok anti-muis antilichaam (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) vir 30 min. Ten slotte is dele gewas met 0.1 m PB, gemonteer op Superfrost Plus-glasskyfies, gedroog, en met die gelatol wat die anti-verdofmiddel 1,4-diazabicyclo (2,2) -oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Data-analise: neuron soma grootte.

Beelde van TH-immunoreaktiewe (IR) neurone in die VTA is geneem by 40 × vergroting by drie rostralale tot caudale vlakke (Balfour et al., 2004). Daar was geen verskille tussen selle op die verskillende vlakke aangetref nie. Die soma grootte van TH-IR neurone is geanaliseer met behulp van ImageJ (National Institutes of Health). Gemiddelde area, omtrek en sirkelvormigheid is gemeet soos beskryf deur Sklair-Tavron et al. (1996). 'N gemiddelde van 25 selle per dier (gekombineer alle 3 VTA vlakke) is ontleed en slegs selle met 'n duidelik sigbare kern was ingesluit. Vir elke dier is die gemiddelde oppervlakte, omtrek en omsendbrief bereken. Vir statistiese analise is 'n tweerigting-ANOVA gebruik [faktore: seksuele ervaring (seks ervaar of seks naïef) en tyd (1, 7, of 31 d)] gevolg deur post hoc vergelykings met behulp van die Holm-Sidak-metode met 'n betekenisvlak van 0.05.

VTA-nie-dopamien veranderinge

Weeklikse paringsessies.

Om te toets of seksuele ondervinding tydens daaglikse paringsessies benodig word vir afname in TH-IR neuron soma grootte, is VTA dopamienneurone van diere wat tydens vyf tweeweeklikse paringsessies gesamper is, ontleed. Paringsessies was soos hierbo beskryf, maar oor 'n tydperk van 2.5 weke. Breinse is 7 d ingesamel na laaste paring of hantering.

Immunoperoksidase etikettering.

Daarbenewens is dit getoets of die gebruik van sensitiewe kleuringstegnieke met immunoperoksidase- en chromogen-opsporing ook die visualisering van TH-IR soma-grootte veranderinge sal toelaat. Perfusie en weefselverwerking was gedrag soos hierbo beskryf. Na behandeling met 1% H2O2 en PBS +, afdelings is oornag by RT geïnkubeer in 'n polyklonale polislonale tyrosienhidroksilase (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Na primêre antilichaam-inkubasie is dele gekweek met biotien-gekonjugeerde bok-anti-konyn-IgG (1 h, 1: 500 in PBS +; Vector Laboratories), avidin-biotien-peperwortelperoksidase (1 h, ABC-elite; 1: 1 000 in PBS , 3,3, DAB, Sigma-Aldrich) en 10'-diaminobenzidien-tetrahydrochloried (0.02 min, 0.02%, DAB, Sigma-Aldrich) met nikkel sulfaat in 0.1% in 0.015 m PB met waterstofperoksied (0.1%). Artikels is deeglik in 0.3 m PB gewas om die reaksie te beëindig en gemonteer op gekodeerde Superfrost plus glasskyfies (Fisher) met XNUMX% gelatien in ddH2O. Na uitdroging is alle skyfies bedek met DPX-bergmiddel (dibutylftalaat xyleen, Sigma-Aldrich).

Data-analise: neuron soma grootte.

TH-IR selle is geanaliseer vir area, omtrek en sirkelvormigheid soos hierbo beskryf. Daarbenewens is TH-IR-selle in substantia nigra (SN), in dieselfde gedeeltes wat gebruik is vir die ontleding van VTA TH-IR-selle, geanaliseer. Na die ontleding van VTA- en SN TH-IR-selle, is afdelings met behulp van cresyl-violet ondertoon en is nie-TH-IR-selle geanaliseer met behulp van dieselfde metodes soos hierbo beskryf. Verskille tussen naïewe en ervare groepe is met behulp van tweestertige studente vergelyk t toetse met 'n betekenisvlak van 0.05.

Effekte van naloksoon op ervaring-geïnduceerde dopamien soma grootte vermindering

Om te bepaal of MOR's 'n rol gespeel het in seks-ervaring-geïnduseerde veranderinge in dopamienneuron soma grootte, was MOR geblokkeer tydens seksuele gedrag. Die helfte van die diere het seksuele ondervinding opgedoen, terwyl die ander helfte hanteer is maar seksueel naïef gebly het. Seksueel ervare diere het op 5 opeenvolgende dae toegelaat. Binne die seksueel ervare en naïewe groepe is diere behandel met die nie-selektiewe MOR antagonist naloksoon (10 mg / kg, SC, Sigma-Aldrich, opgelos in 0.9% sout) of sout 30 min voor die bekendstelling van die vroulike (ervare) of voor hantering (naïef); Daardeur word vier eksperimentele groepe geskep: seksueel naïewe sout (Naive Sal), seksueel-naïewe naloksoon (Naive NLX), seksueel ervare sout (Exp Sal) en seksueel ervare naloksoon (Exp NLX; n = 5-8 per groep). Naloksoonbehandeling het nie enige statisties-betekenisvolle effekte op enige parameter van seksuele gedrag op enige van die 5 d gehad nie, en naloksoon- en sout behandelde groepe was identies in seksuele ondervinding. Alle diere is doodgemaak via intracardiale perfusie 7 d na laaste paringsessie. Seksie-, immunohistochemie- en data-analise (tweerigting-ANOVA, faktore: sekservaring en dwelmbehandeling) vir dopamien soma grootte is uitgevoer soos hierbo beskryf.

Morfien gekondisioneerde plek voorkeur

Eksperimentele ontwerp.

Voorheen, Russo et al. (2007) het getoon dat chroniese morfien verdraagsaamheid teenoor morfienbeloning veroorsaak. Aangesien seksuele ervaring en chroniese morfien soortgelyke afname in soma-grootte van dopamienneurone in die VTA veroorsaak, is die funksionele relevansie van die geslagsgeïnduceerde morfologiese veranderinge getoets vir morfienbeloning. Seksueel ervare en naïefdiere is verdeel in ses verskillende eksperimentele groepe (n = 9-13 per groep) gebaseer op seksuele gedrag (seksueel naïef of ervare) en morfien dosis (0.5, 5.0, of 10.0 mg / kg, ip) en is getoets vir morfien-geïnduceerde gekondisioneerde plek voorkeur (CPP).

Morfien-CPP.

Verbetering het 1 d plaasgevind ná die laaste paringsessie en groepe is tydens die laaste paringsessie vir seksuele opvoering aangepas. Die gebruik CPP paradigma bestaan ​​uit 'n pretest, kondisionering dae, en post-toets, en apparaat is gebaseer op Tenk et al. (2009). Kortliks bestaan ​​die CPP-apparaat (MED Associates) uit drie verskillende kamers. Tussen elke sessie is die apparaat deeglik skoongemaak met 70% etanoloplossing om langdurige olfaktoriese leidrade te verminder. Om individuele voorkeure te bepaal, is 'n voortoets gedoen waartydens diere gratis toegang tot die hele apparaat vir 15 minute gegee het. As groep het diere nie beduidende voorkeur vir 'n spesifieke kamer gehad nie, maar elke individuele dier het 'n effense voorkeur gehad. Rotte wat 'n wesenlike voorkeur getoon het vir een van die kamers (> 200 s verskil tussen tyd spandeer in elk van die kamers; <5% van die diere) tydens die voortoets is uitgesluit van die studie. Tydens die kondisionering is die middel gekoppel aan die kamer wat aanvanklik verkies is of nie-voorkeure met behulp van 'n onbevooroordeelde paradigma (Tzschentke, 2007) en diere was beperk tot die kamers vir 30 min. Diere is soggens met sout (ip) ingespuit (9: 00 AM tot 12: 00 PM) en beperk tot die soutpaarkamer (beheer). In die namiddag (1: 00-PM), is diere ingespuit met morfien (ip, 4 mg / kg, 00 mg / kg of 0.5 mg / kg; morfinsulfate opgelos in 5.0% sout, Johnson Matthey) en beperk na die morfienpaarkamer. Diere was onderworpe aan twee kondisioneringsdae. Die volgende dag (10.0 d na laaste dag van paring) is 'n na-toets, prosedureel identies aan die pretest, uitgevoer. Vir statistiese analise is die tyd wat in die morfienpaarkamer tydens die naskoets spandeer is, vergelyk met die tyd wat in die soutpaarkamer tydens die na-toets vir seksueel-naïewe of ervare mans binne elke dosis bestee is deur 'n gepaarde t toets. p <0.05 is as statisties beduidend beskou. Bykomende kontrolegroepe van seksueel naïewe en ervare diere het sout in beide gepaarde en ongepaarde kamers gekry om as negatiewe kontroles te dien. Geen verskil in die tyd wat tussen die kamers deurgebring is, is vir enige groep opgespoor nie.

Effekte van sistemiese naloksoon op ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag

Eksperimentele ontwerp.

Seksuele ervaring lei tot die fasilitering van seksuele gedrag wat vir minstens 1 maand gehandhaaf word (Pitchers et al., 2012). Om die effek van MOR te demonstreer op ervaringsgeïnduceerde fasilitering van seksuele gedrag, het seksueel ervare diere naloksoon of sout ontvang voor die vyf opeenvolgende paringsessies (n = 12 elk) soos hierbo beskryf. Een week na die laaste paringsessie is 'n finale paringstoets gedoen waarby alle diere toegelaat word om te mate tot een ejakulasie of tot 1 h. Geen naloksoon- of soutbehandeling is toegedien voor paring op die finale toetsdag nie. Parameters van paring is vergelyk om te bepaal of naloksoon óf seksuele ervaring-geïnduseerde fasilitering van paring (dag 1 vs dag 5) beïnvloed het óf instandhouding van hierdie fasilitering (dag 5 vs toets) met behulp van 'n tweerigting-ANOVA [faktore: behandeling (sout versus naloksoon ) en dag (dag 1, dag 5, of toets)] en Holm-Sidak metode vir post hoc vergelykings. Vir alle statistiese toetse, p <0.05 is as statisties beduidend beskou.

Addisionele beheer eksperimente

Sistemiese naloksoon op toetsdag.

Om die gewysigde seksuele gedrag op die finale paringstoetsdag te wys was nie as gevolg van die afwesigheid van naloksoon nie, het ons óf naloksoon of sout op die laaste paring toetsdag toegedien aan diere wat paring gekry het met naloksoon terwyl hulle seksuele ondervinding opgedoen het. Spesifiek, alle diere het naloksoon inspuiting (10 mg / kg, sc) 30 min voorafgaande paring ontvang gedurende een opeenvolgende dae na een ejakulasie. Op toetsdag 5 d later het ongeveer die helfte van die diere 'n inspuiting van naloksoon (7 mg / kg, n = 7) of sout (n = 6) 30 min voor die bekendstelling van 'n ontvanklike vrou. Seksuele gedrag is waargeneem en aangeteken. Parameters van paring is vergelyk om te bepaal of naloksoon óf seksuele ervaring-geïnduseerde fasilitering van paring (dag 1 vs dag 5) beïnvloed het óf instandhouding van hierdie fasilitering (dag 5 vs toets) met behulp van 'n tweerigting-ANOVA [faktore: behandeling (sout versus naloksoon ) en dag (dag 1, dag 5, of toets)] en Holm-Sidak metode vir post hoc vergelykings. Vir alle statistiese toetse, p <5% is as statisties beduidend beskou.

Effekte van naloksoon op korttermynuitdrukking van gefasiliteerde seksuele gedrag.

Die gevolge van naloksoon (10 mg / kg, sc) behandeling tydens paring is tydens 'n finale paring toetsdag getoets op daaropvolgende seksuele gedrag, wat slegs na die laaste paring (sout, n = 5; naloksoon, n = 4).

Sistemiese naloksoonvoorbehandeling.

Om vas te stel of dit herhaaldelik behandel word, veroorsaak naloksoon alleen die verswakking van seksuele gedrag 7 d na die laaste behandeling, op seksuele naïefdiere vyf daaglikse naloksoon (10 mg / kg, sk) of soutinspuitings op opeenvolgende dae voor 'n paringstoets 7 d na finale naloksoon of soutinjectie. Op hierdie laaste toetsdag het diere geen inspuiting ontvang nie. Seksuele gedrag is waargeneem en aangeteken soos hierbo beskryf. Parameters van paring is vergelyk tussen groepe wat ongepaarde gebruik het t toetse. Vir alle statistiese toetse, p <5% is as statisties beduidend beskou.

Sistemiese naloksoon en seksbeloning.

Een moontlikheid vir die verswakkende effekte van naloxone op die vertoon van die handhawing van gefasiliteerde seksuele gedrag is dat naloxone die lonende gevolge van seksuele gedrag blokkeer. Om hierdie moontlikheid te toets, is die CPP-paradigma uitgevoer vir seksuele gedrag onmiddellik na naloksoon of soutinspuiting by mans sonder enige vorige seksuele ervaring. Die CPP-prosedure was soortgelyk aan die hierbo beskryf vir morfien-CPP, insluitende voorproef, kondisioneringsdae en na-toets.

Seksgedrag is gepaard met die aanvanklik nie-voorafgaande kamer. Op 'n gereelde manier het elke dier 'n inspuiting van naloksoon (n = 12) of sout (n = 11) 30 min voor toegang tot 'n ontvanklike vrou. Die gemiddelde duur van paringsessie was ~13 min. Een minuut na ejakulasie is die dier in die gepaarde kamer geplaas vir 30 min. Op die ander kondisioneringsdag het diere 'n inspuiting ontvang van naloksoon of sout (wat ook al voor hulle gekry is), en in die ongepaarde kamer vir 30 min geplaas. Daarna is 'n na-toets uitgevoer, identies aan die pretest. Om kamervoorkeur te bepaal, is die tyd wat in die gepaarde kamer tydens die voor- en na-toets bestee is, vergelyk. Vir statistiese analise, gepaar t toetse is gebruik om voor- en verskil tellings te vergelyk, en tyd in gepaarde kamer tydens die voor- en na-toets om vas te stel of 'n beduidende CPP vir seksuele gedrag gevorm is. p <0.05 is as beduidend beskou.

Effekte van intra-VTA naloksoon op ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag

Eksperimentele ontwerp.

Om vas te stel of EOP-aksie spesifiek in die VTA verantwoordelik was vir die uitwerking van seksuele ondervinding-geïnduseerde veranderinge in seksuele gedrag, het diere voor vyf daaglikse paringsessies plaaslike infusie van naloksoon of sout in die VTA ondergaan. Gedrags paradigma was soortgelyk aan die sistemiese naloksoon eksperiment. Seksueel ervare diere mag gedurende 5 opeenvolgende dae gaar word tot een ejakulasie of tot 1 h. Vyftien minute voordat die ontvanklike vrou bekend gestel is, het die manlike rotte bilaterale infusies van naloksoon (10 μg / μl per halfrond, 0.5 μl volume, opgelos in 0.9% sout) of sout (0.5 μl per halfrond) ontvang. Bilaterale mikroinjecties is toegedien teen 'n vloeitempo van 0.5 μl / min oor 'n 1-mininterval gevolg deur 'n addisionele 1-min met die inspuitingskanaal wat in plek was vir diffusie. Die inspuitingskanaal is dan vervang met die dummykanaal en stofdop. Een week na die laaste dag van paring (toetsdag), het alle diere weer eens gesing tot ejakulasie sonder 'n infusie van naloksoon of sout. Figuur 3A beskryf die eksperimentele ontwerp. Data-analise is uitgevoer soos beskryf in die sistemiese naloksoon-eksperiment.

Kanaalchirurgie.

Manlike rotte was narkoseer met 'n intraperitoneale inspuiting (0.1 ml / kg) ketamien (0.87 mg / ml) en xylazine (0.13 mg / ml), en in 'n stereotaksiese apparaat (Kopf Instruments) geplaas. Bilaterale 21-gauge-kanukane (Plastics One) is deur klein boorgate in die skedel in die brein verlaag na die VTA by -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML van bregma en -7.8 mm DV van die bokant van die skedel volgens Paxinos en Watson (2013). Kanonne is verseker met tandheelkundige akriel wat aan drie skroewe in die skedel vasgeheg is. Diere het 'n 2-week herstelperiode ontvang, en is daagliks hanteer vir habituasie tot hanterings- en inspuitingsprosedures wat tydens gedragstoetsing gebruik is.

Kanaalplasingverifikasie.

Die plasing van die kanna's is ondersoek met behulp van TH-immunostaining om te bevestig dat die VTA akkuraat geteiken is. Slegs diere met behoorlike plasings is ingesluit in ontledings (finale groepgroottes: ervare sout n = 8; ervare naloksoon n = 6). Drie addisionele diere wat intra-VTA-naloksoon-inspuitings wat buite die VTA gerig is, is saamgegroepeer in 'n "gemiste" inspuitingsgroep. Die gemiste groep is afsonderlik geanaliseer om as anatomiese kontrole en Mann-Whitney te dien U toets is gebruik om gedrag op die finale toetsdag te vergelyk met naloksoon- en sout behandelde ervare mannetjies.

Paring-geassosieerde kontekstuele cue-geïnduseerde PERK uitdrukking

Eksperimentele ontwerp.

Blootstelling aan die hok waarin mannetjies ervaring opgedoen het, het getoon dat MOR-aktivering in die VTA en neurale aktiwiteit in VTA en NAc veroorsaakBalfour et al., 2004). Die paringsomgewing dien dus as 'n gekondisioneerde leidraad voorspel van seksuele beloning. Die huidige studie het getoets of MOR-aktivering tydens seksuele ondervinding benodig word vir die daaropvolgende gekondisioneerde cue-geïnduceerde neurale aktivering. Naloksoon of sout was sistemies (ip) 30 min voor plasing in die paringsarea en die bekendstelling van 'n ontvanklike vrou vir paring (ervare), of voor die beheer manipulasie wat bestaan ​​het uit plasing in die hanteringskas sonder voorstelling van die vroulike (neutrale) omgewing; naïef). So is vier eksperimentele groepe geskep: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal, en Exp NLX. Een week na die finale paringsessie was die helfte van die diere in elke groep blootgestel aan die paringshok (Exp mans: geslagsverwante toestande) of hok (naïef mannetjies: onverskillige / neutrale aanwysers), terwyl die ander helfte nie blootgestel is aan enige leidrade en in plaas daarvan gebly in die huishokke (om basislyn pERK uitdrukking te bepaal). Hierdie eksperimentele paradigma het 8-groepe opgebou: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-Geen Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 elk behalwe Naive NLX-No Cue, n = 3). Diere is geperfumeer 10-15 min na die cue blootstelling. Beheerdiere is van hul tuishokke verwyder en gelyktydig geperfuseer.

Immunohistochemie.

Seksie en immunohistochemie is uitgevoer soos hierbo beskryf. Hier het ons 'n konyn polyklonale teenliggaam gebruik teen p42 en p44 MAP Kinases ERK1 en ERK2 (PERK; 1: 4 000; Cell Signal Technology). Die primêre teenliggaam is omvattend in die literatuur gekenmerk (Roux en Blenis, 2004; Murphy en Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Daarbenewens het die weglating van die primêre teenliggaam alle immunoreaktiwiteit en Western blot-analise van rotbreinweefsel verhoed dat twee bande teen die toepaslike molekulêre gewigte geopenbaar is.

Data-analise.

pERK-immunoreaktiewe (-IR) selle is getel in 'n aantal breinstreke deur 'n kamera lucida-tekenbuis aan 'n Leica DMRD-mikroskoop: NAc [kern (C) en dop (S); 400 × 600 μm; mediale prefrontale korteks; mPFC; anterior cingulate area (ACA); prelimbiese korteks (PL); infralimbiese korteks (IL); 600 × 800 μm elk], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm), en basolaterale amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Twee afdelings is per breingebied getel en die aantal selle in die standaardareas van ontledings is dan bereken as getalle selle per mm2. Die twee tellings is gemiddeld per dier bereken vir die berekening van groepmidde. Groepgemiddeldes binne seksueel ervare of naïefgroepe is vergeleke met die gebruik van tweerigting-ANOVA [faktore: dwelmbehandeling (NLX of Sal) en cue (cue of no cue)] gevolg deur post hoc vergelykings deur gebruik te maak van die Holm-Sidak of Mann-Whitney somme toetse waar toepaslik met 'n betekenisvlak van p <0.05. In die NAc-dop van seksueel ervare diere was daar 'n sterk neiging in die rigting van die belangrikheid van die faktore, en dus is paarsgewyse vergelykings getref om slegs sout (Sal-No Cue) en sout cue (Sal + Cue) groepe te vergelyk.

Beelde.

Digitale beelde is vasgelê met behulp van 'n CCD-kamera (Macrofire, Optronics) wat aan 'n Leica mikroskoop (DM5000B) met vaste kamera instellings. Beelde is ingevoer in Adobe Photoshop 9.0 sagteware. Beelde is op geen manier verander nie, behalwe vir aanpassing van helderheid en kontras.

Results

Geslagservaring-geïnduceerde veranderinge in VTA dopamien selle

Seksuele ondervinding het gelei tot 'n afname in VTA dopamien soma grootte (Fig 1A-C). Seksuele ervaring het die area en omtrek van die soma van VTA TH-IR selle aansienlik verminder (area: F(1,31) = 23.068, p <0.001; omtrek, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Daar was ook 'n belangrikste effek van tyd (gebied: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; omtrek, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) en 'n beduidende interaksie tussen ervaring en tyd (area: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; omtrek, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Pairwise vergelykings het getoon dat die gebied en omtrek van TH-IR selle aansienlik verminder 1 en 7 d na die laaste dag van seksuele gedrag by seksueel ervare diere in vergelyking met seksueel-naïewe kontroles [Fig 1B, area: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, omtrek: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 d)]. Die effek van seksuele gedrag het verdwyn, gevolg deur die periode van beloning onthouding, aangesien die soma-grootte van TH-IR neurone na die vorige paringsessie na die basislyn 31d teruggekeer het (Fig 1B, area: p = 0.798; C, omtrek: p = 0.785). Seks-ervaring-geïnduceerde veranderings is nie op een van die tydspunte in sirkelvormigheid opgespoor nie (Fig 1D). VTA dopamien soma grootte vermindering was nie afhanklik van daaglikse paringsessies nie, aangesien paringervaring tydens vyf tweeweeklikse paringsessies ook 'n verminderde VTA dopamien soma grootte geproduseer het (Fig 2A,B, E-H, area: p = 0.004; omtrek: p <0.001). Daarenteen het sekservaring geen invloed op die soma-grootte van TH-IR in die substantia nigra nie (Fig 2C, I-J, area: p = 0.13; omtrek: p = 0.16) of veranderde soma grootte in nabygeleë VTA nie-TH-IR neurone (Fig 2D, E-H, area: p = 0.46; omtrek: p = 0.45).

Figuur 1. 

Endogene opioïde-geïnduceerde soma grootte veranderinge van VTA dopamienneurone. A, Verteenwoordigende beelde van VTA dopamienneurone van seksueel naïewe en ervare diere wat die afname in soma-grootte 7 d toon na die laaste paringsessie. Skaalbalk, 5 μm. Kwantitatiewe data wat toon dat seksuele ondervinding (Exp, swart bars) aansienlike afname in gebied veroorsaak het (B; in μm2) en omtrek (C; in μm) van VTA dopamien selle, 1 d (Naive, Exp; n = 6) en 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), maar nie 31 d (Naïef, n = 6; Exp, n = 8) na finale paring, in vergelyking met seksueel naïewe kontroles (Naive, white bars). Oppervlakte is in ervare mans verlaag tot 84% in vergelyking met naïewe kontroles by 1 of 7 d. Omtrek is verlaag tot 91.6 en 90% in ervare groepe vergeleke met beheer by 1 en 7 d resp. Daar was geen effek op sirkelvormigheid nie (D). Hierdie dopamien sel plastisiteit in die area (E) en omtrek (F) is verhoed deur naloksoon (NLX, n = 8), maar nie sout nie (Sal, n = 7) behandeling tydens paring, 7 d na finale paringsessie in vergelyking met seksueel naïewe kontroles (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM; * dui op 'n beduidende verskil in vergelyking met seksueel naïewe kontrole van dieselfde dag (B, C) of in vergelyking met sout behandelde seksueel-naïewe kontrole en naloksoon-behandelde seksueel ervare mannetjies (E, F).

Figuur 2. 

Seksuele ondervinding het nie die grootte van substanties in substantia nigra dopamienneurone of VTA-nondopamienneurone verminder nie. VTA TH-IR neuron soma area (A; in μm2) en omtrek (B; in μm) in seksueel naïewe (wit) en ervare (swart) diere wat ervaring ondervind het deur twee keer per week te parkeer eerder as gedurende opeenvolgende dae. Substantia nigra TH-IR soma area (C) en VTA nie-TH-IR soma-gebied (D) in seksueel naïewe (wit) en ervare (swart) diere. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM; * dui op beduidende verskil in vergelyking met seksueel naïewe kontrole. Verteenwoordigende beelde wat TH-IR (bruin) neurone in VTA van seksueel-naïef toon (E), en ervare (F) mans. G, H, 'N Hoër vergrotingsbeeld van die neuron wat deur die pyl aangedui word E en F onderskeidelik. Nissl-gekleurde neurone word in blou in hierdie beelde getoon. Verteenwoordigende beelde wat TH-IR neurone in SN van seksueel naïef wys (I) en ervare (J) mans. Skaalstawe: E-J, 20 μm.

Seks-ervaring-geïnduseerde soma grootte reduksie van VTA dopamienneurone is afhanklik van opioïede reseptor aktivering

Die vermindering van VTA dopamienneuron soma grootte veroorsaak deur seksuele ervaring is geblokkeer deur die nie-selektiewe MOR antagonist naloksoon, wat voor elke paringsessie toegedien word. Naloksoonbehandeling voor paringsessies het 'n beduidende uitwerking op die area gehad (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) en getrek na 'n beduidende effek op omtrek (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). 'N Beduidende interaksie tussen ondervinding en naloksoonbehandeling is gevind vir area (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) en omtrek (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Pairwise vergelykings het getoon dat seksuele ervaring in sout behandelde diere aansienlik verminder area en omtrek van VTA dopamienneurone 7 d na die laaste paringsessie in vergelyking met sout behandelde seksueel naïewe mans (Fig 1E, area: p = 0.018; F, omtrek: p = 0.007). In teenstelling hiermee, het seksueel ervare naloksoonbehandelde diere nie verskil van naloksoon-behandelde naïewe mans nie (Fig 1E, area: p = 0.483; F, omtrek: p = 0.330). Daarbenewens was die soma grootte van ervare soutdiere aansienlik verminder in vergelyking met ervare naloksoondiere (Fig 1E, area: p = 0.002; F, omtrek: p = 0.002). Hierdie effek van naloksoon was spesifiek vir seksuele ondervinding, aangesien naloksoonbehandeling alleen nie die TH-IR-sel soma grootte beïnvloed het in mans wat met seksueel naïef naloksoon behandel is, in vergelyking met sout behandelde kontrole (Fig 1E,F). Daarbenewens was hierdie effek van naloksoon op ervaring-geïnduceerde soma grootte vermindering nie te wyte aan die effekte van naloksoon op seksuele gedrag nie, aangesien paringsgedrag nie beduidend verskil het tussen naloksoon- en sout behandelde mans nie, behalwe vir 'n langer tyd om paring na ejakulasie te begin (post-ejakulasie interval) by naloksoon-behandelde mans tydens die eerste en vyfde paringsessie (p = 0.03 en p = 0.004, onderskeidelik). Beide sout- en naloksoonbehandelde mans het gedurende elk van die vyf paringsessies geëksamineer na ejakulasie.

Seksuele ervaring-geïnduseerde morfienbeloningverdraagsaamheid

Die effekte van seksuele ondervinding op VTA dopamien soma grootte deur die werking van EOP in die VTA is soortgelyk aan dié wat vir eksogene opiate gerapporteer word (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Daarom is getoets of natuurlike beloning-geïnduceerde VTA dopamien-sel plastisiteit beloning vir die opiaatmorfien beïnvloed. Inderdaad, seksuele ervaring het morfienbeloningstoleransie veroorsaak, soortgelyk aan die uitwerking van chroniese opiate (Russo et al., 2007). Seksueel ervare mans het misluk om 'n CPP te ontwikkel vir 0.5 mg / kg morfien dosis; terwyl seksuele naïewe mans 'n CPP vir hierdie dosis gevorm het, soos aangedui deur 'n groter hoeveelheid tyd in die morfienpaarkamer te spandeer in vergelyking met die soutpaarkamer tydens die na-toets (Fig 3; p = 0.039). Beide seksueel-naïewe en ervare groepe het 'n aansienlik groter hoeveelheid tyd in die morfienpaarkamer deurgebring in vergelyking met die soutpaarkamer met hoër dosisse morfien: 5.0 mg / kg (Fig 3; naïewe: p = 0.029; Exp: p = 0.012) en 10.0 mg / kg (Fig 3; naïewe: p <0.001; Exp: p = 0.002).

Figuur 3. 

Die effek van seksuele ondervinding op morfienbeloning. Tye spandeer in sout- (Sal) of morfienpaar (Mor, 0.5, 5 of 10 mg / kg liggaamsgewig) kamers tydens die na-toets in seksueel naïef (Naïef, n = 10-13) of ervare (Exp, n = 9-13) mans. Data aangebied as gemiddelde ± SEM; * dui op beduidende verskil in vergelyking met Sal-gepaarde kamer binne dieselfde diere. NS, nie beduidend nie.

Geslagservaring-geïnduseerde fasilitering van paringsgedrag is afhanklik van opioïede reseptoraktivering

Die bevindings tot dusver toon dat EOP wat tydens die XTAX-daaglikse XTAX-samestelling tydens die XTAX-samestellings voorkom, plastisiteit van die VTA-dopamienneurone veroorsaak, wat soortgelyk is aan die effekte van chroniese morfien- of heroïen-selfadministrasie (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Ons het veronderstel dat VTA dopamien soma-grootte vermindering van kritieke belang is vir die leer van beloning en spesifiek vir seksuele ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksgedrag in terme van motivering en prestasie. Hierdie hipotese is getoets deur MOR te blokkeer deur naloksoon te gebruik tydens die paring en ondersoek van die effekte op die fasilitering van seksuele gedrag wat tydens seksuele ondervinding tydens die vyf daaglikse paringsessies veroorsaak is. Data word aangebied in Figuur 4 vir die eerste en vyfde paringsessies, aangesien dit die data is wat die ervaringsgerigte fasilitering van paringsgedrag die beste illustreer. Daarbenewens word die langtermyn-effekte van naloksoonbehandeling tydens die paringsessies getoets op die instandhouding van ervaringsgeïnduceerde fasilitering van paringsgedrag tydens 'n finale paringstoets 1 week later. Figuur 4A toon die eksperimentele ontwerp. Daar was 'n belangrike hoof-effek van paringsessie op alle parameters van seksgedrag (berglatensie: F(2,55) = 11.286, p <0.001; vertraging van intrommissie: F(2,55) = 8.767, p <0.001; ejakulasie latency: F(2,55) = 10.368, p <0.001) en naloksoonbehandeling op latensies om te monteer (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) en intromissie (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Pairwise vergelykings het getoon dat naloksoonbehandeling tydens die eerste paringsessie seksuele gedrag beïnvloed het omdat naloksoondiere aansienlik langer latensies gehad het om die eerste berg te hou (p = 0.002) en intromissie (p = 0.002) in vergelyking met soutkontroles op die eerste dag van paring. Hierdie naloksoon-effek op aanvanklike geslagsgedrag is verminder deur seksuele ervaring en nie waargeneem tydens enige van die volgende paringsessies nie (Tabel 1). Daarbenewens het naloksoonadministrasie voor elk van vyf paringsessies nie die aanvanklike fasilitering van seksuele gedrag met seksuele ondervinding verhoed nie. In ooreenstemming met die versterkende effekte van seksuele ondervinding, het soutbehandelde mans uitgestal verminderde latensies na die berg (Fig 4B; p = 0.032) intromissie (Fig 4C; p = 0.033) en ejakulasie (Fig 4D; p <0.001) tydens die vyfde paringsessie in vergelyking met die eerste paringsessie, wat dui op fasilitering van seksuele gedrag. Net so het mans wat met naloxoon behandel is, aansienlik korter vertragings vertoon om te monteer (Fig 4B; p <0.001), intromissie (Fig 4C; p <0.001) en ejakulasie (Fig 4D; p = 0.017) op die vyfde in vergelyking met die eerste dag. Daarbenewens het naloksoonbehandelde mans nie verskil van soutkontroles in enige van die latensies gedurende die vyfde paringsessie nie.

Figuur 4. 

Endogene opioïede speel 'n kritieke rol in die ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag. A, Eksperimentele ontwerp. B-D, Seksuele gedragsparameters vir mans wat met sout behandel word (Sal, witstawe, n = 11) of naloksoon (NLX; swart bars, n = 12) met sistemiese toediening. Gegewe data is latensie om te berg (B; sekondes), intromissie (C; sekondes), en ejakulasie (D; sekondes) op dae 1 en 5 van vyf opeenvolgende dae van paring. Daarbenewens word data vir die finale paringstoets, 7 d, na die vyfde paringsessie getoon. Data word aangebied as gemiddelde ± SEM; + dui op 'n beduidende verskil tussen dae 1 en 5 binne behandeling; * dui op 'n beduidende verskil tussen toetsdag en dag 5 binne behandeling; # dui op 'n beduidende verskil tussen naloksoon- en soutgroepe binne dag.

Tabel 1. 

Naloksoonadministrasie voorafgaand aan paring het slegs latensies op die eerste dag van paring toegeneem

In teenstelling hiermee het die naloksoonbehandeling tydens seksuele ervaringsessie die instandhouding van ervaringsgeïnduceerde fasilitering van seksuele gedrag op die finale paring toetsdag ontwrig. Die toetsdag is 7 d na die finale paringsessie uitgevoer in die afwesigheid van 'n naloksoon inspuiting. Sout behandelde beheer mans het die verwagte ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag vertoon. Spesifiek, latensies vir berging, intromissie en ejakulasie het nie verskil tussen die vyfde paringsessie en die finale toetsdag nie (Fig 4B-D). AANGESIEN dat naloksoonbehandelde mans 'n beduidende toename in latensies het om te berg (Fig 4B; p = 0.033), intromissie (Fig 4C; p = 0.036) en ejakulasie (Fig 4D; p = 0.049) op die toetsdag in vergelyking met die vyfde paringsessie. Ook op die toetsdag is naloksoondiere gevind dat dit aansienlik stadiger was as die sout behandelde mannetjies soos aangedui deur langer latensies om te berg (Fig 4B; p = 0.017) en intromissie (Fig 4C; p = 0.043). So, die behandeling met naloksoon geblokkeer die instandhouding, maar nie die aanvanklike, ontwikkeling van ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag. Hierdie bevindinge dui op 'n kritieke rol vir EOP-geïnduceerde VTA dopamienneuron plastisiteit op langtermyn uitdrukking van versterking van natuurlike beloning gedrag.

Verskeie addisionele kontrole eksperimente is uitgevoer om te bepaal dat die gevolge van opioïede reseptor blokkade op die verlies van langtermyn versterking van seksuele gedrag plaasgevind het onafhanklik van 'n gebrek aan naloksoon toediening op die laaste paring toets dag (Fig 5A,B), was spesifiek vir die verlies van langtermyn, maar nie korttermyn-instandhouding van paringfasilitering nie (Fig 5E,F), is nie veroorsaak deur die daaglikse blootstelling aan naloksoon alleen nie (Fig 5C,D), en is nie veroorsaak deur 'n verlies van seksuele beloning in naloksoonbehandelde mans nie (Fig 5G,H). Ten eerste om te wys dat veranderde seksuele gedrag op die finale paringstoets nie te wyte was aan die afwesigheid van naloksoon nie, is naloksoon of sout op die laaste paring toetsdag toegedien aan diere wat paring gekry het met naloksoon terwyl hulle seksuele ondervinding opgedoen het (Fig 5A). Daar was 'n belangrike hoof effek van paring dag op latensies te berg (Fig 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) en intromissie (Tabel 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Daar was geen hoof effek van paring dag op latensie tot ejakulasie (Tabel 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Net soos hierbo beskryf, het naloksoonbehandeling tydens paring nie die fasilitering van seksuele gedrag tydens die aanvanklike vyf seksuele ervaringsessies beïnvloed nie. Beide groepe (saline- en naloksoonbehandelde groepe soos bepaal deur behandeling ontvang tydens die finale paringstoets, albei het naloksoon tydens paring ontvang) het getoon dat seksuele gedrag op dag 5 vergeleke met dag 1 vergemaklik is en aansienlik korter latensies tot eerste berg getoon het (Fig 5B; sout: p = 0.033; naloksoon: p = 0.014) en intromissie (Tabel 2; sout: p = 0.034; naloksoon: p = 0.026). Diere wat óf naloksoon of sout op die finale paringstoetsdag ontvang het, het langer latensies om te berg (Fig 5B; sout: p = 0.018; naloksoon: p = 0.029) en intromissie (Tabel 2; sout: p = 0.019; naloksoon: p = 0.020) in vergelyking met die vyfde dag van paringservaring. Daarom het die toediening van naloksoon of sout op die toetsdag onmiddellik voor paring nie die effek van naloksoonbehandeling tydens seksuele ervaringsessies beïnvloed nie en die versagting van langtermyn fasilitering van seksuele gedrag was identies aan dié wat aangetoon is in diere wat geen inspuiting ontvang het nie. op die finale paring toetsdag (Fig 4).

Figuur 5. 

Endogene opioïede is belangrik in die langtermyn-uitdrukking van ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag. A, Experimentele ontwerp vir eksperiment vir die effek van NLX behandeling op toetsdag. B, Laat latensie op dae 1 en 5 van vyf opeenvolgende dae van paring en finale paring toetsdag (Toets) volgende sout (grys) of naloksoon (swart) inspuiting. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM. * dui op 'n beduidende verskil tussen dag 1 en dag 5 binne behandeling. # dui op 'n beduidende verskil tussen toetsdag en dag 5 binne behandeling. C, Eksperimentele ontwerp vir eksperiment om die effek van naloksoonvoorbehandeling alleen sonder seksuele ervaring op paringsgedrag te toets. D, Berg latensie op finale paring toets dag, 7 dae na 5 dae van óf sout of naloksoon inspuiting in die afwesigheid van paring. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM. E, Eksperimentele ontwerp vir eksperiment om te toets of naloksoonbehandeling die korttermynvertoning van gefasiliteerde seksuele gedrag in seksueel ervare diere beïnvloed het. F, Berg latensie op dag 1 en dag 5 van vyf opeenvolgende dae van paring en finale paring toets dag, 1 dag na dag 5 in die teenwoordigheid van sout (grys) of naloksoon (swart) inspuiting. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM. * dui op 'n beduidende verskil tussen dag 1 en dag 5 binne behandeling. G, Eksperimentele ontwerp vir eksperiment om te toets of naloksoonbehandeling die belonende effekte van seksuele gedrag geblokkeer het. HTyd in die paring van gepaarde kamer (in sekondes) tydens die pretest (wit) en na-toets (swart) vir diere wat naloksoon of sout ontvang voor paring. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM; * dui op beduidende verskil in vergelyking met pretest.

Tabel 2. 

Die getoonde data is latensies vir intromissie en ejakulasie (sekondes) van kontrole eksperimente wat uitgevoer is om te bepaal dat die effekte van MOR blokkade op die verlies van langtermyn versterking van seksuele gedrag plaasgevind het onafhanklik van 'n gebrek aan naloksoon toediening op die finale paring toets dag

Om vas te stel of dit naloksoonbehandeling was wanneer dit gepaard gegaan het met seksuele ondervinding en nie herhaaldelik na naloksoon wat die verswakking van seksuele gedrag 7 d na laaste behandeling veroorsaak het nie, het seksueel-naïefdiere vyf daaglikse inspuitings van naloksoon- of soutinjecties ontvang voor 'n finale paringstoets 7 d later (Fig 5C). Geen beduidende verskille is opgespoor vir enige paringsparameter tussen sout- en naloksoonvoorbehandelde groepe nie (Fig 5D; berg latensie; intromissie latensie: sout 139.7 ± 40.3 vs naloksoon 121.83 ± 42.55; ejakulasie latensie: sout 887.9 ± 70.0 vs naloksoon 1050.8 ± 327.31). Hierdie resultate dui aan dat naloksoon alleen nie voldoende is om daaropvolgende seksuele gedrag te verander nie, soortgelyk aan die gebrek aan effekte van naloksoon alleen op VTA dopamienneuroplastisiteit.

Ons vermoed dat naloksoonbehandeling tydens die verkryging van seksuele ondervinding die langtermyn-uitdrukking van seksuele ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag ontwrig. Om dit verder te toets, is die gevolge van naloksoonbehandeling tydens paring getoets op daaropvolgende geslagsgedrag tydens 'n finale paringstoets, wat na die laaste paring slegs 1 d uitgevoer is (eksperimentele ontwerp; Fig 5E). Daar was 'n beduidende hoof effek van paring dag op die berg (Fig 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) en laat intrommisie (Tabel 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Daar was geen beduidende hoofeffek van die dag op die ejakulasie-latency nie (Tabel 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Soos met bogenoemde beskryf, het alle mans (ten spyte van die sout- of naloksoonbehandelings) die fasilitering van seksuele gedrag tydens die vyf seksuele ervaringsessies aangedui wat aansienlik korter latensies aan die berg gewys het (Fig 5F; sout: p = 0.002; naloksoon: p = 0.018) en intromissie (Tabel 2; sout: p = 0.006; naloksoon: p = 0.009) op dag 5 in vergelyking met dag 1. Op dieselfde manier is gefasiliteerde seksuele gedrag gedemonstreer op toetsdag in vergelyking met dag 1 wat aangedui word deur aansienlik korter latensies om te berg (Fig 5F; sout: p = 0.001; naloksoon: p = 0.020) en intromissie (Tabel 2; sout: p = 0.004; naloksoon: p = 0.009). Nog belangriker, het naloksoonbehandeling tydens paring nie die seksuele ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksgedrag beïnvloed tydens die toets van 1 d na seksondervinding, onafhanklik van naloksoonbehandeling op hierdie finale paringstoetsdag nie.

Laastens het ons die moontlikheid getoets dat die verswakende effekte van naloxone op die langtermynuitdrukking van gefasiliteerde seksuele gedrag die gevolg is van 'n blokkerende effek van naloxone op die lonende eienskappe van seksuele gedrag. Naloksoon wat onmiddellik voor paring toegedien is, het egter nie die vorming van CPP vir paring beïnvloed nie (Fig 5G), wat daarop dui dat naloksoonbehandeling nie seksuele beloning verander het nie. Beide sout- en naloksoonbehandelde groepe het 'n beduidende CPP vir seksuele gedrag gevorm, soos aangedui deur aansienlik verhoogde tyd spandeer in sekspaarkamer (Fig 5H; sout: p = 0.038; naloksoon: p = 0.002) tydens die na-toets in vergelyking met die pretest. Daarom oefen naloksoon nie sy nadelige uitwerking op die handhawing van gefasiliteerde seksuele gedrag deur die beloning wat verband hou met seksuele gedrag te blokkeer nie.

Fasilitering van seksuele gedrag is afhanklik van EOP-aksie in die VTA

Om te bevestig dat EOP spesifiek in die VTA optree om langtermyn fasilitering van seksuele gedrag te bewerkstellig, word die eksperimentele ontwerp uiteengesit in Figuur 3A is herhaal met intra-VTA naloksoon infusies eerder as sistemiese inspuitings. Resultate was identies aan sistemiese toediening soos hierbo beskryf. Daar was 'n belangrike hoof-effek van paringsdag op alle parameters van seksgedrag (Fig 6A, berg latensie: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, intromission latensie: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ejakulasie latensie: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) en intra-VTA naloksoon behandeling op latensies om te berg (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) en intromissie (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA-naloksoon het nie die aanvanklike ervaring-geïnduseerde fasilitering van seksuele gedrag tydens die 5 d van paring verhoed nie, aangesien naloksoonbehandelde mannetjies gedemonstreerde verminderde latensies aan die berg gewys het (Fig 6A; p = 0.001), intromissie (Fig 6B; p <0.001) en ejakulasie (Fig 6C; p = 0.001) op dag 5 in vergelyking met dag 1. Naloksoon-behandelde mannetjies verskil nie van sout behandelde mans op die vyfde dag van paring in enige van die latensies nie. Intra-VTA-naloksoonbehandeling, soos sistemiese toediening, het aansienlik verhoogde berg veroorsaak (Fig 6A; p <0.001) en laat intrommisie (Fig 6B; p <0.001) op die eerste paardag in vergelyking met mans wat met sout behandel is, wat nie tydens die volgende paringsessies waargeneem is nie (waartydens mans met naloksoon en sout nie verskil het nie). Een onverwagte waarneming was dat mans wat met soutoplossing behandel is met soutoplossing nie statisties beduidende fasilitering van beroeps- of intromisasie-latency het nie (soos getoon in al die eksperimente hierbo beskryf), en dat slegs die ejakulasie-latency op die vyfde dag gekort is in vergelyking met die eerste dag. (sout: p = 0.001).

Figuur 6. 

Endogene opioïede in die VTA bemiddel ervaring-geïnduceerde fasilitering van seksuele gedrag en sy langtermyn onderhoud. Seksuele gedrag parameters vir mans behandel met sout (Sal, wit bars, n = 8) of NLX (swart bars, n = 6) met intra-VTA toediening. Gegewe data is latensie om te berg (A), intromissie (B), en ejakulasie (C) op dae 1 en 5 van vyf opeenvolgende dae van paring. Daarbenewens word data getoon vir die finale paring toetsdag, 7 d volgende dag 5 in die afwesigheid van sout of naloksoon inspuiting. Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM; + dui op 'n beduidende verskil tussen dae 1 en 5 binne behandeling; * dui op 'n beduidende verskil tussen toetsdag en dag 5 binne behandeling; # dui op 'n beduidende verskil tussen naloksoon- en Sal-groepe binne dag. Skematiese tekeninge van koronale VTA-afdelings (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 van bregma) wat intra-VTA inspuitingsterreine vir alle diere in Eksperiment 5 (sout, wit, naloksoon, swart, gemis, grys) aandui. Gebruik sjabloon tekeninge van Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Kanonne was bilateraal, maar inspuitingsterreine word eensydig voorgestel vir maklike aanbieding. Fr, Fasciculus retroflexus; ML, Mediale lemniscus; SN, substantia nigra.

Intra-VTA naxolonebehandeling het die instandhouding van gefasiliteerde seksuele gedrag waargeneem in seksueel ervare mans, gelyk aan die effekte van sistemiese naloksoon. Spesifiek, op die laaste toetsdag het naloksoonbehandelde mans meer latensies gehad om te berg (Fig 6A; p = 0.011), intromissie (Fig 6B; p = 0.010), en ejakulasie (Fig 6C; p = 0.015) in vergelyking met hul vyfde paringsessie en vergelyk met die sout behandelde mans op die finale toetsdag (Fig 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). In teenstelling hiermee, het sout behandelde diere nie in latensies verskil van berging en intromissie tussen die finale toetsdag en dag 5 van paring nie. Hierdie effekte was spesifiek vir die aflewering van naloksoon na die VTA, aangesien mans met kanasielokale naby, maar nie die VTA gerig is nie (Fig 6D; n = 3) vertoon langtermyn fasilitering van seksuele gedrag soortgelyk aan sout behandelde kontrole (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 en aansienlik anders as in die VTA-naloksoondiere op die finale paring toetsdag (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

EOP-aksie word benodig vir seksverwante gekondisioneerde cue-geïnduceerde neurale aktivering

Gebaseer op die bevindings tot dusver, het ons veronderstel dat EOP-aktivering in VTA tydens paringervaring en daaropvolgende VTA dopamien soma grootte vermindering van kritieke belang is vir die toewysing van aansporingsvermoë om beloningverwante stimuli te koördineer en gevolglik die handhawing van gefasiliteer van seksuele gedrag. Om hierdie hipotese te toets, is die gevolge van die opioïde reseptore se blokkering tydens paringervaring op neurale aktiwiteit geïnduceerd deur gevolglike blootstelling aan gekondisioneerde kontekstuele leidrade wat voorspelbaar is van seksuele beloning (seksverwante kontekstuele leidrade). Seksueel-naïewe diere was ook blootgestel aan omgewingswyses, maar dit was nie geassosieer met vorige paringervaring nie, dus was neutrale leidrade. Laastens is die basiese pERK-vlakke bepaal in seksueel ervare en naïef-kontrolegroepe wat in die huishokke gebly het en nie aan enige leidrade blootgestel is nie. Bevestiging en uitbreiding van vorige bevindinge (Balfour et al., 2004), blootstelling aan kontekstuele leidrade wat met vorige geslagsbeloning verband hou, het pERK uitdrukking aansienlik verhoog in seksueel ervare mans in die NAc (Fig 7) en mPFC (Fig 8A-C), maar veroorsaak nie neuronale aktivering in die BLA nie (Fig 8D) of CPu (data nie getoon nie). Daar was hoof-effekte van cue-blootstelling in NAc-kern (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), en PLF(1,12) = 5.241, p = 0.041), en naloksoonbehandeling in die NAc-kern (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), en PLF(1,12) = 7.336, p = 0.019). Daar was 'n beduidende interaksie in die NAc-kern (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014), en IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Eerstens, paring-geassosieerde Cue-blootstelling het pERK in sout behandelde seksueel ervare diere (Exp Sal ​​+ Cue) aansienlik toegeneem in vergelyking met beheermaatreëls wat nie aan enige leidrade blootgestel is nie en in die NAc-kern (Exp Sal-No Cue) in NAc-kern geneem is (Fig 7A; p <0.001), en mPFC-substreke ACA (Fig 8A; p = 0.001), PL (Fig 8B; p = 0.003), en IL (Fig 8C; p = 0.029). In teenstelling, in die sout behandelde seksueel-naïewe diere, het blootstelling aan die kontekstuele aanwysings, wat nie met seksuele beloning geassosieer was, pERK in enige van die breinareas veroorsaak nie (Naive Sal + Cue in vergelyking met naïef Sal-No Cue; Vye. 7, 8), wat aantoon dat induksie van pERK spesifiek is vir die blootstelling van die seksuele ervaring-geassosieerde leidrade. Daarbenewens het seksuele ervaring alleen nie die basiese pERK-uitdrukking in enige van die breinstreke verander nie, aangesien daar geen verskille was tussen groepe wat uit die huishokke geneem is, of dit seksueel naïef of ondervinding was nie, en met sout of naloksoon behandel is.

Figuur 7. 

Endogene opioïede aksie word benodig vir neurale aktivering in NAc wat veroorsaak word deur seksverwante gekondisioneerde leidrade. Getalle PERK-IR-selle per mm2 in die kern van die kernwapen (A) en dop (B) in seksueel naïewe (wit) en ervare (Exp; swart) diere wat met sistemiese NLX of sout (Sal) tydens paringsessies (Exp mans) of hanteringsessies (Naïef mans) voorbehandeld is. Groepe is óf blootgestel aan kontekstuele leidrade (Cue), wat paring-geassosieerde leidrade in Exp-mannetjies en neutrale leidrade in Naïefdiere was of uit die huishokke geneem is (No Cue, aangedui deur 'n gebrek aan Cue-etiket). Data word aangebied as gemiddelde ± SEM; * dui op 'n beduidende verskil in vergelyking met soutvoorbehandelde, geen cue-exposed beheermaatreëls (Naive Sal-No Cue en Exp Sal-No Cue); # dui op beduidende verskil in vergelyking met Sal-behandelde Cue-exposed Exp groep (Exp Sal ​​+ Cue). Verteenwoordigende beelde van pERK-IR selle per mm2 in die NAc-kern van seksueel ervare mans met Sal (C, D) of NLX (E, F) wat óf uit die hokkas (No Cue, C, E) geneem is, óf blootgestel aan die paringverwante kontekstuele leidrade (Cue; D, F). N = 4 elke groep behalwe Naive NLX (No Cue), n = 3. AC, Anterior kommissie. Skaalbalk, 100 μm.

Figuur 8. 

Die effekte van naloksoon op paring-geïnduceerde pERK-uitdrukking in ander VTA-teikengebiede. Getalle PERK-IR-selle per mm2 In seksueel naïewe (wit) en ervare (Exp; swart) diere wat met sistemiese NLX of sout (Sal) tydens die paringsessies behandel is en blootgestel is aan die kontekstuele leidrade (Cue) of huishok (geen leidrade) in die ACAA), PL (B), IL (C), en BLA (D). Data verteenwoordig gemiddelde ± SEM; * dui op 'n beduidende verskil in vergelyking met soutvoorbehandelde, geen cue-exposed beheermaatreëls (Naive Sal-No Cue en Exp Sal-No Cue); # dui op 'n beduidende verskil in vergelyking met Sal-behandelde cue-exposed seksueel naïewe kontroles (Naive Sal + Cue).

Ter ondersteuning van ons hipotese, het naloksoonbehandeling tydens seksuele ondervinding die pERK-induksie aansienlik verswak deur die geslagsverwante gekondisioneerde leidrade. pERK-uitdrukking in hierdie naloksoonbehandelde ku-blootgestelde ervare mannetjies (Exp NLX + Cue) verskil nie van die basiese pERK-uitdrukking in enige van die seksueel naïewe of ervare kontrolegroepe wat uit die tuiskooie (Naive Sal-No Cue of Naive NLX- Geen Cue). Verder was pERK-uitdrukking in die naloksoonbehandelde ku-blootgestelde ervare mannetjies (Exp NLX + Cue) aansienlik laer in vergelyking met sout behandelde ku-blootgestelde ervare diere (Exp Sal ​​+ Cue) in NAc-kern (Fig 7A; p = 0.002) en mPFC subregions (Fig 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

In die NAc-dop het die tweerigting-ANOVA-analise nie statisties beduidende effekte van die faktore se blootstelling aan blootstelling en naloksoonbehandeling opgelewer nie. 'N Paarse vergelyking het egter getoon dat die blootstelling aan die blootstelling PERK in die sout-behandelde seksueel ervare groep (Exp SAL + Cue) veroorsaak het in vergelyking met die neutrale blootgestelde Saline naive control group (Fig 7B; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

Bespreking

Die huidige studie toon dat EOP wat in die VTA optree tydens seksuele gedrag, 'n natuurlike beloningsgedrag, 'n sterk, maar kortvarige vermindering in soma grootte van VTA dopamien selle veroorsaak het. Die vermindering in soma grootte is nie waargeneem in VTA nie-dopamiene neurone, of in dopamienneurone in die nabygeleë substantia nigra, wat daarop dui dat hierdie verandering spesifiek vir VTA dopamien selle was. Hierdie VTA dopamien plastisiteit verskyn soortgelyk aan dié wat veroorsaak word deur chroniese opiate blootstelling (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) en het soortgelyke toleransie vir eksogene opiate (morfien) beloning veroorsaak. Ons het getoon dat VTA dopamien plastisiteit van kritieke belang is vir die langtermyn (instandhouding), maar nie korttermyn (ontwikkeling), versterking van seksuele gedrag en beloningsverwante cue-geïnduceerde neurale aktiwiteit (PERK) in VTA-teikengebiede: NAc en mPFC. Hierdie bevindings is 'n aanduiding van 'n rol vir VTA dopamien plastisiteit in die langtermyn uitdrukking van die prikkelbaarheid van natuurlike beloning voorspellende aanwysings of beloning herinnering.

Dit is goed gedokumenteer dat seksuele ondervinding lei tot die fasilitering van daaropvolgende seksuele gedrag, insluitende vinniger aanvang tot paring en verhoogde prestasie (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Hierdie fasilitering of versterking van seksuele gedrag word gehandhaaf vir minstens 28 d na paring (Pitchers et al., 2012). Daarbenewens is getoon dat geslagsgedrag en gekondisioneerde leidrade wat voorspelbaar is vir geslagsbeloning, MOR-internalisasie in die VTA veroorsaak en neuronale aktivering deur die mesolimbiese stelsel veroorsaak, insluitend in VTA (dopamien- en nondopamienneurone), NAc, PFC en BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Dit is goed gevestigde VTA-dopamienneurone speel 'n kritieke rol in die leer en toeskrywing van die aansporingsvermoë van beloningsverwante stimuli (Berridge en Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) en is krities vir beloning voorspelling (Schultz, 2010). Die huidige bevindings brei uit op ons huidige kennis deur aan te toon dat beloningsgeïnduceerde VTA-neuroplastisiteit krities is vir hierdie funksies, en is afhanklik van MOR-aktivering deur EOP in die VTA. Dit is tans onbekend watter EOP is die MOR ligand wat in die VTA optree tydens manlike seksuele gedrag. Alhoewel beide β-endorfien en enkefalien betrokke was by aansporingsmotivering vir voedselversterkers (Hayward et al., 2002), bly dit vir manlike seksuele gedrag vasgestel. Ons het voorheen getoon dat β-endorfiene neurone nie geaktiveer word tydens paring nie, en daar is ook geen toenames in POMC mRNA nie; dus, wat daarop dui dat β endorfien nie die kritieke EOP-aktiwiteit in die VTA mag wees tydens paring nie (Davis et al., 2007). Hierdie VTA dopamien plastisiteit was noodsaaklik vir neurale aktiwiteit in die mPFC, NAc en VTA na aanleiding van blootstelling aan die seksuele beloning-voorspelling van omgewingswyses. Daarbenewens was VTA dopamiene plastisiteit van kritieke belang vir die langtermyn-uitdrukking van verhoogde inisiasie en uitvoering van seksuele gedrag. In teenstelling hiermee is VTA-neuroplastisiteit wat deur seksuele ervaring veroorsaak is, nie nodig vir 'n hegtoniese reaksie nie, aangesien geslagsbeloning (bepaal deur CPP) en korttermynfasilitering van seksuele motivering en prestasie (tydens sekservaring of 1 d later) ongeskonde gebly het ondanks MOR blokkade tydens paringMehrara en Baum, 1990). In plaas daarvan dui die data daarop dat VTA dopamienneuroplastisiteit die langer termyn bemiddel (7 d na laaste seks ervaring; Pitchers et al., 2012) uitdrukking van "wil" van seks beloning en verhoogde gemotiveerde reaksies op paring leidrade (Miller en Baum, 1987; Berridge en Robinson, 1998).

Seksueel ervare diere het kruisverdraagsaamheid teenoor morfienbeloning getoon, soortgelyk aan die effekte van die wiel wat in muise loop, 'n ander natuurlike bevredigende gedrag, 'n effek geblokkeer met naloksoonbehandeling (Lett et al., 2001, 2002) en vasberade om afhanklik te wees van VTA dopamien sel plastisiteit (huidige bevindings). Soortgelyk aan natuurlike belonings, veroorsaak herhaalde blootstelling aan die opiate morfien of heroïen 'n oorgangsvermindering van VTA dopamien soma grootte (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Daarbenewens veroorsaak opiate blootstelling met kort onttrekkingstydperke vergoedingstoleransie, aangesien dit impliseer dat hoër dosisse medisyne vereis word om beloningsverenigings te vorm (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007), en veroorsaak dat self-administrerende diere dwelms inname stimuleer (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Gevolglik tree EOP en opiate op gemeenskaplike neurale substrates om vergoedingstoleransie tydens vroeë onttrekking te veroorsaak, wat 'n kompenserende homeostatiese meganisme kan weerspieël om stimulasie teen herhaalde blootstelling te voorkom (Koob en Le Moal, 2005). In teenstelling hiermee word toleransie na langtermyn opiate-dwelm onthouding omgekeer na 'n sensitiwiteit vir die belonende eienskappe van die geneesmiddel (Harris en Aston-Jones, 2003; Aston-Jones en Harris, 2004; Harris en Gewirtz, 2004). Interessant genoeg is seksuele ondervinding gevolg deur 'n geslagsonderdrukkingstydperk van 7-28 d gevind dat dit sensitiwiteit veroorsaak vir psigostimulerende beloning (Pitchers et al., 2010a), wat afhanklik is van paring-geïnduceerde deltaFosB uitdrukking en dopamienreseptor 1 aktivering in die NAc (Pitchers et al., 2013). Dus, seksuele beloning ervaring veroorsaak gelyktydige opiaat beloning verdraagsaamheid en psigostimulerende beloning sensibilisering, alhoewel 'n langer geslag onthouding tydperk op morfien beloning verdraagsaamheid nog steeds getoets moet word. Ons beweer dat hierdie teenoorgestelde uitwerking op dwelmbeloning bemiddel kan word deur verskillende vorme van neurale plastisiteit in die verskillende areas van die mesolimbiese stelsel: VTA EOP-aksie en dopamienplastisiteit bemiddel die opiaatbeloningsverdraagsaamheid (huidige studie), terwyl NAc deltaFosB uitdrukking psigostimulerende sensitiwiteit beheer (Pitchers et al., 2013). Albei van hierdie gebeurtenisse kan bydra tot die toename van dwelmopname (Ahmed en Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Die molekulêre meganismes waardeur EOP die DTA-dopamienneurone tydens natuurlike beloning gedrag beïnvloed, bly onbekend. Die IRS2-Akt-mTORC2-roete is 'n belangrike mediator van verminderde soma-grootte in die VTA wat veroorsaak word deur herhaalde morfien (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Herhaalde morfienadministrasie-geïnduseerde veranderinge in die grootte van dopamienneurone in die VTA kan voorkom word deur intra-VTA infusies van brein-afgeleide neurotrofe faktor (BDNF; Sklair-Tavron en Nestler, 1995). BDNF aktiveer hierdie pad deur TrkB sein (Russo et al., 2007), 'n reseptorkinase met hoë affiniteit vir BDNF en deel van die IRS2-Akt-pad (Seroogy and Gall, 1993; Numan en Seroogy, 1999), en uitgedruk op dopamien- en GABA-neurone in die VTA. Downregulasie van die verskillende komponente van die IRS2-Akt-pad deur die gebruik van virale vektor-genoordragstegnologie, simuleer die effekte van chroniese opiaatblootstelling. Verder kan die effekte van opiaatblootstelling gered word deur hierdie seinweg te herstel (Russo et al., 2007) en ooruitdrukking van 'n komponent van mTORC2 voorkom morfien-geïnduceerde VTA dopamien soma vermindering (Mazei-Robison et al., 2011). Daarom het vorige werk wat die gevolge van chroniese opiate op VTA dopamien soma grootte ondersoek, bewys dat morfine-geïnduseerde downregulasie van die IRS2-Akt-mTOR-pad beide voldoende en nodig is vir hierdie effek (Mazei-Robison en Nestler, 2012). Dit is dus aanloklik om te bespiegel dat die effekte van seksuele ondervinding op VTA dopamienneuroplastisiteit op dieselfde wyse bemiddel word deur BDNF en die IRS2-Akt-mTORC2-roete.

Ten slotte het die huidige studie getoon dat VTA-neuroplastisiteit veroorsaak word deur ondervinding met natuurlike bevredigende gedrag, veral deur herhaalde manlike seksuele gedrag. Spesifiek, EOP tree op in die VTA om dopamien soma grootte te verminder, wat veronderstel word om geassosieer te word met verhoogde neurale opwekbaarheid en minder dopamien-uitset wat lei tot 'n hipodopaminerge sisteem, en verander die mesolimbiese stelsel wat funksioneer in reaksie op leidrade wat voorspelbaar is van seksuele beloning. Voorts is VTA-neuroplastisiteit van kritieke belang vir die aansporingsmotivering en beloning-geheue, maar nie vir die hedoniese impak van seksuele gedrag nie. Ten slotte, VTA neuroplasticity veroorsaak deur natuurlike beloning gedrag gevolg deur 'n kort tydperk van beloning onthouding invloed opiate beloning en kan dus die kwesbaarheid raak vir die ontwikkeling van dwelmverslawing.

voetnote

  • Ontvang Januarie 12, 2014.
  • Hersiening ontvang Mei 17, 2014.
  • Aanvaar Mei 20, 2014.

  • Hierdie navorsing is ondersteun deur toekennings van die Kanadese Instituut vir Gesondheidsnavorsing aan die LMC en die Natuurwetenskappe- en Ingenieursnavorsingsraad aan KKP

  • Die outeurs verklaar geen mededingende belange.

  • Korrespondensie moet gerig word aan dr. Lique M. Coolen, Universiteit van Mississippi Mediese Sentrum, Departement Fisiologie en Biofisika, 2500 Noordstaatstraat, Jackson, MS 39216-4505. [e-pos beskerm]

Verwysings

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Manlike seksuele gedrag. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Oorgang van matige tot oormatige dwelminname: verandering in hedoniese setpunt. Wetenskap 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Langdurige toename in die vasgestelde punt vir kokaïen selfadministrasie na eskalasie by rotte. Psigofarmakologie 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Aanhoudende toename in die motivering om heroïen in rotte te neem met 'n geskiedenis van dwelm eskalasie. Neuropsigofarmakologie 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobiologiese bewyse vir heoniese allostase wat verband hou met stygende kokaïengebruik. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Escalatie van kokaïen-selfadministrasie is nie afhanklik van veranderde kokaïen-geïnduceerde kerne wat dopamienvlakke behels nie. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Hersubstraten vir verhoogde geneesmiddel soek tydens langdurige onttrekking. Neuro Farmacologie 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Koel LM

    (2004) Seksuele gedrag en seksverwante omgewingswyses aktiveer die mesolimbiese stelsel in manlike rotte. Neuropsigofarmakologie 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Bruin JL,
    3. Yu L,
    4. Koel LM

    (2006) Potensiële bydraes van efferente vanaf mediale prefrontale korteks tot neurale aktivering na seksuele gedrag in die manlike rat. Neurowetenskap 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilamentproteïene en die mesolimbiese dopamienstelsel: algemene regulering deur chroniese morfien en chroniese kokaïen in die rat ventrale tegmentale area. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Wat is die rol van dopamien in beloning: hedoniese impak, beloning leer, of aansporing salience? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Dissekteer komponente van beloning: "hou van", "wil", en leer. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Goud M

    (2012) Seks, dwelms en rock 'n 'roll: hipotesering van algemene mesolimbiese aktivering as 'n funksie van beloningsgenpolimorfismes. J Psychoactive Drugs 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Perifere elektriese stimulasie het die selgroottevermindering en verhoogde BDNF-vlak in die ventrale tegmentale area omgekeer in chroniese morfienbehandelde rotte. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Bruin JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Koel LM

    (2007) Aktivering van POMC neurone tydens algemene opwekking, maar nie seksuele gedrag by manlike rotte nie. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dinamiese veranderinge in die kern veroorsaak dopamien efflux tydens die Coolidge effek by manlike rotte. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn Ek,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) 'n Selektiewe rol vir dopamien in stimulus-beloning leer. Aard 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Koel LM

    (2010a) Gemengde genot: 'n oorsig van die uitwerking van dwelms op seksgedrag by mense en diermodelle. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Wise RA,
    4. Lehman MN,
    5. Koel LM

    (2010b) Metamfetamien tree op subpopulasies van neurone wat seksuele gedrag reguleer in manlike rotte. Neurowetenskap 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Verhoogde skrik tydens onttrekking van akute morfien: 'n model van opiaatonttrekking en angs. Psigofarmakologie 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Veranderde motivering en leer volgende opiate onttrekking: bewyse vir langdurige dysregulering van beloningverwerking. Neuropsigofarmakologie 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Lae MJ

    (2002) Selektiewe beloningstekort in muise sonder beta-endorfien en enkefalien. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Natuurverslawing: 'n gedrags- en kringmodel gebaseer op suikerverslawing by rotte. J Verslaafde Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Neurale meganismes van verslawing: die rol van beloningsverwante leer en geheue. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) -receptor blokkade in die anterior ventrale tegmentale area verhoog ekstrasellulêre vlakke van dopamien in die nukleusakkels van rotte. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad BK,
    5. Sheng M

    (2005) Beheer van dendritiese arborisering deur die fosfoinositied-3'-kinase-Akt-soogdier teiken van rapamisienweg. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. Noord-RA

    (1992) Opioïede opwek dopamienneurone deur hiperpolarisasie van plaaslike interneurone. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Regulering van somatodendritiese dopamien vrystelling in die ventrale tegmentale area deur opioïede en GABA: 'n in vivo mikrodialise studie. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plastisiteit van beloning neurokringkunde en die "donker kant" van dwelmverslawing. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) 'n Verbeterde monteermedium vir immunofluorescensmikroskopie. Is J Clin Patolo 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloksoon verswak die gekondisioneerde plekvoorkeur wat veroorsaak word deur die wiel wat in rotte hardloop. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Voorafgaande ervaring met wielbewerking lewer kruistoleransie op die lonende effek van morfien. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Duitse DC

    (1984) Elektrofisiologiese bewyse vir die opwekking van rat ventrale tegmentale area dopamienneurone deur morfien. Neurowetenskap 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Moed JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Rol vir mTOR sein en neuronale aktiwiteit in morfien-geïnduseerde aanpassings in ventrale tegmentale area dopamienneurone. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiate-geïnduseerde molekulêre en sellulêre plastisiteit van ventrale tegmentale area en lokus coeruleus katekolamienneurone. Koue Lente Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloksoon ontwrig die uitdrukking, maar nie die verkryging deur manlike rotte van 'n gekondisioneerde plekvoorkeure-reaksie vir 'n growwe vroulike nie. Psigofarmakologie 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Seksuele ervaring in vroulike knaagdiere: sellulêre meganismes en funksionele gevolge. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloksoon inhibeer paring en gekondisioneerde plekvoorkeur vir 'n estrouse vrou in manlike rotte kort na kastrasie. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Fasilitering van seksuele gedrag in die manlike rat wat verband hou met intra-VTA inspuitings van opiate. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LU,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK sein spesifisiteit: die regte plek op die regte tyd. Neigings Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Transkripsie meganismes van dwelmverslawing. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Die rotbrein in stereotaksiese koördinate (Akademies, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Koel LM

    (2010a) Neuroplasticiteit in die mesolimbiese stelsel geïnduseer deur natuurlike beloning en daaropvolgende beloning onthouding. Biolpsigiatrie 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Koel LM

    (2010b) DeltaFosB in die nucleus accumbens is noodsaaklik vir die versterkende effekte van seksuele beloning. Genes Brein Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Koel LM

    (2012) Natuurlike beloning ervaring verander AMPA en NMDA reseptor verspreiding en funksie in die kern accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Koel LM

    (2013) Natuurlike en dwelmbelonings handel oor gemeenskaplike neurale plastisiteitsmeganismes met DeltaFosB as 'n belangrike bemiddelaar. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK en p38 MAPK-geaktiveerde proteïenkinases: 'n familie van proteïenkinases met diverse biologiese funksies. Mikrobiol Mol Biol Ds 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Self DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt-pad in midbrain dopamienneurone reguleer gedrags- en sellulêre reaksies op opiate. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Meerdere funksies van dopamienneurone. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Uitdrukking van neurotrofiene deur middellyn dopaminerge neurone. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Motiverende eienskappe van opioïede: bewys dat 'n aktivering van delta-reseptore bemiddelingsprosesse bemiddel. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Opponerende effekte van morfien en die neurotrofiene, NT-3, NT-4, en BDNF, op lokus coeruleus neurone in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Chroniese morfien veroorsaak sigbare veranderinge in die morfologie van mesolimbiese dopamienneurone. Proc Natl Acad Sci VSA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Prinses M

    (2003) Morfien-onttrekking-geïnduseerde abnormaliteite in die VTA: konfokale laser skanderingsmikroskopie. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Breinkaarte: struktuur van die rotbrein (Akademies, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Koel LM

    (2009) Seksuele beloning in manlike rotte: gevolge van seksuele ervaring op gekondisioneerde plekvoorkeure wat verband hou met ejakulasie en intromissies. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Meting van beloning met die gekonfronteerde plekvoorkeurparadigma (CPP): opdatering van die laaste dekade. Verslaafde Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Seksuele motivering: betrokkenheid van endogene opioïede in die ventrale tegmentale area. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Regulering van manlike seksuele gedrag: betrokkenheid van breinopioïede en dopamien. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Chroniese opioïedblootstelling veroorsaak verhoogde heroïen-selfadministrasie by rotte. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Die neurobiologie van paarbinding: insigte van 'n sosiaal monogame knaagdier. Front Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •