Biolpsigiatrie. 2008 Dec 1; 64 (11): 941-50. Epub 2008 Jul 26.
Teegarden SL, Nestler EJ, Bale TL.
Bron
Departement Dierbiologie, Universiteit van Pennsylvania, Philadelphia, PA 19104-6046, VSA.
Abstract
AGTERGROND:
Sensitiwiteit vir beloning is betrokke as 'n predisponerende faktor vir gedrag ten opsigte van dwelmmisbruik sowel as ooreet. Die onderliggende meganismes wat bydra tot sensitiwiteit, is egter onbekend. Ons het vermoed dat 'n dysregulasie in dopamien sein 'n onderliggende oorsaak kan wees van verhoogde beloning sensitiwiteit waardeur belonende stimuli kan optree om die stelsel te normaliseer.
METODES:
Ons het 'n genetiese muismodel gebruik van verhoogde sensitiwiteit van die beloning, die Delta FosB-ooruitdrukkende muis, om beloningveranderings te ondersoek in reaksie op 'n smaaklike hoë vet dieet. Merkers van beloningsaanwysing in hierdie muise is beide basies en 6 weke seetbare blootstelling aan dieet ondersoek. Muise is ondersoek in 'n gedragstoets na hoë vet dieet onttrekking om die kwesbaarheid van hierdie model te evalueer vir die verwydering van lonende stimuli.
RESULTATE:
Ons resultate demonstreer veranderde beloningswegaktivering langs die nucleus accumbens-hipotalamus-ventrale tegmentale area stroombaan wat voortspruit uit oormatige ekspressie van Delta FosB in die nucleus accumbens en streatale streke. Vlakke van gefosforileerde sikliese adenosienmonofosfaat (cAMP) reaksie element bindende proteïen (PCREB), brein-afgeleide neurotrofe faktor (BDNF), en dopamien- en sikliese adenosienmonofosfaat gereguleerde fosfoproteïen met 'n molekulêre massa van 32 kDa (DARPP-32) in die nukleusbolletjies is verminder in Delta FosB-muise, wat dui op verminderde dopamien sein. Ses weke hoë vet dieetblootstelling het hierdie verskille heeltemal vergemaklik en die sterk beloonende vermoë van 'n smaaklike dieet onthul. Delta FosB-muise het ook 'n beduidende toename in lokomotoriese aktiwiteit en angsverwante reaksies 24 uur na hoëvet-onttrekking getoon.
GEVOLGTREKKINGS:
Hierdie resultate vestig 'n onderliggende sensitiwiteit vir veranderinge in beloning wat verband hou met disregulasie van Delta FosB en dopamien sein wat met verteerbare diëte genormaliseer kan word en kan 'n predisponerende fenotipe wees in sommige vorme van vetsug.
Inleiding
Ten spyte van ons toenemende kennis van die neurale stelsels wat eetlus en versadiging beheer, bly die vetsugvlakke in die Verenigde State styg. Huidige geneesmiddelbehandelings het beperkte doeltreffendheid, en gedragsveranderinge ly aan minimale langtermyn nakoming (1). Die verbruik van kalorie-digte, smaaklike kosse is gekoppel aan veranderinge in stres- en beloningstroke in die brein, wat daarop dui dat die beloonende eienskappe van sulke voedselsoorte die energiebalansseine (2-4) kan ignoreer. Voedsel wat hoog in vet is, is natuurlike belonings, wat breinbeloningsentrums op dieselfde manier as misbruikmiddels aktiveer en sodoende gebruik word in selfadministrasieparadigmas (5-8). Dit is dus waarskynlik dat gedrag en motivering vir ooreet en dwelmmisbruik gemeenskaplike onderliggende meganismes deel, wat potensieel nuwe behandelingsmetodes vir beide toestande kan oopmaak.
In die bestudering van die verhouding tussen smaaklike kosse en paaie wat beloning en stres in die brein reguleer, Ons het voorheen molekulêre en biochemiese merkers van verminderde beloning geïdentifiseer en verhoogde stres na onttrekking uit 'n smaaklike hoë vet dieet (HF). Soortgelyk aan dwelmmiddels, het blootstelling aan 'n smaaklike dieet in ons studies tot verhoogde vlakke van die transkripsiefaktor ΔFosB in die nukleus accumbens (NAc), 'n sentrale breinbeloningsstruktuur (9, 10). Muise wat indringend ΔFosB uitdruk, toon verhoogde instrumentele reaksie op 'n voedselbeloning (11), waardeur hulle 'n waardevolle instrument is om die rol van beloningsensitiwiteit en langtermyn-dysregulering van die beloningstelsel in die molekulêre en biochemiese reaksies op 'n smaaklike dieet te ondersoek.
In die huidige studie het ons die ΔFosB-ooruitdrukkende muise gebruik om langtermynveranderinge in die merkers van beloning in die NAc-hipotalamus-ventrale tegmentale area (VTA) neurokringkunde te ondersoek in reaksie op 'n smaaklike HF-dieet. Op grond van vorige studies in hierdie beloningsensitiewe muise het ons veronderstel dat ΔFosB-geïnduceerde veranderinge in beloningsensitiwiteit 'n dysregulasie in dopamien seinverwerking behels wat voortspruit uit NAc terugvoer aan die VTA. Verder het ons veronderstel dat blootstelling aan 'n natuurlike beloning van 'n energie-digte HF-dieet dan die dopaminerge sisteem in hierdie muise sal normaliseer, wat 'n oordrewe reaksie op die spanning van onttrekking van hierdie HF-dieet sal veroorsaak. Die unieke aspek van die gebruik van 'n smaaklike dieet as 'n bevredigende middel, laat ons toe om die hipotalamiese insette in te sluit om stroombane te beloon in 'n fenotipe wat voorspelbaar is van 'n bevolking wat behandel word teen weerstandbiedende vetsug. Om hierdie hipotese te ondersoek, het ons nasieners van dopamienneurotransmissie, insluitend pCREB, BDNF en DARPP-32 in die NAc- en tyrosienhidroksilase en die dopamien-vervoerder in die VTA, na HF-blootstelling bestudeer. Ons het ook spesifieke merkers van energiebalans ondersoek wat bekend is om dopamien-uitset te beïnvloed, insluitende leptien- en oreksienreseptore in die VTA- en orexin-uitdrukking binne die laterale hipotalamus.
Materiaal en metodes
diere
Manlike bittertransgeniese muise wat ΔFosB inducerend in eksemplaar positiewe neurone in die NAc en dorsale striatum (Kelz et al., 1999) induseer, is op 'n gemengde agtergrond (ICR: C57Bl6 / SJL) by die Universiteit van Texas Southwestern Medical Center gegenereer en onderhou en getoets aan die Universiteit van Pennsylvania. Alle muise is gehandhaaf op doxycycline (100 μg / ml in die drinkwater) tot by die Universiteit van Pennsylvania. Om ooruitdrukking te veroorsaak, is doxycycline verwyder (n = 23) (12). Beheermuise (n = 26) het steeds die geneesmiddel ontvang. Muise is toegeken aan dieetgroepe agt weke na die verwydering van doksikilien, waartydens uitdrukking getoon is om maksimum vlakke (13) te bereik. Muise is gehandhaaf op 'n 12: 12 lig-donker siklus (ligte op 0700) met kos en water beskikbaar ad libitum. Alle studies is uitgevoer volgens eksperimentele protokolle goedgekeur deur die Institusionele Diereversorgings- en -gebruikskomitee van die Universiteit van Pennsylvania, en alle prosedures is in ooreenstemming met institusionele riglyne uitgevoer.
Dieetblootstelling
Muise is vir ses weke op huiskou (n = 16) gehou of op HF (n = 16-17) geplaas. House Chow (Purina Lab Dieet, St Louis, MO) bevat 4.00 kcal / g, bestaande uit 28% proteïen, 12% vet en 60% koolhidraat. HF-dieet (Navorsingsdiëte, New Brunswick, NJ) bevat 4.73 kcal / g, bestaande uit 20% proteïen, 45% vet en 35% koolhidraat.
Biochemie en geenuitdrukking
Muise is ontleed na ses weke van dieetblootstelling. Brein is verwyder van die skedel en óf bevrore geheel op droë ys of die NAc dissected (ongeveer 0.5 - 1.75 mm van bregma, op 'n diepte van 3.5 - 5.5 mm) en bevrore in vloeibare stikstof. Weefsel is by -80 ° C gestoor totdat dit geassesseer is.
Biochemiese ontledings
Metodes vir Western blots word in aanvullende materiale beskryf. Die teenliggaampies wat gebruik is, was: Cdk5, CREB en BDNF (1: 500, Santa Cruz Biotegnologie, Santa Cruz, CA) en fosfor-CREB (SerCNB) (133: 1, Cell Signal Technology, Danvers, MA).
Reseptor autoradiography
Gedetailleerde metodes vir autoradiografie word in aanvullende materiaal beskryf. Ligande wat gebruik is, was 2 nM H3 - SCH 23390 en 5 nM H3 - spiperoon (PerkinElmer, Boston, MA).
In situ-hybridisering
Weefselverwerking en hibridisering is uitgevoer soos voorheen beskryf (14). Die DARPP-32 sonde is vriendelik verskaf deur P. Greengard (Rockefeller Universiteit), en die orexinsonde deur J. Elmquist (Universiteit van Texas Southwestern Medical Center). Skyfies wat vir DARPP-32 geassesseer is, was geskik om te fliek vir 3 dae, en skyfies wat vir orexine geassesseer is, was geskik vir film vir 4 dae. Kwantifisering van filmbeelde is uitgevoer soos voorheen beskryf (10).
QRT-PCR
RNA is geïsoleer uit die VTA en uitdrukking van individuele gene wat met behulp van TaqMan-gene-ekspressie-toetse (Applied Biosystems, Foster City, CA) beoordeel is. Gedetailleerde metodes en statistiese analises kan gevind word in aanvullende materiale.
Gedragsontledings
Ten einde die effekte van beloningsensitiwiteit op dieetgeïnduceerde gedragsveranderinge te ondersoek, is 'n subgroep muise uit HF onttrek na vier weke blootstelling en teruggekeer na huischow (n = 9 beheer, n = 8 ΔFosB). Vier-en-twintig uur na onttrekking was muise blootgestel aan die oop veldtoets in ooreenstemming met ons voorheen gepubliseerde dieet-onttrekkingsparadigma (10). Kortliks is die muis in die middel van die oopveldapparaat geplaas en vir vyf minute gemonitor. Totale lynkruisings, fekale boli, tyd in die middel, en kruise in die middel is gemeet.
Statistiek
Alle data behalwe Western blots is geanaliseer met behulp van 'n tweerigting-ANOVA, gevolg deur Fisher se PLSD-toets met doksisiklienbehandeling (ΔFosB-uitdrukking) en dieettoestand as die onafhanklike veranderlikes. Vir RT-PCR-ontledings is 'n verlaagde P-waarde gebruik om korrigeer vir veelvuldige vergelykings binne groepe verwante gene (sien aanvullende materiale). Western blots is geanaliseer met behulp van 'n student se t-toets met doksisiklienbehandeling as die onafhanklike veranderlike, en vergelyk optiese digthede binne dieselfde vlek. Alle data word as gemiddeld ± SEM aangebied.
Results
Basiese biochemiese verskille
Om die molekulêre weë wat die verhoogde beloningsensitiwiteit in ΔFosB-ooruitdruklike muise ten grondslag lê, toe te lig, is vlakke van verskeie belangrike seinmolekules in die NAc ondersoek. Daar was 'n neiging vir verhoogde vlakke van Cdk5 in die NAc van ΔFosB-muise in vergelyking met diere wat op rommelstrook beheer is, wat op doksisiklien gehou word (F = 5.1, P = 0.08; Fig. 1A). ΔFosB-muise het aansienlik verlaagde vlakke van pCREB (F = 7.4, P <0.05; Fig. 1B) sowel as totale vlakke van CREB (F = 5.4, P = 0.05; Fig. 1C) uitgespreek. 'N Beduidende vermindering in BDNF is ook waargeneem in die NAc van ΔFosB muise (F = 10.6, P <0.05; Fig. 1D).
Figuur 1
Muise ooruitdrukking ΔFosB vertoon biochemiese merkers van verminderde dopamien sein in die NAc
Voedselinname en liggaamsgewig op hoë vet dieet
Ons het vervolgens die effekte van 'n natuurlik lonende HF-dieet op veranderinge in seinmolekules in die ΔFosB-ooruitdrukkende muise ondersoek. Daar was geen verskille tussen ΔFosB-muise en kontroles in voedselinname by huis of HF nie. Daar was egter 'n algehele afname in kalorie-inname wat genormaliseer is tot liggaamsgewig wanneer dit blootgestel is aan HF wat spesifiek was vir die ΔFosB-muise (F = 11.2, P <0.01; Fig. 2A). Aan die einde van ses weke se blootstelling aan dieet het muise wat HF ontvang, aansienlik meer geweeg as dié op chow-dieet (F = 17.2, P <0.001), en ΔFosB-muise het oor die algemeen minder geweeg as kontroles (F = 5.6, P <0.05; 2B). Hierdie effek was spesifiek vir verskille tussen groepe op die chow-dieet (P <0.05).
Figuur 2
ΔFosB ooruitdrukkende muise het geen verskille in voedselinname op Chow of High Fat (HF) dieet gewys nie
Biochemiese verskille op hoë vet dieet
Om te bepaal hoe basale verskille in NAc seinverandering deur HF dieet verander kan word, is dieselfde seinproteïene wat by die basislyn bestudeer is, ondersoek in diere wat ses weke HF ontvang het. Daar was geen beduidende verskille in Cdk5 vlakke nie (Fig. 3A). Vlakke van pCREB en totale CREB was nie meer verskillend na ses weke van HF nie (Figuur 3B, C). Vlakke van BDNF was aansienlik verhoog in ΔFosB muise na ses weke van HF blootstelling (F = 6.5, P = 0.05; Fig. 3D).
Figuur 3
Hoë vet (HF) dieet verbeterde seinverskille waargeneem in die NAc van ΔFosB ooruitdrukkende muise
Dopamienreseptor-autoradiografie
Ons het reseptor autoradiografie gebruik om te bepaal of die ΔFosB-geïnduseerde veranderinge in dopamien sein in die NAc verband hou met veranderinge in dopamien reseptor uitdrukking (Fig. 4A). Die voorkoms van hoë vetdieet het die digtheid van D1-dopamienreseptorbinding effens verhoog (P = 0.14), en hierdie verskil was groter by ΔFosB-muise (Fig. 4B). Daar was ook 'n tendens in die rigting van 'n toename in D1-bindingsarea na aanleiding van HF (P = 0.06), en post hoc-toetsing het getoon dat dit betekenisvol was in die ΔFosB-muise (P <0.05; Fig. 4C). In teenstelling met D1-reseptore, is geen verandering in D2-reseptorbindingsdigtheid nie (beheer chow = 97.6 ± 6.9, beheer HF = 101.1 ± 8.2, ΔFosB chow = 91.6 ± 1.0, ΔFosB HF = 94.8 ± 9.5) of bindingsarea (control chow = 47.3 ± 3.4, kontrole HF = 53.8 ± 6.0, ΔFosB chow = 51.9 ± 3.7, ΔFosB HF = 49.0 ± 3.3) in die NAc is waargeneem.
Figuur 4
Hoë vet dieet (HF) het gelei tot veranderinge in D1 dopamienreseptor binding en DARPP-32 uitdrukking in die nucleus accumbens (NAc) van ΔFosB muise ooruitdrukking
DARPP-32 uitdrukking in die NAc
In situ-verbastering is gebruik om uitdrukkingsvlakke van DARPP-32 in die NAc te bepaal (Fig. 4D). Dieet met hoë vet het die DARPP-32-uitdrukking in hierdie breinstreek aansienlik verhoog (F = 5.1, P <0.05), en daar was 'n beduidende interaksie tussen dieet en ΔFosB-uitdrukking (F = 8.9, P <0.05), met ΔFosB-muise wat 'n groter dieet-geïnduseerde verandering (Fig. 4E). 'N Basale verskil in DARPP-32-uitdrukking tussen beheer en ΔFosB-muise is geopenbaar deur post hoc-toetsing (P <0.01), sowel as 'n beduidende toename in DARPP-32-uitdrukking in die ΔFosB-muise op HF (P <0.01).
Gene uitdrukking in die VTA
QRT-PCR is gebruik om veranderinge in geenuitdrukking in die VTA te beoordeel, en gerig op verskeie sleutelgene wat voorheen by die regulering van beloning betrokke was. Alle monsters is genormaliseer tot β-aktien. Om te verseker dat die uitdrukking van β-aktien nie deur die behandeling verander word nie, is 'n aparte toets uitgevoer om β-aktien met 'n tweede interne kontrole, GAPDH, te vergelyk. Daar was geen beduidende verskille in β-aktien-uitdrukking nie (ΔCT-waardes, β-aktien - GAPDH: beheer chow = 2.29 ± 0.21, beheer HF = 2.01 ± 0.04, ΔFosB chow = 2.32 ± 0.49, ΔFosB HF = 2.37 ± 0.10).
'N Neiging vir 'n interaksie tussen ΔFosB-uitdrukking en dieetbehandeling is waargeneem vir die uitdrukking van tyrosienhidroksilase (F = 3.6, P <0.06; Fig. 5A). Ses weke van blootstelling aan HF het blykbaar die uitdrukking van tyrosienhidroksilase in beheermuise verminder en die uitdrukking in ΔFosB-muise verhoog. 'N Beduidende interaksie tussen ΔFosB-uitdrukking en dieetblootstelling is waargeneem vir die uitdrukking van die dopamien-vervoerder (F = 6.7, P <0.03; Fig. 5B). Soortgelyk aan tyrosienhidroksilase, het blootstelling aan HF die uitdrukking van dopamientransporter in beheermuise verminder en die uitdrukking in ΔFosB-muise aansienlik verhoog (P <0.05). Die basale verskil in die uitdrukking van dopamientransporteur tussen kontrole en ΔFosB-muise het geen betekenis bereik nie (P = 0.16), maar na 6 weke HF het ΔFosB-muise aansienlik verhoogde vlakke van dopamien-vervoerder uitgespreek in vergelyking met kontroles (P <0.05).
Figuur 5
Hoë vet dieet (HF) blootstelling en ΔFosB uitdrukking het gelei tot veranderinge in die uitdrukking van 'n aantal sleutel molekules in die VTA
Daar was 'n tendens wat dui op 'n effek van verhoogde ΔFosB-uitdrukking om TrkB-vlakke in die VTA te verlaag (F = 5.7, P <0.04; Fig. 5C). Alhoewel daar geen hoof effekte op die uitdrukking van k-opioïedreseptore was nie, was daar 'n neiging tot verminderde uitdrukking in ΔFosB-muise (P = 0.08; Fig. 5D). Ekspressie van die leptienreseptor is ook in die VTA bepaal. 'N Beduidende effek van dieetblootstelling is gevind (F = 6.1, P <0.03), met HF wat die vlakke van die leptienreseptor in die VTA in beide ΔFosB en kontrolemuise aansienlik verlaag (Fig. 5E). Uitdrukking van orexienreseptor 1 in die VTA is ook ondersoek. Daar was 'n beduidende effek van die dieet op die uitdrukking van die orexienreseptor (F = 9.0, P <0.02), met muise wat aan HF blootgestel is, wat hoër vlakke in die VTA tot uitdrukking bring (Fig. 5F). Daar was ook 'n neiging vir ΔFosB-muise om algehele hoër vlakke van orexienreseptor 1 in hierdie breinstreek (P <0.05) uit te druk.
Orexin-uitdrukking in die laterale hipotalamus
Ons het vlakke van orexien in die laterale hipotalamus, die oorsprong van orexinergiese innervering van die VTA, gemeet deur in situ verbastering (Fig. 6A). Daar was 'n beduidende interaksie tussen ΔFosB-uitdrukking en dieetblootstelling op orexine-uitdrukking (F = 9.1, P <0.01), met HF wat orexienvlakke in kontrole-muise (P <0.05) aansienlik verhoog het en uitdrukking in ΔFosB-muise afgeneem het (Fig. 6B). Alhoewel daar geen beduidende verskille in orexien-uitdrukking in die basale toestand was nie, het 6FsB-muise na 0.05 week HF betekenisvol verlaagde vlakke van orexien uitgespreek in vergelyking met kontroles (P <XNUMX).
Figuur 6
Hoë vet (HF) dieet het differensiële effekte op orexien-uitdrukking in beheer (Ctrl) en ΔFosB-muise ooruitdruk.
BeHaviorale ontledings
Om veranderinge in opwinding en emosionaliteit as gevolg van dieetverandering te evalueer, is muise 24 uur na die onttrekking van die HF-dieet aan die oopveldtoets blootgestel (10). Totale lynkruisings, wat as maatstaf van opwinding aangeteken is, is beduidend beïnvloed deur ΔFosB-uitdrukking (F = 6.6, P <0.05) en dieet (F = 4.6, P <0.05; Fig. 7A). ΔFosB-muise was meer aktief in die nuwe omgewing as samentrekkings, en post-hoc-toetsing het getoon dat muise wat aan HF onttrek is, beduidend meer aktief was as diegene wat aan chow blootgestel is (P <0.05). Fekale boli is getel as 'n maatstaf vir angsagtige gedrag (10). Daar was 'n hoofeffek van ΔFosB-uitdrukking (F = 10.2, P <0.01), met ΔFosB-ooruitdrukkende muise wat meer fekale boli in die nuwe omgewing geproduseer het, veral in die huis-chow- en HF-onttrekkingsgroepe (Fig. 7B). ΔFosB-muise wat op die HF-dieet onderhou is, het minder fekale boli geproduseer as dié wat op chow onderhou is en diegene wat 24 uur voor die toets onttrek is. Beheermuise het blykbaar nie deur dieet geraak nie. Daar was geen beduidende effekte van ΔFosB-uitdrukking of dieet op die tyd wat in die middel van die oop veld deurgebring is nie (kontrole chow = 14.5 ± 3.1 sek, beheer HF = 18.0 ± 3.2 sek, beheer W / D = 15.4 ± 1.9 sek, ΔFosB chow = 16.9 ± 2.4 sek, ΔFosB HF = 13.1 ± 3.9 sek, ΔFosB W / D = 19.8 ± 2.6 sek).
Figuur 7
Muise oor-uitdrukking ΔFosB was meer sensitief vir die gevolge van hoë vet dieet (HF) onttrekking
Bespreking
In vetsugbehandeling is daar 'n kritiese behoefte aan identifikasie van faktore wat vatbaarheid vir ooreating en gewigstoename beïnvloed. Breinbeloningspaaie speel 'n belangrike rol in die motivering vir en reaksie op smaaklike kosse en dieetveranderings (6, 10, 15, 16). Aangesien orexigeniese en anorexigeniese seine direk deur middel van 'n hipotalamus-VTA-NAc-kring kan beïnvloed word, kan die verheldering van gene wat reageer op energie-ryk, smaaklike diëte binne beloningsentrums nuwe terapeutiese teikens in obesitasbehandeling (17, 18) bied. Daarom het ons biochemiese en molekulêre merkers van beloning- en energiebalansverwysing langs die hipotalamus-VTA-NAc-kring ondersoek in reaksie op 'n HF-dieet in ΔFosB-ooruitdrukkende muise as 'n model van verbeterde sensitiwiteit vir veranderinge in beloning (13, 19, 20) , en die gedrags sensitiwiteit volgende dieet onttrekking. Ons het veronderstel dat basale dysregulasie van dopamien sein in ΔFosB muise genormaliseer sal word deur die belonende effekte van 'n HF dieet, wat die snypunt van energiebalansseine en die dopamienstelsel insluit.
Om merkers wat dui op 'n dysregulasie in dopamien sein in die NAc, te ondersoek, het ons D1 reseptor vlakke en stroomaf effektore ondersoek. Alhoewel daar geen beduidende verskille in D1-receptor binding was nie, Daar was 'n tendens vir HF-blootstelling om bindingsgebied in die ΔFosB-muise te verhoog. Dit is interessant aangesien induksie van ΔFosB deur middel van geneesmiddels en natuurlike belonings blyk te oorheers in die dynorfine-positiewe subtipe medium-spinyneurone wat hoofsaaklik D1-reseptore uitdruk. (9, 21). Vlakke van die stroomop dopamien sein teiken pCREB is aansienlik verminder in ΔFosB muise, ondersteunend van verminderde D1 reseptor aktivering in hierdie brein streek (22, 23). Interessant genoeg het ons ook 'n beduidende afname in totale CREB-vlakke in ΔFosB-muise opgespoor. Dit dui op 'n verdere verminderde kapasiteit vir dopamien seintransduksie wat sekondêr kan wees vir terugvoering as gevolg van 'n lang afname in pCREB (24). BDNF uitdrukking word gereguleer deur pCREB, word verhoog met D1 aktivering, en is 'n belangrike mediator van beloningsverwante neuroplastisiteit in die NAc (25, 26). Gevolglik het ons 'n beduidende afname in BDNF proteïen in die NAc van ΔFosB muise bespeur.
Alle medium spiny neurone in die NAc druk DARPP-32 (27). Sy talle stroomafwaartse effektore maak dit 'n belangrike speler in beloningspaaie (28), en dit is betrokke by dwelmverslawing en in ander afwykings wat die dopamienstelsel insluit, insluitende affektiewe afwykings en skisofrenie. (27, 29). Ons het diepgaande basale reduksies in DARPP-32-uitdrukking in die NAc van ΔFosB-muise opgespoor. DARPP-32 uitdrukking word deur BDNF gereguleer, en daarom kan die verminderde uitdrukking direk verband hou met die verlagings in BDNF-vlakke wat in ΔFosB-muise (27, 29, 30) opgespoor word. Selfs matige veranderinge in die fosforileringstoestand van DARPP-32 kan lei tot aansienlike veranderinge in intracellulêre sein binne die NAc (27). Vorige studies het geen verandering in DARPP-32 proteïen in ΔFosB muise gerapporteer na aanleiding van 'n 12-wk-verwydering van doxycycline wanneer 'n breër striatale assessering uitgevoer is (31), wat daarop dui dat die effekte van ΔFosB op DARPP-32 tyd en streek spesifiek kan wees.
Ons het veronderstel dat die dramatiese afname in indekse van dopamien sein in die NAc van ΔFosB-muise waarskynlik veranderinge in die VTA dopamienprojeksie-neurone behels, alhoewel ΔFosB nie oordruk word binne hierdie neurone nie.. Daarom het ons die uitdrukking van dopamienverwante gene in die VTA ondersoek, insluitende tyrosienhidroksilase en die dopamien-vervoerder. Vlakke van tyrosienhidroksilase en dopamien-vervoerder is positief gekorreleer met dopamien-uitset. Daar was 'n tendens vir ΔFosB-muise om verminderde tyrosienhidroksilase en 'n beduidende verlaging van dopamien-vervoerder te vertoon, in ooreenstemming met die dysregulering van dopamien sein in die NAc. Aangesien hierdie basale reduksies in dopamienverwante gene in die VTA van ΔFosB-muise vermoedelik veranderde terugvoer van die NAc weerspieël tydens langtermyn ΔFosB ooruitdrukking, het ons die uitdrukking van die BDNF reseptor, TrkB, ondersoek as 'n moontlike meganisme van NAc terugvoer na die VTA (32). Soortgelyk aan tyrosien hidroksilase en dopamien vervoerder, het TrkB uitdrukking ook 'n tendens getoon om basies verminder te word in ΔFosB muise wat nie betekenis bereik het toe dit gekorrigeer is vir veelvuldige vergelykings. Die BDNF-TrkB-kompleks kan retrogradely vervoer word en optree binne die VTA om plaaslike geenuitdrukking te beïnvloed en selgroei en instandhouding (33) te bevorder. Verder kan BDNF-aktivering van presynaptiese TrkB binne die NAc dopamien-neurotransmissie (32) direk stimuleer, en ondersteun 'n onderliggende vermindering van dopamien sein in hierdie muise.
Dynorphin-aktivering van K-opioïed-reseptore reguleer dopamien sein en is 'n ander meganisme waardeur die NAc terugvoer gee aan die VTA (34). Ons het bevind dat κ-opioïed-reseptor uitdrukking in die VTA 'n neiging getoon het om in ΔFosB muise verminder te word. Aangesien ΔFosB ooruitdrukking getoon is om die dinorfin-uitdrukking in die NAc (20) te verminder, het ΔFosB-muise waarskynlik diep afname in netto VTA κ-opioïde aktivering. Alhoewel dynorfine-sein normaalweg 'n remmende effek op dopamienneurone uitoefen (35), vertoon rotte wat verhoogde selfadministrasie van dwelmmiddels toon, laer vlakke van dynorfien in die NAc, wat dui op 'n rol vir basies verminderde dynorfiene sein om die beloningsensitiwiteit te verbeter (36 , 37). Dysregulering van die dynorfine - k-opioïedstelsel is gekoppel aan die verkryging en volharding van dwelmmisbruik, wat 'n kritieke balans van opioïedseinligting ondersteun in die normalisering van dopamienweë (38).
Op grond van die belonende kapasiteit van 'n energie-digte HF-dieet, het ons veronderstel dat 'n dysregulasie in dopamien- en opioïdebeloningsverandering in ΔFosB-muise hierdie muise sou voorspel vir verbeterde beloningsresponse op so 'n dieet, sodoende die beloningstelsel normaliseer deur aktivering van die hipotalamus -VTA-NAc stroombaan. Gedurende die ses-uur dieetblootstelling is geen verskille in voedselinname tussen ΔFosB en beheermuise waargeneem nie, wat daarop dui dat die veranderinge wat in biochemiese en molekulêre merkers van beloningsaanwysing in ΔFosB-muise voorkom, nie te wyte was aan verskille in die verbruikte kalorieë nie. Soos verwag is, is basale verskille wat in pCREB opgespoor is, totale CREB-, BDNF-, DARPP-32- en K-opioïed-reseptorvlakke tussen ΔFosB en kontrole-muise verswak, waarskynlik as gevolg van verhoogde dopamienuitset in ΔFosB-muise op HF (29, 39-41) .
Ondersoek van beide tyrosienhidroksilase en die dopamien-vervoerder in die VTA het verrassende opponerende antwoorde van ΔFosB en beheermuise na HF geopenbaar.. Beheermuise het 'n afname in tyrosienhidroksiel- en dopamien-vervoerderuitdrukking getoon, terwyl ΔFosB-muise verhoogde uitdrukking van albei hierdie dopamienverwante gene toon. Interessant genoeg word die uitdrukking van tyrosienhidroksilase in die VTA verander deur chroniese kokaïen- of metamfetamienadministrasie (42-44), wat daarop dui dat ΔFosB-muise die natuurlike beloning van HF meer waarnemend kan vind as kontrole-muise.
Ten einde te ondersoek hoe moontlike hipotalamiese insette vir die VTA seine kan herlei wat energiebalans weerspieël, is ekspressie van die leptienreceptor en orexienreseptor-1 ook ondersoek. Sirkulerende leptienvlakke word verhoog deur HF, en leptien kan op sy beurt by die VTA optree om dopamien seinverandering (18, 45) te verander. VTA leptien reseptor uitdrukking is ook afgeneem deur HF in beide ΔFosB en beheer muise, in ooreenstemming met soortgelyke gewigstoename en dieet inname, terwyl dit op HF. Hoë vet het ook die uitdrukking van die orexienreseptor-1 in die VTA van beide ΔFosB en beheermuise toegeneem. Orexin aktiveer dopamienneurone in die VTA, bevorder VTA-plastisiteit en verhoog dopamienvlakke in die NAc (46-48). Hoë vet dieet is getoon om die orexien uitdrukking in muise te verhoog, in ooreenstemming met ons waarnemings (49, 50). Dus, verhoogde uitdrukking van die orexin reseptor asook veranderinge in leptien sein in die VTA kan dieetbeloning bevorder in beide ΔFosB en beheermuise, en ondersteun 'n dissosiasie tussen weë wat energiebalansse herlei en dié wat direk gekoppel is om te beloon.
Om die stresuitdagende effekte van terugtrekking van beloning te ondersoek, is muise ondersoek in 'n oop veldtoets 24 uur na die verwydering van HF. ΔFosB muise was meer sensitief vir die akute effekte van voorkeur dieet onttrekking, wat verhoogde opwekking aktiwiteit en fekale boli produksie in die roman open arena vergeleke met alle ander beheer en dieet groepe. ΔFosB-muise het ook 'n interessante gedragspatroon getoon in hierdie toets wat dui op beloning- en stresgevoeligheid, met die HF-dieet wat aanvanklik fekale boli-produksie relatief tot chow verminder, en die onttrekking van hierdie angstverwante reaksie weer verhoog. Hierdie waargenome toename in oopveldaktiwiteit het nie verband gehou met veranderinge in orexin-uitdrukking wat 'n verband tot stresgeïnduceerde opwekking aandui nie, dit is nie bloot 'n effek van veranderinge in oreksien-gemedieerde sein nie. Algehele, hierdie data ondersteun ons hipotese dat ΔFosB muise meer sensitief sal wees vir die akute effekte van voorkeur dieet onttrekking as gevolg van hul verhoogde beloning sensitiwiteit.
Hoe lei langtermyn-oordrukking van ΔFosB in die NAc tot sulke veranderinge in gedrag en beloning sein? Ons het 'n model van VTA-toevallige opsporing voorgestel, waarin gewysigde terugvoering van die NAc- en hipotalamus-relais seine ten opsigte van beloningsstatus bepaal om die regulering van die dopamienstelsel te bepaal wat 'n verband tussen beloningswegdissregulasie en 'n vooroordeel vir vetsug kan ondersteun (Fig. 8). Tydens HF-blootstelling, meervoudige insette wat beide energiebalans en beloningstoestand weerspieël op die VTA. Toename in leptien- en orexien-sein sowel as veranderde terugvoer van die NAc na die laterale hipotalamus kan beïnvloed hoe hierdie orexigeniese seine op HF in die ΔFosB-muise reageer (17, 18, 45, 47, 51-53). Hoë vet dieet-geïnduceerde verhogings in BDNF kan beloning terugvoer gee aan die VTA, verdere bevordering van veranderinge in dopamien-verwante gene uitdrukking.
Figuur 8
Hoë vet (HF) dieet normaliseer gedisreguleerde beloning sein in ΔFosB muise
Hierdie resultate definieer molekulêre merkers van beloningsensitiwiteit en dui aan dat langtermyn-dysregulering van die dopamienstelsel 'n individu aan verslawing en vetsug kan voorspel. Verder verskaf hierdie data 'n belangrike stap in die rigting van die identifisering van moontlike nuwe terapeutiese teikens in die behandeling en voorkoming van vetsug en ander afwykings wat op die beloningstelsel kan fokus. In die toekoms sal dit belangrik wees om te ondersoek hoe hierdie stelsel reageer op die verwydering van die HF dieet, asook om enige geslagsverskille in sensitivity vir beloning en hoë vet dieet blootstelling te ondersoek.
Aanvullende materiaal
Supp. metodes
Klik hier om te sien. (61K, doc)
Erkennings
Die skrywers wil Cathy Steffen bedank vir bystand met veeteelt en oordrag. Hierdie werk is ondersteun deur 'n toekenning van die Universiteit van Pennsylvania Diabetes Sentrum (DK019525) en deur toekennings van die Nasionale Instituut vir Geestesgesondheid (R01 MH51399 en P50 MH66172) en die Nasionale Instituut vir Dwelmmisbruik (R01 DA07359).
voetnote
Finansiële Openbaarmaking: Alle outeurs verklaar dat hulle geen biomediese finansiële belange of potensiële botsende belange het nie.
Verwysings
1. Wadden TA, Berkowitz RI, Womble LG, Sarwer DB, Phelan S, Cato RK, Hesson LA, Osei SY, Kaplan R, Stunkard AJ. Randomized trial of lifestyle modification and pharmacotherapy for obesity. N Engl J Med. 2005; 353 (20): 2111-20 [PubMed].
2. Blendy JA, Strasser A, Walters CL, Perkins KA, Patterson F, Berkowitz R, Lerman C. Verlaagde nikotienbeloning in vetsug: kruisvergelyking in mens en muis. Psigofarmakologie (Berl) 2005
3. Franken IH, Muris P. Individuele verskille in sensitiwiteit van beloning is verwant aan voedselvergeefs en relatiewe liggaamsgewig by gesonde vroue. Aptyt. 2005; 45 (2): 198-201 [PubMed].
4. Kelley AE, Berridge KC. Die neurowetenskap van natuurlike belonings: relevansie vir verslawende dwelms. J Neurosci. 2002; 22 (9): 3306-11 [PubMed].
5. Cagniard B, Balsam PD, Brunner D, Zhuang X. Muise met kronies verhoogde dopamien vertoon verhoogde motivering, maar nie leer nie, vir 'n kosbeloning. Neuropsychopharmacology. 2006; 31 (7): 1362-70 [PubMed].
6. Liang NC, Hajnal A, Norgren R. Sham voer koringolie verhoog dumbamien in die rat. Is J Fisiol Reguleer Integr Comp Physiol. 2006; 291 (5): R1236-9 [PubMed].
7. Mendoza J, Angeles-Castellanos M, Escobar C. Optrede deur 'n smaaklike ete lei tot voedselverwagtende aktiwiteit en c-Fos-uitdrukking in beloningsverwante areas van die brein. Neuroscience. 2005; 133 (1): 293-303 [PubMed].
8. Schroeder BE, Binzak JM, Kelley AE. 'N Algemene profiel van prefrontale kortikale aktivering na blootstelling aan nikotien- of sjokoladeverwante kontekstuele aanwysings. Neuroscience. 2001; 105 (3): 535-45 [PubMed].
9. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: 'n volgehoue molekulêre skakelaar vir verslawing. Proc Natl Acad Sci VSA A. 2001; 98 (20): 11042-6. [PMC gratis artikel] [PubMed]
10. Teegarden SL, Bale TL. Afname in dieetvoorkeur produseer verhoogde emosionaliteit en risiko vir dieet terugval. Biolpsigiatrie. 2007; 61 (9): 1021-9 [PubMed].
11. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Nestler EJ, Taylor JR. dFosB in die Nucleus Accumbens Reguleer Voedselversterkte Instrumentale Gedrag en Motivering. Die Journal of Neuroscience. 2006; 26 (36): 9196-9204 [PubMed].
12. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniese diere met induceerbare, geteikende genexpressie in die brein. Mol Pharmacol. 1998; 54 (3): 495-503 [PubMed].
13. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Uitdrukking van die transkripsiefaktor deltaFosB in die brein beheer sensitiwiteit vir kokaïen. Aard. 1999; 401 (6750): 272-6 [PubMed].
14. Bale TL, Dorsa DM. Seksverskille in en effekte van estrogeen op oksitosienreceptor messenger ribonukleïensuur uitdrukking in die ventromediale hipotalamus. Endokrinologie. 1995; 136 (1): 27-32 [PubMed].
15. Avena NM, Long KA, Hoebel BG. Suiker afhanklike rotte toon verbeterde reaksie op suiker na onthouding: bewys van 'n suiker deprivasie effek. Physiol Behav. 2005; 84 (3): 359-62 [PubMed].
16. Sal MJ, Franzblau EB, Kelley AE. Nucleus accumbens mu-opioïdes reguleer die inname van 'n hoë-vet dieet via die aktivering van 'n verspreide brein netwerk. J Neurosci. 2003; 23 (7): 2882-8 [PubMed].
17. Zheng H, Patterson LM, Berthoud HR. Orexin sein in die ventrale tegmentale area word benodig vir hoëvetlewende aptyt veroorsaak deur opioïde stimulasie van die nucleus accumbens. J Neurosci. 2007; 27 (41): 11075-82 [PubMed].
18. Hommel JD, Trinko R, Sears RM, Georgescu D, Liu ZW, Gao XB, Thurmon JJ, Marinelli M, DiLeone RJ. Leptienreseptor sein in midbrain dopamienneurone reguleer voeding. Neuron. 2006; 51 (6): 801-10 [PubMed].
19. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatale seltipe-spesifieke ooruitdrukking van DeltaFosB verhoog aansporing vir kokaïen. J Neurosci. 2003; 23 (6): 2488-93 [PubMed].
20. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. 'N noodsaaklike rol vir DeltaFosB in die kern accumbens in morfinaksie. Nat Neurosci. 2006; 9 (2): 205-11 [PubMed].
21. Lee KW, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokaïen-geïnduceerde dendritiese ruggraatvorming in D1- en D2-dopamienreseptor-bevattende medium-stekel-neurone in kernklemme. Proc Natl Acad Sci VSA A. 2006; 103 (9): 3399-404. [PMC gratis artikel] [PubMed]
22. Blendy JA, Maldonado R. Genetiese analise van dwelmverslawing: die rol van cAMP reaksie element bindende proteïen. J Mol Med. 1998; 76 (2): 104-10 [PubMed].
23. Nestler EJ. Molekulêre meganismes van dwelmverslawing. Neuro Farmacologie. 2004; 47 1: 24-32. [PubMed]
24. Tanis KQ, Duman RS, Newton SS. CREB Binding en aktiwiteit in die brein: Streekspesifisiteit en induksie deur elektrokonvulsiewe beslaglegging. Biolpsigiatrie. 2007
25. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Chromatien remodellering is 'n belangrike meganisme onderliggend aan kokaïen-geïnduseerde plastisiteit in striatum. Neuron. 2005; 48 (2): 303-14 [PubMed].
26. Graham DL, Edwards S, Bachtell RK, Dileone RJ, Rios M, Self DW. Dinamiese BDNF-aktiwiteit in kernklemme met kokaïengebruik verhoog selfadministrasie en terugval. Nat Neurosci. 2007; 10 (8): 1029-37 [PubMed].
27. Svenningsson P, Nairn AC, Greengard P. DARPP-32 bemiddel die optrede van veelvuldige dwelmmiddels. Aaps J. 2005; 7 (2): E353-60. [PMC gratis artikel] [PubMed]
28. Palmer AA, Verbitsky M, Suresh R, Kamens HM, Reed CL, Li N, Burkhart-Kasch S, McKinnon CS, Belknap JK, Gilliam TC, Phillips TJ. Gene uitdrukkingsverskille in muise wat divergent gekies word vir metamfetamien sensitiwiteit. Mamm Genoom. 2005; 16 (5): 291-305 [PubMed].
29. Bogush A, Pedrini S, Pelta-Heller J, Chan T, Yang Q, Mao Z, Sluzas E, Gieringer T, Ehrlich ME. AKT en CDK5 / p35 mediate brein-afgeleide neurotrofe faktor induksie van DARPP-32 in medium grootte spiny neurons in vitro. J Biol Chem. 2007; 282 (10): 7352-9 [PubMed].
30. Benavides DR, Bibb JA. Rol van Cdk5 in dwelmmisbruik en plastisiteit. Ann NY Acad Sci. 2004; 1025:. 335-44 [PubMed]
31. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet BK, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Effekte van chroniese blootstelling aan kokaïen word deur die neuronale proteïen Cdk5 gereguleer. Aard. 2001; 410 (6826): 376-80 [PubMed].
32. Blochl A, Sirrenberg C. Neurotrofiene stimuleer die vrystelling van dopamien vanaf ratmemensfale neurone via Trk- en p75Lntr-reseptore. J Biol Chem. 1996; 271 (35): 21100-7 [PubMed].
33. Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. Noodsaaklike rol van BDNF in die mesolimbiese dopamienweg in sosiale nederlaagstres. Wetenskap. 2006; 311 (5762): 864-8 [PubMed].
34. Nestler EJ, Carlezon WA., Jr Die mesolimbiese dopamien-beloningskring in depressie. Biolpsigiatrie. 2006; 59 (12): 1151-9 [PubMed].
35. Ford CP, Beckstead MJ, Williams JT. Kappa opioïde inhibisie van somatodendritiese dopamien inhibitiewe postsynaptiese strome. J Neurofisiolo. 2007; 97 (1): 883-91 [PubMed].
36. Nylander I, Vlaskovska M, Terenius L. Breindynorfien en enkefalienstelsels in Fischer- en Lewis-rotte: effekte van morfienverdraagsaamheid en onttrekking. Brein Res. 1995; 683 (1): 25-35 [PubMed].
37. Nylander I, Hyytia P, Forsander O, Terenius L. Verskille tussen alkohol-voorkeur (AA) en alkohol-vermyende (ANA) rotte in die prodynorfien- en proenkefalienstelsels. Alkohol Clin Exp Res. 1994; 18 (5): 1272-9 [PubMed].
38. Kreek MJ. Kokaïen, dopamien en die endogene opioïdesisteem. J Addict Dis. 1996; 15 (4): 73-96 [PubMed].
39. Carlezon WA, Jr, Duman RS, Nestler EJ. Die baie gesigte van CREB. Neigings Neurosci. 2005; 28 (8): 436-45 [PubMed].
40. Dudman JT, Eaton ME, Rajadhyaksha A, Macias W, Taher M, Barczak A, Kameyama K, Huganir R, Konradi C. Dopamien D1-reseptore bemiddel CREB-fosforilering via fosforilering van die NMDA-reseptor by Ser897-NR1. J Neurochem. 2003; 87 (4): 922-34 [PubMed].
41. Self DW. Regulering van dwelm-en-gedrag gedrag deur neuroadaptations in die mesolimbic dopamien stelsel. Neuro Farmacologie. 2004; 47 1: 242-55. [PubMed]
42. Beitner-Johnson D, Nestler EJ. Morfien en kokaïen oefen algemene chroniese aksies op tyrosienhidroksilase in dopaminerge breinbeloningstreke uit. J Neurochem. 1991; 57 (1): 344-7 [PubMed].
43. Lu L, Grimm JW, Shaham Y, Hoop BT. Molekulêre neuro-aanpassings in die accumbens en ventrale tegmentale area gedurende die eerste 90-dae van gedwonge onthouding van kokaïen-selfadministrasie by rotte. J Neurochem. 2003; 85 (6): 1604-13 [PubMed].
44. Shepard JD, Chuang DT, Shaham Y, Morales M. Effek van metamfetamien-selfadministrasie op tyrosienhidroksiel- en dopamien-vervoerdervlakke in mesolimbiese en nigrostriatale dopamienweë van die rat. Psigofarmakologie (Berl) 2006; 185 (4): 505-13. [PubMed]
45. Fulton S, Pissios P, Manchon RP, Stiles L, Frank L, Pothos EN, Maratos-Flier E, Flier JS. Leptien regulering van die mesoaccumbens dopamienweg. Neuron. 2006; 51 (6): 811-22 [PubMed].
46. Narita M, Nagumo Y, Miyatake M, Ikegami D, Kurahashi K, Suzuki T. Implikasie van proteïenkinase C in die oreksien-geïnduceerde vermeerdering van ekstrasellulêre dopamienvlakke en sy lonende effek. Eur J Neurosci. 2007; 25 (5): 1537-45 [PubMed].
47. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Direkte betrokkenheid van orexinergiese stelsels in die aktivering van die mesolimbiese dopamienweg en verwante gedrag wat deur morfien veroorsaak word. J Neurosci. 2006; 26 (2): 398-405 [PubMed].
48. Borgland SL, Taha SA, Sarti F, Fields HL, Bonci A. Orexin A in die VTA is van kritieke belang vir die induksie van sinaptiese plastisiteit en gedrags sensitiwiteit vir kokaïen. Neuron. 2006; 49 (4): 589-601 [PubMed].
49. Park ES, Yi SJ, Kim JS, Lee HS, Lee IS, Seong JK, Jin HK, Yoon YS. Veranderinge in orexien-A en neuropeptied Y-uitdrukking in die hipotalamus van die gevaste en hoë vet-dieet gevoed rotte. J Vet Sci. 2004; 5 (4): 295-302 [PubMed].
50. Wortley KE, Chang GQ, Davydova Z, Leibowitz SF. Peptiede wat voedselinname reguleer: orexiengeenuitdrukking word verhoog tydens toestande van hipertriglyceridemie. Is J Fisiol Reguleer Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1454-65 [PubMed].
51. Zheng H, Corkern M, Stoyanova I, Patterson LM, Tian R, Berthoud HR. Peptiede wat voedselinname reguleer: appetite-inducerende accumbens manipulasie aktiveer hipotalamiese orexienneurone en inhibeer POMC neurone. Is J Fisiol Reguleer Integr Comp Physiol. 2003; 284 (6): R1436-44 [PubMed].
52. Baldo BA, Gual-Bonilla L, Sijapati K, Daniel RA, Landry CF, Kelley AE. Aktivering van 'n subpopulasie van orexien / hipokretien-bevattende hipotalamiese neurone deur GABAA-reseptor-gemedieerde inhibisie van die nucleus accumbens-dop, maar nie deur blootstelling aan 'n nuwe omgewing nie. Eur J Neurosci. 2004; 19 (2): 376-86 [PubMed].
53. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. 'N rol vir laterale hipotalamiese orexine neurone in beloning soek. Aard. 2005; 437 (7058): 556-9 [PubMed].
;