Deteksie van molekulêre veranderinge in metamfetamien-geaktiveerde Fos-uitdrukkende neurone van 'n enkele rat dorsale striatum met behulp van fluorescens-geaktiveerde selsortering (FACS) (2013)

Metamfetamien en ander middels aktiveer 'n klein deel van alle neurone in die brein. Ons het voorheen 'n fluorescens-geaktiveerde selsorteringstelsel (FACS) -gebaseerde metode ontwikkel om molekulêre veranderinge selektief in geaktiveerde neurone geïnduceerde wat die neurale aktiwiteit merker Fos uitdruk. Hierdie metode verg egter monsters van baie rotte. Ons beskryf nou 'n gewysigde FACS-gebaseerde metode om molekulêre veranderinge in Fos-uitdrukkende dorsale striatale neurone van 'n enkele rot te karakteriseer deur 'n multiplex pre-amplifiseringstrategie te gebruik.

Fos en NeuN ('n neuronale merker) immunohistochemie dui aan dat 5-6% dorsale striatumneurone 90 min na akute metamfetamieninjecties (5 mg / kg, ip) geaktiveer is, terwyl minder as 0.5% neurone geaktiveer is deur soutinjecties.

Ons gebruik FACS om NeuN-gemerkte neurone in Fos-positiewe en Fos-negatiewe neurone te skei en mRNA-uitdrukking met behulp van RT-qPCR van so min as vyf Fos-positiewe neurone te bepaal. Metamfetamien geïnduceerde 3-20-voudige toenames van onmiddellike vroeë gene boog, homer-2, c-fos, fosB en sy isoforme (ΔfosB en 'n nuwe isoform ΔfosB-2) in Fos-positiewe maar nie Fos-negatiewe neurone. Onmiddellike vroeë gene mRNA induksie was 10-vou laer of afwesig wanneer geassesseer in ongesorteerde monsters van enkel dorsale striatum-homogenate. Ons gewysigde metode maak dit moontlik om unieke molekulêre veranderinge in neurone wat deur dwelms of dwelmverwante leidrade in komplekse verslawingsmodelle geaktiveer word, te ondersoek.

Metamfetamien en ander middels aktiveer 'n klein deel van alle neurone in die brein. Ons rapporteer hier 'n verbeterde metode om molekulêre veranderinge selektief in geaktiveerde neurone wat die neurale aktiwiteit merker Fos uitdruk, te karakteriseer. Ons het FACS saam met geteikende PCR-voorversterking gebruik om akute metamfetamien-geïnduceerde geenuitdrukking van so min as 5 Fos-uitdrukkende neurone van 'n enkele rat dorsale striatum te assesseer. Metamfetamien geïnduceerde 3-20-voudige toenames van onmiddellike vroeë gene (IEGs) in Fos-positiewe maar nie Fos-negatiewe neurone. Gerigte PCR-voorversterking maak dit moontlik om unieke molekulêre veranderinge in neurone wat deur dwelms of dwelmverwante leidrade in komplekse verslawingsmodelle geaktiveer word, te bestudeer.

Gepubliseer 2013. Hierdie artikel is 'n Amerikaanse regering werk en is in die openbare domein in die VSA.