Differensiële Uitdrukking van FosB Proteïene en Potensiële Teikengenes in Seleksie Breinstreke van Verslawing- en Depressiepatiënten (2016)

Paula A. Gajewski,
Gustavo Turecki,
Alfred J. Robison

Gepubliseer: Augustus 5, 2016

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355

Abstract

Chroniese blootstelling aan stres of dwelmmiddels is gekoppel aan veranderde geenuitdrukking regdeur die liggaam, en veranderinge in geenuitdrukking in afsonderlike breinstreke word vermoedelik onderliggend aan baie psigiatriese siektes, insluitend ernstige depressiewe versteuring en dwelmverslawing. Prekliniese modelle van hierdie afwykings het bewyse gelewer vir meganismes van hierdie veranderde geenuitdrukking, insluitend transkripsiefaktore, maar bewyse wat 'n rol vir hierdie faktore in menslike pasiënte ondersteun, het stadig na vore gekom. Die transkripsiefaktor ΔFosB word in die prefrontale korteks (PFC) en hippokampus (HPC) van knaagdiere geïnduseer in reaksie op stres of kokaïen, en die uitdrukking daarvan in hierdie streke word vermoedelik hul "top-down" beheer van beloningskringe, insluitend die kern, reguleer accumbens (NAc). Hier gebruik ons biochemie om die uitdrukking van die FosB familie van transkripsiefaktore en hul potensiële geenteikens in PFC en HPC nadoodse monsters van depressiewe pasiënte en kokaïenverslaafdes. Ons demonstreer dat ΔFosB en ander FosB isovorme in die HPC afgereguleer word, maar nie die PFC in die breine van beide depressiewe en verslaafde individue nie. Verder wys ons dat potensiële ΔFosB transkripsionele teikens, insluitend GluA2, ook in die HPC, maar nie PFC van kokaïenverslaafdes, afgereguleer word nie. Dus verskaf ons die eerste bewys van FosB geenuitdrukking in menslike HPC en PFC in hierdie psigiatriese afwykings, en in die lig van onlangse bevindinge wat die kritieke rol van HPC ΔFosB in knaagdiermodelle van leer en geheue demonstreer, dui hierdie data daarop dat verminderde ΔFosB in HPC moontlik kognitiewe tekorte kan onderlê wat gepaard gaan met chroniese kokaïenmisbruik of depressie.

aanhaling: Gajewski PA, Turecki G, Robison AJ (2016) Differensiële uitdrukking van FosB-proteïene en potensiële teikengene in uitgesoekte breinstreke van verslawing en depressiepasiënte. PLoS EEN 11(8): e0160355. doi:10.1371/journal.pone.0160355

Redakteur: Ryan K. Bachtell, Universiteit van Colorado Boulder, VERENIGDE STATE

ontvang: Februarie 29, 2016; aanvaar: Julie 18, 2016; Published: Augustus 5, 2016

Copyright: © 2016 Gajewski et al. Dit is 'n ooptoegang-artikel wat onder die bepalings van die Creative Commons Erkenning Lisensie, wat onbeperkte gebruik, verspreiding en voortplanting in enige medium toelaat, mits die oorspronklike skrywer en bron gekrediteer word.

Data Beskikbaarheid: Alle relevante data is binne die vraestel.

befondsing: Skrywer PAG het 'n mate van salarisondersteuning ontvang van 'n toekenning aan skrywer AJR van die Whitehall Foundation. Die befondsers het geen rol in studie-ontwerp, data-insameling en -analise, besluit om te publiseer of voorbereiding van die manuskrip gehad nie.

Kompeterende belange: Die outeurs het verklaar dat geen mededingende belange bestaan nie.

Inleiding

Die molekulêre en kringvlakmeganismes van psigiatriese siektes soos depressie en verslawing word nie ten volle verstaan nie, en hierdie kennis is deurslaggewend vir rasionele ontwikkeling van nuwe en beter behandelings. Veranderinge in geenuitdrukking in die nucleus accumbens (NAc) en die breinstreke wat bo-na-onder beheer oor NAc-funksie uitoefen, soos prefrontale korteks (PFC) en hippokampus (HPC), is deur baie studies betrek by die patogenese van verslawing en depressie in beide model-organismes en in nadoodse menslike brein [1-5]. Baie huidige behandelings vir depressie werk deur chroniese verbetering van serotonergiese en/of dopaminergiese sein, en feitlik alle dwelmmiddels beïnvloed dopamiensein in NAc. Boonop is verslawing en depressie hoogs comorbied, met byna een derde van pasiënte met ernstige depressiewe versteuring wat ook dwelmgebruiksversteurings en comorbiditeit het wat 'n groter risiko vir selfmoord en groter sosiale en persoonlike inkorting oplewer.6, 7]. Saamgevat dui hierdie data daarop dat chroniese wanaanpassings in die mesolimbiese dopamienkring en gekoppelde strukture beide verslawing en depressie kan onderlê, en dat veranderinge in geenuitdrukking waarskynlik 'n deurslaggewende rol in hierdie wanaanpassings sal speel.

Aangesien beide depressie en verslawing met verloop van tyd ontwikkel en gekoppel kan word aan chroniese blootstelling aan stres en/of dwelmmiddels [8, 9], en omdat tipiese antidepressante wat serotonergiese en dopaminergiese seine teiken weke se behandeling vereis om effektief te wees [10], lyk dit waarskynlik dat die patogenese van hierdie siektes en die meganismes van hul behandeling gekoppel kan word aan langtermyn- veranderinge in geenuitdrukking. Sulke veranderinge kan die gevolg wees van epigenetiese modifikasies van geenstruktuur, en bewyse neem inderdaad toe vir 'n sleutelrol vir DNA-metilering en histoonmodifikasies in beide verslawing en depressie [11-14]. Dit sluit egter nie 'n potensiële rol vir transkripsiefaktore in hierdie prosesse uit nie, veral stabiele transkripsiefaktore wat deur chroniese neuronale aktivering geïnduseer word. Een so 'n transkripsiefaktor is ΔFosB [1, 15, 16], 'n splitsingsvariant vervaardig uit die FosB geen. Anders as die vollengte FosB-proteïen, is ΔFosB merkwaardig stabiel in vergelyking met ander onmiddellike vroeë geenprodukte (halfleeftyd van tot 8 dae in die brein [17]), hoofsaaklik as gevolg van die afkapping van twee degron-domeine in die c-terminus [18], sowel as 'n stabiliserende fosforilering by Ser27 [19, 20]. ΔFosB word deur die knaagdierbrein geïnduseer, insluitend die NAc en verwante strukture, deur stres [21-23], antidepressante [22], en dwelms van misbruik [24]. Verder impliseer knaagdiermodelle ΔFosB uitdrukking in NAc in beide verslawing [20, 25] en depressie [26, 27], en onlangse studies dui op 'n rol vir ΔFosB in hierdie siektes in PFC [21] en HPC [28]. In die NAc bevorder ΔFosB uitdrukking verhoogde psigomotoriese sensitisering vir en beloning van psigostimulante by knaagdiere [20, 25]. NAc ΔFosB tree ook op as 'n pro-veerkragtigheidsfaktor in die muis chroniese sosiale nederlaag model van depressie, en die uitdrukking daarvan daar is nodig vir antidepressante funksie [26]. In teenstelling hiermee bevorder uitdrukking van ΔFosB in PFC vatbaarheid vir sosiale nederlaagstres by muise [21], wat daarop dui dat ΔFosB baie verskillende rolle speel in die beloningkring en die breinstreke wat dit innerveer. Laastens word ΔFosB in die muis dorsale HPC geïnduseer deur te leer en die funksie daarvan is nodig vir normale ruimtelike geheue vorming [28], die verskaffing van 'n moontlike meganisme vir die kognitiewe tekorte wat dikwels gepaard gaan met chroniese dwelmblootstelling en/of depressie [29-31].

Aangesien ΔFosB 'n transkripsiefaktor is, word daar algemeen aanvaar dat dit sy biologiese effekte uitoefen deur modulasie van die uitdrukking van geselekteerde teikengene, en baie van daardie teikengene is by depressie en verslawing betrokke. ΔFosB reguleer die uitdrukking van veelvuldige subeenhede van α-amino-3-hidroksi-5-metiel-4-isoksasoolpropionzuur (AMPA)- en N-metiel-D-aspartaat (NMDA)-tipe glutamaatreseptore [25, 26, 32], en hierdie reseptore is direk by verslawing betrokke [33, 34], depressie [35, 36], en antidepressante funksie [36, 37]. ΔFosB reguleer ook die uitdrukking van seinmolekules, soos kalsium/kalmodulien-afhanklike proteïenkinase II α (CaMKIIα), wat gekoppel is aan baie psigiatriese versteurings [38], en ons het getoon dat hierdie regulering van CaMKII-uitdrukking in muise psigomotoriese sensitiwiteit vir kokaïen dryf [20] en antidepressante funksie [27]. Daarbenewens reguleer ΔFosB die uitdrukking van siklienafhanklike kinase 5 (cdk5) [39], wat in striatum geïnduseer word deur psigostimulante blootstelling en stres [40-42] en reguleer die psigomotoriese en motiverende reaksies op kokaïen [43]. Daar is dus sterk bewyse in knaagdiermodelle dat induksie van ΔFosB in verskeie breinstreke deur stres, antidepressante en dwelmmiddels gedrag wat verband hou met depressie en verslawing kan reguleer deur die uitdrukking van geselekteerde teikengene in diskrete breinstreke te moduleer.

Alhoewel prekliniese modelle van verslawing en depressie redelik vrugbaar was, is dit noodsaaklik om bevindinge van diermodelle te ondersteun met bewyse van menslike studies as ons verwag om potensiële molekulêre meganismes in nuwe behandelingsopsies te vertaal. Ons het voorheen getoon dat ΔFosB opgereguleer word in die NAc van menslike kokaïenverslaafdes [20] en verminder in die NAc van depressiewe mense [26]. Maar regulering van FosB geenprodukuitdrukking in HPC en PFC, kritieke reguleerders van NAc-neuronale aktivering, is nie voorheen in menslike brein bestudeer nie, en ook nie regulering van potensiële ΔFosB-teikengeenuitdrukking nie. Ons het dus die uitdrukking van FosB geenprodukte, sowel as die uitdrukking van potensiële ΔFosB-teikengene, in die PFC en HPC van pasiënte wat aan ernstige depressiewe versteuring of kokaïenverslawing ly.

Materiaal en metodes

Menslike monsters

Nadoodse menslike breinweefsel is verkry vanaf die Douglas Bell-Canada Brain Bank (Douglas Mental Health University Institute, Montreal, Quebec, Kanada). Dwelmgebruikinligting rakende menslike kokaïenverslaafdes, depressiepasiënte en ooreenstemmende kontroles kan gevind word in Tabel 1. Die bewaring van weefsel het in wese verloop soos beskryf [44]. Kortliks, sodra dit onttrek is, word die brein op nat ys in 'n Styrofoam-boks geplaas en na die Douglas Bell-Canada Breinbank-fasiliteite gehaas. Hemisfere word onmiddellik geskei deur 'n sagittale sny in die middel van die brein, breinstam en serebellum. Bloedvate, pineaalklier, choroid plexus, halwe serebellum en halwe breinstam word tipies van die linkerhemisfeer gedissekteer wat dan koronaal in 1 cm-dik skywe gesny word voordat dit gevries word. Die laaste helfte van die serebellum word sagittaal in 1 cm-dik skywe gesny voordat dit gevries word. Weefsels word flitsbevries in 2-metielbutaan by -40°C vir ~60 sek. Alle bevrore sneesdoekies word apart in plastieksakke by -80°C gehou vir langtermynberging. Spesifieke breinstreke word gedissekteer van bevrore koronale skywe op 'n vlekvrye staalplaat met droë ys rondom om die temperatuur van die omgewing te beheer. PFC monsters kom van Brodmann area 8/9, en HPC monsters word geneem vanaf die middelmassa van die hippocampus formasie (Fig 1).

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prent (1.61 MB)

TIFF

oorspronklike beeld (1.59MB)

Fig 1. Diagram van disseksiestreke vir menslike breinmonsters.

Tekeninge verteenwoordig anterior (A) en posterior (B) koronale gedeeltes van menslike brein wat gebruik word vir disseksie van PFC-monsters, en (C) HPC-monsters. Rooi blokkies beklemtoon areas van disseksie. SFG: superieure frontale gyrus; MFG: middel frontale gyrus; IG: insulêre gyrus; FuG: fusiform gyrus.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g001

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prentjie (529KB)

TIFF

oorspronklike beeld (1.02MB)

Tabel 1. Middelafhanklikheid, toksikologie en gebruik van antidepressante medikasie by menslike kokaïenverslaafdes, depressiepasiënte en ooreenstemmende kontrolegroepe.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t001

Muismonsters

Die studie het riglyne gevolg wat in die Gids vir die versorging en gebruik van laboratoriumdiere, agtste uitgawe (Instituut of Laboratory Animal Resources, 2011). Voor enige toetsing is alle eksperimentele prosedures deur die Institusionele Dieresorg- en Gebruikskomitee by Michigan State University goedgekeur. Indien enige dier gebrek aan versorging, infeksie, ernstige gewigsverlies of onbeweeglikheid toon, word die dier doodgemaak. Geen diere het sulke genadedood nodig gehad voor die eksperimentele eindpunt in die huidige studie nie. Na aankoms by die fasiliteit is 7 weke oue C57BL/6 manlike muise (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, VSA) in groepe gehuisves teen 4 per hok in 'n koloniekamer wat op 'n konstante temperatuur (23°C) gestel is vir ten minste 3 dae voor eksperimentering in 'n 12 uur lig/donker siklus met ad libidum kos en water. Muise is chroniese (7 dae) of akute (enkele inspuiting) kokaïen (15 mg/kg) of steriele sout (0.9% sout) via 'n intraperitoneale (ip) inspuiting gegee, en een uur na die finale inspuiting deur servikale ontwrigting geoffer. Weefsel is dadelik geoes (Fig 2) of op verskillende tye na offer (Fig 3).

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prentjie (649KB)

TIFF

oorspronklike beeld (878KB)

Fig 2. Vergelyking van menslike en muis FosB proteïene.

(A) Westerse klad van hippocampale proteïene met FosB-teenliggaampies onthul veelvuldige bykomende bande in tipiese menslike kokaïenverslaafde HPC-monster in vergelyking met 'n chroniese kokaïenbehandelde (15 mg/kg vir 7 dae) muis HPC. Nuwe bande is sigbaar by 20 kDa, 23 kDa (wit pyl) en 30 kDa (swart pyl). (B) Korrelasie en lineêre regressie plotte van proteïen uitdrukking vir elke band in die menslike monsters met die nadoodse interval (tyd tussen dood en brein bevriesing) vir elke menslike monster. Stippellyne verteenwoordig 95% vertrouensinterval; geen lineêre regressiehelling het betekenisvol van 0 verskil nie.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g002

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prentjie (214KB)

TIFF

oorspronklike beeld (317KB)

Fig 3. Uitdrukking van FosB proteïene in muis HPC na verlengde nadoodse intervalle.

Die brein van muise wat 'n akute inspuiting van kokaïen (15 mg/kg ip) gekry het, is oorgebly on-site vir 0, 1 of 8 uur na opoffering voor die oes van HPC. Western blot toon opbou van 'n 23 kDa band in die 8 uur diere, maar wys nie ander bande wat in menslike HPC monsters gevind is nie.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g003

Western Blotting

Muisbreine is vinnig op ys onttrek en dan in 1 mm-afdelings gesny, en dorsale hippokampus is met 'n 12 gauge pons verwyder en onmiddellik op droë ys gevries. Beide menslike en muismonsters is gehomogeniseer deur ligte sonikasie in gemodifiseerde RIPA-buffer (10 mM Tris-basis, 150 mM natriumchloried, 1 mM EDTA, 0.1% natriumdodesielsulfaat, 1% Triton X-100, 1% natriumdeoksicholaat, pH 7.4, protease en fosfatase inhibeerders [Sigma Aldrich]). Konsentrasie is gemeet deur gebruik te maak van DC Protein Assay (BioRad) en jelmonsters is genormaliseer vir totale proteïen. Proteïene is geskei op 4-15% polyacrylamaide gradiënt gels (Criterion System, BioRad), en Western blotting is uitgevoer met behulp van chemiluminescence (SuperSignal West Dura, Thermo Scientific). Totale proteïen is getoets met behulp van Swift Membrane Stain (G Biosciences) en proteïene is gekwantifiseer met behulp van ImageJ sagteware (NIH). Primêre teenliggaampies is gebruik om FosB-isovorme op te spoor (5G4; 1:500; Selsein, 2251), GluA2/3 (1:1,000 07; Millipore, 598–1), CaMKIIα (1,000:05 532; Millipore, 5–1), cdk1,000 (173:1 20,000; Santa cruz, sc-21185), GAPDH (XNUMX:XNUMX XNUMX; Selsein, XNUMX).

Statistiek

Alle statistiese ontledings is uitgevoer met behulp van die Prism 6 sagteware pakket (GraphPad). Lineêre regressie-analise is gebruik om te bepaal of die uitdrukking van FosB geen produkte is gekorreleer met nadoodse interval. Die helling van elke lineêre regressielyn is getoets vir beduidende verskil vanaf nul. Studente se t-toetse is gebruik vir alle paarsgewyse vergelykings tussen kontrole- en kokaïenverslaafde individue (aangedui in Resultate waar t-waarde gegee word). Eenrigting ANOVA's is gebruik vir alle veelvuldige vergelykings tussen kontroles, depressiewe individue met antidepressante aan boord, of depressiewe individue sonder antidepressante (aangedui in resultate waar F-waarde gegee word). Die eenrigting ANOVA's is deur Tukey gevolg post hoc toets. P <0.05 is as beduidend beskou.

Results

Ons onlangse studies dui daarop dat die drie belangrikste produkte van die FosB geen in die brein, vollengte FosB (~50 kDa), ΔFosB (~35–37 kDa), en Δ2ΔFosB (~25 kDa), word differensieel geïnduseer in muisbreinbeloning-geassosieerde streke in reaksie op stres en antidepressante behandeling [22], en ander Fos-verwante antigene wat waarskynlik deur die FosB geen is ook in muisbrein waargeneem [45-47]. Daarom het ons eers probeer vasstel of die menslike brein 'n patroon van uitdruk FosB geenprodukte soortgelyk aan dié wat in muisbrein gevind word. Ons het 'n tipiese HPC-monster van 'n menslike kokaïenverslaafde vergelyk (Tabel 2) na HPC van 'n muis wat chroniese kokaïen gegee is (15 mg/kg, ip vir 7 dae). Al drie hoofvak FosB geenprodukte is in beide muis- en menslike breinweefsel gevind, maar bykomende bande is in die menslike monster waargeneem in vergelyking met muis (Fig 2A). Die belangrikste is dat bande by ~30 kDa, ~23 kDa en ~20 kDa in menslike monsters verskyn het, maar is nie in muismonsters waargeneem nie. Ons het gepostuleer dat hierdie bande proteolitiese produkte kan verteenwoordig wat voortspruit uit degradasie van FosB of ΔFosB as gevolg van die verlengde nadoodse interval (PMI) in ons menslike monsters (Tabel 2). Geen korrelasie is egter gevind tussen die intensiteit van hierdie nuwe bande en PMI (Fig 2B), of tussen PMI en die belangrikste geenprodukte, FosB, ΔFosB en Δ2ΔFosB (Fig 2B), dit wil sê, nie een van die regressielyne het 'n helling wat beduidend van nul verskil het nie. Hierdie nuwe bande is dus moontlik nie proteolitiese afbraakprodukte as gevolg van lang tyd tussen dood en weefselvries nie.

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prentjie (279KB)

TIFF

oorspronklike beeld (504KB)

Tabel 2. Demografie van menslike kokaïenverslaafdes, depressiepasiënte en ooreenstemmende kontrolegroepe.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.t002

Om dit verder te ondersoek, het ons muise 'n enkele inspuiting van kokaïen (15 mg/kg, ip) of sout gegee en hulle 'n uur later deur servikale ontwrigting geoffer. Die breine is toe gelos on-site vir nul, een of agt uur voordat monsters geneem is. Ons het 'n paar afbraakprodukte opgemerk (Fig 3), die mees prominente is ~23 kDa, maar die gevolglike patroon het nie nageboots wat in menslike HPC-monsters gesien word nie. Saamgevat dui hierdie data daarop dat daar addisionele Fos-verwante antigene in die menslike brein is wat nuwe kan verteenwoordig FosB geenprodukte en sal waarskynlik nie die gevolg wees van proteolise van FosB of ΔFosB nie.

Ons het vervolgens probeer vasstel of kokaïenafhanklikheid, onbehandelde depressie of depressie tesame met blootstelling aan antidepressante medikasie geassosieer word met veranderinge in FosB geenprodukte in menslike HPC of PFC. Pasiënte en kontrolepersone is so gekies dat daar geen beduidende verskille in gemiddelde ouderdom, geslag, brein pH of PMI was nie (Tabel 1). In monsters van kokaïenafhanklike pasiënte het Western klad geen verskille in die uitdrukking van enige FosB-isovorm in die PFC getoon in vergelyking met kontroles nie (Fig 4A en 4B). Ons het egter 'n merkbare afname in die HPC van kokaïenafhanklike individue in vollengte FosB (t(35) = 2.67, p = 0.012), ΔFosB (t(31) = 2.81, p = 0.009), sowel as in al drie nuwe bands, 30 kDa (t(34) = 2.71, p = 0.011), 23 kDa (t(15) = 2.7, p = 0.016), en 20 kDa (t(13) = 2.43, p = 0.031), en 'n neiging na 'n afname in Δ2ΔFosB (t(29) = 2.03, p = 0.052). Net so, in monsters van pasiënte wat aan depressie ly, was daar geen verskille in die uitdrukking van enige FosB-isovorm in die PFC nie, terwyl die HPC afnames in vollengte FosB (F(2,35) = 1.98, p = 0.048) en ΔFosB (F(2,30) = 1.38, p = 0.027), sowel as in die 23 kDa-band (F(2,21) = 2.05, p = 0.022) en die 20 kDa-band (F(2,18) = 0.97, p = 0.028) (Fig 4C en 4D). Hierdie data stel voor dat FosB geenuitdrukking in HPC word verminder in veelvuldige psigiatriese toestande terwyl PFC-uitdrukking nie beïnvloed word nie.

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prent (1.19 MB)

TIFF

oorspronklike beeld (1.98MB)

Fig 4. Uitdrukking van FosB-proteïene in HPC en PFC van menslike kokaïenverslawing en depressiepasiënte.

(A) Westerse klad van FosB-proteïene van die HPC en PFC van menslike kokaïenverslaafdes (Coc) en kontroles (Con). (B) Kwantifisering toon 'n kokaïenafhanklike afname in baie FosB-proteïene in die HPC, maar nie PFC nie (*:p<0.05, #:p = 0.05). (C) Westerse klad van FosB-proteïene van die HPC en PFC van menslike depressiepasiënte af (Dep) of op antidepressante (Dep + AD) en kontroles (Con). (D) Kwantifisering toon 'n depressie-afhanklike afname in sommige FosB-proteïene in die HPC maar nie PFC nie (*:p<0.05). Foutstawe dui gemiddelde +/- SEM aan.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g004

Direkte bewyse vir geenteikens van ΔFosB transkripsieregulering in HPC is skraal, met slegs siklienafhanklike proteïenkinase 5 (cdk5) 'n bevestigde teiken na elektrokonvulsiewe stimulasie in muise [39]. Baie ander gene is egter bekende teikens vir ΔFosB transkripsieregulering in ander breinstreke, veral in NAc. Dit sluit 'n aantal gene in wat noodsaaklik is vir hippokampale selfunksie en sinaptiese plastisiteit, soos GluA2 [48] en CaMKII [20]. Daarom het ons Western blot gebruik om die vlakke van potensiële geen-teikens van ΔFosB in HPC en PFC van kokaïenafhanklike en depressiewe pasiënte te bepaal. Ons het geen beduidende verskille in die proteïenvlakke van die kandidaat-teikengene in die PFC van kokaïenafhanklike individue gevind nie, terwyl die HPC 'n beduidende afname in GluA2 (t(34) = 2.31, p = 0.027) en 'n sterk neiging tot afname in CaMKII-vlakke (t(35) = 1.99, p = 0.053) uitdrukking, terwyl cdk5 onveranderd gebly het (Fig 5A en 5B). In die PFC en HPC van depressiewe pasiënte was daar geen veranderinge in uitdrukking van die ΔFosB teikengene nie (Fig 5C en 5D). Hierdie data dui daarop dat ΔFosB die uitdrukking van potensiële teikengene in menslike HPC kan reguleer, en hierdie regulering kan breinstreek- en siektespesifiek wees.

Download:

PPT

PowerPoint-skyfie

PNG

groter prentjie (546KB)

TIFF

oorspronklike beeld (1.01MB)

Fig 5. Uitdrukking van moontlike ΔFosB geen teikenproteïene in HPC en PFC van menslike kokaïenverslawing en depressiepasiënte.

(A) Westerse klad van potensiële ΔFosB geen-teikenproteïene van die HPC en PFC van menslike kokaïenmisbruikers (Coc) en kontroles (Con). (B) Kwantifisering toon 'n kokaïenafhanklike afname in alle GluA2 en CaMKII in die HPC, maar nie PFC nie (*:p<0.05, #:p = 0.05). (C) Westerse klad van potensiële ΔFosB geen-teikenproteïene van die HPC en PFC van menslike depressiepasiënte af (Dep) of op antidepressante (Dep + AD) en kontroles (Con). (D) Kwantifisering toon geen depressie-afhanklike veranderinge nie. Foutstawe dui gemiddelde +/- SEM aan.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0160355.g005

Bespreking

Hier bied ons die eerste samestelling van FosB geenproduk en ΔFosB-teikenproteïenanalise in die hippokampus en prefrontale korteks van kokaïenverslaafdes en depressiewe pasiënte. Dit is bekend dat hierdie breinstreke sleutelrolle speel in die patofisiologie van hierdie siektes, en die gebruik van menslike nadoodse monsters stel ons in staat om: 1) te bepaal of die molekulêre veranderinge wat in goed bestudeerde knaagdiermodelle van hierdie siektes gevind word, in mense saamgevat word. ; 2) identifiseer nuwe roetes vir studie in knaagdiermodelle vir potensiële terapeutiese intervensie. Ons ontledings het gefokus op die uitdrukking van FosB geen produkte, aangesien hul uitdrukking in hierdie streke voorgestel is om 'n rol te speel in depressie en word geïnduseer deur kokaïenblootstelling in knaagdiermodelle [21, 22, 24]. Toe ons aanvanklik die FosB-proteïenvlakke in ons menslike monsters ondersoek het, was dit duidelik dat ons FosB-teenliggaampie meer bande opgespoor het as wat voorheen in knaagdierbreinmonsters deur ons groep en baie ander gerapporteer is.1, 22]. Omdat menslike brein ure na die dood gevries word terwyl muismonsters binne twee minute van opoffering verwyder en gevries word, het ons muisbreine gelos on-site na opoffering vir tot agt uur om vas te stel of soortgelyke bande sou na vore kom. Omdat ons egter nie dieselfde patroon van FosB-proteïene waargeneem het wat in die menslike monsters gevind is nie, en omdat ons ook geen korrelasie tussen die lengte van PMI en die vlakke van die verskillende bande in menslike monsters gevind het nie, het ons tot die gevolgtrekking gekom dat baie van die bande in die menslike breinmonsters sal waarskynlik nie die gevolg wees van proteolitiese afbraak van groter FosB-isovorme nie. Alhoewel ons nie verskille in die proteolitiese masjinerie tussen spesies kan uitsluit nie, sou ons voorstel dat sommige van die menslike bande kan voortspruit uit differensiële splitsing van die FosB mRNA, en toekomstige studies van ons groep sal hierdie vraag aanspreek.

Vorige resultate van knaagdierstudies het 'n toename in FosB-isovorme in HPC en PFC na chroniese kokaïen gevind.24]. Uit ons groep kokaïenafhanklike individue het ons egter 'n afname in alle FosB-isovorme in HPC gevind, met geen verandering in PFC in vergelyking met kontrole-individue nie. Ons glo dit kan te wyte wees aan die inherente verskille tussen knaagdierstudies en gevalle van menslike verslawing. Studies van kokaïenverslawing duur net vir 'n klein fraksie van die knaagdier se lewe, en geen ΔFosB-induksiestudies het tot dusver verder gegaan as 14 dae van aaneenlopende kokaïenblootstelling nie [1, 20]. Menslike kokaïengebruikers kan vir baie langer tydperke verslaaf wees, wat homeostatiese effekte kan veroorsaak wat die FosB geen wat in HPC onderdruk moet word. Boonop het baie studies getoon dat langtermynverslawing aan psigostimulante gepaard gaan met verminderde kognitiewe funksie [9, 49]. Ons onlangse werk toon dat HPC ΔFosB 'n kritieke rol in leer speel [28], en dus die afname in HPC FosB geenuitdrukking in kokaïenverslaafdes wat hier getoon word, kan 'n meganisme vir kognitiewe afname in psigostimulerende verslawing verteenwoordig. Met verminderde uitdrukking van die FosB geen in HPC, het ons ook 'n afname in die proteïenvlakke van kandidaat ΔFosB-teikengene GluA2 en CaMKII waargeneem, en beide hierdie molekules is ook krities vir HPC-funksie en leer [50] en is voorheen aan verslawing gekoppel [38, 51].

In die HPC van depressiewe pasiënte het ons 'n afname in verskeie FosB-proteïene waargeneem, afhangende van of pasiënte antidepressante gebruik het. Dit kan aandui dat antidepressante differensiële effekte het op die splyting of stabiliteit van FosB geen produkte, alhoewel ons vorige studies in knaagdiere nie sulke verskille aan die lig gebring het nie [22]. Daar was egter geen verskille in die uitdrukking van potensiële teikengene in óf HPC óf PFC van hierdie pasiënte nie. Alhoewel ernstige depressie dikwels gepaard gaan met kognitiewe probleme [52], is dit waarskynlik dat HPC ΔFosB nie die enigste faktor is wat verander is in reaksie op depressie nie. Terwyl die kokaïenverslaafdes veranderinge in HPC ΔFosB en in teikengeenuitdrukking getoon het, kan depressie lei tot verskillende kompenserende meganismes wat vermindering in GluA2- of CaMKII-uitdrukking voorkom. Dus, toekomstige studies sal toelig of veranderinge in HPC geenuitdrukking in depressie en verslawing voortspruit uit soortgelyke meganismes.

Dit is van kritieke belang om daarop te let dat die menslike bevolkings wat vir hierdie studie gebruik word, nie die homogeniteit van prekliniese knaagdier- of primaatmodelle het nie. Byvoorbeeld, vyf van die depressiewe pasiënte het aan alkoholisme gely, en twee het opiate aan boord gehad ten tyde van die dood. Net so het ses van die kokaïenafhanklike individue antidepressante gebruik in die drie maande voor die dood. Alhoewel dit nie verbasend is nie, aangesien depressie en verslawing 'n hoë vlak van comorbiditeit het [6, 7], dit bemoeilik die interpretasie van resultate. Ons neem nie 'n beduidende verskil in enige van ons biochemiese maatreëls waar tussen kokaïenafhanklike proefpersone wat antidepressante aan boord gehad het en dié wat nie gehad het nie, en ons neem ook nie verskille waar tussen depressiewe pasiënte wat substansafhanklikheid gehad het en diegene wat nie het nie (data nie getoon nie) ). Dit sluit egter oorvleuelende of sinergistiese effekte van depressie en verslawing op ons maatreëls uit. Inteendeel, aangesien ons soortgelyke afnames in HPC FosB isovorm uitdrukking met depressie en verslawing waarneem, is dit moontlik dat vermindering in HPC FosB geenuitdrukking is 'n algemene meganisme tussen die twee toestande en kan bydra tot komorbiditeit. Ondersoek van hierdie hipotese sal baie groter kohorte van menslike proefpersone en bykomende prekliniese studies vereis.

Ten slotte vind ons dat veelvoud FosB geenprodukte word afgereguleer in die HPC, maar nie die PFC nie, van mense wat aan verslawing en depressie ly. Alhoewel ons nie 'n etiologiese verband tussen hierdie verskynsel en die siektetoestande kan maak nie, is dit moontlik dat afnames in HPC ΔFosB en/of ander FosB isovorme deels die kognitiewe tekortkominge wat met depressie en verslawing geassosieer kan wees, kan onderlê, of kan bydra tot die comorbiditeit van hierdie psigiatriese versteurings.

Erkennings

Die skrywers wil Kenneth Moon bedank vir uitstekende tegniese bystand.

Skrywer Bydraes

Ontleed en ontwerp die eksperimente: AJR PAG.
Die eksperimente uitgevoer: AJR GT PAG.
Ontleed die data: PAG AJR.
Bygedrae reagense/materiale/analise-instrumente: GT.
Het die vraestel geskryf: PAG AJR.

Verwysings

1. Robison AJ, Nestler EJ. Transkripsionele en epigenetiese meganismes van verslawing. Nat Rev Neurosci. 2011;12(11):623–37. Epub 2011/10/13. doi: 10.1038/nrn3111 nrn3111 [pii]. pmid:21989194; PubMed Central PMCID: PMC3272277.
- Bekyk artikel
- PubMed / Ncbi
- Google Scholar
2. Fass DM, Schroeder FA, Perlis RH, Haggarty SJ. Epigenetiese meganismes in gemoedsversteurings: gerig op neuroplastisiteit. Neurowetenskap. 2014;264:112–30. doi: 10.1016/j.neuroscience.2013.01.041 pmid:23376737; PubMed Central PMCID: PMC3830721.
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
3. Menard C, Hodes GE, Russo SJ. Patogenese van depressie: Insigte uit menslike en knaagdierstudies. Neurowetenskap. 2015. doi: 10.1016/j.neuroscience.2015.05.053 pmid:26037806.
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
Bekyk artikel
PubMed / Ncbi
Google Scholar
4. Keralapurath MM, Briggs SB, Wagner JJ. Kokaïen selfadministrasie veroorsaak veranderinge in sinaptiese oordrag en plastisiteit in ventrale hippokampus. Verslawing biologie. 2015. doi: 10.1111/adb.12345 pmid:26692207.
5. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. Kannabinoïde-oordrag in die Hippokampus aktiveer Nucleus Accumbens Neurone en moduleer beloning en afkeerverwante emosionele opvallendheid. Biologiese psigiatrie. 2015. doi: 10.1016/j.biopsych.2015.10.016 pmid:26681496.
6. Davis L, Uezato A, Newell JM, Frazier E. Major depressie en comorbide dwelmgebruik versteurings. Huidige mening in psigiatrie. 2008;21(1):14–8. doi: 10.1097/YCO.0b013e3282f32408 pmid:18281835.
7. Comorbiditeit: Verslawing en ander geestesiektes. In: Services USDoHaH, redakteur.: National Institute on Drug Abuse; 2010.
8. Tafet GE, Nemeroff CB. Die skakels tussen stres en depressie: psigoneuro-endokrinologiese, genetiese en omgewingsinteraksies. Die Tydskrif vir neuropsigiatrie en kliniese neurowetenskappe. 2015: appineuropsych15030053. doi: 10.1176/appi.neuropsych.15030053 pmid:26548654.
9. Kadet JL, Bisagno V. Neuropsigologiese gevolge van chroniese dwelmgebruik: relevansie vir behandelingsbenaderings. Grense in psigiatrie. 2015;6:189. doi: 10.3389/fpsyt.2015.00189 pmid:26834649; PubMed Central PMCID: PMC4713863.
10. Blier P. Die farmakologie van vermeende vroeë-aanvang antidepressante strategieë. Eur Neuropsychopharmacol. 2003;13(2):57–66. pmid:12650947. doi: 10.1016/s0924-977x(02)00173-6
11. Januar V, Ancelin ML, Ritchie K, Saffery R, Ryan J. BDNF-promotor-metilering en genetiese variasie in laat-lewe depressie. Translasie psigiatrie. 2015;5:e619. doi: 10.1038/tp.2015.114 pmid:26285129; PubMed Central PMCID: PMCPMC4564567.
12. Covington HE 3de, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnishi YN, Berton O, et al. Antidepressante aksies van histoon deacetilase inhibeerders. J Neurosci. 2009;29(37):11451–60. Epub 2009/09/18. 29/37/11451 [pii] doi: 10.1523/JNEUROSCI.1758-09.2009 pmid:19759294; PubMed Central PMCID: PMC2775805.
13. Maze I, Covington HE 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, et al. Noodsaaklike rol van die histoonmetieltransferase G9a in kokaïen-geïnduseerde plastisiteit. Wetenskap. 2010;327(5962):213–6. Epub 2010/01/09. 327/5962/213 [pii] doi: 10.1126/science.1179438 pmid:20056891; PubMed Central PMCID: PMC2820240.
14. Massart R, Barnea R, Dikshtein Y, Suderman M, Meir O, Hallett M, et al. Rol van DNA-metilering in die nucleus accumbens in inkubasie van kokaïen-drang. Die Tydskrif vir Neurowetenskap: die amptelike tydskrif van die Vereniging vir Neurowetenskap. 2015;35(21):8042–58. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3053-14.2015 pmid:26019323.
15. Ruffel JK. Molekulêre neurobiologie van verslawing: waaroor gaan die (Delta)FosB? Die Amerikaanse joernaal van dwelm- en alkoholmisbruik. 2014;40(6):428–37. doi: 10.3109/00952990.2014.933840 pmid:25083822.
16. Nestler EJ. FosB: 'n Transkripsiereguleerder van stres en antidepressante reaksies. Eur J Pharmacol. 2014. doi: 10.1016/j.ejphar.2014.10.034 pmid:25446562.
17. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforilering van DeltaFosB bemiddel sy stabiliteit in vivo. Neurowetenskap. 2009;158(2):369–72. Epub 2008/12/02. S0306-4522(08)01596-0 [pii] doi: 10.1016/j.neuroscience.2008.10.059 pmid:19041372; PubMed Central PMCID: PMC2734485.
18. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, et al. Proteasoom-afhanklike en -onafhanklike meganismes vir FosB-destabilisering: identifikasie van FosB-degroondomeine en implikasies vir DeltaFosB-stabiliteit. Eur J Neurosci. 2007;25(10):3009–19. Epub 2007/06/15. EJN5575 [pii] doi: 10.1111/j.1460-9568.2007.05575.x pmid:17561814.
19. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulering van DeltaFosB-stabiliteit deur fosforilering. J Neurosci. 2006;26(19):5131–42. Epub 2006/05/12. 26/19/5131 [pii] doi: 10.1523/JNEUROSCI.4970-05.2006 pmid:16687504.
20. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J, Kourrich S, Collins M, et al. Gedrags- en strukturele reaksies op chroniese kokaïen vereis 'n terugvoerlus wat DeltaFosB en kalsium/kalmodulien-afhanklike proteïenkinase II in die Nucleus Accumbens-dop betrek. J Neurosci. 2013;33(10):4295–307. doi: 10.1523/JNEUROSCI.5192-12.2013 pmid:23467346.
21. Vialou V, Bagot RC, Cahill ME, Ferguson D, Robison AJ, Dietz DM, et al. Prefrontale kortikale stroombaan vir depressie- en angsverwante gedrag bemiddel deur cholecystokinien: rol van DeltaFosB. J Neurosci. 2014;34(11):3878–87. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1787-13.2014 pmid:24623766; PubMed Central PMCID: PMC3951691.
22. Vialou V, Thibault M, Kaska S, Cooper S, Gajewski P, Eagle A, et al. Differensiële induksie van FosB isovorme regdeur die brein deur fluoksetien en chroniese stres. Neurofarmakologie. 2015;99:28–37. doi: 10.1016/j.neuropharm.2015.07.005 pmid:26164345.
23. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, et al. Induksie van deltaFosB in beloningsverwante breinstrukture na chroniese stres. J Neurosci. 2004;24(47):10594–602. Epub 2004/11/27. 24/47/10594 [pii] doi: 10.1523/JNEUROSCI.2542-04.2004 pmid:15564575.
24. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, et al. Afsonderlike patrone van DeltaFosB-induksie in die brein deur dwelmmiddels. Sinaps. 2008;62(5):358–69. Epub 2008/02/23. doi: 10.1002/syn.20500 pmid:18293355; PubMed Central PMCID: PMC2667282.
25. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr., Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. Uitdrukking van die transkripsiefaktor deltaFosB in die brein beheer sensitiwiteit vir kokaïen. Aard. 1999;401(6750):272–6. Epub 1999/09/28. doi: 10.1038/45790 pmid:10499584.
26. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE 3rd, Dietz DM, Ohnishi YN, et al. DeltaFosB in breinbeloningskringe bemiddel veerkragtigheid teen stres en antidepressante reaksies. Nat Neurosci. 2010;13(6):745–52. Epub 2010/05/18. nn.2551 [pii] doi: 10.1038/nn.2551 pmid:20473292; PubMed Central PMCID: PMC2895556.
27. Robison AJ, Vialou V, Sun HS, Labonte B, S AG, Dias C, et al. Fluoksetien verander epigeneties die CaMKIIalpha-promotor in Nucleus Accumbens om DeltaFosB-binding en antidepressante effekte te reguleer. Neuropsigofarmakologie. 2013. doi: 10.1038/npp.2013.319 pmid:24240473.
28. Eagle AL, Gajewski PA, Yang M, Kechner ME, Al Masraf BS, Kennedy PJ, et al. Ervaring-afhanklike induksie van Hippocampus DeltaFosB beheer leer. J Neurosci. 2015;35(40):13773–83. doi: 10.1523/JNEUROSCI.2083-15.2015 pmid:26446228.
29. Papakostas GI, Culpepper L. Begrip en bestuur van kognisie in die depressiewe pasiënt. J Clin Psigiatrie. 2015;76(4):418–25. doi: 10.4088/JCP.13086ah1c pmid:25919832.
30. Evans VC, Iverson GL, Yatham LN, Lam RW. Die verhouding tussen neurokognitiewe en psigososiale funksionering in ernstige depressiewe versteuring: 'n sistematiese oorsig. J Clin Psigiatrie. 2014;75(12):1359–70. doi: 10.4088/JCP.13r08939 pmid:25551235.
31. Wood S, Sage JR, Shuman T, Anagnostaras SG. Psigostimulante en kognisie: 'n kontinuum van gedrags- en kognitiewe aktivering. Pharmacol Rev 2014;66(1):193–221. doi: 10.1124/pr.112.007054 pmid:24344115; PubMed Central PMCID: PMC3880463.
32. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, et al. Noodsaaklike rol van die fosB-geen in molekulêre, sellulêre en gedragsaksies van chroniese elektrokonvulsiewe aanvalle. J Neurosci. 1998;18(17):6952–62. Epub 1998/08/26. pmid:9712664.
33. Pierce RC, Wolf ME. Psigostimulant-geïnduseerde neuro-aanpassings in nucleus accumbens AMPA-reseptoroordrag. Cold Spring Harbor perspektiewe in medisyne. 2013;3(2):a012021. doi: 10.1101/cshperspect.a012021 pmid:23232118; PubMed Central PMCID: PMC3552338.
34. Luscher C. Kokaïen-ontlokte sinaptiese plastisiteit van opwindende oordrag in die ventrale tegmentale area. Cold Spring Harbor perspektiewe in medisyne. 2013;3(5):a012013. doi: 10.1101/cshperspect.a012013 pmid:23637310; PubMed Central PMCID: PMC3633178.
35. Graybeal C, Kiselycznyk C, Holmes A. Stres-geïnduseerde tekorte in kognisie en emosionaliteit: 'n rol van glutamaat. Curr Top Behav Neurosci. 2012;12:189–207. doi: 10.1007/7854_2011_193 pmid:22261703; PubMed Central PMCID: PMC3877736.
36. Duman RS. Patofisiologie van depressie en innoverende behandelings: hermodellering van glutamatergiese sinaptiese verbindings. Dialoë Clin Neurosci. 2014;16(1):11–27. pmid:24733968; PubMed Central PMCID: PMC3984887.
37. Zarate C, Duman RS, Liu G, Sartori S, Quiroz J, Murck H. Nuwe paradigmas vir behandelingsweerstandige depressie. Ann NY Acad Sci. 2013;1292:21–31. doi: 10.1111/nyas.12223 pmid:23876043; PubMed Central PMCID: PMC3936783.
38. Robison AJ. Opkomende rol van CaMKII in neuropsigiatriese siekte. Tendense Neurosci. 2014;37(11):653–62. doi: 10.1016/j.tins.2014.07.001 pmid:25087161.
39. Chen J, Zhang Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, et al. Induksie van siklien-afhanklike kinase 5 in die hippokampus deur chroniese elektrokonvulsiewe aanvalle: rol van [Delta] FosB. J Neurosci. 2000;20(24):8965–71. Epub 2000/01/11. 20/24/8965 [pii]. pmid:11124971.
40. Mlewski EC, Krapacher FA, Ferreras S, Paglini G. Verbygaande verbeterde uitdrukking van Cdk5-aktiveerder p25 na akute en chroniese d-amfetamientoediening. Ann NY Acad Sci. 2008;1139:89–102. doi: 10.1196/annals.1432.039 pmid:18991853.
41. Bignante EA, Rodriguez Manzanares PA, Mlewski EC, Bertotto ME, Bussolino DF, Paglini G, et al. Betrokkenheid van septale Cdk5 in die opkoms van oormatige angs wat deur stres veroorsaak word. Europese neuropsigofarmakologie: die tydskrif van die Europese Kollege vir Neuropsigofarmakologie. 2008;18(8):578–88. doi: 10.1016/j.euroneuro.2008.02.007 pmid:18406108.
42. Seiwell AP, Reveron ME, Duvauchelle CL. Verhoogde accumbens Cdk5 uitdrukking in rotte na kort-toegang tot self-toegediende kokaïen, maar nie na lang-toegang sessies. Neurosci Lett. 2007;417(1):100–5. doi: 10.1016/j.neulet.2007.02.043 pmid:17339080; PubMed Central PMCID: PMC1876973.
43. Taylor JR, Lynch WJ, Sanchez H, Olausson P, Nestler EJ, Bibb JA. Inhibisie van Cdk5 in die nucleus accumbens verhoog die lokomotoriese aktivering en aansporing-motiverende effekte van kokaïen. Proc Natl Acad Sci US A. 2007;104(10):4147–52. Epub 2007/03/16. 0610288104 [pii] doi: 10.1073/pnas.0610288104 pmid:17360491; PubMed Central PMCID: PMC1820723.
44. Quirion R, Robitaille Y, Martial J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C, et al. Menslike breinreseptor-outoradiografie met behulp van hele hemisfeerafdelings: 'n algemene metode wat weefselartefakte minimaliseer. Sinaps. 1987;1(5):446–54. Epub 1987/01/01. doi: 10.1002/syn.890010508 pmid:2850625.
45. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, et al. Induksie van 'n langdurige AP-1-kompleks wat bestaan uit veranderde Fos-agtige proteïene in die brein deur chroniese kokaïen en ander chroniese behandelings. Neuron. 1994;13(5):1235–44. Epub 1994/11/01. 0896-6273(94)90061-2 [pii]. pmid:7946359. doi: 10.1016/0896-6273(94)90061-2
46. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiese studies van die regulering van chroniese FOS-verwante antigeen-induksie deur kokaïen in die striatum en nucleus accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995;275(3):1671–80. Epub 1995/12/01. pmid:8531143.
47. Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ. Chroniese Fos-verwante antigene: stabiele variante van deltaFosB wat in die brein geïnduseer word deur chroniese behandelings. J Neurosci. 1997;17(13):4933–41. Epub 1997/07/01. pmid:9185531.
48. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. Uitdrukking van die transkripsiefaktor [Delta]FosB in die brein beheer sensitiwiteit vir kokaïen. Aard. 1999;401(6750):272–6. http://www.nature.com/nature/journal/v401/n6750/suppinfo/401272a0_S1.html. pmid: 10499584
49. Buchta WC, Riegel AC. Chroniese kokaïen ontwrig mesokortikale leermeganismes. Brein Res. 2015;1628(Pt A):88–103. doi: 10.1016/j.brainres.2015.02.003 pmid:25704202; PubMed Central PMCID: PMC4739740.
50. Shonesy BC, Jalan-Sakrikar N, Cavener VS, Colbran RJ. CaMKII: 'n molekulêre substraat vir sinaptiese plastisiteit en geheue. Vordering in molekulêre biologie en translasiewetenskap. 2014;122:61–87. doi: 10.1016/B978-0-12-420170-5.00003–9 pmid:24484698.
51. Loweth JA, Tseng KY, Wolf ME. Aanpassings in AMPA-reseptoroordrag in die nucleus accumbens wat bydra tot inkubasie van kokaïen-drang. Neurofarmakologie. 2014;76 Pt B:287–300. doi: 10.1016/j.neuropharm.2013.04.061 pmid:23727437; PubMed Central PMCID: PMC3836860.
52. Culpepper L. Impak van onbehandelde ernstige depressiewe versteuring op kognisie en daaglikse funksie. J Clin Psigiatrie. 2015;76(7):e901. doi: 10.4088/JCP.13086tx4c pmid:26231021.