Effek van ΔFosB ooruitdrukking op opioïed- en cannabinoïed-reseptor-gemedieerde sein in die nucleus accumbens (2011)

Neuro Farmacologie. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

Bron

Departement Farmakologie en Toksikologie en Instituut vir Geneeskunde en Alkoholstudies, Virginia Gemenebes Universiteitskool van Geneeskunde, Richmond, VA 23298, VSA.

Abstract

Die stabiele transkripsiefaktor ΔFosB word geïnduceer in die nucleus accumbens (NAc) deur chroniese blootstelling aan verskeie dwelms van misbruik, en die transgeniese uitdrukking van ΔFosB in die striatum verhoog die lonende eienskappe van morfien en kokaine. Die meganistiese basis vir hierdie waarnemings word egter onvolledig verstaan. Ons gebruik 'n bitransgeen muis model met induceerbare uitdrukking van ΔFosB in dopamien D (1) reseptor / dynorfienbevattende streatale neurone om die effek van ΔFosB-uitdrukking op opioïed- en cannabinoïed-receptor sein in die NAc te bepaal. Resultate het getoon dat mu opioïed-gemedieerde G-proteïen aktiwiteit en inhibisie van adenylyl-siklas was versterk in die NAc van muise wat ΔFosB uitgedruk het. Net so is kappa-opioïed-inhibisie van adenylyl-siklas versterk in die ΔFosB-drukmuise. In teenstelling hiermee het cannabinoïed-reseptor-gemedieerde seinwysing nie verskil tussen muise wat ΔFosB en beheermuise ooruitdruk het nie. THierdie bevindinge dui daarop dat opioïde en cannabinoïed-receptor seinvorming differensiaal gemoduleer word deur die uitdrukking van ΔFosB, en dui aan dat ΔFosB-uitdrukking sommige van die effekte daarvan kan lewer via verhoogde mu- en kappa-opioïede-receptor sein in die NAc.

sleutelwoorde: G-proteïen, adenylyl-siklas, striatum

1. Inleiding

Opioïde reseptore en cannabinoïde CB1 reseptore (CB1R) is die neurobiologiese teikens vir twee wyd gebruikte medisyneklasse wat morfien-, heroïen- en voorskrifopioïede insluit, en marihuana (Δ9-Tetrahydrocannabinol (THC)), onderskeidelik. Die akute effekte van opioïede en cannabinoïede word bemiddel deur G-proteïengekoppelde reseptore wat hoofsaaklik G aktiveeri / o proteïene en produseer downstream effektor response soos inhibisie van adenylyl siklase (Childers, 1991, Childers, et al., 1992, Howlett, et al., 2002). Die motor, geheueverlies en psigoaktiewe effekte van Δ9-DK word deur die Sertifiseringsliggaam vervaardig1R (Huestis, et al., 2001, Zimmer, et al., 1999), wat wyd versprei word in die brein, met hoë vlakke in die basale ganglia, hippokampus en serebellum (Herkenham, et al., 1991). Die analgetiese en lonende effekte van die meeste klinies relevante en mishandelde opioïedmedisyne word hoofsaaklik deur mu opioïede reseptore (MOR) bemiddel (Matthes, et al., 1996), wat verryk word in die limbiese stelsel en breinstam (Mansour, et al., 1994). Die mesolimbiese stelsel, wat bestaan ​​uit dopaminerge projeksies vanaf die ventrale tegmentale area (VTA) tot nucleus accumbens (NAc), speel 'n belangrike rol in die belonende effekte van opioïede en cannabinoïede (Bozarth and Wise, 1984, Vaccarino, et al., 1985, Zangen, et al., 2006), sowel as ander dwelms van misbruik (Koob en Volkow, 2010). Daarbenewens is endogene opioïed- en cannabinoïdestelsels betrokke by die belonende effekte van verskeie klasse van psigoaktiewe middels (Maldonado, et al., 2006, Trigo, et al., 2010). Dit is dus belangrik om meganismes te verduidelik deur watter opioïed en CB1R sein word in die NAc gereguleer.

'N Sentrale vraag op die gebied van dwelmmisbruik is om proteïene te identifiseer wat die oorgang bemiddel van akute na langtermyn-effekte van psigo-middels. Die AP-1 transkripsiefaktor ΔFosB is besonder interessant omdat dit 'n stabiele afgeknotte splytingsvariantproduk van die fosb geen wat op herhaalde blootstelling aan dwelms van mishandeling of natuurlike belonings ophoop (McClung, et al., 2004, Nestler, 2008, Nestler, et al., 1999). Ons het gevind dat ΔFosB in die brein geïnduceer word na herhaalde blootstelling aan morfien, Δ9-KV, kokaïen of etanol, met elke middel wat 'n unieke streekspatroon van ΔFosB-uitdrukking produseer (Perrotti, et al., 2008). 'N Konsekwente bevinding oor dwelms was dat ΔFosB hoogs geïnduceer is in die striatum, waar al vier dwelms ΔFosB in die NAc-kern geïnduceer het en almal behalwe Δ9-DK beduidend geïnduceerde uitdrukking in die NAc dop en caudate-putamen.

Farmakologiese studies het getoon dat mede-toediening van die dopamien D1 reseptor (D1R) antagonis SCH 23390 geblokkeer ΔFosB induksie in die NAc en caudate-putamen volgende intermitterende kokaïen of morfien toediening, wat die potensiële belang van D voorstel1R-uitdrukkende neurone (Muller en Unterwald, 2005, Nye, et al., 1995). Die effek van ΔFosB induksie op dwelm-gemedieerde gedrag is ondersoek met behulp van bittertransge muise wat ΔFosB uitdruk in spesifieke neuronale bevolkings van die NAc en dorsale striatum (Chen, et al., 1998). Muise wat ΔFosB in dynorfine / D uitdruk1R positiewe neurone in die NAc en dorsale striatum (lyn 11A) toon veranderde reaksies op misbruikmiddels, veral verbeterde sensitiwiteit vir die lonende effekte van kokaïen of morfien (Colby, et al., 2003, Kelz, et al., 1999, Zachariou, et al., 2006). Hierdie veranderinge het plaasgevind in die afwesigheid van veranderinge in die vlakke van MOR of verskeie G-proteïen subeenhede. Die dermorfiene mRNA-vlakke is egter verminder in die NAc van ΔFosB wat muise uitdruk (Zachariou, et al., 2006), wat daarop dui dat een teiken van ΔFosB 'n geen is wat 'n endogene opioïede peptied koder. ΔFosB induksie kan ook gedragsveranderings veroorsaak deur reseptor sein in die NAc te reguleer, maar hierdie moontlikheid is nie ondersoek nie. Daarom het die huidige studies die bitransgeniese muismodel gebruik om te bepaal of ooruitdrukking van ΔFosB in dynorfine / D1R wat striatale neurone bevat, verander MOR-gemedieerde G-proteïen aktiwiteit en MOR- en KOR-gemedieerde adenylyl-siklasase-inhibisie in die NAc. Die effek van ΔFosB op CB1R-gemedieerde G-proteïen aktiwiteit is ook geassesseer omdat Δ9-HG-administrasie veroorsaak ΔFosB in die NAc (Perrotti, et al., 2008) en die endokannabinoïde stelsel is bekend om breinbeloningskringe te reguleer (Gardner, 2005, Maldonado, et al., 2006), maar die effek van ΔFosB op die endokannabinoïdesisteem is nie ondersoek nie.

2. Materiaal en metodes

2.1. reagense

[35S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-32P] ATP (800 Ci / mmol) en [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) is van PerkinElmer (Shelton, CT) gekoop. ATP, GTP, BBP, cAMP, bees serum albumien, kreatien fosokinase, papaverine, imidasool en WIN-55212-2, is gekoop van Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS is gekoop van Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO is verskaf deur die Drug Supply Programme van die Nasionale Instituut vir Dwelmmisbruik (Rockville, MD). Econo-1 scintillation vloeistof is verkry van Fisher Scientific (Norcross, GA). Ekoliet scintillatie vloeistof is verkry uit ICN (Costa Mesa, CA). Alle ander chemikalieë is verkry uit Sigma Aldrich of Fisher Scientific.

2.2. muise

Manlike bittertransgeniese muise afgelei van NSE-tTA (lyn A) × TetOp-FosB (lyn 11) is gegenereer soos beskryf in Kelz et al. (Kelz, et al., 1999). Bitransgene muise is ontwikkel en opgewek op doxycycline (100 μg in drinkwater) om transgene uitdrukking te onderdruk. By 8 weke oud is doxycycline weggelaat van die water vir die helfte van die muise om transgenuitdrukking toe te laat, terwyl die oorblywende muise op doksisiklien onderhou word om die transgen te onderdruk. Breine is weke later 8 versamel, die tyd waarteen transkripsie-effekte van ΔFosB die maksimum is (McClung en Nestler, 2003). 'N Tweede transgeniese muislyn is gebruik waarin Δc-Jun, 'n dominante negatiewe antagonis van c-Jun, uitgedruk word in D1R / dynorfien en D2R / enkefalien selle van die striatum, hippocampus en parietale korteks (Peakman, et al., 2003). C-Jun en verwante Jun-familie-proteïene dimeriseer met Fos-familie-proteïene en bind aan die AP-1-terrein van teikengene om transkripsie te reguleer. Truncatie van die N-terminus van c-Jun (Δc-Jun) maak die kompleks transkriptioneel onaktief en kan die DNA binding van aktiewe AP-1 komplekse belemmer. Manlike bittertransgeniese muise afgelei van NSE-tTA (lyn A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (lyn E) is gegenereer soos beskryf in Peakman et al. (Peakman, et al., 2003). Bitransgene muise is ontwikkel en opgewek op doxycycline (100 μg in drinkwater) om transgene uitdrukking te onderdruk. Pups is gespeen op 3 weke, genotipeer, en geskei in groepe, met half gehandhaaf op doxycycline-bevattende water en half op gereelde drinkwater om FLAG-Δc-Jun uitdrukking te veroorsaak. Brein is weke later 6 versamel, die tyd waarop maksimum vlakke van FLAG-Δc-Jun gemeet is (Peakman, et al., 2003). Alle dierprosedures is in ooreenstemming met die Nasionale Institusie van Gesondheidsgids vir die Sorg en Gebruik van Laboratoriumdiere uitgevoer.

2.3. Membraan Voorbereiding

Brein is gestoor by -80 ° C tot die dag van die toets. Voor die toets is elke brein ontdooi, en die NAc is op ys gedissekteer. Elke monster is gehomogeniseer in 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membraan buffer) met 20 beroertes van 'n glas homogenisator by 4 ° C. Die homogenaat is gesentifugeer by 48,000 × g by 4 ° C vir 10 min, gesuspendeer in membraanbuffer, sentrifugeer weer by 48,000 × g by 4 ° C vir 10 min en gesuspendeer in 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (assaybuffer). Proteïenvlakke is bepaal deur die metode van Bradford (Bradford, 1976) met behulp van bees serum albumien (BSA) as die standaard.

2.4. Agonist-gestimuleerde [35S] GTPγS Binding

Membrane is vooraf geïncubeer vir 10 minute by 30 ° C met adenosien deaminase (3 mU / ml) in assay buffer. Membraan (5-10 μg proteïen) word dan vir 2 uur by 30 ° C geïncubeer in assaybuffer wat 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPγS, 30 μM BBP en adenosiendeaminase (3 mU / ml) met en sonder toepaslike konsentrasies van DAMGO of WIN55,212-2. Nie-spesifieke binding is gemeet met 20 μM GTPγS. Die inkubasie is beëindig deur filtrasie deur GF / B glasvezel filters, gevolg deur 3 was met 3 ml yskoue 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Bound radioaktiwiteit is bepaal deur vloeibare scintillation spectrofotometry na oornag ekstraksie van die filters in Econo-1 scintillation vloeistof.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membraan (5-25 μg proteïen) is voorafgekinbeer met adenosien deaminase soos hierbo beskryf, dan vir 15 min by 30 ° C geïnkubbeer in die teenwoordigheid of afwesigheid van 1μM forskolin, met of sonder DAMGO, U50,488H of WIN55,212-2, in assaybuffer wat 50 μM ATP, [α-321.5 μM GTP, 0.2 mM papaverine, 0.1 mM fosfokreatien, 50-eenhede / ml kreatienfosfokinase en adenosiendeaminase (50 mUe), 0.2 mM DTT, 5 μM-siklus AMP, 20 μM GTP / ml) in 'n finale volume 3 μl. Onder hierdie toestande is die totale [α-32P] cAMP herstel, was gewoonlik minder as 1% van die totale hoeveelheid bygevoeg [α-32P] ATP in elke monster. Die reaksie is beëindig deur kook vir 3 min en [32P] Sikliese AMP is geïsoleer deur die twee-kolom (Dowex en alumina) metode van Salomon (Salomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) is by elke buis gevoeg voor kolomchromatografie as interne standaard. Radioaktiwiteit is bepaal deur vloeibare scintillasie spektrofotometrie (45% doeltreffendheid vir 3H) nadat 4.5 ml van die eluaat in 14.5 ml Ecolite-scintillasievloeistof opgelos is.

2.6. Data-analise

Tensy anders aangedui, word data aangegee as gemiddelde waardes ± SE van 4-8 afsonderlike eksperimente, wat elk in triplikaat uitgevoer is. Net gestimuleer [35S] GTPγS binding word bereken as agonist gestimuleerde binding minus basale binding. Netto forskolin gestimuleerde adenylyl siklase aktiwiteit word gedefinieer as forskolin gestimuleerde aktiwiteit - basale aktiwiteit (pmol / mg / min). Persent remming van forskolin gestimuleerde adenylyl cyclase aktiwiteit word gedefinieer as (netto forskolin gestimuleerde aktiwiteit in die afwesigheid van agonist - netto forskolin gestimuleerde aktiwiteit in die teenwoordigheid van agonist / netto forskolin gestimuleerde aktiwiteit in die afwesigheid van agonist) × 100. Alle kromme pas en statistiese ontledings is uitgevoer met Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Konsentrasie-effekkrommes is geanaliseer deur herhaalde nie-lineêre regressie om EC te verkry50 en EMax waardes. Statistiese betekenisvolheid van die konsentrasie-effek data is bepaal deur tweerigtinganalise van variansie (ANOVA), met behulp van agonistiese dosis en geen-induksie (aan of af) as die hooffaktore. Statistiese betekenisvolheid van krommepaswaardes (EMax of EG50) is bepaal deur die nie-gepaarde tweestaart-student se t-toets, met behulp van Welch se regstelling of vierkantsworteltransformasie van die data waar nodig om te korrigeer vir ongelyke afwykings (opgespoor deur F-toets) in EC50 waardes.

3. Resultate

3.1. Effek van ΔFosB-uitdrukking op opioïed- en cannabinoïed-reseptor-gemedieerde G-proteïenaktivering

Om te bepaal of MOR- of CB1R-gemedieerde G-proteïenaktivering is verander deur induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB in die NAc, agonist gestimuleerde [35S] GTPγS binding is ondersoek in geïsoleerde membrane wat uit hierdie streek van bitransgene muise voorgestel is wat voorwaardelik uitdruk (ΔFosB on) of nie die ΔFosB transgen uitdruk nie. Die MOR-selektiewe enkefalien-analoog DAMGO is gebruik om MOR te aktiveer en die cannabinoïde aminoalkylindool WIN55,212-2 is gebruik om CB te aktiveer1R. Hierdie ligande is voorheen getoon om volle agoniste by MOR en CB te wees1R, onderskeidelik (Breivogel, et al., 1998, Selley, et al., 1997). Dit was nie haalbaar om KOR-gemedieerde G-proteïen aktiwiteit te ondersoek nie omdat die sein te laag is in knaagdierbrein (Childers, et al., 1998). Resultate toon konsentrasie afhanklike stimulasie van G-proteïen aktiwiteit deur beide DAMGO en WIN55,122-2 in NAc van ΔFosB af en ΔFosB op muise (Figuur 1). Vir DAMGO-gestimuleerde aktiwiteit (Figuur 1A), het tweerigting-ANOVA van die konsentrasie-effekdata beduidende hoofeffekte van ΔFosB-status (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) en DAMGO-konsentrasie (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) met geen beduidende interaksie (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Nie-lineêre regressie-analise van die konsentrasie-effek kurwes het 'n beduidend groter DAMGO E getoonMax waarde in ΔFosB op muise (EMax = 73 ± 5.2% stimulasie) relatief tot ΔFosB off muise (EMax = 56 ± 4.1% stimulasie; p <0.05 verskil van ΔFosB op muise volgens die student se t-toets). DAMGO EC50 waardes was nie verskillend tussen ΔFosB op en ΔFosB van muise (302 ± 72 nM teenoor 212 ± 56 nM, onderskeidelik, p = 0.346).

Figuur 1 

Effek van ΔFosB uitdrukking op agonist gestimuleerde [35S] GTPγS binding in die NAc. Membrane van ΔFosB-druk (ΔFosB on) of beheer (ΔFosB off) -muise is geassesseer soos beskryf in Metodes deur verskillende konsentrasies te gebruik. ...

In teenstelling met die resultate wat met die MOR agonist DAMGO verkry is, is geen ΔFosB statusafhanklike verskille in G-proteïenaktivering waargeneem met die kannabinoïed-agonis WIN55,212-2 (Figuur 1B). Tweerigting-ANOVA van die WIN55,212-2 konsentrasie-effekdata het 'n beduidende hoofeffek van WIN55,212-2-konsentrasie getoon (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), maar nie van ΔFosB-status nie (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) en daar was geen interaksie nie (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Net so was daar geen effek van ΔFosB-status op WIN55,212-2 E nieMax waardes (103 ± 6% teenoor 108 ± 8% stimulasie in ΔFosB aan en af ​​muise onderskeidelik, p = 0.813 deur Student se t-toets) of EC50 waardes (103 ± 20 nM teenoor 170 ± 23 nM in ΔFosB aan en af ​​muise onderskeidelik, p = 0.123).

Gebaseer op die vorm van die krommes en die feit dat ons vorige studies bifasiese WIN55,212-2 konsentrasie-effekkurwes in die brein (Breivogel, et al., 1999, Breivogel, et al., 1998), is die WIN55,212-2-krommes ook geanaliseer met behulp van 'n twee-plek model. Ontleding van die gemiddelde data het 'n geringe verbetering in die goedheid van fiksheid getoon deur die twee-plek model (R2 = 0.933 en 0.914, som van vierkante = 3644 en 5463 in ΔFosB aan en af ​​van muise onderskeidelik) in vergelyking met die enkel-terrein model (R2 = 0.891 en 0.879, som van vierkante = 6561 en 6628 in ΔFosB aan en af ​​van muise, onderskeidelik). Daar is egter geen beduidende verskille tussen ΔFosB op en af ​​van muise in óf die E nieMax of EG50 waardes van die hoë of lae potensiaal terreine (Aanvullende Tabel 1), hoewel daar 'n neiging was tot 'n laer ek50 waarde op die hoë potensiaal terrein in muise met ΔFosB op (EC50hoë = 28.0 ± 10.6 nM) in vergelyking met dié met ΔFosB af (EC50hoë = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Daarbenewens was daar geen effek van ΔFosB status op basale [35S] GTPγS binding in NAc membrane (253 ± 14 versus 226 ± 14 fmol / mg in respektiewelik ΔFosB aan en af ​​muise, p = 0.188). Hierdie data dui aan dat induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB in die NAc van muise MOR-gemedieerde G-proteïenaktivering verhoog het sonder om CB1R-gemedieerde of basale G-proteïen aktiwiteit.

3.2. Effek van ΔFosB op opioïde- en cannabinoïed-reseptor-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklas

Om die effek van induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB op modulasie van stroomaf-effekaktiwiteit deur MOR en CB te evalueer.1R, inhibisie van 1 μM forskolin gestimuleerde adenylyl siklase aktiwiteit is ondersoek in NAc membrane. Benewens MOR en CB1R-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklasase-aktiwiteit, effekte van KOR-aktiwiteit is ook ondersoek met behulp van die KOR-selektiewe volle agonis U50,488 (Zhu, et al., 1997), omdat vorige resultate het getoon dat dynorphin mRNA 'n teiken van ΔFosB in die bitransgeniese model was (Zachariou, et al., 2006). Resultate het getoon dat DAMGO, U50,488 en WIN55,212-2 elk konsentrasie afhanklike inhibisie van adenylyl siklase aktiwiteit in beide ΔFosB af en ΔFosB op muise geproduseer het (Figuur 2). Tweerigting-ANOVA van DAMGO konsentrasie-effek data (Figuur 2A) beduidende hoofeffekte van ΔFosB-status (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) en DAMGO-konsentrasie (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), maar geen beduidende interaksie (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6). Nie-lineêre regressie-analise van DAMGO konsentrasie-effek kurwes het 'n aansienlik laer DAMGO EC getoon50 waarde in ΔFosB op muise (101 ± 11 nM) in vergelyking met ΔFosB van muise (510 ± 182 nM, p <0.05 deur student se t-toets). Daar was egter geen noemenswaardige verskil in DAMGO E nieMax waardes (20.9 ± 1.26% teenoor 19.8 ± 1.27% inhibisie in ΔFosB aan en af ​​muise onderskeidelik, p = 0.534).

Figuur 2 

Effek van ΔFosB uitdrukking op inhibisie van adenylyl siklase aktiwiteit in die NAc. Membrane van ΔFosB-druk (ΔFosB on) of beheer (ΔFosB off) -muise is geassesseer soos beskryf in Metodes in die teenwoordigheid van 1 μM ...

KOR-gemedieerde adenylyl-siklasase inhibisie het ook verskil as 'n funksie van induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB (Figuur 2B). Tweerigting-ANOVA van U50,488 konsentrasie-effekdata het beduidende hoofeffekte van ΔFosB-status getoon (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) en U50,488 konsentrasie (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , sonder beduidende interaksie (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Nie-lineêre regressie-analise van kurwes met konsentrasie-effekte het 'n groter U50,488 E getoonMax waarde in ΔFosB op muise (18.3 ± 1.14% inhibisie) in vergelyking met ΔFosB af by muise (12.5 ± 2.03% inhibisie; p <0.05 verskil van ΔFosB aan deur Student se t-toets), sonder enige beduidende verskil in U50,488 EC50 waardes (310 ± 172 nM teenoor 225 ± 48 nM in ΔFosB aan en af ​​muise onderskeidelik, p = 0.324).

In teenstelling met effekte waargeneem met MOR en KOR, was daar geen beduidende effek van induceerbare transgeniese ΔFosB-uitdrukking op inhibisie van adenylyl-siklas deur die kannabinoïede agonis WIN55212-2 (Figuur 2C). Tweerigting-ANOVA van WIN55,212-2 konsentrasie-effekdata het 'n beduidende effek van geneesmiddelkonsentrasie getoon (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), maar nie van ΔFosB-status nie (p = 0.735, F = 0.118, df Daar was ook geen beduidende interaksie nie (p = 1, F = 0.714, df = 0.343). Verder was daar geen effek van ΔFosB-status op basale of forskolin-gestimuleerde adenylsiklase-aktiwiteit in die afwesigheid van enige agonis nie. Basale adenylylsiklase-aktiwiteit was 2 ± 491 pmol / mg / min in ΔFosB op muise vergeleke met 35 ± 546 in ΔFosB buite muise (p = 44 volgens Student se t-toets). Net so was adenylylsiklase-aktiwiteit in die teenwoordigheid van 0.346 µM forskolin 1 ± 2244 pmol / mg / min in ΔFosB op muise teenoor 163 ± 2372 pmol / mg / min in ΔFosB buite muise (p = 138).

3.3. Effek van ΔcJun op opioïed- en cannabinoïed-reseptor-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklas

Omdat induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB verbeterde inhibitiewe seintransduksie van MOR en KOR na adenylyl-siklas in die NAc was, was dit van belang om vas te stel of 'n dominante negatiewe inhibitor van ΔFosB-gemedieerde transkripsie opioïede reseptorsignaal op 'n teenoorgestelde manier sou moduleer. Om hierdie vraag aan te spreek, is inhibisie van forskolin-gestimuleerde adenylyl-siklase-aktiwiteit deur DAMGO en U50,488 ondersoek in membrane vervaardig uit die NAc van bittertransgeniese muise wat voorwaardelik ΔcJun uitdruk. Die resultate het geen betekenisvolle effek van ΔcJun uitdrukking op inhibisie van adenylyl siklase aktiwiteit by MOR of KOR (Figuur 3). Tweerigting-ANOVA van DAMGO-konsentrasie-effekkurwes het 'n beduidende hoofeffek van DAMGO-konsentrasie getoon (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), maar nie van ΔcJun-status nie (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) en daar was geen beduidende interaksie nie (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Net so was daar geen noemenswaardige verskil in E nieMax of EG50 waardes tussen muise met ΔcJun op (EMax = 23.6 ± 2.6%; EG50 = 304 ± 43 nM) of ΔcJun af (EMax = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EG50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Soortgelyke resultate is gesien met U50,488, sodat tweerigting-ANOVA van die konsentrasie-effekkurwes 'n beduidende effek van konsentrasie getoon het (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), maar nie van ΔcJun-status nie (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) en daar was geen beduidende interaksie nie (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Net so was daar geen beduidende verskille in E.Max of EG50 waardes tussen muise met ΔcJun op (EMax = 14.8 ± 2.9%; EG50 = 211 ± 81 nM) of af (EMax = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EG50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Figuur 3 

Effek van ΔcJun uitdrukking op inhibisie van adenylyl siklase aktiwiteit in die NAc. Membrane van ΔcJun-uitdrukkende (ΔcJun on) of beheer (ΔcJun off) -muise is geïnkubeer in die teenwoordigheid van DAMGO (A), U50,488H (B) of WIN55,212-2 ...

ΔcJun-uitdrukking het ook nie die inhibisie van adenylylsiklase in die NAc deur die cannabinoïde agonis beduidend beïnvloed nie. Tweerigting-ANOVA van die WIN55,212-2 konsentrasie-effek kurwes het 'n beduidende hoofeffek van WIN55,212-2 konsentrasie getoon (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), maar nie van genotipe nie (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) en daar was geen beduidende interaksie nie (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Net so was daar geen beduidende verskille in WIN55,212-2 E nieMax waardes (13.0 ± 2.3% en 13.6 ± 0.9% inhibisie in ΔcJun onderskeidelik teenoor muise, p = 0.821) en of EC50 waardes (208 ± 120 nM en 417 ± 130 nM in ΔcJun onderskeidelik teenoor muise, p = 0.270). Alhoewel daar 'n geringe neiging was tot verminderde sterkte van WIN55,212-2 by muise wat ΔcJun uitgedruk het, het die transgeen nie die kannabinoïed-inhibisie van adenylyl-siklas beïnvloed nie. Verder was daar geen effek van ΔcJun status op basale of forskolin gestimuleerde adenylyl siklase aktiwiteit. Basale adenylyl siklase aktiwiteit was 1095 ± 71 pmol / mg / min en 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) in muise met ΔcJun aan of af onderskeidelik. Adenylyl-siklase-aktiwiteit gestimuleer deur 1 μM forskolin was 4185 ± 293 pmol / mg / min teenoor 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) in muise met ΔcJun aan of af onderskeidelik.

3.4. bespreking

Die resultate van hierdie studie het verbeterde MOR-gemedieerde G-proteïenaktivering en inhibisie van adenylyl-siklas in die NAc van muise geopenbaar met induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔFosB in dynorfine / D1R bevat neurone. KOR-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklase-aktiwiteit is ook verbeter in die NAc van ΔFosB wat muise uitdruk, wat daarop dui dat ΔFosB die endogene opioïdesisteem in die NAc reguleer. Die DAMGO EMax waarde was groter vir MOR-gestimuleerde [35S] GTPγS binding, en sy EC50 waarde was laer vir adenylyl siklase inhibisie, in ΔFosB oor-ekspressie muise in vergelyking met beheer muise. Hierdie bevindinge dui op die moontlikheid van reseptorreserwe vir effektor modulasie, maar nie G-proteïenaktivering onder die ondersoektoestande wat ondersoek word nie. Die bevinding dat die maksimale inhibisie van adenylyl-siklas deur die KOR-agonis geaffekteer is deur ΔFosB-uitdrukking dui op lae reseptorreserwe vir die KOR-gemedieerde respons, in ooreenstemming met die lae vlakke van KOR-bindingsplekke in die muisbrein (Unterwald, et al., 1991). In teenstelling hiermee, CB1R-gemedieerde G-proteïen aktiwiteit en inhibisie van adenylyl siklase was nie beïnvloed deur ΔFosB uitdrukking, wat daarop dui dat die opioïede en cannabinoïde stelsels verskil in hul respons op ΔFosB in hierdie NAc neurone.

Die effek van ΔFosB op opioïed-reseptor-gemedieerde sein is in ooreenstemming met ons vorige verslag dat ΔFosB-uitdrukking in die striatum die akute en chroniese effekte van morfien verander (Zachariou, et al., 2006). Een bevinding van daardie studie was dat muise met transgeniese uitdrukking van ΔFosB in dynorphine / D1R striatale neurone was meer sensitief vir morfien in plek kondisionering as kontroles. Verder is hierdie effek naboots deur die virale gemedieerde uitdrukking van ΔFosB deur plekspesifieke inspuiting in die NAc. Hierdie waarnemings stem ooreen met die huidige resultate wat verbeterde MOR-sein in die NAc toon.

Ons het voorheen die gene-kodering geïdentifiseer dynorfine as 'n teiken van ΔFosB, en stel voor dat verminderde dynorfine in ooreenstemming sal wees met verbeterde belonende eienskappe van morfien in ΔFosB bittertransgeniese muise (Zachariou, et al., 2006). Die huidige resultate toon dat KOR-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklas in die NAc verbeter word in ΔFosB wat muise uitdruk, wat moontlik 'n kompenserende toename in KOR-sensitiwiteit weerspieël as gevolg van verminderde dynorfine. Vorige studies het getoon dat KOR opgerig is in sekere breinstreke van prodynorfien-knockout-muise, insluitend NAc (Clarke, et al., 2003).

In teenstelling met ΔFosB, induceerbare transgeniese uitdrukking van ΔcJun, het die dominante negatiewe afgeknotte mutant van die ΔFosB bindingsvennoot cJun nie adenylyl-siklasase-inhibisie deur MOR- of KOR-agoniste verander nie. Hierdie resultate dui daarop dat basale vlakke van ΔFosB-uitdrukking, wat relatief laag is, nie 'n belangrike rol speel in die handhawing van opioïede-receptor sein op hierdie vlak van seintransduksie in die NAc nie. Die feit dat die gekondisioneerde lonende effek van morfien afgeneem is deur ΔcJun uitdrukking in ons vorige studie (Zachariou, et al., 2006) stel voor dat die morfien-induksie van ΔFosB tydens die kondisioneringsprosedure belangrik is in die regulering van gedragsreaksies op die geneesmiddel of dat transkripsie-effekte van ΔFosB anders as dié wat proximale seinwerking deur opioïed-reseptore beïnvloed, opioïde-beloning kan beïnvloed. In elk geval toon die resultate van die huidige studie duidelik dat, wanneer ΔFosB uitdrukking hoër is as basale vlakke in striatale dynorfine / D1R-uitdrukkende neurone, is daar 'n sterk toename in die koppeling van MOR en KOR tot inhibisie van adenylyl-siklas in die NAc.

Die meganismes waardeur MOR- en KOR-gemedieerde seinverligting versterk word deur ΔFosB ooruitdrukking, is onduidelik, maar ons het voorheen getoon dat MOR vlakke, beoordeel deur [3H] naloksoonbinding, verskil nie in die NAc van ΔFosB op teenoor van muise nie (Zachariou, et al., 2006). Dieselfde studie het bevind dat Gαi1- en 2-proteïenvlakke is nie in hierdie streek beïnvloed deur ΔFosB-uitdrukking nie. Egter, vorige genuitdrukkings-analises het getoon dat Gαo mRNA is opgemerk in NAc van ΔFosB op muise (McClung en Nestler, 2003). Dit sal in toekomstige studies van belang wees om die effek van transgeniese ΔFosB uitdrukking op G-proteïen subeenheid uitdrukking op proteïenvlak sowel as op die uitdrukking van baie G-proteïen modulerende proteïene omvattend te ondersoek.

Dit is interessant dat ΔFosB uitdrukking nie CB verbeter het nie1R-gemedieerde sein in die NAc. Dit is moontlik dat veranderinge in die Sertifiseringsliggaam1R sein voorkom in 'n diskrete bevolking van neurone wat in die hele NAc-voorbereiding verduister word. Byvoorbeeld, administrasie van Δ9- THC het ΔFosB aansienlik geïnduseer in die kern, maar nie die dop nie, van die NAc (Perrotti, et al., 2008). Ekndeed, dit is getoon dat die uitdaging met Δ9-THC volg herhaalde toediening van Δ9-DK het dopamien vrystelling in die NAc-kern verhoog, maar verminderde vrystelling in die dop (Cadoni, et al., 2008). Dit is ook belangrik om daarop te let dat die 11A-lyn van bittertransgeniese muise ΔFosB slegs in dynorfine / D uitdruk.1R positiewe medium stekel neurone van die striatum, maar CB1R word in beide dynorfine / D uitgedruk1R en enkefalien / D2R positiewe striatale neurone (Hohmann en Herkenham, 2000), sowel as op terminale van kortikale afferente (Robbe, et al., 2001). Uitdrukking van die dominante negatiewe reguleerder van ΔFosB-gemedieerde transkripsie, ΔcJun, het ook geen beduidende effek op cannabinoïed-receptor seinering gehad nie, hoewel ΔcJun induceerd uitgedruk word in beide D1 en D2bevattende bevolkings van medium stekel neurone in hierdie muise (Peakman, et al., 2003). Dit is egter moontlik dat die basale ΔFosB-uitdrukking voldoende laag is dat ΔcJun die reseptor seinering nie beïnvloed nie, soos voorgestel deur resultate met MOR en KOR. Dit is ook moontlik dat die CB1R seinering word beskeie versterk deur basiese ΔFosB uitdrukking, sodanig dat die toename van ΔFosB uitdrukking of blokkering van sy aksies met ΔcJun slegs effense effekte gehad het wat nie die vlak van statistiese betekenisvolheid bereik het nie. Indirekte ondersteuning vir hierdie interpretasie kan gesien word deur WIN55,212-2 EC te vergelyk50 waardes tussen muise wat ΔcJun versus ΔFosB uitdruk. Die verhouding van die WIN55,212-2 EC50 waarde vir adenylyl siklase inhibisie in muise met geïnduseerde uitdrukking van ΔcJun na sy EC50 waarde vir G-proteïenaktivering in muise met geïnduseerde uitdrukking van ΔFosB was 4.0, terwyl dieselfde verhouding in muise sonder induksie van enige transgeen 1.2 was.

Alternatiewelik kan kannabinoïede ΔFosB-uitdrukking veroorsaak sonder enige direkte effek op CB1R sein. In hierdie scenario kan cannabinoïdes die responsiwiteit van die psigo-effekte van ander middels moduleer via ΔFosB-gemedieerde transkripsionele regulering. Ekn feit, administrasie van Δ9-DK produseer kruisgevoeligheid vir opioïede en amfetamien (Cadoni, et al., 2001, Lamarque, et al., 2001), in ooreenstemming met hierdie hipotese. Daarbenewens is herhaalde toediening van die kannabinoïed-agonis CP55,940 aangemoedig om MOR-gemedieerde G-proteïenaktivering in die NAc te verhoog, soortgelyk aan muise wat ΔFosB in die huidige studie uitdruklik tot uitdrukking bring (Vigano, et al., 2005). Die effek van ΔFosB uitdrukking op Δ9-HG-gemedieerde gedrag is nie geëvalueer nie, maar die huidige resultate verhoed nie 'n interaksie nie. Die resultate van hierdie en ons vorige studie (Zachariou, et al., 2006) toon ΔFosB-geïnduceerde veranderinge in MOR en KOR / dynorfine in die striatum. Die lonende effekte van Δ9-THC, soos gemeet deur plekvoorkeur, word afgeskaf in MOR null-muise, terwyl skrapping van KOR gedemp Δ9-Die plek van afkeer en onthul Δ9-Die plek voorkeur (Ghozland, et al., 2002). Net so, gekondisioneerde afkeer van Δ9-DK is afwesig in pro-dynorfine knockout in vergelyking met wilde-tipe muise (Zimmer, et al., 2001). Hierdie data dui daarop dat Δ9-DKK kan meer beloon word na ΔFosB induksie en gevolglike induksie van MOR sein met reduksies in die dynorfine uitdrukking.

In opsommingy, die resultate van hierdie studie het getoon dat die uitdrukking van ΔFosB in D1R / dynorfine positiewe striatale neurone verhoogde MOR- en KOR-gemedieerde sein op die vlak van G-proteïen-gemedieerde inhibisie van adenylyl-siklasase-aktiwiteit in die NAc. Hierdie bevinding is in ooreenstemming met studies wat 'n rol vir die endogene opioïdestelsel in beloning getoon het (Trigo, et al., 2010), en bied 'n potensiële meganisme vir ΔFosB-gemedieerde effekte op beloning. In teenstelling hiermee, CB1R-gemedieerde sein in die NAc is nie beduidend beïnvloed deur striatale ΔFosB-uitdrukking onder die omstandighede wat ondersoek is nie, hoewel verdere studies geregverdig is om die effek van ΔFosB-induksie op die endokannabinoïdesisteem te bepaal.

Navorsingshoogtepunte

  • MOR-seinverandering word versterk in die kernmoment van muise wat ΔFosB uitdruk
  • KOR remming van adenylyl siklase word ook verbeter in muise wat ΔFosB uitdruk
  • Uitdrukking van ΔFosB verander nie CB nie1R sein in die kern accumbens

Aanvullende materiaal

Bedankings

Die skrywers bedank Hengjun He, Jordan Cox en Aaron Tomarchio vir tegniese hulp met die [35S] GTPγS binding assays. Hierdie studie is ondersteun deur USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) en P01 DA08227 (EJN).

voetnote

Disclaimer van die uitgewer: Hierdie is 'n PDF-lêer van 'n ongeredigeerde manuskrip wat aanvaar is vir publikasie. As 'n diens aan ons kliënte voorsien ons hierdie vroeë weergawe van die manuskrip. Die manuskrip sal kopieëring, tikwerk en hersiening van die gevolglike bewys ondergaan voordat dit in sy finale citable vorm gepubliseer word. Let asseblief daarop dat tydens die produksieproses foute ontdek kan word wat die inhoud kan beïnvloed, en alle wettige disklaimers wat van toepassing is op die tydskrif betrekking het.

Verwysings

  • Bozarth MA, Wise RA. Anatomies duidelike opiaat-reseptor velde bemiddel beloning en fisiese afhanklikheid. Wetenskap. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. 'N Vinnige en sensitiewe metode vir die kwantifisering van mikrogram hoeveelhede proteïen wat die beginsel van proteïen-kleurstof bindend gebruik. Anal. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Chroniese delta9-tetrahydrocannabinol behandeling lewer 'n tydsafhanklike verlies van kannabinoïed-reseptor-geaktiveerde G-proteïene in die brein. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Kannabinoïede reseptor agonis effektiwiteit vir stimulering [35S] GTPγS binding aan rot serebellêre membrane korreleer met agonist-geïnduseerde afname in BBP-affiniteit. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Gedrags sensitiwiteit na herhaalde blootstelling aan Delta 9-tetrahydrocannabinol en kruis sensibilisering met morfien. Psigofarmakologie (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Gedrags sensitiwiteit vir delta 9-tetrahydrocannabinol en kruis sensibilisering met morfien: differensiële veranderinge in akkumulale dop en kerndopamien oordrag. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeniese diere met induceerbare, geteikende genexpressie in die brein. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Childers SR. Opioïede reseptor-gekoppelde tweede boodskappers. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioïde en cannabinoïed receptor inhibisie van adenylyl siklase in die brein. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioïede reseptor stimulasie van [35S] GTPγS binding in cavia brein: Gebrek aan bewyse vir kappa2-selektiewe aktivering van G-proteïene. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kombuis I. Streek selektiewe opregulering van mikro-, delta- en kappa-opioïede reseptore, maar nie opioïede reseptor-agtige 1-reseptore in die brein van enkefalien- en dynorfine-knockout-muise nie. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatale seltipe-spesifieke ooruitdrukking van DeltaFosB verhoog aansporing vir kokaïen. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Endocannabinoïde seinstelsel en breinbeloning: klem op dopamien. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Motiverende effekte van cannabinoïede word bemiddel deur mu-opioïede en kappa-opioïede reseptore. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, die Costa BR, Rice KC. Karakterisering en lokalisering van kannabinoïedreseptore in rotbrein: 'n kwantitatiewe in vitro-autoradiografiese studie. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Lokalisering van cannabinoïed CB (1) reseptor mRNA in neuronale subpopulasies van ratstriatum: 'n dubbel-label in situ-hybridisasie studie. Sinaps. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Internasionale Unie van Farmakologie. XXVII. Klassifikasie van cannabinoïde reseptore. Farmakologiese oorsig. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Blokkering van die effekte van gerookte marihuana deur die CB1-selektiewe kannabinoïed-reseptor-antagonis SR141716. Boog. Gen. Psychiatrie. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Uitdrukking van die transkripsiefaktor deltaFosB in die brein beheer sensitiwiteit vir kokaïen. Die natuur. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Neurokringkunde van verslawing. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Chroniese behandeling met Delta (9) -Tetrahydrocannabinol verhoog die lokomotoriese reaksie op amfetamien en heroïen. Implikasies vir kwesbaarheid vir dwelmverslawing. Neuro Farmacologie. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Betrokkenheid van die endokannabinoïdesisteem in dwelmverslawing. Neigings Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioïede reseptor mRNA uitdrukking in die rat SSS: vergelyking met mu-reseptor binding. Brein Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Kitchen I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Verlies van morfien-geïnduseerde analgesie, beloningseffek en onttrekkingsimptome by muise wat die μ-opioïede reseptor geen het. Die natuur. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Regulering van geenuitdrukking en kokaïenbeloning deur CREB en DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: 'n molekulêre skakelaar vir langtermyn aanpassing in die brein. Brein Res. Mol. Brein Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. D1 dopamienreseptore moduleer deltaFosB induksie in ratstriatum na intermitterende morfien toediening. J. Pharmacol. Exp. En daar. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Resensie. Transkripsionele meganismes van verslawing: rol van DeltaFosB. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: 'n molekulêre bemiddelaar van langtermyn neurale en gedragsplastisiteit. Brein Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hoop BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiese studies van die regulering van chroniese FOS-verwante antigeen-induksie deur kokaïen in die striatum- en nucleus accumbens. J. Pharmacol. Exp. En daar. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Voorraad JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, brein-streekspesifieke uitdrukking van 'n dominante negatiewe mutant van c-Jun in transgeniese muise verminder sensitiwiteit vir kokaïen. Brein Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Duidelike patrone van DeltaFosB induksie in die brein deur dwelms van misbruik. Sinaps. 2008;62: 358-369. [PMC gratis artikel] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Lokalisering en werkingsmeganismes van cannabinoïedreseptore by die glutamatergiese sinapse van die muskernkern accumbens. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Sikliese Nukleotied Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioïede reseptor gestimuleer [35S] GTPγS binding in rottalamus en gekweekte sellyne: Signaaltransduksiemeganismes onderliggend aan agonistiese effektiwiteit. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Die endogene opioïdesisteem: 'n algemene substraat in dwelmverslawing. Dwelm Alkohol Afhanklik. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Neuroanatomiese lokalisering van κ1 en K2 opioïede reseptore in die rat- en proefkakbrein. Brein Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokkeer van kernkerns opiate-reseptore verminder intraveneuse heroïenbeloning in die rot. Psigofarmakologie (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekulêre meganismes betrokke by die asimmetriese interaksie tussen cannabinoïde en opioïde stelsels. Psigofarmakologie (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. 'N noodsaaklike rol vir DeltaFosB in die kern accumbens in morfinaksie. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Twee brein terreine vir cannabinoïde beloning. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo Li, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Aktivering van die gekloonde menslike kappa opioïede reseptor deur agoniste verhoog [35S] GTPγS bindend aan membrane: bepaling van potenties en effektiwiteite van ligande. J. Pharmacol. Exp. En daar. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Afwesigheid van delta -9-tetrahydrokannabinol-disforese-effekte in dynorfien-gebrek aan muise. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Verhoogde sterftesyfer, hipoaktiwiteit en hipoalgesie by cannabinoïde CB1-reseptor-knockout-muise. Proc. Natl. ACAD. Sci. VSA 1999;96: 5780-5785. [PMC gratis artikel] [PubMed]