Langdurige Hoë Vet Dieet verminder dopamien heropname sonder om DAT Gene Expression (2013) te verander.

  • Jackson J. Cone,
  • Elena H. Chartoff,
  • David N. Potter,
  • Stephanie R. Ebner,
  • Mitchell F. Roitman

Abstract

Die ontwikkeling van dieet-geïnduseerde vetsug (DIO) kan baie verskillende aspekte van dopamien seinverandering, insluitende dopamien transporter (DAT) uitdrukking en dopamien heropname, sterk verander. Die tydsverloop van dieet-geïnduseerde veranderinge in DAT-uitdrukking en -funksie en of sulke veranderinge afhanklik is van die ontwikkeling van DIO bly egter onopgelos. Hier het ons 'n hoë (HFD) of lae (LFD) vet dieet vir 2 of 6 weke gevoed. Na dieetblootstelling is rats met uretaan verdoving en die striatale DAT-funksie is beoordeel deur die dopamien-selliggame in die ventrale tegmentale area (VTA) te stimuleer en die gevolglike veranderinge in dopamienkonsentrasie in die ventrale striatum met behulp van vinnige scan sikliese voltammetrie op te neem. Ons het ook die effek van HFD op membraanverwante DAT in striatale selfrakties gekwantifiseer van 'n afsonderlike groep rotte na blootstelling aan dieselfde dieetprotokol. Nie een van ons behandelingsgroepe verskil in liggaamsgewig nie. Ons het 'n tekort gevind in die tempo van dopamien heropname in HFD rotte relatief tot LFD rotte na 6, maar nie 2 weke van dieet blootstelling. Daarbenewens is die toename in opgewekte dopamien na 'n farmakologiese uitdaging van kokaïen aansienlik verswak in HFD relatief tot LFD rotte. Western blot-analise het getoon dat daar geen effek van dieet op totale DAT-proteïene was nie. 6 weke van HFD-blootstelling verminder egter die 50 kDa DAT-isoform in 'n sinaptosomale membraanverwante breuk, maar nie in 'n breuk wat verband hou met die herwinning van endosome. Ons data verskaf verdere bewyse vir dieet-geïnduseerde veranderinge in dopamien heropname onafhanklik van veranderinge in DAT-produksie en toon dat sulke veranderinge kan manifesteer sonder die ontwikkeling van DIO. 

aanhaling: Cone JJ, Chartoff EH, Potter DN, Ebner SR, Roitman MF (2013) Langdurige Hoë Vet Dieet verminder dopamien heropname sonder om DAT Gene Expression te verander. PLUIS EEN 8 (3): e58251. doi: 10.1371 / journal.pone.0058251

Redakteur: Sidney Arthur Simon, Duke Universiteit Mediese Sentrum, Verenigde State van Amerika

ontvang: Oktober 26, 2012; aanvaar: Februarie 5, 2013; Published: Maart 13, 2013

Copyright: © 2013 Cone et al. Hierdie is 'n oop-toegang artikel wat versprei word ingevolge die Creative Commons Attribution-lisensie, wat onbeperkte gebruik, verspreiding en reproduksie in enige medium toelaat, mits die oorspronklike skrywer en bron gekrediteer word.

befondsing: Die projek wat beskryf is, is ondersteun deur die National Institute of Health (NIH) toekennings DA025634 (MFR) en T32-MH067631 van die Biomediese Neurowetenskap Opleidingsprogram (JJC). Bykomende ondersteuning is verskaf deur die Nasionale Sentrum vir Navorsingshulpbronne en die Nasionale Sentrum vir Bevordering van Vertaalwetenskappe, NIH, deur toekenning UL1RR029877 (JJC) en die Chicago Biomedical Consortium met ondersteuning van die Searle-fondse by die Chicago Community Trust (JJC). Die inhoud is uitsluitlik die verantwoordelikheid van die outeurs en verteenwoordig nie noodwendig die amptelike sienings van die NIH of die Chicago Biomedical Consortium nie. Die befondsers het geen rol gehad in studieontwerp, data-insameling en -analise, besluit om te publiseer of voorbereiding van die manuskrip te maak nie.

Kompeterende belange: Die outeurs het verklaar dat geen mededingende belange bestaan ​​nie.

Inleiding

Die oorgewig en vetsugtig verteenwoordig 'n toenemend groter persentasie van die Verenigde State en wêreldwye bevolkings [1], [2]. Alhoewel daar baie rigtings op vetsug is, is miskien een van die grootste bedreigings vir gesonde liggaamsgewig die voorkoms en verbruik van hoogs smaaklike, kalorie-voedsel [3]. Inderdaad, die energie-digtheid (kcal / g) van kos dra by tot oorgewig en vetsug by volwassenes [4], [5]. Pragtige kosse laat dopamien vrylating in die striatum van beide mense en nie-menslike diere uit [6], [7], [8], [9] en subjektiewe graderings van vetterigheid in voedsel is positief gekorreleer met die sterkte van neurale response in die ventrale striatum [10]. Dus, dopamien en die striatum blyk by te dra tot voorkeure vir energie-digte kosse. Onlangs is aangetoon dat verskille in dieet gelyktydige veranderinge in striatale stroombane en voedselgerigte gedrag kan veroorsaak [11]. Miskien minder waardeer egter, is die groeiende bewyse dat verskille in ingeneemde kosse, veral ten opsigte van vet, terugvoering kan gee op en verander striatale dopamien seinverandering.

Striatale dopamien sein word gereguleer deur verskeie faktore, insluitende dopamienproduksie deur die ensiem tyrosienhidroksilase, pre- en postsynaptiese dopamienreseptore, en presynaptiese dopamien-transporters (DAT's), wat almal in obesiteit betrek is. [12], [13]. Veranderinge in DAT nommer of funksie kan die invloedsfeer van vrygestelde dopamien en gevolglik striatale funksie verander [14], [15]. Insulien, vrygestel in reaksie op ingeneemde voedsel, het getoon dat die DAT-funksie beïnvloed word [16], [17]. Dus, die DAT is een van die waarskynlike kandidate vir die gevolge van dieet.

Onlangs is korrelasies tussen vetsug en DAT-beskikbaarheid asook dieet-geïnduseerde veranderings van DAT-funksie ondersoek. Liggaamsmassa-indeks (BMI) word negatief gekorreleer met DAT-beskikbaarheid in die menslike striatum [18]. DAT binding, en dus beskikbaarheid, word verminder in hoë vet dieet (HFD) gevoed muise [19]. HFD-geïnduceerde obesiteit (DIO) word geassosieer met 'n verlaagde dosis van dopamien heropname deur die DAT by rotte [20]. Saam met hierdie studies dui daarop dat vetsug wat deur die HFD-verbruik ingestel is, die kritieke presynaptiese regulators van dopamien sein kan beïnvloed - veral die DAT. Die tydsverloop van dieetgeïnduceerde veranderinge in dopamien sein en die vraag of die ontwikkeling van DIO nodig is om veranderings te manifesteer, bly onbekend. Ons het DAT-funksie geassesseer deur dopamien vrystelling in die ventrale striatum op te wek en die tempo van heropname in rotte te kwantifiseer met behulp van vinnige scan sikliese voltammetrie. Om te bepaal of verminderde dopamien heropname veroorsaak is deur verminderde DAT gene-uitdrukking, het ons DAT mRNA gemeet in die ventrale tegmentale area en substantia nigra deur real-time qRT-PCR te gebruik. Daarbenewens het ons 'n biochemiese fraksioneringsprosedure en Western blot-analise gebruik om striatale DAT-vlakke in ruwe sinaptosomale en endosomale membrane te toets. Ratte het óf 2 of 6 weke met hoë of lae vet dieet gehad, maar alle afmetings is gemaak in die afwesigheid van DIO. Ons resultate dui daarop dat langdurige gebruik van HFD, onafhanklik van DIO, die tempo van dopamien heropname in die ventrale striatum verminder sonder dat die DAT-uitdrukking verminder word.

Materiaal en metodes

Etiekverklaring

Hierdie studie is uitgevoer in ooreenstemming met die aanbevelings in die Gids vir die Sorg en Gebruik van Laboratoriumdiere van die Nasionale Instituut van Gesondheid. Die protokol is goedgekeur deur die Animal Care Committee by die Universiteit van Illinois, Chicago. Alle chirurgie is onder uretaan-narkose uitgevoer, en alle pogings is aangewend om lyding te verminder.

onderwerpe

Standaard manlike Sprague-Dawley rotte (n = 67), ongeveer 2 maande oud en weeg 225-275 g by aankoms, is gebruik. Diere is individueel gehuisves in plastiekhokke (26.5 × 50 × 20 cm) in 'n temperatuur- (22 ° C) en humiditeits- (30%) beheerde omgewing op 'n 12: 12 h lig: donker siklus (ligte aan by 07: 00 h). Rotte het vir een week by die fasiliteit aangesluit ad libitum Toegang tot standaard lab chow en water.

Voedselinname en liggaamsmassa-metings

Na akklimasie is rotte geweeg en lukraak toegewys aan 1 van 4 groepe wat teen die aanvanklike liggaamsgewig opgetree is. Twee groepe is in stand gehou met lae vet dieet (LFD; Navorsingsdietse, New Brunswick, NJ; D12450B; 10% kilokalorieë van vet (3.85 kcal / g)). Die ander 2-groepe is gehandhaaf op HFD (Research Diets; D12492; 60% kilokalorieë van vet (5.24 kcal / g)). Vir elke dieet is rotte gehandhaaf vir 2 of 6 weke (wks). Die 4-groepe was dus: LFD-2 wk (n = 18), HFD-2 wk (n = 16), LFD-6 wk (n = 16) en HFD-6 wk (n = 17). Alle groepe het ad libitum toegang tot water. Voedselinname en liggaamsgewigmetings is drie keer per week gemaak en data word afsonderlik aangemeld vir rotte wat voltammetriese opnames of DAT-proteïen / boodskapontleding ondergaan.

Chirurgiese Prosedures en Dopamienmetings

Na blootstelling aan dieet is 'n subgroep rotte wat nie verskil in liggaamsgewig nie, voorberei vir voltammetriese opnames (LFD-2 wk (n = 8), HFD-2 wk (n = 6), LFD-6 wk (n = 6) en HFD-6 wk (n = 7)) onder uretaan (1.5 g / kg) narkose [soos in 9,21]. 'N Gidskanaal (Bioanalytical Systems, West Lafayette, IL) is bo die ventrale striatum (1.3 mm anterior, 1.5 mm lateraal van bregma) geplaas, 'n gechloreerde silwer draad (Ag / AgCl) verwysingselektrode is in die kontralaterale korteks ingeplant en albei is vasgemaak aan die skedel met skroewe van vlekvrye staal en tandheelkundige sement. 'N Mikromanipulator wat 'n koolstofvesel-elektrode (CFE) bevat, is in die geleierkanule ingebring en die elektrode in die ventrale striatum laat sak. Die CFE en die verwysingselektrode is aan 'n hoofstadium gekoppel en die potensiaal van die CFE is van -0.4 tot +1.3 V (vs. Ag / AgCl) en terug (400 V / s; 10 Hz) geskandeer. 'N Bipolêre stimulerende elektrode (Plastics One, Roanoke, VA) is dan geleidelik in die ventrale tegmentale area / substantia nigra pars compacta (VTA / SNpc; 5.2 mm posterior, 1.0 mm lateraal en aanvanklik 7.0 mm ventral vanaf bregma) in 0.2 mm inkremente laat sak. . By elke toename is 'n stroom stroompulse (60 pulse, 4 ms per pols, 60 Hz, 400 µA) gelewer. Wanneer die stimulerende elektrode in die VTA / SNpc geposisioneer is en die CFE in die striatum is, veroorsaak stimulasie betroubaar dopamienvrystelling - onttrek uit voltammetriese data met behulp van hoofkomponentanalise [9], [22]; en omskep in konsentrasie na elke CFE word gekalibreer in 'n vloeispuitstelsel volgens elke eksperiment [23]. Die posisie van die stimulerende elektrode is geoptimaliseer vir maksimum vrystelling. Die CFE het toe toegelaat om vir 10 min te ewewig voordat die eksperiment begin word. Dopamien vrystelling is veroorsaak deur elektriese stimulasie van die VTA / SNpc (dieselfde parameters as hierbo), en die gevolglike veranderinge in dopamien konsentrasie is bereken van -5 s tot 10 s relatief tot stimulasie. Onmiddellik na stimulasie is rotte ingespuit met kokaïenhidrochloried opgelos in 0.9% sout (10 mg / kg ip) en, 10 min later, is die stimulasie herhaal. Toegepaste spannings, data-verkryging en analise is uitgevoer met behulp van sagteware wat in LabVIEW (National Instruments, Austin, TX, VSA) geskryf is. [22].

Dopamien heropname

Dopamien heropname is gemodelleer met behulp van Demon Voltammetry Analysis Software (24; Wake Forest Universiteit, Winston-Salem NC). Hier rapporteer ons die verval konstante tau as ons maatstaf van die tempo van dopamien heropname. Tau word afgelei van 'n eksponensiële kurwepas wat die meerderheid van die dopamien-opruimkromme insluit en hoogs gekorreleer is (r = .9899) met Km, die oënskynlike affiniteit van dopamien vir die DAT [24]. Om die effek van kokaïen op piek dopamien konsentrasie te bepaal, vergelyk ons ​​die waardes wat voor en na toediening verkry is (% verandering).

histologie

Na elke opname is 'n vlekvrye staal elektrode (AM Systems #571500, Sequim, WA) op dieselfde diepte as die CFE verlaag en 'n letsel (10 μA, 4 s) is gemaak om die opname plek te merk. Brein is verwyder en gestoor in 10% formalin. Ligmikroskopie is gebruik om die letselligging op koronale dele (50 μm) deur die striatum te identifiseer. Alle opnames wat hier gerapporteer word, is in die ventrale striatum gemaak [25].

Subcellulêre Fraksie van Striatale Weefsel

Rotte (LFD-2 wk, HFD-2 wk, LFD-6 wk, en HFD-6 wk; n = 10 / groep; geen verskil in liggaamsgewig) is deur dekapping vermoor. Biochemiese fraksionering is uitgevoer met behulp van die protokol beskryf in [26], met geringe veranderinge. Brein is vinnig verwyder, in isopentaan gevries en op 'n cryostat (HM505E, Microm, Walldorf, Duitsland, -20 ° C) gesny tot die striatum bereik is. Bilaterale 1-mm3 stampe deur die ventrale striatum (gemiddelde weefselgewig: 15.2 mg) is gehomogeniseer vir 20 s in 0.8 ml yskoue TEVP (10 mM Tris basis, 5 mM NaF, 1 mM Na3VO4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, pH 7.4) + 320 mM sukrose buffer. 'N 100 μl-aliquot van totale homogenaat (H) is gestoor. Die res van H is gekentrifugeer by 800 × g vir 10 min by 4 ° C. Die korrel (P1, kerne en groot puin) is gesuspendeer in 0.2 ml TEVP buffer en gered. Die supernatant (S1) is verwyder en in 'n skoon buis op ys geplaas. S1 is gesentifugeer by 9200 × g vir 15 min by 4 ° C om 'n pellet (P2, ruwe sinaptosomale membrane) en 'n supernatant (S2) te genereer. P2 is een keer in TEVP + 35.6 mM sukrosebuffer gespoel, en dan weer gesuspendeer in 0.25 ml TEVP + 35.6 mM sukrose buffer, saggies vir 3 s gesny en hipo-osmoties gelys deur die monster op ys vir 30 min te hou. Supernatant (S2) is op 165,000 × g vir 2 h versamel en gesponster om 'n pellet (P3, ligmembrane, herwinningsendosome) te genereer wat in TEVP (0.1 ml) gereduseer en gered is. Alle monsters is by -80 ° C gehou tot poliakrylamied-gelelektroforese.

Gel Elektroforese en Western Blotting

Proteïeninhoud is bepaal met behulp van die Bio-Rad DC Protein Assay kit (Hercules, CA), en die konsentrasie van elke monster is op 0.3 mg / ml proteïen aangepas. NuPAGE LDS (litiumdodesielsulfaat) monsterbuffer (Invitrogen, Carlsbad, CA) en 50 mM ditiotreitol is by elke monster gevoeg voordat dit gedurende 70 minute by 10 ° C verhit is. Om ekwivalente hoeveelhede proteïene vir elke fraksie te laai, is 3 µg van elke monster in NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris gels (Invitrogen) gelaai vir skeiding deur gelelektroforese. Proteïene is daarna oorgedra na polivinielideenfluoriedmembraan (PVDF) (PerkinElmer Lewenswetenskappe, Boston, MA). Nie-spesifieke bindingspersele is gedurende 2 uur by kamertemperatuur geblokkeer in blokkerende buffer (5% droë melk sonder vet in PBS en 0.02% Tween 20 [PBS-T]). Vlekke is dan geïnkubeer in primêre teenliggaam (1∶3000 muis monoklonale anti-NR2B [# 05–920, Millipore], 1∶5000 konyn anti-DAT [# AB2231, Millipore] en 1∶1000 muis monoklonale anti-transferrien reseptor ( TfR) [# 13–6800, Invitrogen]. Vlekke is in 3 dele gesny: hoë (> 97 kDa), medium (46-97 kDa) en lae (<46 kDa) gewigte en elke deel is ondersoek met 'n teenliggaam wat herken 'n proteïen binne daardie gewigsklasse. Oënskynlike molekulêre gewigte vir die teenliggaampies wat gebruik word, is: NR2B, 180 kDa; DAT, 75, 64 en 50 kDa; TrfR, 95 kDa. met stroopbuffer (62.5 mM Tris, 2% SDS, 100 mM β-merkapto-etanol, pH 6.8) vir 15 minute by 50 ° C. Vlekke is daarna weer geblokkeer en met anti-TfR ondersoek. SeeBlue Plus 2 (Invitrogen) voor- gekleurde standaarde is uitgevoer vir die beraming van molekulêre gewig.

Proteïen immunoblots is geanaliseer met behulp van Carestream Molecular Imaging Software 5.0. Netto intensiteit (die som van die pixels binne die betrokke band minus die som van die agtergrondpixels) is vir elke band bepaal. Om vergelykings tussen blots toe te laat, is data genormaliseer na die LFD kontroles by 2 en 6 wks. Data word uitgedruk as die gemiddelde vouinduksie in vergelyking met LFD ± SEM.

Kwantitatiewe Real-time Reverse Transcriptase Polimerase Kettingreaksie (qRT-PCR)

Na die versameling van striatale pons vir western blot analise, bevrore brein is koronaal gesny op die microtome tot die VTA / SN bereik. Bilaterale 1-mm3 stampe van VTA en SN weefsel (gemiddelde weefsel gewig = 15.0 mg) is gemaak en RNA is onttrek met PureLink RNA Mini Kit (Invitrogen). RNA gehalte en hoeveelheid is beoordeel met behulp van 'n RNA 6000 Nano Chip (Agilent, Santa Clara, CA) op 'n Agilent Bioanalyzer 2100. RNA integriteit nommer (RIN) oorskry 7 vir alle monsters, wat hoë gehalte aandui. Een mikrogram totale RNA is gebruik om cDNA te sintetiseer deur iScript cDNA Synthesis Kit (BioRad) in 'n ThermoHybaid iCycler (Thermo Scientific) te gebruik. Primer spesifiek vir DAT (Slc6a3; Voorwaartse primer: GGAAGCTGGTCAGCCCCTGCTT, Reverse primer: GAATTGGCGCACCTCCCCTCTG), β-aktien (Nba; Voorwaartse primer: AGGGAAATCGTGCGTGACAT; Reverse primer: AAGGAAGGCTGGAAGAGAGC) en TATA-boks bindende proteïen (Tbp; Voorwaartse primer: ACCTAAAGACCATTGCACTTCGTGCC; : GCTCCTGTGCACACCATTTTCCC) gene (Genbank toetreding nommers NM_012694, NM_031144, en NM_001004198) is ontwerp met behulp van NCBI Primer-BLASThttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/) en gekoop van geïntegreerde DNA Technologies (Coralville, Iowa). Smeltkromme-analise en poliakrylamied-gelelektroforese het die spesifisiteit van die primers bevestig. Die DAT, β-aktien, en Tbp amplikone is onderskeidelik 266, 182 en 136 basispare.

'N Q-PCR-kit (iQ SybrGreen Supermix, BioRad) is gebruik. Die reaksie is uitgevoer op 'n MyiQ Single Color Real-Time PCR Detection System (BioRad) in 'n volume van 20 μl, met 2 μL van 3 μM voor- en omgekeerde primers en 4 μL cDNA-monster verdunde 1: 10. PCR-siklusstoestande was 95 ° C vir 5 min; 40 siklusse by 94 ° C vir 15 s, 60 ° vir 15 s, 72 ° C vir 15 s. Data is versamel teen 'n lees temperatuur van 84 ° C vir 15 s gebaseer op die amplikon smelt temperature. Standaardverdunningskurwes is vir elke primer wat deur middel van seriële verdunning (1.00, 0.2, 0.04, en 0.008-vou) gestig word, gegenereer. 'N Meester cDNA-voorraad wat 'n gelyke mengsel van cDNA uit alle behandelingsgroepe bevat. Die logboek10 van die verdunningswaardes is opgeteken teen die drempel sikluswaardes vir die standaardkrommes. MyiQ Optical System Software (BioRad) is gebruik om die data te analiseer. Monsters wat geen cDNA sjabloon bevat nie en monsters van cDNA reaksies wat geen omgekeerde transkriptase bevat nie, word as kontroles vir kontaminasie en amplifisering van genomiese DNA onderskeidelik uitgevoer. Gerapporteerde waardes is genormaliseer na die gemiddelde waardes van die interne standaarde ß-actin en Tbp vir elke monster. Data word uitgedruk as gemiddelde relatiewe vlakke van DAT / interne standaarde mRNA ± SEM.

Statistiese Analise

DAT-uitdrukking verander dinamies gedurende die lewensiklus in beide mense [27] en rotte [28], [29]. Daarbenewens verander die dopamien- en gedragsreaksie op kokaïen ook as jong rotte volwasse [30]. Dus, metings van DAT kan wissel met ouderdom en verbied betekenisvolle vergelykings tussen die 2 wk en 6 wk groepe. Daarom beteken groep vir voedselinname, liggaamsgewig, piek dopamien konsentrasie, tau,% verandering, en relatiewe gene uitdrukking is afsonderlik vergeleke vir 2 en 6 wk groepe met behulp van Student se ongepaarde t-toets. Vir western blot ontledings, is groepverskille in genormaliseerde DAT-bandintensiteit afsonderlik vergeleke vir 2- en 6-wk-groepe met behulp van twee-rigting herhaalde maatstawwe ANOVA (dietXfraction). Alle statistiese ontledings is uitgevoer in Grafiek Pad 5 (Prism Inc.).

Results

HFD bevorder verhoogde vetverbruik

Voor die aanvang van dieetblootstelling was daar geen verskille in die aanvanklike liggaamsgewig in die 2 wk (LFD: 275.22 +/- 4.1 g; HFD: 280.87 +/- 4.8 g; p = 0.37), of 6 weke (LFD: 287.31 +/− 4.9 g; HFD: 289.44 +/− 5.1 g; 6 week p = 0.97) groepe. Ten spyte van die inname van diëte met 'n drasties verskillende samestelling, het ons geen verskille in liggaamsgewig tussen dieetgroepe gevind na 2 of 6 weke (Fig. 1a-b; beide ns). Daar was ook geen verskil in die totale kcals wat verteer is tussen groepe wat beide 2 en 6 gevolg het van dieetblootstelling (Fig. 1c-d; ns). HFD rotte verbruik egter aansienlik meer kcals uit vet (Fig. 1e-f; 2 wks: t (32) = 25.59; 6 wks: t (31) = 27.54; p<0.0001 vir albei die dieettydperke).

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 1. Voedselinname en liggaamsgewigmetings.

Daar was geen verskille tussen HFD en LFD in die finale liggaamsgewig nie ('n-b) of totale kilokalorieë wat verbruik word (c-d) of 2 of 6 weke van dieetblootstelling volg. (e-f) HFD rotte verbruik aansienlik meer kilokalorieë van vet as LFD rotte in beide 2 week en 6 weke toestande (***p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g001

Verlengde HFD verminder die koers van DA-heropname

Voltammetriese opnames is in die ventrale striatum gemaak (Figuur 2). Figuur 3 toon verteenwoordiger van elektriese opgewek veranderinge in dopamien konsentrasie verkry van rotte na 6 wks dieet. By baseline het die grootte van opgedokte dopamien nie verskil tussen dieetgroepe en oor dieetperiode nie (Fig. 4a-b, beide ns). Inspeksie van individuele voorbeelde het egter die tempo van verval voorgestel nadat piek dopamien konsentrasie verskil tussen dieet groepe na 6 wks dieet blootstelling (Figuur 3 a-b vir voorbeelde). Die verval tempo is hoofsaaklik te danke aan dopamien klaring deur die DAT [31], wat ons gemodelleer het as 'n enkele fase eksponensiële tau te bepaal. Daar was geen verskille tussen dieetgroepe na 2 wks dieetblootstelling nie (Fig. 4c). Na 6 van dieetblootstelling was tau egter aansienlik groter in HFD-6 wk rotte relatief tot LFD-6 wkFig. 4d; t (11) = 2.668; p<0.05). Dus verminder 6 weke HFD die tempo van dopamienklaring in die ventrale striatum in vergelyking met diere wat 'n LFD verbruik.

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 2. Histologiese verifikasie van opname terreine vir heropname ontleding.

Opnames terreine vir LFD gevoed rotte word gekodeer deur grys driehoeke en vir HFD rotte deur swart sirkels. Getalle dui afstand in mm anterior aan Bregma aan. Figuur aangepas uit Paxinos en Watson 2006.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g002

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 3. Elektriese stimulasie van die VTA / SNC veroorsaak 'n fasiese spek in dopamien konsentrasie.

Verteenwoordigende voorbeelde van data verkry ná 6 weke van dieetblootstelling. a) Agtergrond-getrek kleur grafiek toon huidige veranderinge by verskillende potensiale van die elektrode voor (-5 tot 0 s relatief tot aanvang) en na (0.1 tot 10 s relatief tot aanvang) elektriese stimulasie (STIM) van die VTA / SNc. Tyd is die abskis, die elektrodepotensiaal is die ordinaat, en die huidige veranderinge word gekodeer in 'n valse kleur. Dopamien [geïdentifiseer deur sy oksidasie (+ 0.6 V, groen) en reduksie (-0.2 V, blou) funksies] oorgedra verhoog as gevolg van die stimulasie in hierdie LFD-6 wk rat. b) Dieselfde as in a), behalwe van 'n HFD-6 wk rat. c) Dopamien konsentrasie as 'n funksie van tyd word onttrek uit die kleur plot in a) en tau word via kromme pas geïdentifiseer. Twee rooi kolle merk die piek en die dopamien konsentrasie op die tydstip wanneer tau bereik word. Tau word regs aangedui. d) Dieselfde as in c), maar data word uit b) onttrek.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g003

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 4. Ses weke van hoë vet dieet verminder die tempo van dopamien heropname en demp die dopamien reaksie op kokaïen.

Gemiddelde piek dopamien konsentrasie veroorsaak deur VTA / SNpc stimulasie na of 2 (a) of 6 weke (b) van dieet blootstelling voor kokaïen inspuiting. c-d) Gemiddelde Tau volgende 2 (c) wks of xnumx wks (d) van dieetblootstelling. Tau was aansienlik groter vir HFD-6 wk rotte relatief tot LFD-6 wk rotte (*p e-f) Persentasieverandering in piek wat dopamien konsentrasie veroorsaak het na kokaïen inspuiting vir 2 (e) en 6 (f) weke van dieetblootstelling. Persentasie verandering was aansienlik kleiner in HFD-6 wk relatief tot LFD-6 wk rotte (**p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g004

Verlengde HFD verminder die DA-reaksie op kokaïen

Om verder te toets vir dieet-geïnduseerde veranderinge in DAT, het ons rotte met die DAT-blocker-kokaïen ingespuit. Piek dopamien konsentrasie na elektriese stimulasie word veroorsaak deur vrystelling van dopamien, maar word ook beperk deur gelyktydige verwydering van dopamien deur die DAT [21]. Ons het die effek van kokaïen op dopamien-oordrag gekenmerk deur die verandering in die grootte van opgewekte dopamien te bereken relatief tot die voor-dwelmwaardes (% verandering). Twee weke van HFD het geen invloed gehad op% verandering in verhouding tot LFD nie (Fig. 4e; ns). Na 6 wks dieetblootstelling, was die verandering in% egter aansienlik gestort in HFD relatief tot LFD (Fig. 4f; t (10) = 4.014; p<0.01). Ons resultate dui daarop dat 6, maar nie 2 weke, HFD-blootstelling die dopamienreaksie op kokaïen verminder nie.

Verlengde HFD-blootstelling verminder DAT-proteïenuitdrukking in sinaptosomale membraan

Om te bepaal of die gevolge van langdurige HFD weens veranderinge in die DAT-nommer was, is DAT-proteïenvlakke gekwantifiseer in totale weefselhomogenate (H-fraksie), sinaptosomale membrane (P2-fraksie) en intracellulêre herwinningsendosome (P3-fraksie). DAT is 'n Ngekoppelde glikoproteïen met 'n skynbare molekulêre gewig van tussen 50 en 80 kDa as gevolg van toenemende vlakke van glikosilering as die proteïen verval [32]. Fraksie is bevestig deur verrykde uitdrukking van die NR2B subeenheid van die NMDA-reseptor in sinaptosomale membraanfraksie en van die transferrienreseptor in die endosomale fraksie (byvoorbeeld blat sien Fig. 5b). Ons het geen verskille in totale DAT-proteïene gevind nadat 2 en 6 wyd van dieetblootstelling (data nie getoon nie). Om te toets vir breukspesifieke verskille in DAT-proteïen, het ons twee-rigting herhaalde maatstawwe ANOVA (dieet-breuk) gebruik. In ooreenstemming met die voltammetrie-eksperimente was 2 wks dieetblootstelling onvoldoende om vlakke van enige van die DAT-isoforme in P2- of P3-breuke te verander (Fig 5. c, e, g; alle ns). Na die 6 van dieetblootstelling was daar egter 'n beduidende dieet-breukinteraksie (F(1,18) = 8.361, p<0.01); Fig. 5d) vir die 50 kD isoform van die DAT. Gevolglik het langdurige HFD die 50 kD-isoform van die DAT in die P2-fraksie aansienlik verminder en 'n toename in die P3-fraksie veroorsaak. Ons het geen effek van dieet of breuk op die 64 kD gevind nie (Fig. 5f; ns) of die 70 kD (Fig. 5h; ns) DAT isoforms.

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 5. Verbruik van 'n hoë vet dieet verminder membraanverwante DAT proteïen in die ventrale striatum.

a) Verteenwoordigende beeld wat die (2) 1 × 1 mm weefselstampe van die ventrale striatum bevat wat vir DAT proteïenanalise gekombineer is. VStr = Ventral Striatum; DStr = Dorsale Striatum; cc = corpus callosum; ac = anterior kommissie. b) Verteenwoordigende westelike blots van die data wat in c-h aangebied word. L = LFD; H = HFD; TfR = transferrien reseptor; NR2B = NR2B subeenheid van NMDA reseptor. c) Daar was geen verskille in 50 kD DAT proteïen vir P2 of P3 breuke na 2 weke van dieetblootstelling nie. d) 50 kD DAT proteïen word aansienlik verminder in die P2 (* = p<.05), maar nie die P3-fraksie van die ventrale striatale weefsel in HFD-6 wk in verhouding tot LFD-6 wk-rotte nie. Daar was geen verskille in 64 kD DAT-proteïene na twee nie (e) of 6 weke (f) van dieetblootstelling. Daar was geen verskille in 70 kD DAT proteïen na óf 2 (g) of 6 weke (h) van dieetblootstelling.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g005

Om te bepaal of afgeneem vlakke van DAT proteïen in die P2 fraksie verskuldig was, in deel, tot 'n afname in DAT transkripsie, is VTA / SNc DAT mRNA vlakke gemeet in dieselfde rotte as hierbo (Fig. 6a byvoorbeeld). Ons het geen verskille tussen dieetgroepe in die middelbrein-DAT mRNA waargeneem na 2 of 6 wks dieetblootstelling nie (Fig. 6b-c; beide ns). So, waarskynlik is verskille in DAT-proteïenvlakke binne die ventrale striatum weens tekorte in DAT-produksie.

thumbnail

Download:

PowerPoint-skyfie

groter prentjie

oorspronklike beeld

Figuur 6. Hoë vet dieet verbruik verander nie DAT mRNA vlakke. a)

Verteenwoordigende beeld wat 1 × 1 mm weefselstampe uit die VTA / SN bevat en gekombineer vir DAT mRNA analise. cp = serebrale penduncle; PC = posterior kommissie; MM = mediale mammillêre kern. Daar was geen verskille in relatiewe DAT mRNA vlakke na óf 2 weke nie (b) of 6 weke van dieetblootstelling (c).

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g006

Bespreking

Langdurige HFD verbruik kan lei tot DIO en plastisiteit binne die sentrale senuweestelsel. Dopamienneurone en striatale dopamienreseptore blyk een stel CNS-teikens te wees wat geraak word deur 'n HFD en by vetsugtige individue [11], [13], [33]. Hier berig ons dat 'n HFD die tempo van dopamien heropname in die ventrale striatum verminder het en hierdie effek was afhanklik van die duur van blootstelling. Wat belangrik is, het die uitwerking van HFD op DAT-funksie plaasgevind in die afwesigheid van DIO. Terwyl ons nie direk merkers van liggaamsadaptheid in hierdie studie gemeet het nie, is diere tradisioneel geklassifiseer as DIO of dieetbestand, gebaseer op slegs liggaamsgewigstoename as gevolg van blootstelling aan 'n HFD [34]. Langdurige HFD het die vermoë van kokaïen aansienlik verminder, wat met die DAT inmeng, om die omvang van die vrystelling van dopamien te versterk. Ons het DAT proteïenvlakke in die ventrale striatum gekwantifiseer met behulp van Western blot-analise. Dit onderskei tussen DAT gelokaliseer binne subcellulêre breuke verryk vir óf die plasmamembraan of herwinningsendosome. Ons het 'n beduidende vermindering in 'n onvolwasse isoform van die DAT wat met die plasmamembraan verband hou, aangetref. Gevolglik blyk langdurige HFD om die tempo van dopamien heropname via die DAT te verminder, waarskynlik deurdat dit met DAT-handel of maturasie inmeng, maar nie deur DAT-gene-uitdrukking of DAT-mRNA-stabiliteit te verlaag nie. Daarbenewens blyk dit dat die tydperk tussen twee en ses weke blootstelling aan 'n HFD die vroegste punt vir dieet-geïnduseerde plastisiteit ten opsigte van die DAT is.

Vetsug word gekorreleer met verskeie aspekte van striatale dopamien sein, insluitend DAT beskikbaarheid in beide mense [18] en muise [19]. Slegs onlangs is dit egter getoon dat die ontwikkeling van DIO die tempo van dopamien heropname in rotte verander [20]. Terwyl hierdie studie gedemonstreer het dat dopamien heropname na eksogene toegedien dopamien na slegs 4 weke HFD aangetas is, is die diere wat op 'n HFD gehandhaaf is, gekies op grond van aanvanklike gewigstoename en kon dit dus 'n unieke populasie verteenwoordig. In ooreenstemming met hierdie siening het HFD-diere voortgegaan om meer kalorieë te eet en meer gewig in vergelyking met LFD-beheermaatreëls te kry. Nog 'n onlangse studie het aangetas dat verswakte dopamien heropname na 12 weke van HFD in ongemete rottes was [35]. Daar was egter beduidende verskille in liggaamsgewig tussen die diere wat 'n HFD teenoor 'n standaard laboratoriumkosdieet gegee het toe die heropname-metings gemaak is. Daarom bly dit onduidelik of daar waardedaling in dopamien heropname ontstaan ​​as 'n direkte gevolg van, of voorafgaan, DIO-ontwikkeling. In teenstelling met hierdie onlangse verslae, het ons geen verskille in liggaamsgewig of totale kcalverbruik tussen ons dieetgroepe aangetref toe heropname-metings gemaak is nie. Dat ons gevind het dat verskille in dopamien heropname na 6, maar nie 2, weke van HFD, dui daarop dat dieetgeïnduceerde veranderinge in dopamien heropname 'n reaksie is op chroniese, maar nie akute, veranderinge in die dieetsamestelling nie. Verder, ons resultate dui daarop dat in plaas van 'n gevolg van vetsug, dieet-geïnduseerde veranderinge in DAT kan bydra tot die ontwikkeling van die siekte. Toekomstige studies sal moet aandui of dierebevolkings wat differensieel vatbaar is vir DIO of nie [34] het vooraf bestaande verskille in DAT-uitdrukking / funksie of is differensieel vatbaar vir dieet-geïnduseerde veranderinge in DAT.

Ons weet dit is die eerste studie wat bewys dat 'n HFD die dopamienreaksie op kokaïen verminder. Gegewe dopamien se rol in dwelmbeloning, is ons resultate in ooreenstemming met vorige werk wat aantoon dat rotte wat 'n HFD vir ongeveer 6 weke gevoed het, stadiger is om kokaïen selfadministrasie te verkry as diere wat 'n beheerde dieet gevoer het. [36]. Dit is belangrik dat hierdie effek ook onafhanklik van DIO-ontwikkeling is. Daarbenewens het rotte wat selektief geteel is vir vatbaarheid vir DIO, 'n verminderde kokaïenplekvoorkeur, wat daarop dui dat die belonende eienskappe van kokaïen in hierdie diere gestamp word. [37]. Die verminderde reaksie op kokaïen wat ons waargeneem het in HFD-6 wk-rotte, kan wees as gevolg van verminderde striatale DAT-beskikbaarheid. Kokaïen verhoog egter dopamien sein deur nie-DAT afhanklike meganismes. Spesifiek, HFD kan verswakte kokaïen-geïnduseerde mobilisering van reserwe dopamien vesikels [38]. Kokaïen verswak ook GABA-oordrag op dopamienneurone binne die VTA [39] en veroorsaak ossillasies in die vuurspoed van dopamien sel liggame [40]. Enige of al hierdie prosesse kan ook deur 'n HFD geraak word. Toekomstige navorsing sal nodig wees om die meganismes onderliggend aan te spreek hoe 'n HFD die lonende aspekte van kokaïen verander en / of die potensiaal vir dwelmgeïnduceerde neurale aanpassings [18]. Verbruik van 'n HFD verswak beide die gedrag [41] en dopamienrespons [20], [42] tot amfetamien, wat ook met die DAT inmeng. Belangrik is dat rotte wie se inname van 'n HFD kalorieë ooreenstem met dié van rotte wat 'n beheersdieet gevoer het, nie DIO ontwikkel nie, maar steeds nie 'n amfetamien-gekondisioneerde plekvoorkeur ontwikkel nie [41]. Saam met die data wat hier aangebied word, blyk dit dat die verbruik van 'n HFD die reaksie op psigostimulante ontbloot. Alle dwelmmiddels beïnvloed die dopamienstelsel, en dwelmgeïnduceerde versterking van dopamien sein is van mening dat dit noodsaaklik is vir die ontwikkeling van verslawing [43]. Dus, die verminderde reaksie op kokaïen in HFD rotte is in ooreenstemming met verslae dat vetsugtige mense 'n aansienlik laer leeftydrisiko het om 'n dwelmmisbruikversteuring te ontwikkel. [44]. Toekomstige werk sal moet aandui of die subjektiewe beoordeling van kokaïenbeloning verskil in vetsugtige individue in vergelyking met normale gewigsbeheer.

Ons western blot analise dui daarop dat langdurige verbruik van 'n HFD nie die totale striatale DAT proteïen beïnvloed nie, maar verminder die integrasie van die nie-geglycosyleerde 50 kDa DAT isoform in synaptosomale membrane. Terwyl DAT glikosilering die tempo van dopamien vervoer verhoog en die stabiliteit van die membraanoppervlakte verhoog [45], [46], [47], nie-glycosylated DAT van mense [45], [46] sowel as rotte [47] vervoer dopamien maklik. Daarbenewens toon immunomabeling-eksperimente dat vlakke van nieglikosiliese DAT hoër is in die ventrale in vergelyking met dorsale striatum in beide ape en mense [47]. Saamgestel, dui hierdie studies aan dat die verlaagde membraanvlakke van 50 kDa DAT kan bydra tot die heropname tekort wat ons waargeneem het in 6 wk HFD rotte. Ons data is in ooreenstemming met 'n vorige studie wat toon dat HFD verbruik die beskikbaarheid van DAT in die ventrale striatum van muise verminder [19]. Hierdie studie het egter nie DAT lokalisering in verskillende intracellulêre kompartemente gemeet nie. Daarbenewens is ons bevindings in ooreenstemming met 'n studie wat verminderings in seloppervlak DAT in die striatum van DIO-rotte toon [20]. Hierdie studie het ook gerapporteer dat die totale DAT proteïenvlakke nie beïnvloed is deur dieet in die DIO-model nie. Ons brei hierdie bevinding uit om te wys dat die totale DAT-proteïen ook nie geraak word deur 'n HFD by uitgewasse rotte nie. Daarom, langdurige verbruik van 'n HFD verander nie DAT uitdrukking nie, maar kan inmeng met DAT-handel of volwassenheid.

Die gebrek aan verskille in VTA / SNpc DAT mRNA vlakke na óf 2 of 6 wks HFD blootstelling ondersteun verder die idee dat die totale DAT vlakke nie beïnvloed word deur ons dieet manipulasies. Hierdie resultaat kontrasteer met 'n vorige verslag wat verminderde DAT mRNA in die muis VTA toon na 17 weke van HFD verbruik [12]. In hierdie studie is DAT mRNA vlakke egter gemeet nadat die dieetgroepe verskil in liggaamsgewig vir 12 weke. Dus, hul resultate verteenwoordig waarskynlik laat stadium aanpassings aan DIO. Samevattend, bied ons data sterk bewyse dat blootstelling aan 'n HFD lei tot funksionele veranderinge in striatale dopamien heropname deur die vermindering van membraanverwante DAT's sonder om die totale DAT-uitdrukking te verander. Belangrik, ons rapporteer dat dieet-geïnduseerde ontwrigtings in die DAT kan voorkom voor die aanvang van DIO, wat daarop dui dat hierdie veranderinge kan bydra tot die ontwikkeling van vetsug.

Ons data voeg by 'n groeiende literatuur impliserende dieet in die regulering van dopamienfunksie aan, en verskaf verdere bewyse dat dieetgeïnduceerde veranderinge in DAT-uitdrukking lei tot funksioneel relevante veranderinge in dopamien sein. Dieet-geïnduseerde veranderinge in die dinamika van striatale dopamien sein via die DAT sal waarskynlik gevolge hê vir voedinggedrag. Voedselverwante stimuli veroorsaak fasiese toenames in striatale dopamien [9], [48], [49], wat waarskynlik voedselgerigte aksies versterk en versterk [50]. Hier wys ons dat 6 weke van HFD-verbruik die duur van fasiese dopamien vrylating verleng deur dembraanverwante DAT's in 'n streek van die striatum te verminder waar dopamienfunksie noodsaaklik is vir voedselinname [51]. Dieet-afhanklike veranderings in DAT kan 'n feed-forward meganisme bevorder waarvolgens langdurige dopamien seine wat deur voedselstimulasies veroorsaak word, die aktivering van striatale dopamien D1-reseptore met lae affiniteit verhoog, wat krities is vir benaderingsgedrag [52], [53], [54]. Met verloop van tyd kan langdurige verheffing van striatale dopamien aanpassings bevorder, soos downregulering van dopamien D2 reseptore (D2R), wat in beide menslike en knaagdiermodelle van vetsug gedemonstreer is. [11], [33]. Ons studie dui daarop dat die ontwikkeling van vetsug nie 'n vereiste is om dopamien heropname te verander nie. Dus, dieetverwante afname in membraan-DAT kan voorafgaan en bydra tot die aanvang van D2R-downregulasie, vetsug, en kompulsiewe eetgedrag wat ontwikkel in die loop van HFD-verbruik [11].

Erkennings

Ons bedank drs. Jamie D. Roitman en James E. McCutcheon vir nuttige kommentaar op vorige weergawes van die manuskrip. Die inhoud van hierdie vraestel is uitsluitlik die verantwoordelikheid van die outeurs en verteenwoordig nie noodwendig die amptelike sienings van die NIH of die Chicago Biomedical Consortium nie.

Skrywer Bydraes

Ontleed en ontwerp die eksperimente: JJC EHC MFR. Die eksperimente uitgevoer: JJC DNP SRE. Ontleed die data: JJC EHC SRE MFR. Skryf die vraestel: JJC EHC MFR.

Verwysings

  1. 1. Flegale KM, Carroll MD, Kit BK, Ogden CL (2012) Voorkoms van vetsug en neigings in die verspreiding van liggaamsmassa-indeks onder Amerikaanse volwassenes, 1999-2010. JAMA 307: 491-497.
  2. 2. Ogden CL, Carroll MD, Curtin LR, McDowell MA, Tabak CJ, et al. (2006) Voorkoms van oorgewig en vetsug in die Verenigde State, 1999-2004. JAMA 295: 1549-1555.
  3. Bekyk artikel
  4. PubMed / Ncbi
  5. Google Scholar
  6. 3. Drewnowski A, Almiron-Roig E (2010) Menslike Persepsies en Voorkeure vir Vetryke Voedsel. In: Montmayeur JP, le Coutre J, redakteurs. Vet Deteksie: Smaak, Tekstuur, en Post-indringende effekte, Hoofstuk 11. Boca Raton, FL: CRC Press.
  7. Bekyk artikel
  8. PubMed / Ncbi
  9. Google Scholar
  10. Bekyk artikel
  11. PubMed / Ncbi
  12. Google Scholar
  13. Bekyk artikel
  14. PubMed / Ncbi
  15. Google Scholar
  16. Bekyk artikel
  17. PubMed / Ncbi
  18. Google Scholar
  19. Bekyk artikel
  20. PubMed / Ncbi
  21. Google Scholar
  22. Bekyk artikel
  23. PubMed / Ncbi
  24. Google Scholar
  25. Bekyk artikel
  26. PubMed / Ncbi
  27. Google Scholar
  28. Bekyk artikel
  29. PubMed / Ncbi
  30. Google Scholar
  31. Bekyk artikel
  32. PubMed / Ncbi
  33. Google Scholar
  34. Bekyk artikel
  35. PubMed / Ncbi
  36. Google Scholar
  37. Bekyk artikel
  38. PubMed / Ncbi
  39. Google Scholar
  40. Bekyk artikel
  41. PubMed / Ncbi
  42. Google Scholar
  43. Bekyk artikel
  44. PubMed / Ncbi
  45. Google Scholar
  46. Bekyk artikel
  47. PubMed / Ncbi
  48. Google Scholar
  49. Bekyk artikel
  50. PubMed / Ncbi
  51. Google Scholar
  52. Bekyk artikel
  53. PubMed / Ncbi
  54. Google Scholar
  55. Bekyk artikel
  56. PubMed / Ncbi
  57. Google Scholar
  58. Bekyk artikel
  59. PubMed / Ncbi
  60. Google Scholar
  61. Bekyk artikel
  62. PubMed / Ncbi
  63. Google Scholar
  64. Bekyk artikel
  65. PubMed / Ncbi
  66. Google Scholar
  67. Bekyk artikel
  68. PubMed / Ncbi
  69. Google Scholar
  70. 4. Rolls BJ (2009) Die verband tussen die energiedigtheid van die dieet en energie-inname. Fisiologie en gedrag 97: 609–15.
  71. 5. Ledikwe JH, Blanck HM, Kettel Khan L, Serdula MK, Seymour JD, et al. (2006) Dieet-energie-digtheid word geassosieer met energie-inname en gewigstatus in Amerikaanse volwassenes. Die Amerikaanse Tydskrif vir Kliniese Voeding 83: 1362-8.
  72. Bekyk artikel
  73. PubMed / Ncbi
  74. Google Scholar
  75. Bekyk artikel
  76. PubMed / Ncbi
  77. Google Scholar
  78. Bekyk artikel
  79. PubMed / Ncbi
  80. Google Scholar
  81. Bekyk artikel
  82. PubMed / Ncbi
  83. Google Scholar
  84. Bekyk artikel
  85. PubMed / Ncbi
  86. Google Scholar
  87. Bekyk artikel
  88. PubMed / Ncbi
  89. Google Scholar
  90. Bekyk artikel
  91. PubMed / Ncbi
  92. Google Scholar
  93. Bekyk artikel
  94. PubMed / Ncbi
  95. Google Scholar
  96. Bekyk artikel
  97. PubMed / Ncbi
  98. Google Scholar
  99. Bekyk artikel
  100. PubMed / Ncbi
  101. Google Scholar
  102. Bekyk artikel
  103. PubMed / Ncbi
  104. Google Scholar
  105. Bekyk artikel
  106. PubMed / Ncbi
  107. Google Scholar
  108. Bekyk artikel
  109. PubMed / Ncbi
  110. Google Scholar
  111. Bekyk artikel
  112. PubMed / Ncbi
  113. Google Scholar
  114. Bekyk artikel
  115. PubMed / Ncbi
  116. Google Scholar
  117. Bekyk artikel
  118. PubMed / Ncbi
  119. Google Scholar
  120. Bekyk artikel
  121. PubMed / Ncbi
  122. Google Scholar
  123. Bekyk artikel
  124. PubMed / Ncbi
  125. Google Scholar
  126. Bekyk artikel
  127. PubMed / Ncbi
  128. Google Scholar
  129. Bekyk artikel
  130. PubMed / Ncbi
  131. Google Scholar
  132. Bekyk artikel
  133. PubMed / Ncbi
  134. Google Scholar
  135. Bekyk artikel
  136. PubMed / Ncbi
  137. Google Scholar
  138. Bekyk artikel
  139. PubMed / Ncbi
  140. Google Scholar
  141. Bekyk artikel
  142. PubMed / Ncbi
  143. Google Scholar
  144. Bekyk artikel
  145. PubMed / Ncbi
  146. Google Scholar
  147. Bekyk artikel
  148. PubMed / Ncbi
  149. Google Scholar
  150. Bekyk artikel
  151. PubMed / Ncbi
  152. Google Scholar
  153. Bekyk artikel
  154. PubMed / Ncbi
  155. Google Scholar
  156. 6. Klein DM, Jones-Gotman M, Dagher A (2003) Voedingsgeïnduceerde dopamien-vrystelling in dorsale striatum korreleer met maaltydvriendelikheidsgraderings by gesonde menslike vrywilligers. NeuroImage 19: 1709-1715.
  157. 7. Bassero V, Di Chiara G (1999) Differensiële responsiwiteit van dopamien-oordrag na voedselstimulasie in kernkomponente-dop / kernkompartemente. Neurowetenschappen 89: 637-41.
  158. 8. Roitman MF, Wheeler RA, Wightman RM, Carelli RM (2008) Real-time chemiese response in die nucleus accumbens onderskei lonende en aversive stimuli. Natuur Neurowetenskap 11: 1376-7.
  159. 9. Brown HD, McCutcheon JE, Cone JJ, Ragozzino ME, Roitman MF (2011) Primêre voedselbeloning en beloning-voorspellende stimuli roep verskillende patrone van fasiese dopamien sein deur die striatum. Die Europese Tydskrif vir Neurowetenschappen 34: 1997-2006.
  160. 10. Grabenhorst F, Rolls ET, Parris BA, d 'Souza AA (2010) Hoe die brein die beloningswaarde van vet in die mond verteenwoordig. Serebrale Korteks 20: 1082-91.
  161. 11. Johnson PM, Kenny PJ (2010) Dopamien D2 reseptore in verslawing-agtige beloning disfunksie en kompulsiewe eet in vetsugtige rotte. Natuur Neurowetenskap 13: 635-41.
  162. 12. Vuketiese Z, Carlin JL, Totoki K, Reyes TM (2012) Epigenetiese dysregulering van die dopamienstelsel in dieetgeïnduceerde vetsug. Blaar van neurochemie 120: 891-84.
  163. 13. Stok E, Spoor S, Bohon C, Klein DM (2008) Die verhouding tussen vetsug en stompe stralingsreaksie op voedsel word gemodereer deur TaqIA A1-allel. Wetenskap 322: 449-452.
  164. 14. Cragg SJ, Rice ME (2004) Dans verby die DAT by 'n DA-sinaps. Neigings in Neurowetenskap 27: 270-7.
  165. 15. Dreyer JK, Herrik KF, Berg RW, Hounsgaard JD (2010) Invloed van fasiese en toniese dopamien vrystelling op reseptoraktivering. Die Tydskrif vir Neurowetenskap 30: 14273-83.
  166. 16. Figlewicz DP, Szot P, Chavez M, Woods SC, Veith RC (1994) Intraventrikulêre insulien verhoog dopamien-vervoerder mRNA in rat VTA / substantia nigra. Breinnavorsing 644: 331-4.
  167. 17. Mebel DM, Wong JC, Dong YJ, Borgland SL (2012) Insulien in die ventrale tegmentale area verminder hedoniese voeding en onderdruk dopamien konsentrasie deur verhoogde heropname. Die Europese Tydskrif vir Neurowetenschappen 36: 2336-46.
  168. 18. Chen PS, Yang YK, Yeh TL, Lee IH, Yao WJ, et al. (2008) Korrelasie tussen liggaamsmassa-indeks en beskikbaarheid van striatale dopamien-vervoerder in gesonde vrywilligers - 'n SPECT-studie. NeuroImage 40: 275-9.
  169. 19. Suid-T, Huang XF (2008) Hoë vet dieet blootstelling verhoog dopamien D2 reseptor en verminder dopamien transporter reseptor bindend digtheid in die kern accumbens en caudate putamen van muise. Neurochemiese navorsing 33: 598-605.
  170. 20. Spoed N, Saunders C, Davis AR, Owens WA, Matthies HJG, et al. (2011) Gestremde striatale Akt-signalering versteur dopamienhomeostase en verhoog voeding. Ploe een 6: e25169.
  171. 21. Roitman MF, Wescott S, Cone JJ, McLane MP, Wolfe HR (2010) MSI-1436 verminder die akute voedsel inname sonder om die dopamien transporter te beïnvloed. Farmakologie Biochemie en Gedrag 97: 138-43.
  172. 22. Heien MLAV, Johnson MA, Wightman RM (2004) Oplossing van neurotransmitters opgespoor deur vinnige scan sikliese voltammetrie. Analitiese chemie 76: 5697-704.
  173. 23. Sinkala E, McCutcheon JE, Schuck MJ, Schmidt E, Roitman MF, et al. (2012) Elektrode kalibrasie met 'n mikrofluidiese vloei sel vir vinnige-skandering sikliese voltammetrie. Lab op 'n Chip 12: 2403-08.
  174. 24. Yorgason JT, España RA, Jones SR (2011) Demon voltammetrie en analise sagteware: analise van kokaïen-geïnduceerde veranderings in dopamien sein met behulp van verskeie kinetiese maatreëls. Blaar van neurowetenschappen 202: 158-64.
  175. 25. Paxinos G, en Franklin KBJ (2004) Die rotbrein in stereotaksiese koördinate. San Diego, CA: Academic Press.
  176. 26. Hallett PJ, Collins TL, Standaert DG, Dunah AW (2008) Biochemiese fraksionering van breinweefsel vir studies van reseptor verspreiding en handel. Huidige protokolle in neurowetenskap / redaksionele raad, Jacqueline N. Crawley ... [et al.] Hoofstuk 1: Eenheid 1.16.
  177. 27. Meng SZ, Ozawa Y, Itoh M, Takashima S (1999) Ontwikkelings- en ouderdomverwante veranderinge in dopamien-vervoerder, en dopamien D1- en D2-reseptore in menslike basale ganglia. Breinnavorsing 843: 136-144.
  178. 28. Moll GH, Mehnert C, Wicker M, Bock N, Rothenberger A, et al. (2000) Ouderdomsverwante veranderinge in die digtheid van presynaptiese monoamientransporteurs in verskillende streke van die rotbrein vanaf die vroeë jeugdige lewe tot laat volwassenheid. Ontwikkelingshiernavorsing 119: 251-257.
  179. 29. Cruz-Muros I, Afonso-Oramas D, Abreu P, Perez-Delgado MM, Rodriguez M, et al. (2009) Veroudering effekte op die dopamien vervoerder uitdrukking en kompenserende meganismes. Neurobiologie van Veroudering 30: 973-986.
  180. 30. Badanich KA, Adler KJ, Kirstein CL (2006) Adolessente verskil van volwassenes in kokaïen-gekondisioneerde plekvoorkeur en kokaïen-geïnduceerde dopamien in die nucleus accumbens septi. Europese Tydskrif vir Farmakologie 550: 95-106.
  181. 31. Jones SR, Garris PA, Kilts CD, Wightman RM (1995) Vergelyking van dopamien opname in die basolaterale amigdaloid-kern, caudate-putamen, en die kern van die rat. Blaar van neurochemie 64: 2581-9.
  182. 32. Rao A, Simmons D, Sorkin A (2011) Differensiële subcellulêre verspreiding van endosomale kompartemente en die dopamienvervoerder in dopaminerge neurone. Molekulêre en Sellulêre Neurowetenskap 46: 148-58.
  183. 33. Wang GJ, Volkow ND, Thanos PK, Fowler JS (2009) Imaging van brein dopamien paaie: implikasies vir die verstaan ​​van vetsug. Tydskrif van verslawing medisyne 3: 8-18.
  184. 34. Levin BE, Dunn-Meynell AA, Balkan B, Keesey RE (1997) Selektiewe teling vir dieetgeïnduceerde vetsug en weerstand in Sprague-Dawley-rotte. Amerikaanse Tydskrif vir Fisiologie 273: R725-730.
  185. 35. Morris JK, Bomhoff GL, Gorres BK, Davis VA, Kim J, et al. (2011) Insulien weerstand verlaag nigrostriatale dopamienfunksie. Eksperimentele neurologie 231: 171-80.
  186. 36. Wellman PJ, Nasie JR, Davis KW (2007) Waardedaling van die verkryging van kokaïen-selfadministrasie by rotte wat op 'n hoë vet dieet gehandhaaf word. Farmakologie, biochemie en gedrag 88: 89-93.
  187. 37. Thanos PK, Kim R, Cho J, Michaelides M, Anderson BJ, et al. (2010) Vetsugbestande S5B-rotte het 'n groter voorkeur aan kokaïen gekondisioneer as die obesitasgevoelige OM-rotte. Fisiologie en gedrag 101: 713–8.
  188. 38. Venton BJ, Seipel AT, Phillips PEM, Wetsel WC, Gitler D, et al. (2006) Kokaïen verhoog dopamien vrystelling deur die mobilisering van 'n synapsien afhanklike reserwe poel. Die Tydskrif vir Neurowetenskap 26: 4901-04.
  189. 39. Steffenson SC, Taylor SR, Horton ML, Barber EN, Lyte LT (2008) Kokaïen versteur dopamienneurone in die ventrale tegmenale area via gebruiksafhanklike blokkade van GABA neurone spanning sensitiewe natrium kanale. Europese Tydskrif vir Neurowetenschappen 28: 2028-2040.
  190. 40. Shi WX, Pun CL, Zhou Y (2004) Psigostimulante veroorsaak lae frekwensie-ossillasies in die afbrandaktiwiteit van dopamienneurone. Neuropsigofarmacologie 29: 2160-2167.
  191. 41. Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Lipton JW, et al. (2008) Blootstelling aan verhoogde vlakke van dieetvet verswak psigostimulerende beloning en mesolimbiese dopamienomset in die rot. Gedrags neuro-wetenskap 122: 1257-63.
  192. 42. Geiger BM, Haburcak M, Avena NM, Moyer MC, Hoebel BG, et al. (2009) Tekorte van mesolimbiese dopamien-neurotransmissie in dieet-vetsug. Neurowetenschappen 159: 1193-9.
  193. 43. Hyman SE, Malenka RC, Nestler EJ (2006) Neurale meganismes van verslawing: Die rol van beloningverwante leer en geheue. Addiction 29: 565-598.
  194. 44. Simon GE, Von Korff M, Saunders K, Miglioretti DL, Crane PK, et al. (2006) Vereniging tussen vetsug en psigiatriese versteurings in die Amerikaanse volwasse bevolking. Argief van Algemene Psigiatrie 63: 824-30.
  195. 45. Torres GE, Carneiro A, Seamans K, Fiorentini C, Sweeney A, et al. (2003) Oligomerisering en handel van die menslike dopamien vervoerder. Die Tydskrif vir Biologiese Chemie 278: 2731-2739.
  196. 46. Li LB, Chen N, Ramamoorthy S, Chi L, Cui XN, et al. (2004) Die rol van N-glikosilering in funksie en oppervlakhandel van die menslike dopamien transporter. Die Tydskrif vir Biologiese Chemie 279: 21012-21020.
  197. 47. Afonso-Oramas D, Cruz-Muros I, de la Rosa DA, Abreu P, Giraldez T, et al. (2009) Dopamien vervoerder glikosilering korreleer met die kwesbaarheid van dopaminergiese selle in die middel van die brein in parkinson se siekte. Neurobiologie van Siekte 36: 494-508.
  198. 48. Roitman MF, Stuber GD, Phillips PEM, Wightman RM, Carelli RM (2004) Dopamien funksioneer as 'n subsekondemoduleerder van voedsel soek. Die Tydskrif vir Neurowetenskap 24: 1265-71.
  199. 49. McCutcheon JE, Beeler JA, Roitman MF (2012) Sukrose-voorspellende aanwysers veroorsaak groter fasiese dopamien vrystelling as sackarien-voorspellende aanwysers. Synapse 66: 346-51.
  200. 50. Flagel SB, Clark JJ, Robinson TE, Mayo L, Czuj A, et al. (2011) 'n Selektiewe rol vir dopamien in stimulus-beloning leer. Natuur 469: p53-7d.
  201. 51. Szczypka MS, Mandel RJ, Donahue BA, Snyder RO, Leff SE, et al. (1999) Virale geen lewering herstel selektief voeding en verhoed dat dodamien van dopamien-gebrek aan muise. Neuron 22: 167-78.
  202. 52. Di Ciano P, Kardinale RN, Cowell RA, Little SJ, Everitt BJ (2001). Verskillende betrokkenheid van NMDA, AMPA / kainate, en dopamienreseptore in die kernkomponent-kern in die verkryging en verrigting van pavloviese benaderingsgedrag. Blaar van Neurowetenskap 21: 9471-9477.
  203. 53. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PRL, Kay K, Thwin MT, et al. (2010) Regulering van parkinsoniese motoriese gedrag deur optogenetiese beheer van basale ganglia-kringe. Natuur 466: 622-6.
  204. 54. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012) Spesifieke rolle vir direkte en indirekte stralingstreekse neurone in versterking. Natuur Neurowetenskap 15: 816-818.