Sirkulerende MicroRNA-uitdrukkingsvlakke geassosieer met Internet Gaming Disorder (2018)

. 2018; 9: 81.

Gepubliseer aanlyn 2018 Mar 12. doi:  10.3389 / fpsyt.2018.00081

PMCID: PMC5858605

PMID: 29593587

Abstract

agtergrond

Verslawende gebruik van die internet en aanlyn speletjies is 'n potensiële psigiatriese versteuring genaamd Internet gaming disorder (IGD). Veranderde mikroRNA (miRNA) uitdrukkingsprofiele is in bloed en breinweefsel van pasiënte met sekere psigiatriese afwykings aangemeld en as biomerkers voorgestel. Daar was egter geen verslae oor bloed miRNA-profiele in IGD nie.

Metodes

Om IGD-geassosieerde miRNA's te ontdek, het ons die miRNA-uitdrukkingsprofiele van 51 monsters (25 IGD en 26 kontroles) ontleed met behulp van die TaqMan Low Density miRNA Array. Vir validering het ons kwantitatiewe omgekeerde transkripsie PCR uitgevoer met 36 onafhanklike monsters (20 IGD en 16 kontroles).

Results

Deur ontdekking en onafhanklike validering het ons drie miRNA's (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) geïdentifiseer wat aansienlik in die IGD-groep afgereguleer is. Individue met al drie miRNA-veranderings het 'n baie hoër risiko van IGD gehad as dié met geen verandering [kansverhouding (OR) 22, 95% CI 2.29-211.11], en die OK's het dosis afhanklik met aantal veranderde miRNA's toegeneem. Die voorspelde teikengene van die drie miRNA's is met neurale weë geassosieer. Ons het die proteïenuitdrukking van die drie stroomaf-teikengene deur western klad ondersoek en bevestig dat uitdrukking van GABRB2 en DPYSL2 aansienlik hoër was in die IGD-groep.

Gevolgtrekking

Ons het waargeneem dat uitdrukkings van hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p en hsa-miR-652-3p in die IGD-pasiënte afgereguleer is. Ons resultate sal nuttig wees om die patofisiologie van IGD te verstaan.

sleutelwoorde: Internetspelversteuring, mikroRNA, biomerker, verslawing, westerse klad

Inleiding

Verslawende gebruik van die internet en internet-gebaseerde speletjies is nie net 'n sosiale verskynsel in lande met uitgebreide internettoegang-infrastruktuur nie, maar 'n potensiële psigiatriese versteuring genaamd internetspelversteuring (IGD) (-). Volgens epidemiologiese verslae verskil die voorkomssyfers van IGD by adolessente tussen lande en wissel van 0.8 tot 26.7% (). Studies toon veral voorkomssyfers van meer as 10% by adolessente in baie Asiatiese lande soos Suid-Korea, China, Taiwan, Hong Kong en Singapoer (). IGD word geassosieer met inkorting in kognisie, psigo-sosiale verhoudings en daaglikse lewe; byvoorbeeld dalende akademiese of beroepsprestasie (-). IGD is nou ingesluit in Afdeling III (Voorwaardes vir Verdere Studie) van die vyfde hersiening van die Diagnostiese en Statistiese Handleiding van Geestesversteurings (DSM-V) (). Ten spyte van die klinies-sosiale belangrikheid daarvan, is min bekend oor die molekulêre genetiese meganisme agter IGD.

Onlangse grootskaalse tweelingstudies het 'n genetiese agtergrond tot IGD voorgestel (, ). Vink et al. individuele verskille in kompulsiewe internetgebruik met 5,247 48 monosigotiese en tweesiggotiese adolessente tweelinge in die Nederlandse Tweelingregister ondersoek en gerapporteer dat XNUMX% van die verskille deur genetiese faktore verklaar is (). Li et al. het 825 pare Chinese adolessente tweelinge waargeneem en gerapporteer dat genetiese faktore 58–66% van die verskille verklaar (). Gevolglik, polimorfismes van die gene betrokke by neurotransmissie, kognisie en aandag soos dopamienreseptor D2-geen (DRD2), katekolamien-O-metieltransferase geen (COMT), serotonien vervoerder geen (5HTTLPR), en cholinergiese reseptor nikotien alfa 4 geen (CHRNA4) is na berig word aansienlik geassosieer met internetverslawing (-). Onlangs het Kim et al. variante van meer as 100 kandidaatgene wat verband hou met produksie, aksie en metabolisme van neurotransmitters gekeur deur volgende generasie volgordebepaling analise en berig dat rs2229910 van NTRK3 geen word geassosieer met IGD ().

Benewens die genetiese faktore, is dit ook bekend dat neurogedragsfenotipes epigeneties beheer word deur nie-koderende RNA's insluitend mikroRNA's (miRNA's) (, ). miRNA's is klein nie-koderende enkelstring-RNA-molekules (ongeveer 20–23 nukleotiede lank), wat die uitdrukking van proteïenkoderende gene negatief reguleer deur mRNA's af te breek en 'n kritieke rol speel in die patofisiologiese proses van diverse siektes (). Bewyslyne het getoon dat miRNA's volop in die menslike sentrale senuweestelsel (SSS) voorkom en die uitdrukkingsvlakke van hul teikengene, wat betrokke is by die ontwikkeling en rypwording van SSS-stelsel, fyn instel (). Inderdaad, onlangse studies het aan die lig gebring dat miRNA-uitdrukkingsprofiele in breinweefsel van pasiënte met psigiatriese versteurings verander word, wat daarop dui dat hul uitdrukkingsprofiele biomerkers vir psigiatriese versteurings kan wees (, , ). Byvoorbeeld, deur nadoodse ontleding, Lopez et al. het berig dat uitdrukking van miR-1202, wat die uitdrukking van metabotropiese glutamaatreseptor-4-geen reguleer en die reaksie op antidepressant voorspel, afgereguleer is in prefrontale korteksweefsels van pasiënte met ernstige depressieversteuring (). In terme van biomerker sifting, hierdie benadering het 'n duidelike beperking omdat die uitvoering van 'n biopsie van SSS weefsel vir sifting onmoontlik is. Aangesien miRNA's in bloed (plasma of serum) opgespoor kan word, het sirkulerende miRNA's 'n besliste voordeel as nie-indringende biomerkers in neuropsigiatriese versteurings. Daar was egter tot dusver geen studies oor sirkulerende miRNA-profiele in IGD nie. Beter begrip van sirkulerende miRNA-uitdrukkingsprofiele kan help om die meganisme van IGD-ontwikkeling te verduidelik en kliniese vertaling te vergemaklik.

In hierdie studie het ons daarop gemik om IGD-geassosieerde miRNA-merkers te identifiseer deur differensieel uitgedrukte plasma miRNAs tussen die IGD en kontrolegroepe waar te neem en hul biologiese implikasies ondersoek.

Materiaal en metodes

Studie Vakke

Ons het 3,166 12 tieners (18–251 jaar oud) ondervra deur DSM-V IGD-telling te gebruik. Onder hulle is 168 (83 mans en XNUMX vroue) gediagnoseer as IGD volgens die DSM-V-kriteria (). Altesaam 91 individue (49 IGD'e en 42 kontroles) het die ingeligte toestemming vir hierdie studie verskaf. Onder hulle is vier individue volgens die uitsluitingskriteria uitgesluit. Uiteindelik is 87 individue (45 IGD-vakke en 42 gesonde kontrole-individue) vir hierdie studie ingeskryf. Onder hulle is 51 deelnemers (25 IGD-pasiënte en 26 kontroles) gewerf as die ontdekkingsstel van 2014 tot 2016. Die ander 36 deelnemers (20 IGD-pasiënte en 16 kontroles) is gewerf as die onafhanklike valideringstel vanaf 2016. Alle deelnemers was Koreaans individue, ingeskryf by Seoul St. Mary's Hospitaal (Seoul, Suid-Korea) en Seoul National University Boramae Hospitaal (Seoul, Suid-Korea). Alle deelnemers het 'n gestruktureerde onderhoud deur 'n psigiater ondergaan, gebaseer op die Koreaanse Kiddie-skedule vir affektiewe versteurings en skisofrenie (K-SADS-PL) (). Alle deelnemers het die Blokontwerp en Woordeskat-subtoetse van die Koreaans-Wechsler Intelligensieskaal vir Kinders voltooi, 4de uitgawe (K-WISC-IV) (). Impulsiwiteit is geassesseer deur Barratt Impulsiveness Scale (BIS) (). Behavioural Inhibition System (BInS) en Behavioral Activation System (BAS) skale is gemeet om persoonlikheidsdimensie (). Uitsluitingskriteria sluit in vorige of huidige groot mediese afwykings (bv. diabetes mellitus), neurologiese versteuring (bv. beslagleggingsversteurings, kopbesering), psigiatriese versteurings (bv. ernstige depressiewe versteuring, angsversteurings), verstandelike gestremdheid of enige middelmisbruik (bv. , tabak, dagga, alkohol). Die algemene kenmerke van die studievakke word in Tabel opgesom Table1.1. Hierdie studie is goedgekeur deur die Institusionele Hersieningsraad van die Katolieke Universiteit Mediese Kollege van Korea (MC16SISI0120). Alle deelnemers en hul ouers het skriftelike ingeligte toestemming gegee.

Tabel 1

Algemene kenmerke van die studievakke.

 DiscoveryvalideringGekombineer
 
 BeheerIGDP-waardeBeheerIGDP-waardeBeheerIGDP-waarde
N2625 1620 4245 
Ouderdom (jare)
Mediaan (min-maksimum)13 (12 - 17)13 (12 - 15)0.75915 (13 - 18)14.5 (12 - 18)0.62814 (12 - 18)14 (12 - 18)0.509
Weeklikse internetspeletjie-ure (h)
Mediaan (min-maksimum)5.25 (2 - 17)18 (6 - 46)1.27E−6a5.5 (2 - 23)8 (1 - 112)0.3745.5 (2 - 23)14 (1 - 112)1.63E−5a
Maandelikse huishoudelike inkomste (miljoen KRW)
Mediaan (min-maksimum)5 (1 - 9)3 (1 - 9)0.5884 (4 - 4)2 (2 - 2)1.0005 (1 - 9)3 (1 - 9)0.460
Onderwys (jare)
Mediaan (min-maksimum)8 (7 - 9)8 (7 - 9)0.58412 (12 - 12)6 (6 - 13)0.3058 (7 - 12)8 (6 - 13)0.269
K-WISC: blokontwerp
Mediaan (min-maksimum)10.5 (4 - 17)10 (4 - 16)0.54410 (3 - 16)12.5 (4 - 15)0.12510 (3 - 17)11 (4 - 16)0.598
K-WISC: woordeskat
Mediaan (min-maksimum)9 (5 - 17)7 (5 - 13)0.1749.5 (8 - 15)11.5 (5 - 15)0.5959 (5 - 17)9 (5 - 15)0.527
KS
Mediaan (min-maksimum)24 (17 - 36)37 (22 - 51)3.81E−6a29 (17 - 34)59 (22 - 108)1.2E−5a25 (17 - 36)40 (22 - 108)2.05E−10a
BIS
Mediaan (min-maksimum)63 (35 - 75)67.5 (45 - 81)0.08061 (45 - 79)63 (32 - 82)0.83562 (35 - 79)65 (32 - 82)0.240
BAS
Mediaan (min-maksimum)31 (15 - 40)31 (13 - 51)0.55836.5 (22 - 48)34 (27 - 52)1.00032 (15 - 48)34 (13 - 52)0.637
BINS
Mediaan (min-maksimum)18 (10 - 26)17.5 (13 - 27)0.64218.5 (12 - 25)20 (13 - 21)0.13818 (10 - 26)19 (13 - 27)0.302
 

IGD, pasiënte met internetspeletjies; KS, Koreaanse internetverslawing geneigdheidskaal; BIS, Barratt Impulsiwiteitskaal; BAS, Gedragsaktiveringstelsel; BInS, Gedragsinhibisiestelsel; KRW, Koreaanse Won.

aP < 0.05 (Mann–Whitney–Wilcoxon-toets).

TaqMan Lae Digtheid miRNA Array (TLDA) Eksperimente

Perifere bloed is van elke deelnemer versamel en binne 4 uur na die laboratorium oorgeplaas om die bloedsellise te minimaliseer. Die monster is gesentrifugeer teen 3,000 10 rpm vir 50 minute by kamertemperatuur. Dan is supernatant (plasmalaag) versamel sonder om die bloedselle te besoedel. Sirkulerende miRNAs is onttrek met behulp van TaqMan miRNA ABC Purification Kit (Human Panel A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VSA) volgens die vervaardiger se instruksies. Kortliks, 100 µL plasmamonster en 100 µL ABC-buffer is gemeng. Na hibridisering met teikenspesifieke anti-miRNA magnetiese krale, is begrensde sirkulerende miRNA's uit die krale geëlueer met 381 µL elueringsbuffer. In die ontdekkingsfase is 51 miRNA's van 25 plasmamonsters (26 IGD's en 2.0 kontroles) ondersoek met behulp van die TaqMan miRNA ABC Purification Kit (Human Panel A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VSA) volgens die vervaardiger se instruksies. Megaplex omgekeerde transkripsie en pre-amplifikasie reaksies is uitgevoer om die hoeveelheid cDNA vir miRNA uitdrukking analise te verhoog deur MegaplexPreAmp Primers Human Pool A en TaqManPreAmp Master Mix (Thermo Fisher Scientific) te gebruik. Die TLDA-paneel A v7 (Thermo Fisher Scientific) is op die ViiA1.0.4 intydse PCR-stelsel (Thermo Fisher Scientific) uitgevoer om uitdrukking van die miRNAs te evalueer. Rou data is verwerk met behulp van ExpressionSuite Software vXNUMX (Thermo Fisher Scientific) om Ct-waardes vir elke miRNA te bepaal.

Data-analise vir TLDA

Ons het eers drempelsiklusse (Ct-waarde) van elke miRNA gemeet. miRNA's met 'n Ct-waarde >35 is as onopspoorbaar beskou en uitgesluit van daaropvolgende analise. Alle Ct-waardes is genormaliseer na die Ct-waarde van miR-374b (ΔCt-waarde), een van die mees stabiele uitgedrukte miRNA's wat in menslike plasma sirkuleer (). 'n Log2 vou-verandering verhouding (ΔΔCt waarde) van uitdrukking is bereken deur gebruik te maak van gemiddelde waardes van kontrole monsters as 'n kalibreerder in die HTqPCR pakket in Bioconductor (). Die relatiewe kwantifisering (RQ) van elke miRNA-teiken is gedefinieer as 2−ΔΔCt. Vir hipotetiese toetsing van die verskil in uitdrukking tussen twee groepe, het ons surrogaatveranderlike analise (SVA) toegepas om heterogeniteite soos bondeleffekte vas te lê in die eksperimente met behulp van die sva pakket in Bioconductor (). miRNA's met 'n P-waarde <0.05 is beskou as betekenisvol verskillend tussen twee groepe.

Geneset-verrykingsanalise

Vir genestelverrykingsanalise het ons ToppFun in ToppGene Suite () om aansienlik verrykte Gene Ontologie (GO) af te lei () terme, pad en siekte terme. As die inset vir hierdie benadering het ons 1,230 XNUMX voorspelde teikengene van die kandidaat miRNA's gebruik. Padanalise is gebruik om betekenisvolle weë van die voorspelde teikengene te vind volgens KEGG, BioCarta, Reactome, GeneMAPP en MSigDBin die ToppGene paaie. Die betekenis van funksionele verrykingsterme is bepaal op grond van die Bonferroni-aangepaste P-waarde.

Kwantitatiewe omgekeerde transkripsie PCR (qRT-PCR) Validasie en replikasie

Om die 10 miRNA's wat differensieel uitgedruk is in die ontdekkingstadium te bekragtig, is qRT-PCR uitgevoer met behulp van die TaqMan MicroRNA Assay (miR-15b-5p, #000390; miR-26b-5p, #000407; miR-29b-3p, # 000413; miR-125b-5p, #000449; miR-200c-3p, #002300; miR-337-5p, #002156; miR-411-5p, #001610; miR-423-5p, #002340-483, #5-002338; -652p, #3; en miR-002352-7p, #4366596) en die ViiA2-stelsel (Life Technologies) volgens die vervaardiger se protokol. Tien nanogram van totale RNA is omgeskakel na eerste-string cDNA met miRNA-spesifieke primers met behulp van die TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (#XNUMX, Life Technologies), gevolg deur intydse PCR met TaqMan Probes. Die RQ van elke miRNA is gedefinieer as XNUMX−ΔCt, waar ΔCt die verskil in drempelsiklusse vir die betrokke monster is, genormaliseer teen die endogene miRNA (miR-374b-5p, #001319). Alle PCR-reaksies is in drievoud uitgevoer, en hul Ct-waardes is gemiddeld. Ons het 'n log2 vou-verandering verhouding (ΔΔCt) van elke miRNA bereken op dieselfde manier as in die skikking-gebaseerde analise. 'n Nie-parametriese Mann-Whitney-Wilcoxon-toets is uitgevoer om die verskille in uitdrukkingsvlakke van miRNA's in twee groepe met 'n drempel te toets P-waarde van 0.05.

Western Blot Analysis

Elke serummonster is eers uitgeput van die top 14 hoë-oorvloed proteïene (albumien, immunoglobulien G, immunoglobulien A, serotransferrien, haptoglobien, alfa-1 antitripsien, fibrinogeen, alfa-2 makroglobulien, alfa-1 suur glikoproteïen, immunoglobulien M AI, apolipoproteïen , apolipoproteïen A-II, komplement C3 en transtiretien) deur gebruik te maak van die MARS-14-kolom (4.6 × 50 mm, Agilent Technology, Santa Clara, CA, VSA) voor western-klat-analise. Die ongebonde fraksie verkry vanaf die MARS-14 kolom is gekonsentreer deur gebruik te maak van 'n Amicon Ultracel-3 sentrifugale filter (3 kDa afsnypunt), en dan is die proteïenkonsentrasie met behulp van die bisinchoniensuur metode bepaal. Dieselfde hoeveelhede (van 10 tot 30 µg) kontrole- en IGD-serummonsters is geskei op 'n 4-20% Mini-PROTEAN TGX voorafvervaardigde gel (Bio-Rad, CA, VSA) en oorgedra na 'n polivinielideendifluoriedmembraan. Vervolgens is die membraan geblokkeer in TBS-T (190 mM NaCl, 25 mM Tris-HCl, pH 7.5 en 0.05% Tween 20) met 5% nie-vet droë melk by kamertemperatuur vir 30 min. Die membrane is daarna geïnkubeer met primêre teenliggaampies teen DPYSL2 (1:500, Novus Biologicals, Littleton, CO, VSA), GABRB2 (1:1000, Abcam, Cambridge, MA, VSA), en CNR1 (1:100, Santa Cruz Biotechnology) , Inc., Santa Cruz, CA, VSA), DUSP4 (1:500, MybioSource, San Diego, CA, VSA), en PI15 (1:500, MybioSource, San Diego, CA, VSA) in TBS-T met 5 % nie-vet droë melk by 4°C oornag, en dan met toepaslike sekondêre teenliggaampies óf bees-teenmuis (1:1,000 1, Santa Cruz Biotegnologie) óf bok-anti-konyn (1,000:1 1, Cell Signaling, Beverly, MA, VSA) ) gekonjugeer aan peperwortelperoksidase by kamertemperatuur vir XNUMX uur. Seinopsporing is uitgevoer met behulp van chemiluminessensie met ECL-reagens (GE healthcare, Piscataway, NJ, VSA). Ons het die westelike klad-resultate gekwantifiseer met behulp van die TotalLab XNUMXD-analise sagteware (Nie-lineêre Dynamics, Newcastle upon Tyne, VK). Dan is die densitometrie verhouding waarde bereken deur die densitometrie waarde van elke monster te deel soos elders beskryf (). As 'n kontrole vir normalisering, is 'n serummonster saamgevoeg uit 46 IGD en kontrolemonsters vir elke eksperiment gebruik. Statistiese betekenisvolheid is bepaal met behulp van 'n nie-parametriese Mann-Whitney-Wilcoxon-toets met 'n drempel P-waarde van 0.05.

Results

Eienskappe van die studievakke

Die demografiese en kliniese kenmerke van die studievakke word in Tabel getoon Table1.1. Toe ons die IGD- en kontrolegroepe vergelyk het volgens die Koreaanse internetverslawing-neigingskaal (K-Skaal) soos elders beskryf (, ), het die IGD-groep 'n aansienlik hoër mediaan K-skaalwaarde getoon as die kontrolegroep (37 vs. 24, P = 3.81 × 10-6) (Tabel (Table1) .1). Mediaan weeklikse tyd bestee aan internetspeletjies in die IGD-groep was aansienlik langer as dié van kontroles (18 vs. 5.25 uur, P = 1.27 × 10-6). Terwyl daar geen betekenisvolle verskil tussen twee groepe was in ouderdom, maandelikse huishoudelike inkomste, duur van opvoeding, blokontwerp en woordeskatsubtoetsresultate van die K-WISC, BIS, BInS en BAS nie.

Differensieel uitgedrukte miRNA's tussen IGD en kontroles

Om IGD-geassosieerde miRNA's te ontdek, het ons 'n tweestap-benadering (ontdekking en onafhanklike validering) aangeneem. Die studie-ontwerp en algehele strategie word in Figuur S1 in Aanvullende Materiaal geïllustreer. In die ontdekkingstadium het ons miRNA-uitdrukkingsprofiele van 51 monsters (25 IGD's en 26 kontroles) ontleed met behulp van die miRNA-skikking wat 384 miRNA's bevat. Daar is gevind dat uitdrukkingsvlakke van 10 miRNAs aansienlik verskil tussen die IGD- en kontrolegroepe (tabel (Table2) .2). Relatiewe uitdrukkingsvlakke van hierdie 10 miRNA's word in Figuur getoon Figure1.1. Onder hulle is twee (hsa-miR-423-5p en hsa-miR-483-5p) opgereguleer en agt (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-411-5p en hsa-miR-652-3p) is in die IGD-groep afgereguleer.

Tabel 2

Differensieel uitgedrukte mikroRNA's (miRNA's) en vouveranderinge.

miRNADiscoveryvalideringGekombineer
 
 P-waardeVou veranderingP-waardeVou veranderingP-waardeVou verandering
hsa-miR-15b-5p0.0330.8290.6941.1190.3810.947
hsa-miR-26b-5pa0.0080.8710.0490.8410.0130.857
hsa-miR-29b-3p0.0050.4000.5601.1870.0890.647
hsa-miR-125b-5p0.0210.5820.2900.9500.0690.723
hsa-miR-200c-3pa0.0110.3360.0030.5422.93 × 10-50.415
hsa-miR-337c-5p0.0090.3850.5820.8720.0200.553
hsa-miR-411-5p0.0040.3220.3361.2820.1580.595
hsa-miR-423-5p0.0261.3870.1890.9550.5181.175
hsa-miR-483-5p0.0181.8610.7651.4130.2111.647
hsa-miR-652-3pa0.0190.7150.0490.8770.0110.782
 

amiRNA's het op 'n konsekwente wyse aansienlik verander in beide ontdekkings- en valideringsstelle.

 

'N eksterne lêer wat 'n prentjie, illustrasie, ens. Bevat. Voorwerpnaam is fpsyt-09-00081-g001.jpg.

Relatiewe uitdrukkingsvlakke van 10 differensieel uitgedrukte miRNA's. Relatiewe kwantifisering (RQ) is genormaliseer na miR-374b-5p.

qRT-PCR Validasie van die kandidaat miRNA's

Om die 10 kandidaat-miRNA's te bekragtig, het ons qRT-PCR uitgevoer met 'n onafhanklike valideringsstel (20 IGD's en 16 kontroles) (Tabel S1 in aanvullende materiaal). Drie van hierdie miRNA's (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p en hsa-miR-652-3p) is aansienlik afgereguleer in die IGD-groep van die validasiestel (tabel (Table2) .2). Drie ander miRNA's (hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-125b en hsa-miR-423-5p) is ook in die IGD-groep afgereguleer, maar nie beduidend nie. Oorblywende vier miRNA's (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-411-5p en hsa-miR-423-5p) is teenoorgesteld in die validasiestel uitgedruk. Toe ons die ontdekkings- en valideringsstelle gekombineer het ('n totaal van 45 IGD-vakke en 42 kontroles), was die drie bekragtigde miRNA's konsekwent betekenisvol (tabel (Table2) .2). Gedetailleerde inligting, chromosomale liggings, volwasse volgordes en uitdrukkingsvlakke in die SSS van hierdie drie miRNAs is beskikbaar in Tabel S2 in aanvullende materiaal.

Sinergistiese effek van gelyktydige verandering van die drie miRNA's op IGD-risiko

Om die gekombineerde effek van die drie miRNA's te evalueer, het ons die kansverhoudings (OR's) van die vier subgroepe (met 0, 1, 2 of 3 miRNA-veranderings) waargeneem. miRNA-verandering is gedefinieer deur die RQ-waarde soos beskryf in Afdeling "Materiaal en metodes.” Omdat al drie miRNAs-merkers in die IGD-groep afgereguleer is, is 'n miRNA waarvan die RQ-waarde laer was as een, as veranderde een uitgedaag. Gedetailleerde inligting van elke studievak se RQ-waarde vir die drie miRNA's is beskikbaar in Tabel S3 in Aanvullende Materiaal. Vir elke subgroep is kans bereken as die verhouding van aantal kontroles tot dié van IGD's, dan is elke OF bereken deur kans van elke subgroep te deel deur kans van die subgroep sonder enige miRNA-veranderings. Individue met drie miRNA veranderinge het 'n risiko 22 keer hoër getoon as dié sonder enige miRNA verandering (OF 22, 95% CI 2.29-211.11). OK's het 'n toenemende neiging getoon met die aantal veranderde miRNA's van 0 tot 3 (r2 = 0.996) (Figuur (Figure22).

'N eksterne lêer wat 'n prentjie, illustrasie, ens. Bevat. Voorwerpnaam is fpsyt-09-00081-g002.jpg.
Kansverhoudings (OR'e) volgens aantal afgereguleerde mikroRNA (miRNA) merkers. Waardes bo puntskattings is die OK's (95% vertrouensinterval).

GO en padanalise van teikengene van die kandidaat miRNA's

Om insig te kry in die funksies van die drie miRNA-merkers wat aansienlik in die IGD-groep afgereguleer is, is hul teikengene voorspel met behulp van die miRWalk 2.0-databasis (). Altesaam 1,230 22 gene is konsekwent as stroomaf-teikens voorspel deur vier algoritmes (miRWalk, miRanda, RNAXNUMX en Targetscan) met behulp van die miRWalk-databasis (-) (Tabel S4 in Aanvullende Materiaal). Genestelverrykingsanalise met ToppFun in ToppGene Suite het getoon dat die teikengene van daardie miRNA's aansienlik geassosieer is met neurale ontwikkelingsweë soos "Axon guidance" en GO terme soos "neurogenese" (Tabel S5 in aanvullende materiaal).

Uitdrukking van die voorspelde teikengene

Onder die stroomaf teikengene van die drie miRNAs, is 140 gelyktydig vir twee of meer miRNAs voorspel (Tabel S4 in aanvullende materiaal). Om te ondersoek of hul proteïenuitdrukkingsvlakke van die stroomaf-teikengene verskil tussen die IGD- en kontrolegroepe, het ons 2 gene gekies (DUSP4 en PI15), wat voorspel word as stroomaf teikens van al 3 miRNA's en bykomende 3 gene (GABRB2, DPYSL2, en CNR1) van dié wat vir 2 miRNA's voorspel is en westelike klad-analise uitgevoer met die plasmamonsters van 28 IGD's en 28 kontroles beskikbaar vir die eksperiment. Ons het die uitdrukkings van die vyf teikens tussen die IGD en kontrolegroepe vergelyk deur die bandintensiteit en area te meet soos elders beskryf (). Onder hulle, die uitdrukkingsvlakke van DPYSL2 (28 IGD's en 28 kontroles, P = 0.0037) en GABBR2 (27 IGD's en 28 kontroles, P = 0.0052) was aansienlik hoër in die IGD-groep (Figuur (Figure3) .3). Ons kon egter nie differensiële uitdrukkings van CNR1 waarneem nie (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443), en PI15 (P = 0.6346).

 

'N eksterne lêer wat 'n prentjie, illustrasie, ens. Bevat. Voorwerpnaam is fpsyt-09-00081-g003.jpg.

Westerse klad beelde en boks-dot-plots wat uitdrukking van (A) DPYSL2 en (B) GABRB2. Beide DPYSL2- en GABRB2-proteïene het beduidende verskille in hul uitdrukkingsvlakke tussen die internetspelversteuring (IGD) en kontrolemonsters (P-waarde <0.05). Die twee proteïene is op hoër vlakke in die IGD-monsters uitgedruk.

Bespreking

Daar is gerapporteer dat miRNAs betrokke is by neuronale ontwikkeling (, ), en differensiële uitdrukking van brein miRNAs word waargeneem in psigiatriese siektes soos skisofrenie (). Daarom is dit aanneemlik dat sirkulerende miRNA-profiele nuttige biomerkers vir IGD kan wees. Sirkulerende miRNA's is voorgestel as biomerkers vir diverse neuropsigiatriese versteurings (-); die molekulêre meganismes agter IGD-ontwikkeling is egter steeds grootliks onbekend ten spyte van die kliniese en sosiale belangrikheid daarvan. Spesifiek, daar was geen studies oor IGD-geassosieerde miRNA's nie. Die doel van hierdie studie was tweeledig. Eerstens het ons probeer om plasma miRNA's wat met IGD geassosieer word, te ontdek. Tweedens het ons die biologiese implikasie van die miRNA-kandidate geëvalueer deur proteïenuitdrukking en GO van stroomaf-teikengene te ondersoek. Deur genoomwye sifting van miRNA-uitdrukkingsprofiele en stroomaf-validering van die kandidate, het ons ontdek dat uitdrukking van drie miRNA's (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p en hsa-miR-652-3p) was aansienlik laer in IGD-pasiënte as kontroles. Alhoewel die uitdrukkingspatrone van ander sewe miRNA-kandidate nie in die validering gerepliseer is nie, kan dit vals negatief wees as gevolg van klein steekproefgrootte in hierdie studie. Na ons kennis is dit die eerste verslag oor die moontlikheid dat bloed miRNA-uitdrukkingsprofiele nuttige biomerkers vir IGD kan wees. Kombinasie van die drie miRNA-merkers kan dien as 'n minimaal indringende hulpmiddel vir vroeë identifikasie van mense met die risiko van IGD.

Daar is berig dat die miRNA's wat in hierdie studie geïdentifiseer is, betrokke is by diverse neuropsigiatriese versteurings. Uitdrukking van hsa-miR-200c in bloed is na berig word afgereguleer in verskeie psigiatriese versteurings soos skisofrenie () en ernstige depressiewe episodes (). miR-200c is na berig word meer uitgedruk in sinaptiese breuke as in totale voorbrein () en ook geassosieer word met neuronale seldood (). Gebaseer op hierdie vorige verslae, is miR-200c betrokke by neuro-ontwikkeling en kan dit met neuropsigiatriese versteurings geassosieer word as die uitdrukking daarvan versteur word. Verskeie studies het verband tussen miR-652 en risiko van neuropsigiatriese versteurings voorgestel. Soortgelyk aan ons benadering, om bloedbiomerkers vir skisofrenie te identifiseer, het Lai et al. het TLDA-analise uitgevoer met skisofreniepasiënte en normale kontroles, en gevind dat sewe miRNA's insluitend hsa-miR-652 differensieel uitgedruk is in skisofreniepasiënte (). In die daaropvolgende studie het hulle 'n voorspellingsmodel ontwerp deur die miRNA-uitdrukkingsdata te gebruik en skisofrenie suksesvol van normale beheer te onderskei (). Veranderde uitdrukking van hsa-miR-652 is ook waargeneem by alkoholiste (). Daar is gevind dat Hsa-miR-26b geaktiveer word tydens neuronale seldifferensiasie (). Perkins et al. gerapporteer dat hsa-miR-26b in die prefrontale korteks van skisofrenie pasiënte afgereguleer is ().

Alhoewel daar geen direkte bewyse is om die verband tussen die versteurde uitdrukking van hierdie miRNAs en die patofisiologie van IGD te ondersteun nie, kan ons aflei dat disregulering van hierdie miRNAs geassosieer kan word met die patofisiologie van IGD gebaseer op verskeie vorige verslae oor die stroomafgene wat ons voorspel het . Sommige van die stroomaf gene van die drie miRNAs soos GABRB2, CNR1, NRXN1, en DPYSL2 word geassosieer met neuropsigiatriese afwykings. Gamma-aminobottersuur (GABA) is 'n belangrike inhiberende neurotransmitter in die SSS. Disregulering van die GABA-reseptor, is betrokke by neuropsigiatriese versteurings, insluitend verslawing, angs en depressie (), wat ook die hoofkenmerke van IGD (). Genetiese polimorfismes in GABA-reseptorgene word geassosieer met alkoholverslawing en skisofrenie (, ). Dihidropirimidinase-agtige 2 (DPYSL2) is 'n lid van die collapsin response mediator proteïen familie, wat 'n rol speel in mikrotubuli samestelling, sinaptiese sein en regulering van aksonale groei. Gevolglik is hierdie molekule voorgestel as 'n biomerker vir psigiatriese versteurings (, ). Polimorfisme in die DPYSL2 geen is ook geassosieer met alkoholgebruiksversteuring (). Vorige verslae en ons data dui daarop dat ooruitdrukking van GABRB2 en DPYSL2, stroomaf teikens van die afgereguleerde miRNAs, implikasies het vir die patogenese van neuropsigiatriese versteurings, insluitend IGD. Cannabinoïde reseptor tipe 1 (CNR1) is 'n presinaptiese heteroreseptor wat neurotransmitter vrystelling moduleer en versteurings in cannabinoïde sein word geassosieer met verskeie neuropsigiatriese versteurings (). Genetiese polimorfisme van CNR1 Dit is bekend dat geen verband hou met substansafhanklikheid by Kaukasiërs (). In 'n rotmodel ontwrig aktivering van ventrale hippokampus CNR1 normale sosiale gedrag en kognisie (). Dit is bekend dat genetiese verandering in die NRXN-familie betrokke is by diverse neuropsigiatriese versteurings, insluitend verslawing ().

Om die biologiese implikasie van die drie miRNA-kandidate op 'n meer direkte manier te ondersoek, het ons proteïenuitdrukking van hul stroomaf teikengene ondersoek. As gevolg van die beperkte beskikbaarheid van plasmamonsters, van die 140 algemene kandidate (voorspel as stroomaf van 2 of meer miRNAs), het ons 5 teikens (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4 en PI15) deur westelike klad ondersoek en bevestig dat uitdrukking van GABRB2 en DPYSL2 was aansienlik hoër in die IGD-groep. Vorige verslae en ons data dui daarop dat ooruitdrukking van GABRB2 en DPYSL2, stroomaf teikens van die afwaarts gereguleerde miRNAs, implikasies kan hê vir die patogenese van neuropsigiatriese versteurings insluitend IGD. Die resultate van GO en padanalise van neurale ontwikkelingsweë ondersteun ook die neurobiologiese implikasie van die miRNA-merkers. Nog 'n interessante bevinding was die sinergistiese effek van gelyktydige verandering van die miRNAs. Individue met afregulering van al 3 miRNAs het 22 keer hoër risiko getoon as dié met geen afregulering, en die OKs het op 'n dosis-afhanklike wyse toegeneem. Alhoewel CI vir hierdie drie veranderinge wyd was as gevolg van beperkte steekproefgrootte, is die duidelike positiewe korrelasie (r2 = 0.996) ondersteun die sinergistiese effek van die drie miRNA's.

Alhoewel ons die IGD-geassosieerde miRNA-merkers ontdek het en individue met al drie miRNA-veranderings 'n risiko 22 keer hoër gehad het as dié sonder enige miRNA-veranderings, is daar verskeie beperkings in hierdie studie. Eerstens het die klein steekproefgrootte die waarskynlikheid verhoog om ander beduidende miRNA-merkers te mis. Tweedens, aangesien ons data nie genoeg was om te verduidelik of die plasma miRNA-profiele óf oorsaak óf gevolg is nie, kan ons nie die biologiese rolle van hierdie nie-indringende merkers in 'n kliniese omgewing bevestig nie. Verdere miRNA-profilering en hul stroomaf-geenanalise deur menslike breinweefsel van breinweefselbank te gebruik, kan 'n meer direkte antwoord gee. Breinweefselanalise met 'n spelversteuringsdiermodel sal ook nuttig wees. Derdens, as gevolg van die beperkte beskikbaarheid van plasmamonsters, het ons slegs vyf stroomaf kandidaat-molekules ondersoek. Om meer stroomaf-teikens met 'n groter monsterstel te verken, sal nuttig wees om die molekulêre meganisme van IGD verder te verstaan.

Samevattend, deur genoomwye sifting van miRNA-uitdrukkingsprofiele en onafhanklike validering, het ons drie IGD-geassosieerde miRNA's ontdek (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p en hsa-miR-652-3p). Daar word gerapporteer dat baie van hul stroomaf-gene betrokke is by diverse neuropsigiatriese versteurings, en eksperimentele validering van veranderde uitdrukking van hierdie stroomaf-gene ondersteun die implikasie van die miRNA's wat in hierdie studie geïdentifiseer is. Ons het gevind dat individue met afregulering van al drie miRNA 'n hoë risiko van IGD het. Saam met die bekende kliniese of omgewingsrisikofaktore en diagnostiese kriteria, kan ons bevindinge vroeë intervensie vergemaklik om mense met 'n hoër risiko van IGD te help.

Etiekverklaring

Hierdie studie is goedgekeur deur die Institusionele Hersieningsraad van die Katolieke Universiteit Mediese Kollege van Korea (MC16SISI0120). Alle deelnemers en hul ouers het skriftelike ingeligte toestemming gegee.

Skrywer Bydraes

ML en HC het ewe veel tot hierdie vraestel bygedra. ML, D-JK en Y-JC het die studie ontwerp. SJ, S-MC, YP, DC en JL het eksperimente en datagenerering uitgevoer. J-WC, S-HP, J-SC en D-JK het bloedmonsters en kliniese inligting ingesamel. ML, HC, S-HY en Y-JC het data ontleed. ML, HC, S-HY en Y-JC het die manuskrip beskryf. Y-JC het toesig gehou oor die projek.

Konflik van belangstelling

Die skrywers verklaar dat die navorsing gedoen is in die afwesigheid van enige kommersiële of finansiële verhoudings wat as 'n potensiële botsing van belange beskou kan word.

voetnote

 

Befondsing. Hierdie werk is ondersteun deur 'n toekenning van die breinnavorsingsprogram deur die Nasionale Navorsingstigting van Korea (NRF), befonds deur die Ministerie van Wetenskap en IKT en Toekomsbeplanning (NRF-2015M3C7A1064778).

 

 

Aanvullende materiaal

Die aanvullende materiaal vir hierdie artikel kan aanlyn gevind word by http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.

Verwysings

1. Jong KS. Internetverslawing: die opkoms van 'n nuwe kliniese versteuring. Cyber ​​Psychol Behav (1998) 1(3):237–44.10.1089/cpb.1998.1.237 [Kruisverwysing]
2. Petry NM, Rehbein F, Ko CH, O'Brien CP. Internetspelversteuring in die DSM-5. Curr Psychiatry Rep (2015) 17(9):72.10.1007/s11920-015-0610-0 [PubMed] [Kruisverwysing]
3. Cho H, Kwon M, Choi JH, Lee SK, Choi JS, Choi SW, et al. Ontwikkeling van die internetverslawingskaal gebaseer op die internetspelversteuringskriteria wat in DSM-5 voorgestel word. Addict Behav (2014) 39(9):1361–6.10.1016/j.addbeh.2014.01.020 [PubMed] [Kruisverwysing]
4. Kuss DJ, Griffiths MD, Karila L, Billieux J. Internetverslawing: 'n sistematiese oorsig van epidemiologiese navorsing vir die afgelope dekade. Curr Pharm Des (2014) 20(25):4026–52.10.2174/13816128113199990617 [PubMed] [Kruisverwysing]
5. Park M, Choi JS, Park SM, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, et al. Disfunksionele inligtingsverwerking tydens 'n ouditiewe gebeurtenisverwante potensiële taak by individue met internetspelversteuring. Transl Psychiatry (2016) 6:e721.10.1038/tp.2015.215 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
6. Lim JA, Lee JY, Jung HY, Sohn BK, Choi SW, Kim YJ, et al. Veranderinge van lewenskwaliteit en kognitiewe funksie by individue met internetspelversteuring: 'n 6-maande opvolg. Medicine (Baltimore) (2016) 95(50):e5695.10.1097/MD.0000000000005695 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
7. van Rooij AJ, Van Looy J, Billieux J. Internetspelversteuring as 'n formatiewe konstruk: implikasies vir konseptualisering en meting. Psychiatry Clin Neurosci (2016) 71(7):445–58.10.1111/pcn.12404 [PubMed] [Kruisverwysing]
8. Amerikaanse Psigiatriese Vereniging, redakteur. , redakteur. Diagnostiese en Statistiese Handleiding van Geestesversteurings: DSM-5. 5de uitg Arlington, VA: Amerikaanse Psigiatriese Vereniging; (2013).
9. Vink JM, van Beijsterveldt TC, Huppertz C, Bartels M, Boomsma DI. Oorerflikheid van kompulsiewe internetgebruik by adolessente. Addict Biol (2016) 21(2):460–8.10.1111/adb.12218 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
10. Li M, Chen J, Li N, Li X. 'n Tweelingstudie van problematiese internetgebruik: sy oorerflikheid en genetiese assosiasie met moeitevolle beheer. Twin Res Hum Genet (2014) 17(4):279–87.10.1017/thg.2014.32 [PubMed] [Kruisverwysing]
11. Han DH, Lee YS, Yang KC, Kim EY, Lyoo IK, Renshaw PF. Dopamiengene en beloningsafhanklikheid by adolessente met oormatige internetvideospeletjies. J Addict Med (2007) 1(3):133–8.10.1097/ADM.0b013e31811f465f [PubMed] [Kruisverwysing]
12. Lee YS, Han DH, Yang KC, Daniels MA, Na C, Kee BS, et al. Depressie-agtige kenmerke van 5HTTLPR-polimorfisme en temperament by oormatige internetgebruikers. J Affekteer Disord (2008) 109(1–2):165–9.10.1016/j.jad.2007.10.020 [PubMed] [Kruisverwysing]
13. Montag C, Kirsch P, Sauer C, Markett S, Reuter M. Die rol van die CHRNA4-geen in internetverslawing: 'n geval-kontrole studie. J Addict Med (2012) 6(3):191–5.10.1097/ADM.0b013e31825ba7e7 [PubMed] [Kruisverwysing]
14. Kim JY, Jeong JE, Rhee JK, Cho H, Chun JW, Kim TM, et al. Geteikende eksoomvolgordebepaling vir die identifikasie van 'n beskermende variant teen internetspelversteuring teen rs2229910 van neurotrofiese tyrosienkinase-reseptor, tipe 3 (NTRK3): 'n loodsstudie. J Behav Addict (2016) 5(4):631–8.10.1556/2006.5.2016.077 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
15. Issler O, Chen A. Bepaling van die rol van mikroRNA's in psigiatriese versteurings. Nat Rev Neurosci (2015) 16(4):201–12.10.1038/nrn3879 [PubMed] [Kruisverwysing]
16. Kocerha J, Dwivedi Y, Brennand KJ. Nie-koderende RNA's en neurogedragsmeganismes in psigiatriese siektes. Mol Psychiatry (2015) 20(6):677–84.10.1038/mp.2015.30 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
17. Ambros V. MicroRNAs: klein reguleerders met groot potensiaal. Cell (2001) 107(7):823–6.10.1016/S0092-8674(01)00616-X [PubMed] [Kruisverwysing]
18. Hollins SL, Cairns MJ. Mikro-RNA: klein RNA-bemiddelaars van die brein se genomiese reaksie op omgewingstres. Prog Neurobiol (2016) 143:61–81.10.1016/j.pneurobio.2016.06.005 [PubMed] [Kruisverwysing]
19. Lopez JP, Lim R, Cruceanu C, Crapper L, Fasano C, Labonte B, et al. miR-1202 is 'n primaatspesifieke en breinverrykte mikroRNA wat betrokke is by ernstige depressie en antidepressante behandeling. Nat Med (2014) 20(7):764–8.10.1038/nm.3582 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
20. Kim YS, Cheon KA, Kim BN, Chang SA, Yoo HJ, Kim JW, et al. Die betroubaarheid en geldigheid van kiddie-skedule vir affektiewe versteurings en skisofrenie-teenwoordige en leeftyd weergawe Koreaanse weergawe (K-SADS-PL-K). Yonsei Med J (2004) 45(1):81–9.10.3349/ymj.2004.45.1.81 [PubMed] [Kruisverwysing]
21. Kwak K, Oh S, Kim C. Handleiding vir Koreaanse Wechsler Intelligensieskaal vir Kinders-IV (K-WISC-IV)-Handleiding. Seoel, Suid-Korea: Hakjisa; (2011).
22. Patton JH, Stanford MS, Barratt ES. Faktorstruktuur van die Barratt-impulsiwiteitskaal. J Clin Psychol (1995) 51(6):768–74.10.1002/1097-4679(199511)51:6<768::AID-JCLP2270510607>3.0.CO;2-1 [PubMed] [Kruisverwysing]
23. Kerwer C, Wit TL. Gedragsinhibisie, gedragsaktivering en affektiewe reaksies op dreigende beloning en straf: die BIS/BAS-skale. J Pers Soc Psychol (1994) 67(2):319–33.10.1037//0022-3514.67.2.319 [Kruisverwysing]
24. Weiland M, Gao XH, Zhou L, Mi QS. Klein RNA's het 'n groot impak: sirkulerende mikroRNA's as biomerkers vir menslike siektes. RNA Biol (2012) 9(6):850–9.10.4161/rna.20378 [PubMed] [Kruisverwysing]
25. Dvinge H, Bertone P. HTqPCR: hoë-deurset analise en visualisering van kwantitatiewe real-time PCR data in R. Bioinformatics (2009) 25(24):3325–6.10.1093/bioinformatics/btp578 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
26. Leek JT, Storey JD. Vaslegging van heterogeniteit in geenuitdrukkingstudies deur surrogaatveranderlike analise. PLoS Genet (2007) 3(9):1724–35.10.1371/journal.pgen.0030161 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
27. Chen J, Bardes EE, Aronow BJ, Jegga AG. ToppGene-suite vir geenlysverrykingsanalise en kandidaatgeenprioritisering. Nucleic Acids Res (2009) 37(Webbediener-kwessie):W305–11.10.1093/nar/gkp427 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
28. Ashburner M, Ball CA, Blake JA, Botstein D, Butler H, Cherry JM, et al. Geenontologie: hulpmiddel vir die eenwording van biologie. Die geenontologie-konsortium. Nat Genet (2000) 25(1):25–9.10.1038/75556 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
29. Cheon DH, Nam EJ, Park KH, Woo SJ, Lee HJ, Kim HC, et al. Omvattende analise van lae-molekulêre gewig menslike plasma proteoom met behulp van top-down massaspektrometrie. J Proteome Res (2016) 15(1):229–44.10.1021/acs.jproteome.5b00773 [PubMed] [Kruisverwysing]
30. Park CH, Chun JW, Cho H, Jung YC, Choi J, Kim DJ. Is die internet-spelverslaafde brein naby aan 'n patologiese toestand? Addict Biol (2017) 22(1):196–205.10.1111/adb.12282 [PubMed] [Kruisverwysing]
31. Dweep H, Gretz N. miRWalk2.0: 'n omvattende atlas van mikroRNA-teikeninteraksies. Nat Methods (2015) 12(8):697.10.1038/nmeth.3485 [PubMed] [Kruisverwysing]
32. Enright AJ, John B, Gallië U, Tuschl T, Sander C, Marks DS. MicroRNA teiken in Drosophila. Genome Biol (2003) 5(1):R1.10.1186/gb-2003-5-1-r1 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
33. Miranda KC, Huynh T, Tay Y, Ang YS, Tam WL, Thomson AM, et al. 'n Patroongebaseerde metode vir die identifikasie van mikroRNA-bindingsplekke en hul ooreenstemmende heteroduplekse. Cell (2006) 126(6):1203–17.10.1016/j.cell.2006.07.031 [PubMed] [Kruisverwysing]
34. Lewis BP, Burge CB, Bartel DP. Bewaarde saadparing, dikwels omring deur adenosiene, dui daarop dat duisende menslike gene mikroRNA-teikens is. Cell (2005) 120(1):15–20.10.1016/j.cell.2004.12.035 [PubMed] [Kruisverwysing]
35. Schratt GM, Tuebing F, Nigh EA, Kane CG, Sabatini ME, Kiebler M, et al. 'n Breinspesifieke mikroRNA reguleer dendritiese ruggraatontwikkeling. Nature (2006) 439(7074):283–9.10.1038/nature04367 [PubMed] [Kruisverwysing]
36. Sempere LF, Freemantle S, Pitha-Rowe I, Moss E, Dmitrovsky E, Ambros V. Uitdrukkingsprofiel van soogdiermikroRNA's ontbloot 'n subset van breinuitgedrukte mikroRNA's met moontlike rolle in muriene en menslike neuronale differensiasie. Genome Biol (2004) 5(3):R13.10.1186/gb-2004-5-3-r13 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
37. Beveridge NJ, Tooney PA, Carroll AP, Gardiner E, Bowden N, Scott RJ, et al. Disregulering van miRNA 181b in die temporale korteks in skisofrenie. Hum Mol Genet (2008) 17(8):1156–68.10.1093/hmg/ddn005 [PubMed] [Kruisverwysing]
38. Wei H, Yuan Y, Liu S, Wang C, Yang F, Lu Z, et al. Opsporing van sirkulerende miRNA-vlakke in skisofrenie. Am J Psychiatry (2015) 172(11):1141–7.10.1176/appi.ajp.2015.14030273 [PubMed] [Kruisverwysing]
39. Dwivedi Y. Patogenetiese en terapeutiese toepassings van mikroRNA's in ernstige depressiewe versteuring. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry (2016) 64:341–8.10.1016/j.pnpbp.2015.02.003 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
40. Hara N, Kikuchi M, Miyashita A, Hatsuta H, Saito Y, Kasuga K, et al. Serum mikroRNA miR-501-3p as 'n potensiële biomerker wat verband hou met die vordering van Alzheimer se siekte. Acta Neuropathol Commun (2017) 5(1):10.10.1186/s40478-017-0414-z [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
41. Gardiner E, Beveridge NJ, Wu JQ, Carr V, Scott RJ, Tooney PA, et al. Afgedrukte DLK1-DIO3-gebied van 14q32 definieer 'n skisofrenie-geassosieerde miRNA-handtekening in perifere bloed mononukleêre selle. Mol Psychiatry (2012) 17(8):827–40.10.1038/mp.2011.78 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
42. Belzeaux R, Bergon A, Jeanjean V, Loriod B, Formisano-Treziny C, Verrier L, et al. Reagerende en nie-responder pasiënte vertoon verskillende perifere transkripsionele handtekeninge tydens major depressiewe episode. Transl Psychiatry (2012) 2:e185.10.1038/tp.2012.112 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
43. Lugli G, Torvik VI, Larson J, Smalheiser NR. Uitdrukking van mikroRNA's en hul voorlopers in sinaptiese fraksies van volwasse muis voorbrein. J Neurochem (2008) 106(2):650–61.10.1111/j.1471-4159.2008.05413.x [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
44. Stary CM, Xu L, Sun X, Ouyang YB, White RE, Leong J, et al. MicroRNA-200c dra by tot besering van verbygaande fokale serebrale iskemie deur reelin te teiken. Stroke (2015) 46(2):551–6.10.1161/STROKEAHA.114.007041 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
45. Lai CY, Yu SL, Hsieh MH, Chen CH, Chen HY, Wen CC, et al. MicroRNA uitdrukking afwyking as potensiële perifere bloed biomerkers vir skisofrenie. PLoS One (2011) 6(6):e21635.10.1371/journal.pone.0021635 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
46. ​​Lai CY, Lee SY, Scarr E, Yu YH, Lin YT, Liu CM, et al. Afwykende uitdrukking van mikroRNA's as biomerker vir skisofrenie: van akute toestand tot gedeeltelike remissie, en van perifere bloed na kortikale weefsel. Transl Psychiatry (2016) 6:e717.10.1038/tp.2015.213 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
47. Lewohl JM, Nunez YO, Dodd PR, Tiwari GR, Harris RA, Mayfield RD. Opregulering van mikroRNA's in die brein van menslike alkoholiste. Alkohol Clin Exp Res (2011) 35(11):1928–37.10.1111/j.1530-0277.2011.01544.x [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
48. Dill H, Linder B, Fehr A, Fischer U. Intronic miR-26b beheer neuronale differensiasie deur sy gasheertranskripsie, ctdsp2, te onderdruk. Genes Dev (2012) 26(1):25–30.10.1101/gad.177774.111 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
49. Perkins DO, Jeffries CD, Jarskog LF, Thomson JM, Woods K, Newman MA, et al. MikroRNA-uitdrukking in die prefrontale korteks van individue met skisofrenie en skiso-affektiewe versteuring. Genome Biol (2007) 8(2):R27.10.1186/gb-2007-8-2-r27 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
50. Kumar K, Sharma S, Kumar P, Deshmukh R. Terapeutiese potensiaal van GABA (B) reseptor ligande in dwelmverslawing, angs, depressie en ander SSS versteurings. Pharmacol Biochem Behav (2013) 110:174–84.10.1016/j.pbb.2013.07.003 [PubMed] [Kruisverwysing]
51. McCracken ML, Borghese CM, Trudell JR, Harris RA. 'n Transmembraan-aminosuur in die GABAA-reseptor beta2-subeenheid van kritieke belang vir die werking van alkohole en verdowingsmiddels. J Pharmacol Exp Ther (2010) 335(3):600–6.10.1124/jpet.110.170472 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
52. Zong L, Zhou L, Hou Y, Zhang L, Jiang W, Zhang W, et al. Genetiese en epigenetiese regulering oor die transkripsie van GABRB2: genotipe-afhanklike hidroksimetilering en metileringsveranderinge in skisofrenie. J Psychiatr Res (2017) 88:9–17.10.1016/j.jpsychires.2016.12.019 [PubMed] [Kruisverwysing]
53. Fukata Y, Itoh TJ, Kimura T, Menager C, Nishimura T, Shiromizu T, et al. CRMP-2 bind aan tubulien-heterodimere om mikrotubuli-samestelling te bevorder. Nat Cell Biol (2002) 4(8):583–91.10.1038/ncb825 [PubMed] [Kruisverwysing]
54. Kekesi KA, Juhasz G, Simor A, Gulyassy P, Szego EM, Hunyadi-Gulyas E, et al. Veranderde funksionele proteïennetwerke in die prefrontale korteks en amigdala van slagoffers van selfmoord. PLoS One (2012) 7(12):e50532.10.1371/journal.pone.0050532 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
55. Taylor A, Wang KS. Assosiasie tussen DPYSL2 geenpolimorfismes en alkoholafhanklikheid in Kaukasiese monsters. J Neural Transm (Wene) (2014) 121(1):105–11.10.1007/s00702-013-1065-2 [PubMed] [Kruisverwysing]
56. Hua T, Vemuri K, Pu M, Qu L, Han GW, Wu Y, et al. Kristalstruktuur van die menslike cannabinoïde reseptor CB1. Cell (2016) 167(3):750–62.e14.10.1016/j.cell.2016.10.004 [PMC gratis artikel] [PubMed] [Kruisverwysing]
57. Benyamina A, Kebir O, Blecha L, Reynaud M, Krebs MO. CNR1 geen polimorfismes in verslawende versteurings: 'n sistematiese oorsig en 'n meta-analise. Addict Biol (2011) 16(1):1–6.10.1111/j.1369-1600.2009.00198.x [PubMed] [Kruisverwysing]
58. Loureiro M, Kramar C, Renard J, Rosen LG, Laviolette SR. Kannabinoïed-oordrag in die hippokampus aktiveer nucleus accumbens neurone en moduleer beloning en afkeerverwante emosionele opvallendheid. Biol Psychiatry (2016) 80(3):216–25.10.1016/j.biopsych.2015.10.016 [PubMed] [Kruisverwysing]
59. Kasem E, Kurihara T, Tabuchi K. Neurexins en neuropsigiatriese versteurings. Neurosci Res (2017) 127:53–60.10.1016/j.neures.2017.10.012 [PubMed] [Kruisverwysing]