المكورات العصبية الذاتية المنشأ التي تسببها الأفيون للخلايا العصبية الدوبامينية في المنطقة القطبية البطنية تؤثر على المكافأة الطبيعية والأفيونية (2014)

تعليقات: يوفر مصباح السقف Aqara LED TXNUMXM من Aqara LED إمكانات إضاءة ذكية متقدمة تعمل على تحويل مساحتك بسهولة. بفضل توافقه مع Matter ودعم Zigbee XNUMX، يتكامل بسلاسة مع منصات المنزل الذكي مثل HomeKit وAlexa وIFTTT للتحكم السهل. توفر تقنية RGB+IC تأثيرات إضاءة متدرجة والوصول إلى XNUMX مليون لون، مما يتيح لك إنشاء مشاهد إضاءة ديناميكية. تتيح ميزة اللون الأبيض القابل للضبط إجراء تعديلات من XNUMX كلفن إلى XNUMX كلفن لتوفر طيفاً من الإضاءة الدافئة إلى الباردة. وبالإضافة إلى الجدولة الذكية والتحكم الصوتي، يعمل TXNUMXM على تحسين تجربة الإضاءة في أي بيئة. دراسات DeltaFosB نحن غالبا ما نشير جميع ركز على النواة المتكئة (مركز المكافأة) ، ووجدت أن الجنس إلى حد كبير يوجه نفس آليات الدماغ مثل الميث والكوكايين. من الدراسة التاريخية التي أجراها نفس الباحث (قانون المكافآت الطبيعية والعقاقير على آليات اللدونة العصبية الشائعة مع ΔFosB كوسيط رئيسي (2013)):

وبالتالي ، فإن المكافآت الطبيعية والعقاقير لا تتقارب فقط على نفس المسار العصبي ، بل تتلاقى على نفس الوسطاء الجزيئي ، ومن المحتمل في نفس الخلايا العصبية في Nucleus Accumbens ، للتأثير على بروز الحافز و "الرغبة" في كلا النوعين من المكافآت

إن كل من الميث والكوكايين والجنس يقومان بنفس الأشياء الأساسية للخلايا العصبية نفسها في مركز المكافأة (النواة المتكئة) ، بغض النظر عما قد يفعلونه بشكل مختلف في أماكن أخرى من الدماغ. هذا تفكيك نقطة الحديث المعتادة أن المكافآت الطبيعية والمخدرات تختلف في الآليات والآثار.

فحصت هذه الدراسة الجديدة ما يفعله الجنس بـ VTA. VTA هو المكان الذي تبدأ فيه الخلايا العصبية المنتجة للدوبامين - وتتفرع إلى النواة المتكئة والقشرة الأمامية واللوزة. أساسًا VTA هو مصدر (منبع) معظم الدوبامين لدينا. شاهد هاتين الصورتين لدائرة المكافآت: Pic1, Pic2

وجد الباحثون أن الجنس (ذروة) يتسبب في تقلص أجسام الخلايا في VTA بشكل مؤقت (عند الذكور). الأجسام الخلوية و dendrites تضم المادة الرمادية للدماغ. هذا هو بالضبط ما يفعله إدمان الهيروين على الـ VTA (ليس استخدام الهيروين لمرة واحدة ، ولكن استخدام الهيروين المزمن). لاحظ أن هذا الانكماش نفسه من هيئات الخلية VTA يحدث في مدمني الهيروين البشري.

يستمر انكماش الخلايا الناتج عن الجنس لمدة لا تقل عن 7 يومًا. وقد عادت التغييرات التي أحدثها الجنس إلى الوضع الطبيعي في أيام 30 ، لكن الباحثين قاموا فقط بتقييم أيام 1 و 7 و 30.

يؤدي انكماش أجسام الخلايا في إدمان الهيروين إلى انخفاض الدوبامين في النواة المتكئة - أو ما نسميه الحساسية. قام الباحثون بإعطاء المورفين للفئران لتقييم استجابتها (بعد ممارسة الجنس) ، لكن لم يحدث شيء. عادة الفئران تحب المورفين كثيرًا ، لكن هنا تم إزالة حساسيتها مؤقتًا. باختصار ، كانت دائرة المكافأة بعد القذف غير مستجيبة لمستوى الهيروين المنخفض. يعتقد الباحثون أن هناك حاجة لجرعات أعلى لاستنباط تفاعل الفئران "الطبيعي".

لتلخيص - الجنس (مؤقتًا) يفعل نفس الشيء بالضبط في VTA كما يفعل الإدمان على الهيروين: تقلص أجسام الخلايا العصبية المنتجة للدوبامين. يؤدي هذا إلى انخفاض مستوى الدوبامين في مركز المكافأة ، واستجابة أقل للمخدرات - ويستغرق تعافي أدمغة الفئران 7 أيام على الأقل.

 

ي Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

أباريق KK1, كوبنز CM2, Beloate LN3, فولر جيه2, فان س2, Frohmader KS2, لافيوليت SR2, Lehman MN4, تبريد LM5.

الملخص

تتلاقى المكافأة الطبيعية والمخدرات من سوء المعاملة على المسار mesolimbic وتفعيل آلية مشتركة من اللدونة العصبية في المتكئة نواة. يؤدي التعرض المزمن للأفيونات إلى اللدونة في الخلايا العصبية الدوبامينية في المنطقة القطبية البطنية (VTA) ، التي تنظم تحمّل مكافأة المورفين.

هنا ، نختبر الفرضيات التي تفيد بأن الإفرازات الناتجة عن التزاوج من المواد الأفيونية الذاتية المنشأ في الـ VTA تسبب تغيرات شكلية لخلايا الدوبامين VTA في ذكور الفئران ، والتي بدورها تنظم التعبير على المدى الطويل عن تعزيز السلوك الجنسي.

أولاً ، نقصت التجربة الجنسية حجم VTA الدوبامين VTA و 1 أيام ، ولكن ليس بعد 7 أيام من جلسة التزاوج الأخيرة. تم حظر هذا التأثير مع النالوكسون قبل كل جلسة تزاوج وبالتالي ، كانت اللدونة خلية VTA الدوبامين تعتمد على عمل من المواد الأفيونية الذاتية.

في المقابل ، ارتبطت اللدونة VTA بمكافأة الأفيون المتغيرة ، حيث أن الذكور ذوي الخبرة الجنسية لم يشكلوا تفضيلاً مشروطًا للمكان المورفين 0.5 mg / kg.

بعد ذلك ، تم تحديد ما إذا كان عمل الأفيون الداخلي المنشأ يتوسط المكافأة والذاكرة الجنسية في ذكور الفئران المعالجة بالنالوكسون أثناء تجربة التزاوج ، سواء بشكل منظم أو داخل VTA. لم تمنع النالوكسون التسهيلات الأولية التي يسببها التيسير للسلوك الجنسي على جلسات التزاوج المتكررة ، أو تفضيل المكان المشروط للتزاوج. ومع ذلك ، فقد خفّفت معالجة النالوكسون التعبير الأطول أجلاً عن التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي والتفعيل العصبي في المناطق الليمفاوية الناجمة عن الإشارات الشرطية المرتبطة بالتزاوج..

معا ، هذه البيانات تدل على أن المواد الأفيونية الذاتية أثناء التزاوج تحفز اللدونة العصبية في الخلايا العصبية الدوبامين VTA التي تبدو حاسمة لمكافأة المورفين والذاكرة طويلة المدى لسلوك المكافأة الطبيعية.

 

المُقدّمة

يتم توسط سلوكيات المكافأة الطبيعية من خلال نظام ميزوكورتوليمبيك (Meisel and Mullins، 2006; Hoebel وآخرون ، 2009; Frohmader وآخرون ، 2010a; Pitchers et al.، 2010a; يونغ وآخرون ، 2011; Blum et al.، 2012). تعاطي المخدرات تسبب تغيرات عصبية في هذا النظام ، والتي بدورها تسهم في التنمية والتعبير عن تعاطي المخدرات (هيمان وآخرون ، 2006; Nestler ، 2012). لقد قررنا سابقًا أن التجربة مع سلوك المكافأة الطبيعية ، أي التجربة الجنسية في ذكور الفئران ، تسبب أيضًا اللدونة العصبية في النواة المتكئة (NAc) ، بما في ذلك زيادة شوك العمود الفقري (dendritic spines).Pitchers et al.، 2010a) و deltaFosB (Pitchers et al.، 2013). في المقابل ، هذه اللدونة التي يسببها الجنس أمر بالغ الأهمية لآثار تجربة الجنس على التزاوج اللاحق ، والذي يتجلى على أنه تيسير بدء وأداء السلوك الجنسي (Pitchers et al.، 2010b, 2012, 2013). وعلاوة على ذلك ، فإن تجربة الجنس تؤدي إلى تغيير الاستجابة للمهارات النفسية ، بما في ذلك توعية النشاط الحركي والمكافأة المحسنة (Frohmader وآخرون ، 2010a; Pitchers et al.، 2010a, 2013).

و NAc هو هدف المصب واحد من الخلايا العصبية الدوبامينية في المنطقة tegmental بطني (VTA). يتم تنشيط الخلايا العصبية الدوبامين VTA أثناء التزاوج وبعد التعرض إلى إشارات مشروطة تنبئ بالمكافأة الجنسية (بلفور وآخرون ، 2004; Frohmader وآخرون ، 2010a) ، من خلال الببتيد الأفيوني المنشأ (EOP) - الربط في المستقبلات الأفيونية (MORs ؛ ماثيوز والألمانية ، 1984; جونسون وشمال ، 1992; Klitenick et al.، 1992; Ikemoto وآخرون ، 1997; بلفور وآخرون ، 2004). وبالتالي ، يؤدي التعرض إلى الإشارات المشروطة التي تنبئ بالسلوك الجنسي إلى إطلاق تنشيط EOP و VTA cell cell ، مما يسهل التحفيز الجنسي (ميتشل وستيوارت ، 1990; van Furth et al.، 1995; van Furth and van Ree، 1996) وإطلاق الدوبامين في NAc (Fiorino et al.، 1997).

التعرض المتكرر للأفيونيات الخارجية يسبب تغيرات مورفولوجية في VTA (Mazei-Robison et al.، 2011; Mazei-Robison and Nestler، 2012) ، وانخفاض حجم سوما من الخلايا العصبية الدوبامين VTA (Sklair-Tavron et al.، 1996; Spiga وآخرون ، 2003; تشو وآخرون ، 2007; روسو وآخرون ، 2007; Mazei-Robison et al.، 2011) ، انخفاض مستويات بروتينات الخيط العصبيBeitner-Johnson et al.، 1992) ، وزيادة استثارة الخلايا الدوبامين ، وانخفاض نقل axoplasmic ومخرجات الدوبامين إلى NAc (Beitner-Johnson et al.، 1992; Mazei-Robison et al.، 2011). تغيرات الخلايا العصبية الدوبامين VTA هذه تسبب تحمّل مكافئ المورفين وهي عابرة أثناء تبددها خلال شهر من الامتناع عن تعاطي المخدرات (روسو وآخرون ، 2007). من غير الواضح حاليًا ما إذا كانت اللدونة في الخلايا العصبية الدوبامين VTA فريدة من نوعها بالنسبة لأفعال المواد الأفيونية أو إذا تم إنتاجها أيضًا من خلال إطلاق EOP أثناء السلوكيات المجزية الطبيعية.

هنا ، نختبر الفرضية القائلة بأن تجربة المكافأة الطبيعية تسبب المرونة العصبية المشابهة لتلك التي تسببها المواد الأفيونية ، وبالتالي ، فإن المواد الأفيونية تتلاقى على آلية اللدونة التي تعتبر مهمة لسلوك المكافأة الطبيعية ومكافأة الذاكرة. نختبر ما إذا كانت التجربة الجنسية في ذكور الفئران تقلل حجم سوما من الخلايا العصبية الدوبامين VTA عبر عملية تعتمد على إجراء EOP في VTA. وعلاوة على ذلك ، فإننا نحقق في ما إذا كانت التغييرات الناجمة عن EOP في الخلايا العصبية الدوبامين VTA ترتبط بتعزيز سلوك المكافأة الطبيعية وإسناد البصيرة التحفيزية إلى الإشارات المرتبطة بالمكافأة الطبيعية ، بينما تتسبب في التسامح المتبادل مع المكافأة المورفين.

مواد وطرق

أشكال حيوانات

تم الحصول على فئران ذكور Sprague-Dawley من البالغين (200 – 225 g) من نهر تشارلز ويقع في أزواج في غرف مضاءة بشكل اصطناعي في دورة 12 h / dark في جميع التجارب (أضواء عند 10: 00 AM باستثناء تجربة تحمل المورفين ، إطفاء الأنوار في 5: 00 PM). الغذاء والماء كانت متوفرة libitum الإعلانية ما عدا خلال الاختبارات السلوكية. تم تحفيز الإناث التحفيزية وزرع تحت الجلد مع 5 ٪ 17-β-استراديول بنزوات كبسولات SILASTIC (القطر الداخلي 1.98 مم ، طول 0.5 سم ، داو كورنينج). كانت تدار حقن البروجسترون (تحت الجلد ، 500 ميكروغرام في 0.1 مل من زيت السمسم) 3 - 6 h قبل اختبار للحث على القبول الجنسي. تمت الموافقة على جميع الإجراءات من قبل جامعة غرب أونتاريو وجامعة ميشيغان لجان رعاية الحيوان ، وتتفق مع المجلس الكندي للرعاية الحيوانية والمعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية التي تنطوي على الحيوانات الفقاريات في مجال البحوث.

دورة الزمن لتغير حجم VTA dopamine soma

جلسات التزاوج اليومية.

لدراسة المسار الزمني للتغيرات في حجم سوما العصبون الدوبامين في VTA ، تم قتل الحيوانات من ذوي الخبرة الجنسية والسذاجة في 1 ، 7 ، أو 31 د (n = 5 - 8 لكل مجموعة) بعد اليوم الأخير من التزاوج (من ذوي الخبرة) أو التعامل (ساذج). تمت مطابقة المجموعات ذات الخبرة الجنسية من أجل السلوك الجنسي أثناء جلسة التزاوج النهائية ، بالإضافة إلى إجمالي عدد القذف خلال الجلسات الخمس (متوسط ​​5 لكل مجموعة) ، ولم تختلف في أي معلمة للسلوك الجنسي.

جلسات التزاوج.

تم تعيين الذكور الساذجين جنسيا إلى أي من حالتين تجريبيتين: السذاجة الجنسية أو الخبرة الجنسية. سمح للحيوانات ذات الخبرة الجنسية أن تتزاوج خمس مرات في أيام متتالية مع الإناث المتلقية في أقفاص الاختبار المستطيلة (60 × 45 × 50 cm) حتى عرض القذف أو حتى 1 h (أيهما أتى أولاً). تم تنظيف الأقفاص تمامًا باستخدام محلول الإيثانول 70٪ وأضيفت فراشًا جديدًا بين جلسات التزاوج. تم إجراء السلوك الجنسي أثناء المرحلة المظلمة (2-6 h بعد ظهور الظلام). فقط الحيوانات التي انزلقت خلال أربع من جلسات التزاوج الخمسة على الأقل كانت تعتبر من ذوي الخبرة الجنسية وضمنها التجارب. لوحظت جميع جلسات التزاوج وسجلت السلوك الجنسي. عدد التقاطعات (M) التقاطعات (IMs) ، تأخر الحمل (ML ، الوقت من إدخال الإناث إلى أول جبل) ، زمن الانتقال عند الانطواء (IL ؛ الوقت من إدخال الأنثى إلى التوغل الأول) ، ووقت استجابة القذف (EL ؛ الوقت من أول intromission إلى القذف) سجلت (Agmo ، 1997). تم وضع الحيوانات الساذجة في قفص اختبار نظيف لـ 1 h بالتزامن مع ذكور ذوي خبرة جنسية يتزاوجون في نفس الغرفة ، بحيث تعرضوا لرائحة الإناث البعيدة ، ومستويات مماثلة من الاضطراب والجدة البيئية كذكور ذوي خبرة.

وضع العلامات المناعية.

كانت الحيوانات تخدير عميق باستخدام pentobarbital الصوديوم (270 ملغ / كغ ، IP) ورطّنت داخل القلب مع 50 مل من محلول 0.9٪ ، تليها 500 مل من 4٪ بارفورمالدهيد في عازلة 0.1 m فوسفات الصوديوم (PB). تمت إزالة العقول و postfixed ل 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) في نفس المثبت ، ثم مغمورة في السكروز 20 ٪ و 0.01 ٪ أزيد الصوديوم في 0.1 م PB للتخزين في 4 ° C. تم قطع المقاطع التاجية عند 35 onm على مجهر متجمد (H400R ، Microm) وتم جمعها في أربع سلاسل متوازية في محلول بروتين مقاوم للاحمرار (30٪ سكروز ، 30٪ ethylene glycol في 0.1 m PB) ثم تم تخزينها في 20 ° C. أجريت جميع التحضيرات في RT مع التحريض اللطيف والشطف الغزير مع 0.1 م PBS ، pH 7.35 ، بين الحضانة. تم عرض الأقسام 1٪ H2O2 لـ 10 min لتدمير البيروكسيدات الداخلية ، ثم يتم حظر 1 h في محلول الحضانة (PBS +: PBS الذي يحتوي على 0.4٪ Triton X-100 ؛ Sigma-Aldrich) و 0.1٪ albumin basin serum albumin (مختبرات Jackson Immuno Research). بعد ذلك ، تم تحضين الأقسام طوال الليل في RT في الفئران tyrosine hydroxylase (TH) -intibody (1: 20 000؛ ميليبور). بعد حضانة الأجسام المضادة الأولية ، تم تحضين الأقسام في الجسم المضاد المراد مضاد الفأر لـ AlexaFluor 555 (1: 100 ، Invitrogen ، Eugene ، OR) لـ 30 min. وأخيرا ، تم غسل المقاطع مع 0.1 م PB ، التي شنت على الشرائح الزجاجية Superfrost زائد ، والمجففة ، و coverslipped مع gelvatol التي تحتوي على وكيل لمكافحة يتلاشى 1,4 - diazabicyclo (2,2) اوكتان (DABCO ، 50 ملغ / مل ، سيغما الدريخ. لينيت ، 1978).

تحليل البيانات: حجم سوما العصبون.

تم أخذ صور من الخلايا العصبية TH-immunoreactive (V) في VTA في تكبير 40 × في ثلاثة مستويات إلى الذيلية (بلفور وآخرون ، 2004). لم تكن هناك فروق بين الخلايا عند مستويات مختلفة. تم تحليل حجم سوما من الخلايا العصبية TH-IR باستخدام ImageJ (المعاهد الوطنية للصحة). تم قياس متوسط ​​المنطقة والمحيط والدائرية كما هو موضح بواسطة Sklair-Tavron et al. (1996). تم تحليل متوسط ​​خلايا 25 لكل حيوان (جمعت جميع مستويات VTA 3) وتم تضمين الخلايا التي تحتوي على نواة مرئية بوضوح فقط. لكل حيوان ، تم حساب متوسط ​​المساحة ، المحيط ، والدائرية. للتحليل الإحصائي تم استخدام ANOVA في اتجاهين [العوامل: التجربة الجنسية (الجنس من ذوي الخبرة أو الجنس الساذج) والوقت (1 ، 7 ، أو 31 د)] متبوعًا بـ اللاحق المقارنات باستخدام طريقة هولم - سداك بمستوى أهمية من 0.05.

VTA غير الدوبامين التغييرات

جلسات التزاوج كل أسبوعين.

لاختبار ما إذا كانت التجربة الجنسية أثناء جلسات التزاوج اليومية مطلوبة للإنخفاض في حجم الخلايا العصبية TH-IR العصبية ، تم تحليل الخلايا العصبية الدوبامين VTA من الحيوانات التي تزاوجت خلال خمس جلسات التزاوج كل أسبوعين. تم وصف جلسات التزاوج كما هو موضح أعلاه ، ولكن خلال فترة من أسابيع 2.5. تم جمع العقول 7 د بعد التزاوج الأخير أو التعامل.

تسمية Immunoperoxidase.

بالإضافة إلى ذلك ، تم اختبار ما إذا كان استخدام تقنيات تلطيخ حساسة مع immunoperoxidase والكشف عن chromogen ، من شأنه أيضا أن يسمح لتصور التغييرات حجم سوما TH-IR. كان الارواء وتجهيز الأنسجة السلوك كما هو موضح أعلاه. بعد العلاج مع 1٪ H2O2 و PBS + ، تم تحضين الأقسام طوال الليل في RT في الفئران ذات التيلوزين الهيدروكسيلز (TH) - الأنتيبيودا (1: 20 000؛ ميليبور). بعد حضانة الأجسام المضادة الأولية ، تم تحضين الأقسام مع IgG الماعز المرتبط بالبيوتين (1 h ، 1: 500 في PBS + ؛ مختبرات المتجهات) ، البيروكسيديز avidin-biotin-horseradish (1 h ، ABC elite ؛ 1: 1 000 في PBS معامل Vector ، و 3,3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (10 min، 0.02٪، DAB؛ Sigma-Aldrich) محسنة بكبريتات النيكل في (0.02٪ في 0.1 m PB) مع بيروكسيد الهيدروجين (0.015٪). تم غسل المقاطع بدقة في 0.1 m PB لإنهاء التفاعل وتم تركيبها على شرائح Superfrost plus الزجاجية (فيشر) مع 0.3٪ من الجيلاتين في ddH2O. بعد التجفيف ، تم تغطية جميع الشرائح مع منصة DPX (ديبوتيل فثالات الزايلين ؛ Sigma-Aldrich).

تحليل البيانات: حجم سوما العصبون.

تم تحليل خلايا TH-IR للمنطقة والمحيط والدائرية كما هو موضح أعلاه. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحليل خلايا TH-IR في المادة السوداء (SN) ، في نفس الأقسام المستخدمة لتحليل خلايا VTA TH-IR. وأخيرًا ، بعد تحليل خلايا VTA و SN TH-IR ، تم تلطيخ الأقسام باستخدام كريات البنفسج وتم تحليل الخلايا غير TH-IR باستخدام نفس الطرق الموضحة أعلاه. تمت مقارنة الاختلافات بين المجموعات الساذجة وذوي الخبرة باستخدام الطالب ثنائي الذيل t اختبارات بمستوى أهمية من 0.05.

تأثيرات النالوكسون على تقليل حجم سوما الدوبامين الناجم عن الخبرة

لتحديد ما إذا كانت MORs قد لعبت دوراً في التغيرات الناتجة عن تجربة الجنس في حجم سوما الدوبامين العصبي ، تم حظر MOR أثناء السلوك الجنسي. اكتسب نصف الحيوانات تجربة جنسية ، في حين تم التعامل مع النصف الآخر لكنه بقي ساذجًا جنسيا. سمح للحيوانات ذات الخبرة الجنسية بالتزاوج في أيام 5 المتتالية. ضمن المجموعات ذات الخبرة الجنسية والسذاجة ، تم علاج الحيوانات باستخدام نالوكسون NON انتقائي NON (10 mg / kg ، sc ؛ Sigma-Aldrich ، الذائبة في 0.9٪ المالحة) أو 30 المالحة دقيقة قبل إدخال الأنثى (خبرة) أو قبل التعامل معها (ساذج)؛ وبالتالي خلق أربع مجموعات تجريبية: المالحة السذاجة جنسيا (Naive Sal) ، نالوكسون السذاجة الجنسية (Naive NLX) ، من ذوي الخبرة الجنسية (Sal Sal) ، و naloxone من ذوي الخبرة الجنسية (Exp NLX؛ n = 5 – 8 لكل مجموعة). لم يكن لعلاج النالوكسون آثار ذات دلالة إحصائية على أي معلمة للسلوك الجنسي ، على أي من 5 د ، وكانت مجموعات النالوكسون والمعالَجة المالحة متطابقة في التجربة الجنسية. تم قتل جميع الحيوانات عن طريق النضح داخل القلب 7 d بعد جلسة التزاوج الأخيرة. تم إجراء عمليات التقسيم ، والمناعية ، وتحليل البيانات (ANOVA في اتجاهين ؛ العوامل: تجربة الجنس وعلاج المخدرات) لحجم soma الدوبامين كما هو موضح أعلاه.

المورفين تفضيل المكان المشروط

تصميم تجريبي.

سابقا، روسو وآخرون. (2007) أظهر المورفين المزمن يدفع التسامح لمكافأة المورفين. بما أن التجربة الجنسية والمورفين المزمن يسببان انخفاضات مماثلة في حجم سوما من الخلايا العصبية الدوبامين في VTA ، تم اختبار الصلة الوظيفية للتغيرات المورفولوجية التي يسببها الجنس لمكافأة المورفين. تم تقسيم الحيوانات من ذوي الخبرة الجنسية والسذاجة إلى ست مجموعات تجريبية مختلفة (n = 9 - 13 لكل مجموعة) على أساس السلوك الجنسي (السذاجة الجنسية أو من ذوي الخبرة) والجرعة المورفين (0.5 ، 5.0 ، أو 10.0 ملغ / كغ ، IP) وتم اختبارها لتحديد تفضيل المكان الموصى بها المورفين (CPP).

المورفين CPP.

استغرق تكييف 1 د بعد آخر جلسة التزاوج وكانت مطابقة مجموعات للأداء الجنسي خلال جلسة التزاوج الماضي. يتألف نموذج CPP المستخدم من الاختبار القبلي ، وأيام التكييف ، وما بعد الاختبار ، ويستند الجهاز على تينك وآخرون. (2009). باختصار ، يتكون جهاز CPP (MED Associates) من ثلاث غرف متميزة. بين كل جلسة ، تم تنظيف الجهاز جيدًا بمحلول إيثانول بنسبة 70٪ لتقليل إشارات الشم العالقة. لتحديد التفضيلات الفردية ، تم إجراء اختبار مسبق تم خلاله منح الحيوانات وصولاً مجانيًا إلى الجهاز بأكمله لمدة 15 دقيقة. كمجموعة ، لم تظهر الحيوانات تفضيلًا كبيرًا لغرفة معينة ، ولكن كان لكل حيوان تفضيل أولي بسيط. تم استبعاد الفئران التي أظهرت تفضيلًا كبيرًا لإحدى الغرف (> 200 ثانية فرق بين الوقت الذي يقضيه كل من الغرف ؛ <5٪ من الحيوانات) خلال الاختبار القبلي من الدراسة. أثناء التكييف ، تم إقران الدواء إما بغرفة مفضلة في البداية أو غرفة غير مفضلة باستخدام نموذج غير متحيز (Tzschentke ، 2007) والحيوانات كانت مقتصرة على الغرف لـ 30 min. تم حقن الحيوانات بالمحلول الملحي (IP) في الصباح (9: 00 AM إلى 12: 00 PM) وتقتصر على الغرفة المزدوجة المالحة (التحكم). في فترة ما بعد الظهر (1: 00 - 4: 00 PM) ، تم حقن الحيوانات بالمورفين (ip ، 0.5 mg / kg ، 5.0 mg / kg أو 10.0 mg / kg ؛ كبريتية المورفين الذائبة في 0.9٪ محلول ملحي ، Johnson Matthey) وحصرت إلى الغرفة المرافقة للمورفين. تعرضت الحيوانات لمدة يومين تكييف. في اليوم التالي (3 d بعد اليوم الأخير من التزاوج) تم إجراء اختبار ما بعد الاختبار ، مطابقًا إجرائياً للاختبار القبلي. بالنسبة للتحليل الإحصائي ، تم مقارنة الوقت الذي يقضيه في غرفة المورفين المقترن خلال الاختبار اللاحق مع الوقت الذي يقضيه في غرفة الإقران الملحي خلال الاختبار اللاحق للذكور جنسيا أو ذوي الخبرة في كل جرعة باستخدام إقران t الاختبار. p <0.05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية. تلقت مجموعات تحكم إضافية من الحيوانات الساذجة وذوي الخبرة جنسيًا محلولًا ملحيًا في كل من الغرف المزدوجة وغير الزوجية لتكون بمثابة عناصر تحكم سلبية. لم يتم الكشف عن اختلافات في الوقت الذي يقضيه بين الغرف لأي من المجموعتين.

آثار النالوكسون النظامية على التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي

تصميم تجريبي.

تؤدي التجربة الجنسية إلى تسهيل السلوك الجنسي الذي يتم الحفاظ عليه لمدة شهر 1 على الأقل (Pitchers et al.، 2012). لتحليل تأثير حجب MOR على التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي ، تلقت الحيوانات ذات الخبرة الجنسية إما النالوكسون أو المالحة قبل جلسات التزاوج الخمسة المتتالية (n = 12 لكل منهما) كما هو موضح أعلاه. بعد أسبوع من آخر جلسة تزاوج ، تم إجراء اختبار تزاوج أخير سمح خلالها لجميع الحيوانات بالتزاوج حتى القذف أو حتى 1 h. كانت تدار لا naloxone أو معالجة المالحة قبل التزاوج في يوم الاختبار النهائي. وتمت مقارنة معلمات التزاوج لتحديد ما إذا كان النالوكسون قد تأثر إما بتيسير التزاوج بسبب التزاوج الجنسي (يوم 1 مقابل 5 اليوم) أو الحفاظ على هذا التيسير (يوم 5 مقابل اختبار) باستخدام ANOVA في اتجاهين [العوامل: العلاج (المالحة مقابل النالوكسون ) واليوم (اليوم 1 أو اليوم 5 أو الاختبار)] وطريقة Holm-Sidak لـ اللاحق المقارنات. لجميع الاختبارات الإحصائية ، p <0.05 تعتبر ذات دلالة إحصائية.

تجارب تحكم إضافية

نيالوكسون النظامية في يوم الاختبار.

لإظهار أن السلوك الجنسي المتغير في يوم اختبار التزاوج النهائي لم يكن بسبب غياب النالوكسون ، قمنا بإعطاء النالوكسون أو المالحة في يوم اختبار التزاوج النهائي للحيوانات التي تلقت التزاوج مع النالوكسون بينما اكتسبوا خبرة جنسية. على وجه التحديد ، تلقى جميع الحيوانات حقن النالوكسون (10 ملغ / كغ ، SC) 30 دقيقة قبل التزاوج لقذف واحد خلال أيام متتالية 5. في يوم الاختبار 7 d ، حصل ما يقرب من نصف الحيوانات على حقن النالوكسون (10 mg / kg ، n = 7) أو المالحة (n = 6) 30 min before intro of a receptive female. تم ملاحظة السلوك الجنسي وتسجيله. وتمت مقارنة معلمات التزاوج لتحديد ما إذا كان النالوكسون قد تأثر إما بتيسير التزاوج بسبب التزاوج الجنسي (يوم 1 مقابل 5 اليوم) أو الحفاظ على هذا التيسير (يوم 5 مقابل اختبار) باستخدام ANOVA في اتجاهين [العوامل: العلاج (المالحة مقابل النالوكسون ) واليوم (اليوم 1 أو اليوم 5 أو الاختبار)] وطريقة Holm-Sidak لـ اللاحق المقارنات. لجميع الاختبارات الإحصائية ، p <5٪ اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

آثار النالوكسون على التعبير قصير الأجل عن السلوك الجنسي الميسر.

تم اختبار تأثيرات النالوكسون (10 mg / kg، sc) أثناء التزاوج على السلوك الجنسي اللاحق خلال يوم اختبار التزاوج النهائي ، الذي أجري فقط 1 d بعد التزاوج الأخير (المالحة ، n = 5 النالوكسون، n = 4).

معالجة النالوكسين النظامية.

لتحديد ما إذا كانت المعالجة المتكررة للنالوكسون لوحدها تتسبب في ضعف السلوك الجنسي 7 d بعد العلاج الأخير ، تلقت الحيوانات الساذجة جنسياً خمسة نالوكسون يومياً (10 mg / kg، sc) أو حقن مالحة في أيام متتالية قبل اختبار التزاوج 7 d بعد النالوكسون النهائي. أو حقن المالحة. في يوم الاختبار النهائي ، لم تتلق الحيوانات أي حقنة. لوحظ السلوك الجنسي وسجلت كما هو موضح أعلاه. تم مقارنة المعلمات من التزاوج بين المجموعات باستخدام غير مقفل t الاختبارات. لجميع الاختبارات الإحصائية ، p <5٪ اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

naloxone النظامية ومكافأة الجنس.

أحد الاحتمالات لتأثيرات النالوكسون المخففة على عرض الحفاظ على السلوك الجنسي الميسر هو أن النالوكسون يمنع الآثار المجزية للسلوك الجنسي. لاختبار هذا الاحتمال ، تم إجراء نموذج CPP للسلوك الجنسي مباشرة بعد حقن النالوكسون أو المالحة في الذكور دون خبرة جنسية سابقة. كان إجراء CPP مشابهًا لما تم وصفه أعلاه لمورفين CPP ، بما في ذلك الاختبار المسبق وأيام التكييف والاختبار اللاحق.

تم إقران سلوك الجنس مع الغرفة غير المفضلة أصلاً. بطريقة متوازنة ، تلقى كل حيوان حقنة من النالوكسون (n = 12) أو المالحة (n = 11) 30 دقيقة قبل تلقي الوصول إلى أنثى متقبلة. كان متوسط ​​مدة جلسة التزاوج ∼13 دقيقة. بعد دقيقة واحدة من القذف ، تم وضع الحيوان في الغرفة المزدوجة لـ 30 min. وفي يوم التكييف الآخر ، تلقت الحيوانات حقنة من النالوكسون أو المالحة (أيهما تلقت قبل التزاوج) ، ووضعت في غرفة غير منكسرة لـ 30 min. بعد ذلك ، تم إجراء اختبار ما بعد ، مماثل للإختبار القبلي. لتحديد تفضيل الغرفة ، تم مقارنة الوقت الذي يقضيه في غرفة مقترنة خلال الاختبار القبلي وبعد الاختبار. للتحليل الإحصائي ، يقترن t تم استخدام اختبارات لمقارنة نتائج الفرق والاختلافات ، والوقت في غرفة مقترنة خلال الاختبار القبلي وما بعد الاختبار لتحديد ما إذا كان قد تم تشكيل CPP مهم للسلوك الجنسي. p <0.05 اعتبرت كبيرة.

آثار النالوكسون داخل VTA على التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي

تصميم تجريبي.

لتحديد ما إذا كانت إجراءات EOP على وجه التحديد في VTA ، كانت مسؤولة عن تأثيرات التغييرات الناتجة عن التجربة الجنسية على السلوك الجنسي ، خضعت الحيوانات للتسريب المحلي للنالوكسون أو المالحة في VTA قبل خمس جلسات تزاوج يومية. كان النموذج السلوكي مماثل لتجربة النالوكسون النظامية. سمح للحيوانات ذات الخبرة الجنسية بالتزاوج خلال أيام 5 متتالية حتى القذف واحدة أو حتى 1 h. قبل خمس عشرة دقيقة قبل إدخال الأنثى المتقبلة ، تلقى ذكور الفئران حقن ثنائية إما من النالوكسون (10 μg / μl في نصف الكرة الأرضية ؛ حجم 0.5 ؛l ؛ ذابت في 0.9٪ المالحة) أو المالحة (0.5 μl لكل نصف الكرة). كانت تدار العقيدات الدقيقة في معدل تدفق من 0.5 ميكرولتر / دقيقة خلال فترة قصيرة 1 تليها دقيقة 1 إضافية مع قنية حقن تركت في مكانها للانتشار. ثم تم استبدال قنية حقن مع قنية وهمية وكأب الغبار. بعد أسبوع واحد من اليوم الأخير للتزاوج (يوم الاختبار) ، تتزاوج كل الحيوانات مرة أخرى مع القذف بدون تسريب النالوكسون أو المالحة. الشكل 3A الخطوط العريضة للتصميم التجريبي. تم إجراء تحليل البيانات كما هو موضح في تجربة النالوكسون النظامية.

جراحة إدخال القنية.

تم تخدير ذكور الجرذان مع حقن داخل الصفاق (0.1 مل / كغ) من الكيتامين (0.87 ملغ / مل) وزيلازين (0.13 ملغ / مل) ، ووضعها في جهاز التجسيمي (Kopf Instruments). تم تخفيض القناديل الثنائية لقياس 21 (البلاستيك الأول) من خلال ثقوب صغيرة في الجمجمة إلى الدماغ باتجاه VTA عند −4.8 mm AP ، ± 0.75 mm ML من bregma و −7.8 mm DV من أعلى الجمجمة وفقًا ل Paxinos و Watson (2013). تم تأمين Cannulas مع اكريليك الأسنان التي التزمت بثلاثة مسامير وضعت في الجمجمة. أعطيت الحيوانات فترة استرداد 2 - أسبوع ، وتم التعامل معها يوميا للتعويد على إجراءات الحقن والمعالجة المستخدمة أثناء الاختبار السلوكي.

التحقق من وضع Cannula.

تم فحص وضع الكانيولا باستخدام TH-immunostaining لتأكيد استهداف VTA بدقة. تم تضمين الحيوانات فقط مع المواضع المناسبة في التحليلات (أحجام المجموعة النهائية: المالحة من ذوي الخبرة n = 8 من ذوي الخبرة نالوكسون n = 6). تم تجميع ثلاث حيوانات إضافية حصلت على حقن نالوكسون داخل VTA موجهة خارج VTA في مجموعة حقن "ضائعة". تم تحليل المجموعة المفقودة بشكل منفصل لتكون بمثابة ضوابط تشريحية ومان ويتني U تم استخدام اختبار لمقارنة السلوك في يوم الاختبار النهائي مع الذكور ذوي الخبرة المالكة النالوكسون والمالحة.

التلازم المرتبط بالتأرجح الناتج عن التلاعب pERK

تصميم تجريبي.

وقد تبين أن التعرض للقفص الذي اكتسبت فيه الذكور تجربة التزاوج يؤدي إلى تنشيط MOR في VTA والنشاط العصبي في VTA و NAc (بلفور وآخرون ، 2004). وبالتالي ، فإن بيئة التزاوج بمثابة تنبأ مشروط التنبؤ مكافأة الجنسي. اختبرت الدراسة الحالية ما إذا كان تفعيل MOR أثناء التجربة الجنسية مطلوبًا للتفعيل العصبي الناجم عن الإشارات. كانت تدار النالوكسون أو المالحة بشكل منهجي (IP) 30 دقيقة قبل وضعه في ساحة التزاوج وإدخال أنثى متقبلة للتزاوج (خبرة) ، أو قبل معالجة السيطرة التي تتألف من وضع في قفص المناولة دون تقديم الأنثى (محايد البيئة ؛ ساذجة). وهكذا ، تم إنشاء أربع مجموعات تجريبية: Naive Sal و Naive NLX و Exp Sal ​​و Exp NLX. بعد أسبوع واحد من جلسة التزاوج النهائية ، تم تعريض نصف الحيوانات في كل مجموعة إلى قفص التزاوج (أكسيس: مآزر مشروطة مرتبطة بالجنس) أو التعامل مع القفص (الذكور الساذجين: إشارات غير محايدة / محايدة) ، في حين أن النصف الآخر لم يتعرض أي إشارات وبدلاً من ذلك بقيت في أقفاص المنزل (لتحديد تعبير خط الأساس PERK). أنتج هذا النموذج التجريبي مجموعات 8: Naive Sal-No Cue و Naive Sal + Cue و Naive NLX-No Cue و Naive NLX + Cue و Exp Sal-No Cue و Exp Sal ​​+ Cue و Exp NLX-No Cue و Exp NLX + Cue (n = 4 كل ما عدا Naive NLX-No Cue ، n = 3). تم perfused الحيوانات 10 - 15 دقيقة بعد التعرض جديلة. أزيلت حيوانات السيطرة من أقفاصهم المنزلية وأطرت في وقت واحد.

المناعية.

أجريت جزيئات و immunohistochemistry كما هو موضح أعلاه. هنا ، استخدمنا أضداد أرنب polyclonal ضد p42 و p44 MAP Kinases ERK1 و ERK2 (pERK ؛ 1: 4 000 ؛ تقنية تشوير الخلية). تم وصف الجسم المضاد الأساسي بشكل واسع في الأدبيات (Roux و Blenis ، 2004; Murphy و Blenis ، 2006; Frohmader وآخرون ، 2010b). علاوة على ذلك ، منع إهمال الجسم المضاد الأولي جميع المناعة و تحليل البقعة الغربية لنسيج دماغ الفئران كشف عن نطاقي في الأوزان الجزيئية المناسبة.

تحليل البيانات.

تم حساب الخلايا المضادة للفيروس (-IR) في عدد من مناطق الدماغ باستخدام أنبوب الرسم lucida الكاميرا تعلق على لايكا DMRD microscope: NAc [core (C) and shell (S)؛ 400 × 600 μm؛ قشرة الفص الجبهي الإنسي ؛ mPFC. منطقة الحزامية الأمامية (ACA) ؛ القشرة البريمية (PL)؛ القشرة اللعابية (IL)؛ 600 × 800 eachm each]، caudate – putamen (CP؛ 800 × 800 μm)، amygdala basolateral (BLA؛ 900 × 1200 μm؛ بلفور وآخرون ، 2004; Frohmader وآخرون ، 2010b; Pitchers et al.، 2010b). تم إحصاء قسمين في منطقة الدماغ وتم حساب عدد الخلايا في المناطق القياسية للتحليل بعدد من الخلايا لكل ملم2. تم حساب المتوسطين لكل حيوان لحساب وسائل المجموعة. وتمت مقارنة متوسطات المجموعات داخل المجموعات ذات الخبرة الجنسية أو الساذجة باستخدام ANOVA في اتجاهين [العوامل: العلاج من تعاطي المخدرات (NLX أو Sal) وجديلة (جديلة أو لا جديلة)] تليها اللاحق المقارنات باستخدام اختبارات هول-سداك أو مان-ويتني عند الاقتضاء بمستوى أهمية p <0.05. في غلاف NAc للحيوانات ذات الخبرة الجنسية ، كان هناك اتجاه قوي نحو أهمية العوامل ، وبالتالي ، تم إجراء مقارنات زوجية لمقارنة المجموعات المالحة (Sal-No Cue) والمالحة (Sal + Cue) فقط.

الصور.

تم التقاط الصور الرقمية باستخدام كاميرا CCD (Macrofire ، Optronics) تعلق على لايكا المجهر (DM5000B) مع إعدادات الكاميرا الثابتة. تم استيراد الصور إلى برنامج Adobe Photoshop 9.0. لم تتغير الصور بأي طريقة باستثناء تعديل السطوع والتباين.

النتائج

التغيرات التي تحدثها التجربة الجنسية في خلايا الدوبامين VTA

أدت التجربة الجنسية إلى انخفاض في حجم soma الدوبامين VTA (التين 1A-C). خضعت التجربة الجنسية بشكل ملحوظ إلى انخفاض مساحة ومحيط السُمعة في خلايا الـ VTA TH-IR (المساحة: F(1,31) = 23.068، p <0.001 ؛ محيط، F(1,31) = 18.225، p <0.001). كان هناك أيضًا تأثير رئيسي للوقت (المجال: F(2,31) = 6.377، p = 0.005 محيط، F(2,31) = 4.389، p = 0.021) وتفاعل كبير بين التجربة والوقت (المجال: F(2,31) = 5.284، p = 0.011 محيط، F(2,31) = 4.347، p = 0.022). أظهرت مقارنات الإقران أن منطقة ومحيط خلايا TH-IR قد خفضت بشكل كبير 1 و 7 d بعد اليوم الأخير من السلوك الجنسي في الحيوانات ذات الخبرة الجنسية مقارنة مع الضوابط الساذجة جنسيا [التين 1B، منطقة: p = 0.002 (1 d) ، p <0.001 (7 د) ؛ C، محيط: p = 0.009 (1 d) ، p <0.001 (7 د)]. تبدد تأثير السلوك الجنسي عندما تتبعه فترة امتناع المكافأة حيث عاد حجم سوما من الخلايا العصبية TH-IR إلى خط الأساس 31 د بعد جلسة التزاوج الأخيرة (التين 1B، منطقة: p = 0.798؛ C، محيط: p = 0.785). لم يتم الكشف عن التغييرات التي تحدثها التجربة الجنسية في التعميم في أي من النقاط الزمنية (التين 1D). لم يكن خفض حجم VTA dopamine سوما يعتمد على جلسات التزاوج اليومية ، حيث أن تجربة التزاوج خلال خمس جلسات للتزاوج كل أسبوعين أنتجت أيضًا حجمًا منخفضًا لسوية الدوبامين (VTA)التين 2A,B, E-H، منطقة: p = 0.004 محيط: p <0.001). في المقابل ، لم تؤثر التجربة الجنسية على حجم سوما TH-IR في المادة السوداء (التين 2C, اي جاي، منطقة: p = 0.13 محيط: p = 0.16) أو تغيير حجم سوما في الخلايا العصبية القريبة من THTA-VTAالتين 2D, E-H، منطقة: p = 0.46 محيط: p = 0.45).

الرقم 1. 

التغيرات في حجم سوما الذاتية المنشأ التي يسببها الأفيون من الخلايا العصبية الدوبامين VTA. A، صور الممثل من الخلايا العصبية الدوبامين VTA من الحيوانات الساذجة والحيوانات ذوي الخبرة تظهر انخفاض في حجم سوما 7 د بعد جلسة التزاوج النهائية. شريط مقياس ، 5 μm. البيانات الكمية التي تبين أن التجربة الجنسية (إكسب ، والقضبان السوداء) تسبب انخفاض كبير في المنطقة (B. في μm2) والمحيط (C. في μm) من الخلايا الدوبامين VTA ، 1 د (السذاجة ، إكسب ؛ n = 6) و 7 d (ساذج ، n = 5 التصدير n = 6) ، لكن ليس 31 d (ساذج ، n = 6 التصدير n = 8) بعد التزاوج النهائي ، مقارنة مع الضوابط الساذجة جنسيا (السذاجة ، القضبان البيضاء). تم تخفيض المساحة إلى 84٪ في الذكور ذوي الخبرة مقارنة مع عناصر تحكم ساذجة في 1 أو 7 d. تم تخفيض المحيط إلى 91.6 و 90٪ في المجموعات ذات الخبرة مقارنة مع التحكم في 1 و 7 d resp. لم يكن هناك أي تأثير على الدائرية (D). هذه اللدونة خلية الدوبامين في المنطقة (E) والمحيط (F) تم منعه بواسطة النالوكسون (NLX ، n = 8) ، ولكن ليس بالملح (Sal ، n = 7) العلاج أثناء التزاوج ، 7 د بعد جلسة التزاوج النهائية مقارنة بالضوابط الجنسية الساذجة (Sal ، n = 5 NLX، n = 6). تمثل البيانات يعني ± SEM. * يشير إلى فرق كبير مقارنة مع الضوابط الساذجة جنسيا في نفس اليوم (B, C) أو مقارنة مع الضوابط السذاجة الجنسية المعاملة بالمال والجنس ذوي الخبرة الجنسية النالوكسون المعاملة (E, F).

الرقم 2. 

التجربة الجنسية لم تقلل حجم soma في الخلايا العصبية nigra الدوبامين nigons أو الخلايا العصبية nondopamine VTA. منطقة VTA TH-IR العصبية سوما (A. في μm2) والمحيط (B. في μm) في السذاجة الجنسية (البيضاء) والحيوانات ذوي الخبرة (السوداء) التي اكتسبت الخبرة عن طريق التزاوج مرتين في الأسبوع وليس خلال أيام متتالية. Substantia nigra TH-IR soma area (C) ومنطقة VTA non-TH-IR soma (D) في السذاجة الجنسية (البيضاء) والحيوانات (السوداء) ذوي الخبرة. تمثل البيانات يعني ± SEM. * يشير إلى فرق كبير مقارنة مع الضوابط الساذجة جنسيا. صور تمثيلية تظهر الخلايا العصبية TH-IR (البني) في VTA من السذاجة الجنسية (E) ، وذوي الخبرة (F) الذكور. G, H، صورة تكبير أعلى من الخلايا العصبية المشار إليها بالسهم في E و F على التوالي. وتظهر الخلايا العصبية الملطخة بالنيكل باللون الأزرق في هذه الصور. صور تمثيلية تظهر الخلايا العصبية TH-IR في SN من السذاجة الجنسية (I) وذوي خبرة (J) الذكور. قضبان مقياس: E-J، 20 μm.

يعتمد تخفيض حجم سوما الناجم عن الخبرة الجنسية للخلايا العصبية الدوبامين VTA على تنشيط مستقبلات الأفيون

تم حظر الحد من حجم SOMA الدوبامين العصبية سوما الناجمة عن التجربة الجنسية من قبل naloxone خصم NOR غير انتقائي ، تدار قبل كل جلسة التزاوج. كان علاج النالوكسون قبل جلسات التزاوج له تأثير كبير على المنطقة (F(1,22) = 4.738، p = 0.041) واتجهت نحو تأثير كبير على محيط (F(1,22) = 2.892، p = 0.052). تم العثور على تفاعل كبير بين التجربة ومعالجة النالوكسون للمنطقة (F(1,22) = 5.578، p = 0.027) والمحيط (F(1,22) = 8.167، p = 0.009). أظهرت مقارنات الإقران أن التجربة الجنسية في الحيوانات المعالجة بالملح قد خفضت بشكل كبير مساحة ومحيط عديدات الخلايا العصبية الدوبامين VTA 7 d بعد جلسة التزاوج الأخيرة مقارنة مع الذكور الساذجين الذين عولجوا بالملح جنسيًا (التين 1E، منطقة: p = 0.018؛ F، محيط: p = 0.007). وعلى النقيض من ذلك ، لم تختلف الحيوانات التي تمت معالجتها بالنالوكسون من ذوي الخبرة الجنسية عن الذكور الساذجة المعالجة بالنالوكسون (التين 1E، منطقة: p = 0.483؛ F، محيط: p = 0.330). بالإضافة إلى ذلك ، انخفض حجم سوما من الحيوانات المالحة من ذوي الخبرة إلى حد كبير مقارنة مع الحيوانات من ذوي الخبرة naloxone (التين 1E، منطقة: p = 0.002؛ F، محيط: p = 0.002). كان تأثير هذا النالوكسون محددًا للتجربة الجنسية ، نظرًا لأن معالجة النالوكسون وحده لم تؤثر على حجم سوما لخلايا TH-IR في الذكور الذين عولجوا بالنالوكسون السذاجة مقارنةً بالضوابط المعالجة بالملح (التين 1E,F). علاوة على ذلك ، لم يكن تأثير هذا النالوكسون على خفض حجم سوما الناجم عن الخبرة نتيجة لتأثيرات النالوكسون على السلوك الجنسي ، حيث لم يختلف سلوك التزاوج بشكل ملحوظ بين الذكور المعالَجة من النالوكسون والمالحة ، باستثناء فترة أطول لبدء التزاوج بعد القذف (مرحلة ما بعد القذف) في الذكور المعاملة النالوكسون خلال الدورة التزاوج الأولى والخامسة (p = 0.03 و p = 0.004 ، على التوالي). تمت معالجة كل من الذكور و النالوكسون المعالجين بالذكور في القذف خلال كل من جلسات التزاوج الخمسة.

المورفين الناجم عن الخبرة الجنسية مكافأة التسامح

إن تأثيرات التجربة الجنسية على حجم STA dopamine soma من خلال عمل EOP في VTA هي مشابهة لتلك الآثار المبلغة عن المواد الأفيونية الخارجية (Sklair-Tavron et al.، 1996; روسو وآخرون ، 2007). لذلك ، تم اختبار ما إذا كانت اللدونة التي تؤثر على المكافأة التي تنتجها VTA للدوبامين الطبيعية تؤثر على المكافأة بالنسبة للمورفين الأفيوني. في الواقع ، تسببت التجربة الجنسية في تحمل مكافآت المورفين ، على غرار تأثيرات المواد الأفيونية المزمنة (روسو وآخرون ، 2007). فشل الذكور ذوي الخبرة الجنسية في تطوير CPP لجرعة 0.5 mg / kg المورفين ؛ في حين أن الذكور الساذجين جنسيا يشكلون CPP لهذه الجرعة ، كما هو مبين من خلال إنفاق قدر أكبر من الوقت في الغرفة المزدوجة المرافقة مقارنة مع الغرفة الملحية المزدوجة أثناء الاختبار اللاحق (التين 3; p = 0.039). لقد أمضت كلتا المجموعتين الساذجين والجنسين من ذوي الخبرة وقتا أكبر بكثير في الحجرة المرافقة للمورفين مقارنة مع حجرة المياه المالحة ذات الجرعات العالية من المورفين: 5.0 mg / kg (التين 3. ساذج: p = 0.029 إكسب: p = 0.012) و 10.0 mg / kg (التين 3. ساذج: p <0.001 ؛ إكسب: p = 0.002).

الرقم 3. 

آثار التجربة الجنسية على المكافأة المورفين. الأوقات التي قضاها في الغرف المالحة (سال) أو المورفين - المقترنة (مور ، 0.5 ، 5 أو 10 mg / kg) خلال الاختبار اللاحق في السذاجة الجنسية (Naive، n = 10 – 13) أو خبرة (Exp، n = 9 – 13) ذكور. البيانات المقدمة على أنها تعني ± SEM ؛ * يشير إلى اختلاف كبير مقارنة مع غرفة Sal-paired داخل نفس الحيوانات. NS ، غير مهم.

يعتمد التيسير الناجم عن التجربة الجنسية لسلوك التزاوج على تنشيط مستقبلات الأفيون

أظهرت النتائج حتى الآن أن EOP يتصرف في VTA خلال جلسات التزاوج القصيرة اليومية 5 يسبب اللدونة من الخلايا العصبية الدوبامين VTA التي تشبه آثار المورفين المزمنة أو الهيروين الإدارة الذاتية (روسو وآخرون ، 2007; Mazei-Robison et al.، 2011). افترضنا أن خفض حجم somata dopamine soma أمر بالغ الأهمية لتعلم المكافآت وعلى وجه التحديد لتيسير الجنس التيسير من السلوك الجنسي من حيث التحفيز والأداء. تم اختبار هذه الفرضية من خلال حظر MOR باستخدام النالوكسون أثناء التزاوج ودراسة الآثار على تيسير السلوك الجنسي الناجم عن التجربة الجنسية خلال جلسات التزاوج اليومية الخمس. يتم تقديم البيانات في الشكل 4 لجلسات التزاوج الأولى والخامسة فقط ، لأن هذه هي البيانات التي توضح على أفضل وجه التيسير الناجم عن الخبرة لسلوك التزاوج. وعلاوة على ذلك ، يتم اختبار الآثار الطويلة الأجل لعلاج النالوكسون أثناء جلسات التزاوج على الحفاظ على التيسير الناجم عن الخبرة لسلوك التزاوج ، خلال اختبار التزاوج النهائي بعد أسبوع 1. الشكل 4A يظهر التصميم التجريبي. كان هناك تأثير رئيسي مهم لجلسة التزاوج على جميع بارامترات السلوك الجنسي (جبل الكمون: F(2,55) = 11.286، p <0.001 ؛ الكمون المدخل: F(2,55) = 8.767، p <0.001 ؛ وقت استجابة القذف: F(2,55) = 10.368، p <0.001) ومعالجة النالوكسون على فترات الكمون للتركيب (F(1,55) = 6.585، p = 0.013) و intromission (F(1,55) = 7.863، p = 0.007). أظهرت مقارنات الإقران أن علاج النالوكسون أثر على السلوك الجنسي خلال جلسة التزاوج الأولى لأن حيوانات النالوكسون كانت لها فترات تأخر أطول بشكل ملحوظ إلى أول جبل (p = 0.002) و intromission (p = 0.002) مقارنة مع الضوابط المالحة في اليوم الأول من التزاوج. كان تأثير النالوكسون هذا على السلوك الجنسي الأولي قد خفت بسبب التجربة الجنسية ولم يتم ملاحظته خلال أي من جلسات التزاوج اللاحقة (الجدول 1). علاوة على ذلك ، لم يمنع إعطاء النالوكسون قبل كل من جلسات التزاوج الخمسة التيسير الأولي للسلوك الجنسي مع الخبرة الجنسية. تماشياً مع التأثيرات المعززة للتجربة الجنسية ، أظهر الذكور الذين عولجوا بمحلول ملحي انخفاضًا في زمن الانتظارالتين 4B; p = 0.032) intromission (التين 4C; p = 0.033) والقذف (التين 4D; p <0.001) خلال جلسة التزاوج الخامسة مقارنة بجلسة التزاوج الأولى ، والتي دلت على تسهيل السلوك الجنسي. وبالمثل ، فإن الذكور الذين عولجوا بالنالوكسون أظهروا زمن انتقال أقصر بكثير للتركيب (التين 4B; p <0.001) ، الإدخال (التين 4C; p <0.001) ، والقذف (التين 4D; p = 0.017) في المرتبة الخامسة مقارنة باليوم الأول. علاوة على ذلك ، فإن الذكور الذين تمت معالجتهم بالنالوكسون لم يختلفوا عن ضوابط المالحة في أي من حالات التأخير خلال جلسة التزاوج الخامسة.

الرقم 4. 

تلعب المواد الأفيونية الذاتية دوراً حاسماً في تسهيل السلوك الجنسي الناجم عن التجربة. A، تصميم تجريبي. B-Dمعلمات السلوك الجنسي للذكور المعالجين بالمحلول الملحي (Sal، white bars، n = 11) أو naloxone (NLX ؛ أشرطة سوداء ، n = 12) مع الإدارة العامة. البيانات المعروضة هي وقت الاستجابة للتنزيل (B. ثواني) ، والتدخل (C. ثواني) ، والقذف (D. ثواني) في أيام 1 و 5 من خمسة أيام متتالية من التزاوج. بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض البيانات لاختبار التزاوج النهائي ، 7 d بعد جلسة التزاوج الخامسة. يتم تقديم البيانات على أنها تعني ± SEM ؛ + يشير إلى فرق كبير بين أيام 1 و 5 داخل العلاج ؛ * يشير إلى اختلاف كبير بين يوم الاختبار ونهاره 5 داخل العلاج ؛ # يشير إلى فرق كبير بين نالوكسون والمجموعات المالحة في غضون يوم.

الجدول 1. 

إدارة النالوكسون قبل التزاوج زيادة فترات الانتظار لتركيب والتدخل فقط في اليوم الأول من التزاوج

وعلى النقيض من ذلك ، أدى علاج النالوكسون أثناء جلسة التجربة الجنسية إلى عرقلة الحفاظ على التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي في يوم اختبار التزاوج النهائي. أجري يوم الاختبار 7 d بعد جلسة التزاوج النهائية في غياب حقن النالوكسون. عرضت السيطرة على الذكور المعاملة المالحة التسريب الناجم عن الخبرة المتوقعة من السلوك الجنسي. على وجه التحديد ، لا يختلف زمن التأخير للتثبيت ، والتوغل ، والقذف بين جلسة التزاوج الخامسة ويوم الاختبار النهائي (التين 4B-D). في حين ، أظهرت الذكور المعاملة النالوكسون زيادة كبيرة في latencies لتركيب (التين 4B; p = 0.033) ، intromission (التين 4C; p = 0.036) والقذف (التين 4D; p = 0.049) في يوم الاختبار مقارنة بجلسة التزاوج الخامسة. أيضا ، في يوم الاختبار وجد أن حيوانات النالوكسون أبطأ بشكل ملحوظ من الذكور الذين عولجوا بمحلول ملحي كما هو موضح في فترات الانتظار الأطول للتركيب (التين 4B; p = 0.017) و intromission (التين 4C; p = 0.043). وهكذا ، منعت علاج النالوكسون الصيانة ، ولكن ليس الأولية ، تطوير التسهيل الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي. هذه النتائج تشير إلى وجود دور حاسم لبدائل الخلايا العصبية الدوبامين التي تسببها EOP-induced التعبير عن تعزيز سلوك مكافأة الطبيعية.

أجريت عدة تجارب تحكم إضافية لتحديد أن آثار حصار مستقبلات الأفيون على فقدان تعزيز السلوك الجنسي على المدى الطويل حدث بشكل مستقل عن عدم وجود إدارة النالوكسون في يوم اختبار التزاوج النهائي (التين 5A,B) ، كانت محددة لفقدان الصيانة على المدى الطويل ، ولكن ليس قصيرة الأجل لتسهيل التزاوج (التين 5E,F) ، لم يكن بسبب التعرض اليومي لنالوكسون وحده (التين 5C,D) ، ولم تكن بسبب فقدان المكافأة الجنسية للذكور المعالجين بالنالوكسون (التين 5G,H). أولا ، لإظهار أن السلوك الجنسي المتغير في اختبار التزاوج النهائي لم يكن بسبب عدم وجود نالوكسون ، سواء كان نالوكسون أو مالح تم إعطاؤه في يوم اختبار التزاوج النهائي للحيوانات التي تلقت التزاوج مقترنا بالنالوكسون بينما اكتسبوا خبرة جنسية (التين 5A). كان هناك تأثير رئيسي مهم في يوم التزاوج على فترات التأخير للتثبيت (التين 5B; F(2,27) = 30.031، p = 0.038) و intromission (الجدول 2; F(2,27) = 10.686، p = 0.048). لم يكن هناك تأثير رئيسي لتزاوج يوم على الكمون إلى القذف (الجدول 2; F(2,27) = 2.388، p = 0.109) على غرار ما تم وصفه أعلاه ، لم تؤثر معالجة النالوكسون أثناء التزاوج على تيسير السلوك الجنسي خلال جلسات التجربة الجنسية الخمس الأولى. كلتا المجموعتين (المجموعات المالحة والنالوكسون المعالجة على النحو الذي يحدده العلاج المتلقاة أثناء اختبار التزاوج النهائي ؛ وكلاهما استلم النالوكسون أثناء التزاوج) أظهروا سلوكًا جنسيًا سهلاً في اليوم 5 مقارنةً بـ 1 يومًا وأظهروا تأخرًا أقصر بكثير في التثبيت الأول (التين 5B. المالحة: p = 0.033 النالوكسون: p = 0.014) و intromission (الجدول 2. المالحة: p = 0.034 النالوكسون: p = 0.026). الحيوانات التي تلقت النالوكسون أو المالحة في يوم اختبار التزاوج النهائي كان لها تأخرات أطول للتركيب (التين 5B. المالحة: p = 0.018 النالوكسون: p = 0.029) و intromission (الجدول 2. المالحة: p = 0.019 النالوكسون: p = 0.020) مقارنة مع اليوم الخامس من تجربة التزاوج. ولذلك ، فإن إعطاء النالوكسون أو المالحة في يوم الاختبار مباشرة قبل التزاوج لم يؤثر على تأثير علاج النالوكسون أثناء جلسات التجربة الجنسية وكان تخفيف التيسير طويل الأجل للسلوك الجنسي مماثلاً لتلك التي تظهر في الحيوانات التي لم تتلق أي حقن يوم اختبار التزاوج النهائي (التين 4).

الرقم 5. 

الأفيونيات الحيوية الذاتية مهمة في التعبير طويل الأمد عن التيسير الناجم عن الخبرة في السلوك الجنسي. A، تصميم تجريبي لتجربة تأثير العلاج NLX في يوم الاختبار. B، جبل الكمون في أيام 1 و 5 من خمسة أيام متتالية من يوم اختبار التزاوج والتزاوج النهائي (اختبار) التالية المالحة (الرمادية) أو حقن naloxone (أسود). تمثل البيانات يعني ± SEM. * يشير إلى اختلاف كبير بين اليوم 1 و 5 خلال المعالجة. # تشير إلى فرق كبير بين يوم الاختبار و يوم 5 ضمن العلاج. C، تصميم تجريبي للتجربة لاختبار تأثير النالوكسون ما قبل العلاج وحده دون خبرة جنسية في سلوك التزاوج. D، جبل الكمون في يوم اختبار التزاوج النهائي ، أيام 7 التالية 5 أيام إما الحقن المالحة أو النالوكسون في غياب التزاوج. تمثل البيانات يعني ± SEM. E، تصميم تجريبي للتجربة لاختبار ما إذا كان علاج النالوكسون قد أثر على عرض المدى القصير للسلوك الجنسي الميسر في الحيوانات ذات الخبرة الجنسية. F، جبل الكمون في يوم 1 واليوم 5 من خمسة أيام متتالية من يوم اختبار التزاوج والتزاوج النهائي ، 1 يوم بعد يوم 5 في وجود حقن المالحة (الرمادية) أو naloxone (أسود). تمثل البيانات يعني ± SEM. * يشير إلى اختلاف كبير بين اليوم 1 و 5 خلال المعالجة. G، تصميم تجريبي للتجربة لاختبار ما إذا كان علاج النالوكسون يمنع الآثار المجزية للسلوك الجنسي. H، الوقت الذي يقضيه في التزاوج الغرفة المزدوجة (بالثواني) أثناء الاختبار القبلي (الأبيض) وما بعد الاختبار (الأسود) للحيوانات التي تستقبل النالوكسون أو المالحة قبل التزاوج. تمثل البيانات يعني ± SEM. * يشير إلى فرق كبير مقارنة مع الاختبار القبلي.

الجدول 2. 

البيانات الموضحة هي تأخر في الانطواء والقذف (بالثواني) من تجارب السيطرة التي أجريت لتحديد أن آثار الحصار MOR على فقدان تعزيز السلوك الجنسي على المدى الطويل وقعت مستقلة عن عدم وجود إدارة النالوكسون في يوم اختبار التزاوج النهائي

لتحديد ما إذا كانت معالجة النالوكسون عند إقرانها مع تجربة جنسية وعدم تكرارها إلى النالوكسون في حد ذاتها التي تسببت في إضعاف السلوك الجنسي 7 d بعد العلاج الأخير ، تلقت الحيوانات الساذجة جنسياً إما خمس حقن يومية من حقن النالوكسون أو المالحة قبل اختبار التزاوج النهائي 7 د لاحقا (التين 5C). تم الكشف عن عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية لأي معلمة التزاوج بين مجموعات ملحية و naloxone pretreated (التين 5D. كمون جبل ؛ الكمون intromission: المالحة 139.7 ± 40.3 مقابل naloxone 121.83 ± 42.55؛ الكمون القذف: المالحة 887.9 ± 70.0 مقابل naloxone 1050.8 ± 327.31). هذه النتائج تشير إلى أن النالوكسون وحده غير كاف لتغيير السلوك الجنسي اللاحق ، على غرار عدم وجود تأثيرات من النالوكسون وحده على اللدونة VTA الدوبامين العصبية.

نحن نفترض أن معالجة النالوكسون أثناء اكتساب التجربة الجنسية تعطل التعبير طويل الأجل عن التسيير الناجم عن التجربة الجنسية للسلوك الجنسي. لاختبار ذلك بشكل أكبر ، تم اختبار آثار علاج النالوكسون أثناء التزاوج على السلوك الجنسي اللاحق خلال اختبار التزاوج النهائي ، الذي أجري فقط 1 د بعد التزاوج الأخير (تصميم تجريبي ؛ التين 5E). كان هناك تأثير رئيسي مهم في يوم التزاوج على جبل (التين 5F; F(2,20) = 19.780، p <0.001) والكمون الداخلي (الجدول 2; F(2,20) = 19.041، p <0.001). لم يكن هناك تأثير رئيسي كبير لليوم على زمن انتقال القذف (الجدول 2; F(2,20) = 3.042، p = 0.070). على النحو الموصوف أعلاه ، أظهر جميع الذكور (على الرغم من العلاجات المالحة أو النالوكسون) تيسير السلوك الجنسي خلال جلسات التجربة الجنسية الخمس المشار إليها بوقت استجابة أقصر بكثير للتثبيت (التين 5F. المالحة: p = 0.002 النالوكسون: p = 0.018) و intromission (الجدول 2. المالحة: p = 0.006 النالوكسون: p = 0.009) في يوم 5 مقارنةً بـ 1 اليوم. وبالمثل ، تم توضيح السلوك الجنسي الميسّر في يوم الاختبار مقارنةً باليوم 1 المشار إليه بوقت استجابة أقصر بكثير للتثبيت (التين 5F. المالحة: p = 0.001 النالوكسون: p = 0.020) و intromission (الجدول 2. المالحة: p = 0.004 النالوكسون: p = 0.009). الأهم من ذلك ، لم يؤثر علاج النالوكسون أثناء التزاوج بشكل كبير على التيسير الناجم عن التجربة الجنسية لسلوك الجنس عند اختبار 1 بعد تجربة الجنس ، بغض النظر عن معالجة النالوكسون في يوم اختبار التزاوج النهائي.

أخيرًا ، اختبرنا احتمالية تأثير تأثيرات النالوكسون المخففة على التعبير طويل المدى للسلوك الجنسي الميسر بسبب تأثير النالوكسون المحظور على الخصائص المجزية للسلوك الجنسي. ومع ذلك ، فإن النالوكسون الذي تم إعطاؤه مباشرة قبل التزاوج لم يغير تكوين CPP للتزاوج (التين 5G) ، مما يوحي بأن علاج النالوكسون لم يغير المكافأة الجنسية. شكلت كل من المجموعات المالحة والنالوكسون المعاملة CPP كبيرة للسلوك الجنسي كما يتضح من زيادة كبيرة في الوقت الذي يقضيه في غرفة الزوجية (التين 5H. المالحة: p = 0.038 النالوكسون: p = 0.002) أثناء الاختبار اللاحق مقارنة مع الاختبار القبلي. لذلك ، لا تمارس النالوكسون تأثيره الضار على الحفاظ على السلوك الجنسي الميسر عن طريق منع المكافأة المرتبطة بالسلوك الجنسي.

يعتمد تيسير السلوك الجنسي على إجراء EOP في VTA

للتأكد من أن EOP يعمل على وجه التحديد في VTA للحث على تسهيل السلوك الجنسي على المدى الطويل ، فإن التصميم التجريبي المبين في الشكل 3A تكررت مع دفعات نالوكسون داخل VTA بدلاً من الحقن النظامية. كانت النتائج مماثلة للإدارة النظامية المذكورة أعلاه. كان هناك تأثير رئيسي مهم في يوم التزاوج على جميع معايير السلوك الجنسي (التين 6Aجبل الكمون: F(2,33) = 4.494، p = 0.019؛ B، وقت استجابة intromission: F(2,33) = 4.042، p = 0.027؛ C، وقت استجابة القذف: F(2,33) = 5.309، p = 0.010) وعلاج النالوكسون داخل VTA على فترات الانتظار للتثبيت (F(1,33) = 7.345، p = 0.011) و intromission (F(1,33) = 6.126، p = 0.019). لم تمنع النالوكسون داخل نواة VTA التيسير الأولي الذي يسببه التغير في السلوك الجنسي أثناء 5 d للتزاوج ، حيث أظهر الذكور الذين تم علاجهم من النالوكسون انخفاضًا في زمن الانتظار للتثبيت (التين 6A; p = 0.001) ، intromission (التين 6B; p <0.001) ، والقذف (التين 6C; p = 0.001) في يوم 5 مقارنةً بـ 1 اليوم. لم تختلف الذكور المعاملة النالوكسون عن الذكور المعاملة المالحة في اليوم الخامس من التزاوج في أي من حالات التأخير. تسبب علاج النالوكسون الداخلي ، مثل نظام الإدارة ، زيادة كبيرة في التحميل (التين 6A; p <0.001) والكمون الداخلي (التين 6B; p <0.001) في يوم التزاوج الأول مقارنة بالذكور المعالجين بمحلول ملحي ، والذي لم يتم ملاحظته أثناء جلسات التزاوج اللاحقة (التي لم يختلف خلالها الذكور المعالجون بالنالوكسون والملح). كانت إحدى الملاحظات غير المتوقعة هي أنه في هذه التجربة ، لم يُظهر الذكور المعالجون بمحلول ملحي تسهيلات ذات دلالة إحصائية للتسلل أو الكمون الداخلي (كما هو موضح في جميع التجارب الموضحة أعلاه) ، وتم تقصير وقت استجابة القذف فقط في اليوم الخامس مقارنة باليوم الأول (محلول ملحي: p = 0.001).

الرقم 6. 

المواد الأفيونية الذاتية المنشأ في التخفيف من التداخل الناجم عن التداخل بين السلوكيات الجنسية وسلوكها على المدى الطويل. معلمات السلوك الجنسي للذكور المعالجين بالمحلول الملحي (Sal، white bars، n = 8) أو NLX (أشرطة سوداء ، n = 6) مع إدارة intra-VTA. البيانات المعروضة هي وقت الاستجابة للتنزيل (A) ، intromission (B) ، والقذف (C) في الأيام 1 و 5 من خمسة أيام متتالية من التزاوج. بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض البيانات في يوم اختبار التزاوج النهائي ، 7 d في اليوم التالي 5 في غياب حقن المالحة أو النالوكسون. تمثل البيانات يعني ± SEM. + يشير إلى فرق كبير بين أيام 1 و 5 داخل العلاج ؛ * يشير إلى اختلاف كبير بين يوم الاختبار ونهاره 5 داخل العلاج ؛ # يشير إلى فرق كبير بين نالوكسون ومجموعات سال في النهار. الرسومات التخطيطية لأقسام VTA التاجية (H، −4.60؛ I، −5.00؛ J، −5.25 من bregma) تشير إلى مواقع الحقن داخل VTA لجميع الحيوانات في التجربة 5 (المالحة ؛ الأبيض ؛ النالوكسون ، الأسود ؛ المفقود ، الرمادي) ، باستخدام رسومات القوالب من خرائط Swanson Brain Maps (سوانسون ، 2004). كانت Cannulas ثنائية ، لكن مواقع الحقن ممثلة من جانب واحد لسهولة العرض. fr، Fasciculus retroflexus؛ ML ، lemniscus الإنسي ؛ SN ، المادة السوداء.

منع علاج naxolone Intra-VTA الحفاظ على السلوك الجنسي الميسور الذي لوحظ في الذكور ذوي الخبرة الجنسية ، على غرار تأثيرات النالوكسون النظامية. على وجه التحديد ، في يوم الاختبار النهائي ، كان للذكور المعالجين بالنالوكسون فترات تأخر أطول للتركيب (التين 6A; p = 0.011) ، intromission (التين 6B; p = 0.010) والقذف (التين 6C; p = 0.015) مقارنة بجلسة التزاوج الخامسة ومقارنتها بالذكور المعالجين بالملح في يوم الاختبار النهائي (التين 6A, p = 0.006؛ B, p = 0.008). على النقيض من ذلك ، لم تختلف الحيوانات المعالجة بالملح في حالات التأخير للتثبيت والتداخل بين يوم الاختبار النهائي واليوم 5 للتزاوج. كانت هذه التأثيرات خاصة بتوصيل النالوكسون إلى VTA ، كذكر مع مواقع إقناء القنية القريبة ولكنها لا تستهدف VTA (التين 6D; n = 3) عرض التسهيل على المدى الطويل للسلوك الجنسي على غرار الضوابط المعالجة المالحة (ML ، IL = 53 ± 6.245 ، EL = 389 ± 299.5 ومختلف بشكل كبير مقارنة مع الحيوانات النالوكسون داخل VTA في يوم اختبار التزاوج النهائي (ML ، انا: p = 0.029 EL: p = 0.0395).

مطلوب إجراء EOP للتفعيل العصبي الناجم عن العرق المرتبط بالجنس

وبناءً على النتائج حتى الآن ، افترضنا أن تنشيط EOP في VTA أثناء تجربة التزاوج وخفض حجم soma dopamine اللاحق له أهمية بالغة لإسناد البراعة الحافزة إلى محفز التزاوج المرتبط بالمكافئ ، وبالتالي الحفاظ على تسهيل السلوك الجنسي. لاختبار هذه الفرضية ، تم فحص آثار حجب مستقبلات الأفيون أثناء تجربة التزاوج على النشاط العصبي الناجم عن التعرض اللاحق إلى إشارات سياقية مشروطة تنبئ بالمكافأة الجنسية (العتبات السياقية المرتبطة بالجنس). كانت الحيوانات الساذجة جنسياً أيضاً تتعرض لمنبهات بيئية ، ولكنها لم تكن مرتبطة بتجربة التزاوج السابقة ، ومن ثم كانت تلميحات محايدة. وأخيرا ، تم تحديد مستويات PERK الأساسية في مجموعات المراقبة من ذوي الخبرة الجنسية والسذاجة التي بقيت في أقفاص المنزل وعدم التعرض لأي إشارات (لا جديلة). تأكيد وتوسيع النتائج السابقة (بلفور وآخرون ، 2004) ، التعرض إلى الإشارات السياقية المرتبطة بمكافأة الجنس السابقة زاد بشكل كبير من تعبير PERK في الذكور ذوي الخبرة الجنسية في NAc (التين 7) و mPFC (التين 8A-C) ، ولكن لم يسبب التنشيط العصبي في BLA (التين 8D) أو CPu (لا تظهر البيانات). كانت هناك تأثيرات رئيسية لتعرض الإشارات في نواة NAc (F(1,12) = 12.1941، p = 0.004) ، ACA (F(1,12) = 5.541، p = 0.038) و PL (F(1,12) = 5.241، p = 0.041) ، ومعالجة النالوكسون في النواة NAc (F(1,12) = 6.511، p = 0.025) ، ACA (F(1,12) = 15.242، p = 0.002) و PL (F(1,12) = 7.336، p = 0.019). كان هناك تفاعل كبير في نواة NAc (F(1,12) = 10.107، p = 0.008) ، ACA (F(1,12) = 16.060، p = 0.002) ، PL (F(1,12) = 8.235، p = 0.014) و IL ((F(1,12) = 6.965، p = 0.022). أولًا ، زاد التعرّض المصاحب للتزاوج بشكل ملحوظ بشكل ملحوظ في الحيوانات التي تمت معالجتها بالمال المالحة (Exp Sal ​​+ Cue) مقارنةً بالضوابط التي لم تكن معرّضة لأي إشارات وأخذت من القفص المنزلي (Exp Sal-No Cue) في NAc core (التين 7A; p <0.001) ، والمناطق الفرعية mPFC ACA (التين 8A; p = 0.001) ، PL (التين 8B; p = 0.003) و IL (التين 8C; p = 0.029). في المقابل ، في الحيوانات السذاجة التي عولجت بالمحبة المالحة ، فإن التعرض للإشارات السياقية ، التي لم تكن مرتبطة بالمكافأة الجنسية ، لم يحرض الشخص في أي من مناطق الدماغ (Naive Sal + Cue بالمقارنة مع السلالة Sal-No Cue ؛ تين. 7, 8) ، مما يدل على أن تحريض pERK هو خاص لتعرض الإشارات المرتبطة التجربة الجنسية. علاوة على ذلك ، لم تغير التجربة الجنسية وحدها تعبير PERK الأساسي في أي من مناطق الدماغ ، حيث لم تكن هناك فروق بين المجموعات التي تم أخذها من الأقفاص المنزلية ، سواء كانت ساذجة جنسياً أو خبرة ، وعولجت بمحلول ملحي أو نالوكسون.

الرقم 7. 

مطلوب عمل الأفيونية الذاتية للتفعيل العصبي في NAc الناجم عن العظة مكيفة المرتبطة بالجنس. عدد خلايا الـ PERK-IR لكل مم2 في النواة المتكئة النواة (A) وقذيفة (B) في السذاجة الجنسية (البيضاء) والحيوانات ذوي الخبرة (إكسب ؛ الأسود) التي كانت مسبقة المعالجة مع NLX النظامية أو المالحة (سال) أثناء جلسات التزاوج (إكسب الذكور) أو جلسات التعامل (الذكور السذاجة). كانت المجموعات إما معرضة للعديد من الإشارات السياقية (Cue) ، التي كانت عبارة عن إشارات مرتبطة بالزواج في الذكور والإشارات المحايدة في الحيوانات السذاجة ، أو مأخوذة من الأقفاص المنزلية (No Cue ، يشار إليها بنقص التسمية Cue). يتم تقديم البيانات على أنها تعني ± SEM ؛ * يشير إلى اختلاف كبير مقارنة مع الضوابط المسببة للالتهاب لا تتعرض للمجموعة المالحة (Naive Sal-No Cue and Exp Sal-No Cue) ؛ # تشير إلى فرق كبير مقارنة مع مجموعة Exp-Cue-exp Express (Sal Sal + Cue). صور ممثِّلة لخلايا PERK-IR لكل ملم2 في جوهر NAc من الذكور ذوي الخبرة الجنسية مع سال (C, D) أو NLX (E, F) إما أنها مأخوذة من القفص المنزلي (No Cue، C، E) أو معرضة للعواطف المرتبطة بالزواج (Cue؛ D, F). N = 4 كل مجموعة ما عدا Naive NLX (No Cue) ، n = 3. تيار متردد ، أمامي. شريط مقياس ، 100 μm.

الرقم 8. 

تأثيرات النالوكسون على التزاوج pERK الناتج عن التداخل في المناطق المستهدفة الأخرى لـ VTA. عدد خلايا الـ PERK-IR لكل مم2 في السذاجة الجنسية (البيضاء) وذوي الخبرة (إكسب ؛ الأسود) الحيوانات التي تم علاجها مسبقا مع النظامية NLX أو المالحة (سال) أثناء جلسات التزاوج وتعرضوا للإشارات السياقية (Cue) أو القفص المنزلي (لا إشارات) في ACA (A) ، PL (B)، انا (C) و BLA (D). البيانات تمثل يعني ± SEM. * يشير إلى اختلاف كبير مقارنة مع الضوابط المسببة للالتهاب لا تتعرض للمجموعة المالحة (Naive Sal-No Cue and Exp Sal-No Cue) ؛ # يشير إلى فرق كبير مقارنة مع تعامل سى تعامل جديلة السخرية جنسيا (Naive Sal + Cue).

في دعم فرضيتنا ، علاج النالوكسون أثناء التجربة الجنسية الحث الموهن pERK إلى حد كبير من قبل إشارات مكيفة المرتبطة بالجنس. لم يختلف تعبير PERK في هؤلاء الذكور ذوي الخبرة المستخرجة من النالوكسون (Exp NLX + Cue) عن تعبير pERK الأساسي في أي من مجموعات التحكم الساذجة جنسياً أو ذوي الخبرة المأخوذة من الأقفاص المنزلية (Naive Sal-No Cue أو Naive NLX- لا جديلة). علاوة على ذلك ، كان التعبير PERK في الذكور ذوي الخبرة من النالوكسون (NLX + Cue) أقل بشكل ملحوظ مقارنة مع الحيوانات ذات الخبرة المجهزة بمذيب جديلة (Exp Sal ​​+ Cue) في NAc core (التين 7A; p = 0.002) والمناطق دون الإقليمية التابعة لـ mPFC (التين 8A، ACA: p <0.001 ؛ B، PL: p = 0.002؛ C، انا: p = 0.015).

في غلاف NAc ، لم يُحْدِث تحليل ANOVA في الاتجاهين آثارًا مهمة إحصائيًا لعوامل التعرض للجديلة وعلاج النالوكسون. ومع ذلك ، أظهرت المقارنة الزوجية أن التعرض جديلة لحث pERK في المجموعة التي تمت معالجتها ذات الخبرة المالحة (Exp SAL + Cue) مقارنة مع مجموعة التحكم الساذجة المالحة غير معروض جديلة (التين 7B. Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).

مناقشة

توضح الدراسة الحالية أن EOP يتصرف في VTA أثناء السلوك الجنسي ، وهو سلوك مكافأة طبيعية ، تسبب في انخفاض قوي ولكن عابر في حجم سوما من الخلايا الدوبامين VTA. لم يلاحظ انخفاض في حجم soma في الخلايا العصبية غير الدوبامين VTA ، ولا في الخلايا العصبية الدوبامين في المادة السوداء المجاورة ، مما يشير إلى أن هذا التغيير كان محددًا لخلايا الدوبامين VTA. تبدو هذه اللدونة VTA الدوبامين مشابهة لتلك الناجمة عن التعرض الأفيوني المزمن (Sklair-Tavron et al.، 1996; روسو وآخرون ، 2007; Mazei-Robison et al.، 2011) وتسبب في تحمل مماثل للمكافأة الخارجية الأفيونية (المورفين). أثبتنا أن اللدونة VTA الدوبامين أمر بالغ الأهمية بالنسبة للصيانة (على المدى الطويل) ولكن ليس على المدى القصير (تطوير) ، وتعزيز السلوك الجنسي والنشاط العصبي الناجم عن جديلة الناجمة عن المكافأة (pERK) في المناطق المستهدفة VTA: NAc و mPFC. هذه النتائج تدل على دور اللدونة VTA الدوبامين في التعبير على المدى الطويل من الحافز البارز من الإشارات التنبؤية مكافأة الطبيعية أو مكافأة الذاكرة.

لقد تم توثيقه جيدا أن التجربة الجنسية تؤدي إلى تسهيل السلوك الجنسي اللاحق ، بما في ذلك بداية أسرع لبدء التزاوج وزيادة الأداء (بلفور وآخرون ، 2004; Pitchers et al.، 2010a,b, 2012). يتم الحفاظ على هذا التسهيل أو تعزيز السلوك الجنسي لمدة لا تقل عن 28 بعد التزاوج (Pitchers et al.، 2012). بالإضافة إلى ذلك ، فقد تبين أن السلوك الجنسي والمنبهات المشروطة التي تنبئ بالمكافأة الجنسية تتسبب في تدخّل MOR في الـ VTA وتحرض التنشيط العصبوني في جميع أنحاء النظام المتوسط ​​، بما في ذلك VTA (الدوبامين والخلايا العصبية nondopamine) ، NAc ، PFC ، و BLA (بلفور وآخرون ، 2004, 2006). تلعب الخلايا العصبية الدوبامين (VTA) المؤثرة جيداً دوراً حاسماً في تعلم وإسناد الحافز التحفيزي للمحفزات المرتبطة بالمكافئات.Berridge and Robinson، 1998; Berridge et al.، 2009; فلاجل وآخرون ، 2011) وحرجة لتوقع المكافأة (شولتز ، 2010). تتوسع النتائج الحالية على معرفتنا الحالية من خلال إظهار أن المرونة العصبية VTA التي يسببها المكافئ أمر بالغ الأهمية لهذه الوظائف ، وتعتمد على تنشيط MOR بواسطة EOP في VTA. من غير المعروف حاليًا أي EOP هو ligand MOR الذي يعمل في VTA أثناء سلوك الذكور الذكوري. على الرغم من أن كل من Endorphin و enkephalin متورطان في الحافز التحفيزي لتعزيز المواد الغذائية (هايوارد وآخرون ، 2002) ، لا يزال يتعين إقامة هذا السلوك الجنسي للذكور. لقد أظهرنا سابقًا أنه لا يتم تنشيط الخلايا العصبية β-endorphin أثناء التزاوج ، ولا توجد زيادات في mRNA POMC ؛ وبالتالي ، مما يشير إلى أن β إندورفين قد لا يكون EOP الحرجة التي تتصرف في VTA أثناء التزاوج (Davis وآخرون ، 2007). كانت هذه اللدونة VTA الدوبامين ضرورية للنشاط العصبي في mPFC ، NAc ، و VTA بعد التعرض للمنبهات البيئية للتنبؤ بالجنس. علاوة على ذلك ، كانت اللدونة VTA الدوبامين حاسمة للتعبير على المدى الطويل من زيادة بدء وأداء السلوك الجنسي. على النقيض من ذلك ، لم تكن المرونة العصبية VTA الناجمة عن التجربة الجنسية مطلوبة للاستجابة المتعة كمكافأة جنسية (يحددها CPP) والتيسير قصير المدى للدوافع والأداء الجنسي (أثناء تجربة الجنس أو 1 d فيما بعد) بقيت سليمة بالرغم من الحصار MOR أثناء التزاوج (مهرارا وبوم ، 1990). بدلا من ذلك ، تشير البيانات إلى أن المرونة العصبية الدوبامين VTA تتوسط المدى الأطول (7 d بعد تجربة الجنس الأخيرة. Pitchers et al.، 2012التعبير عن "الرغبة" في المكافأة الجنسية والاستجابات ذات الدوافع المتزايدة لإشارات التزاوج (ميلر وبوم ، 1987; Berridge and Robinson، 1998).

أثبتت الحيوانات ذات الخبرة الجنسية عبر التسامح مع مكافأة المورفين ، على غرار الآثار المترتبة على عجلة تشغيل في الفئران ، آخر سلوك مجزي طبيعي ، وهو تأثير تم حظره مع علاج النالوكسون (Lett et al.، 2001, 2002) وعزم على أن تعتمد على اللدونة VTA خلية الدوبامين (النتائج الحالية). على غرار المكافآت الطبيعية ، يؤدي التعرض المتكرر للمورفين أو الهيروين إلى انخفاض مؤقت في حجم سُدا الدوبامين (VTA) (Sklair-Tavron et al.، 1996; Spiga وآخرون ، 2003; روسو وآخرون ، 2007; Mazei-Robison et al.، 2011). وعلاوة على ذلك ، فإن التعرض الأفيوني مع فترات انسحاب قصيرة يؤدي إلى تحمّل المكافأة ، كما هو متورط من جرعات أعلى من الدواء المطلوب لتشكيل جمعيات المكافأة (Shippenberg وآخرون ، 1987; روسو وآخرون ، 2007) ، ويسبب الحيوانات ذاتية الإدارة لتصعيد تناول المخدرات (أحمد وآخرون ، 2000; Walker et al.، 2003). ومن ثم ، يعمل EOP والأفيونات على ركائز عصبية مشتركة للحث على تحمل الثواب أثناء الانسحاب المبكر ، والذي قد يعكس آلية تعويضية تعويضية لمواجهة التحفيز بالتعرض المتكرر (Koob و Le Moal، 2005). في المقابل ، خلال الامتناع عن المخدرات على المدى الطويل opiate ، يتم عكس التسامح إلى حساسية لخصائص المكافأة للدواء (هاريس وأستون جونز ، 2003; أستون جونز وهاريس ، 2004; هاريس و Gewirtz ، 2004). ومن المثير للاهتمام أن التجربة الجنسية التي أعقبتها فترة الامتناع عن ممارسة الجنس مع 7 – 28 d قد تم العثور عليها لتسبب الحساسية المتبادلة لمكافأة psychostimulant (Pitchers et al.، 2010a) ، والتي تعتمد على تعبير deltaFosB الناجم عن التزاوج وتفعيل مستقبلات الدوبامين 1 في NAc (Pitchers et al.، 2013). ومن ثم ، فإن تجربة المكافأة الجنسية تتسبب في تحمُّل مكافح الأفيون في وقت واحد وتوعية بمكافأة نفسية ، على الرغم من أن فترة الامتناع عن ممارسة الجنس لفترة أطول فيما يتعلق بالتكافؤ مع المورفين تبقى محل اختبار. نحن نفترض أن هذه التأثيرات المعاكسة على المكافأة الدوائية قد تتوسطها أشكال مختلفة من اللدونة العصبية في مناطق مختلفة من النظام المتوسطي: عمل VTA EOP ودوبامين اللدونة تتوسط التسامح الأفيري للجوائز (الدراسة الحالية) ، في حين أن تعبير NAc deltaFosB يسيطر على التحسس الذهني. (Pitchers et al.، 2013). كل من هذه الأحداث يمكن أن تسهم في تصاعد اتخاذ المخدرات (أحمد وكوب ، 1998, 1999; أحمد وآخرون ، 2000, 2002, 2003; Walker et al.، 2003).

لا تزال الآليات الجزيئية التي تؤثر فيها EOP على الخلايا العصبية الدوبامين VTA خلال سلوك المكافأة الطبيعية غير معروفة. مسار IRS2-Akt-mTORC2 هو وسيط رئيسي لحجم سوما أقل في VTA الناجم عن المورفين المتكرر (Jaworski وآخرون ، 2005; روسو وآخرون ، 2007; Mazei-Robison et al.، 2011). يمكن منع التغييرات المتكررة التي تحدثها إدارة المورفين في حجم الخلايا العصبية من الدوبامين في VTA عن طريق تسريب داخل باطن VTA لعامل التغذية العصبي المشتق من الدماغ (BDNF؛ Sklair-Tavron و Nestler ، 1995). يقوم BDNF بتنشيط هذا المسار من خلال تشوير TrkB (روسو وآخرون ، 2007) ، كينازات مستقبلية ذات ألفة عالية لـ BDNF وجزء من مسار IRS2-Akt (Seroogy و Gall ، 1993; نعمان وسيرولوجي ، 1999) ، وأعرب عن الخلايا العصبية الدوبامين و GABA في VTA. إن تنظيم المكونات المختلفة لمسار IRS2-Akt باستخدام تقنية نقل الجينات الناقل الفيروسي يحاكي تأثيرات التعرض الأفيوني المزمن. وعلاوة على ذلك ، يمكن إنقاذ آثار التعرض الأفيوني عن طريق استعادة مسار التأشير (روسو وآخرون ، 2007) و overexpression من عنصر من mTORC2 يمنع تخفيض soma الدوبامين التي يسببها المورفين (Mazei-Robison et al.، 2011). ولذلك ، فإن العمل السابق الذي يبحث في تأثيرات المواد الأفيونية المزمنة على حجم soma dopamine المزمنة يُظهر أن خفض كمية المورفين الناجم عن مسار IRS2-Akt-mTOR كافٍ وضروري لهذا التأثير (Mazei-Robison and Nestler، 2012). وبالتالي ، فمن المغري أن نتكهن بأن آثار التجربة الجنسية على المرونة العصبية الدوبامين VTA تتوسط بشكل مماثل من قبل BDNF ومسار IRS2-Akt-mTORC2.

في الختام ، أوضحت الدراسة الحالية أن المرونة العصبية VTA ناجمة عن التجربة مع سلوك المكافأة الطبيعية ، ولا سيما بسبب السلوك الجنسي الذكري المتكرر. على وجه التحديد ، تعمل EOP في VTA لتخفيض حجم sop الدوبامين ، الذي يُفترض أن يرتبط بزيادة الإثارة العصبية وناتج أقل من الدوبامين يؤدي إلى نظام hypodopaminergic ، ويغير نظام mesolimbic يعمل استجابةً للمؤشرات التي تنبأت بالمكافأة الجنسية. علاوة على ذلك ، فإن المرونة العصبية VTA ضرورية للدوافع المحفزة ومكافأة الذاكرة ، ولكن ليس للأثر السعيد للسلوك الجنسي. أخيرا ، المرونة العصبية VTA التي يسببها سلوك المكافأة الطبيعية تليها فترة قصيرة من مكافأة الامتناع عن ممارسة الجنس التأثير الأفيري ، وبالتالي قد تؤثر على قابلية التأثر لتطوير إدمان المخدرات.

الحواشي

  • تم استلام يناير 12 و 2014.
  • تم استلام المراجعة في مايو 17 ، 2014.
  • مقبول في مايو 20 ، 2014.

  • تم دعم هذا البحث من خلال المنح المقدمة من المعهد الكندي للبحوث الصحية إلى LMC ومجلس العلوم الطبيعية والهندسة للبحوث إلى KKP

  • الكتاب تعلن أي المصالح المالية المتنافسة.

  • يجب إرسال المراسلات إلى الدكتورة ليكي إم كولن ، مركز جامعة ميسيسيبي الطبي ، قسم علم وظائف الأعضاء والفيزياء الحيوية ، 2500 North State Street ، جاكسون ، MS 39216-4505. [البريد الإلكتروني محمي]

مراجع حسابات

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) السلوك الجنسي الفئران الذكور. دماغ دماغ الدقة 1: 203-209.

  2. ↵
    1. احمد ش
    2. Koob GF

    (1998) الانتقال من تناول الدواء المعتدل إلى المفرط: التغيير في نقطة ضبط hedonic. علوم 282: 298-300.

  3. ↵
    1. احمد ش
    2. Koob GF

    (1999) زيادة طويلة الأمد في نقطة التحديد للإدارة الذاتية للكوكايين بعد التصعيد في الجرذان. علم الادوية النفسية 146: 303-312.

  4. ↵
    1. احمد ش
    2. ووكر جونيور ،
    3. Koob GF

    (2000) زيادة مستمرة في الدافع لاتخاذ الهيروين في الفئران مع تاريخ من تصعيد المخدرات. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. احمد ش
    2. كيني PJ ،
    3. Koob GF ،
    4. ماركو أ

    (2002) أدلة بيولوجية عصبية للأوصفة المرتبطة بمصاحبة تعاطي الكوكايين. نات نيوروسكي 5: 625-626.

  6. ↵
    1. احمد ش
    2. لين د ،
    3. Koob GF ،
    4. بارسونز إل

    (2003) لا يعتمد تصعيد الكوكائين في تعاطي الكوكايين على النواة المتغيرة من الكوكايين المتناوبة في مستويات الدوبامين. J نوروتشيم بمعدل 86: 102-113.

  7. ↵
    1. أستون جونز جي ،
    2. هاريس GC

    (2004) ركائز الدماغ لزيادة البحث عن المخدرات خلال الانسحاب طويلة الأمد. الجهاز العصبي 47: 167-179.

  8. ↵
    1. بلفور الشرق الأوسط ،
    2. يو لام ،
    3. تبريد LM

    (2004) يعمل السلوك الجنسي والمنبهات البيئية المرتبطة بالجنس على تنشيط نظام الميزولببيك في ذكور الجرذان. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. بلفور الشرق الأوسط ،
    2. براون جى إل ،
    3. يو لام ،
    4. تبريد LM

    (2006) المساهمات المحتملة من efferents من قشرة الفص الجبهي الإنسي إلى التنشيط العصبي بعد السلوك الجنسي في الفئران الذكور. علم الأعصاب 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D ،
    2. Guitart X ،
    3. Nestler EJ

    (1992) بروتينات العصب neurofilament ونظام دوبامين mesolimbic: التنظيم الشائع من قبل المورفين المزمنة والكوكايين المزمن في منطقة tegmental البطنية الفئران. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC،
    2. روبنسون تي

    (1998) ما هو دور الدوبامين في المكافأة: تأثير المتعة ، أو مكافأة التعلم ، أو التحفيز؟ بحوث الدماغ بحوث الدماغ القس 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC،
    2. روبنسون تي ،
    3. الدريدج JW

    (2009) تشريح مكونات المكافأة: "الإعجاب" ، "الرغبة" ، والتعلم. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K ،
    2. فيرنر تي ،
    3. كارنيس إس ،
    4. كارنيس بي ،
    5. Bowirrat A ،
    6. جيوردانو جيه ،
    7. اوسكار بيرمان ام
    8. الذهب م

    (2012) الجنس ، والمخدرات ، و الروك أند رول: فرضية التنشيط المتوسط ​​الشائع كدالة لتعدد الأشكال الجيني المكافأة. J المؤثرات العقلية المخدرات 44: 38-55.

  14. ↵
    1. تشو ن ن ،
    2. Zuo YF ،
    3. منغ لام ،
    4. لي دي واي
    5. هان JS ،
    6. تسوى CL

    (2007) عكس التحفيز الكهربائي المحيطي خفض حجم الخلية وزيادة مستوى BDNF في منطقة tegmental بطني في الفئران المزمنة المورفين المعالجة. الدماغ الدقة 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. ديفيس BA ،
    2. فيتزجيرالد ME ،
    3. براون جى إل ،
    4. أمستالدين KA ،
    5. تبريد LM

    (2007) تفعيل الخلايا العصبية POMC خلال الإثارة العامة ولكن ليس السلوك الجنسي في ذكور الفئران. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF ،
    2. كورى ايه
    3. فيليبس ايه جي

    (1997) التغيرات الديناميكية في النواة تتكثف تدفق الدوبامين أثناء تأثير كوليدج في ذكور الفئران. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB ،
    2. كلارك JJ ،
    3. روبنسون تي ،
    4. مايو لام ،
    5. Czuj A ،
    6. Willuhn I ،
    7. أكيرز CA ،
    8. كلينتون SM
    9. فيليبس PE ،
    10. عقيل اتش

    (2011) دور انتقائي للدوبامين في تعلم التحفيز والمكافأة. الطبيعة 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS ،
    2. أباريق KK ،
    3. بلفور الشرق الأوسط ،
    4. تبريد LM

    (2010a) خلط الملذات: استعراض آثار المخدرات على السلوك الجنسي في النماذج البشرية والحيوانية. هورم بيهاف 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS ،
    2. Wiskerke J ،
    3. وايز RA ،
    4. Lehman MN ،
    5. تبريد LM

    (2010b) يعمل الميثامفيتامين على المجموعات السكانية الفرعية من العصبونات التي تنظم السلوك الجنسي في ذكور الجرذان. علم الأعصاب 166: 771-784.

  20. ↵
    1. هاريس AC ،
    2. جيويرتز جيه سي

    (2004) ارتفاع المرتفع أثناء الانسحاب من المورفين الحاد: نموذج للانسحاب الأفيوني والقلق. علم الادوية النفسية 171: 140-147.

  21. ↵
    1. هاريس GC ،
    2. استون جونز جي

    (2003) الحافز المتغير والتعلم بعد الانسحاب الأفيوني: دليل على عدم انتظام معالجة المكافأة لفترات طويلة. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. هيوارد MD ،
    2. بنتار جي إي
    3. منخفضة MJ

    (2002) عجز المكافأة الانتقائي في الفئران التي تفتقر إلى بيتا إندورفين و enkephalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG ،
    2. Avena NM ،
    3. Bocarsly ME ،
    4. رادا ب

    (2009) الإدمان الطبيعي: نموذج سلوكي والدائرة يعتمد على إدمان السكر في الجرذان. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. هيمان سراج الدين ،
    2. RC مالينكا ،
    3. Nestler EJ

    (2006) الآليات العصبية للإدمان: دور التعلم والذاكرة المتعلقة بالجوائز. انو ريف نيوروسكي 29: 565-598.

  25. ↵
    1. إيكيموتو إس ،
    2. كول RR ،
    3. ماكبرايد WJ

    (1997) حصار مستقبلات GABA (A) في المنطقة الأمامية البطنية يزيد من مستويات الدوبامين خارج الخلية في النواة المتكئة من الفئران. J نوروتشيم بمعدل 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J ،
    2. سبانجلر S ،
    3. سيبورج دي بي ،
    4. Hoogenraad CC ،
    5. شنغ م

    (2005) السيطرة على التشجير الشجيري بواسطة الهدف phosphoinositide-3′-kinase-Akt-mammalian لمسار rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. جونسون SW ،
    2. شمال جمهورية أرمينيا

    (1992) الأفيونيات تثير الخلايا العصبية الدوبامين عن طريق فرط الاستقطاب من interneurons المحلية. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA ،
    2. ديويتي ف ،
    3. كاليفاس PW

    (1992) تنظيم إطلاق الدوبامين somatodendritic في المنطقة tegmental بطني بواسطة المواد الأفيونية و GABA: دراسة في microdialysis في الجسم الحي. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF ،
    2. لو موال م

    (2005) اللدونة من neurocircuitry مكافأة و "الجانب المظلم" من إدمان المخدرات. نات نيوروسكي 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) وسط محسن للتركيب المجهري المناعي. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT ،
    2. جرانت VL ،
    3. كوه ام تي

    (2001) تعمل نالوكسون على تخفيف تفضيل المكان المشروط الناتج عن العجلة التي تعمل في الجرذان. فيسيول بيهاف 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT ،
    2. جرانت VL ،
    3. كوه ام تي ،
    4. فلين جي

    (2002) إن الخبرة السابقة في تشغيل العجلات تعمل على تحقيق التسامح المتبادل مع التأثير المربح للمورفين. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. ماثيوز آر تي ،
    2. العاصمة الألمانية

    (1984) دليل الكهربية الكهربية لإثارة الفئران العصبية الدوبامين المنطقة الجزئية الفئران بواسطة المورفين. علم الأعصاب 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS ،
    2. كو JW ،
    3. فريدمان ،
    4. Lansink CS ،
    5. روبنسون AJ ،
    6. Vinish M ،
    7. كريشنان الخامس ،
    8. كيم س ،
    9. Siuta MA ،
    10. غالي ،
    11. نسويندر
    12. Appasani R ،
    13. Horvath MC ،
    14. نيف RL ،
    15. Worley PF ،
    16. سنايدر SH ،
    17. هيرد ييل
    18. يهتف JF ،
    19. هان ام اتش
    20. روسو SJ ،
    21. وآخرون.

    (2011) دور الإشارات mTOR والنشاط العصبي في التكيفات التي يسببها المورفين في الخلايا العصبية الدوبامين المنطقة tegmental البطنية. الخلايا العصبية 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS ،
    2. Nestler EJ

    (2012) اللدونة الجزيئية والخلوية التي يسببها الأفيون من المنطقة tegmental البطنية والخلايا العصبية catecholamine locer coeruleus. البرد الربيع حرب Perspect ميد 2: a012070.

  36. ↵
    1. مهرارا بي جيه ،
    2. باوم إم جي

    (1990) تقوم نالوكسون بتعطيل التعبير ولكن ليس اكتساب الفئران الذكور لاستجابة تفضيل المكان المشروط للإناث الشريرة. علم الادوية النفسية 101: 118-125.

  37. ↵
    1. ميزل آر إل ،
    2. مولينز AJ

    (2006) تجربة جنسية في القوارض الأنثوية: آليات خلوية وعواقب وظيفية. الدماغ الدقة 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. ميلر RL ،
    2. باوم إم جي

    (1987) تمنع التزاوج نالوكسون التزاوج وتفضيل المكان المشروط للإناث الستيرويدية في ذكور الجرذان مباشرة بعد الإخصاء. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. ميتشل جاي بي
    2. ستيوارت جيه

    (1990) تيسير السلوكيات الجنسية في الفئران الذكور المرتبطة بحقن داخل الأفيون VTA من المواد الأفيونية. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. ميرفي لو ،
    2. Blenis J

    (2006) إشارة إشارة MAPK: المكان المناسب في الوقت المناسب. اتجاهات Biochem العلوم 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) آليات النسخ من إدمان المخدرات. كلين Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G ،
    2. واتسون ج

    (2013) الدماغ الفئران في الإحداثيات التجسيمي (الأكاديمي ، بوسطن) ، إد 7.

  • ↵
    1. أباريق KK ،
    2. بلفور الشرق الأوسط ،
    3. Lehman MN ،
    4. ريتشاراند الشمالية ،
    5. يو لام ،
    6. تبريد LM

    (2010a) المرونة العصبية في نظام mesolimbic الناجم عن المكافأة الطبيعية والامتناع عن مكافأة لاحقة. بيول الطب النفسي 67: 872-879.

  • ↵
    1. أباريق KK ،
    2. Frohmader KS ،
    3. Vialou V ،
    4. Mouzon E ،
    5. Nestler EJ ،
    6. Lehman MN ،
    7. تبريد LM

    (2010b) يعتبر DeltaFosB في النواة المتكئة أمرًا ضروريًا لتعزيز تأثيرات المكافأة الجنسية. الجينات الدماغ Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. أباريق KK ،
    2. شميد اس ،
    3. دي سيباستيانو AR ،
    4. وانغ X ،
    5. لافيوليت SR ،
    6. Lehman MN ،
    7. تبريد LM

    (2012) تجربة المكافأة الطبيعية تبدل توزيع مستقبلات AMPA و NMDA ووظائفها في النواة المتكئة (nucleus accumbens). بلوس واحد 7: e34700.

  • ↵
    1. أباريق KK ،
    2. Vialou V ،
    3. Nestler EJ ،
    4. لافيوليت SR ،
    5. Lehman MN ،
    6. تبريد LM

    (2013) تعمل المكافآت الطبيعية والعقاقير على آليات اللدونة العصبية الشائعة مع DeltaFosB كوسيط رئيسي. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP ،
    2. Blenis J

    (2004) ERK و kINases بروتين P38 MAPK تنشيط الكينازات: عائلة من كينازات البروتين مع وظائف بيولوجية متنوعة. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. روسو SJ ،
    2. بولانوس كاليفورنيا ،
    3. ثيوبالد دي ،
    4. ديكاروليس نا ،
    5. Renthal W ،
    6. كومار A ،
    7. وينستانلي كاليفورنيا ،
    8. Renthal NE ،
    9. Wiley MD ،
    10. النفس دي دبليو ،
    11. راسل DS ،
    12. نيف RL ،
    13. Eisch AJ ،
    14. Nestler EJ

    (2007) مسار IRS2-Akt في الخلايا العصبية الدوبامين الدماغ المتوسط ​​ينظم الاستجابات السلوكية والخلوية إلى المواد الأفيونية. نات نيوروسكي 10: 93-99.

  • ↵
    1. شولتز دبليو

    (2010) وظائف متعددة من الخلايا العصبية الدوبامين. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB ،
    2. غال سم

    (1993) التعبير عن neurotrophins بواسطة الخلايا العصبية الدوبامين midbrain. ااستعمال Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS ،
    2. Bals-Kubik R ،
    3. هيرز أ

    (1987) خصائص تحفيزية من المواد الأفيونية: دليل على أن تنشيط مستقبلات الدلتا يتوسط عمليات التعزيز. الدماغ الدقة 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L ،
    2. Nestler EJ

    (1995) التأثيرات المضادّة للمورفين والعصّيات العصبية ، NT-3 ، NT-4 ، و BDNF ، على العصبونات المحلية coeruleus في المختبر. الدماغ الدقة 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L ،
    2. شي WX ،
    3. Lane SB،
    4. هاريس HW ،
    5. Bunney BS ،
    6. Nestler EJ

    (1996) المورفين المزمنة يدفع التغييرات المرئية في مورفولوجية الخلايا العصبية الدوبامين mesolimbic. بروك Natl أكاد العلوم الولايات المتحدة الأمريكية 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. سبيجا إس ،
    2. سيرا جي بي
    3. بودو مولودية ،
    4. فوداي م ،
    5. ديانا م

    (2003) الشذوذ الناجم عن الانسداد المورفين في VTA: الفحص المجهري بالليزر متحد البؤر. يورو J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. سوانسون إل دبليو

    (2004) خرائط الدماغ: بنية الدماغ الفئران (الأكاديمية ، سان دييغو) ، إد 3.

  • ↵
    1. تينك سم ،
    2. ويلسون ،
    3. تشانغ كيو ،
    4. أباريق KK ،
    5. تبريد LM

    (2009) المكافأة الجنسية في ذكور الجرذان: آثار التجربة الجنسية على تفضيلات المكان المشروط المرتبطة بالقذف والانفصال. هورم بيهاف 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) قياس المكافأة مع نموذج تفضيل المكان المشروط (CPP): تحديث العقد الماضي. المدمن Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. فان فورث دبليو آر ،
    2. فان ري JM

    (1996) الدافع الجنسي: إشراك المواد الأفيونية الذاتية في المنطقة القطبية البطنية. الدماغ الدقة 729: 20-28.

  • ↵
    1. فان فورث دبليو آر ،
    2. Wolterink G ،
    3. فان ري JM

    (1995) تنظيم السلوك الجنسي الذكري: إشراك الأفيونيات الدماغية والدوبامين. بحوث الدماغ بحوث الدماغ القس 21: 162-184.

  • ↵
    1. ووكر جونيور ،
    2. تشن SA ،
    3. موفيت اتش ،
    4. Inturrisi CE،
    5. Koob GF

    (2003) يؤدي التعرض الأفيوني المزمن إلى زيادة إدارة الهيروين الذاتي في الجرذان. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. يونغ KA ،
    2. Gobrogge KL ،
    3. ليو يي ،
    4. وانغ زد

    (2011) علم الأعصاب من الترابط الزوج: رؤى من القوارض monogamous اجتماعيا. الجبهة Neuroendocrinol 32: 53-69.

    •