Nörobilim jurnalı, 15 Mart 2001, 21(6): 2123-2130;
+ Müəllif iştirakçıları
mücərrəd
Nüvəli akumbenslərdə dopaminin ötürülməsi dərmanlar, stresslər və ya motivasiya davranışları ilə aktivləşdirilə bilər və bu stimullara təkrar məruz qalma bu dopamin cavabını həssaslaşdıra bilər. Bu işin məqsədləri, qadın cinsi davranışının nüvənin akumbens neyronlarını aktivləşdirdiyini və keçmiş cinsi təcrübənin amfetaminin nüvəsindəki accumbenslərdə nöronal reaksiyaların xassələri həssaslaşdıracağını müəyyənləşdirmək olub. Müxtəlif alt bölgələrdə c-Fos ifadəsinin immunocytochemical labeling istifadə edərək, çekirdek accumbens və rostral, orta və kaudal səviyyələrdə shell vs cinsi təcrübə müxtəlif miqdarda olan qadın hamsters araşdırıldı. 6 həftə cinsi təcrübə və ya cinsi əxlaqsız qalan qadın hamsterlər, yetkin kişi hamsterlarına məruz qalmaqla cinsi davranış üçün sınaqdan keçirildi. Əvvəlki cinsi təcrübə rostral və kaudal səviyyələrində c-Fos etiketini artırdı, lakin nüvənin akumbens orta səviyyələrində deyil. Cinsi davranış üçün test çekirdeklerde akuplekten çekirdeklerde değil, çekirdeklerde etiketlemeyi artırdı. Qadın cinsi davranışını mesolimbik dopamin yolunda nöronları həssaslaşdırmaq üçün cinsi təcrübəli və cinsi əxlaqsız qadınların amfetamin inyeksiyasına qarşı lokomotor reaksiyaları müqayisə edildi. Amfetamin bütün qadınlarda ümumi lokomotor fəaliyyəti artırdı. Amma cinsi cəhətdən təcrübəli heyvanlar amfetaminə cinsi qaranlıq heyvanlara nisbətən daha tez cavab verdi. Bu məlumatlar göstərir ki, qadın cinsi davranış nüvələrin akumbensində neyronları aktivləşdirə bilər və cinsi təcrübə amfetaminlə əlaqədar nöronal reaksiyaları qarşılıqlı həssaslaşdıra bilər. Bundan əlavə, bu nəticələr nüvənin akumbenslərinin qabığının və onun anteroposterior oxları arasında olan funksional fərqlər üçün əlavə sübutlar verir.
Midbrain ventral tegmental ərazidə köklənən və nüvə adapterləri daxil olmaqla, müxtəlif forebrin nüvələrinə çıxan dopamin nöronları mezolimbik dopamin sisteminin bir hissəsidir. Bu dopamin sisteminin iştahlı davranışların tənzimlənməsi üçün vacib olduğu düşünülmüşdür (Mitchell və Gratton, 1994; Salamone, 1994, 1996; Ikemoto və Panksepp, 1999), habelə sui-istifadənin özünü idarə etməsi (Pierre və Vezina, 1998;Koob, 1999; Lorrain və digərləri, 1999; McKinzie və digərləri, 1999; Peoples et al., 1999; Bradberry və s., 2000). İstifadəsi müxtəlif narkotiklərin (məsələn, kokain, amfetamin və eroin) sistemli idarə edilməsi dopamin yollarını aktivləşdirir (Pontieri və digərləri, 1995; Nisell və digərləri, 1997; Pierce və Kalivas, 1997a; Tanda et al., 1997; Tanda və Di Xiara, 1998; Barrot et al., 1999; Cadoni və Di Xiara, 1999) və bu farmakoloji vasitələrə təkrarlanan məruz qalma bu dopaminə həssas nöronlarıRobinson et al., 1988; Kalivas və digərləri, 1992; Kalivas və Duffy, 1993; Pierce və Kalivas, 1995; Kuczenski et al., 1997; Nisell və digərləri, 1997; Birrell və Balfour, 1998; Heidbreder və Feldon, 1998; Cadoni və Di Xiara, 1999; Cadoni və digərləri, 2000). Araşdırmalar, nüvəli akumbenslərin çiftleşmə ilə əlaqəli müəyyən xüsusiyyətlərə cavab verdiyini sübut etdi. Dişi siçovulların cinsi qarşılıqlı təsirləri zamanı hüceyrə dopamin səviyyələri,Mermelstein və Becker, 1995; Pfaus və digərləri, 1995) və hamsters (Meisel və digərləri, 1993; Kohlert və digərləri, 1997; Kohlert və Meisel, 1999). Təkrarlanan dərman administrasiyasına bənzər olaraq, bir çox cinsi davranış testi, həmçinin cinsi təcrübənin dopamin yolunda nöronları həssaslaşdıracağını göstərən nucleus accumbens dopamin səviyyəsinin artırılmasını da artırırKohlert və Meisel, 1999).
Nüvəli akumbens çox anatomik fərqli subregions ibarətdir, ən tanış olan qabıq və əsasdır. Bu iki alt bölgənin fərqli funksiyaları tənzimləməsini nəzərdə tutan qabığın və əsasın ayrılmasının anatomik əlaqələri (Crawley et al., 1985a,b; Heimer və digərləri, 1991; Zahm və Brog, 1992; Brog et al., 1993;Kalivas və Duffy, 1995; Maldonado-Irizarry et al., 1995; Pierce və Kalivas, 1995; Pontieri və digərləri, 1995; Broening və s., 1997; Heimer və digərləri, 1997; Kelley və digərləri, 1997; Stratford və Kelley, 1997; Heidbreder və Feldon, 1998; Lanca və digərləri, 1998; Bassareo və Di Xiara, 1999; Di Xiara və digərləri, 1999b; Groenewegen et al., 1999; Kelley, 1999; McKinzie və digərləri, 1999; Zahm, 1999; Brown və Molliver, 2000). Nüvə akumbensi heterojen bir nüvə olduğundan, qadın cinsi davranışlara cavab nüvənin akumbenslərinin xüsusi alt bölgələrinə yerləşdirildikdə və ya bütün nüvə boyunca yayıldığı aydın deyil. Əvvəllər bu suala cavab vermək üçün istifadə edilən üsullar (məsələn, mikrodializ), sürətləndiricilərin funksional heterojenliyini araşdırmaq üçün kifayət qədər həssas deyildir. Əksinə, c-Fos proteini üçün immunositokimyəvi emal nüvəli akumbensin subregions arasında ayrı-ayrı hüceyrəli aktivliyin araşdırılması üçün bir üsul təqdim edir. Beləliklə, bu təcrübənin ilk məqsədi, qadın cinsi davranışdan sonra hüceyrə aktivliyinin nüvə akumbenslərinin xüsusi alt bölgələrinə lokallaşdırıldığını müəyyən etmək idi.
Bu dopamin yollarının maraqlı bir xüsusiyyəti cross-sensitization edir. Başqa sözlə, daha əvvəl bir dərmana həssaslaşmış olan dopamin nöronları ilk dəfə verilmiş başqa bir dərmana həssas cavablar göstərəcəkdir (Cunningham və Kelley, 1992; Pierce və Kalivas, 1997a; Birrell və Balfour, 1998; Taylor və Horger, 1999). Druglar arasında qarşılıqlı həssaslaşmaya əlavə olaraq, bir neçə tədqiqat təkrarlanan məruz qalmaların farmakoloji maddələrə və təbii motivasiya davranışlarınaMitchell və Stewart, 1990a,b; Tidey və Miczek, 1997; Fiorino və Phillips, 1999). Buna görə də, cinsi təcrübəli və cinsi cəhətdən soyuq heyvanların amfetamin kimi dopamin yollarını aktivləşdirmək üçün bilinən yeni bir stimulun (məsələn, cross-sensitization) fərqli cavab verəcəyini araşdırdıq. Qadın cinsi davranışları dopamin yollarını həssaslaşdırırsa, cinsi təcrübəli qadınlar tək bir amfetamin inyeksiyasına bir davranış reaksiyası göstərməlidir.
MATERİALLAR VƏ METODLAR
Ümumi metodlar
Heyvanlar. Kişi və qadın Suriyalı hamsterlər Charles Nehri Laboratories-dən (Kingston, NY) yaşı ~60 d. Qadınlar ayrı-ayrılıqda yerləşdirilib, kişilərin plastik qəfəslərdə üç (dörd) qrupda (50.8 × 40.6 × 20.3 sm) yerləşdirildi. Heyvan koloniyası otağı 22: 1 və 30 arasındakı işıqlar ilə sabit bir temperaturda (11 ° C) saxlanılır: 30 PM (14 / 10 saatlıq yüngül / qaranlıq dövr). Qida və su mövcud idi ad libitum.
Bu sınaqda istifadə edilən prosedurlar Milli Sağlamlıq İnstitutlarına uyğunlaşdırılır Laboratuvar Heyvanlarının Qulluq və İstifadəsi üzrə Təlimatlar və Purdue Animal Care və İstifadə Komitəsi tərəfindən təsdiq edilmişdir.
Cinsi təcrübə. Qadınların laboratoriyaya gəldikdən təxminən 1 həftə sonra onlar ikitərəfli sodyum pentobarbital (Nembutal) anesteziyası (8.5 gm bədən çəkisi, ip üçün 100 mg) ilə ovariectomized edilmişdir. Ovaryektomiden sonra qadınlar əvvəlcə iki qrupa bölündülər. Qadınlardan bir qrup 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib idi; ikinci qrup cinsi cəhətdən sadiq qaldı. 6 həftəlik dövr üçün qadınların hamısı həftədə bir dəfə hormonla asdılar. Cinsi təcrübədən əvvəl həm 48, həm də 24 hr-də qadın 10 ml pambıq yağında 0.1 μg estradiol benzoat ilə subkutan yola salınıb. Təcrübə testi günü qadınlar 500 ml pambıq yağı (deri altı enjeksiyon) içərisində 0.1 μg progesteronun alındı. Cinsi təcrübəyə girməyən qadınlar hormon rejimi ilə ciyərlənmiş və koloniya otağında ev qəfəslərində qalmışlar. Progesteron administrasiyasından sonra 4-5 saatda, digər cinsi davranış tədqiqatlarında istifadə etməklə cinsi təcrübəyə malik olan bir yetkin kişi hamsteri eksperimental qadınların ev qəfəsinə yerləşdirildi. Kişilərdən ibarət olan qəfəslərin sırası, hər bir qadın və kişinin 6 həftə cinsi təcrübədə birdən çox dəfə cütləşmə ehtimalını minimuma endirmək üçün hər həftə qaytarıldı.
İmmünositokimya. Həddindən artıq dozada natrium pentobarbital ilə öldürülən qadın hamsterlər intrasardial olaraq 25 mm 7.5 min üçün PBS həlli, pH 2, axın həcmi, 25 ml / min), ardından 4% paraformaldehid 20 min üçün PBS'de. Braunlar paraformaldehiddə 2 saat üçün təyin olundu və 10% sukroz PBS-də gecə 4 ° C-də saxlanıldı.
Serial coronal 40 μm dondurulmuş hissələr bütün nüvəli akumbenslərdən keçirildi. PBS-də üç 10 min duruladan sonra bölmələr hər hansı bir əsas antikorda c-Fos (1% Triton X-6000, Santa Cruz Biotexnology, Santa Cruz, CA ilə 0.3: 100 və ya calbindin-D üçün əsas antikorda inkubasiya edilmişdir) (28 kDa) (1: 6000 ilə XSNXX: 0.3; Triton X-100; Chemicon International, Temecula, CA) 4 ° C'de 48 saat üçün. Həm c-Fos, həm də calbindin-D bölmələri biotinilləşdirilmiş anti-quyon IgG ikincil antikorunda (45: 1 in PBS, Elite Vectastain ABC dəsti, Vector Laboratories, Burlingame, CA) oda temperaturunda 200 dəqiqə üçün inkübat edilmişdir. hər bir inkubasiya əvvəl PBS üç 1 min durulayır ilə otaq temperaturunda 50 min üçün bir avidin-biotin horseradish peroksidaz kompleksi (45: PBX 10, Eln Vectastain ABC kit) ilə inkubasiya. PBS-də iki duruladan sonra və 10-da 0.1-da durulayın m Tris tamponu, pH 7.6, c-Fos və calbindin-D bölmələri 5% hidrogen peroksid və 10% -dən ibarət olan Tris tamponundakı 0.08% diaminobenzidin (DAB) (Aldrich, Milwaukee, WI) içərisində sırasıyla 0.003 və 0.015 min üçün inkubasiya edilmişdir nikel klorür. Bütün hissələr yenidən Tris tampon və deionlaşdırılmış suda durulanmış, sonra isə xrom-alümlə örtülmüş slaydlara quraşdırılmışdır. Slaydlar qurudulmuş, qurudulmuş, təmizlənmiş və Permount (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) istifadə edərək örtülmüşdür.
Mikroskopik analiz. Nüvə toxuması, calbindin-D üçün lekeli, bu nüvənin akumbensinin qabığını və nüvəsini təyin edir (Jongen-Relo və digərləri, 1994a; Johnson və Wood, 1999) dorsal nucleus accumbens-in rostral, orta və kaudal səviyyəsində hər bir hissəsini müəyyən etmək üçün istifadə edilmişdir. Kalbindin üçün boyanan rostral, orta və kaudal səviyyələrində nüvəli akumbensdən olan hissələr Şəkil 1 A-C. Sıçanla müqayisədə Suriyalı hamstanda calbindin-D immunoreaktivliyində əsas və qabıq arasında daha az fərqli fərqlər olduğu bildirilmiş, lakin bu peptidin boyanması hələ də nüvə akumbensinin subregionlarını (Johnson və Wood, 1999). 0.1 mm nümunə alanını əhatə edən qutu2 (0.2 × 0.5 mm) hər bölmə üçün dorsal qövsü və çekirdek akumbensinin nüvəsi üzərində yerləşdirilib. Hər bir hissənin bir şəffaflığı filmə şəffaflıq filminə basdırılmış və təsvirlər sonra hər bir heyvan üçün müvafiq c-Fos bölmələrinə yerləşdirilmiş və qutu bütün heyvanlar üçün eyni mövqedə yerləşdirilmişdir. Şəkil 1, D və E, 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib olan və cinsi davranış üçün sınaqdan keçirilmiş bir heyvandan bir kaudal bölməni göstərir. Qutuda Şəkil içərisində kaudal nüvəli akumbensin əsas hissəsi yerləşdirildi 1 Dvə şəkildəki kaudal akumbensin qabığında1 E. Eyni ölçülərə malik bir qutu, medial singulat korteksindəki eyni toxuma hissəsinə və nüvə hüceyrələri üçün nümunə götürülmüş üç səviyyənin hər birində medial və lateral dorsal kaudat nüvəsinin üstünə qoyuldu. Çiftleşmənin c-Fos üzərindəki təsirlərində rostral-kaudal dəyişikliklərin ola biləcəyini fərz etdiyimiz üçün, nümunə götürməyimizin anatomik dəqiqliyini artırmaq üçün hər səviyyə üçün yalnız bir hissə analiz edildi. Hər seçilmiş ərazidəki c-Fos-immunoreaktiv hüceyrələrin sayı, kompüterləşdirilmiş görüntü analiz sisteminə qoşulmuş bir videokamera (BioQuant MegM; R & M Biometrics, Nashville, TN) köməyi ilə sayıldı.
Kalibindin-D və c-Fos üçün boyanmış nüvəli toxumaların toxumalarının akumbensi. A-C rostral (A), orta (B) və kaudal (C) nüvə akkumtsiyası ləkələnmişdir (orta xətt Zaman), gölgə və əsas subregions (bölmə) arasında bölüşdürülməsi göstərən calbindin üçünasterisks). Orta və kaudal bölmələr arasında rostral və orta hissələr və 320 μm arasında 240 μm var. Aşağı şəkillər (D, E) kaudal nüvədən c-Fos boyanma nümunələridir (D) və kabuk (E) nüvənin akumbensinin (orta xəttdir sağ) seksual davranış testindən sonra öldürülən cinsi təcrübəli bir qadın. Məqalələrdüzbucaq nümunə alanını (0.2 × 0.5 mm) göstərir.
1 sınağı
İlk sınaq cinsi təcrübə və c-Fos induksiyasını sınaqdan keçirərək nucleus accumbens, dorsal caudate nucleus və cingulate cortex-in təsirlərini araşdırdı. Denemenin məqsədi iki dəfə idi. Birincisi, əvvəlki cinsi təcrübə və / və ya davranış testi səbəbindən beyin bölgələrindən hər hansı birində hücresel aktivliyin fərqli olub olmadığını müəyyən etmək idi. C-Fos ifadəinin dəyişdirildiyi təqdirdə, dəyişikliklərin təhlil edildiyi üç beyin sahəsinin içərisində xüsusi subregions lokalizə ediləcəyi müəyyən edilib.
Qadın Suriyalı hamsters 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib olub ya da cinsi cəhətdən sadiq qaldı. 6 həftəlik təcrübə zamanı, qadının lordozu (geri dorsofleksiya ilə müşayiət edildiyi hərəkətsizlik) hər bir 10 min sınaq seansı üçün ölçüldü. Kişi cinsi davranışla əlaqədar heç bir tədbir alınmadı. 7 həftəsində eyni estradiol benzoat və progesteron inyeksiya seriyası verildi. Bu dəfə, cinsi təcrübəli və sadiq qadınların yarısı evlərində qəfəsdə yetkin bir kişi yerləşdirməklə cinsi davranış üçün sınaqdan keçirildi. Qalan qadınlar ev kafeslərində qaldılar. 60-90-da, kişilərə məruz qaldıqdan sonra, qadınlar intrakardiyaya perfüze edilmiş və beyinləri c-Fos ifadəsi üçün işlənmişdir. Progesteron administrasiyası sonrasında cinsi davranış üçün sınaqdan keçməyən qadınlar 4 saatdan sonra perfüze edilmişdir.
Məlumatların təhlili. 7 həftəsində cinsi davranış üçün sınaqdan keçməyən qadınlar arasında keçmiş cinsi təcrübədən asılı olmayaraq hüceyrə sayıları fərqlənməmişdir (bax Cədvəl1 bir nümunə üçün), eksperimental qadınlar nəticədə təhlil üçün üç müalicə qrupuna bölündülər. Birinci qrup 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib olan və cinsi davranış üçün sınaqdan keçirilmiş qadınları əhatə etmişdir (təcrübə / test, n = 6). İkinci qrup əvvəllər təcrübəsi olmayan qadınlardan ibarət idi, lakin cinsi davranış üçün sınaqdan keçirilmişdir (heç bir təcrübə / test,n = 8). Son qrup hər hansı bir əvvəlki cinsi təcrübədən asılı olmayaraq cinsi davranış üçün sınaqdan keçirilməmiş qadın hamsteri (test, n = 13). Cinsi davranış testini almadan iki qrup analizlərdə statistik gücünü artırmaq üçün birləşdirildi. Üç qrup arasında dorsal nüvəli accumbens, dorsal caudate nucleus və cingulate korteksindən c-Fos-boyalı hüceyrələrin sayı təsbit edilmişdir.
Nucleus accumbens qabığında c-Fos-immunoreaktiv hüceyrələrin ortalama ± SEM ədədi müqayisəsi və heç bir sınaq müalicə qrupu arasında
Hüceyrə sayıları multifaktor ANOVA'ları istifadə edərək təhlil edilmişdir. Sadə əsas effekt ANOVA və post hoc Newman-Keuls testləri müvafiq hallarda həyata keçirildi. Davranış məlumatları (lordoz müddəti) iki quyruğu istifadə edərək təhlil edilmişdir t test.
2 sınağı
İkinci sınaq, cinsi təcrübəli və cinsi əxlaqsız qadın hamstersində davranışçı həssaslıq yaratmaq üçün yeni stimul, amfetamin qabiliyyətini müqayisə etdi. C-Fos nüvəsindəki accumbens, dorsal kaudat nüvəsi və sinqulator korteksində ifadəsi yenidən hücum fəaliyyəti nümunəsinin Experiment 1-da əldə edilən nəticələrə oxşar olub olmadığını müəyyən etmək üçün yenidən təhlil edilmişdir.
Qadın Suriya hamsters 6 həftə cinsi təcrübə verildi və ya cinsi sadəlövh qaldı. 7 həftəsində bütün qadınlar yeni bir mühitə (yəni, tanımadığı bir otaqda 10 gallon şüşə akvarium) nəql edilmişdi. 4 hr progesteron administrasiyasından sonra. Qadınlar 10 dəqiqəlik 10 galon şüşə akvariumuna yerləşdirilib, sonra cinsi təcrübəli və cinsi əxlaqsız qadınların yarısı idarə olundud-Xamunamin sulfat (1 ml 1% NaCl-də 1.0 kq çəki ilə xNUMX mq, Dr David Nichols, Purdue Universitetindən bir hədiyyə). Qalan qadınlar 0.9% NaCl (0.9 kiloqram ağırlığında 1 mg) ilə enjekte edilmişdir. Qadınlar daha sonra əlavə 1 dəqiqə üçün 10 gallon akvariumuna yerləşdirildi. 60 min sessiya qadınların ümumi lokomotor fəaliyyətinin təhlili üçün videotaped edilmişdir. Ümumi fəaliyyət testindən sonra 70 dəqiqə içində qadınlar intrakardiyaya perfüze edildi və onların beyinləri c-Fos ifadəsi üçün işlənildi.
Videoqrafik analiz. 7 həftəsində, lokomotor fəaliyyəti test edən 70 min sessiya videotaped edilmişdir. 10 galon şüşə akvariumları video ekranda üç bərabər sahəyə bölündü və qadınların lokomotor fəaliyyəti sahə xaçlarının sayına görə qeyd edildi.
Məlumatların təhlili. Köhnə cinsi tarixi şoranla çəkilən qadın hamstərlərin lokomotor fəaliyyətinə təsir etməmişdir; Buna görə də, eksperimental qadınlar təhlil üçün üç müalicə qrupuna bölünmüşdür. İlk qrup 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib olan və amfetaminlə (təcrübə / amfetamin, n = 8). İkinci qrup amfetamin idarəsindəki qadınlardan ibarət idi, lakin heç bir cinsi təcrübə almadı (təcrübə / amfetamin,n = 8). Son qrup hər hansı bir əvvəlki cinsi təcrübədən asılı olmayaraq, salin ilə enjekte edilmiş qadın hamsteri (salin, n = 15). Qadınların ortalama lokomotor fəaliyyəti, iki qruplu ANOVA'ları istifadə edərək, 70 min test (10 min dövrlərdə) boyunca üç müalicə qrupu arasında müqayisə edildi. Sadə əsas effekt ANOVA və post hoc Newman-Keuls testləri müvafiq hallarda həyata keçirildi.
C-Fos üçün boyanmış hüceyrələrin sayı keçmiş cinsi təcrübədən asılı olmayaraq, salinaya salınmış qadınlar arasında fərqlənmir. Buna görə, dorsal nüvədən akumbens, dorsal kaudat nüvəsi və sinqulator korteksindən olan c-Fos-boyalı hüceyrələrin sayı ilk sınaqda olduğu kimi eyni üç müalicə qrupu arasında müqayisə edilmişdir. Hüceyrə sayıları multifaktor ANOVA'ları istifadə edərək təhlil edilmişdir. Sadə əsas effekt ANOVA və post hoc Newman-Keuls testləri müvafiq hallarda həyata keçirildi.
NƏTİCƏLƏR
1 sınağı
Cinsi davranış tədbirləri
7 həftəsində cinsi davranış testi zamanı lordoz müddəti təcrübə / test və təcrübə / test qrupları arasında müqayisə olundu. 10 min test zamanı orta lordoz müddəti təcrübə / test qrupu üçün 341 ± 53 saniydi və heç bir təcrübə / test qrupu üçün 478 ± 20 saniydi. Heç bir təcrübə / test qrupunda olan qadınlar təcrübə / test qrupunda qadınlara nisbətən daha uzun müddət lordozu qəbul etmişdilər (t 6 = 5.131; p = 0.05). Bundan əlavə, cinsi təcrübə lordoz müddəti təsir etməmişdir. Təcrübə / test qrupunda qadınlar üçün həftəlik 1 (399 ± 44 san) və həftəlik 7 (341 ± 53 san.) Orta müddətləri arasında əhəmiyyətli fərqlər göstərilməyib.
C-Fos nüvəsindəki accumbens ifadəsidir
Müalicə müddətlərinin rostral-caudal səviyyədə məruz qalmış üç dəfə bir ANOVA müalicəsi əhəmiyyətli ana təsirləri və müalicə arasında heç bir üç tərəfli qarşılıqlı, acumbens səviyyəsi və qabıq-çekirdek tapılmadı (Şəkil 4). 2); Ancaq iki əhəmiyyətli iki yollu qarşılıqlı təsir (müalicə müddəti kabuk çekirdek və rostral-kaudal səviyyədə müalicə müddətləri) təsbit edildi.
c-Fos ifadəsi, hər bir müalicə qrupu üçün rostral, orta və kaudal səviyyələrində nüvəli akumbensin qabığında və nüvəsində. C-Fos hüceyrələrinin ortalama ± SEM sayına cinsi təcrübə və davranış təsirlərini araşdırmaq üçün üç yollu ANOVA (müalicə zamanı rostral-kaudal səviyyədə mərclikdə) istifadə edilmişdir. Müalicənin əhəmiyyətli əsas təsirləri və müalicə, akkumts səviyyəsinin və qabıq nüvəsi arasında heç bir üç tərəfli qarşılıqlı əlaqə tapılmadı.
Müalicə müddəti müəllimi olan qalıq-çekirdek etkileşimi, müalicə qruplarının yalnız çekirdek akumbensinin çekirdeklerinde önemli etkilerini ortaya çıxardı (Şek. 3). Çox cüt müqayisə bu qadınların 7 (təcrübə / test və təcrübə / test) həftəsində cinsi davranış üçün sınaqdan keçirildiyini göstərdi ki, sınaqdan keçirilməyən qadınlardan daha çox c-Fos-ləkələnmiş hüceyrələr nüvə akumbensinin əsas hissəsində idi test) (Newman-Keuls, p <0.01). Nüvə hüceyrələrinin qabığında heç bir sınaq təsiri müşahidə edilmədi. Bundan əlavə, cinsi təcrübənin akumbenslərin qabığında və ya nüvəsində c-Fos ifadə edən hüceyrələrin sayı üzərində açıq bir təsiri yox idi.
c-Fos ifadəsi, nüvənin akumbensinin qabığında və nüvəsində, rostral-kaudal səviyyəsində çökmüşdür. Üç yollu ANOVA, müalicə arasındakı iki yollu qarşılıqlı və ortalama ± SEM nömrə c-Fos hüceyrələrində nüvə akumbensinin (müalicə müddəti kabuk çekirdek;F (2,24) = 4.243; p<0.026). Bu qarşılıqlı əlaqəni araşdıran bir tərəfli ANOVA, müalicə qruplarının əhəmiyyətli dərəcədə əsas təsirlərini yalnız nüvə accumbens nüvəsində tapdı (F (2,24) = 7.341; p<0.003) və accumbens qabığında deyil (F (2,24) = 1.271; p> 0.1). Müxtəlif məktublar qruplar arasında əhəmiyyətli fərqlər göstərir.
Rostral-kaudal səviyyəli qarşılıqlı müalicə müddətlərinin araşdırılması, həm rostral, həm də kaudal səviyyələrində müalicə qruplarının əhəmiyyətli əsas təsirlərini tapdı, lakin nüvəli akumbensin orta səviyyəsində deyil (Şek. 4). Newman-Keuls post hoc testlər 6 həftə cinsi təcrübəyə sahib olan və cinsi davranış (təcrübə / test) üçün sınaqdan keçirilmiş qadınların rostral nüvədə daha çox c-Fos pozitiv hüceyrələrə test edilmiş qadınlardan daha əvvəlki cinsi təcrübəyə (təcrübə / test yox; p <0.05) və cinsi davranış üçün test edilməmiş qadınlar (test yox;p <0.01). The post hoc testlər caudal nucleus accumbens üçün oxşar nəticələr ortaya qoydu. Təcrübə / test qrupundakı qadınlar heç bir təcrübə / test qrupunda qadınlara nisbətən kaudal nüvəli acumbensdə c-Fos ifadə edən çox sayda hüceyrə idi (p <0.05) və test qrupu yoxdur (p <0.01). Bu səbəbdən, 7-ci həftə ərzində cinsi davranış üçün test, rostral və kaudal nüvəli akumbenslərdə c-Fos ilə boyanmış hüceyrələrin sayını yalnız 6 həftəlik təcrübə alan qadınlar üçün artırdı.
C-Fos ifadəsi yadro və akkumulyatorun rostral-kaudal ölçüsü vasitəsilə nüvə və qabığın üzərinə çökmüşdür. Üç yollu ANOVA, müalicə qrupları ilə ortalama ± SEM nömrəli c-Fos hüceyrələri arasında nüvə akumbenslərinin rostral-caudal səviyyələri vasitəsilə qarşılıqlı təsir göstərdiyini göstərsə də,F (4,48) = 2.365; p <0.066), müalicənin c-Fos boyanmasına təsiri üçün hər bir nüvə akumbens səviyyəsini ayrı-ayrılıqda araşdırdıq. Bir tərəfli ANOVA, müalicə qruplarının həm rostral səviyyədə əhəmiyyətli əsas təsirlərini ortaya qoydu (F (2,48) = 5.230; p<0.009) və kaudal səviyyə (F (2,48) = 7.455; p <0.002), lakin orta səviyyədə deyil (F (2,48) = 1.744; p> 0.1) nüvə akumbens. Müxtəlif məktublarqruplar arasında əhəmiyyətli fərqlər göstərir.
kaudat nüvəsindəki və cingulyasiya korteksində c-Fos ifadəsi
Dorsal kaudat nüvəsindəki hüceyrə sayıları da üç yollu ANOVA istifadə edərək təhlil edilmişdir. Təhlil yalnız medial və lateral kaudat nüvəsindəki müalicə ilə c-Fos ifadə arasında qarşılıqlı təsir göstərmişdir (F (2,24) = 3.514;p <0.046). Bununla birlikdə, medial və lateral kaudat nüvəsinin bir tərəfli ANOVA ilə ayrı-ayrı təhlili təcrübə / test, təcrübə / test və test qrupları arasında c-Fos ləkələnmiş hüceyrələrin sayında heç bir fərq olmadığını göstərmişdir (Cədvəl2). Bundan əlavə, c-Fosu ifadə edən hüceyrələrin sayı və ya hər hansı qarşılıqlı təsir göstərən cinsi təcrübənin və ya davranışın heç bir əsas təsiri sindral korteksdə (məlumatlar göstərilməyib) tapılmışdır.
Medial və lateral dorsal kaudat nüvəsindəki c-Fos-immunoreaktiv hüceyrələrin ortalama ± SEM sayı
2 sınağı
Lokomotor fəaliyyəti
Təcrübədə / amfetamində, təcrübədə / amfetamində və şoran müalicə qruplarında 70 min testlərində qadınların orta fəaliyyətini müqayisə edən iki yollu ANOVA (müalicə müddəti test dövrü) müalicə qrupu ilə sınaq müddəti arasında qarşılıqlı təsir göstərmişdir. Bu qarşılıqlı əlaqəni yoxlamaq üçün fərdi müalicə qrupları birtərəfli ANOVA ilə ayrı-ayrılıqda araşdırılmışdır. Təhlillər amfetaminlə (təcrübə / amfetamin və təcrübə / amfetamin) enjekte edilmiş qadınların iki qrupu üçün 70 min test zamanı orta ümumi fəaliyyətdə əhəmiyyətli dəyişikliklər göstərdi. Lakin, salınan qadınların ümumi fəaliyyəti 70 dəqiqədə əhəmiyyətli dərəcədə dəyişməmişdir (Şek.5). Newman-Keuls post hoc10 min sınaq müddəti fərqləndiyini təyin etmək üçün testlər istifadə edilmişdir. Pairwise birdən çox müqayisə amfetamin verilmiş cinsi təcrübəli qadınların ümumi fəaliyyətinin 10 min enjeksiyondanp <0.05). Bundan əlavə, enjeksiyondan əvvəl 10 dəqiqə ilə müqayisədə, təcrübə / amfetamin müalicə qrupundakı qadınlar 20 dəqiqə əhəmiyyətli dərəcədə aktiv qaldı (p <0.05) və 30 dəq (pEnjeksiyondan sonra <0.05). Əksinə, amfetaminin cinsi cəhətdən sadəlövh qadınlarda təsirləri iynə vurulduqdan 20 dəqiqə sonra aydın deyildi. Bu anda, bu qadınlar enjeksiyondan əvvəl 10 dəqiqə ilə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə daha aktiv idi (p <0.05). Bundan əlavə, amfetamin verilmiş cinsi sadəlövh qadınların aktivliyi 30 dəqiqə ərzində əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır (p <0.05) və 40 dəq (pEnjeksiyondan sonra <0.01).
Amfetaminin cinsi cəhətdən təcrübəli və cinsi əxlaqsız qadın hamstersinin ümumi fəaliyyətinə təsiri. İki yollu ANOVA (müalicə müddəti test dövrü) müalicə qrupu ilə sınaq müddəti arasındakı qarşılıqlı əlaqəniF (12,150) = 2.288;p <± 0.011) orta ± SEM aktivliyi sayılır. Fərdi müalicə qruplarını araşdıran bir tərəfli ANOVA, təcrübə / amfetamində qadınlar üçün ümumi fəaliyyətdə əhəmiyyətli dəyişikliklər göstərdi (F (6,150) = 3.0468; p <0.008) və təcrübəsi yoxdur / amfetamin (F (6,150) = 3.893;p <0.001) müalicə qrupları. Salin vurulmuş dişilərin fəaliyyəti dəyişməyib (F (6,150) = 1.619;p <0.1). Post hoc testlər cinsi təcrübəli qadınların amfetaminə daha sürətli cavab verdiyini, enjeksiyondan sonra ilk 10 dəqiqə ərzində fəaliyyətin artım göstərdiyini göstərdi. Cinsi qaranlıq qadınlar ampetaminə 20 dəqiqə enjeksiyaya qədər cavab vermədilər. *p Testdən əvvəlki dövrə qarşı <0.05.
c-Fos ifadəsi
Cinsi təcrübə və amfetaminin c-Fos ifadəinə təsirini araşdırmaq üçün üç tərəfli ANOVA (müalicə zamanı rostral-caudal səviyyədə mərc-çekirdək) istifadə edilmişdir. Müalicənin əhəmiyyətli əsas təsirləri və müalicə, akkumts səviyyəsinin və qabıq nüvəsi arasında heç bir üç tərəfli qarşılıqlı əlaqə tapılmadı. Bundan əlavə, analiz, müalicə qrupları arasında və c-Fos ifadəsi arasında akumbens və ya müalicə qrupları arasında və c-Fos etiketinin rostral, orta və kaudal səviyyələrində nüvə accumbens ( məlumat göstərilmir).
Dorsal kaudat nüvəsindəki hüceyrə sayıları da üç yollu ANOVA istifadə edərək təhlil edilmişdir. İlkin analiz c-Fos-pozitiv hüceyrələrin sayına əvvəlki cinsi təcrübənin və ya amfetaminin əhəmiyyətli təsiri olmadığını göstərir. Əlavə olaraq c-Fos'u ifadə edən hüceyrələrin sayına əvvəlki cinsi təcrübə və ya amfetamin təsir etməmiş ikili bir ANOVA (məlumatlar göstərilməmişdir) istifadə edərək, cingulate korteksində aşkar edilmişdir.
MÜZAKİRƏ
Bu istintaqın məqsədi iki dəfə olub. İlk növbədə cinsi təcrübənin hüceyrə fəaliyyətinə nüvənin akumbensinin müxtəlif bölgələrində təsirlərini araşdırdıq. Əvvəlki cinsi təcrübənin mesolimbik dopamin yolunu həssaslaşdıra biləcəyi ikinci məsələ, cinsi təcrübəli və sadiq heyvanların davranışlarına cavab verən amfetamin inyeksiyasına nisbətən müqayisə edilərək tədqiq edilmişdir. Bizim tapıntılar yalnız qadın cinsi davranışların nüvələrin akumbenslərində nöronların aktivləşdirə biləcəyini deyil, eyni zamanda cinsi təcrübənin amfetaminin nöronal reaksiyalarını qarşılıqlı həssaslaşdıra biləcəyini göstərir.
C-Fos ifadəsinə cinsi davranış təsirləri, nüvə akumbensinin qabığında və nüvəsində
Cinsi davranış testi, cinsi c-Fos ifadəsini artırdı, lakin cinsi qarşılaşmanın cinsi gəmiricilərdə nüvəli akumbenslərdə neyronları aktivləşdirə biləcəyini göstərir.Meisel və digərləri, 1993; Joppa və digərləri, 1995; Mermelstein və Becker, 1995; Pfaus və digərləri, 1995; Kohlert və digərləri, 1997; Kohlert və Meisel, 1999). Nucleus accumbens funksional ikitərəfliyinə toxunan ədəbiyyat, farmakoloji və fizioloji stimullara cavab olaraq, nüvə akumbensinin qabığında və nüvəsində dopamin ötürülməsində diferensial dəyişikliklərin çox sayda hesabatından ibarətdir. İstifadənin bir neçə dərmanının idarəsi nüvə akumbensinin qabığında ekstrasellüler dopamin səviyyələrində selektiv artımlarla nəticələnir (Pontieri və digərləri, 1995; Nisell və digərləri, 1997; Pierce və Kalivas, 1997a; Tanda et al., 1997; Tanda və Di Xiara, 1998; Barrot et al., 1999; Cadoni və Di Xiara, 1999). Bənzər bir şəkildə, çox dadlı qidalar (Tanda və Di Xiara, 1998; Di Xiara və digərləri, 1999a; Kelley, 1999), yumşaq stress (məsələn, ayaq şoku) (Kalivas və Duffy, 1995; Tidey və Miczek, 1997; Bruijnzeel et al., 1999; Wu və digərləri, 1999) və ekoloji yenilik (Rebec və ark., 1997;Rebec, 1998) həmçinin çekirdek akumbens qabığında dopamin ötürülməsini seçici şəkildə artırır.
Bizim bulgularımız, cinsi davranışa cevap verebilmek üçün kabuğu değil, çekirdek değilse de, kabuk ve çekirdeğin fonksiyonel olarak farklı olduğu varsayımıyla tutarlıdır. Bununla belə, nucleus accumbens qabığında c-Fos immunoreaktivliyində dəyişikliklər olub, lakin bu dəyişikliklər aşkar edilmədi. Kabuk, medial qabığın ventral və dorsal bölgələri ilə daha fərqli alt bölgələrdən olan digər subregions (medial, ventral və lateral)Groenewegen et al., 1999). Qabığın bu alt bölgələri, eləcə də nüvənin orta və yan hissələri kortikal və subkortikal sahələrdən gələn müxtəlif girişlərdən ibarətdir (Groenewegen et al., 1999). Bundan əlavə, bu alt bölgələrdə yerləşən nöqtələrin funksional olaraq ayrı anatomik bölmələrəGroenewegen et al., 1999). Bu işdə c-Fos ifadəsinə cinsi davranışın təsirləri yalnız dorsomedial qabığında araşdırıldığı üçün c-Fos-pozitiv hüceyrələrin sayı həqiqətən fərqli bir kabuk subregionunda dəyişə bilər.
Çoxlu nüvəli akumbens funksiyasının qövs bölgəsinə lokallaşdırıldığı müşahidələrinə baxmayaraq, nüvəli akumbenslər içərisində müxtəlif neyron dövrlərdə müxtəlif davranışların gücləndirici xüsusiyyətlərinə vasitəçilik edirlər. Carelli et al. (2000)yaxınlarda məruz qalmış nüvə nüvələrində təbii gücləndirici və kokainlə qarşılaşdıqda, iki təbii gücləndirici (yəni, qida və su) cavab verməklə yanaşı, fərqli atəş nümunələrinə cavab verərkən siçovulların neyronların oxşar neyron aktivliyi nümayiş etdirmişdir. Nüvə akumbensindəki ayrı nöral sxemlərin kokain mükafatı ilə müqayisədə qidalanma və suyun möhkəmləndirilməsi barədə məlumatlarıCarelli və ark., 2000).
C-Fos ifadəsinə cinsi təcrübənin təsirləri, nucleus accumbens rostral-caudal axis vasitəsilə
Alt-nüvə təşkilatını rostral-caudal nüvəli akumbens vasitəsilə araşdıraraq ədəbiyyat kiçikdir; Ancaq aydın funksional və anatomik fərqliliklər müşahidə edildi. Bizim tapıntılar akumbensin rostral-caudal oxları arasında nörokimyəvi və motor reaksiyalarının fərqli tənzimləməsini bildirmişdir. Kolesistokinin (CCK) rostral və kaudal nüvəli akumbenslərdə dopaminin təsirli təsirlərini fərqləndirirCrawley et al., 1985a,b), kaudal akumbenslərə daxil olduqda dopaminin səbəb olduğu hyperlocomotion potensiallaşdırılması, dopamin ilə colocalized CCK nöronları tərəfindən innervated bir region (Crawley et al., 1985a,b; Lanca və digərləri, 1998). Bununla belə, CCK rostral nucleus accumbens, ayrı CCK və dopamin proqnozları alan bir bölgəyəCrawley et al., 1985a,b; Lanca və digərləri, 1998). Amfetaminin rostral qabığa, kaudal qabığına və ya nüvəyə birbaşa infüzyonu davranış fəaliyyəti və ekstrasellüler dopamin və serotonin səviyyələrini fərqli şəkildə təsir göstərirHeidbreder və Feldon, 1998). Opioid peptidlərin tənzimlənməsi, maddə P, dopamin D1 reseptorları (Voorn və Docter, 1992; Jongen-Relo və digərləri, 1994b; Voorn et al., 1994) və asetilkolinin salınması (Jongen-Relo və digərləri, 1995) dopamin və dopamin reseptor agonistləri tərəfindən rostral və caudal hissələri arasında fərqlənir, rostral akumbens dopamin tükənməsi və idarəsinə daha həssasdır. Rostral və kaudal nüvəli akumbenslər arasında bu funksional fərqlər bildirildiyinə baxmayaraq, bu funksional fərqlərin səbəbi hələ də tam başa düşülməmişdir.
Amfetamin səbəb olduğu lokomotor fəaliyyətə cinsi təcrübənin təsirləri
Buradakı nəticələr və daha əvvəl edilən bir araşdırmada, əvvəlki bir cinsi təcrübənin cinsi davranış testlərinə nöronal reaksiyaların həssaslaşması olduğunu ifadə edərək, dopamin salınımında həssas artımlarıKohlert və Meisel, 1999) və hüceyrə fəaliyyətində akustens (bu iş). Ancaq bir narahatlıq, əvvəlki araşdırmada təcrübəli qadınların həm cinsi davranış testinə həm də cinsi istək və testlərə cavab verə bilər, çünki cinsi təcrübə və test eyni otaqda aparılmışdır. Motivasiya edilən davranışlarla şərtli şərtlərlə ekoloji istəklər təşviq xüsusiyyətləri əldə edə və dopamin səviyyələrini daha da artırır.Reid və ark., 1996, 1998; Watson və Little, 1999). İkinci bir narahatlıq isə, kişi cinsi davranış tədbirləri qeyd edilmədiyi üçün, qadınların cinsi davranış üçün sınanmış iki qrupunun, vaginoservikal stimullaşdırmanın müqayisəli miqdarlarını aldıqları bilinmir. Vaqnozervikal stimullaşdırmanın, çiftleşmə zamanı nüvəli accumbensdə dopamin sərbəstliyi üçün zəruri olduğu bildirilmişdir (Kohlert və digərləri, 1997). Bəlkə də cinsi təcrübəli qadınlar daha çox vaginoservikal stimullaşdırma (bu işdə ölçülməmiş) aldılar və c-Fos induksiyasını artırdılar. Buna görə də, qadın cinsi davranışını mesolimbik dopamin yolunu həssaslaşdırmaq üçün cinsi təcrübəli və sadiq qadınların amfetamin inyeksiyasına fərqli cavab verdiyini, dopamin yolları vasitəsilə təsirlərinə vasitəçilik etmək üçün bilinən başqa bir stimulun araşdırıldığını araşdırdıq. Bundan əlavə, müşahidə edilən həssas cavabların təkrarlanan cinsi davranışlar olması və ətraf mühitin cinsi davranışa uyğun gəlməməsi səbəbindən olması üçün hamstersin amfetaminə olan davranış reaksiyası yeni mühitdə sınaqdan keçirilmişdir.
Amfetamin bütün qadın hamsterlarda ümumi fəaliyyətini artırdı. Amma cinsi təcrübəli qadınlar cinsi qaranlıq qadınlara nisbətən amfetaminə daha tez cavab verdilər. Bu nəticələr təkrarlanan cinsi davranışların mesolimbik dopamin yolunda nöronların həssaslığını təmin edə biləcəyini və yolun dəyişikliklərinin təbii motivasiya davranışına və psixomotor stimulyatora (həssaslaşdırma) qarşı həssaslaşdırılmış davranış reaksiyalarına səbəb olduğunu göstərən fərziyyəni təsdiqləyir.
Bu tapıntılar dərmanlara və cinsi davranışlara cavab verən yaxınlaşan neyron mexanizmlərin olduğu hipotezinə uyğun gəlir (Robinson və Berridge, 1993; Pierce və Kalivas, 1997b). Bir neçə yeni tədqiqat təkrarlanan dərmana məruz qalma və təbii motivasiya davranışları arasında qarşılıqlı həssaslığın müşahidə olunduğunu müşahidə etmişdir. Sosial məğlubiyyət siçanı siçovulların içində kokainin özünü idarə etməsi üçün vaxtını azaldırTidey və Miczek, 1997). Təkrarlanan morfin müayinəsi ilə qoşulan bir mühit kişi siçovulların cinsi davranışını asanlaşdıra bilər (Mitchell və Stewart, 1990a,b). Amfetamin əvvəlcədən müalicəsi də cinsi səmimiyyətli kişi siçovulların cinsi davranışını asanlaşdırır və nüvə akumbensində genişlənmiş dopamin sərbəstliyi ilə əlaqəliFiorino və Phillips, 1999).
amfetamin müalicəsindən sonra c-Fos ifadəsi çekirdek akumbensində analiz edilmişdir. Amfetamin nüvəli akumbenslərdə c-Fos ifadəsini, cinsi təcrübəli qadınlarda isə daha böyük dərəcədə artacağını proqnozlaşdırdı. Lakin, c-Fos ifraz edən hüceyrələrin sayına amfetaminin təsirləri nüvənin akumbenslərinin alt hissələrində tapıldı. Cədvəldən aydın görünür3 2 (salin qadınlar) adlı sınaq heyvanları, test heyvanlarında 1 (test qadını olmayan) sınaq heyvanları ilə müqayisədə daha çox c-Fos-pozitiv hüceyrələrə malik idi. Badiani et al. (1998) yenilik artdığını bildirdi c-fos nucleus accumbens-də mRNA məzmunu və yenilik bu təsiric-fos tərkibi yeni bir mühitdə amfetaminin tətbiqi əlavə artımlı cavab vermədiyi bir neçə beynin bölgəsində gücləndi. Beləliklə, bizim tədqiqatımızda test otağının yeni mühitinə çatdırılma stresi c-Fos proteininin sintezini aktivləşdirdi və bununla da amfetamin və cinsi təcrübəyə səbəb olan c-Fos ifadəsində dəyişikliklərin maskalanması mümkün oldu.
1 və 2 təcrübələrində nəzarət heyvanları üçün çekirdek akumbens qabığında və çekirdekdə c-Fos-immunoreaktiv hüceyrələrin ortalama ± SEM bazlı sayı
Potensial əhəmiyyəti
Bu təcrübələr artan bir tədqiqat siyahısına qoşulur (Mitchell və Stewart, 1990b; Fiorino və Phillips, 1999; Miczek və ark., 1999bir heyvanın tecrübelerinin mezolimbik dopamin yolunun hem hayvanın doğal repertuarının bir parçası olan davranışlara hem de insanları kötüye kullanıldığı bilinen bazı uyuşturuculara duyarlılığını algıladıklarını belirterek,Wise və Bozarth, 1987). Narkotik maddələrin istifadəsi üzrə tədqiqatlarda əsas məsələ narkotiklərin təsirinə fərdi zəiflikdirNewcomb, 1992; Robinson və Berridge, 1993) və kollektiv olaraq bu tədqiqat insanlarda asılılığın inkişafına dair anlayışlar təqdim edə bilər.
Dəyişikliklər
- Alınan İyun 8, 2000.
- Revizyon alındı Dekabr 12, 2000.
- qəbul Dekabr 20, 2000.
Bu araşdırma National Science Foundation Grant IBN-9723876 tərəfindən dəstəklənmişdir. Melissa Zila, Shannon McCanna, Marchelle Baker, Michael Huntington və Deborah Shelley üçün davranış testi və c-Fos emalına köməkçi olduqları üçün təşəkkür edirik.
Yazışmalar Dr. Robert L. Meisel, Psixologiya Elmləri Bölümü, Purdue Universiteti, West Lafayette, IN 47907-1364 ünvanına göndərilməlidir. E-poçt: [e-poçt qorunur].
- Müəllif hüququ © 2001 Neuroscience for Society
REFERANSLAR
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
- â † μ
;