ΔFosB aşırı ekspresyonunun çekirdek akumbenslerinde (2011) opioid ve kanabinoid reseptör aracılı sinyal üzerine etkisi,

Neurofarmakoloji. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

mənbə

Farmakologiya və Toksikologiya və Narkotik və Alkoqologiya İnstitutu, Virginia Commonwealth Universiteti Tibb Fakültəsi, Richmond, VA 23298, ABŞ.

mücərrəd

Sabit transkripsiya faktoru ΔFosB, bir neçə dərman istifadəsinə xroniki məruz qalmaqla nucleus accumbens (NAc) -nin içində yerləşdirilir və striatumda ΔFosB'nin transjenik ifadəsi morfin və kosinanın mükəmməl xüsusiyyətlərini artırıre. Lakin, bu müşahidələr üçün mexaniki əsas tam başa düşülməmişdir. Biz ΔFosB inducible ifadə ilə bir bitransgenic siçan model istifadə dopamin D (1) reseptor / dynorphin ehtiva edən striatal nöronlar NAc-da opioid və kannabinoid reseptor sinyallığında ΔFosB ifadəsinin təsirini müəyyən etmək üçün. Nəticələr ΔFosB ifadə edən siçanların NAc-da opioid-mediated G-protein fəaliyyətinin və adenilil siklaza inhibinin artdığını göstərdi. Eynilə, adenilil siklazın kappa opioid inhibisyonu ΔFosB ifadə edən siçanlarda artırıldı. Əksinə, kannabinoid reseptoru vasitəçiliyi olan siqnallar ΔFosB və nəzarət siçanlarını aşıraraq siçanlar arasında fərqlənmədi. These tapıntıları opioid və cannabinoid reseptor siqnalının ΔFosB ifadəsi ilə fərqli olaraq modulyasiya edildiyini və NAc-da ΔFosB ifadəinin inkişaf etmiş mu və kappa opioid reseptor sinyalleri vasitəsilə təsirlərinin bir qismini çıxara biləcəyini göstərir.

Keywords: G-protein, adenilil siklaz, striatum

1. Giriş

Opioid reseptorları və kannabinoid CB₁ reseptorlar (CB₁R) morfin, eroin və reçeteli opioidlər və marixuana (Δ) olan geniş yayılmış dərman dərmanları üçün nörobiyoloji hədəflərdir⁹-tetrahidrokannabinol (THC)). Opioidlərin və kannabinoidlərin kəskin təsiri, əvvəlcə G-ni aktivləşdirən G-proteinlə əlaqəli reseptorlar tərəfindən vasitələnir_{i / o} zülallar və adenilil siklazın inhibisyonu kimi aşağı effektiv cavablar verir (Childers, 1991, Childers və digərləri, 1992, Howlett və digərləri, 2002). Mühərrik, yaddaşın pozulması və Δ⁹-TC CB tərəfindən hazırlanır₁R (Huestis və digərləri, 2001, Zimmer və digərləri, 1999), beyində geniş yayılmış olan, bazal ganglion, hipokampus və serebellumHerkenham və digərləri, 1991). Klinik olaraq tətbiq olunan və istismar edilən opioid dərmanlarının analjezik və mükafatlandırıcı effektləri əsasən muivoid reseptorları (MOR)Matthes, və s., 1996), limbik sistemdə və brainstemdə zəngin olanMansour və digərləri, 1994). Ventrol tegmental bölgəsindən (VTA) dopaminergik proqnozlardan ibarət olan mesolimbik sistem, nüvəli akumbenslərə (NAc) qədər opioidlərin və kannabinoidlərin təsirli təsirlərindəBozarth və Wise, 1984, Vaccarino və digərləri, 1985, Zangen və digərləri, 2006), habelə digər sui-istifadələr (Koob və Volkow, 2010). Bundan əlavə, endogen opioid və kannabinoid sistemləri çoxsaylı psixoaktiv dərmanların təsirli təsirlərinəMaldonado və digərləri, 2006, Trigo, et al., 2010). Beləliklə, opioid və CB olan mexanizmləri aydınlaşdırmaq vacibdir₁R siqnalları NAc-da tənzimlənir.

Narkotik vasitələrin istifadəsi sahəsində əsas sual psixoaktiv dərmanların kəskindən uzunmüddətli təsirlərinə keçid edən zülalları müəyyən etmək olmuşdur. AP-1 transkripsiyası faktoru ΔFosB xüsusilə maraqlıdır, çünki bu, sabit bir kəsilmiş splice variant məhsuludur. fosb istifadəsi və ya təbii mükafatların dərmanına təkrar məruz qalması nəticəsində yaranan genMcClung və digərləri, 2004, Nestler, 2008, Nestler və digərləri, 1999). ΔFosB, morfinə təkrar məruz qaldıqdan sonra beyində indukluğunu aşkar etdik, Δ⁹-THC, kokain və ya etanol, hər bir narkotik ilə ΔFosB ifadəsinin unikal bir bölgə formasıPerrotti və digərləri, 2008). Dərmanlar arasında ardıcıl bir nəticə ΔFosB'nin striatumda yüksək səviyyədə istifadəsi olmuşdur ki, burada dörd dərman NAc nüvəsində ΔFosB əmələ gətirmiş və bütün Δ⁹- NAc kabuğunda və kaudat-pitamendə əhəmiyyətli dərəcədə ifadə edilən ifadə.

Farmakoloji tədqiqatlar göstərir ki, dopamin D-nin birgə tətbiqi₁ reseptor (D₁R) antagonist SCH 23390, NAc və kaudat-putamendə fasiləsiz kokain və ya morfin idarəsindəki ΔFosB induksiyasını maneə törətdi və D₁R-ifadə nöronları (Muller və Unterwald, 2005, Nye və digərləri, 1995). ΔFosB induksiyasının dərman vasitəsi ilə bağlı davranışlara təsiri NAc və dorsal striatumun xüsusi neyronal populyasiyalarında ΔFosB ifadə edən bitransgen siçanlarından istifadə edərək tədqiq edilmişdirChen və digərləri, 1998). Dynorphin / D ildə ΔFosB ifadə edən siçanlar₁NAc və dorsal striatumda (xətt 11A) R pozitiv nöronlar istismarın dərmanlarına dəyişdirilmiş reaksiyaları göstərir, xüsusilə də kokain və ya morfinin mükəmməl təsirlərinə artan həssaslıq (Colby və digərləri, 2003, Kelz və digərləri, 1999, Zachariou və digərləri, 2006). Bu dəyişikliklər MOR və ya müxtəlif G-protein subunitlərinin səviyyələrində dəyişiklik olmadıqda baş vermişdir. Lakin, ΔFosB'nin siçanlarını ifadə edən NAc-da dynorphin mRNA səviyyəsi azaldı (Zachariou və digərləri, 2006), ΔFosB'nin bir hədəfi endojen opioid peptidi kodlayan bir gendir. ΔFosB induksiyası NAc-da reseptor siqnalını tənzimləyərək davranış dəyişiklikləri də yarada bilər, lakin bu imkanlar araşdırılmamışdır. Buna görə də, indiki tədqiqatlar dynorphin / D'de ΔFosB'nin aşırı ekspresyonunun olub-olmadığını müəyyən etmək üçün bitransgen siçan modelini istifadə etdi₁Striatal neyronları olan R, MOR-mediatlı G-protein fəaliyyətini və NAc-də MOR- və KOR-mediated adenilil siklazın qadağanını dəyişir. ΔFosB'nin CB üzərində təsiri₁R-vasitəçiliyi ilə G-protein fəaliyyəti də qiymətləndirildi, çünki Δ⁹-THC administrasiyası NAc-da ΔFosBPerrotti və digərləri, 2008) və endokannabinoid sisteminin beyin mükafat sxemləriniGardner, 2005, Maldonado və digərləri, 2006), lakin ΔFosB nin endokannabinoid sisteminə təsiri araşdırılmamışdır.

2. Materiallar və metodlar

2.1. Reaktivlər

[³⁵S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-³²P] ATP (800 Ci / mmol) və [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) PerkinElmer'den (Shelton, CT) satın alındı. ATP, GTP, ÜDM, cAMP, sığır serum albumin, kreatin fosfokinaz, papaverin, imidazol və WIN-55212-2, Sigma Aldrich (St Louis, MO) tərəfindən alınmışdır. GTPγS Roche Diagnostic Corporation-dan (Chicago, IL) alındı. DAMGO, Narkotik Maddə İstifadəsi üzrə Milli İnstitutun (Rockville, MD) Narkotiklə Mübarizə Proqramı tərəfindən təmin edilmişdir. Econo-1 sintilasyon mayesi Fisher Scientific (Norcross, GA) tərəfindən əldə edilmişdir. Ecolite sintillasiya mayesi ICN-dən əldə edilmişdir (Costa Mesa, CA). Bütün digər kimyəvi maddələr Sigma Aldrich və ya Fisher Scientific tərəfindən əldə edilmişdir.

2.2. Siçan

NSE-tTA (xətt A) × TetOp-ΔFosB (xətt 11) dən əldə edilən kişi bitransgen siçanları Kelz və ark. (Kelz və digərləri, 1999). Bitqransgen siçanları transgen ifadəsini basdırmaq üçün doksisiklin üzərində (içməli suda 100 μq) düşdü və qaldırıldı. 8 həftəlik dövrdə transgen ifadəsini təmin etmək üçün siçanların yarısı üçün doksisiklin suya buraxıldı, qalan siçan isə transgenə biganə üçün doksisiklin üzərində saxlanıldı. Brains 8 həftə sonra toplandı, ΔFosB'nin transkripsiya təsirləri maksimal (McClung və Nestler, 2003). İkinci bir transgenik siçan xətti istifadə edilmişdir ki, bu da c-Junun dominant mənfi antagonisti olan D-Jun, D₁R / dynorphin və D₂Striatum, hipokampus və parietal korteksin R / enkefalin hüceyrələri (Peakman və digərləri, 2003). C-Jun və əlaqəli Jun ailəsi proteinləri Fos ailə zülalları ilə dimerize olur və transkripsiyanı tənzimləmək üçün hədəf genlərin AP-1 saytına bağlanır. Lakin, c-Jun (Δc-Jun) N-terminusunun kəsilməsi kompleks transkripsiyalı olaraq qeyri-effektivdir və aktiv AP-1 komplekslərinin DNT-ə bağlanmasına mane olur. NSE-tTA (xətt A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (line E) -dən əldə edilən kişi bitransgen siçanları Peakman et al. (Peakman və digərləri, 2003). Bitqransgen siçanları transgen ifadəsini basdırmaq üçün doksisiklin üzərində (içməli suda 100 μq) düşdü və qaldırıldı. Yavrular 3 həftələrində yuyulur, genotiplənir və qruplara ayrılır, yarısı doksisiklin tərkibli suda saxlanılır və FLAG-Δc-Jun ifadəsinin yaranmasına səbəb olan müntəzəm içməli suyun yarısı. Braunlar 6 həftə sonra toplanmış, FLAG-Δc-Junun maksimal dərəcələri ölçüldü (Peakman və digərləri, 2003). Bütün heyvan prosedurları Laboratuvar Heyvanlarının Qulluq və İstifadəsi üzrə Milli Səhiyyə Təşkilatına uyğun olaraq aparılmışdır.

2.3. Membran hazırlığı

Brains testin gününə qədər -80 ° C-də saxlanıldı. Test əvvəlində, hər bir beyin qarışdırılıb və NAc buz üzərində parçalanmışdı. Hər bir nümunə 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl-də homogenləşdirilmişdir₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membran tampon), 20 ° C'de bir cam homogenizatordan 4 vuruşları ilə. Homojenat 48,000 × -də santrifüj edilib g 4 ° C'de 10 dəqiqə üçün, membran tamponda yenidən salıb, 48,000-da yenidən santrifüj edilmiş g 4 ° C'de 10 dəqiqə üçün və 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (test tamponu). Protein səviyyələri Bradford metodu (Bradford, 1976) bovine serum albumin (BSA) standart olaraq istifadə edir.

2.4. Agonist-Stimulated [³⁵S] GTPγS Binding

Membranlar test tamponunda 10 ° C'de adenosin deaminaz (30 mU / ml) ilə 3 dəqiqə əvvəlcədən inkubasiya edilmişdir. Membranlar (5-10 μg protein) 2% (w / v) BSA, 30 nM olan test tamponunda 0.1 ° C'de 0.1 saat üçün inkubasiya edilmişdir [³⁵DAMGO və ya WIN30-3 müvafiq konsentrasiyaları ilə və ya olmadan müvafiq olaraq, GTPγS, 55,212 μM ÜDM və adenozin deaminaz (2 mU / ml). Nonspesifik bağlama 20 μM GTPγS ilə ölçüldü. İnkubasiya GN / B şüşə lif filtrlər vasitəsilə filtrasiya yolu ilə sona çatdı, sonra 3 xNUMX ml buz xron xnumx mM Tris-HCl, pH 3 ilə yuyulur. Econo-50 sintilasyon sıvısında filtrlərin gecə-gündüz ekstraksiyasından sonra maye sintilasyon spektrofotometriyası ilə əlaqəli radioaktivlik müəyyən edilmişdir.

2.5. Adenilli Cyclase Assay

Membranlar (5-25 μg protein) yuxarıda təsvir edildiyi kimi adenosin deaminaz ilə preinkubated edilmişdir, sonra 15 ° C'de 30M forskolin varlığında və ya olmamasında 1 min üçün inkjetləşdirilmiş, DAMGO, U50,488H və ya WIN55,212-2 ilə və ya olmadan, test tamponunda 50 μM ATP, [α-³²1.5 (xNUMX μCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 μM çevik AMP, 50 μM GTP, 0.2 mM papaverin, 5 mM fosfokreatin, 20 ədəd / ml kreatin fosfokinaz və adenozin deaminaz (3 mU / ml) 100 μl son həcmində. Bu şərtlərdə, ümumi [α-³²P] cAMP bərpa edilən ümumiyyətlə əlavə edilən ümumi məbləğdən 1% -dən azdır [α-³²P] Hər nümunədə ATP. Reaksiya 3 dəqiqə üçün qaynar ilə kəsildi və [³²P] Cyclic AMP Salomon'un ikili sütunu (Dowex və alumina) üsulu ilə təcrid olunmuşdurSalomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) hər bir boruya daxili standart olaraq sütun kromatoqrafiyasından əvvəl əlavə edildi. Radioaktivlik maye sintilləşmə spektrofotometriyası (45% effektivliyi ilə müəyyən edilmişdir) ³H) 4.5 ml elüattan sonra 14.5 ml ekolit sintillasiya mayesi ilə həll edilmişdir.

2.6. Məlumatların təhlili

Başqa cür göstərilmədiyi təqdirdə, məlumatlar 4-8-in ayrı-ayrı eksperimentlərinin ortalama dəyərləri ± SE, hər biri üçqat olaraq yerinə yetirilmişdir. Net-stimullaşdırılan [³⁵S] GTPγS bağlanması, agonist-stimullaşdırılan bağlanma mənfi bazal bağlanma kimi hesablanır. Net forskolin-stimullaşdırılmış adenilil siklaz aktivliyi forskolin-stimullaşdırılmış fəaliyyət - bazal aktivlik (pmol / mg / min) kimi müəyyən edilir. Forskolin-stimullaşdırılmış adenilil siklaz fəaliyyətinin faiz inhibisyonu (agonist olmadıqda agonist / net forskolin-stimullaşdırıcı aktivliyində agonist-net forskolin-stimullaşdırılan fəaliyyət olmadıqda net forskolin stimulyasiya fəaliyyəti) xNUMX kimi müəyyən edilir. Bütün əyri-uyğun və statistik analizlər Prism 100c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) istifadə edilmişdir. Konsentrasiya effekti əyriləri EC-ni əldə etmək üçün iterativ qeyri-xətti reqressiya ilə təhlil edilmişdir₅₀ və E_max dəyərlər. Konsentrasiya effekti məlumatlarının statistik əhəmiyyəti, əsas amillər kimi agonist doza və gen indüksiyasını (on və ya off) istifadə edərək, iki tərəfli variance (ANOVA) analizi ilə müəyyən edilmişdir. Eğrilik-uyğun dəyərlərin statistik əhəmiyyəti (E_max və ya EC₅₀) EC-də bərabər olmayan fərqləri (F-testi ilə müəyyənləşdirilmiş) düzəltmək üçün lazım olduqda Welch düzəlişindən və ya məlumatların kvadrat kökündən çevrilməsindən istifadə edərək cütlənməmiş iki quyruqlu Tələbə testi ilə təyin olundu.₅₀ dəyərlər.

3. Nəticələr

3.1. ΔFosB ifadəinin opioid və kannabinoid reseptor vasitəçiliyi ilə G-protein aktivliyinə təsiri

MOR- və ya CB-ni müəyyən etmək üçün₁R-vasitəçiliyi ilə G-proteinin aktivasiyası NAc-də ΔFosB'nin inducible transgenik ifadəsi ilə dəyişdirilmiş, agonist-stimullaşdırılmış [³⁵S] GTPγS bağlanması ΔFosB transgenini (ΔFosB açan) ifadə edən və ya (ΔFosB söndürməyən) ifadə edən bitişkən siçanların bu bölgəsindən hazırlanan təcrid olunmuş membranlarda tədqiq edilmişdir. MOR-seçməli enkefalin analog DAMGO MOR aktivləşdirmək üçün istifadə edilmişdir və kannabinoid aminoalkilindol WIN55,212-2 CB-ni aktivləşdirmək üçün istifadə edilmişdir₁R. Bu ligandların daha əvvəl MOR və CB-də tam agonistlər olduğu göstərilir₁R, müvafiq olaraq (Breivogel və digərləri, 1998, Selley və digərləri, 1997). KOR-mediatlı G-protein fəaliyyətini araşdırmaq mümkün olmadı, çünki siqnal kemirgen beyində çox aşağı idi (Childers və digərləri, 1998). Nəticədə NAc-da DAMGO və WIN55,122-2 tərəfindən ΔFosB söndürülmüş və ΔFosB-də siçanlarda G-protein fəaliyyətinin konsentrasiyaya əsasən stimullaşdırılması göstərilmişdirŞəkil 1). DAMGO-stimullaşdırılmış fəaliyyət üçün (Şəkil 1A), konsentrasiya effekti məlumatlarının iki tərəfli ANOVA ΔFosB statusunun (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) və DAMGO konsentrasiyasının (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) əhəmiyyətli əsas təsirlərini aşkar etdi əhəmiyyətli qarşılıqlı təsir (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Konsentrasiya effekti əyrilərinin qeyri-xətti reqressiya təhlili əhəmiyyətli dərəcədə daha böyük DAMGO E aşkar etdi_max farelerdeki ΔFosB (E_max = 73 ± 5.2% stimulyasiya) ΔFosB siçanlarından kənara nisbətən (E_max = 56 ± 4.1% stimullaşdırma; p <0.05, Tələbənin t testi ilə siçanlardakı ΔFosB-dən fərqlidir). DAMGO EC₅₀ ΔFosB və ΔFosB siçanları arasında fərqlər fərqlənmədi (302 ± 72 nM 212 ± 56 nM ilə müqayisədə, p = 0.346).

ΔFosB ifadəsinin agonist-stimullaşdırılmış təsiri [³⁵NA] -də GTPγS bağlanması. ΔFosB ekspression (ΔFosB on) və ya nəzarətdə (ΔFosB söndürülmüş) siçanlardan olan membranlar dəyişkən konsentrasiyalardan istifadə üsullarında təsvir olunmuşdur ...

MOR agonisti DAMGO ilə əldə edilən nəticələrdən fərqli olaraq, qandabinoid agonisti WIN55,212-2 (G-protein aktivliyində heç bir ΔFosB statusu ilə bağlı fərqlər müşahidə edilməmişdirŞəkil 1B). WIN55,212-2 konsentrasiya effekti məlumatlarının iki tərəfli ANOVA-sı, WIN55,212-2 konsentrasiyasının (p <0.0001, F = 112.4, df = 7) əhəmiyyətli bir əsas təsirini ortaya qoydu, lakin ΔFosB statusunda deyil (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) və heç bir qarşılıqlı əlaqə olmadı (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Eynilə, WIN55,212-2 E üzərində ΔFosB statusunun heç bir təsiri olmamışdır_max (103 ± 6% 108 ± 8% -ə qarşı ΔFosB-də stimulyasiya, siçanların söndürülməsi və p = 0.813-nin tələbə t-testi ilə) və ya EC₅₀ (103 ± 20 nM 170 ± 23 nM-ə uyğun olaraq ΔFosB-də siçanların söndürülməsi və söndürülməsi, p = 0.123).

Əyrilərin formasından və əvvəlki tədqiqatların beynimizdə bifazik WIN55,212-2 konsentrasiyası təsiri əyriləri göstərdiyindənBreivogel və digərləri, 1999, Breivogel və digərləri, 1998), WIN55,212-2 əyriləri də ikiölçülü model istifadə edərək təhlil edilmişdir. Orta səviyyəli məlumatların təhlili iki tərəfli modeldən (R.² = 0.933 və 0.914, bir ədəd model ilə müqayisədə 3644 və 5463 kvadratlarının məcmusu ΔFosB-də siçanların söndürülməsi və söndürülməsi)² = 0.891 və 0.879, kvadratların miqdarı = 6561 və 6628 isə ΔFosB-də siçanların söndürülməsi və söndürülməsi). Lakin ΔFosB arasında siçanlarda və ya siçanlarda E arasında əhəmiyyətli fərqlər olmur_max və ya EC₅₀ yüksək və ya aşağı potensial saytların dəyərləri (Əlavə Cədvəl 1), baxmayaraq ki, aşağı AK üçün bir meyl var idi₅₀ ΔFosB ilə (EC₅₀yüksək = 28.0 ± 10.6 nM) ΔFosB off (EC₅₀yüksək = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Bundan başqa, ΔFosB statusu bazal [³⁵NA] membranlarında (253 ± 14 qarşı 226 ± 14 fmol / mg, ΔFosB-də siçanların açılması və söndürülməsi, p = 0.188) GTPγS bağlanmasıdır. Bu məlumatlar siçanların NAc-də ΔFosB'nin induksiyalı transgenik ifadəsinin CB-nin vasitəçiliyi ilə G-protein aktivliyini CB₁R-vasitəçiliyi və ya əsas G-protein fəaliyyəti.

3.2. ΔFosB'nin adenilil siklazın opioid və kanabinoid reseptor vasitəsi ilə inhibe edilməsinə təsiri

MOR və CB tərəfindən aşağı axın effektivliyinin modullaşdırılması üzrə ΔFosB inducible transgenik ifadəsinin təsiri.₁R, 1 μM forskolin-stimullaşdırılmış adenilil siklaz aktivliyinin inhibe edilməsi NAc membranlarında tədqiq edilmişdir. MOR- və CB-yə əlavə olaraq₁Adenilil siklaz aktivliyinin R-mediated inhibisyonu, KOR aktivliyinin təsiri də KOR-selektiv tam agonist U50,488 (Zhu, et al., 1997), çünki əvvəlki nəticələr dynorphin mRNA'nın Bitransjenik modeldə ΔFosB hədəfi olduğunu göstərdi (Zachariou və digərləri, 2006). Nəticələr DAMGO, U50,488 və WIN55,212-2 hər birində ΔFosB off və ΔFosB-də siçanlarda adenilil siklaza aktivliyinin konsentrasiyaya asılı olaraq inhibə olunduğunu göstərdiŞəkil 2). DAMGO konsentrasiyası təsiri məlumatlarının iki tərəfli ANOVA (Şəkil 2A) ΔFosB statusunun (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) və DAMGO konsentrasiyasının (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) əhəmiyyətli əsas təsirlərini aşkar etdi, lakin əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir göstərmədi (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). DAMGO konsentrasiyası-effekt əyrilərinin qeyri-xətti regresiya təhlili DAMGO EC-nin əhəmiyyətli dərəcədə aşağı olduğunu aşkar etdi₅₀ siçanlardakı 101FosB-də (11 ± 510 nM) ΔFosB siçanlara nisbətən (182 ± 0.05 nM, şagirdin t testi ilə p <XNUMX). Ancaq DAMGO E-də ciddi bir fərq yox idi_max dəyərlər (20.9 ± 1.26% 19.8 ± 1.27% -lə ΔFosB-də siqnalların söndürülməsi və söndürülməsi, p = 0.534).

NAc'ta adenilil siklaz aktivitesinin inhibe edilməsinə ΔFosB ifadesinin təsiri. ΔFosB ekspression (ΔFosB on) və ya nəzarətdə (ΔFosB söndürülmüş) siçanlardan olan membranlar 1 μM iştirakı ilə Metodlarda təsvir olunmuşdur ...

KOR-mediated adenilil siklazın inhibisyonu da ΔFosB'nin inducible transgenic ifadə funksiyasıŞəkil 2B). U50,488 konsentrasiya effekti məlumatlarının iki tərəfli ANOVA ΔFosB statusunun (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) və U50,488 konsentrasiyasının (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) əsas təsirlərini göstərmişdir. , əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir olmadan (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Konsentrasiya effekti əyrilərinin qeyri-xətti regresiya təhlili daha çox U50,488 E aşkar etdi_max siçanlardakı ΔFosB-dəki dəyər (.18.3FosB off siçanlarla müqayisədə (1.14 ± 12.5% inhibisyon) (2.03 ± 0.05% inhibisyon; p <50,488 tələbənin t testi ilə ΔFosB-dən fərqli), UXNUMX EC-də əhəmiyyətli bir fərq yoxdur.₅₀ (310 ± 172 nM 225 ± 48 nM-ə uyğun olaraq ΔFosB-də siçanların söndürülməsi və söndürülməsi, p = 0.324).

MOR və KOR ilə müşahidə edilən təsirlərdən fərqli olaraq, kannabinoid agonisti WIN55212-2 (adenilil siklazın inhibe edilməsi üzrə indüklədilən transgenik ΔFosB ifadəinin əhəmiyyətli təsiri yox idiŞəkil 2C). WIN55,212-2 konsentrasiya effekti məlumatlarının iki tərəfli ANOVA'sı dərman konsentrasiyasının əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərdi (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), lakin ΔFosB statusunda deyil (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) nə də əhəmiyyətli bir qarşılıqlı əlaqə olmadı (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Bundan əlavə, agFosB statusunun heç bir agonist olmadığı halda bazal və ya forskolinlə stimullaşdırılmış adenilil siklaz aktivliyinə təsiri olmamışdır. Bazal adenilil siklaz aktivliyi mFosB siçanlarındakı 491 ± 35 ilə müqayisədə siçanlardakı wasFosB içərisində 546 ± 44 pmol / mg / min (Student t-testi ilə p = 0.346). Eyni şəkildə, 1 µM forskolinin iştirakı ilə adenilil siklaz aktivliyi, siçanlardakı onFosB siçanlarında 2244 ± 163 pmol / mg / dəq-ə qarşı mFosB-də 2372 ± 138 pmol / mg / min (p = 0.555).

3.3. ΔcJun'un adenilil siklazın opioid və kanabinoid reseptor vasitəsi ilə inhibe edilməsinə təsiri

ΔFosB'nin inhibe edici transgenik ekspresyonu MOR ve KOR'dan NAc'de adenylyl siklazdan inhibe edici siqnal transdüksiyonunu artırdığından, ΔFosB aracılı transkripsiyonun dominant negatif inhibitörünün opioid reseptör sinyallerini ters yönde modüle edeceğini belirlemek ilgi olmuşdur. Bu suala cavab vermək üçün DAMGO və U50,488 tərəfindən forkolin stimullu adenilil siklaz aktivliyinin qadağan edilməsi ΔcJun-i ifadə edən Bitransgen siçanların NAc-dən hazırlanmış membranlarda tədqiq edilmişdir. Nəticələr ΔcJun ifadəsinin MOR və ya KOR tərəfindən adenilil siklaz aktivliyinin qadağan edilməsinə əhəmiyyətli təsir göstərməmişdirŞəkil 3). DAMGO konsentrasiyası-effekt əyrilərinin iki tərəfli ANOVA'sı DAMGO konsentrasiyasının əsas təsirini göstərmişdir (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), lakin ΔcJun statusunda deyil (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) və əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir olmadı (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Eynilə, E-də də ciddi bir fərq yox idi_max və ya EC₅₀ ΔcJun ilə siçanlar arasında dəyərlər (E_max = 23.6 ± 2.6%; EC₅₀ = 304 ± 43 nM) və ya ΔcJun off (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Bənzər nəticələr U50,488 ilə görülmüşdür, belə ki, konsentrasiya-effekt əyrilərinin iki tərəfli ANOVA konsentrasiyanın əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərmişdir (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), lakin JcJun statusunda deyil (p = 0.127) , F = 2.391, df = 1) və əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir olmadı (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Eynilə, E-də də əhəmiyyətli bir fərq yox idi_max və ya EC₅₀ ΔcJun ilə siçanlar arasında dəyərlər (E_max = 14.8 ± 2.9%; EC₅₀ = 211 ± 81 nM) və ya (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

NAc'de adenilil siklaz aktivitesinin inhibe edilməsinə ΔcJun ifadesinin təsiri. ΔcJun-ifadə (ΔcJun on) və ya nəzarət (ΔcJun off) siçanlarından olan membranlar DAMGO (A), U50,488H (B) və ya WIN55,212-2 ...

ΔcJun ifadəsi də kannabinoid agonist tərəfindən NAc-dəki adenilil siklazın inhibisyonunu əhəmiyyətli dərəcədə təsir etməmişdir. WIN55,212-2 konsentrasiya effekti əyrilərinin iki tərəfli ANOVA-sı genotipdən deyil (p = 55,212, F =) WIN2-0.0001 konsentrasiyasının (p <15.53, F = 6, df = 0.066) əsas təsirini göstərmişdir. 3.472, df = 1) və əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir olmadı (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Eynilə, WIN55,212-2 E-də də əhəmiyyətli bir fərq yox idi_max dəyərlər (13.0 ± 2.3% və 13.6 ± 0.9% siqaretlə qarşı səthdə ΔcJun'da p = 0.821) və ya EC₅₀ dəyərlər (208 ± 120 nM və 417 ± 130 nM, müvafiq olaraq siçanlara qarşı ΔcJun-da, p = 0.270). Beləliklə, ΔcJun ifadə edən siçanlarda WIN55,212-2-in azalmış potensialına qarşı bir az dəyişiklik olmasına baxmayaraq, transgen adenilil siklazın kannabinoid inhibisyonunu əhəmiyyətli dərəcədə dəyişməmişdir. Üstəlik, ΔcJun statusu bazal və ya forskolin stimullaşdırılmış adenilil siklaz aktivliyinə təsir göstərmədi. Bazal adenilil siklaz aktivliyi ΔcJun ilə siçanlarda müvafiq olaraq 1095 ± 71 pmol / mq / min və 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) idi. 1 μM forskolin tərəfindən stimullaşdırılmış adenilil siklaz aktivliyi ΔcJun ilə siçanlarda müvafiq olaraq 4185 ± 293 pmol / mg / min (p = 4032) xNUMX ± 273 pmol / mg / min idi.

3.4. Müzakirə

Bu tədqiqatın nəticələrinə əsasən, dornorfin / D-də ΔFosB inducible transgenik ifadə ilə siçanların NAc-da adenilil siklazın inhibe edilməsi və MOR-vasitə ilə işlənmiş G-proteinin aktivləşdirilməsi aşkar edilmişdir₁R nöronları ehtiva edir. Adenilil siklaz fəaliyyətinin KOR vasitəsinin inhibe edilməsi də ΔFosB siçanlarını ifadə edən NAc-də artmışdır və ΔFosB NAc-də endogen opioid sistemini tənzimləyir. DAMGO E_max dəyəri MOR-stimullaşdırılan [³⁵S] GTPγS bağlanması və onun EC₅₀ adenilil siklaz inhibisyonu üçün daha az idi, nəzarət farelerinə nisbətən ΔFosB aşırı ifadə edən siçanlarda. Bu tapıntılar müayinə şəraitində G-proteinin aktivləşdirilməsi deyil efektiv modulyasiya üçün reseptor rezerv ehtimalı təklif edir. KOR agonisti tərəfindən adenilil siklazın maksimal inhibisyonunun təsirindən ΔFosB ifadəsi təsir göstərdi ki, KOR-mediated cavab üçün aşağı retseptor ehtiyatı, siçan beyinində KOR bağlama sahələrinin aşağı səviyyələrinəUnterwald və digərləri, 1991). Əksinə, CB₁R-vasitəçiliyi ilə G-proteinin aktivliyi və adenilil siklazın inhibisyonu ΔFosB ifadəsi ilə təsirlənməmiş, bu NAc neyronlarında opioid və kannabinoid sistemlərinin ΔFosB cavablarına fərqli olduğunu bildirir.

ΔFosB'nin opioid reseptor vasitəçiliyi ilə siqnalizasiyasına təsiri əvvəlki hesabatımıza uyğun olaraq, striatumda ΔFosB ifadəinin morfinin kəskin və xroniki təsiriniZachariou və digərləri, 2006). Bu tədqiqatın bir məqsədi dynorphin / D ildə ΔFosB'nin transjenik ifadəsinə malik olan farelerdir₁R striatal nöronlar nəzarətə nisbətən morfinə daha həssasdırlar. Bundan başqa, bu təsirin NAc-a site-spesifik injection tərəfindən ΔFosB viral vasitəçilik ifadə ilə mimicked edilmişdir. Bu müşahidələr NAc-da inkişaf etmiş MOR siqnalını göstərən cari nəticələrə uyğun gəlir.

Daha əvvəl gen kodlamasını təsbit etdik ΔFosB hədəfi kimi dynorphin və dynorphin azaldılması ΔFosB bitransgen siçanlarda morfin inkişaf xüsusiyyətləri ilə uyğun olacaq təklif (Zachariou və digərləri, 2006). Mövcud nəticələr göstərir ki, NAc-da adenilil siklazın KOR tərəfindən vasitəçiliyinin maneə törədilməsi ΔFosB eksprese edən siçanlarda artmışdır və bu da azalmış dynorphin sonrasında KOR həssaslığında kompensasiya artımını əks etdirə bilər. Əvvəlki tədqiqatlar göstərir ki, KOR prodynorphin knockout siçanlarının belli beyin bölgələrində upcorrected, NAc (Clarke, və digərləri, 2003).

ΔFsB'den fərqli olaraq ΔcJun'un indüklenebilir transgenik ekspresyonu, ΔFosB bağlayıcı ortağının cJun'un dominant negatif kesilmiş mutantı, MOR ya da KOR agonistleri tarafından adenilil siklaz inhibisyonunu değiştirmemiştir. Bu nəticələr göstərir ki, nisbətən aşağı olan ΔFosB ifadəsinin bazal səviyyəsi NAc-da siqnal ötürülməsinin bu səviyyəsində opioid reseptor siqnalının saxlanmasında əhəmiyyətli rol oynamır. Əvvəlki işimizdə morfinin şərtli mükafatlandırıcı təsiri ΔcJun ifadəsi ilə azaldılıb (Zachariou və digərləri, 2006) ya da kondisioner proseduru zamanı ΔFosB'nin morfin induksiyası dərmana davranış reaksiyalarının tənzimlənməsində vacibdir və ya opioid reseptorlarının proksimal siqnalını təsir edən ΔFosB transkripsiyası effektləri opioid mükafata təsir göstərə bilər. Hər halda, bu işin nəticələrindən aydın görünür ki, ΔFosB ifadəsi striatal dynorfin / D-də bazal səviyyələrdən yüksək olduqda₁R-ifadə edən nöronlar, MOR və KOR-nun NAc-də adenilil siklaza inhibə edilməsinə birləşməsində güclü bir artım var.

MOR- və KOR-vasitə ilə işlənmiş siqnalların ΔFosB aşırı ekspresyonu ilə artdıqları mexanizmlər açıq deyil, lakin əvvəllər göstərdik ki, MOR səviyyələri [³H] naloksonun bağlanması, ΔFosB nin NAc'sində siçanlara qarşı fərqli deyil (Zachariou və digərləri, 2006). Eyni araşdırma Qa_i1 və 2 protein səviyyələri bu bölgədə ΔFosB ifadəsi ilə təsirlənməmişdir. Lakin, əvvəlki gen ifadəsi array analizləri Qa olduğunu göstərir_o mRNA, farelerde ΔFosB'nin NAc'sında düzəldildi (McClung və Nestler, 2003). Transgenik ΔFosB ifadəsinin protein səviyyəsində G-protein subunit ifadəsinə və bir çox G-protein modulator proteinlərinin ifadəsinə təsirini hərtərəfli araşdırmaq üçün gələcək işlərə maraq yaradacaqdır.

ΔFosB ifadəsinin CB-ni inkişaf etdirməməsi maraqlıdır₁NAc-də R-mediasiya siqnalları. CB-də dəyişikliklər mümkündür₁R sinyalizasiyası bütün NAc preparatında qaranlıq olan neyronların ayrı-ayrı populyasiyasında baş verir. Məsələn, Δ⁹- THC, NAc-nin nüvəsində shellFosB-ni əhəmiyyətli dərəcədə əmələ gətirdi (lakin qabıq deyil)Perrotti və digərləri, 2008). Mənndeed, bu Δ ilə problem olduğunu göstərilib⁹A-d təkrar tətbiq edildikdən sonra⁹-THC NAc əsasında dopamin sərbəstliyini artırdı, ancaq qəfildəki sərbəstliyi azaldı (Cadoni və digərləri, 2008). Qeyd etmək lazımdır ki, 11A bitransgen siçanları ΔFosB yalnız dynorphin / D₁Striatumun R pozitiv orta spiny nöronları, lakin CB₁R, həm də dinorfin / D ilə ifadə edilir₁R və enkefalin / D₂R müsbət striatal nöronlar (Hohmann və Herkenham, 2000), eləcə də kortikal afferentlərin terminalları (Robbe və digərləri, 2001). ΔcJun, həm D-də, həm də D-də təsiredici bir şəkildə ifadə edilsə də, ΔFosB vasitəsi ilə transkripsiyanın dominant tənzimləyici tənzimləyicisinin ifadəsi, ΔcJun, həmçinin kannabinoid reseptorlarının sinyalizasiyası üçün əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərməmişdir₁ və D₂Bu siçanlarda orta sürünən nöronların əhaliPeakman və digərləri, 2003). Bununla yanaşı, ΔcJun'un MOR və KOR ilə nəticələrə görə təklif etdiyi reseptor siqnalına təsir etməyəcəyi əsas ΔFosB ifadəsinin kifayət qədər aşağı olması mümkündür. CB də mümkündür₁R siqnalları bazal ΔFosB ifadəsi ilə kifayət qədər genişlənir, beləliklə, ΔFosB ifadəsini daha da artırmaq və ya ΔcJun ilə hərəkətlərini maneə törətmək statistik əhəmiyyətə çatmayan kiçik təsirlərə malik idi. Bu şərh üçün dolayı dəstək WIN55,212-2 EC ilə müqayisə edilə bilər₅₀ ΔcJun-ə ΔFosB-ə qarşı ifadə edən siçanlar arasında dəyərlər. WIN55,212-2 EC nisbəti₅₀ ΔcJun'un EC'ye induksiyalı ifadə ilə siçanlarda adenilil siklaz inhibisyonu üçün dəyər₅₀ ΔFosB'nin induksiyalı ifadə ilə siçanlarda G-proteinin aktivləşdirilməsi üçün dəyəri 4.0 idi, transgenin induksiyasız siçanlarda eyni nisbəti isə 1.2 idi.

Alternativ olaraq, kannabinoidlər CB üzərində hər hansı bir təsir olmadan ΔFosB ifadə edə bilər₁R siqnalları. Bu ssenaridə cannabinoidlər ΔFosB vasitəçiliyi ilə transkripsiya tənzimlənməsi vasitəsi ilə digər dərmanların psixoaktiv təsirlərinə cavab verə bilər. MənƏslində, Δ⁹-THC opioidlərə və amfetaminə qarşı həssaslaşdırma istehsal edir (Cadoni və digərləri, 2001, Lamarque və digərləri, 2001), bu hipotez ilə uyğun gəlir. Bundan başqa, kannabinoid agonist CP55,940-in təkrarlanan administrasiyasında NAc-da MOR-vasitə ilə işlənmiş G-proteinin aktivləşdirilməsini, eyni zamanda, bu tədqiqatda ΔFosB-i ifadə edici şəkildə ifadə edən siçanlarınVigano və digərləri, 2005). ΔFosB ifadəinin Δ⁹-Bu vasitəçilik davranışları qiymətləndirilməmişdir, lakin indiki nəticələr qarşılıqlı əlaqəni maneə törədir. Bu və əvvəlki tədqiqatımızın nəticələri (Zachariou və digərləri, 2006) striatumda MOR və KOR / dynorphin-də ΔFosB-in bağlı dəyişiklikləri göstərir. Δ⁹Yer seçimi ilə ölçülmüş olan THC, MOR null siçanlarda ləğv edilir, KOR silinməsi isə Δ⁹-Dünyanın yer üzündüyünü və Δ⁹-Bu yer seçimi (Ghozland və s., 2002). Eynilə, şərti yer Δ⁹Yabani tipli siçanlarla müqayisədə prointerfin nekroqunda THC yoxdur (Zimmer və digərləri, 2001). Bu məlumatlar Δ⁹-THC, ΔFosB induksiyasından və MOR siqnalının sonra dynorphin ifadəsində azalma ilə indüksiyadan sonra daha mükəmməl ola bilər.

Xülasəy, bu işin nəticələrinə görə D ΔFosB ifadəsidir₁R / dynorphin pozitiv striatal nöronlar NAc-da adenilil siklaz fəaliyyətinin G-protein vasitəsi ilə maneə səviyyəsində gücləndirilmiş MOR- və KOR-mediatlaşdırılmış siqnalları artırdı. Bu tapıntı endogen opioid sisteminin mükafatlandırılmasında rol oynadığını göstərən tədqiqatlarla uyğun gəlir (Trigo, et al., 2010) və mükafat üzrə ΔFosB vasitəçiliyi təsirləri üçün potensial mexanizm təmin edir. Əksinə, CB₁NAc-da R-mediatlaşdırılmış siqnalizasiya tədqiq edilən şəraitdə striatal ΔFosB ifadəindən əhəmiyyətli dərəcədə təsirlənməmişdir, baxmayaraq ki, sonrakı tədqiqatlar endosankabinoid sistemində ΔFosB induksiyasının təsirini müəyyən etmək üçün zəmanət verilir.

Araşdırma məqamları

MOR siqnalları ΔFosB ifadə edən siçanların nüvəli akumbensində gücləndirilir
Adenilil siklazın KOR inhibisyonu da ΔFosB ifadə edən siçanlarda artır
ΔFosB ifadəsi CB-i dəyişmir₁R-də nüvəli akumbensdə R siqnalları

Əlavə material

01

Baxmaq üçün buraya basın.^{(45K, pdf)}

Təşəkkürlər

Müəlliflər Hengjun He, Jordan Cox və Aaron Tomarchio ilə texniki yardım üçün təşəkkür edir [³⁵S] GTPγS bağlanma təhlili. Bu iş USPHS Grants DA014277 (LJS), DA10770 (DES) və P01 DA08227 (EJN) tərəfindən dəstəklənmişdir.

Dəyişikliklər

Yayımcının Rədd cavabı: Bu dərc üçün qəbul edilmiş edilmiş edilməmiş əlyazmanın bir PDF faylıdır. Müştərilərimizə xidmət olaraq, bu əlyazmanın bu erkən versiyasını təqdim edirik. Əlyazma, surətini çıxarmaq, tərtib etmək və son sübut şəklində dərc edildikdən sonra ortaya çıxan sübutların nəzərdən keçirilməsini təmin edəcəkdir. Xatırlayın ki, istehsal prosesi zamanı məzmuna təsir göstərə biləcək səhvlər aşkar edilə bilər və jurnala aid olan bütün hüquqi rəddlər aiddir.

References

Bozarth MA, Wise RA. Anatomik olaraq fərqli opiat reseptor sahələri mükafat və fiziki asılılığa vasitəçilik edir. Elm. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Protein-boya bağlama prinsipini istifadə edərək, mikroqram miqdarının kəmiyyətinin ölçülməsi üçün sürətli və həssas bir üsul. Anal Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Xroniki delta⁹-tetrahidrokannabinol müalicəsi beynindəki kannabinoid reseptorla aktivləşdirilmiş G-proteinlərin vaxt itkisinə səbəb olur. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Cannabinoid reseptor agonistinin stimullaşdırılması üçün effektivliyi [³⁵Siçan serebellar membranlara bağlanan GTPγS, GSYH yaxınlığında agonist səbəbli azalmalarla əlaqələndirir. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Deloni 9-tetrahidrokannabinolə təkrar məruz qaldıqdan və morfin ilə qarşılıqlı həssaslaşmadan sonra davranışçı həssaslaşdırma. Psixofarmakologiya (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Deloni 9-tetrahidrokannabinolə qarşı davranış həssaslığı və morfin ilə qarşılıqlı həssaslaşma: Aqumbal qabığın və əsas dopamin ötürülməsində diferensial dəyişikliklər. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Beyində induksiyalı, hədəf gen ifadəsi olan transgenik heyvanlar. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioid reseptoru ikinci peyğəmbərləri birləşdirdi. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Beyində adenilil siklazın opioid və kannabinoid reseptorlarının inhibe edilməsi. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid reseptor stimullaşdırılması [³⁵S] GPeS qvineya donuz beynində bağlama: Kappa üçün sübutların olmaması₂G-zülalların seçici aktivasiyası. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Enkefalin və dynorphin knockout siçanlarının beynində opioid reseptor kimi 1 reseptorları deyil, mikro, delta və kappa-opioid reseptorlarının selektiv up-tənzimlənməsi, Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. DeltaFosB'nin striatal hüceyrə tipli xüsusi ov ekspresyonu kokain üçün təşviq artırır. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endokannabinoid sinyalizasiya sistemi və beyin mükafatı: dopaminə diqqət. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kannabinoidlərin motivasiya effektləri mu-opioid və kappa-opioid reseptorları tərəfindən vasitələnir. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice K.C. Sıçan beyinində kannabinoid reseptorlarının xarakterizə edilməsi və lokalizasiyası: in vitro otoradyoqrafik tədqiqatlarda kəmiyyət. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Sıçan striatumun nöronal subpopulyasiyalarında kannabinoid CB (1) reseptor mRNA'sının lokalizasiyası: in-situ hibridizasiya işində ikiqat etiket. Sinapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Hellenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Beynəlxalq Farmakologiya Birliyi. XXVII. Kannabinoid reseptorlarının təsnifatı. Farmakoloji Baxış. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. CB1-selektiv kannabinoid reseptor antagonisti SR141716 tərəfindən çəkilmiş sirr təsirlərinin blokadası. Arch. Ümumi psixiatriya. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Beşte deltaFosB transkripsiyon faktorunun ifadəsi kokain həssaslığını nəzarət edir. Nature. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Narkomaniya asılılığı. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Delta (9) -tetrahidrokannabinollə kronik müalicə amfetamin və eroin üçün lokomotor reaksiyanı artırır. Narkomaniyaya zəiflik üçün təsirlər. Neurofarmakoloji. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Narkomaniyaya endokannabinoid sisteminin cəlb edilməsi. Trends Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Sıçan CNS-də mu-Opioid reseptor mRNA ifadəsi: mu-reseptorun bağlanmasına müqayisə. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Mətbəx I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Morphine-induced analjezi, mükafat təsiri və μ-opioid reseptor geninə malik olmayan siçanlarda çəkilmə siqnalı. Nature. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. CREB və DeltaFosB tərəfindən gen ifadə və kokain mükafatının tənzimlənməsi. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: beyində uzun müddətli adaptasiya üçün molekulyar bir keçid. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1 dopamin reseptorları aralıq morfin idarəsindən sonra sümük striatumunda deltaFosB indüksiyasını modullaşdırır. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Baxış-icmal. Bağımlılığın transkripsiyon mexanizmləri: DeltaFosB rolu. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: uzunmüddətli sinir və davranış plastisitəsinin molekulyar vasitəçi. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Striatum və nüvəsiz acumbensdə kokain tərəfindən xroniki FOS ilə əlaqəli antigen induksiyasının tənzimlənməsində farmakoloji tədqiqatlar. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Fond JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. C-Jun'un transgenik siçanlarda dominant mənfi mutantının beyin bölgəsinə spesifik ifadəsi kokainə qarşı həssaslığı azaldır. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. DeltaFosB-nun istifadəsi ilə narkotik maddələri ilə beynin induksiyası. Sinapse. 2008;62: 358-369. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Sinə nüvəsinin akumbenslərinin glutamateriqik sinapslarında kannabinoid reseptorlarının lokallaşdırılması və hərəkət mexanizmləri. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenilat siklaz testi. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid reseptoru stimullaşdırılan [³⁵S rat thalamus və kültürlü hüceyrələrin xəttlərində bağlama: Güclü effektivliyi olan siqnal transdüksiyon mexanizmləri. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Endogen opioid sistemi: narkotik maddə asılılığında ümumi substrat. Drug Alkoqolundan asılıdır. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Sıçan və qviney donuz beyinlərində κ1 və κ2 opioid reseptorlarının neyroanatomik lokalizasiyası. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Nüvə adacığının opiate reseptorlarının blokadası sıçanda intravenöz eroin mükafatını azaldır. Psixofarmakologiya (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Kannabinoid və opioid sistemləri arasında asimmetrik qarşılıqlı iştirak edən molekulyar mexanizmlər. Psixofarmakologiya (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. DeltaFosB üçün morfin hərəkətində nüvəli akumbens üçün mühüm rol. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Kannabinoid mükafatı üçün iki beyin yeri. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Klonlanmış insan kappa opioid reseptorunun agonistlər tərəfindən aktivləşdirilməsi [35S] GTPγS membranların bağlanması: ligandların potensiyaları və effektivliyini müəyyənləşdirir. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Dynorphin-çatışmaz siçanlarda delta -9-tetrahidrokannabinol disforat effekti olmaması. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Kannabinoid CB1 reseptor nekroz siçanlarında artmış ölüm, hipoaktivlik və hipoaljeziya. Proc. Natl. Acad. Sci. ABŞ 1999;96: 5780-5785. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]