Fadok JP, Darvas M, Dickerson TMK, Palmiter RD
(2010). PLoS ONE 5 (9): e12751. doi: 10.1371 / journal.pone.0012751
Jonathan P. Fadok1,2, Martin Darvas2, Tavis MK Dickerson2, Richard D. Palmiter2
1 Nörobiyoloji və Davranış Yüksek Lisans proqramı, Vaşinqton Universiteti, Seattle, Vaşinqton, Amerika Birləşmiş Ştatları,
2 Biokimya bölməsi və Howard Hughes Tibb İnstitutu, Vaşinqton Universiteti, Seattle, Vaşinqton, Amerika Birləşmiş Ştatları
Neyrotransmitter dopamin (DA) bir Pavlovian qorxu kondisionerində öyrənmək üçün vacibdir paradiqma qorxu potensiallı başlanğıc (FPS) kimi tanınır. DA sintez etmək qabiliyyətinə malik olmayan siçanlar, kondisyonlu stimul və qorxu endirən ayaq şoku arasında əlaqəni öyrənməz. Daha əvvəl, biz ventral tegmental bölgənin nöronlarına (VTA) DA sintezinin FPS bərpa etmək üçün kifayət qədər olduğunu göstərmişik. Burada, VTA'dan DA sinyalleri alan mezokortikolimbik beyin bölgələrinin FPS üçün DA tələb etməsini təyin etmək üçün hədəf-seçici viral bərpa yanaşması istifadə edilmişdir. DA sintezinin həm bazolyar amigdalana (BLA), həm də nüvəli accumbens (NAc) bərpasının FPS-nin uzunmüddətli yaddaşı üçün tələb olunduğunu nümayiş etdiririk. Bu məlumatlar qorxu ilə əlaqəli yaddaş meydana gəlməsində iştirak edən dopaminə bağlı olan dövrəyə mühüm bir fikir verir.
giriş
DA, hipotalamus, koflin lampanı və ventral midbrain [1] daxil olmaqla beyində diskret nüvələrdə neyronlarla sintez olunur. Prefrontal korteks, hipokampus, amigdala və NAc [1], [2], [3] kimi qorxu kondisionerləri üçün vacib olan limbik beyin sahələrinə ventral midbrain layihəsinin VTA-da DA nöronları. DA-nın qorxu kondisionerində rolu ilə uyğun olaraq, DA nöronların atəş dərəcəsi qorxu-stimullaşdırıcı stimullar, habelə çirkin nəticələrin [4], [5], [6] proqnozları ilə dəyişir. Bundan əlavə, qorxulu stimullara və ya stres hallarına cavab olaraq, DA səviyyəsi bir neçə limbik beyin bölgəsində artmaqdadır [7], [8], [9], [10] və DA funksiyasının farmakoloji və genetik manipulyasiyası qorxu kondisioner paradiqmalarında [11], [12], [13], [14]
Pavlovian qorxu kondisionerində, işıq kimi neytral bir vəziyyətdə olan stimul, ayaq kimi şüursuz bir şərt olmadan stimullaşdırılır. Təlimdən sonra yalnız kondisyonlu stimul təqdimatı qorxu reaksiyalarını ortaya qoyur [3]. FPS, öyrənmənin akustik qışqırma reaksiyası (15) ilə təyin olunan artımlarla qiymətləndirildiyi yayılmış olaraq Pavlovian qorxu kondisioner paradiqmasıdır. Daha əvvəl VTA-da DA nöronlarının FPS paradiqmasında [12] öyrənilməsi üçün kifayət qədər olduğunu göstərdik. Bununla yanaşı, BLA-da DA qısamüddətli yaddaş (STM) yaratmaq üçün kifayətdir, amma şüurlu şok birliyin uzunmüddətli yaddaşı (LTM). VTA DA nöronlarının qalan hədəflərindən NAc ən böyük innervasyonu qəbul edir və bu səbəbdən FPS [2] üçün LTM-in formalaşması üçün əsas namizəddir.
Böyük bir ədəbiyyat, mükafat əsaslı paradiqmalarda [16] birləşmə öyrənmə prosesləri üçün NAc çərçivəsində DA-nın rolunu dəstəkləyir. Hazırda NAc-da DA-da Pavlovian qorxu kondisionerini öyrənmək üçün də vacibdir. Buna baxmayaraq, tədqiqatlar göstərir ki, DA səviyyələri NAc-da qorxulu stimullara və proqnozlaşdırıcı xarakterlərə cavab olaraq artmışdır [10]. Bundan başqa, NAc qorunması üçün əsas olan bir BLA [16], [17], nadir bir hüceyrədir və DA həm NAc və BLA [18], [19], [20], [21 ]. Buna görə də, həm də bu bölgələrin hər ikisinde BLA və NAc arasındakı əlaqə və DA sinyalizasiyası Pavlovian qorxu kondisioner üçün tələb olunur.
Pavlovian qorxu kondisionerində LTM üçün NAc və BLA-dakı DA-nın lazım olduğunu müəyyən etmək üçün, loxP-flanşlı transkripsiyalı / translational dayandırılmasının dayandırılması səbəbindən DA-i sintez etmək qabiliyyətinə malik olmayan dopamin çatışmazlığı (DD) siçan modelindən istifadə etdik tirozin hidroksilaz (Thfs) genindəki kasset [22]. Cre recombinase iştirakı ilə, DA sinyalizasyonu, stop kassetinin çıxarılması vasitəsilə Thfs allelinin yenidən aktivləşdirilməsi ilə xüsusi hədəf bölgələrə seçici olaraq bərpa edilə bilər. Biz təkrar NA'ya ya da NAc və BLA-ya DA-ni seçici olaraq yenidən bərpa etmək üçün Cre rekombinasiyasını ifadə edən retrogradely-insan alveri virusu istifadə etdik. Bizim nəticələr göstərir ki, DA NAc və BLA-da DA FPS üçün LTM qurmaq üçün kifayətdir.
Nəticələr
Viral-xilas edilən DD Siçanlarında TH-nin bərpası
FPS üçün LTM'nin formalaşması üçün beyin DA-nı nəyin olduğu müəyyən etmək üçün DA funksiyası CAV2-Cre recombinase inyeksiya vasitəsi ilə DD siçanlarında bərpa edilmişdir. Bu virus selektiv şəkildə nöronlara yoluxur və retrograd yoluxma yerindən nəql olunur [23]. DD siçanlarında DA neyronlarının bir hədəf nüvəsinə enjekte edildikdə, bu virus ventral midbrain DA neyronlarına geri çevriləcəkdir, burada fönşən stop kassetini çıxarır, TH genini yenidən aktivləşdirir, TH istehsalını bərpa edir və DA istehsalını yalnız Seçilmiş hədəflər [22]. Bu texnikanı iki ayrı siçan kohortunda istifadə etdik. NAc, VTA'nın [2] DA nöronlarının ən böyük hədəfi olduğundan, bu nüvənin FPS üçün LTM meydana gəlməsi üçün kritik ola biləcəyini fərz etdik; Buna görə CAV2-Cre ikitərəfli inyeksiya bir kohortda NAc halına gətirildi. Həm də DA-nın LTM üçün VTA-nın bir çox hədəfində tələb oluna biləcəyi hipotezini test etdik. Bu test üçün ikitərəfli inyeksiya DD siçanlarının NAc və BLA-na daxil edilmişdir.
İmmünohistokimya, viral yoluxmuş DD siçanlarında TH funksiyasının bərpasını təsdiqləmək üçün istifadə edilmişdir (Şəkil 1). Gözlənildiyi kimi DA taşıyıcısı (DAT) (Şəkil 1A-D) ilə birgə yerləşdirilən nəzarət siçanlarının NAc-də TH üçün güclü bir siqnal var idi. TH də nəzarət siçanlarının BLA-da aşkar edilmişdir (Şəkil 1E); Buna baxmayaraq, DAT immunoreaktivliyi BLA-da çox aşağıdır və buna görə də göstərilmir. İmmünohistokimya həmçinin qeyri-injection DD siçanlarından (Şəkil 1 F-J) beyin toxuması üzərində aparıldı. NAc-da heç bir təsbit edilə bilən TH siqnalının olmaması (Şəkil 1F, G), hələ də DAT boyama mövcud idi (Şəkil 1H, I). DD siçanlarının BLA da əsasən TH laminasiyasından (Şəkil 1J) məhrum olmuşdur.
Şəkil 1
DD siçanlarında viral xilas edilən TH-nin seçmə bərpası.
NAc-enjekte edilmiş DD siçanlarından immunohistokimya TH'nin NAc (Şəkil 1K-N) böyük ölçüdə bərpa etdiyini göstərdi. NAc-injected DD siçan BLA (Şəkil 1O) aşkar heç bir aşkar edilmişdir. NAc və BLA-lara ikiqat xilasetmə NAc (Şəkil 1P-S) və BLA-da güclü TH siqnalının (Şəkil 1T) TH üçün güclü bir siqnal gətirdi. Bu məlumatlar göstərir ki, CAV2-Cre viral inyeksiya enjekte edilmiş beyin bölgələrinə aid TH ifadəsinin bərpasında yüksək təsir göstərmişdir.
TH'nin viral xilasetməsini təsdiqləyib ki, DA-nın enjekte edilmiş DD siçanlarının bərpasına səbəb olan DA, DA metabolitlərini və yüksək effektiv maye xromatoqrafiya (HPLC; Table 1) istifadə edərək norepinefrin təyin etdik. Bu təcrübə üçün, DA proqnozlarının bir hədəfində TH'nin xilas edilməsinin digər səviyyələrdə DA səviyyələrinə təsir göstərəcəyini müəyyən etmək üçün ya NAc ya da amigdala da xilasetmə aparıldı. Dopamin tükənməyən DD siçanlarının nəzarət səviyyəsinin 0.51% -i, amigdala səviyyəsində NAc və 1.39% səviyyəsində olduğunu təsbit etdik. NAc-xilas edilən DD siçanlar NAc-da 34.0% nəzarət səviyyəsi olan DA səviyyəsinə malik idi; Amigdala DA səviyyələri qeyri-indiki DD səviyyələri ilə eyni idi (1.57%). Amigdala qurtarılan DD siçanlarının amigdaladakı DA səviyyələri 38.4% -dəkdir, lakin NAc-da DA səviyyəsi qeyri-xilas edilmiş DD səviyyələri ilə eynidır (0.46%). Bu nəticələr göstərir ki, TH-nin virus vasitəsi ilə qurtarması DD siçanlarının enjekte edilmiş hədəf bölgələrində yüksək DA səviyyələrinə gətirib çıxarır.
Bundan başqa, ya NAc ya da amigdalana virusu enjekte etməsi digər hədəfdə DA səviyyəsinin yüksəlməsinə gətirib çıxarmadı. Nəhayət, TH'nin DD siçanlarının [24], noradrenergik neuronlarda ifadə edildiyi üçün [25], DD siçanlarında BLA'nın IHC-də görülən az miqdarda noradrenergik axonlara aid etdik. Qeyri-xilas edilən DD siçanlarının BLA-da norepinefrin varlığı HPLC ilə təsdiqləndi (Cədvəl 1).
Cədvəl 1
DA, NE və DA metabolitlərinin HPLC kantifikasiyası.
Uzunmüddətli yaddaş üçün NAc və BLA-da Dopamin tələb olunur
Qorxu ilə gücləndirilmiş çaşqınlıq Pavlov kondisionerinin bir formasıdır ki, burada şərtləndirilmiş stimul akustik həyəcan reaksiyasının artmasına səbəb olur [15]. DA-nın yalnız NAc-də və ya yalnız NAc və BLA-da selektiv bərpasının akustik həyəcan reaksiyasının özünü pozmamasını təmin etmək üçün idarəetmələr və xilas edilmiş DD siçanları üçün qorxuya cavab əyriləri yaradıldı (Şəkil 2A). İkitərəfli təkrar ölçmələr dispersiya təhlili (RM ANOVA) səs intensivliyinin əhəmiyyətli təsirini (F(4,172) = 37.1, p<0.01) aşkar etdi, lakin müalicə qarşılıqlı təsiri ilə heç bir qrup yoxdur. DA funksiyasının pozulmaları da sensorimotor qapılarda FPS-i poza biləcək fərqlərə səbəb ola bilər [15], [26]. Sensorimotor qapını təhlil etmək üçün bütün siçanlar impulsdan əvvəl inhibə (PPI) paradiqmasında bir çox səviyyələrdə sınaqdan keçirilmişdir (Şəkil 2B). Prepulse intensivliyinin əhəmiyyətli bir təsiri var idi (RM ANOVA F (2,86) = 57.79, p<0.01), lakin müalicənin qarşılıqlı təsiri ilə heç bir qrup yoxdur. Bu nəticələr göstərir ki, eksperimental manipulyasiyalarımız nəticəsində yaranan DA siqnalının NAC və ya NAc və BLA-ya seçici xilas edilməsi akustik həyəcan reaksiyasını və ya sensorimotor qapını dəyişməyib. Şəkil 2 DA-nın həm NAc, həm də BLA-ya bərpası LTM üçün kifayətdir. FPS üçün. Siçanlar qorxu kondisioner paradiqmasına məruz qaldılar (Şəkil 2C). Təlim zamanı siçanlara 30 saniyəlik işıq siqnalının yüngül ayaq zərbəsi (10 san, 0.5 mA) ilə birləşdirildiyi 0.2 sınaq verilmişdir. Qısamüddətli yaddaş (STM) məşqdən 10 dəqiqə sonra, LTM isə 24 saat sonra sınaqdan keçirildi. Kondisionerdən əvvəl qruplar arasında əhəmiyyətli fərqlər yox idi. Təlimdən sonra DD siçanlarında NAc və BLA-nın bərpası ilə STM tamamilə bərpa edildi. NAc enjekte edilmiş DD siçanlarında STM pozuldu, lakin bu təsir əhəmiyyət kəsb edə bilmədi; lakin onlar nəzarət siçanlarına nisbətən əhəmiyyətli dərəcədə daha az LTM-yə malik idilər (p<0.05; Bonferroni posttest). LTM həm NAc, həm də BLA-ya ikitərəfli şəkildə yeridilmiş DD siçanlarında nəzarət səviyyəsinə tamamilə bərpa edildi. Ayaq şokuna davranış reaksiyasında qruplar arasında əhəmiyyətli fərqlər yox idi (Şəkil 2D). Bu məlumatlar göstərir ki, NAc və BLA-da DA FPS üçün LTM-i asanlaşdırmaq üçün kifayətdir.
Müzakirə
DA, amigdala, NAc və hipokampus (27), [28], [29], və əvvəlki tədqiqatlar da Pavlovyanda qorxu kondisionerində rol oynamışdır. 13]. Əvvəllər biz DA-nin FPS paradiqmasında yaddaş izini sabitləşdirmək üçün vacib olduğunu nümayiş etdirdik [12]. Bundan əlavə, DA funksiyasının VTA-dan irəli gələn mesokortikolimbik dövrə bərpa olunması FPS üçün STM və LTM-ni bərpa etmək üçün kifayət idi, lakin yalnız BLA bərpa yalnız təkrar STM [12] bərpa edilmişdir. Bununla belə, bu cür öyrənmə prosesində LTM-in formalaşması üçün lazım olan DA fəaliyyət sahələri məlum deyil. Burada DA sintezinin NAc və BLA-ya bərpası FPS üçün LTM üçün kifayətdir. Bundan başqa, TH-nin NAc-ə proqnozlaşdırılan DA neyronlarının bərpasının STM-ni BLA-nın bərpası (12) və ya həm BLA, həm də NAc-ə bərpası kimi effektiv olmamışdır. Bu, NAC-nin LTM-in yaradılması üçün STM-dən daha vacib ola biləcəyini göstərir.
Viral bərpa yanaşmasına bir potensial xəbərdarlıq DA nöronları birdən çox hədəfə girov proqnozları göndərə bilir. Beləliklə, NAc-yə virus enjeksiyası BL-ə TH, və bununla DA-yı bərpa edə bilər. Bizim immunohistokimyəvi nəticələr göstərir ki, NAc-nı innervasiya edən DA nöronları BLA-nı innervasiya edənlərdən fərqli bir əhali təşkil edir, çünki bir beyin bölgəsində virusu inyeksiya edən yalnız TH bölgəsində boyanma artmışdır. HPLC nəticələri bu argümanı gücləndirir, çünki DA səviyyələri NAc-xilas edilən DD siçanlarının NAc-da yüksəlir, amigdala deyil. Bu tapıntılar proqnozlaşdırma hədəfi [30], [31], [32], [33] əsasında DA nöronlarının heterojenliyini tədqiq edən çoxsaylı tədqiqatlara uyğun gəlir.
Pavlovyanın qorxu kondisionerinə görə NAc və BLA-da DA-yə olan tələbatın təməli və mexanizmləri həll edilməmişdir. Maraqlıdır ki, BLA NAc [16], [34] üçün proqnozlar göndərir və bu sinapslar uzun müddətli potensiasiya, öyrənmə və yaddaşın əsas hücum korretelidir [35]. Üstəlik, DA BLA və NAc [18], [21] -də LTP-ni asanlaşdırır. Beləliklə, Pavlovian qorxu kondisionerində BLA-da DA NAc [19] üçün layihələndirən hüceyrələr daxil olmaqla glutamateriqik piramidal hüceyrə fəaliyyəti [20], [36], [34] BLA'nın LTP'si NAc sinapslarına, beləliklə LTM-in formalaşmasına kömək edir. FPS üçün BLA və NAc-dakı DA-bağımlı hadisələrin dəqiq vaxtının müəyyən edilməsi bu prosesin anlayışımızı artıracaqdır.
Material və metodlar
Etik bəyanatı
Bütün siçanlar, Milli Sağlamlıq İnstitutları tərəfindən müəyyən edilmiş qaydalara əsasən müalicə olundu və siçovullarla proseduralar Vaşinqtonun İnstitusional Heyvan Xidməti və İstifadə Komitəsi (2183-02) tərəfindən təsdiq edildi.
Heyvanlar və müalicələr
DD siçanları [22] təsvir olunduğu kimi yaradılıb. Qısaca, DD (Thfs / fs; DbhTh / +) siçanları cre rekombinasiya ilə şərti olaraq reaktivləşdirilə bilən iki inaktiv tirozin hidroksilaz (Th) alleli daşıyır. DD siçanlarının bir toxunulmaz dopamin β-hidroksilaz (Dbh) alleli və norepinefrinin [24], [25] normal istehsalına imkan verən Th geninin hədəf yerləşdirilməsi ilə bir Dbh aleli var. Nəzarət heyvanları ən azı bir toxunmamış Th aleli və bir bütöv Dbh allele daşıyır. Kişi və qadın siçanlar 2-6 aylıq dövrlər arasında davranış testinə məruz qaldılar. Bütün siçanlar ərzaqla (12LJ12; PMI Feeds, Sent-Luis, MO) və suda mövcud olan bir temperaturda idarə olunan bir mühitdə 5 5 (yüngül: qaranlıq) dövrü altında yerləşdirildi. Bütün davranış təcrübələri işıq dövrü ərzində aparılmışdır. DD siçanlarının ciddi hipofagik olduğundan, 3, 4-dihidroksi-L-fenilalanin (L-Dopa) ilə gündəlik olaraq (intraperitoneal) 50 mL / g həcmində 33 / 10 [25]. Virus inyeksiyasından sonra DD siçanları L-Dopanın gündəlik L-Dopa müalicəsi ilə kifayət qədər L-Dopa müalicəsi olmadan yetişdirə bilən qədər saxlanılırdı.
Viral Enjeksiyonlar
Isofluran (1.5-5%) - anesteziyalı siçanlar stereotaksik alətə yerləşdirilib (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Yalnızca nüvəli akumbenslərdə Th gen funksiyasının bərpası üçün, rekombinant CAV2-Cre virusu (2.1 × 1012 partikül / ml'de titrəyilmiş) iki tərəfli olaraq enjekte edilmişdir (mm: 1.7 anterior Bregma, 0.75 lateral orta xətt, 4.75 ventral Bregma; 0.5 μl / hemisphere) DD və nəzarət siçanlarına daxildir. DA-nın NAc və BLA-yə ikiqat bərpası üçün, CAV2-Cre virusu yuxarıda olduğu kimi NAc-yə iki tərəfli olaraq və BLA (mm: 1.5 arxa Bregma, 3.25 lateral üçün orta xətt, 5 ventral Bregma, 0.5 μl / hemisfer) DD və nəzarət siçanlarında. Bu viral vektorun ətraflı təsviri [22] çap edilmişdir. Virus infuziya pompasına (WPI, Sarasota, FL) qoşulan bir 10-gauge şpris iğnesi (Hamilton, Reno, NV) istifadə edərək, bir 32-min dövrünə viruslar enjekte edildi. Yalnızca NAc-dən nəzarət siçanları və ikiqat xilasetmə qrupları bir qrup halında tərtib edilmiş və hər hansı davranış parametrində fərqlənməmişdir.
Aparat
[12] təsvir edildiyi kimi, prepulse inhibisyonunu, həyəcanlandırıcı cavabları və qorxu potensiallı qışqırımı ölçmək üçün səs-zərifləyən başlama kameraları (SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) istifadə edilmişdir. Cavabın zirvəsi amplitudu prepulse inhibisyonunu, həyəcanlandırıcı cavabları, qorxu-potensiasiya edən başlanğıcı və şok reaktivliyini hesablamaq üçün istifadə edilmişdir. Səs səviyyələri bir səs səviyyəli oxucu (RadioShack, Fort Worth, TX) istifadə edərək təsdiqləndi. Qəzəblənmə vahidi başlanğıc cavab oxumalarının (San Diego Instruments, San Diego, CA) bütövlüyünü təmin etmək üçün istifadə edilmişdir. Istifadə etmək üçün başlama qutusunun arxa divarına 8-watt işığı düzəldildi.
Başlama cavab əyriləri
Bir 5-min habituation dövründən sonra heyvanlar 10 seriyası səs darbe səviyyələrinə malik olan sınaqlarla təqdim edildi: 105-dək 30-dək bir ITI ilə heç bir səsin olmaması nulldan. Bütün səs paxlaları 40 msec idi.
Əvvəlcədən pulse inhibisyonu
ÜFE, [12] olaraq təsvir edildi. Qısaca, bir habituation dövrü sonra, siçanlar 5, 40-msec, 120-dB, pulse-tək sınaqları ilə təqdim edilmişdir. Siçanlar daha sonra 50 sınaqları ilə təqdim edildi və ya üç prepulse sınaqdan (5, 10 və 15-dB fondan yuxarı) bir startle pulse-tək sınaq və ya akustik stimul olmadığı bir boş sınaq. Prepulse inhibisyonu aşağıdakı formula ilə hər prepulse səviyyəsində hesablanmışdır:% inhibition = [(prepulse sınaqında ortalama başlanğıc cavab / pulse-tək sınaqda ortalama başlanğıc cavabı) × 100].
Qorxu-gücləndirilmiş qarışıqlıq
Bütün siçanlar [3] təsvir edildiyi kimi 12-gün FPS paradiqmasını istifadə edərək test edilmişdir. Qısaca əsasən, siçanlara 20 sınaqlarının ssenarisi ilə təsadüfi bir sıra sifariş verilmiş, tapşırıqlar və no-cue şərtləri arasında bərabər bölünmüşdür. 2 günü siçanlar 30-mA, 2-sec ayaq ilə 10-sec nişan işıqlarının 0.2 cütlüyünü (0.5 min orta İTİ) qəbul etdi. Siçanlar qısa müddətli yaddaş testindən əvvəl 10 dəqiqə üçün ev kafeslərinə yerləşdirildi. 3 günü LTM qiymətləndirildi. Aşağıdakı formul qoruyucu potensiallaşdırılmış qışqırımı hesablamaq üçün istifadə edilmişdir:% potentiation = [(Təqib sınaqları üzrə cavabların ortalaması / no-cue sınaqları üzrə cavabların ortalaması-1) × 100].
İmmünohistokimya
Mouse beyin toxuması [12] təsvir edildiyi kimi standart üsullardan istifadə edərək histoloji analiz üçün hazırlanmışdır. Free-floating coronal bölmələr (30 μm) dovşan anti-TH (1 2000, Millipore) və anti-DAT (1 1000, Millipore) antikorları ilə immunostained edilmişdir. İkincil antikorlar ya Cy2- ya da Cy3-konjuge edildi (1 200, Jackson ImmunoResearch). Fotoşəkillər dik bir parlaqlıq mikroskop (Nikon) ilə çəkildi.
Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyası
Siçanlar Beuthanasia (250 mg / kq) ilə ötanadan edilmişdir və sonra beyinlər çıxarılmış və buzlu mərmər qabına yerləşdirilmişdir. Bir siçan beyin matrisi (Activation Systems, Warrren, MI) istifadə edərək, 1-mm qalın dilimləri NAc və ya amigdala vasitəsilə alındı. 1 mL mikrocentrifüj tüplərinə yerləşdirilən və sıx sıxılmış az miqdarda dondurulmuş toxuma yumruları (1.7-mm diametri) alındı. Nümunələr Quru Buzdan Neurochemistry Core Lab (Venderbilt Universiteti Molekulyar Sinirbilim Araşdırmaları Mərkəzi) üçün təhlili üçün göndərilənədək -80 ° C-də saxlanıldı.
Statistik təhlil
Statistik analiz GraphPad Prism proqramı (La Jolla, California) istifadə edilmişdir.
Minnətdarlıq
Larry Zweifel, histoloji üzrə yardım üçün Glenda Froelick və Albert Quintana və Valerie Wall-in siçan koloniyası baxımına aid faydalı şərhləri üçün təşəkkür edirik. CAV2 üçün Dr. Miguel Chillon'a (CBATEG'nin Vector Production Unit-a Barcelona Universitat Autonoma) təşəkkür edirik.
Dəyişikliklər
Rəqabət Maraqlar: Müəlliflər heç bir rəqabət mənsubiyyəti olmadığını bəyan etdi.
Maliyyələşdirmə: Bu araşdırma qismən Howard Hughes Tibb İnstitutu, Xalq Sağlamlığı Xidməti, Milli Tədqiqat Xidməti Mükafatı, T32 GM07270, Milli Ümumi Tibb Elmləri İnstitutu və NIH Milli Ümumi Tibb Elmləri İnstitutlarının Qrant 4 R25 GM 058501- 05. Maliyyələşdirənlərin iş dizaynında, məlumatların toplanmasında və təhlilində, nəşr qərarında və ya əlyazmanın hazırlanmasında heç bir rolu yox idi.
References
1. Bjorklund A, Dunnett SB. Beyində dopamin nöron sistemləri: bir yeniləmə. Trends Neurosci. 2007; 30: 194-202. [PubMed]
2. Alanlar HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Ventral tegmental sahə neyronları öyrənilən iştahlı davranış və müsbət möhkəmlətmə. Annu Rev Neurosci. 2007; 30: 289-316. [PubMed]
3. Marlen S. Pavlovyanın nevrologiya qorxusu. Annu Rev Neurosci. 2001; 24: 897-931. [PubMed]
4. Brischoux F, Çakraborty S, Brierley DI, Ungless MA. Ventral VTA'ta dopamin nöronlarının zəhərli stimullar ilə fasik hərəkət edilməsi. Proc Natl Acad Sci ABŞ A. 2009; 106: 4894-4899. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
5. Guarraci FA, Kapp BS. Uyğun dovşanda fərqli pavlovian qorxu kondisionerində ventral tegmental sahə dopaminergik nöronların elektrofizyoloji xarakteristikası. Behav Brain Res. 1999; 99: 169-179. [PubMed]
6. Yeşua M, Adler A, Mitelman R, Vaadia E, Bergman H. Midbrain dopaminergik nöronlar və striatal kolinergik internöronlar, ehtimal olunan klassik kondisioner işlərinin müxtəlif dövrlərində mükafat və səbirli hadisələr arasındakı fərqləri kodlayır. J Neurosci. 2008; 28: 11673-11684. [PubMed]
7. Abercrombie ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. Striatumda, vivo dopaminin sərbəst buraxılmasında, nüvəli akumbens və medial frontal korteksdə stressin diferensial təsiri. J Neurochem. 1989; 52: 1655-1658. [PubMed]
8. Inglis FM, Moghaddam B. Amigdalanın dopaminergik innervasiyası stressə çox yüksək təsir göstərir. J Neurochem. 1999; 72: 1088-1094. [PubMed]
9. Kalivas PW, Duffy P. Strok tərəfindən nüvə akumbensinin qabığında dopamin ötürülməsinin selektiv aktivasiyası. Brain Res. 1995; 675: 325-328. [PubMed]
10. Pezze MA, Heidbreder CA, Feldon J, Murphy CA. Nucleus accumbens core və shell dopamini seçici cavab verən kontekstual və diskret stimullara cavab vermək. Neuroscience. 2001; 108: 91-102. [PubMed]
11. de Oliveira AR, Reimer AE, Brandao ML. Dopamin D2 reseptor mexanizmləri şərtli qorxu ifadəsində. Pharmacol Biochem Behav. 2006; 84: 102-111. [PubMed]
12. Fadok JP, Dickerson TM, Palmiter RD. Dopamine əmələ gələn qorxu kondisionerinə ehtiyac vardır. J Neurosci. 2009; 29: 11089-11097. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
13. Pezze MA, Feldon J. Mesolimbicin qorxu kondisionerində dopaminergik yollar. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301-320. [PubMed]
14. Ponnusamy R, Nissim HA, Barad M. D2-kimi dopamin reseptorlarının sistematik blokadası siçanlarda kondisiyalı qorxuların aradan qaldırılmasına kömək edir. Mem öyrən. 2005; 12: 399-406. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
15. Koç M. Qəfil nevrobiologiya. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107-128. [PubMed]
16. Sesack SR, Grace AA. Cortico-Basal Ganglia mükafat şəbəkəsi: microcircuitry. Nöropsikofarmakologiya. 2010; 35: 27-47. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
17. McGaugh JL. Amigdala emosional həyəcanlandıran təcrübə xatirələrinin konsolidasiyasını modullaşdırır. Annu Rev Neurosci. 2004; 27: 1-28. [PubMed]
18. Bissiere S, Humeau Y, Luthi A. Dopamin darvazaları, feedforward inhibisyonu bastırarak lateral amigdala LTP induksiyası. Nat Neurosci. 2003; 6: 587-592. [PubMed]
19. Kroner S, Rosenkranz JA, Grace AA, Barrionuevo G. Dopamin in vitro bazolateral amigdala nöronlarının həyəcanlanmasını modullaşdırır. J Neurophysiol. 2005; 93: 1598-1610. [PubMed]
20. Marowsky A, Yanagawa Y, Obata K, Vogt KE. İnterneuronların xüsusi bir alt sinfi amigdala funksiyasının dopaminergik asanlaşdırılmasına vasitəçilik edir. Neuron. 2005; 48: 1025-1037. [PubMed]
21. Wolf ME, Sun X, Mangiavacchi S, Chao SZ. Psixomotor stimulantlar və nöron plastisiyası. Neurofarmakologiya. 2004; 47 (Əlavə 1): 61-79. [PubMed]
22. Hnasko TS, Perez FA, Scouras AD, Stoll EA, Gale SD, et al. Dopamin çatışmazlığı olan siçələrdə nigrostriatal dopaminin rekombinasiya vasitəsi ilə bərpası hipofagiya və bradykinesiyanı düzəldir. Proc Natl Acad Sci ABŞ A. 2006; 103: 8858-8863. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
23. Soudais C, Laplace-Builhe C, Kissa K, Kremer EJ. Xərçəng adenovirus vektorları ilə neyronların effektiv ötürülməsi və in vivo onların effektiv retrograd nəqliyyat. FASEB J. 2001; 15: 2283-2285. [PubMed]
24. Szczypka MS, Rainey MA, Kim DS, Alaynick WA, Marck BT, və s. Dopamin çatışmazlı siçanlarda qidalanma davranışı. Proc Natl Acad Sci ABŞ A. 1999; 96: 12138-12143. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
25. Zhou QY, Palmiter RD. Dopamin çatışmazlığı olan siçanlar hipoaktiv, adiptik və aphagicdir. Cell. 1995; 83: 1197-1209. [PubMed]
26. Swerdlow NR, Braff DL, Geyer MA. Yetərsiz sensorimotor qapaqlarının heyvan modelləri: nə bilirik, nə düşündüyümüzü və yaxın zamanda biləcəyimizi ümid edirik. Behav Pharmacol. 2000; 11: 185-204. [PubMed]
27. LaLumiere RT, Nawar EM, McGaugh JL. Bazolyar amigdala və ya nüvəli akumbens qabığı tərəfindən yaddaş konsolidasiyasının modullaşdırılması həm beyin bölgələrində eyni vaxtda dopamin qəbuledici aktivasiyasını tələb edir. Mem öyrən. 2005; 12: 296-301. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
28. Manago F, Castellano C, Oliverio A, Mele A, De Leonibus E. Dopamin qəbuledicilərinin subtiplərinin rolu, D1 kimi və D2 kimi, nüvəsindəki acumbens subregions, core və shell daxilində, tək sınaq inhibitor qaçışda yaddaş konsolidasiyasında vəzifə. Mem öyrən. 2009; 16: 46-52. [PubMed]
29. Rossato JI, Bevilaqua LR, Izquierdo I, Medina JH, Cammarota M. Dopamin uzun müddətli yaddaş saxlanmasının davamlılığını nəzarət edir. Elm. 2009; 325: 1017-1020. [PubMed]
30. Lammel S, Hetzel A, Hackel O, Jones I, Liss B və digərləri. Dual mesocorticolimbic dopamin sistemində mesoprefrontal neyronların unikal xüsusiyyətləri. Neuron. 2008; 57: 760-773. [PubMed]
31. Ford CP, Mark GP, Williams JT. Mezolimbik dopamin nöronlarının xüsusiyyətləri və opioid inhibisyonu hədəf yerə görə dəyişir. J Neurosci. 2006; 26: 2788-2797. [PubMed]
32. Margolis EB, Lock H, Chefer VI, Shippenberg TS, Hjelmstad GO və digərləri. Kappa opioidləri prefrontal korteksə proqnozlaşdırılan dopaminergik nöronları seçici şəkildə nəzarət edirlər. Proc Natl Acad Sci ABŞ A. 2006; 103: 2938-2942. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
33. Margolis EB, Mitchell JM, Ishikawa J, Hjelmstad GO, Fields HL. Midbrain dopamin nöronları: proqnozlaşdırma hədəfi potensial potensial müddəti və dopamin D (2) reseptor inhibisyonunu müəyyən edir. J Neurosci. 2008; 28: 8908-8913. [PubMed]
34. McGaugh JL, McIntyre CK, Power AE. Amigdala yaddaş konsolidasiyasının modullaşdırılması: digər beyin sistemləri ilə qarşılıqlı əlaqə. Neurobiol Mem. 2002; 78: 539-552. [PubMed]
35. Popescu AT, Saghyan AA, Pare D. Amigdala tərəfindən kortikostriatal plastisiyanın asanlaşdırılmasına NMDA-nın asılılığı. Proc Natl Acad Sci ABŞ A. 2007; 104: 341-346. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
36. Rosenkranz JA, Grace AA. Pavlovian kondisionerində qoxuya uyan amigdala potensialının dopaminin vasitəçiliyi modulyasiyası. Təbiət. 2002; 417: 282-287. [PubMed]
;