İnsülin insulin reseptorlarını (InsRs) hipotalamusda yeməkdən sonra doyma siqnalı üçün aktivləşdirir. Buna baxmayaraq, obezitenin artan insulin səviyyəsi insulinin yüksək səviyyədə artması ilə nəticələnir ki, insulin də motivasiya və mükafat tənzimləyən beyin mərkəzlərində hərəkət edə bilər. Insulinin insulinin insulin ifraz edən striatal xolinergik internöronları əhatə edən dolayı bir mexanizm vasitəsilə nüvəli akumbens (NAc) və kaudat-pitamenə təsir potensialına asılı dopamin (DA) səthini artıracağını bildiririk. Bundan əlavə, siçovulların, qidalanma məhdudiyyətinin (FR) və obesogenic (OB) dietinin iki fərqli xroniki pəhriz manipulyasiyası, striatal DA azadının insulinə həssaslığını əks etdirir, FR-də inkişaf etmiş cavabdehlik, lakin OB-də məsuliyyətin itirilməsi. Davranış tədqiqatları göstərir ki, NAc qabığında sağlam insulin səviyyələri cütləşdirilmiş qlükoza həllinin ləzzətinə üstünlük qazandırmaq üçün vacibdir. Birlikdə bu məlumatlar striatal insulinin siqnalizasiyasını ərzaq seçimlərinə təsir etmək üçün DA sərbəstliyini artırır.

Yemək zamanı və sonra plazma insulinində davamlı artımın hipotalamusa insulin reseptorlarını (InsRs) aktivləşdirdiyini, daha sonra yeməyin azalmasına səbəb olan iştahlı dövrələrə mənfi rəy verən müəyyənləşdirilmişdir^{1, 2, 3}. Brain insulin əsasən pankreatik β hüceyrələrindən, qan-beyin bariyerində plazmadan beynə aktiv nəqli ilə əldə edilir^{4, 5, 6, 7, 8}Nöronal insulin sintezi və sərbəst buraxılması üçün də sübutlar artmaqdadır^{1, 9}. Əlbətdə ki, InsRs ifadəsi hipotalamus ilə məhdudlaşmır, həddindən artıq hipotalamal InsRs funksiyası həll olunmur^{1, 2, 3}. Obezitenin və tip II diabetin yüksəlməsini nəzərə alaraq insulinin dolaşıq səviyyələri daim yüksəldilir və beyin insulinin nəqli və reseptor həssaslığı azalır^{3, 8, 10, 11}motivasiya və mükafat tənzimləyən beyin bölgələrində insulinin funksiyasını anlamaq vacibdir. Xüsusilə maraq dairəsi olan Brain bölgələrinə qida və narkotiklərin mükəmməl təsirlərinə vasitəçilik edən nüvəli akumbens (NAc) daxildir^{12, 13}, habelə vərdişli davranışlarda və istəkdə rol oynayan caudate-putamen (CPu)¹³. InsRs bu bölgələrdə, NAc-da baş verən ən yüksək sıxlıqla ifadə edilir^{3, 14}; InsR'ler, həmçinin ventral tegmental bölgədə (VTA) və əsasən nigra pars kompaktasında (SNc) olanlar da daxil olmaqla midbrenin dopamin (DA) nöronları tərəfindən ifadə edilir.¹⁵. Brain insulinin səviyyəsi plazma insulin konsentrasiyalarına və cisimə yağlılığına mütənasibdir^{6, 7, 8}insulinin bu beyin bölgələrindəki InsRs-də yemək mükafatına təsir göstərə biləcəyi hipotezinə gətirib çıxarır^{3, 16, 17}.

Striatal sinaptozom, heterolog hüceyrələr, beyin dilimləri və s vivo ilə InsRin insulinin aktivləşdirilməsi DA nəqliyyat vasitəsi (DAT) tərəfindən DA alınmasının artmasına gətirib çıxarır.^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. Bu proses PI3 kinaz siqnal yolunu əhatə edir^{19, 20}, plazma membranda DAT yerləşdirilməsinə gətirib çıxarır¹⁹. Sirkulyasiya insulinin səviyyələri diaqnozun heyvan modellərində və ərzaq məhdudiyyətindən sonra (FR) görülən azalma və DA səthinin ifadəsi ilə striatal DAT aktivliyini dinamik şəkildə modulyasiya edir.^{20, 21}. DAT aktivitesinde insülin-asılı artımların uyarılmış ekstrasellüler DA konsantrasyonunu azaltması gösterilmiştir ([DA]_o) VTA-da²³DA sərbəst buraxma və alınma arasında balansdakı bir dəyişməni əks etdirir. Doymuşluğun insulinin rolu ilə uyğun olaraq VTA-da insulinin kəskin mikroenjeksiyonu yemək mükafatını azalda bilər^{23, 24}, VTA və SNc DA neyronlarındakı InsR'si olmayan siçanlarda isə ərzaq alışı artır və şişman olur²⁵. Insulin VTA DA nöronlarına eksantrik girişin uzunmüddətli depressiyasını gətirə bilər²⁴, yenə doyma roluna uyğun olaraq, insulinə məruz qalma da DA sindromu və autoreseptor vasitəsi ilə maneə törətməklə DA neyron atəş nisbətini artıra bilər²⁵. Striatal DA sərbəst buraxılması üçün insulinin net təsiri buna görə də proqnozlaşdırmaq çətindir. Həqiqətən, insulinin striatal DA-ə təsiri üzərində edilən araşdırmalar nəticəsində ex vivo dilimlər¹⁹ və NAc-da insulinin yerli mikroinjectionunun yemək mükafatına təsiri²⁶ ziddiyyətli görünür. Bunu aradan qaldırmaq üçün, biz NAC və CPu-nun sağlam mikroiqtisadda aksonal DA azad və qəbulunu qiymətləndirdik. ex vivo tez-scan siklik voltammetriya (FCV) istifadə striatal dilim və mükafat davranış NAc ildə insulin sinyal təsiri müəyyən vivo ilə.

Bizim tədqiqatlar göstərir ki, NAc və CPu-da insulinin əsas təsiri DA-nın birbaşa artımına baxmayaraq DA sərbəstliyini artırmaqdır. DA azadının bu dinamik tənzimlənməsi striatal xolinergik internöronların (ChIs) həyəcanlanmasında insulinə bağlı bir artım meydana gətirir və bu, nikotinik asetilkolin (ACh) reseptorlarının (nAChRs) aktivləşdirilməsi vasitəsilə təkmilləşdirilmiş DA azadlığına gətirib çıxarır. İnsülinin CHI'lara və DA azadlığına təsiri InsRs vasitəsi ilə həyata keçirilir. Xüsusilə, insulinin DA sərbəstliyinə təsiri FR siçovulların dilimlərində güclənir, lakin sümüklərdə obesogenic (OB) pəhriz üzərində blunted olunur. Bu məlumatlar DA azadının gücləndirilməsini göstərir ex vivo insulin tərəfindən dilimlər insulin bir mükafat siqnalı kimi fəaliyyət göstərə biləcəyinə dair proqnozlara gətirib çıxarır vivo ilə. Həqiqətən, paralel davranış tədqiqatları ləzzət-üstünlük şəraitində NAc qabığında insulin üçün rol oynayır. Birlikdə bu nəticələr qida seçiminə təsir göstərə bilən bir mükafat siqnalı kimi insulinin yeni bir rolunu göstərir

InsRs-də fəaliyyət göstərən insulin uyğundur striatal DA azadını artırır

Yerli olaraq uyarılmış [DA]_o FCV ilə izlənildi ex vivo sıçanlardan striatal dilimlə ad libitum (AL) qida və suya çıxış imkanları gözlənilməz bir nəticəyə gətirib çıxardı ki, insulinin fizioloji cəhətdən müvafiq konsentrasiyalarda kəskin tətbiqi^{1, 4} tək zərbə ilə uyğundur [DA]_o (Şəkil 1a-c), insulin EC ilə birlikdə₅₀ 2-12 nM (təsirinin yarım maksimal olduğu konsentrasiyası)Şəkil 1b). Artıq uyarılmış [DA]_o Xüsusilə təəccüblü idi ki, bunun maksimum dərəcədə əhəmiyyətli bir artımla müşayiət edildiyiV_max) hər subregionda DAT vasitəsi ilə alınması üçünCədvəl 1), bu uyarılmış [DA]_oəvvəllər olduğu kimi bildirildi^{22, 23}. Bunun əvəzinə biz uyğundur [DA]_o 20-55% 30 nM insulin ilə maksimal şəkildə gücləndirilmişdir; ən böyük mütənasib təsiri olan bölgə, ən yüksək InsR ifadəsi olan striatal subregion olan NAc qabığı idi^{1, 14}. Eyni şəraitdə 30 nM insulinə məruz qalan dilimlər striatal DA məzmununda heç bir dəyişiklik göstərmədilər (Əlavə Şəkil 1a), insulinin dinamik sərbəst tənzimləməni dəyişdirməsini nəzərdə tutan, sadəcə DA sintezini upregulating deyil. Xüsusilə, insulinin evokedə təsiri [DA]_o suprafisiyoloji konsentrasiyalarında ≥ 100 nM (Şəkil 1b). Bu, insulinin təsirinə səbəb olaraq sərbəst buraxılmaqda olan DAT aktivliyinin artması nəticəsində deyil V_max həm də bu konsentrasiyalardaCədvəl 1). Ümumiyyətlə, bu məlumatlar göstərir ki, sağlam striatal mikroiqtisildə, insulinin başlanğıc təsiri evoked [DA]_o DA sızmasının bir anda artmasına baxmayaraq sərbəstliyi artırmaqdır.

  

  

(a) Orta tək təkli pulse-uyarılmış [DA]_o 30 nM üçün göstərilən insulindən (Ins) əvvəl və sonra, NAc qabığında, NAc nüvəsi və CPu; səhv barları atıldı, lakin baxın (b); oxlar stimul müddəti göstərir. İnsülin uyğundur [DA]_o (55 ± 10% ilə), əsas (37 ± 5% ilə) və CPu (20 ± 4% ilə) (***P<0.001). (b) İnsülinin təsiri konservasiyaya qəfildən bir fizioloji sıra (1-30 nM)n= 22-24, F_5,133= 14.471, P<0.001), əsas (n= 36-76, F_5,308= 16.318, P<0.001) və CPu (n= 30-62, F_5,253= 13.763, P<0.001), lakin ≥100 nM-də itirdi. (c) Pik uyğundur [DA]_o insulin (30 nM) tətbiqi zamanı və ya InsR inhibitoru HNMPA (5 μM) iştirakı ilə insulin tətbiq edildikdə, dərman preparatının tətbiqi (Con) olmadığı halda NAc nüvəsindəki bir sahədəki zamanla müqayisədə. (d) Orta zirvəyə uyğundur [DA]_o HNMPA, InsR antagonisti S30 (961 μM) və PI1K inhibitoru LY3 (294002 μM) ilə insulinin (1 nM) təsirinin qarşısının alınmasını göstərən məlumatlar, lakin IGF-1R inhibitoru PPP (1 μM) ilə deyil,n= 29-76; P> Yalnız insulinə qarşı 0.9). Üçün Şəkil 1a-d, nhər bir dərman və ya insulin konsentrasiyası üçün 3-6 siçovullarından subregion başına saytların sayı; birtərəfli ANOVA, Tukey dürüst əhəmiyyət testi (HSD). Görmək Əlavə Şəkil 1b, c NAc qabığı və CPu məlumatları üçün.

• Tam ölçülü şəkil (98 KB)

 

 

İnsülin insulin kimi böyümə faktor 1 reseptorları (IGF-1Rs) də olsa da, 100 nM-dən (yəni ref. 1), biz insulinin evokedə [DA] artırılması təsirini təsdiqləməyə çalışdıq._o InsR asılı idi. Bu, təsiri bir hüceyrə içi InsR inhibitoru, hidroksi-2-naftalenilmetilfosfonik turşusu (HNMPA) və bir InsR antagonisti S961 tərəfindən qarşısı alındığından, lakin IGF-1R'lerin selektiv inhibitoru tərəfindən deyil, pikropodofilin²⁴ (PPP; Şəkil 1c, d və Əlavə Şəkil 1b, c). Daha sonra DAT'in insulinə bağlı tənzimləməsindən məsul olan siqnal yolunu başlatan PI3 kinazın iştirakı müayinə etdik.¹⁹. 1 μM konsentrasiyasında, yalnız P13K inhibitoru LY249002 yalnız zirvəyə uyğundur [DA]_o or V_max (n= Dərman başına 29-76 saytlar (NAc nüvəsi) P> 0.05, varyansın birtərəfli təhlili (ANOVA); məlumatlar göstərilməyib), insulinin uyarılmış [DA] üzərində təsirinin qarşısını aldı_o bütün striatal subregions (Şəkil 1d və Əlavə Şəkil 1b, c).

DA axons və ChI'lar üzərində InsR'lerin lokalizasiyası

Gözlənilən artım V_max insulinin fizioloji səviyyələri ilə DA alınması üçün müxtəlif aksiyalarda əvvəlki nəticələr kimi, DA aksonlarda InsRs varlığı nəzərdə tutulur^{18, 19, 20, 21, 22}. İnsR'lerin midbrain DA nöronları üzərində funksional ifadəsi göstərilmiş olsa da^{15, 23, 24, 25}Striatal DA aksonlarda InsR ifadəsi bildirilməmişdir. İmmunohistokimyadan istifadə edildik. DA-aksonaktik hüceyrələr üzərində DA-lokalizasiya səviyyəsinin məhdud miqdarı olan striatumda DİN-in immunoreaktivliyi, DA-sentezləyən ferment üçün immunoreaktivlik, tirosin hidroksilaz (TH). Buna görə də əvvəlki hesabat protokolunu qəbul etdik²⁷, InsR puncta sayını ehtiva edən, normal görüntü görünüşündə TH + rejimləri ilə üst-üstə düşən və InsR görünüşündən sonra təkrar sayılan 90 ° tərəfindən döndürülmüşdür. InsR və TH + profillərinin bir-birinə bənzər örtüşməsi qeyri-müəyyəndirsə, bu proses normal və ya 90 ° fazadan istifadəyə aid istifadəyə aiddir. Lakin, bu analiz InsR punktanın örtüşməsində THN + 14 ± 9% (n= 42 sahələri, P<0.01, cüt quyruqlu t-test; məlumatlar göstərilmir), DA aksonlarda InsR varlığını təsdiqləyir. Bununla belə, striatumun InsR immunolabelling olması ACh sintezi üçün lazım olan birincil ferment olan kolin asetiltransferaz (ChAT) üçün birgə immunolabelling tərəfindən striatal CHI olaraq təyin edilmiş böyük hüceyrə orqanlarında fərqli InsR ifadəsini ortaya qoymuşdur. Elektrofizyoloji meyarlarından istifadə²⁸ əvvəlki bütün hüceyrə qeydiyyatı tədqiqatlarında İİ'leri təyin etmək üçün bir neçə neyron biokitinlə doldurulmuş və sonra immunohistokimya üçün işlənmişdir; bunların hamısı (4 / 4) həm InsR, həm də ChAT üçün immunopositive idiŞəkil 2a). NSR-də InsR və ChAT-ın birgə lokallaşmasının sonrakı qiymətləndirilməsi faktiki olaraq bütün ChAT + nöronları InsR (96%; n27 / 28 nöronları iki sıçandan dörd hissədə).

  

  

(a) Biotin ilə doldurulmuş CHI, sonra ChAT üçün immunolabelled və InsR (4 / 4 biocytin dolu ChI nümayəndəsi); Birləşdirilmiş təsvir ko-lokalizasiyanı göstərir; miqyaslı bar, 10 μm. (b-e) İnsülindən əvvəl və sonra (3 nM) striatal Çİ-lərin bir sıra depolarizasiya edən cərəyan impulslarına (200-s müddəti; 300, 400 və 120 pA; (b) Bir ChI (yuxarı) içərisində səpkili tezlik uyğunlaşma, cari inyeksiya zamanı hərəkət potensialının (AP) axıdılması zamanı görülür, buna baxmayaraq, spiking insulində (aşağı) mövcud pulse boyunca davam edir; tam məlumat dəsti göstərilmişdir d. (c) İnsülin ilə bağlı AP-in sayı artdıqda, Çİ-nin hər bir hazırkı mərhələsi ilə əlaqəli müddətdir b. (d) İnsulin məruz qalmasının əvvəlcədən və ən yüksək təsirində təslim edilən cərəyan dövrələri zamanı AP sayının xülasəsi (n= 21 cütləşdirilmiş stimullar, 7 nöronları, 5 sıçanları) (e) İnsulinin (+ Ins) nəzarət şəraitində təsirini göstərən orta reaksiyalar (Con; n= 21 qoşulan stimullar, 7 nöronları, ***P<0.001, cüt quyruqlu t-test), HNMPA (5 μM) iştirakı (n= 12 cütləşdirilmiş stimullar, 4 nöronları, 4 siçovulları, P>0.05, ikili quyruqlu cütləşdi t-test) və PPP (1 μM) iştirakı ilə (n= 18 ilə qoşulan stimullar, 6 nöronları, 6 sıçanları, **P<0.01, Wilcoxon uyğunluq cütü imzalanmış dərəcə testi). (f) Orta tək təkli pulse-uyarılmış [DA]_o 30% peak nəzarətinə normalləşdirilmiş olan mecamylamine (Mec; 5 Î M) və ya DHβE (1 ‰ Î M) insulindən əvvəl və sonra NAc əsasında (100 € ‰ n)n= 20 - 40-dan 3 siçovulların hər bir alt bölgəsinə görə 4 saytlar, P> Nəzarətə qarşı 0.05, cütlənməmiş t-test). (g) Orta tək təkli pulse-uyarılmış [DA]_o heterozigot nəzarətindən (Het) və forebrain dilimlərində ChAT 30% peak nəzarətinə normalləşdirilmiş insulindən əvvəl və sonra KO siçanları (100 ™). İnsülin uyğundur [DA]_o NAc kabuğunda 190 ± 23% ilə heteroziqoq siçanlarda, NAc əsasında 140 ± 8% və CPU-da 137 ± 12%n= 15 - 25-dan alt bölməyə görə 3 saytlar, genotipə görə 4 fareler, **P<0.01, ***P<0.001-ə qarşı idarəetmə cütlənməmişdir t-test), ancaq uyarılmış [DA]_o hər hansı bir striatal subregionunda ChAT KO faresi (P> 0.1).

• Tam ölçülü şəkil (167 KB)

 

 

İnsülin CHI həyəcanını artırır

Insrinin striatal CHI'ler üzerindeki funksionalliyini test etmək üçün, bütün hüceyrəli cərəyan klipsli qeydlərdən istifadə edərək, insulinin ChI həyəcanına təsirini araşdırdıq. ÇN həyəcan səmərəliliyi tezlikdə uyğunlaşma göstərən hərəkət potensialının qatarını açmaq üçün bir sıra 3-in depolarizing cərəyan darbesi ilə qiymətləndirilmişdir (Şəkil 2b), tez-tez cari nəbzin sonuna qədər açılma itkisinə səbəb olur. Çox təəssüf ki, insulin (30 ™ nM) zəiflədilmiş sıçrayış tezliyi uyğunlaşması, zamanla hərəkət potensialı sayı artımına səbəb olur (Şəkil 2c), maksimum artımlaŞəkil 2d, e) adətən 20 və 50 arasında insulin məruz qalma arasında görünür. Insulin olmadığı təqdirdə, KT-lər nəzarət edilən hərəkət potensialının sayında heç bir dəyişiklik göstərmədilər (P> 0.05, cüt quyruqlu t-test; məlumat göstərilmir); eyni vaxt aralığında nəzarət nöronları ilə müqayisədə, insulinə məruz qalan nöronlar uyarılmış hərəkət potensialının sayında (nəzarət nDörd neyron, insulindən 12 stimul cütləri n= Yeddi neyrondan 21 stimul cütləri, F_1,25= 5.63, P<0.05, qarışıq ölçülər iki tərəfli ANOVA; məlumat göstərilməyib). İnsülinin hərəkət potensialının artmasına təsirinin HNMPA tərəfindən qarşısı alındı, lakin IGF-1R seçici inhibitor PPP tərəfindən deyil (Şəkil 2einsulin tərəfindən artan ChI həyəcanının InsR vasitəçiliyi olduğunu göstərdi.

Uyanılmış insulin artımı [DA]_o nAChRs və ACh tələb edir

Əvvəlki tədqiqatlar göstərir ki, CHIs və ACh DA AKON'larda nAChRs vasitəsilə striatal DA azadlığını güclü tənzimləyir^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. Çİslərdə bol İnsR ifadəsi və kəskin insulin pozğunluğu ilə müşahidə edilən CHI həyəcanının artması bu neyronların inkişaf etmiş DA azadlığına səbəb ola biləcək insulin üçün yeni hədəflər ola biləcəyini göstərdi. Bu test üçün insulinin, selektiv olmayan bir nAChR antagonisti və ya ion2 alt birliyinin tərkibində (β2 *) nAChRs üçün zənginləşdirilmiş selektiv antaqonist olan dihidro-α-erythroidin (DHβE) DA aksonları³⁵. Uydurulmuş [DA]_o həm də bu antagonistlərin iştirakı ilə asanlıqla aşkar edilmişdir. Hər iki dərman tək pulse-uyarılmış [DA]_o (məsələn, 13 ilə "26% NAc əsasında), daha əvvəl bildirildiyi kimi^{29, 30, 31, 32}. ACh və nAChRs üçün bir rolun dəstəklənməsi üçün insulinin evokedə təsiri [DA]_o ya mecamylamine ya da DHβE tərəfindən qarşısı alındı (Şəkil 2f). İnsulin artırılmış DA azadında striatal ACh siqnallarının iştirakını təsdiqləmək üçün insulinin ex vivo ChAT ifadəsinin genetik olaraq forebrin strukturlarında (forebrain) yerləşdiyi siçanlardan striatal dilimlər ChAT KO fareleri), striatum daxildir³². Bu farelerde CHIs pozulmasına baxmayaraq, ACh sintezi ləğv edilir, bu da azalmağa gətirib çıxarır, lakin hələlik tək zərbə ilə uyğundur [DA]_oəvvəllər təsvir edildi³². Heterozigotlu littermates nəzarətində, insulin (30-nM) artmışdır [DA]_o NAc kabuğunda və əsasda və CPU-da 37 tərəfindən "90% (Şəkil 2g), sümük striatumunda görülən amplifikatı aşan (məsələn, Əncir 1). Ancaq insulinin evokedə təsiri [DA]_o forebrain içərisində striatal kompleksi boyunca yox idi ChAT DA sərbəst buraxılışının insulinin vasitəçiliyinin artması striatal ACh tələb edir, ancaq, glutamat kimi ChI-dən yayımlanan vericilərin deyil,³⁶.

İnsülinin evokedə təsiri [DA]_o Diyetə asılıdır

Plazma və beyin insulinin konsentrasiyaları vücut yağışına mütənasibdir^{6, 7, 8}, insulinə beyin həssaslığının kompensasiya edici dəyişmələrinə səbəb ola bilər. Buna görə, diet insulinin DA-nin yayılmasını təşviq etmək qabiliyyətinə təsir edən hipotezi sınaqdan keçirmişik, bu da striatal dilimləri ya rasional FR və ya OB pəhrizində və ya AL nəzarətində saxlanılan siçovullardan istifadə edir. Gözlənildiyi kimi, plazma insulin səviyyələri bədən çəkisi ilə korrelyasiya olunur, FR-da insulinin aşağı olması AL və ya OB sıçanlarına nisbətənŞəkil 3a və Cədvəl 2). İndulin dövranında bu fərqlərə baxmayaraq, pik-uyarılmış [DA]_o NAc kabuğunda və əsas hissəsində, CPU isə əhəmiyyətli dərəcədə aşağıdır ex vivo AL ilə müqayisədə hər iki pəhriz qrupundan striatal dilimlərŞəkil 3b və Əlavə Şəkil 2 a, b), mütləq uyğundur [DA]_o. Striatal DA məzmunu diet qrupları arasında fərqlənmədi, DA sintezindən çox azad tənzimləmə dəyişikliyinə (Əlavə Şəkil 2c). Dinamik tənzimləmə dəyişikliyinə uyğun olaraq, striatal DA-nun insulinə salıverilməsinin həssaslığı dietə nisbətən əhəmiyyətli idi. FR siçovullarında insulin konsentrasiyaları ≤ 1 nM, AL-ə təsir göstərməmiş (Şəkil 1b), artmışdır [DA]_o (Şəkil 3c), EC ilə artan insulin həssaslığını əks etdirir₅₀ AL qiymətinin təxminən bir sərəncamı olan FR striatum (0.4-0.6 nM) dəyərləri Figs 1b və 3c). Ziddiyyətli kontrastda insulinin təsiri OB striatumda itirildi; hətta AL striatumda maksimal təsiri olan 30 nM insuliniŞəkil 1b), OB-də heç bir təsiri olmadı (Şəkil 3c).

  

  

(a) Plazma insulin konsentrasiyası qidalanma qrupları üzrə bədən çəkisi ilə müsbət əlaqəlidir (R= 0.76). (b) Orta tək təkli pulse-uyarılmış [DA]_o NAc əsasında (bax Əlavə Şəkil 2a, b NAc qabığı və CPu üçün) FR (38 ± 4%) və OB (25 ± 4%n= 50-60 saytları 5-6-dən hər pəhriz qrupuna, F_2,156= 23.337, bir tərəfli ANOVA, Tukey HSD; ***P<0.001); OB ilə FR (P<0.08). (c) Uyarılmış [DA] həssaslığı_o insulin üçün FR-də artmışdır, lakin OB-də itirilmişdirn= 21-49 hər bir alt qrupda AL sıçanlarına qarşı həssaslıqla daha çox həssaslıqla, diet qrupuna xNUMX-2 sıçanlarında, bir tərəfli ANOVA, Tukey HSD)PHər bölgə üçün <0.001; ikitərəfli ANOVA; CPU: F_{(konsey xətti; 3,286)}= 10.253; əsas: F_{(konsey xətti; 3,353)}= 6.166; qabıq: F_{(konsey xətti; 3,195)}= 10.735).

• Tam ölçülü şəkil (124 KB)

 

 

Bu məlumatlar striatal InsR həssaslığı və cisim yağlılığı arasında ters əlaqə yaradır. Alternativ olaraq, bu dietə bağlı dəyişikliklər dəyişmiş nAChR həssaslığını əks etdirə bilər. Buna görə, hər bir pəhriz qrupundakı NAc nüvəsində nikotine olan konsentrasiya cavabını təyin etdik. Nikotin, [DA] nisbətini müqayisə etməklə ölçülebilen nAChR desensitizasyonuna səbəb olur._o 100 Hz-də beş impuls qısa bir qatarla uyğundur, tək pulse-uyarılmış [DA]_o (5 p: 1 p nisbəti) nAChR aktivləşdirmə / desensitizasyon göstəricisi kimi^{30, 31}. Bu yanaşmadan istifadə edərək, NAc nüvəsində nAChR həssaslığında pəhriz qrupları arasında heç bir fərq tapılmadı (Əlavə Şəkil 3a-c). Bundan başqa, nəzarət xnumx p: 5 p nisbəti NAc əsasında diet qrupları arasında fərqlənmədi (Əlavə Şəkil 3d) və ya CPU (təsvir olunmayıb), pəhriz nAChR-bağımlı DA azad tənzimləməsini dəyişdirməyəcəyini nəzərdə tutur. Beləliklə, striatal InsR həssaslığı FR, AL sıçanlarına qarşı artmışdır, lakin OB sıçanlarında olmaması, insulinin fiziologiyalı konsentrasiyalarında striatal DA azadının tənzimlənməsinin itirilməsi ilə əlaqədardır.

NAc qabığında insulin şərti ləzzət seçimini modullaşdırır

Qida üstünlükləri əvvəlcədən və sonrası əmələ gətirən faktorlardan yaranır; hər biri üçün mexanizmlər tamamilə həll olunmur, amma mövcud sübutlar həm də NAc DA sinyalizasiya edir^{37, 38}. Plazma və serebrospinal maye (CSF) insulin səviyyələri periferik qlükoza yüksəlişindən sonra sürətlə yüksəlir⁶, striatumda insulinin artması, 5 min səviyyəsində plazma insulinin yüksəlməsi⁷, bir yemək zamanı periferik insulin azad NAc DA azad artırmaq və post-ingestive mükafat mexanizmlərinə kömək edə bilər ki, fərziyyə mantiqidir. Daha əvvəl təsvir edilmiş ləzzət-üstünlük protokolunu uydurduq³⁷ sıçanlarda sakarin şəkərli qlükoza həlləri ilə NAc-da insulin antikorunun (InsAb) lokal tətbiqindən endojen insulinin təsirini maneə törətmiş hipotezi test etmək üçün cütlənmiş ətir seçimini azaldacaq. İnsülinin təsirini maneə törətməkdə InsAb-ın effektivliyi bir sınaqdan keçirildi vitro Striatal sinaptozomlara DA qəbulunun təhlili. İnsülin (30 nM) içərisində əhəmiyyətli bir artım meydana gətirdi V_max NAc və ya CPu-dan sinaptozomlardaƏlavə Şəkil 4), bizimlə tutarlıdır V_max striatal dilindən olan məlumatlar (Cədvəl 1) və əvvəlki tədqiqatlarla^{18, 19, 20, 21, 22, 23}. Insulinin yoxluğunda insAb nə də nəzarət antikoru immunoglobulin G (IgG) V_max İdarəetməyə qarşı DA alınması üçün. IgG iştirakı ilə insulin hələ də əhəmiyyətli bir artım meydana gətirdi V_max; Ancaq insulinin təsirini üzərinə qoydu V_max InsAbın iştirakı ilə itdiƏlavə Şəkil 4).

Doku zədələnməsini minimuma endirmək və toxuma hədəfinin həssaslığını qorumaq üçün, iki qrup subyekt test edilmiş, burada biz subyektlərin bir qrupunu istifadə etməməyi və InsAb ilə bir aromatik həllini və bir-birinə bənzər birləşdirmə üsulunu istifadə etməyimiz əvəzinə, bir microinjection proseduru ilə intra-NAc mikroenjeksiyonunu dəyişdirdik. nəqliyyat vasitəsi. Nəticə olaraq, bir şüşə-kondensasiya seansları zamanı eksperimental qrup iki ətirdən birinə qoşulan InsAb microinjections və alternativ seanslarda, digər ləzzə ilə əlaqəli səhv microinjections (Şəkil 4a, sol). Nəzarət qrupu ya fosfat tamponlu salin (PBS) və ya IgG'nin mikroinjectionları ilə ziddiyyətli mikroiqtisadlar aldı. Kondisionerdə qlükoza ehtiva edən ətirli həll variantları. Control-microinjected qrupunda lezzetlər arasında heç bir fərqlilik gözləməməsi gözlənilmir, buna baxmayaraq InsAb-microinjected qrupunda imtiyazlı microenjection-cütləşdirilmiş ləzzətə doğru dəyişməyəcəyi gözlənilirdi.

  

  

(a) Bir şüşə kondisionerini (solda) və iki şüşə testini (sağ) göstərən diaqram. (b) Bir şüşə kondisioner oturma zamanı həcm istehlak (ml). İnfüzyon-kondisiyalaşdırma sessiyası və mikroinjection müalicəsi arasında əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir göstərmişdir (nQrup başına 19-20 sıçanlar, F_(3,111)= 3.088, P<0.05, 2 × 4 qarışıq ANOVA, infuziya-kondisioner seansında təkrarlanan tədbirlərlə). InsAb mikroenjeksiyonu, üçüncü dövrdə nəzarətlə müqayisədə istehlakı əhəmiyyətli dərəcədə azaldıb (t(40) = 3.026, **P<0.01) və dördüncü (t(40) = 3.052, **P<0.01, qorunan bir quyruqlu t-təsələr) infuziyalar. Mock inyeksiya hər iki qrupda istehlaka təsir göstərməmişdir (F_3,111= 1.110, 2 × 4 qarışıq ANOVA, mock kondisioner seansında təkrarlanan tədbirlərlə). (c) İki şüşə ləzzət seçim imtahanı zamanı istehlak edilmiş həcmi. Kondisioner zamanı ləzzət və mikroenjeksiyon müalicəsi arasında əhəmiyyətli bir qarşılıqlı təsir göstərmişdir (F_1,37= 5.36, P<0.05, ləzzət üzərində təkrarlanan tədbirlər ilə iki tərəfli qarışıq ANOVA). InsAb qrupu, InsAb cütlü ləzzətini istehza cütlüyünə nisbətən xeyli az istehlak etdi (t(18) = 2.82, ** P<0.01, qorunan bir quyruqlu t-test); nəzarət qrupu heç bir ləzzət seçimini göstərməmişdir (t(19) = 0.803, P> 0.05, qorunur t-test). Müqayisəli qruplar, InsAb siçovulları infuziya-cütləşdirilmiş ləzzdən (t(40) = 1.96, *P<0.05) və istehza ilə əlaqələndirilmiş ləzzətin xeyli çoxu (t(40) = 1.77, *P<0.05, qorunan bir quyruqlu t-test) nəzarətdən çox.

• Tam ölçülü şəkil (161 KB)

 

 

Bir şüşə kondisioner oturma zamanı, InsAb mikroinjection üçüncü və dördüncü infüzyonlar zamanı vasitə ilə müqayisədə istehlakı əhəmiyyətli dərəcədə azaldı (Şəkil 4b). Əksinə, hər iki qrup həm də eyni dördüncü injection sessiyalarında eyni həcmdə istehlak etmişdir (F_3,111= 0.127, P>0.05, qarışıq iki yönlü ANOVA) (Şəkil 4b). Səkkiz kondisioner seansından sonra sümüklərin eyni zamanda ətirli həll yollarına çıxışı olan iki şüşə testində ləzzət üstünlüyü qiymətləndirilmişdir (Şəkil 4a). Statistik analizdə ətir və kondisioner zamanı alınan mikroenjeksiyon müalicəsi arasında əhəmiyyətli bir qarşılıqŞəkil 4c). InsAb qrupu, InsAb-cütləşdirilmiş ləzzətdən daha az istehlak etdi,Şəkil 4c), vasitə qrupu isə heç bir ləzzət seçimini göstərməmişdir (Şəkil 4cinsulin siqnalizasiyasının pozulması, şirin bir kaloriya həllinin seçilməsinə kömək etdi. Vasitə ilə müqayisədə, InsAb-microinjected siçovullar infusion-paired ləzzə və daha çox mock-injection-paired lezzet əhəmiyyətli dərəcədə daha az içdiŞəkil 4c). IgG'nin mikroinjectionu (t(9) = 0.792. P>0.05, qorunur t-testlər) və ya PBS (t(9) = 0.442. P>0.05, qorunur tInsaf mikro-enjeksiyonunun qeyri-spesifik təsiri tüketim və ya ləzzət seçimini azaldığına qarşı mübahisə edərək, ləzzət üstünlüyünə heç bir təsir göstərməmişdir (məlumatlar göstərilməyib). Qeyd edək ki, InsAb qrupunun testdə imtahanı daha az yeni ləzzətə üstünlük vermir, çünki InsAb qrupu üçün sessiya və sessiya növü (faktiki infüzyon və istehza infüzyonu) arasında heç bir qarşılıqlı əlaqə yoxdur (F_3,54= 1.584, P> 0.05, ikitərəfli ANOVA). Yəni, InsAb qrupu, InsAb infuziya ilə əlaqəli ləzzətə nisbətən istehza infuziyası ilə əlaqəli ləzzəti daha çox istehlak etməyib; əksinə müalicə qrupları arasındakı fərqlər yalnız infuziya-kondisioner seansları zamanı ortaya çıxdı. Ümumiyyətlə, bu məlumatlar NAc-dəki insulinin glisemik yükə işarə edən bir ləzzət üçün seçimin gücləndirilməsində rol oynadığını göstərir.

Burada Insulin insRin vasitəsilə CHI excitability modulyasiya edərək nAChR-bağımlı şəkildə striatal DA azad artırır bildiririk. Bizim nəticələrimiz insulinin siqnal toxumasının yaradılmasından əlavə, mükafat siqnalı kimi xidmət edə biləcəyini nəzərdə tutur. Xüsusilə, insulinin DA sərbəstliyinə təsiri diaqnozla modullaşdırılıb, FR sonrası insulinə həssaslıq artır, lakin OB pəhrizində insulinin gücləndirilmiş tənzimlənməsinin tam itkisi. Bu dəyişikliklər plazma insulinin səviyyəsinin pəhrizdən asılı olduğu, lakin nAChR həssaslığı olmadığı nəzərə alınmaqla insulin səviyyələri ilə əlaqəli olan insR həssaslığında dəyişiklikləri əks etdirir. Nəhayət, heyvanların davranışında ləzzət seçim seçimimiz, NAc qabığında insulin siqnalının yalnız ərzaqla bağlı öyrənmədə insulinə toxunmaqla yanaşı bir mükafat siqnalı kimi rolunu təsdiqləyən ərzaq seçimini təsir etdiyini bildirir.

Net [DA]_o DAT ilə DA sərbəstliyi və DA alınması arasında tarazlığı əks etdirir. İnsulinin DAT aktivliyini tənzimləyə biləcəyini göstərir^{18, 19, 20, 21, 22, 23} insulinin artması evoked [DA] 'da xalis azalmaya səbəb olması ilə bağlı proqnoza gətirib çıxardı._o DA artımının artırılması vasitəsilə. Lakin, striatumda insulinin təsiri bundan daha mürəkkəb olduğunu təsbit etdik. Insulin pozğunluğu artmışdır V_max DAT üçün, insulinin əsas təsiri evakuasiya edilmiş [DA] bir ardıcıl artımla,_o NAc kabuğunda və əsasən və CPu-da insulin konsentrasiyalarının fizioloji bir sıra daxilində. Uyğundakı artım [DA]_o 100 nM-in suprafisyoloji konsentrasiyasında nəzarət səviyyəsinə qayıtdı, V_max nəzarətdən də dəyişməmiş, DAT üzərində üstünlük verən bir təsiri aradan qaldırmışdı. Bunun əvəzində, alınma və sərbəstliyə təsirin itirilməsi InsR'lerin desensitizasyonuna və ya yüksək insulin konsentrasiyalarında aşağı siqnal yollarının aşağı tənzimlənməsinə səbəb olur. Əslində, periferik toxumalarda insulin bağlanmasından sonra InsRs sürətli endositoz və degradasiyaya məruz qalır¹yüksək səviyyədə insulin və ya yüksək kalorili dietə məruz qaldıqdan sonra neyronal InsR həssaslığının itməsi üçün ortaya çıxan dəlillərlə^{10, 11, 39}.

Burada striatal DA seriyasını artırmaq üçün insulinin dominant təsiri bildirmişdir ki, burada iki yeni nəticənin təzahürü var ex vivo dilim tədqiqatları. Birincisi, insulin elektriksel uyarılmış daşqınların azalmasına səbəb olmuşdur [³H] DA striatal dilimlərdən, baxmayaraq ki, artmışdır [³H] DA daşması DAT inhibe edildiyi zaman aşkar edilmişdir²². Sərbəst buraxılmışdır ki,³H] DA, Superfusing həllində tapılacaq doku boyunca DAT vasitəsi ilə alınması istəməlidir, bu protokol xüsusilə DAT tənzimləməsinə həssasdır. İnsülinin Dİİ-mediated alımının artırılmasına əlavə olaraq, CHI və nAChR aktivasiyası vasitəsilə DA sərbəstliyini artırdığını göstərən nəticələr insulinin inkişaf etmiş görünüşü ilə paradoksal artımı izah edəcək [³H] DA daşqın DAT üzərində rəqabət effektləri pozulduqda görüldü²². İkinci araşdırma, VTA-da somatodendritik DA sərbəst buraxılışının birbaşa aşkar edilməsi üçün FCV-ni də istifadə etdi, eyni zamanda insulinin DA-lərdə üstünlük təşkil etdiyini, azalmış uyanmış [DA]_o (ref. 23). Yerli mikroservisiyadan somatodendritik və aksonal DA azad mexanizmlərinə bir sıra faktorlarda fərqlər⁴⁰, bu bölgə fərqinə qatqı təmin edə bilər. Bununla belə, aşağıda müzakirə edildiyi kimi, insulinin regional cəhətdən asılı rolları ziddiyyətli deyil, tamamlayıcıdır.

Daha əvvəl DA sinyalizasyonunun insulinə bağlı tənzimlənməsinin hər hansı bir rolu insulin DA nöronları üzərində birbaşa aktivləşdirilməsi ilə vasitəçiliyinə düşmüşdür. Burada göstəririk ki InsRs də striatal Çİ-lərdə ifadə edilir və insulin insulinin dietə təsirində mühüm rol oynaya biləcək striatal DA azadını gücləndirmək üçün ChI həyəcanını modullaşdırır. Striatal ÇT'ler, talamusun intralaminar nüvələrinin nöronlarından proqnozlar alırlar ki, bu da həssas duyğu stimullarına cavab olaraq yanan partlayış nümayiş etdirir və Kİ-lərdə diqqəti cəlb etmək, möhkəmləndirmək və birləşməyə yönəldən öyrənmədə əhəmiyyətli olan sürüşməni dayandırmağa kömək edir⁴¹. Buna görə, striatal CHI'lerdeki Insulin insulinin hərəkəti, duysal qida istəklərinin striatal məsuliyyət üzərinə talamik atəşə təsirini artıra bilər və bir yeyinti yeminin mükafat dəyərinin algılanmasının artmasına kömək edə bilər. CHI aktivləşdirməsi ilə striatal DA azadının birbaşa yayılması təşəbbüskar stimullaşdırıcı faktorlar DA buraxılışının tetikleyicisi kimi imtiyazlı bir rola sahib olacağına gətirib çıxardı³³. Bizim məlumatlar insulin-gücləndirilmiş CHI excitability və DA azad azad dinamik artım siqnal ACh ilə, bunun üçün ilk dəstək sübut təmin edir.

İnsulinin iştirakı ilə yüksəlmiş DA sərbəst buraxılması ACh-də bir nəfəsə uyğundur [DA] yüngülləşdirə bilən nAChR desensitizasiyasına və ya muskarinik ACh reseptoruna (mAChR) aktivasiyaya səbəb olur ki,_o (refs 29, 30, 31, 42). Beləliklə, burada bildirilən mexanizmlər ACH-nin məcburi köçkünlərin aktivləşməsindən fərqlənir və bu, nifrət və toxluq ilə əlaqələndirilir⁴³.

Tək zərbə ilə uyğundur [DA]_o AL sıçanlarına nisbətən FR və OB sıçanlarında həm də aşağı idi; baxmayaraq ki, bu nəticələr əvvəlki hesabatlarla bərabərdir^{44, 45, 46}, bizim tədqiqatlar sabit bir müddət ərzində iki pəhriz qrupundakı üç striatal subregionun sistematik müqayisəsini təmin edir. DA sərbəst buraxılışında dietə bağlı dəyişikliklərin baş verdiyi mexanizmlər açıqlanmır və mövcud tədqiqatlar çərçivəsində deyildir. Buna baxmayaraq, plazma insulin səviyyələri FR və OB dietləri ilə ziddiyyət təşkil edildikdə, [DA]_o hər iki qrupda dietə bağlı insulin səviyyəsinin bir nəticəsidir.

Digər tərəfdən, pəhriz və nəticədə diyetə bağlı plazma insulin səviyyələrində InsR həssaslığında dəyişikliklər FR-də insulinə artan həssaslıq və OB-də insulinə qarşı həssaslığın itirilməsi üçün ən çox ehtimal olunan izahı təmin edir. FR və ya OB siçovullarında AL-ə qarşı dəyişmiş nAChR həssaslığının alternativ izahı üçün heç bir sübut yoxdur. Bulgular FR ilə artan striatal insR həssaslığını göstərən ilklər arasında olsa da¹⁸, çəki itkisi CSF-də azalmış insulin səviyyələri ilə müşayiət edilə bilər⁷, FR-də insulinə DA-nın həssaslığının artmasına kömək edəcəkdir. Əksinə, OB sıçanlarında insulin reaksiyasının itirilməsi azalmış beyin üçün daha əvvəlki sübutlarla uyğun gəlir.^{3, 10, 11}.

Bizim ex vivo dilim məlumatları, insulinin mükafatı və doyumluğu siqnal verə biləcəyi hipotezini dəstəkləyir. Bu hipotezi endogen insulinin ikincil InsAb mikroenjeksiyonu ilə NAc qabığında ləzzət-üstünlük kondisionerləri zamanı təsirini bloklaşdırdıq. İnsulin təsirini maneə törətməkdə mükafat roluna uyğun olaraq qatılaşdırılmış qlükoza tərkibli bir həlldəki ləzzətə bənzəməyən insulin sinyallığı ilə əlaqəli ləzzətin üstünlüyünü azaldır. NAc qabığında insulinin maneə olunması da bir şüşə kondisionerində qoşalaşmış bir həllin istehlakını azaltdı, istehlakçılara isə istehlaka təsir etmədi. Bu məlumatlar NAc kabuğunda insulinin ərzaq seçimində rol oynadığını göstərir. Əvvəlki tədqiqatlar göstərir ki, NAc-da sinxronizasiya edilməyən düstur ləzzətin alınması üçün vacibdir^{37, 38}, qida həllərinin gücləndirici təsirlərinə vasitəçilik etməkdə NAc DA üçün rolunu təsdiqlədi. Bu işıqda insulinin müdafiəsiz müalicəsi ilə qoşulan qlükoza həllinin üstünlükləri NAc qabığında DAT vasitəsi ilə DA-nın qəbuluna birincil təsirin qarşısını alır, çünki bunun [DA]_o və buna görə də nəzarət-cütləşdirilmiş ləzzətin istehlakını azaldır. Bizim nəticələrimiz NAc qabığında insulinin mikroinjectionunun heyvanların sukroz istifadəsində sərhəddə artımla, şifahi sukrozun özünü idarəetmə ilə məşğul olduğu vaxtın artdığına dair əvvəlki tədqiqatlara uyğun olub²⁶, bu, DA-nın artımının gözlənilən nəticələrinə zidd idi. Ümumiyyətlə, bu davranış məlumatları insulinin striatal CHI-lərdə və DA-nın genişləndirilməsində nəzərdə tutulan təsirinə uyğun gəlir. Lakin, bu nəticələr striatal mikroskopikanın digər elementlərini nəzarət olunan davranışlarda cəlb etmir, striatum boyunca geniş yayılmış InsR ifadəsi verilir^{1, 14}.

Buradakı işlər, insulinin kaloriya dəyərinin çatdırılmasında rol oynadığını və buna görə də insulinin hem ağır və ya obez subyektlərdəki təsirinə əhəmiyyətli təsiri olan bir yeməyin təsirli təsirini göstərən ilk sübutları təmin edir. Bir neçə tədqiqat göstərir ki, dadın transdüksiyaya yollarının sağlam olub-olmamasından asılı olmayaraq qidalanma sonrası təsirləri⁴⁷, NAc DA azadını artırmaq və davranışın müsbət gücləndirilməsi^{37, 47}. Beləliklə, post-absorbsiyalı insulin reaksiyası qidaçik bir yemək məhsulunu kodlaya bilər və istehlaka imkan verən qida seçimlərini və davranışlarını gücləndirməyə kömək edə bilər. Ancaq insulin səviyyələri və mərkəzi InsR həssaslığı ilə dolaşan ekstremal dəyişikliklər anormal və adaptiv davranışlarda da rol oynaya bilər. Məsələn, FR mübadiləsində inso həssaslığının hipoinsulinemiyası və kompensasiya edici upregulyasiyası onların bədxərcliyinə təsir göstərə bilər.⁴⁸. Əksinə, OB siçovullarında yansıtılmış tip II diabet və ya piylənmədə mərkəzi insulin duyarsızlığı, ingestiondan sonra mükafat hissinin azaldılmasına kömək edə bilər, kompensasiyanın yüksək glisemik indeksi ilə qidaların alınması^{49, 50}. Buna görə ya striatal insulin həssaslığında artım və ya azalma patoloji yeməyə kömək edə bilər, buna görə yemək və / və ya obeziteyə səbəb olur.

Ümumiyyətlə, tapıntılar insulin üçün mükafat siqnalı kimi yeni bir rol oynayır. Bu cür rol, bilinən funksiyasını bir doyma siqnəsi kimi əks etdirir, o cümlədən VTA-ya daxil olan insulin mikroorqanizminin insulinin mikroorqanizmini qidalandırmaq və yeməklə bağlı istəklərə üstünlük verə bilər^{23, 24}. Bu, bu DA-yə bağlı funksiyalarda insulin üçün zahirən qarşı-qarşıya qoyulan rolların necə razı olacağı ilə bağlı sual doğurur. Cavab, bu təsirlərin əksinə deyil, tamamlayıcıdır. İndiki nəticələr göstərir ki, striatumda insulin bir yemək yeminin mükafat dəyərini bildirir. Siqnal toxumasında ikili rolu insulinin yeməyin bitməsinin vacib məqsədə xidmət etməsinə icazə verə bilər, eyni zamanda onun qida və beləliklə mükəmməl keyfiyyətlərinin yaddaşını qurur, beləliklə də doyma davranışının təkrarlanmasını gücləndirir.

Heyvanların idarə edilməsi

Animal prosedurları NIH qaydalarına uyğun olub və NYU Tibb Təbiət Heyvanları Baxımı və İstifadə Komitəsi tərəfindən təsdiqləndi. Bütün heyvanlar 12 h işıqda idi: qaranlıq dövr, 06-dən işıqlar: 00 -dan 18-ə qədər: 00; ex vivo 08: 00 və 12: 00 arasında dilimlər hazırlanmışdır. AL siçovullarında və siçanlarda mexanik tədqiqatlar aparılmışdır ex vivo siçovulların bütün pəhriz qrupları müqayisələri və davranış tədqiqatları üçün ayrı-ayrılıqda yerləşdirildiyi halda, cütlükdə olan heyvanların dilimləri.

Rat pəhriz rejimləri

Yetkin kişi Sprague-Dawley siçovulları (Taconic) 8-10 gün davam edən pəhriz rejimin başlanğıcında 21-30 həftə idi. Siçovullar yarı təsadüfi olaraq pəhriz qruplarına ayrıldı: subyektlər ilk çəki ilə sıralanırdı, sonra siçovulların hər bir ardıcıl triosu diyet qrupları arasında təsadüfən yayıldı. AL siçovulların FR və ya OB dietlərində cütləşdiyi siçovullarla eyni dövrdə siçovul çayına pulsuz çıxışı olmuşdur. Bütün siçovulların suya sərbəst girişi var idi. Qida məhdudiyyəti əvvəllər olduğu kimi həyata keçirilmişdir⁵¹; Qısaca, sıçanlar 40-50% -dən standart siçovul çeynesinin AL qəbulunu gündəlik çəki 20% ilə azaldıqdan sonra qəbul etdilər. OB sıçanlarına siçovul və şokoladdan sərbəst giriş imkanı verildi. Orta səviyyə yüksək yağlı və şəkərli yüksək səviyyəli bir maye təmin edin.⁵².

Forebrain ChAT knockout siçan

Şərtli floxed allele olan siçanlar ChAT (ChAT^flox) ilə birləşdi Nkx2.1^Cre ACh sintezinin ablasyonunun forebrain ilə məhdudlaşdığı siçan istehsalı üçün transgenik xətt³². Qeyri-mutant transgenik littermates nəzarət idi; onların genotipləri Cre⁺;ChAT^{flox / +} və Cre^-;ChAT^{flox / flox} "heterozigot" adlanır. Dilim çalışması üçün istifadə edilən yetkin kişi siçanları vardı ad libitum çay və suya giriş.

Ex vivo dilim hazırlığı və fizioloji həllər

Siçovulların və ya siçanların 50 mg kq ilə dərindən anesteziyası aparıldı^-1 pentobarbital (intraperitoneal (ip)) və dekapitasiya olunur. Voltametri üçün, (mM) olan buzlu soyuq HEPES-tamponlanmış süni CSF (aCSF) bir Leica VT300S titrəmə bıçaq mikrotomu (Leica Microsystems, Bannockburn, IL) üzərində koronal önbaxaq dilimləri (400-1200-μm qalınlığı): NaCl (120); NaHCO₃ (20); qlükoza (10); HEPES kisəsi (6.7); KCl (5); HEPES sodyum tuzu (3.3); CaCl₂ (2); və MgSO₄ (2), 95% O ilə balanslaşdırılmışdır₂/ 5% CO₂. Sonra bu həlldə dilimlər sınaqdan əvvəl 1 h üçün otaq temperaturunda saxlanılıb^{30, 32, 53}. Elektrofizyoloji üçün, anesteziyadan sonra siçovulların transkardial olaraq buz ilə qarışdırıldığı (mM) olan sukroz (225); KCl (2.5); CaCl₂ (0.5); MgCl₂ (7); NaHCO₃ (28); NaH₂PO₄ (1.25); qlükoza (7); askorbat (1); və pyruvat (3) və 95% O ilə balanslaşdırılmışdır₂/ 5% CO₂. Bu həlldə dilimlər kəsilmiş, sonra modifikasiya edilmiş aCSF (mM) içində bərpa kamerasına köçürülmüşdür: NaCl (125); KCl (2.5); NaH₂PO₄ (1.25); NaHCO₃ (25); MgCl₂(1); CaCl₂ (2); qlükoza (25); askorbat (1); piruvat (3); və myo-inositol (4), 95% O ilə balanslaşdırılmışdır₂/ 5% CO₂; bu həllin əvvəlcə 34 ° C səviyyəsində idi, sonra tədricən otaq temperaturu ilə soyumağa icazə verildi⁵⁴. Bütün voltametri və fizioloji təcrübələr 32 ° C-də submersion qeydiyyat kamerasında aparıldı,^-1 aCSF ilə (mM): NaCl (124); KCl (3.7); NaHCO₃ (26); CaCl₂ (2.4); MgSO₄ (1.3); KH₂PO₄ (1.3); və qlükoza (10) və sığır serum albumin (BSA, 0.05-0.1 mg ml^-1) 95% O ilə balanslaşdırılmışdır₂/ 5% CO₂; dilimlər bu mühitdə sınaqdan əvvəl 30 dəqiqə üçün bərabərləşməyə icazə verildi.

Hızlı tarama tsikli voltametri

Boşalmış DA sərbəst buraxılış işləri beyin dilimlərində FCV istifadə edərək aparılmışdır^{32, 53} kişi sıçanlarından hazırlanmış və ya ChAT forebrain knockout siçanları və heterozigot nəzarətləri (5-8 həftə). Tədqiqatlar ChAT knockout siçanlar kor idi, lakin siçovul qidalanma qrupları blinding qarşısını aşkar açıq fenotip idi. Voltametri ölçümü Millar Voltammeter (St Bartholomew'ün Dr Julian Miller və London Universiteti Tibb və Stomatoloji London Royal Universiteti xüsusi tələbi ilə verilmişdir) ilə hazırlanmışdır. 0.7-dan + 1.3 V (Ag / AgCl-ə qarşı), 800 V sxeminin tarama dərəcəsi ilə FCV üçün şərti bir üçbucaq dalğa forması istifadə olunmuşdur^-1, və 100 ms nümunə aralığı^{30, 32, 53}. Data Clampex 1200 proqramı (Molecular Devices) tərəfindən nəzarət edilən DigiData 7.0B A / D kartı ilə əldə edilmişdir. DA buraxılması konsentrik stimullaşdırıcı elektrod istifadə edərək uyarılmışdır; stimul pulse genliği 0.4-0.6 mA idi və müddəti 100 μs idi^{30, 32, 53}. NAc nüvəsində və CPu-da yerli tək impuls stimullaşdırılması istifadə edilmişdir; Ancaq uyarılmış [DA] gücləndirmək üçün qısa bir yüksək tezlikli pulse qatarını (100 Hz'de beş impuls)_o NAc qabığında. Həm stimul paradiqmalar DA salınması, həm də hərəkət potensialı və Ca olduğunu ortaya qoyur²⁺ eyni vaxtda azad glutamat və GABA tərəfindən təsirlənməmişdir^{42, 55}eyni vaxtda azad ACh tərəfindən asanlaşdırılır^{29, 30, 31, 32, 33, 34}. Uyarılmış [DA]_o, elektrodu hər bir sınaqdan sonra bir CSF-də və müəyyən bir sınaq zamanı istifadə edilən hər bir dərmanın iştirakı ilə 32 ° C-də bilinən konsentrasiyalarla DA ilə kalibrlənmişdir⁵³.

İnsülinin evokedə təsirini qiymətləndirmək üçün Voltmetriya təcrübəsi [DA]_o iki protokoldan biri ilə əldə edilmişdir. İnsülin (Sigma, I5523) təsiri üçün vaxt kursunu təyin etmək üçün başlanğıc təcrübələr evoked [DA]_o tək bir saytda hər 5 min. Ardıcıl uyğundur [DA] sonra insulin tətbiq olundu_o əldə edildi (adətən 4-5 ölçmə); insulinin təsiri 50-60 min sonra maksimal idi və sonra [DA]_o eksperimentin müddəti üçün bu səviyyədə qaldı (adətən 90 min insulin pozuntusu; Şəkil 1c). Sonradan, insulinin təsiri evakuasiya edilmiş [DA]_o (4-5 dəqiqə üzrə nümunə), nəzarət şərtlərində (aCSF və ya ASCF artı dərman) və yenə maksimal insulin təsiri zamanı 1.5-60 diskont yerlərdə (bregma'dan + 80 mm) hər üç striatal subregionda bu nümunələr hər bir subregiona orta hesablanmışdır. İnsulinin təsiri dilim hazırlığından sonra azaldılıb; vaxtını azaltmaq üçün ex vivo heyvanların istifadəsini optimallaşdırmaq üçün, adətən bir heyvandan iki dilim eyni zamanda qeydiyyat kamerasında test edilmişdir. İnsülinin təsirinə qarşı mübarizə aparmaq üçün istifadə edilən dərmanlar, HNMPA trisasetoksimetil ester (HNMPA-AM_3; Enzo Life Sciences, S961 (Novo Nordisk), LY294002 (Sigma), pikropodofillotoksin (PPP; Tocris), mecamylamine (Tocris) və DHβE (Tocris). Nəticələrdə təsvir edildiyi kimi, nikotinik ACh reseptorlarının diet qrupları arasında dəyişən həssaslığı pik [DA] nisbətini müqayisə etməklə test edilmişdir._o 5 p (100 Hz) ilə uyğundur, 1 p ilə uyğundur (5 p: 1 p nisbəti)^{30, 31} 0-500 nM nikotinin (Sigma) iştirakı ilə NAc nüvəsində.

Təyinatı V _max evokedən [DA]_o striatal dilimlərdə keçidlər

DAT vasitəsi ilə qəbul edilən insulinin səbəb olduğu dəyişiklikləri qiymətləndirmək üçün, uyğundur [DA]_o əyriləri Michaelis-Menten tənlikinə çıxarmaq üçün uyğunlaşdırılmışdır V_max (maksimal uptake dərəcəsi sabit)⁵⁶. K_m (DA üçün DA-nın yaxınlığı ilə əlaqəli olan) 0.2 μM-də sabitləşmişdir və striatal subregions⁵⁷ və insulindən təsirlənməmiş (bax Əlavə Şəkil 4 başlıq).

Bütün kamerada qeyd

Brain dilimləri 29-dan 35-gündüz kişi siçovullarına hazırlanmışdır; qeyd şərtləri DA azad tədqiqatlarında istifadə olunanlarla eyni idi. Bütün hüceyrəli cari bantların qeydləri şərti üsullardan istifadə edilmişdir⁵⁴. Striatal Çİ-lər Olympus BX51WI mikroskop (Olympus America, Center Valley, PA) istifadə edərək infraqırmızı diferensial-müdaxilə kontrastlı optik və × 40 suya batırma məqsədi ilə görüntülendi. Pipet həllində (mM): K-glükonat (129); KCl (11); HEPES (10); MgCl₂ (2); EGTA (1); Na₂-ATP (2); Na₃-GTP (0.3); və pH 7.2-7.3-ə KOH ilə düzəldilmişdir. ChAT immunoreaktivliyi üçün qiymətləndirilən neyronlar üçün, 0.3% biositin, pipet həllində və neyronların intrasellul tərkibinin seyrini minimuma endirmək üçün qısa müddətdə (~ 5 min) qeydə alındı. Boru müqaviməti ~ 3-5 MΩ idi. Qeydlər Axopatch 200B gücləndiricisi (Molekulyar Cihazlar, Sunnyvale CA) və aşağı keçidlə 2 kHz-də filtrelənmişdir. Kİ-lər müəyyən olunmuş elektrofizioloji meyarlar ilə müəyyən edilmişdir²⁸; ən başlanğıcda tonik aktiv idi, lakin yamaqdan sonra aktivlik dəyişdi. Ancaq müasir inyeksiyaya cavab verən zaman ümumiyyətlə möhkəm və ardıcıl idi və bu səbəbdən insulinin CHI həyəcanına təsirini araşdırmaq üçün istifadə edilmişdir (Nəticələrə baxın). Bu cavabda InsRs və IGF-1Rs rolunu araşdırma təcrübələrində, HNMPA və ya PPP, bir ChI yamulmadan əvvəl ən azı 20 dəqiqə müddətində tətbiq edilmişdir. Yalnızca insulinin maksimal təsiri ~ 16 min-dən az sonra pozğunluqdan sonra müşahidə olundu, baxmayaraq ki, bəzi hüceyrələrdə artım 50 dəqiqə və ya daha uzun müddətə qədər maksimal idi. Bundan əlavə, PPP-də qeyd olunan altı neyrondan dördüncəsində insulin başlanğıc səpin sayını bərpa etmədən və keçmədən əvvəl baş nöqtəsində başlanğıc azalmasına səbəb olmuşdur. Nəticədə bütün tədqiqatlarda insulinin təsiri insulin tətbiqindən dərhal sonra uyğundur sancaqlar sayına nisbətən maksimum təsiri müqayisə etməklə ölçülmüşdür. Pik effektinə çatmaq üçün vaxtdakı aydınlıq fərqi bir neçə amilləri əks etdirə bilər, o cümlədən dilimdəki qeyd olunan hüceyrənin dərinliyi. Eşzamanlı hərəkət potensialı, müqayisə olunan zaman nöqtələrində insulinin yoxluğunda İİİ-də qeydə alınmışdır.

Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyası

Sıçan striatal dilimlərin DA tərkibi (400-μm qalınlığı) elektrokimyəvi aşkarlama ilə yüksək performanslı maye kromatoqrafiya istifadə edərək müəyyən edilmişdir⁵⁸. Dilim cütləri 30-dək 32-də bir CSF-də 60 ° C səviyyəsində balanslaşdırılmışdılar və hər bir cüt üçün bir dilim 32 ° C'de bir XSUMX-da əlavə 10-dək inkubasiya olundu, ikincisi 30 və ya 30 nM insulinlə bir CSF-də inkubasiya edildi. Diyet qrupu müqayisələri üçün striatal toxuma 60-7 min sonrası bərpa edilərək toplandı. İnkübasyondan sonra aşırı aCSF dilimlərdən diqqətlə çıxarıldı, striatal toxuma nümunəsi (10-80 mq) çəkilmiş, quru buzda dondurulmuş və sonra -XNUMX ° C-də saxlanılır. Təhlil günündə nümunələr buzlu soyuducuda sonikləşdirilib, arqonla deoksinlənmişdir⁵⁸, 2 min üçün bir mikrosantrifüjdə bükülmüş və HPLC kolonuna (BAS, West Lafayette, IN) birbaşa vurulmuş supernatant; detector AG / AgCl ilə müqayisədə 0.7 V-də quraşdırılmış camsı bir karbon elektrodu idi.

İmmünohistokimya

İmmunohistokimyasal etiketləmə üçün siçovulların sodyum pentobarbital (50 mg kq^-1, ip), daha sonra bu PBS-də PBS (154 mM fosfat tamponunda xNUMX mM NaCl, pH 10) və 7.2% paraformaldehid ilə transcardial olaraq perfüze edilmişdir; beyinlər çıxarıldı və koronal bölmələr (4 μm) konvensial olaraq kəsildi və işlənildi^{27, 59}. İmmünofloresans şəkilləri Spot proqram təminatı (Diaqnostik Cihazlar A.Ş) tərəfindən nəzarət edilən və bir × 800 obyektinin (sayısal aperture = 100) və ya bir Zeiss LSM 1.4 konfokal mikroskopu ilə × 510 istifadə edərək, bir digital kamera ilə təchiz olunmuş Nikon PM 63 konfokal mikroskopla əldə edilmişdir obyektiv (ədədi diapazon = 1.2). Lazerlər Argon (488 nm), He / Ne (543 nm) və He / Ne (633 nm) idi. Hər bir lazer üçün müvafiq filtreler konfokal mikroskop proqramı tərəfindən seçilmişdir. Pinhole ölçüsü, istifadə edilən məqsəd və bölmə qalınlığı ilə fərqlənir z-Səskin nəsil; proqram tərəfindən göstərilən optimal pinhole dəyərini seçdik (adətən 30 μm). Digital fayllar deconvolution software (AutoQuant Imaging) ilə təhlil edilib, son şəkillər Adobe Photoshop 7.0 istifadə edərək işlənmişdir. Bütün şəkillər parlaqlıq və kontrast üçün düzəldilmişdir; belə düzəlişlər bütün hissələrə vahid şəkildə verilmişdir. Striatal DA axonları iki TH antikoru istifadə edərək təyin edildi: poliklonal AB152 dovşan anti-TH (1: 800) və monoklonal MAB318 siçan əleyhinə TH (1: 500) (hər ikisi Chemicon). Üç InsR antikoru istifadə edildi: sc-57342 və sc-09 (1: 100; Santa Cruz) və PP5 (Pfizer-dən bir hədiyyə). Hər birinin spesifikliyi əvvəlcədən göstərilmişdir^{60, 61}, və müvafiq tədqiqatlarda müvafiq bloker peptidin iştirakı ilə sc-57342 ya da PP5 antikorları ilə immunolabelling olmaması ilə təsdiq edilmişdir. ChAT antikoru AB144 (1: 200; Millipore) idi və biotin Vector (1: 200) idi. Istifadə olunan ikincil antikorlar, eşşək anti-tavşanı Alexa 488 (Invitrogen) və ya eşşək anti-tavşan Cy2 (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME), eşşək keçi Cy3 (Jackson) və eşşəkar anti-mouse Cy5 (Jackson) idi.

TH + aksonlarında InsRs-lokalizasiyasını qiymətləndirmək üçün əvvəlcədən təsvir edilmiş üsullardan istifadə etdik, bu da ATX-həssas K-nın gözenekli bir alt bölməsi olan Kir6.2⁺ DA axonlardakı kanallar²⁷. InsR'yi təmsil edən Puncta, düzəldilmiş şəkillər boyunca paylandı, bu da TH immunoreaktivliyi ilə superimposition təsadüfən baş verə bilər. Bu fərziyyəni test etmək üçün biz 42 müstəqil sahələrdə InsR / TH superimpoziyalarını iki sıçandan üç NAc immunolabelled bölmədə sayırdıq. InsR digital faylları daha sonra 90 ° saat yönünde döndürülmüş ve sayı tekrar edilmişdir; rotasiya çox sahələrdə TH ilə birlikdə lokalize olan InsR puncta sayını azaldır (Nəticələrə bax). Fırlanma ilə superimpoziyaların sayının azalması²⁷ DA axonları ilə əlaqəli hər bir striatal sahədə InsR punktanın nisbətini göstərmişdir.

Qanda qlükoza və insulin ELISA

Trunk qanı, dilim tədqiqatları üçün kəskinləşmə zamanı toplandı. Qan qlükozası standart qan qlükoza monitoru ilə dərhal müəyyən edilmişdir. Insulin üçün EDTA tərkibli borularda əlavə qan toplanmış və 1,500-də santrifüj edilmişdirg 15 dəqiqə; Süpernatant (plazma) toplanmış və ALPCO Rat Insulin ELISA dəsti ilə işlənməməyə qədər -80 ° C-də saxlanılmışdır.

Cannula yerləşdirmə və histoloji yoxlama

350-425 g əvvəlcə ağırlığında qırx bir yetkin kişi Sprague-Dawley sıçanları (Taconic və Charles River) ketamine (100 mg kq^-1, ip) və xylazine (10 mg kg^-1, ip) və NAc medial qabığında infuziya sahələrinə ikitərəfli 26 mm dorsal yerləşdirilən iki xroniki dayanıqlı qaynaq kanülü (2.0 gauge) ilə stereotaksik implantasiya olunmuşdur⁶² (1.6 mm anterior to bregma; 2.1 mm lateral sagittal sütur, kökləri orta xətt istiqamətində açılmış 8 °, xNUMX mm ventral kəllə səthinə). Sıçanlara manamin verildi (5.8 mg kq^-1, subkutan) anesteziya və səhərdən sonra bərpa etdikdən sonra cərrahiyyə sonrası analjezik olaraq. Əməliyyatdan bir həftə sonra sıçanlar FR (yuxarıda təsvir edilmişdir) üzərində yerləşdirilib, qalanlarının 80% -də bərpa olunduqdan sonra bərpa olundu. Cannula yerleşimi, davranış testinin tamamlanmasından sonra histoloji olaraq təyin olundu. Hər siçan CO ilə öldürüldü₂, başı kəsilmiş və beyin çıxarılaraq% 10 tamponlanmış formalində> 48 saat sabitlənmişdir. Dondurulmuş tac bölmələri (40 μm qalınlığı) Reichert-Jung Cryostat-da kəsilmiş, jelatinlə örtülmüş şüşə slaydlara quraşdırılmış və kresil bənövşəyi ilə rənglənmişdir. Verilən bir siçovuldan alınan məlumatlar yalnız hər iki kanülün medial NAc qabığı içərisində olduqda istifadə edilmişdir⁶² (kabuk / çekirdek / kabuk / olfaktaki tüberk sınırı daxil olmaqla) (Əlavə Şəkil 5); Bu meyarlara əsasən, iki siçovul son analizdən kənarlaşdırıldı.

Ləzzətə üstünlük vermə qabiliyyəti əvvəlcədən pozulma

Siçanlar bir gecədə (ev kafesində) və əvvəlcədən məruz qalma (test otaqlarında) içərisində 30% natrium sakarin (Sigma) üçün seanslar arasında bir 0.2-h aralığına malik olan altı 48-min gündəlik seans aldı. Sıçanlar 5% xəmirsiz üzüm və ya albalı Kool-Aid (Kraft Foods) içərisində 0.2% natrium sakarinə məruz qalan iki 0.05-min-günlük gündəlik seans aldılar. İlk Kool-Aid məruz qalma sessiyasında, sıçanların yarısı albalı ətirli həllini aldı, digər yarısı üzümlü ətirli bir həll aldı. Bütün siçovulların hər bir ləzzətə nümunə götürməsini təmin etmək üçün ikinci Kool-Aid məruzlama sessiyasında ləzzətlər ters çevrildi. Qəbul əvvəlcədən məruz qalma seansları üçün ölçüldü. Test kameraları təzə yataqlı aydın plastik qəfəslər idi. Bütün məruz qalma seansları üçün siçovulların kameranın hər iki tərəfində də eyni həll yoluna çıxışı vardı. Gecə əvvəlki məruz qalma sessiyasından başqa, bütün iclaslar təlim və sınaqdan əvvəl 30-min habituation dövrü ilə davranış proseduru otağında aparılmışdır.

Bir şüşə kondisioner

Əvvəlki tədqiqatlar göstərir ki, InsAb-ın ventromedial hipotalamusun mikroinjectionu qidalanma davranışına və qlükqon sekresiyasına insulinin təsirini maneə törədir^{63, 64}. Burada qida seçimini gücləndirməkdə insulinin mümkün bir rolunu qiymətləndirmək üçün bu yanaşmanı istifadə etdik. Siçovullar yarı-təsadüfi olaraq əvvəlcədən məruz qalma qabiliyyətinin orta həcminə əsasən iki qrup, nəzarət və ya eksperimental (InsAb) olaraq təyin edilmişdir. Nəzarət qrupunda siçovulların vasitəsi (microinjection PBS, 137 mM NaCl və 2.7 mM fosfat tamponda 10 mM KCl) və ya IgG (Abcam ab81032; 0.5 μg μl^-1 PBS-də, qəbul edilən kimi) iki ətirli həllərdən birini istehlak etmədən əvvəl NAc qabığında microinjection və digər ətirli həllini istehlak etməzdən əvvəl istehza mikrogenjeksiyonu. Eksperimental qrupda sıçanlar InsAb (Abcam ab46707, 0.5 μl 1 μg μl^-1 PBS-də olduğu kimi) bir ətirli həllinə məruz qalmasından əvvəl və bir-birinə qarşı əvvəlcədən məruz mikroiqtisizliyə məruz qaldı. Mikroekroziya sahəsindəki mikroinjectionların total sayı 4-ə qədər məhdudlaşdı, beləliklə mümkün toxuma ziyanını və həssaslıq itkisini minimuma endirdi⁶⁵. Maye mikroenjeksiyonu üçün, nəzarət həlli və ya InsAb bir ucunda bağlanmış iki 30-sm uzunluqda olan PE-50 borularına yüklənmiş, 5 μl Hamilton şprisləri ilə distillə edilmiş su ilə doldurulmuşdur və digər tərəfdən 31-ölçülü enjektör kanüllərinə qədər genişlənmiş 2.0 mm implantasiya edilmiş təlimatlardan kənarda. 0.5 μl infüzyon həcmləri 90 s xNUMX μl s^-1; enjektör diffuziya üçün vaxt ayırmaq üçün ~ 60 s üçün yerə qoyuldu, sonra enjektör stillə əvəz edildi.

Siçanlar mikroinjection və ya mikrob mikroinjection tamamlanması 2 min ərzində birbaşa davranış otaqlarına köçürülüb. Kondisioner həlləri 0.2% natrium sakarin, 0.05% unsweetened üzüm və ya albalı Kool-Aid və 0.8% qlükoza ehtiva edir. Həll çıxışına sessiya başına 30 dəqiqə ilə məhdudlaşdırıldı. İçəriyə girmə imkanı olan kameranın tərəfli ləzzəti və tərəfi yarı təsadüfi təyin edilmiş və hər bir qrupda balanslaşdırılmışdır. Mikroenjeksiyonlar arası interval, ən azı 72 h, infuziya və səkkiz oturma seansı üçün istehzalı sessiyalar arasında dəyişən idi.

İki şüşə seçim imtahanı

Son kondisioner seansından qırx səkkiz saat sonra siçovullar hər iki kosmik tatlara eyni vaxtda giriş imkanı olan test kameralarına yerləşdirildi; 0.2% üzüm və ya glikoz olmadan albalı Kool-Aid ildə 0.05% natrium sakarin idi. Test 2 gün ərzində baş verib (gündə 60 min). Hər bir siçanın qəfənin hər iki tərəfində hər bir həllin istifadəsi üçün sınaqdan keçirilməsini təmin etmək üçün, eşitmiş və ya infüzyonla birləşdirilmiş həlli olan içmə borusunun mövqeyi dəyişdi. Hər aromatizasiya həllinin alınması imtiyazların təyin olunması üçün iki test günündə ortalama olmuşdur.

[³Insan Effektivliyini qiymətləndirmək üçün striatal sinaptozomlarda H] DA alınması

Striatal sinaptozomlar^{21, 66} AL siçovullarından (kişi, 350-400 g) NAc (qabıq və core) və CPu ayrılmış və ayrı hazırlanmış hazırlanmışdır. Hər bir bölgədən olan toxuma, motorlu idarə olunan Teflon pestle ilə bir homogenizatorda 15 həcmli bir buz xronometrinin 0.32 M sükroz həllini homogenləşdirilmişdir; durulama və santrifüqasiya edildikdən sonra yekun pellet buz xronologiyasında 0.32 M sükrozunda yenidən dayandırıldı^{21, 66}. Başlanğıcdan əvvəl [³H] DA alınma təhlili⁶⁶(180: 15: 30: 30: 1 nM insulinin mövcudluğunda və ya olmaması, 500: 1-də xNUMX min üçün bir çalkalayıcıda 500 μl alınma tamponunun ümumi həcmində sinaptosomal aliquots inkubasiya edilmişdir. , IgG (son dilüsyon 122: XNUMX) və ya vasitədə. Məbləğdə alınan tampon: NaCl (XNUMX); Na₂HPO₄ (3); NaH₂PO₄ (15); KCl (5); MgSO₄ (1.2); qlükoza (10), CaCl₂ (1); nialamid (0.01); tropolone (0.1); və askorbin turşusu (0.001), pH 7.4. Alınması [³H] DA, hər bir sinaptozom süspensiyonunun 20 μl'sini DA (96-0.003 μM) konsentrasiyaları ilə dəyişən 1.0-plitələrə sürətlə çıxararaq başlatdı və [³H] DA (5 nM); 5 ° C-də bir plitə-çiyləyici ilə 25 min sonra, alınması soyuq, sürətli vakuum filtrasiya⁶⁶. Hər kuyucuka hesablanmalar pmoles'e çevrilib, dəqiqə dəqiq protein mqinə düzəldildi. Bütün tədqiqatlar üçqat olaraq həyata keçirilmiş və ən azı dörd dəfə təkrar edilmişdir; V_max və K_m Biosoft Kell Radlig proqramı (Cambridge, Böyük Britaniya) istifadə edərək hesablanmışdır.

Statistik təhlil

Məlumatlar vasitələrlə verilir; Öyrənilən və ya ödənilməmiş Tələbə istifadə edərək əhəmiyyəti qiymətləndirilmişdir t- aksi göstərilmədiyi təqdirdə ANOVA və ya tövsiyələr. Voltametri məlumatları üçün, n bir striatal subregion daxilində site-to-site dəyişkənliyi inter-heyvan və ya dilim arası dəyişkənlik daha çox nəzərə alaraq, qeyd obyektlərin sayıdır^{30, 32, 55, 56}; hər bir məlumat dəsti üçün heyvan nömrəsi qeyd olunur. EC₅₀ insulin və nikotinin zirvəyə uyğundur [DA]_o Prizma 6.0 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA) istifadə edərək hesablanmışdır. Elektrofizioloji məlumatlar üçün, statistik əhəmiyyəti cütləşmə ilə qiymətləndirilmişdir tPrizma 6.0-də testlər və ya Wilcoxon testi və ya SAS 9.3-də (SAS İnstitutu, Cary, NC) qarışıq iki tərəfli ANOVA. Ləzzətə üstünlük şərtlərində insulin iştirakının qiymətləndirilməsi üçün istifadə olunan vasitə müalicəsi istisna olmaqla, eyni iki protokolu istifadə edərək tam iki iş tamamlandı. Birinci tədqiqatda 10 siçovulları PBS və 9 vasitələrinin infusionlarını InsAB-in infüzyonları aldı. İkinci araşdırmada, 10 siçovulları IgG və 10 vasitələrinin infusionlarını InsAb infüzyonları almışdı. İnfüzyon-kondisiyalaşdırma iclasları zamanı iki vasitə qrupu (PBS və ya IgG) arasında əhəmiyyətli fərq yox idi (F₁₉= 0.619, qarışıq ikitərəfli ANOVA) infuziya-kondensasiya seansında təkrarlanan tədbirlərlə) və ya testdəF₁₉= 0.012, iki tərəfli qarışıq ANOVA ləzzətə təkrarlanan tədbirlərlə). Nəticədə, iki təcrübə analiz üçün birləşdirildi. Bu analiz üçün kondisioner zamanı mikroinjection müalicəsinin təsirlərini müəyyən etmək üçün bir 2 × 4 qarışıq ANOVA (infusion-conditioning gündə təkrarlanan tədbirlər ilə) istifadə olundu t- tullantılar (kondisioner oturumlarının mikroinjection müalicəsi qəbulun həcmini azaldıb müəyyənləşdirmək üçün bir quyruq). Eyni analiz mock kondisioner oturumları üçün tamamlandı. İki şüşə ləzzət seçim imtahanı zamanı kondisionerlərin müalicəsinin təsirini müəyyənləşdirmək üçün məlumatlar qarışıq ikitərəfli ANOVA (ətirli təkrarlanan tədbirlərlə) və sonra qorunan t- Təcrübələr (InsAb'in seçimini azaldacaq hipotezi sınamaq üçün bir quyruğu).

Bu məqaləni necə istinad etmək olar? Stouffer, MA et al. İnsülin kolinergik internöronları aktivləşdirərək striatal dopamin sərbəstliyini artırır və bununla da mükafatlandırır. Nat. Kommunizm. 6: 8543 doi: 10.1038 / ncomms9543 (2015).

1. Schulingkamp, ​​RJ, Pagano, TC, Hung, D. & Raffa, RB İnsülin reseptorları və beyindəki insulin təsiri: nəzərdən keçirmə və klinik təsirlər. Neurosci. Biobehav. Rev. 24, 855-872 (2000).
   • CAS
   • ISI
   • PubMed
   • Məqalə
   • Kontekst göstər
2. Gerozissis, K. Brain insulin, enerji və qlükoz homeostazı; genlər, ətraf mühit və metabolik patologiyalar. Avro. J. Pharmacol. 585, 38-49 (2008).
3. CAS
4. PubMed
5. Məqalə
6. Kontekst göstər
7. CAS
8. PubMed
9. Məqalə
10. Kontekst göstər
11. CAS
12. PubMed
13. Məqalə
14. Kontekst göstər
15. CAS
16. PubMed
17. Məqalə
18. Kontekst göstər
19. CAS
20. ISI
21. PubMed
22. Məqalə
23. Kontekst göstər
24. ISI
25. PubMed
26. Məqalə
27. Kontekst göstər
28. CAS
29. PubMed
30. Məqalə
31. Kontekst göstər
32. Kontekst göstər
33. CAS
34. ISI
35. PubMed
36. Məqalə
37. Kontekst göstər
38. CAS
39. ISI
40. PubMed
41. Məqalə
42. Kontekst göstər
43. CAS
44. ISI
45. PubMed
46. Kontekst göstər
47. ISI
48. PubMed
49. Məqalə
50. Kontekst göstər
51. CAS
52. ISI
53. PubMed
54. Məqalə
55. Kontekst göstər
56. CAS
57. ISI
58. PubMed
59. Məqalə
60. Kontekst göstər
61. Kontekst göstər
62. CAS
63. ISI
64. PubMed
65. Məqalə
66. Kontekst göstər
67. CAS
68. ISI
69. PubMed
70. Məqalə
71. Kontekst göstər
72. CAS
73. ISI
74. PubMed
75. Məqalə
76. Kontekst göstər
77. PubMed
78. Məqalə
79. Kontekst göstər
80. Kontekst göstər
81. CAS
82. PubMed
83. Məqalə
84. Kontekst göstər
85. ISI
86. PubMed
87. Məqalə
88. Kontekst göstər
89. CAS
90. ISI
91. PubMed
92. Məqalə
93. Kontekst göstər
94. CAS
95. ISI
96. PubMed
97. Məqalə
98. Kontekst göstər
99. CAS
100. PubMed
101. Məqalə
102. Kontekst göstər
103. Kontekst göstər
104. CAS
105. ISI
106. PubMed
107. Məqalə
108. Kontekst göstər
109. CAS
110. ISI
111. PubMed
112. Məqalə
113. Kontekst göstər
114. CAS
115. ISI
116. PubMed
117. Məqalə
118. Kontekst göstər
119. CAS
120. ISI
121. PubMed
122. Məqalə
123. Kontekst göstər
124. PubMed
125. Məqalə
126. Kontekst göstər
127. CAS
128. ISI
129. PubMed
130. Məqalə
131. Kontekst göstər
132. CAS
133. PubMed
134. Məqalə
135. Kontekst göstər
136. CAS
137. ISI
138. PubMed
139. Məqalə
140. Kontekst göstər
141. CAS
142. PubMed
143. Məqalə
144. Kontekst göstər
145. ISI
146. PubMed
147. Məqalə
148. Kontekst göstər
149. Kontekst göstər
150. Kontekst göstər
151. CAS
152. ISI
153. PubMed
154. Məqalə
155. Kontekst göstər
156. CAS
157. ISI
158. PubMed
159. Məqalə
160. Kontekst göstər
161. CAS
162. ISI
163. PubMed
164. Məqalə
165. Kontekst göstər
166. CAS
167. ISI
168. PubMed
169. Məqalə
170. Kontekst göstər
171. CAS
172. ISI
173. PubMed
174. Kontekst göstər
175. CAS
176. ISI
177. PubMed
178. Məqalə
179. Kontekst göstər
180. PubMed
181. Məqalə
182. Kontekst göstər
183. CAS
184. ISI
185. PubMed
186. Məqalə
187. Kontekst göstər
188. CAS
189. ISI
190. PubMed
191. Məqalə
192. Kontekst göstər
193. CAS
194. ISI
195. PubMed
196. Məqalə
197. Kontekst göstər
198. CAS
199. ISI
200. PubMed
201. Məqalə
202. Kontekst göstər
203. Kontekst göstər
204. CAS
205. ISI
206. PubMed
207. Kontekst göstər
208. Kontekst göstər
209. Kontekst göstər
210. Kontekst göstər
211. CAS
212. ISI
213. PubMed
214. Məqalə
215. Kontekst göstər
216. CAS
217. PubMed
218. Məqalə
219. Kontekst göstər
220. CAS
221. ISI
222. PubMed
223. Kontekst göstər
224. Kontekst göstər
225. CAS
226. PubMed
227. Məqalə
228. Kontekst göstər
229. ISI
230. PubMed
231. Məqalə
232. Kontekst göstər
233. Kontekst göstər
234. ISI
235. PubMed
236. Məqalə
237. Kontekst göstər
238. Kontekst göstər
239. CAS
240. ISI
241. PubMed
242. Məqalə
243. Kontekst göstər
244. Kontekst göstər
245. Vogt, MC & Bruning, embriondan qocalığa qədər enerji homeostazının və qlükoza metabolizmasının nəzarətində JC CNS insulin siqnalı. Trendlər Endokrinol. Metab. 24, 76-84 (2013).
246. Havrankova, J., Schmechel, D., Roth, J. & Brownstein, M. Siçovul beynində insulinin təyin edilməsi. Proc. Natl Acad. Elm. ABŞ 75, 5737-5741 (1978).
247. King, GL & Johnson, S. İnsülinin endotel hüceyrələri arasında reseptor vasitəçiliyi ilə nəqli. Elm 227, 1583-1586 (1985).
248. Strubbe, JH, Porte, D. Jr & Woods, SC Siçovulda oruc tutma və yenidən qidalanma zamanı plazma və beyin onurğa mayesindəki insulin reaksiyaları və qlükoza səviyyəsi. Fiziol. Behav. 44, 205-208 (1988).
249. Banklar, WA & Kastin, AJ İki pankreas peptidinə qarşı qan-beyin baryerinin diferensial keçiriciliyi: insulin və amilin. Peptidlər 19, 883-889 (1998).
250. Banklar, WA Serebral insulinin qaynağı. Avro. J. Pharmacol. 490, 5-12 (2004).
251. Nemoto, T. et al. İnsülin sintezi və siçovul hipokampus və serebral korteksdə salınması ilə bağlı yeni anlayışlar: amiloid-β1-42-proksilin səviyyəsinin glikogen sintaz kinaz-3β vasitəsilə azalması. Cell Siqnal. 26, 253-259 (2014).
252. De Souza, CT et al. Yağlı zəngin bir bəslənmənin istehlakı bir proinflamatuar reaksiyanı aktivləşdirir və hipotalamusa insulin müqavimətini səbəb olur. Endokrinoloji 146, 4192-4199 (2005).
253. Anthony, K. et al. İnsülin müqavimətində iştahı və mükafatı idarə edən beyin şəbəkələrində insulinə uyğundur cavabların azaldılması: metabolik sindromda qida qəbulunun pozulmasına səbəb olan beyin əsasları? Diabet 55, 2986-2992 (2006).
254. Kelley, AE & Berridge, KC Təbii mükafatların sinir elmi: asılılıq yaradan dərmanlarla əlaqəsi. J. Neurosci. 22, 3306–3311 (2002).
255. Koob, GF & Volkow, ND Asılılıq. Nöropsikofarmakologiya 35, 217-238 (2010).
256. Werther, GA et al. Sıçan beyin və hipofiz bezində insulin reseptorlarının lokallaşdırılması və xarakterizə edilməsi vitro autoradioqrafiya və kompüterləşdirilmiş densitometriya. Endokrinoloji 121, 1562-1570 (1987).
257. Figlewicz, DP, Evans, SB, Murphy, J., Hoen, M. & Baskin, DG Siçovulun ventral tegmental bölgəsində / substantia nigra (VTA / SN) içərisində insulin və leptin reseptorlarının ifadəsi. Beyin Res. 964, 107–115 (2003).
258. Daws, LC et al. İnsülin siqnalizasiyası və asılılıq. Neuropharmacology 61, 1123-1128 (2011).
259. Figlewicz, DP & Sipols, AJ Enerji tənzimləyici siqnalları və qida mükafatı. Farmakol. Biokimya. Behav. 97, 15-24 (2010).
260. Patterson, TA et al. Qida məhrumluğu mRNA və sıçan dopamin taşıyıcı fəaliyyətini azaldır. Nöroendokrinologiya 68, 11-20 (1998).
261. Carvelli, L. et al. Dopamin alınmasının PI 3-kinaz tənzimlənməsi. J. Neurochem. 81, 859-869 (2002).
262. Williams, JM et al. Hipoinsulinemiya amfetaminlə bağlı dopaminin tərs nəqlini tənzimləyir. PLoS Biol. 5, e274 (2007).
263. Zhen, J., Reith, MEA & Carr, KD Siçovul striatumunda xroniki qida məhdudiyyəti və dopamin daşıyıcısı funksiyası. Beyin Res. 1082, 98-101 (2006).
264. Schoffelmeer, AN et al. İnsülin kokain həssas monoamin nəql funksiyasını və dürtüsel davranışı modullaşdırır. J. Neurosci. 31, 1284-1291 (2011).
265. Ventral tegmental bölgədəki Mebel, DM, Wong, JC, Dong, YJ & Borgland, SL İnsülin, hedonik qidalanmanı azaldır və artırılmış geri alma yolu ilə dopamin konsentrasiyasını boğur. Avro. J. Neurosci. 36, 2336–2346 (2012).
266. Labouebe, G. et al. İnsülin endokannabinoidlər vasitəsilə ventral tegmental sahənin dopamin nöronlarının uzun müddətli depressiyası yaradır. Nat. Neurosci. 16, 300-308 (2013).
267. Konner, AC et al. Enerji homeostazının nəzarətində katekolaminergik neyronlarda insulin siqnalının rolu. Cell Metab. 13, 720-728 (2011).
268. Figlewicz, DP, Bennett, JL, Aliakbari, S., Zavosh, A. & Sipols, AJ İnsulin siçovullarda kəskin saxaroza qəbulunu və sükrozun öz-özünə verilməsini azaltmaq üçün fərqli CNS sahələrində təsir göstərir. Am. J. Physiol. Regul. Bütöv. Komp. Fiziol. 295, R388-R394 (2008).
269. Patel, JC, Witkovsky, P., Coetzee, WA & Rice, ME Pre-sinaptik K tərəfindən striatal dopamin salınmasının ikinci tənzimlənməsi_ATP kanallar. J. Neurochem. 118, 721-736 (2011).
270. Tepper, JM & Bolam, JP Neostriatal interneuronların funksional müxtəlifliyi və spesifikliyi. Curr. Opin. Neurobiol. 14, 685-692 (2004).
271. Zhou, FM, Liang, Y. & Dani, JA Endogen nikotinik kolinerjik aktivlik striatumda dopamin salınmasını tənzimləyir. Nat. Neurosci. 4, 1224–1229 (2001).
272. Rice, ME & Cragg, SJ Nikotin, striatumdakı mükafatla əlaqəli dopamin siqnallarını gücləndirir. Nat. Neurosci. 7, 583-584 (2004).
273. Zhang, H. & Sulzer, D. Nikofin tərəfindən dopamin salınmasının frekansa bağlı modulyasiyası. Nat. Neurosci. 7, 581-582 (2004).
274. Patel, JC, Rossignol, E., Rice, ME & Machold, RP Ön beyin və beyin kökü xolinergik girişləri ilə striatal dopamin salınması və kəşfiyyat motor davranışının tənzimlənməsinə qarşı çıxır. Nat. Ünsiyyət 3, 1172 (2012).
275. Threlfell, S. et al. Striatal dopamin salınması kolinerjik internöronlarda sinxron aktivliklə tetiklenir. Neuron 75, 58-64 (2012).
276. Cachope, R. et al. Xolinergik internöronların selektiv aktivləşdirilməsi uyğunlaşdırılmış fasik dopamin sərbəstliyini artırır: mükafat emalının tonunu təyin edir. 2, 1-9 (2012).
277. Jones, IW, Bolam, JP & Wonnacott, S. Siçovul nigrostriatal dopaminerjik nöronlarda nikotinik asetilkolin reseptoru beta2 subunit immunoreaktivliyinin presinaptik lokalizasiyası. J. Comp. Neurol. 439, 235-247 (2001).
278. Higley, MJ et al. Xolinergik internöronlar, striatumda sürətli VGluT3 -ə bağlı glutamaterjik ötürülməyə vasitəçilik edirlər. PLoS ONE 6, e19155 (2011).
279. Touzani, K., Bodnar, R. & Sclafani, A. Sıçanlarda dopamin D1 kimi reseptorların aktivləşdirilməsi, siçovullarda qidalandırıcı ləzzət üstünlüklərinin ifadəsi deyil, alınması üçün vacibdir. Avro. J. Neurosci. 27, 1525-1533 (2008).
280. Sclafani, A., Touzani, K. & Bodnar, RJ Dopamin və qida seçimlərini öyrəndi. Fiziol. Behav. 104, 64-68 (2011).
281. Mayer, CM & Belsham, DD Mərkəzi insulin siqnalizasiyası insulin reseptor substratı-1 serin fosforilasiyası, proteazomal deqradasiya və lizosomal insulin reseptorlarının deqradasiyası yolu ilə uzun müddətli insulinə məruz qalma ilə zəiflədir. Endokrinoloji 151, 75-84 (2010).
282. Pirinç, ME, Patel, JC & Cragg, SJ Dopamin bazal ganglionlarda. Neuroscience 198, 112-137 (2011).
283. Smith, Y., Surmeier, DJ, Redgrave, P. & Kimura, M. Bazal ganglionlarla əlaqəli davranış keçidinə və möhkəmləndirilməsinə M. Talamik qatqılar. J. Neurosci. 31, 16102–16106 (2011).
284. Threlfell, S. et al. Striatal muskarinik reseptorları ventral və dorsal striatumda xolinergik internöronlarda fərqli reseptor subtipləri vasitəsilə dopaminin ötürülməsindən asılılığını artırır. J. Neurosci. 30, 3398-3408 (2010).
285. Hoebel, BG, Avena, NM & Rada, P. Accumbens dopamin-asetilkolin tarazlığı yaxınlaşma və qaçınma. Curr. Opin. Farmakol. 7, 617-627 (2007).
286. Pothos, EN, Creese, I. & Hoebel, BG Kilo itkisi ilə məhdud yemək qidalanma nüvəsindəki hüceyrə xaricindəki dopamini selektiv olaraq azaldır və amfetamin, morfin və qida qəbuluna dopamin reaksiyasını dəyişdirir. J. Neurosci. 15, 6640-6650 (1995).
287. Geiger, BM et al. Sıçan qidalanma şişməsində mezolimbik dopamin neyrotransmission çatışmazlığı. Neuroscience 159, 1193-1199 (2009).
288. Morris, JK et al. İnsülin müqaviməti nigrostriatal dopamin funksiyasını pozur. Exp. Neurol. 231, 171-180 (2011).
289. De Araujo, IE et al. Dad reseptorlarının siqnalizasız olmadığı halda yemək mükafatı. Neuron 57, 930-941 (2008).
290. Stice, E., Spoor, S., Bohon, C. & Small, DM Obezite ilə qidaya bulanmış striatal reaksiya arasındakı əlaqə TaqIA A1 alleli tərəfindən idarə olunur. Science 322, 449-452 (2008).
291. Wang, GJ et al. Brain dopamin və obezite. Lancet 357, 354-357 (2001).
292. Johnson, PM & Kenny, PJ Dobamin D2 reseptorları, bağımlılığa bənzər mükafat disfunksiyası və obez siçovullarda kompulsif yemə. Nat. Neurosci. 13, 635-641 (2010).
293. Carr, KD, Kim, G.-Y. & Cabeza de Vaca, S. Doğrudan dopamin reseptoru agonistlərinin mükafatlandırılması və lokomotor aktivləşdirici təsiri siçovullarda xroniki qida məhdudiyyəti ilə artır. Psikofarmakoloji (Berl.) 154, 420-428 (2001).
294. Levin, BE & Keesey, RE Pəhrizdən qaynaqlanan obez və davamlı siçovullarda fərqli bədən çəkisi müəyyən nöqtələrindən müdafiə. Am. J. Physiol. 274, R412-R419 (1998).
295. Patel, JC & Rice, ME Beyin dilimlərində sürətli skan edilmiş tsiklik voltammetriyadan istifadə edərək aksonal və somatodendritik dopamin sərbəstliyinin monitorinqi. Metodlar Mol. Biol. 96, 243-273 (2013).
296. Lee, CR, Witkovsky, P. & Rice, ME Substantia nigra pars reticulata GABAerjik neyron aktivliyinin H tərəfindən tənzimlənməsi₂O₂ Flufenamic acid-sensitive kanalları və K vasitəsilə_ATP kanallar. Cəbhə. Syst. Neurosci. 5, 14 (2011).
297. Chen, BT, Moran, KA, Avshalumov, MV & Rice, ME Gərginliyə həssas Ca ilə somatodendritik dopamin salınmasının məhdud tənzimlənməsi²⁺ Kanallarda aksonal dopamin susmasının güclü tənzimləməsinə ziddir. J. Neurochem. 96, 645-655 (2006).
298. Li, X. et al. Farelerde LRRK2 aşırı ekspresyonu ile geliştirilmiş striatal dopamin transmisyonu ve motor performansı ailesel Parkinson hastalığının mutasyonu G2019S ile ortadan kaldırılır. J. Neurosci. 30, 1788-1797 (2010).
299. Wu, Q., Reith, MEA, Wightman, RM, Kawagoe, KT & Garris, PA Elektrikli evakuasiya edilmiş dopamin dinamikasından sərbəst buraxılma və tutma parametrlərinin real vaxt voltammetri ilə ölçülməsi. J. Neurosci. Metodlar 112, 119-133 (2001).
300. Chen, BT, Avshalumov, MV & Rice, ME H₂O₂ sinaptik dopamin azadlığının yeni, endogen modulatorudur. J. Neurophysiol. 85, 2468-2476 (2001).
301. Witkovsky, P., Patel, JC, Lee, CR & Rice, ME Diqamin dopaminerjik neyronların somatodendritik bölməsindən dopaminlə əlaqəli proteinlərin immunositokimyəvi identifikasiyası. Neuroscience 164, 488-496 (2009).
302. Sugimoto, K. et al. Sıçan periferik sinirində insulin reseptoru: yeri və alternativ şəkildə birləşdirilmiş izoformlar. Diabet Metab. Res. Rev. 16, 354-363 (2000).
303. Sanchez-Alavez, M. et al. İnsülin isti həssas nöronların birbaşa inhibisyonu ilə hipertermiya səbəb olur. Diabet 59, 43-50 (2010).
304. Paxinos, G. & Watson, C. Stereotaksik Koordinatlardakı Siçovul Beyni 6-cı edn Academic (2007).
305. Strubbe, JH & Mein, CG VMH-də insulin antikorlarının ikitərəfli inyeksiyasına cavab olaraq artan qidalanma. Fiziol Behav. 19, 309-313 (1977).
306. Paranjape, SA et al. İndulinin ventromedial hipotalamusun pankreatik glukagon sekresiyasına təsiri vivo ilə. Diabet 59, 1521-1527 (2010).
307. Wise, RA & Hoffman, DC İntrakraniyal inyeksiya ilə dərman mükafatlandırma mexanizmlərinin lokalizasiyası. Sinaps 10, 247-263 (1992).
308. Zhen, J., Maiti, S., Chen, N., Dutta, AK & Reith, MEA 4- (2-benzhidriloksi-etil) -1- (4-florobenzil) piperidin və aspartat 68 arasındakı hidroksipiperidin analoqu arasındakı qarşılıqlı təsir. insan dopamin daşıyıcısı. Avro. J. Pharmacol. 506, 17-26 (2004).

Referansları endir

Bu işlər NXH DA033811 (MER, KDC və MEAR), NS036362 (MER), DA03956 (KDC) və NARSAD müstəqil tədqiqatçı mükafatı (KDC) tərəfindən dəstəklənmişdir. S961 Dr Lauge Schaffer, Novo Nordisk-dən səxavətli bir hədiyyə idi. PP5 antikoru Pfizer-dən səxavətli bir hədiyyə idi. Dr Çarlz Nicholson, NYU Tibb Təşkilatına özü çıxarmaq üçün proqram təminatına təşəkkür edirik V_max FCV məlumatlarından dəyərlər.