Orta Yüksək Yağ Diyeti Siçovulların Gənc Yanaşmalarında Self Xəstəliyini Artırır (2013)

. Müəllif əlyazması; PMC 2014 Fevral 1-də mövcuddur.

Son olaraq redaktə şəklində dərc olunub:

PMCID: PMC3538965

NIHMSID: NIHMS411020

mücərrəd

Əvvəllər orta səviyyədə yüksək yağlı pəhriz yetkin siçovullarda sukroz üçün motivasiya artırdığını bildirmişik. Bu çalışmada, 5-8 həftə ərzində, ergenlikten keçən kişi siçovullarında yüksək yağlı pəhrizin motivasion, neyrokimyəvi və metabolik təsiri test edilmişdir. Yüksək yağlı pəhriz sukroz üçün cavabdehlik səviyyəsini artırdığını müşahidə etdik. Bu da metabolik dəyişikliklərdən və ya nüvəsindəki accumbensdə katekolamin neyrotransmitter metabolitlərində dəyişikliklərdən asılı idi. Lakin hipotalamusda AGRP mRNA səviyyələri əhəmiyyətli dərəcədə yüksəlmişdir. AGRP neyronlarının aktivləşdirilməsinin əsaslandırılmış davranışı ilə əlaqəli olduğunu və ekzogen (üçüncü cerebroventricular) AGRP administrasiyasının sukroz üçün motivasiya səviyyəsinin əhəmiyyətli dərəcədə artmasına səbəb olduğunu göstərdik. Bu müşahidələr göstərir ki, AGRP'nin medial hipotalamusa artması və fəaliyyəti yüksək yağlı pəhriz müdaxiləsi nəticəsində meydana çıxan sukroz üçün cavab vermənin artmasına səbəb ola bilər. Nəhayət, pubertal və böyüklər siçovullarında sükroz üçün motivasiyanı müqayisə etdik və pubertal siçovullarında sükroz üçün artan motivasiyanı müşahidə etdik. Bu, əvvəlki hesabatlara uyğun olaraq gənc heyvanların və insanların böyüklər ilə müqayisədə şirin zövq üçün üstünlük təşkil etdiyini göstərir. Birlikdə, işlərimiz aralıq pəhrizinin adolesan heyvanlarda şirin dad üçün motivasiya güclü modulyar rol oynadığını göstərir.

Keywords: Motivasiya, yemək mükafatı, yüksək yağlı pəhriz, gənclik

giriş

Daha əvvəl orta hesabla yüksək yağ (31.8%) pəhrizinin qısa müddətə azyaşlı siçovullarda sükroz üçün artan motivasiyaya səbəb olduğunu bildirmişik). Ətraf mühitə qarşı bioloji təsirlər və ya onların sinerjisi, ərzaq üstünlükləri və enerjili sıx qidalar üçün motivasiya son on ildə təqdir edilməkdədir. Pediatrik piylənmə son on il ərzində kəskin şəkildə artdığına görə bu, gənclər arasında əlaqəni artırdı (). Şirin zövq üçün artan seçim həm gənc heyvanlarda, həm də insan pediatrik əhalisində sənədləşdirilmişdir (; ; ; ; )) və qida sənayesi üçün qablaşdırılan qidalar və içkilərin yüksək şəkərli tərkibli, uşaqlar üçün layihələndirilməsi və satılması üçün nəzərdə tutulan əsasdır. Buna baxmayaraq, yaşıl siçovullarda səkroz üçün motivasiya kimi ətraf mühitə təsirlərin, məsələn, pəhrizin təsirləri sistematik olaraq qiymətləndirilməmişdir.

Cari hesablamalar göstərir ki, ABŞ-da uşaqlar və yeniyetmələrin 10-20% -i obez). Orta hesabla ABŞ əhalisi gündəlik 336 kcal şəkər istehlak edir (Milli Xərçəng İnstitutu Tətbiqi Araşdırma Proqramı). Əhalinin böyüklərə (19 + yaş) və uşaq nüfusuna (2-18 yaş) ayrıldığı zaman bu ədəd uşaqlar / yeniyetmələr üçün bir qədər yüksəkdir və böyüklər üçün bir qədər aşağı olur. Yeniyetmələr üçün əlavə şəkərlərin əksəriyyəti soda, enerji içkilər və idman içkilərindən (National Cancer Institute Applied Research Program) istifadə olunur. Geniş bir sistematik araşdırma və meta-təhlil analizi göstərir ki, alkoqollu içkilərin alınması artan enerji alınması və bədən çəkisi ilə əlaqədardır). Yeniyetmələr (14-18 yaş) hər gün 444 kkal dəyərində şəkər istehlak edirlər və 9 ilə 13 yaş arasındakı uşaqlar gündəlik 381 kkal əlavə şəkər istehlak edirlər (Milli Xərçəng İnstitutu Tətbiqi Tədqiqat Proqramı). Bu əlavə istehlak qismən gənc insanlarda yetkinlərə nisbətən şirin seçimin yüksək olması ilə əlaqələndirilə bilər (; ; ; ). Araşdırmalar göstərir ki, 9 və 15 yaşları arasındakı uşaqlar daha yüksək konsentrasiyalarda şəkər həlqələrini böyüklər nümunəsinin üstünlük təşkil edən konsentrasiyasından). Uzunluqlu tədqiqatlar bu uşaqların onilliklərdən sonra həyatında şirin seçimini sınaqdan keçirdi, bu zaman onların üstünlükləri azalıb və yetkinlik üstünlüyünə). Araşdırmalar həmçinin uşaqlarda daha yüksək sükroz konsentrasiyalarının analarınla ​​müqayisədə üstünlük göstərdi (). Bu, artmış uşaqlıq dövründə şəkər üstünlüklərinin genetika səbəbindən deyil, inkişaf etməkdə olan bir fenomeni əks etdirdiyini göstərir. Araşdırmalar siçovullarda bu yüksək sükroz üstünlüklərini də nümayiş etdirdi ().

Bir çox CNS sistemi və birləşmələri insanlarda və kemirgenlərdə erkən dövrdə plastır, məsələn, mesocorticolimbic sistemi və mükəmməllik və motivasiya vasitəçiliyi üçün əsas bir yer olan çekirdek akumbensində dopaminergik fəaliyyət (; ) (görmək son baxış üçün). Bu anatomik və nörokimyəvi dəyişikliklərin funksional əhəmiyyəti artıq aydınlaşdırılır. Bolaños və iş yoldaşlarından olan son tədqiqatlar və digərləri, dopamin yenidən alıcı nəqliyyat vasitəsi antagonisti metilphendatının (Ritalin) post-sutəmizləyici, cavan gəmiricilərindən sonrakı müalicə mülahizələrini nəzərdən keçirir. Metilfenidat ilə peri-ergen müalicə funksiyası kimi böyüklər həyatında dəyişmiş nörokimya və davranışlar barədə məlumatlar var (; ; ; ). Bulgular tamamilə ardıcıl deyil, bəlkə də öyrənilən müxtəlif heyvan modellərinə görə, kollektiv olaraq bu tədqiqatlar adolesan dövrünün dopamin funksiyasının dəyişdirilməsi üçün inkişaf pəncərəsi kimi göründüyünü vurğulayır. Qida, ventral tegmental bölgədən (VTA) proqnozlarından nucleus accumbens-ə qədər dopaminin azad edilməsi üçün təbii bir stimuldur və siçovulların sükrozun operativ şəkildə qəbul edilməsi çox dopamin (). Sükroz üçün motivasiya nüvə accumbens dopaminin artması ilə əlaqələndirilir və ekoloji təsirlər ilə modulyasiya bu ergen, siçovulda peri-pubertal mərhələdə olduqca həssas ola bilər.

Uşaqlar və gənc kemirgenlərdəki şirin dadın yüksək üstünlüyünü nəzərə alaraq, adolesan kemiricilərdə sukroz üçün motivasiya parametrlərini müəyyən etmək vacibdir. Bu seriyalı tədqiqatlarda sümük iltihabından sümükqalma üçün yüksək yağlı bəslənmə müdaxiləsinin motivasiyaya təsirini qiymətləndirdik. Sonradan metabolik və CNS qiymətləndirmələrini diaqnoz müdaxiləsi ilə əlaqəli metabolik, endokrin və ya neyron dəyişiklikləri müəyyən etmək üçün aparırdıq. Yetkin siçovullarda bildirdiyimizə görə müqayisədə orta səviyyəli yüksək yağ (31.8%) diet sukrozun özünü idarə etməsində təsirli olmuşdur. Siçovullarda siçovulların motivasiyası üçün post-pəhriz müalicəsinin təsiri olub-olmaması, digər davranışlar üçün bildirildiyi sonrakı həyat təsirləri ilə müqayisədə, gənc yetkinlər kimi test edilmişdir. Bizim tədqiqatlar göstərir ki, gənc sıçanlar orexigenic, hypothalamic peptide AGRP tərəfindən mediatlaşdırıla bilən orta səviyyədə yüksək yağlı pəhriz verdikdə sükroz üçün artan motivasiya nümayiş etdirir; erkən pəhriz müdaxiləsinin keçid dövründən sonra yetkinlik yaşına çatmayan bir məhsula təsir göstərməməsi; və siçovulların metabolik olaraq normal olduğu və pre-obez olmasına baxmayaraq davranış açıqdır. Nəhayət, peripubertal sıçanlar gənc böyüklər sıçanlarına nisbətən sükroz üçün motivasiyanı artırırlar.

Material və metodlar

Mövzu

Mövzular Simonsen (Gilroy, CA) kişi Albino siçovulların idi. Siçanlar, chow (Laboratory Rodent Diet 5001, LabDiet) və ya orta dərəcədə yüksək yağlı pəhriz (31.8%, Research Diets Inc) ad libitum. Diyetlər ümumi karbohidrat miqdarı üçün müvafiq olaraq (58% kcal% 51% kcal üçün aşağı yağ və yüksək yağ üçün sırasıyla) uyğunlaşdırılır. Aşağı yağlı chow 6.23 gm% pulsuz şəkərlərə malikdir və yüksək yağlı pəhriz 29 gm sukrozə malikdir. Onlar 12-da saxlanılıb: 12-da 6 h işıq-qaranlıq dövrü işıqları ilə. Aksi göstərilmədiyi təqdirdə, sıçanlar 3 həftə içində gətirildi, dərhal post-səthdən sonra və 5 həftəlikədək uyğunlaşma üçün yerləşdirildi. Bu yaşda pəhriz və / və ya davranış təhsili və sınaqları başlandı. Müəyyən protokollar aşağıda ətraflı təsvir olunur və yekunlaşdırılır Cədvəl 1. Çünki kişi siçovulları 6-da ergenlikdən keçərlərth-7th Həftə içində araşdırma zamanı, bu inkişaf mərhələsində keçdikcə siçovulların araşdırılması üçün nəzərdə tutulmuşdur. Siçovullarda aparılan bütün prosedurlar Heyvan Baxımı üzrə NIH təlimatlarını izlədi və VA Puget Sound Sağlamlıq Sistemində Araşdırma və İnkişaf Komitəsinin Heyvan Baxımı və İstifadə Alt Komitəsi tərəfindən təsdiq edildi.

Cədvəl 1  

Eksperimental Protokollar

Sucrose özünü idarə etmə

Ümumi Protokol. Prosedurlar dərc olunan metodikamıza əsaslanırdı (; ). Bütün təlim və test prosedurları 0700 və 1200 saat arasında aparıldı. Təcrübə 2-3 mərhələləri: autoshaping və sabit nisbəti (FR) təlim; müəyyən kohortlarda əməliyyat və bərpası (bax Cədvəl 1); və Richardson və Roberts PR alqoritmindən istifadə edən mütərəqqi əmsallar (PR)). PR alqoritmi 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, 575 ( və s.) bir seansta mükafatın çatdırılmasına nail olmaq üçün lever basaraq motivasiya və mükafat (759) üçün ciddi sınaqdır. Siçovullar 999% sukrozunu (999 ml mükafat) özünü idarə etmək üçün bir maye damcı qabına çatdırılmışdır. Med Associates (Gürcüstan, VT) sisteminin idarə etdiyi əməliyyat qutuları iki qola malik idi, lakin yalnız bir qol (aktiv, geri çəkilə bilən qol) infuziya pompasını aktivləşdirdi. Digər qolu (effektiv olmayan, dayanıqlı qol) üzərində olan təzyiqlər də qeyd edildi. Sükroz həlli ağ istehlakı üçün bir maye damcı rezervuarına (Med Associates) təslim edilmişdir. 27 gün ərzində bir məşğələ zamanı birincilik kursları keçirilmişdir (FR5: hər bir qolu mətbuatı möhkəmləndirilmişdir), sessiya başına maksimum 0.5 sukroz mükafatlarını verilmişdir. Hər bir sessiya, aktiv qolu və bütün oturumda qalmış ağ houselight'in işıqlandırılması ilə başladı. 10-nin səsi (fondan yuxarı 1 Hz, 50 dB) + işıq (aktiv qolu yuxarıda 5 W ağ işıq) diskret mürəkkəb nişanı hər bir sükrozun çatdırılmasından sonra hər bir mükafat çatdırılmasına müşayiət olundu. On gün ərzində maksimum mümkün 2900 h / gün üçün PR təlimatı keçirilmişdir. Gündəlik iclaslar 20 mindən sonra heç bir aktiv qolu cavab vermədikdən sonra sona çatdı, evdə işıq söndürüldü və aktiv qol geri çəkildi.

AGRP-nin sükrozun özünü idarə etməsinə təsiri

Yüksək yağlı bəslənməni təmin edən pubertal sıçanlarda AGRP mRNA ifadəsinin artım göstərdiyinə görə, AGRP sukrozun özünü idarə etməsini artıra biləcəyini təsdiq etmək istədi. 5-wk köhnə chow-fed siçovulların FR təlim vasitəsilə alındı, sonra cannula üçüncü beyin qoruyucu (ICV) daxil edildi. Bir həftəlik bərpa edildikdən sonra angiotensin II içmə cavab testi ilə yerləşdirmənin təsdiqlənməsi (bax ) və FR yenidən təliminin bir sessiyası, siçovulların PR özünü idarə paradiqmasına başlandı. PR Günü 1'tan sonra, sıçanlar iki qrupdan birinə təyin edildi ki, PR günü 1 performansı iki qrup arasında (süni CSF vasitəsi, aSFS və ya AGRP, 2 μl 0.01 nmol) fərqlənmir. PR günlərində 8, 7 və 2 bir CSF (n = 5) və ya AGRP (n = 8) inyeksiya qəbul etmişdir. Ümumi gündəlik yemək miqdarı PR təlim vaxtında miqdarda olmuşdur.

Saqqızun özünü idarə etməsində yaşın təsiri

Biz pubertal siçovulların və gənc yetişkinlərin arasında self-administering davranışını müqayisə edərək, şiş və ya 31.8% yağ pəhrizini müqayisə etdik. Siçovulların VAPSHCS vivariumuna (3-5wk və ya 8-10 wk) iki həftəlik qloklama var idi. Onlar bütün test / təlim dövründə pəhriz aldılar (4 wk). Beləliklə, ilk sınaqda olduğu kimi, pubertal siçovulların 5-8 yaşlarında tədqiq edilmişdir. Genç yetişkinler 10-13 yaşlarında araşdırıldı.

Bədən tərkibinin müəyyən edilməsi

Bədən tərkibi kəmiyyət magnetik rezonans spektroskopiyası (QMR []), nisbi bədən yağının hesablanmış fərdi sıçanların bədən suyunun tərkibini müəyyən etmək. Heyvanlar silindrik tutuculara un-anesteziyaya yerləşdirilib, sonra tutacaqlar QMR maşınına 2 dəqiqə tarama üçün yerləşdirilib, bu da üçqat ölçmələr aparır. Məlumat bütün bədən suyunun, yağın və yağsız kütlələrin dərhal hesablanması üçün vahid kompüterə (EchoMRI, Echo Medical Systems, Houston, TX) qeyd olunur.

İntravenöz qlükoza tolerans testi (IVGTT)

Şüurlu İVGTT'lər, xroniki implantasiya edilmiş IV kanüllərlə tədqiq edilmiş gecə əvvəl sürətlə irəli sürülən siçovullarda, . İkitərəfli intravenöz kanüllər tədqiqatdan iki həftə əvvəl tətbiq edilmiş metodikaya əsasən implante edilmişdir (). Temel nümunələr t-10 min (insulin və qlükozanın müəyyənləşdirilməsi üçün 0.5 ml, bütün zamanlarda) və t0 dəqiqə tərtib edilmişdir. Xərçənglər 1-2 saniyədə 15 ml həcmli salinanın ardından 20 gmqqq / 0.5ml / kg infuziya aldı. Qan nümunələri 5, 15, 30, 60, 90 və 120 dəq. Çəkildi. Prosedur zamanı kateterin yerləşdirilməsi nəticəsində (dolayısı ilə, qan nümunələrinin əldə edilməməsi), təqdim edilən bazal / IVGTT məlumatları üçün final 'n' xNUMX-7, xNUMX% yağlı pəhriz ilə qidalanan sıçanlar üçün 8,Cədvəl 3). Plazma insulin Linco sıçan insulin RIA dəstləri (# RI-13K və SRI-13K, Linco) və bir YSI Glukoz Analizatorunda plazma qlükozası təyin olundu. Çizgifildən cavab üçün əyri (AUC) sahəsi 5 dəqiqə və 120 min hesablanır. HOMA indeksi indeksiya (glyukoza [mM] × insulinm [U / L]) / 22.5 kimi hesablanmış və insulin və qlükoza üçün ölçülən terminal açar nümunələri əsasında hesablanmışdır.

Cədvəl 3  

Metabolik Parametrlər1

Sabit metabolik parametrlər

Ekspert 1-dən gələn siçanlar, IVGTT-dən sonra bir neçə gün sonra ötanaziyalardan bir gün əvvəl oruc tutdular. Sıçanlar, izofluran inhalyasiyası ilə dərindən anestezi keçirildi və exsanguinated edilmişdir. Hipotalamik peptid mRNA və nucleus accumbens katekolaminlərinin ölçülməsi üçün maya sıvı azotda sürətlə çıxarılmış və dondurulmuşdur. Açar insulin, qlükoza, leptin və trigliseridlərin ölçülməsi üçün terminal plazma və ya serum istifadə edilmişdir. Trigliseridlər üçün Point Scientific Triglyceride GPO Kiti # T7531-400 (Fisher # 23-666-418) və standartlar KIT # 7531-STD (Fisher # 23-666-422) istifadə edildi və 3 μl serum iki dəfə sınaqdan keçirildi. Plazma leptin Millipore Linco RIA Kiti # RL 83K ilə ölçüldü.

Katexolamin HPLC metodları []

Sıçanlar isofluran anesteziyası ilə euthanized və beyin sürətlə çıxarılır, dondurulur və -80 ° C-də saxlanılır. Hər bir heyvandan nüvəli akumbensin (NAcc) iki tərəfli mikro-zərbələri izole edildi. Hər bir mikro-zərbənin təbiəti və ölçüsü səbəbindən qonşu beyin bölgələri tərəfindən çirklənməni minimuma endirmək üçün əhəmiyyətli qayğı göstərilmiş olsa da, metodumuz NAcc daxilində subregions (NAcc core vs shell) ayırmaq imkan vermədi. Yüksək performanslı maye kromatografi (HPLC) təhlili üçün nümunələrə bir ultrafioloji toxuma homojenizatoru (Biologics, Gainesville, VA) istifadə edərək homojenləşdirmə nümunələrinə antioksidan həll (0.4 N perklorat, 1.343 mM etilendiaminetetraasetik turşusu (EDTA) və 0.526 mM sodyum metabisülfit əlavə edildi ) Toxum homojenatının kiçik bir hissəsi xNUMX% xNUMX üçün xNUMX-da xNUMX% sodyum dodesil sulfat (SDS) (v / v) ilə zülalın müəyyən edilməsi üçün həll edilmişdir (Pierce BCA Protein Reagent Kit, Rockford, IL) Soğutulmuş bir santrifüjdə min. Supernatant HPLC üçün ayrılmışdır.

Nümunələr, həm də DA, 18-dihidroksifenilasetik turşusu (DOPAC) və homovanilik turşusu (HVA) üçün tədqiq edilmiş bir Microsorb MV C-5 sütununda (4.6 Am, 250_3,4 mm, Varian, Walnut Creek, CA) ayrılmışdır dopamin pozuntusu, 5-HT və 5-HIAA. Aşağıdakı şərtlər altında bir Waters 12 Solvent Dağıtım Sisteminə (Waters, Milford, MA) birləşdirilmiş bir 5200 kanalı coulometric array detector (CoulArray 2695, ESA, Chelmsford, MA) istifadə edərək, birləşmələr aşkar edilmişdir: 1 ml / min axını; 50, 175, 350, 400 və 525 mV aşkarlama potensialları; 650 mV fırçalama potensialı. Mobil mərhələdə distillə edilmiş H bir xNUMX% metanol həlli ibarətdir221 pH'sında 0.1 g / l (10.65 M) sitrik asit, 0.075g / l (2 M) Na4HPO176, 0.8 mg / l (36 M) heptanesulfonic acid və 0.097 mg / l (4.1 mM) EDTA ehtiva edən O. Bilinməyən nümunələr minimum R ilə bir 6-point standart əyri əleyhinə ölçülmüşdür2 0.97-dan. Keyfiyyətə nəzarət nümunələri HPLC kalibrləmə təmin etmək üçün hər bir qaçış ilə interspersed edilmişdir.

Orexiqenik peptidlər mRNA qPCR

Biz qidalanmağı stimullayan və motivasiya və mükafat davranışlarına təsir göstərən hipotalamik peptidlərin ifadəsini): nöropeptid Y (NPY [ ; ; ]); agouti ilə əlaqəli peptid (AGRP [; ; ; ; ; ; ; ; ]); və orexin (; ). Siçovullar izofluran anesteziyası ilə yıxıldı və beyinlər sürətlə çıxarıldı, donduruldu və işlənənə qədər -80 ° C-də saxlanıldı. Medial və lateral hipotalamus diseksiya prosesi boyunca 1200 ° C sabit bir temperatur saxlayan AHP-12CPV dondurma təyyarəsi (Termoelektrik Soğutma Amerika, Çikaqo, Il) istifadə edərək bir blok şəklində parçalandı. Mikro parçalanmış toxumadan alınan ümumi RNT, Trizol reaktivi (Invitrogen, Carlsbad, CA) tərəfindən təcrid olunmuş və istehsalçının göstərişlərinə əsasən RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) istifadə edərək təmizlənmişdir. Ümumi RNT, RNase pulsuz DNase (Promega, Madison, WI) istifadə edərək potensial genomik DNT çirklənməsini aradan qaldırmaq üçün müalicə olundu və NanoVue spektrofotometri (GE Healthcare, Cambridge, UK) ilə ölçüldü. RNT keyfiyyəti standart agaroz gel elektroforezi ilə təsdiqlənmişdir. Daha sonra tamamlayıcı DNT (cDNA) iScript cDNA Sintez Dəsti (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA) istifadə edərək təsadüfi hexamerlər və oligo DT astar qarışığı ilə ümumi RNT-nin 1-2 mq-sindən yenidən köçürüldü (RT). Potensial genomik DNT-nin çirklənməsini idarə etmək üçün hər bir nümunədən yenidən köçürülməmiş (RT yoxdur) reaksiyalar hazırlanmışdır. CDNA və no-RT nəzarətləri seyreltildi və hər bir nümunədən 5-10 ng şablon cDNA seçilmiş genlərin mRNA ekspresyonunu MyIQ Real-time PCR Detection System (Bio-Rad, Hercules) istifadə edərək real vaxt kəmiyyət PCR ilə ölçmək üçün istifadə edildi. Hər bir nümunə üçün üçqat ölçmələr, standart iCycler 96 quyu lövhələrində, potensial çarpaz çirklənməni aşkar etmək üçün heç bir şablon nəzarəti (NTC) olmadan, 20 μl 10 × iQ Sybr Green Supermix (Bio-) ibarət 2 μl reaksiya həcmində aparıldı. Rad, Hercules, CA), hər astarda 2 μl 0.2-0.5 μM, 3 μl DEPC suyu və 5 μl şablon. Bütün qPCR reaksiyalarına siqnalın spesifikliyini təmin etmək üçün bir ərimə əyri analizi daxil edilmişdir. Hər bir maraqlanan gen üçün nisbi ifadə, hər bir plitə üzərində ayrı-ayrılıqda standart bir əyriyə ekstrapolyasiya ilə hesablanmış və cDNA referans cəmlənmiş nümunəsinin ardıcıl seyreltilməsindən əldə edilmiş və referans genlərin nisbi ifadəsinə (asidik ribosomal fosfoprotein 36B4-də gen ifadəsi üçün) normallaşdırılmışdır. hipotalamik toxuma və mitoxondrial ribosomal protein L32, nüvə akumbensindəki ifadə üçün). Siçovul prepro-orexin, NPY və AGRP-nin gücləndirilməsi üçün aşağıdakı astar ardıcıllıqlar (IDT, San Diego, CA) istifadə edilmişdir: Prepro-orexin, Ötür: 5′-TTCCTTCTACAAAGGTTCCCT-3 ′, 5′-GCAACAGTTCGTAGAGACGGCAG-3 ′; NPY: İrəli, 5- TACTCCGCTCTGCGACACTACATC-3 ′; Ters: 5′-CACATGGAAGGGTCTTCAAGCC-3 ′; AGRP, İrəli: 5′-GCAGAAGGCAGAAGCTTTGGC-3 ′; Ters: 5′-CCCAAGCAGGACTCGTGCAG-3 ′.

cFos İmmünositokimya (ICC) və kantifikasiya

Floresan ICC, medial hipotalamusa Fos-pozitiv və AGRP-pozitiv neyronal hüceyrə orqanlarını təyin etmək üçün istifadə edilmiş, müəyyən olunmuş metodologiyaya). Son gündə (PR Günü 10) siçovullar 90 dəqiqə ərzində həmişəki kimi öz idarəetmə otaqlarına yerləşdirildi. Son 90 dəqiqəlik iclasdan dərhal sonra siçovullar izofluran inhalyasiyası ilə dərindən anesteziya edildi və% 0.9 NaCl ilə perfüze edildi, ardından soyuq% 4 paraformaldehid məhlulu. Anestezi və evtanaziya üçün vaxt 90-120 dəqiqədən sonra baş verən hadisədə cFos zülalının pik ekspresiyasının bilinən vaxtına əsaslanır. Beləliklə, cFos ifadəsi, vəzifəni yaşayan heyvanların nəticəsi olmaqdansa, davranış vəzifəsinin başlanğıcında CNS-nin aktivləşməsini əks etdirəcəkdir. Beyinlər çıxarıldı və bir neçə gün sonra paraformaldehiddə sabitləndi, daha sonra% 20 saxaroza-PBS, daha sonra% 30 saxaroza-PBS həllinə yerləşdirildi. İmmunohistokimya üçün beyinlər bir kriyostata (Leica CM 3050S kriostat) bölündü. Beyin bölmələrində immunoreaktiv cFos zülalının miqdarını təyin etmək üçün müəyyən metodologiyamızdan istifadə etdik (). Slayd quraşdırılmış 12 μm bütün beyin koronal bölmələri fosfat tamponlu salin (PBS, OXOID, Hampshire, İngiltərə) üç dəfə yuyulurdu. 20% etanol / DI suyu (100%, həcm / həcm) PBS ilə yuyulur, sonra 50% normal keçi və ya eşşəkarı serumu olan PBS-də otaq temperaturunda 1 saat üçün bloklaşdırılır. Bölmələr daha sonra PBS-də bir neçə dəfə yuyulurdu və PBS-də hazırlanmış ilkin antikor həllərində 5 ° C gecəsində inkubasiya edildi. Bölmələr PBS-də üç dəfə yuyulurdu və sonra 4 saat üçün PBS-də hazırlanan orta antikor həllində otaq temperaturunda qaranlıqda inkübe edildi. Bölmələr sonradan PBS-də yenidən yuyulurdu və Vectashield sabit quraşdırılmış mühit (Vector; Burlingame, CA) montaj vasitəsinə quraşdırılmış və örtülmüşdür. Bölmələrin rəqəmsal şəkilləri NIS Elements (Nikon) proqramını istifadə edərək, Qimaging Retiga dijital ələ kamerasına bir Nikon Eclipse E-1 floresan mikroskopu ilə əldə edilmişdir.

Yüksək AGRP mRNA səviyyələrini göstərən PCR tədqiqatlarına əsasən, biz medial hipotalamik bölgələrə, xüsusilə ventromedial nüvəyə və kavisli nüvəyə (ARC) yönəldilmişdir. Atlasla uyğunlaşdırılmış 12 μm bölmələri cFos ifadəsi və ölçülmüş bölmələr və bölgələrdə ölçülməsi üçün atlasın . Nöqtələr üçün (40 × böyüdükdə) atlasla uyğunlaşdırılmış bölgələr seçilmişdir. NIS Elements proqramı (Nikon) istənilən sahənin görünüşünü çəkmək üçün istifadə edilmişdir. Hesablaşma üçün bir sahə ayrıldı və müsbət hüceyrə sayıları müəyyən edildi. Eyni sahə və arka plan (eşik) müvafiq eksperimental qruplardan bölmələr üçün istifadə olunmuşdur və müsbət hüceyrələrin proqram sayılması (kəmiyyətləşdirmə) bütün icra qrupları üçün həmin sessiyada, arxa fonda oturma dəyişikliklərinin qarşısını almaq üçün həyata keçirilmişdir. Statistik analiz üçün fərdi siçandan yalnız hər bir ərazidə müvafiq və ya tam bölmə mövcud olduqda sayar alınmışdır; həmin sahə üçün ikitərəfli ikitərəfli nümayəndəlik olmadığı təqdirdə, müəyyən bir sahə üçün məlumat siçandan alınmamışdır.

CFos kəmiyyətinə əlavə olaraq cFos və AGRP üçün kəmiyyət ikiqat etiketli immunohistokimya aparıldı. Heyvanların davranış performansını pozmaq istəmədiyimiz üçün, AGRP-nin vizualizasiyasını optimallaşdırmaq üçün kolxisinlə əvvəlcədən müalicə edilmədilər. Bu səbəbdən AGRP-pozitiv nöronların vizuallaşdırılması az qiymətləndirilə bilər. AGRP üçün ikiqat boyanma proseduru öz-özlüyündə cFos-immunoreaktivliyin analizi ilə müqayisə oluna bilərdi, istisna olmaqla bölmələr otaq temperaturunda bir saat PBS-5% eşşək serumunda bloklanmışdır. Daha sonra fos-Ab və AGRP əsas antikorlarının qarışığı 4 ° C-də gecə inkubasiya üçün istifadə edilmişdir; eyni zamanda hər iki antikor da eyni məhlulda idi və qaranlıqda otaq temperaturunda bir saat inkübe edildi. Birincili antikorların uyğun bir seyreltilməsini təyin etmək üçün ilkin optimallaşdırma analizləri aparılmışdır. İstifadə olunan əsas antikorlar dovşan əleyhinə cFos (1: 500) (sc-52) və keçi əleyhinə AGRP (1: 100) (18634) idi (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). İkincili antikorlar Cy3-konjuge eşşək dovşan (Jackson Immunoresearch; West Grove, PA) və Alexa fluor 488 eşşək keçi əleyhinə IgG (Molecular Probes, Eugene, OR); bütün ikincil antikorlar 1: 500-də seyreltilmişdir.

Statistik analizlər

Qrup məlumatları mətn, Cədvəllər və Rəqəmlərdəki ortalama (SEM) ortalama ± səhv kimi təqdim olunur. Əhəmiyyətlilik p ≤ 0.05 olaraq təyin olunur. Təcrübəsiz qruplar arasında, "Nəticələr" bölməsində, cütlənməmiş Tələbə testindən istifadə edərək (məsələn, pəhriz, yaş və ya müalicə müqayisəsi) istifadə edildiyi kimi statistik müqayisələr aparılır. Verilərin 'normallaşması' istifadə edildiyi kimi təyin olunur.

Nəticələr

Sükroz üçün peri-pubertal motivasiya üçün orta yüksək yağlı pəhrizin təsiri

Siçanlar 31.8-5 zamanı 8% yağ pəhrizini qidalandırırdılar, öz-özünü idarə etmə sessiyalarında isə saqqız üçün əhəmiyyətli dərəcədə yüksək motivasiyaya malik idi. Göstərildiyi kimi Şəkil 1a, ilk FR məşqində performansın heç bir fərqi yox idi (ortalama FRDays 1-10 effektiv qolu presləri, 38 ± 5 vs. 39 ± 2, xnumX% yağ dietinə qarşı). Lakin siçovulların daha sıx PR vəzifəsinə keçirdikləri zaman aktiv lever presslarının sayının əhəmiyyətli artması və səkkiz mükafatların sayı, lakin ümumi sessiyanın uzunluğunda deyil (Şəkil 1b). Xroniki pəhriz müalicəsinin effektiv olmayan lever presləri sayına təsiri yoxdur. Sıçanlar 5-8-da yüksək yağlı pəhriz verdikdə, lakin sonradan 9-12 həftələrində FR və PR təlimlərindən alınan bir chow pəhrizinə qayıtdıqda, bir fürsət var idi amma aktiv lever pressalarında əhəmiyyətli fərq yox idi. Beləliklə, peri-pubertal müddət ərzində istehlak orta səviyyəli yüksək yağlı bəslənmənin heç bir davranışla qarşılıqlı təsiri yoxdur. Bu kohortlar üçün PR parametri məlumatları ümumiləşdirilir Cədvəl 2. Sükroz motivasiyasında pəhrizlə bağlı artımın artmasına səbəb olan mexanizmi (mexanizmləri) aydınlaşdırmaq üçün bir sıra metabolik və CNS ölçmələrini həyata keçirdik.

Şəkil 1Şəkil 1  

31.8% yağlı pəhriz (n = 8) ilə peripubertal siçovullarda sükroz mükafatlarına cavab verən PR motivasiyası artır. 1a. FR sessiyalarının qarşısında dietin təsiri yox idi, ancaq siçovulların PR paradiqmasına keçdikləri zaman pəhriz effekti ortaya çıxır. 1b. Məlumatlar var ...
Cədvəl 2  

Peri-Pubertal Yüksək Yağ Dietinin Sucrose üçün Proqressiv əmsalların Performansına Etkisi

Orta yağlı pəhriz metabolik parametrlərinə təsiri

Davamlı testin bitməsindən dərhal sonra, 5-8 zamanı pəhriz müdaxiləsi və davranış paradiqması olan siçovullarda bədən yağ tərkibi müəyyən edilmişdir. Rats daha sonra (şüurlu) IV qlükoza tolerantlığı testləri (IVGTTs) üçün kronik intravenöz kanüllər aldı. Sonradan əlavə olaraq metabolik tədbirlər üçün terminal açar plazma və serum əldə edildi. Göstərildiyi kimi Cədvəl 3, bədənin tərkibi, bədən çəkisi, oruc insulini və ya qlükoz tədbirləri, insulin həssaslığı (HOMA hesablanması) və ya IVGTT-ə qarşı, çiçəklənmiş və yüksək yağlı qidalandırılmış siçovulların arasında heç bir fərq yox idi. Terminal oruc tutması leptin və triglitserid ölçüləri iki qrup arasında fərqlənmədi. Beləliklə, pəhriz müalicəsi sükroz üçün motivasiyaya əhəmiyyətli dərəcədə təsir göstərsə də, əvvəlcədən obez olan yüksək yağlı siçovulların rəftarını əks etdirir.

Orta yağlı pəhrizin CNS homeostatik və mükafat neurokimyasına təsiri

Terminal metabolik ölçmələrinə əlavə olaraq həftə ərzində xəttin müdaxiləsi və davranış təhsili olan kohortdan gələn beyinlər nüvəli akumbens amin profilləri (n = 5 başına diet qrupu) və ya hipotalamik oreksiqenik peptidlərin mRNA səviyyələri üçün ölçüldü. Göstərildiyi kimi Cədvəl 4, dopamin, norepinefrin və ya serotonin metabolitlərində yüksək yağlı pəhrizin mühüm mükəmməl yer və motivasion fəaliyyətin mərkəzi hissəsində əhəmiyyətli təsiri yox idi (; ) bu nörotransmitter sistemlərinin hər birinin əsas tənzimləyici rol oynadığı. Hipotalamik ekstraktlar içərisində oreksigenik peptidlərin, NPY, AGRP və oreksinin mRNA səviyyələri ölçülmüşdür. Bu kohortda piylənmiş siçovullarda artan AGRP üçün güclü, lakin əhəmiyyətsiz bir tendensiya müşahidə edildi (hər iki pəhriz üçün n = 8); bu səbəbdən əlavə bir kohortda pəhriz / davranış təhsili paradiqmasını təkrarladıq və hipotalamusda NPY, AGRP və orexin mRNA ölçdük. Kombinə olunmuş qruplarda, yüksək yağ pəhrizinə qarşı çovğun nəzarətinə qarşı siçovullarda AGRP mRNA-da əhəmiyyətli dərəcədə (p <0.05) artım müşahidə etdik (Şəkil 2), lakin NPY və ya orexin ifadəsində əhəmiyyətli dəyişiklik olmur. AGRP ifadə və özünü idarəetmə davranışı arasında mümkün olan əlaqələri qiymətləndirmək üçün mediobasal hipotalamusa cFos və AGRP immunopositive nöronları ölçüldü. Siçovulların qrupları chow və ya 31.8% yağlı pəhriz qidalanırdı; bəziləri özünü idarəetmə protokolu (həftə 5-8) və digərləri isə davranışçı nəzarət kimi qəbul edildi. Şəkil 3a cucaqlı bir nüvə neyronunda cFos və AGRP-nin lokalizasiyasının bir nümunəsini göstərir. Xülasə olaraq Cədvəl 5, AGRP nöronlarının aktivləşməsi (eyni hüceyrələr daxilində cFos-ICC və AGRP-ICC-nin birgə ifadəsi) özünü idarəetmə fəaliyyəti ilə əlaqələndirilmişdir. Bu da göstərildi Şəkil 3bAktiv nöqtələrin (cFos-pozitiv) nöronların sayı nöronal hüceyrə sayı kimi göstərildiyi və ya ümumi AGRP-pozitiv nöronların nisbəti kimi göstərildikdə: sıçanlarda saqqızı özünü idarə edən AGRP neyronlarının aktivləşdirilməsi, birləşdiyi pəhriz qruplarında. Özünü idarəetmə qrupundakı hərəkətə nəzarət qrupları içərisində fəaliyyət göstərən AGRP neyronlarının sayına görə dietə nisbətən müalicə müqayisəsi statistik əhəmiyyətə (trend, p = .078, 31.8% yağlı pəhriz, p = .073) . Əhəmiyyətli olaraq, bu məlumatların AGRP nöronal aktivasiyasını özünü idarəetmə davranışı ilə deyil, cFos ölçülməsi üçün vaxt (90 dəqiqə sonra siçovulların özünü idarəetmə kameralarına yerləşdirmişdir) ilə deyil, cFos ifadəsi AGRP nöronların aktivliyini əks etdirir. özünü idarə etmə fəaliyyətinin başlanğıcında və ya başlanğıcında. Özünü idarəetmə qrupunda artan ümumi AGRP-pozitiv nöronlar üçün qeyri-əhəmiyyətli bir tendensiya var idi (p = 0.16). Diyet qrupları arasında lever-basma eşleştiği bu sıçanlarda, AGRP pozitif nöronların sayı eşleştirilmiştir. Davamlı nəzarət sıçanlarında AGRP-pozitiv nöronların sayına təkcə pəhriz müalicəsinin təsiri olmadı.

Şəkil 2  

% 31.8 yağ pəhrizinin medial hipotalamik peptid mRNA ekspresiyasına təsiri. Verilənlər yüksək yağlı siçovullar üçün normallaşdırılır (n = 17) və chow nəzarətinə nisbətən (n = 16). AGRP mRNA əhəmiyyətli dərəcədə yüksəlmişdir (p <0.05).
Şəkil 3Şəkil 3  

Sükrozun özünü idarə etməsinin başlanğıcında AGRP nöronların aktivləşdirilməsi. 3a. CFos və AGRP-nin araqaqiyalı nüvəli neyron, 60x böyüdülməsi ilə birlikdə lokalizasiyası. 3b. Mediobasal hipotalamusda aktivləşdirilmiş (cFos-immunopositive) AGRP-immunopitif nöronların sayı ...
Cədvəl 4  

Nüvə Akumbens Amin Metabolitləri
Cədvəl 5  

Agrp Neyron Aktivləşdirməsi: Diyet və Davranışa Baxış

AGRP administrasiyasının sükroz motivasiyasına təsiri

Bu tapıntıdan bizim şərhimiz pubertal siçovullarındakı AGRP ifadəsinin yüksək yağlı pəhriz qidalandırılmış siçovulların inkişaf etmiş sukrozun özünü idarə etməsinin əsas mexanizmi olmasıdır. AGRP'nin sükroz üçün motivasyonu artıracağını təsbit etmək üçün, AGRP, davranış paradiqmasının PR hissəsi zamanı üçüncü qarıncuqdan çörək qidalı peri-pubertal sıçanlara tətbiq edildi. AGRP'nin bu doz rejimi, PR-paradigmasının iki həftəsi boyunca chow alımının stimullaşdırılması üçün alt eşiktir, lakin göstərilmişdir ki, sukrozun özünü idarə etməsi əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır Şəkil 4. (Hər sukroz mükafatının 0.1 kcal bir kaloriya məzmununa sahib olduğunu nəzərə alaraq, sukrozun özünü idarə etmə fəaliyyəti gündəlik qəbuledilməzlik üçün çox az kalori təşkil edir.) Cədvəl 6 Gündəlik 9, 2 və 5-də AGRP və ya aCSF-in ICV ilə 8-gün PR paradiqmasında özünü idarəetmə parametri məlumatlarını göstərir. AGRP ilə müalicə olunan siçovullarda aktiv qolu presinin sayı PR Days 2-10 (p = 0.03) və qeyri-injection günlərində (p = 0.048) ümumi olaraq (ortalama) injection günləri. Bundan əlavə, Stop-Time (özünü idarəetmə vəzifəsi ilə məşğul olan bütün vaxtları əks etdirən) qeyri-enjeksiyon günlərində (p = 0.02) ümumiyyətlə artım istiqamətində və injection günləri ilə xeyli artmışdır. Saqqız mükafatlarının ümumi sayı PR Days 2-10 (p = 0.03) arasında artmışdır. AGRP-nin müalicəsi effektiv qolu basaraq, CSF ilə müalicə edilən yoxlamalarla və ya enjeksiyon-qeyri-enjeksiyon günləri ilə müqayisədə təsir göstərmir. Nəticələr sukrozun özünü idarə etməsinin artırılması üçün AGRP-nin dayanıqlı təsirinin təfsirini dəstəklədi: siçovulların mükafatlandırıcı qolu üzərində daha çox təzyiq göstərdi, daha çox sükroz mükafatlarını aldı və vəzifəyə daha çox vaxt sərf etdi.

Şəkil 4  

Üçüncü ventrikulyar (ICV) AGRP (0.01 nmol) PR paradiqmasında sukrozun özünü idarə etməsini stimullaşdırır, lakin iş dövründə (PR Days 2-10, günlər 2, 5 və 8 üzrə injectionlarla) . AGRP (n = 9) məlumatları ifadə edilir ...
Cədvəl 6  

ICC AGRP-nin ASCF-nin Sucrose üçün Proqressiv Riyazi Performansına Etkisi

Həyat mərhələsinin sükroz üçün üstünlük və motivasiyaya təsiri

Son sınaqda sukroz üçün motivasiya pubertal və yetkin siçovulların arasında fərqləndiyini qiymətləndirdik. 5-10-wk köhnə sıçanlara 0-dan 20-ə qədər sukrozdan başlayaraq, özünü idarəetmə testindən və təlimindən əvvəl həll variantları ilə sucrose seçim imtahanı verildi. Göstərildiyi kimi Şəkil 5avə adətən ədəbiyyatdakı məlumatlara uyğun olaraq əvvəlcədən pubertal siçovulların gənc yetkin sıçanlara nisbətən şişkin bir həll üstünlük verdiyi ortaya çıxdı: ən çox əvvəlcədən pubertal sıçanlar 20% sukroz həllinin ən yüksək həcmində qəbul edildi, yetkin siçovulların sıx sıxlıq göstəricisi 15% sukrozunu. Sonradan, hər iki yaş qrupu özünü idarəetmə təhsili və sınaq zamanı siçovul və yüksək yağlı pəhriz arasında bölüşdürülmüşdür. FR seansları arasında ortalama olan peri-pubertal və böyüklər sıçanları (45 ± 3 vs. 37 ± 2, p = 0.05) ilə aktiv qolu presləri sayında kiçik, lakin statistik olaraq əhəmiyyətli bir artım olub, sükroz mükafatları və ya qeyri-aktiv qolu üzərində preslərin sayı. Göstərildiyi kimi Şəkil 5b(n = 15) genç yetişkinlere (n = 14) sıçanlara (2 yolunda ANOVA, PRDay × yaş;) nisbətən daha çox artan aktiv qolu basma ilə PR seansları boyunca yaşın olduqca əhəmiyyətli bir təsiri olmuşdur. yaşın təsiri, p = 0.017, PRDay'ın müstəqil təsiri yox, əhəmiyyətli qarşılıqlı təsirlər). Tthere, yüksək yağlı bəslənmə vəziyyətində yaşın daha böyük bir təsiri üçün bir meyl idi, lakin bu statistik əhəmiyyətə (p = .13) nail olmadı. Cədvəl 7 PR davranış parametrlərini sıraladı: artan aktiv lever presləri ilə yanaşı, peri-pubertal sıçanlar əhəmiyyətli dərəcədə daha çox sükroz mükafatlarını aldılar və artan Stop Time istiqamətində bir trend göstərdilər. Bundan əlavə, peri-pubertal sıçanların həm peri-pubertal, həm də yetişən sıçanlar üçün effektiv (yəni mükafatlandırıcı olmayan) qolu üzərində presləri kiçik, lakin əhəmiyyətli dərəcədə artırdığına baxmayaraq, qeyri-aktiv qolu presləri sayı təxminən 10% aktiv qolu presləri. Bu nəticələr göstərir ki, peri-pubertal siçovulların üstünlük verdiyini və şirin tatma yeməklərini daha yaxşı gözdən keçirəcəkdir və təsir yüksək yağlı pəhriz fonunda artırıla bilər.

Şəkil 5Şəkil 5  

Yetkin siçovulların saqqal mükafatlarına yetkin siçovullarla müqayisədə motivasiya artdı. 5a. Suçroz üstünlük testi uşaqlar üçün (peri-pubertal, n = 15) və gənc yetkin (n = 14) sıçanlar. Sıçanlar konsentrasiyalardan (30-0% sukroz) içmək üçün 20 min idi. ...
Cədvəl 7  

Yaşa Proqressiv Riyazi Performans üzərində təsira Sucrose üçün

Müzakirə

Bu tədqiqatın əsas məqsədi peri-pubertal dövrdə istifadəsi orta səviyyədə yüksək yağlı pəhrizdir (əvvəlcədən, dövrdə və yeniyetmədən keçmə dövründən sonra) sukroz həllər üçün motivasiyanı əhəmiyyətli dərəcədə artırdı. Bu tapıntı, yetkin sıçanlarda əvvəlki, oxşar, müşahidə ilə uyğun gəlir (). Bu heyvanlarda, əlavə yaşda və müalicəyə uyğunlaşdırılmış kohortlarda, siçovulların qeyri-obez və ya pre-obez olduğunun və periferik insulinə davamlı olmadığını geniş metabolik xarakterizə edərək təyin etdik. Sıçanların insulin və ya leptin hərəkətlərinə qarşı CNS-lokallaşdırılmış müqavimət olduğu ehtimalını istisna etmirik: bu hormonların hər ikisi də CNS-yə xüsusi olaraq yemək mükafatının modullaşdırılması (; ; ).

Siçovulların bir alt hissəsində biz midbraindən dopaminergik proqnozların ağır bir yatırılması olan və nəhayət, mükafat və motivasiya davranışının vasitəçiliyi üçün əsas və mərkəzi CNS saytı hesab edilən nüvə vericilərindəki amin nörotransmitterləri və əlaqəli metabolitləri ölçdük; ). Nüvə accumbens içərisində dəyişmiş katekolamin və ya serotonerqik aktivliyin artan sukroz motivasiyaya əsaslanan birincil və ya böyük MSS mexanizmi olmadığını göstərən bu verici metabolitlərinin mütləq səviyyələrdə və nisbətlərində dəyişiklik müşahidə edilməmişdir. Bu, son hesabatla uyğundur ICV AGRP medial prefrontal korteksdə dopamin dövranını artırsa da, yetişkin siçovullarda göstərən, lakin nüvəli akumbens deyil. Bundan əlavə, gənc yetişkinlər kimi dərhal post-puberty-də sınaqdan keçirildikdə pəhrizin "davranışçı keçirici" təsirini müşahidə etdik. Bu Bolaños və başqalarından davranış və katekolaminergik parametrlərdən, metilfenidatla müalicə olunan yetkinlikdə olan kemiricilərdən fərqli olaraq,; ; ; ). Bu, metilfenidat tərəfindən dopaminergik neyronların birbaşa hədəf alınması ilə əlaqədardır və həmçinin diet müdaxiləsinin vaxtı və heyvanların sınaq müddəti funksiyası ola bilər. Nəhayət, biz aparıcı effektləri müşahidə etməmişik, çünki bu işdə diet effektinin əsas yeri orta hipotalamus kimi görünür.

Bu çalışmada, üç dəlil sübut, yüksək yağlı pəhriz qidalanma siçovullarında sukrozun artan özünü idarə etməsində medial hipotalamik nöropeptid AGRP üçün əsas rolunu dəstəkləyir. Birincisi, 31.8% yağlı pəhrizi çova nəzarətinə nisbətən qidalanan sıçanlarda bütün hipotalamusun ekstraktlarında AGRP ifadəsinin (mRNA) artımını müşahidə etdik. Lakin, orexin mRNA və NPY mRNA səviyyələri dəyişməyib. Beləliklə, yüksək yağlı pəhriz / davranış paradiqmasının təsiri AGRP-ə xüsusi olaraq görünür və ya orogenik nöropeptidlərə ümumiləşdirilmiş deyildir. Bu, AGRP-nin yemək üçün motivasiya və ya axtarma rolunu vurğulayır və ədəbiyyatda (aşağıda müzakirə edilmiş) bir sıra son hesabatlara uyğun gəlir. Bizim son işimiz medial hipotalamik aktivləşmənin əsas rolunu motivasiya paradiqmamızda PR işi ilə birlikdə yerinə yetirmiş, bir neçə medial hipotalamik nüvə). Biz də (ekzogen) insulin sükrozun özünü idarə etməsini azaltmaq üçün ARC-ni əsas bölgə kimi müəyyən etdik (). ARC AGRP / NPY nöronları (; ) medial hipotalamusun içərisində fəaliyyət göstərən bir çox mexanizm ilə qidalanma stimullaşdırmaq. Bu çalışmada aktifleştirilmiş AGRP nöronlarının immunositokimyasal kantitasyonu, yetişmemiş davranış kontrollerine kıyasla, sükrozun kendini idare etmek üçün eğitilmiş olan sıçanlarda cFos / AGRP nöronlarının artımını göstermiştir. Bu, AGRP nöronal aktivasiyasının sukrozun özünü idarə etməsinin (başlanğıcı) əmələ gətirdiyi təfsirinə gətirib çıxaran ikinci bir yanaşmadır. Əvvəlki və daha sonrakı işlər AGRP-nin ifadə və fəaliyyətlə bağlı bir üstünlüklü yağ alması ilə bağlıdır, ya da pəhriz () və ya motivasion bir paradiqma kontekstində); və böyüklər siçovullarında ICV AGRP, tercihen yağa). AGRP nöronlarının siçanlarda spesifik aktivləşdirilməsinə imkan verən hədəflənmiş molekulyar üsullardan istifadə edən son tədqiqatlar (; AGRP qidalanma güclü stimullaşdırır, ərzaq axtarışını artırır və enerji xərclərini azaldır. Qeyd etmək maraqlıdır ki, yüksək yağlı pəhrizlə təchiz olunmuş eksperimental qruplarda ümumi kalorili suqəbuledici, nəzarət çiçəklənmiş siçovullarınCədvəl 8) enerji sərfiyyatını azaltmaq üçün endogen AGRP təsiri ilə uyğun olacaq. Bu təsirlər əvvəlki nəticələrə uyğun gəlir enerji balansının bəzi aspektlərinə dair ekzogen AGRP effektləri olduqca uzadılmış ola bilər. Beləliklə, üçüncü bir yanaşma olaraq, ICV AGRP verdiyi sümük sümüyü tərəfindən sarkozun özünü idarə etməsi (chow-fed) tərəfindən göstərilən nəticələr eyni zamanda davam edən bir hərəkət təklif edir. Dörd həftə ərzində yüksək yağlı pəhriz qidalanan sıçanlarda AGRP mRNA ekspresyonunun xüsusi artımı son dövrlərdə edilən araşdırmalarla uyğun gəlir. hipotalamik nöronlarda ekzogen yağ turşularını, hüceyrə içərisində yaranan yağ turşularını və AGRP ifadəsini artıran birləşmədir. Beləliklə, külli hipotalamik hüceyrələrə oleik və ya palmitik turşunun əlavə olunması AGRP ifadəsinin artmasına gətirib çıxardı. Istifadə etdiyimiz pəhriz stearik, palmitik və oleik turşu artdıqca, bu yağ turşularının vivo ilə hipotalamik mühit, onların lokalize konsentrasiyalarının diyet yağlı turşu profilinə uyğun olmasını və bunlardan bir və ya daha çoxunun xüsusən AGRP ifadəsinin artmasına gətirib çıxaracaqdır. Buna baxmayaraq, bu pəhriz alt komponentlərinin medial hipotalamusa əsas təsirlərdən şirniyyat üçün artan motivasiyaya kömək edə biləcəyini spekulyasiya etmək cazibədardır.

Cədvəl 8  

Eksperimental protokol: Kcal istehlak etdi

Araşdırmamız göstərir ki, gənc siçovulların böyüklər siçovullarına nisbətən sukroz üçün motivasiya artdığını göstərir. Bu PR özünü idarə edən bütün dövrdə aydın oldu və yaş təsirini artırmaq üçün yüksək yağlı pəhriz üçün bir meyl var idi. Mümkündür ki, bu, nisbətən kiçik qrupluq ölçüləri ilə əlaqədar statistik əhəmiyyətə malik deyildir; Beləliklə, məlumatlar, pubertal heyvanlarda (və bəlkə də insanda) orta səviyyədə yağın pəhrizdə şirinləşdirilmiş içkilər və ya qidaları əldə etmək üçün davranışları artırmağa kömək edə bilər. Sosiallaşma perspektivindən, yalnız "twenens" və ya yeniyetmələrin diyetlərinin yağ tərkibinə diqqət yetirilməsinin vacibliyini vurğulayır, çünki artıq çoxlu pəhriz yağlarının birbaşa, mənfi metabolik nəticələrinə deyil, həm də nəticə verən davranışlara kömək edə bilər. Şəkərlərin daha geniş şəkildə alınması. Son vaxtlarda nəzərdən keçirildiyi kimi , yağ ilə şəkərlərin birgə yandırılması əhəmiyyətli mənfi metabolik nəticələrə səbəb ola bilər. İnsanlarda yüksək yağ / şəkər kombinasiyası da nisbətən daha az satiating pəhrizdir (). Diabet insidensiyasının artması ilə () və yağlı qaraciyər () pediatrik əhali içərisində meydana gələn, gənclikdə sağlam və balanslı bir pəhrizin əhəmiyyəti açıqdır. Biz də lever presslarının sayı hələ də çox aşağı olmasına baxmayaraq pubertal sıçanlarda (böyüklər siçovulları ilə) qeyri-effektiv qolu üzərində preslərin əhəmiyyətli dərəcədə artdığını müşahidə etdik. Bu mümkündür, lakin aktiv fəaliyyət göstərən leverə basaraq bütün fəaliyyətin qeyri-spesifik təsiri hesab edilə bilər, çünki fəaliyyətin çoxu aktiv qola yönəldilmişdir. Hərəkətsiz qolu presləri faktiki sayının artmasına baxmayaraq, aktiv lever presləri ilə nisbəti peri-pubertal və böyüklər sıçanları arasında müqayisə edildi və artan qolu presləri özünü idarəetmə otağında daha uzun müddətə təsir göstərə bilər. Fərqli bir paradiqmada (bəzi yemək məhdudiyyəti, şirin mükafat yerinə qida pelletlərinin istifadə edilməsi və FR1 cədvəli) keçmişdə yeniyetmələrdə və yetkin siçovullarda dəyişməli instrumental performansı bildirmişdir. Yetkinlik yaşına çatmayan və yetkin siçovulların arasında qida pelletlərini təslim edən nosepoklarda heç bir fərq gözləmədilər. Ancaq yeniyetmələrin sıçanlarında tükənmə zamanı davamlı davranışları müşahidə etmişlər. Birlikdə götürülən iki tədqiqat, yaş və inkişaf mərhələsinin, pubertal sıçanların sürətlə böyüməsinə uyğun olaraq, ərzaq üçün motivasiyaya təsirini vurğulayır. Bu işdə qadın, siçovulların deyil, kişi qiymətləndirdik. Hal-hazırda kişi və qadın siçovulların qida motivasiya paradiqmasında birbaşa müqayisə edilməsi və pubertal dövrdə sistematik qiymətləndirmə ilə bağlı məhdud tədqiqatlar mövcuddur. Qeyd etmək lazımdır ki, (insan) gənclərin öyrənilməsində, Gonadal steroid deyil, böyümənin bir markeri arasında bir birlik var per se. Buna baxmayaraq, bu yaş qrupundakı cinsi təsirlər daha çox istintaqa layiqdir.

Sonuç olaraq, çalışmalarımız yetişkinlere nisbətən pubertal sıçanlarda sükroz üçün artan motivasyonu göstərir və bu, orta səviyyəli yüksək yağlı pəhrizə çıxış yolu ilə artır. Yüksək yağlı pəhrizin sükroz motivasiyasına təsiri medial hipotalamusa artmış AGRP aktivliyi ilə vasitə ola bilər. Bu, mükəmməllik və motivasiyanı tənzimləyən dövrə ilə enerji homeostazını tənzimləyən dövriyyənin güclü daxili CNS funksional keçidinin daha da sübutudur. Orta səviyyə yüksək yağlı pəhriz ilə sukroz üçün motivasiya artırılması metabolik çatışmazlıqlar və açıq şişmanlıqdan öncə gəlir və davranış əvvəlcədən əksinə deyil, metabolik dəyişikliklərə yol aça bilər. Yüksək yağ və fruktoza malik şirin qidaların yuyulması həm tip2 diabet, həm də ürək-damar xəstəliyi üçün yüksək risk təşkil edən metabolik profilə birgə kömək edəcəkdir. Bu tapıntılar yalnız puberte zamanı yemək nümunələri və pəhriz üzərində diqqətin ictimai-ekoloji təsirlərdən deyil, habelə CNS-in heyvan və ya insan keçidləri kimi alınması üçün çoxlu maturasiya dəyişiklikləri dövründə təsirlənməsinin vacibliyini vurğulayır reproduktiv yetkinliyin.

â € <  

  • Moderate yüksək yağlı pəhriz yetkin siçovullarda sükroz üçün motivasiya artırır.
  • Bu işdə yüksək yağlı pəhriz peri-pubertal sıçanlarda sukroz motivasiyasını artırır.
  • Peri-pubertal sıçanlar yetkinlərə nisbətən sükroz motivasiyasını artırmışdılar.
  • Artan sukroz motivasiya hipotalamik AGRP ilə vasitəçilik edilə bilər.
  • Xülasə: Yüksək yağlı pəhriz şişmanlıqdan asılı olmayan şirniyyatlara motivasiya edir.

Minnətdarlıq

Bu araşdırma NIH hədiyyə DK40963 tərəfindən dəstəklənmişdir. Dianne Figlewicz Lattemann Senior Research Career Scientist, Biyomedikal Laboratoriya Tədqiqat Proqramı, Qazi İşləri Puget Sound Səhiyyə Sistemi, Seattle, Vaşinqton. Stephen Benoit, NIH DK066223 və Ethicon Endosurgery Inc tərəfindən dəstəklənmişdir. Müəlliflər Dr. Tami Wolden-Hanson'a bədənin kompozisiya ölçüləri ilə dəstək verdikləri üçün təşəkkür edir; Dr. William Banks və Lucy Dillman, trigliserid ölçüləri ilə dəstək üçün; və Amalie Alver və Samantha Thomas-Nadler davranış tədqiqatları ilə kömək etmək üçün.

References

  • Andersen SL, Teicher MH. Adolesan depressiyasında stress, həssas dövrlər və maturasiya hadisələri. Neuroscience'teki trendler. 2008; 31: 183-191. [PubMed]
  • Aponte Y, Atasoy D, Sternson SM. AGRP nöronları qidalanma davranışını sürətlə və təlim olmadan təşkil etmək üçün kifayətdir. Təbiət neuroscience. 2011; 14: 351-355. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Barnes MJ, Argyropoulos G, Bray GA. Agroporun knockout siçanlarında, mu opioid reseptorlarının aktivləşdirilməsindən sonra yüksək yağlı pəhriz üçün üstünlük deyil, hiperfagiya deyil. Brain Tədqiqatları. 2010; 1317: 100-107. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Bolaños CA, Barrot M, Berton O, Wallace-Qara D, Nestler EJ. Pre-və periadolentlik dövründə metilfenidat müalicəsi yetkinlik yaşına çatmış emosional stimullara davranış reaksiyasını dəyişir. Bioloji Psixiatriya. 2003; 54: 1317-1329. [PubMed]
  • Bolaños CA, Glatt SJ, Jackson D. Periadolen siçovullarda dopaminergik preparatlara qarşı subsidiya: davranış və nörokimyəvi analiz. Beyin Araşdırma İnkişafı Brain Araşdırma. 1998; 111: 25-33. [PubMed]
  • Brandon CL, Marinelli M, Baker LK, White FJ. Adolesan sıçanlarda metilfenidat müalicəsinin ardından kokainə güclü reaktivlik və həssaslıq. Nöropsikofarmakologiya. 2001; 25: 651-61. [PubMed]
  • Brandon CL, Marinelli M, White FJ. Adolesan metilfenidatın məruz qalması siçovul orta dipamin neyronlarının fəaliyyətini dəyişir. Bioloji Psixiatriya. 2003; 54: 1338-1344. [PubMed]
  • Broberger C, Johansen J, Johansson C, Schalling M, Hokfelt T. Normal, anorektik və monosodyum glutamatla işlənmiş siçanlardakı nöropeptid Y / agouti gen ilə əlaqəli protein (AGRP) beyin sxemi. Milli Elmlər Akademiyasının tədqiqatları. 1998; 95: 15043-15048. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Oreksin / hipokretinin mükafat axtarma və bağımlılıqdakı rolu: obezitenin təsirləri. Fiziologiya və Davranış. 2010; 100: 419-428. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Yiyecek motivasyonunda orexin-A'nın rolü, sıçanlarda mükafat temelli beslenme davranışı ve gıda ilə bağlı nöronal aktivasyon. Neuroscience. 2010; 167: 11-20. [PubMed]
  • Cizza G, Brown RJ, Rother KI. Uşaqlıq diabetinin yüksəlməsi və çətinlikləri. Bir mini baxış. Endokrinoloji araşdırma jurnalı. 2012 epub May 8, 2012. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Coldwell SE, Oswald TK, Reed DR. Böyümə göstəricisi yüksək və aşağı şəkər seçiminə sahib olan yeniyetmələr arasında fərqlənir. Fiziologiya və Davranış. 2009; 96: 574-580. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Davis JF, Choi DL, Benoit SC. İnsülin, leptin və mükafat. Endokrinoloji və metabolizm tendensiyaları. 2010; 21: 68-74. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Fitzgerald MF, Clegg DJ, Lipton JW, Figlewicz DP, Benoit SC. Leptin fərqli neyron dövrlərdə fəaliyyət vasitəsilə enerji balansını və motivasiyasını tənzimləyir. Bioloji Psixiatriya. 2011a; 69: 668-674. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Krause EG, Fitzgerald MF, Lipton JW, Sakai RR, Benoit SC. Mərkəzi melanokortinlər, siçovulda mezokortikolimbik aktivliyi və qida axtarma davranışını tənzimləyir. Fiziologiya və Davranış. 2011b; 102: 491-495. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Clegg DJ, Benoit SC, Lipton JW. Yüksək səviyyəli pəhriz yağlarına məruz qalma sıçanda psevdostimulyant mükafat və mesolimbik dopamin dövranını azaldır. Davranış nevrologiyası. 2008; 122: 1257-1263. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Desor JA, Beauchamp GK. İnsanlardakı şirin seçimlərdə uzununa dəyişikliklər. Fiziologiya və Davranış. 1987; 39: 639-641. [PubMed]
  • Desor JA, Greene LS, Maller O. 9-15-yaşlı və yetkin insanlara şirin və duzlu olan üstünlüklər. Elm. 1975; 190: 686-687. [PubMed]
  • Drewnowski A. Enerji sıxlığı, doyurulmazlığı və doyumluğu: çəki nəzarəti üçün təsirlər. Qidalanma Baxışları. 1998; 56: 347-353. [PubMed]
  • Figlewicz DP, Bennett JL, Aliakbari S, Zavosh A, Sipols AJ. Sıçanlarda kəskin sukroz qidalanma və sükrozun özünü idarə etməsini azaltmaq üçün müxtəlif CNS bölgələrində insulin əmələ gəlir. Amerika fiziologiyası jurnalı. 2008; 295: R388-R394. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Figlewicz DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. İntraventrikulyar insulin və leptin siçovullarda sükrozun öz-özünə verilməsini azaldır. Fiziologiya və Davranış. 2006; 89: 611-616. [PubMed]
  • Figlewicz DP, Bennett-Jay JL, Kittleson S, Sipols AJ, Zavosh A. Sucrose özünü idarəetmə və sıçanda CNS aktivasiyası. Am J Physiol. 2011; 300: R876-R884. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Figlewicz DP, Ioannou G, Bennett Jay J, Kittleson S, Savard C, Roth CL. Siçovulda orta miqdarda tatlandırıcı qəbulunun metabolik sağlamlığa təsiri. Fiziologiya və Davranış. 2009; 98: 618-624. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Figlewicz DP, Sipols AJ. Enerji tənzimləyici siqnalları və yemək mükafatı. Farmakologiya, Biokimya və Davranış. 2010; 97: 15-24. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Frangioudakis G, Gyte AC, Loxham SJ, Poucher SM. Cannulated Wistar sıçanlarında intravenöz glyukoza tolerans testi: qlükozanın stimullaşdırılan insulin sekresiyasının in vivo qiymətləndirilməsi üçün möhkəm bir üsul. Farmakoloji və Toksikoloji Metodlarının Jurnalı. 2008; 57: 106-113. [PubMed]
  • Hagan MM, Rushing PA, Pritchard LM, Schwartz MW, Strack AM, Van Der Ploeg LHT, Woods SC, Seeley RJ. AgRP-nin (83-132) uzunmüddətli orxiqenik təsiri melanokortin reseptor blokadasiyasından başqa mexanizmləri əhatə edir. Amerika fiziologiyası jurnalı. 2000; 279: R47-R52. [PubMed]
  • Hahn TM, Breininger JF, Baskin DG, Schwartz MW. Oruclu aktiv hipotalamik nöronlarda Agrp və NPY'nin birgə təsiri. Təbiət neuroscience. 1998; 1: 271-272. [PubMed]
  • Hodos W. Progressive nisbəti mükafat gücü bir tədbir kimi. Elm. 1961; 134: 943-944. [PubMed]
  • Ikemoto S, Panksepp J. Ödüllendirici beyin bölgelerinin farmakolojik manipulyasiyası ilə iştahlı və istehlakçı cavablar arasında ayrışmalar. Davranış nevrologiyası. 1996; 110: 331-345. [PubMed]
  • Jewett DC, Cleary J, Levine A.Ş., Schaal DW, Thompson T. Nöropeptid Y, insulin, 2-deoksiglukozun və ərzaq məhviyyətinin ərzaq məhrumiyyətinə təsiri. Psixofarmakologiya. 1995; 120: 267-271. [PubMed]
  • Hautothalic AgRP neurons in Autophagy, ərzaq alışı və enerji balansını tənzimləyir. Kəskinlik, R. Rodriges-Navarro JA, Arias E, Kiffin R, Sahu S, Schwartz GJ, Cuervo AM, Singh R. Hüceyrə metabolizmi. 2011; 14: 173-183. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Kelley AE, Berridge KC. Təbii mükafatların neyrokimyası: asılılıq verən dərmanlara aiddir. Nöroloji jurnalı. 2002; 22: 3306-3311. [PubMed]
  • Kelley SP, Nannini MA, Bratt AM, Hodge CW. Neuropeptid-Y paraventrikulyar nüvədə etanolun özünü idarə etməsini artırır. Peptidlər. 2001; 22: 515-522. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Kohli R, Boyd T, Lake K, Dietrich K, Nicholas L, Balistreri WF, Ebach D, Shashidkar H, Xanthakos SA. Uşaqlıq dövründə NASH'in sürətli inkişafı. Uşaq Gastroenteroloji və Bəslənmə Dergisi. 2010; 50: 453-456. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Krashes MJ, Koda S, Ye CP, Rogan SC, Adams AC, Cusher DS, Maratos-Flier E, Roth BL, Lowell BB. AgRP neyronlarının sürətli bərpaedici aktivasiyası siçanlarda qidalanma davranışını idarə edir. Klinik Araşdırmalar Dergisi. 2011; 121: 1424-1428. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Mennella JA, Pepino MY, Reed DR. Acı qəbulu və şirin seçimlərin genetik və ekoloji göstəriciləri. Pediatriya. 2005; 115: 216-222. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Myers KP, Sclafani A. Öyrənilən ləzzət seçimlərini inkişaf etdirir. İnkişaf Psixobiologiya. 2006; 48: 380-388. [PubMed]
  • Milli Kanser İnstitutu Tətbiqi Araşdırma Proqramı. ABŞ əhalisi, 2005-06 arasında əlavə şəkərlərdən gələn kalorilərin qaynaqları. Yenilənib 21 dekabr 2010. [21 Sentyabr 2011 daxil olub]; 2010 Mövcud: http://riskfactor.cancer.gov/diet/foodsources/added_sugars/
  • Nixon JP, Zhang M, Wang CF, Kuskowski MA, Novak CM, Levine JA, Billington CJ, Kotz CM. Kemirgenlerde bütün bədən kompozisiya analizləri üçün kəmiyyət magnetik rezonans görüntüləmə sisteminin qiymətləndirilməsi. Obezite. 2010; 18: 1652-1659. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Ogden CL, Carroll MD. Sağlamlıq və Bəslənmə İmtahanı Araşdırmaları bölməsi. Uşaqlar və yeniyetmələr arasında piylənmə yayılması: ABŞ, 1963-1965 xətti ilə 2007-2008. [Access 21 Sentyabr 2011]; Sağlamlıq E-Stat. 2010 2010 Available: http://www.cdc.gov/nchs/fastats/overwt.htm.
  • Paxinos G, staterotaxik koordinatlarda siçovul beyin Watson C. Atlas. 5th. San Diego CA: Elsevier Akademik Press; 2005.
  • Richardson NR, Roberts DC. Siçovulların içərisində narkotik özünüidarə tədqiqatlarında proqressiv nisbət cədvəli: gücləndirici effektivliyi qiymətləndirmək üçün bir üsul. Nöroloji metodlarının jurnalı. 1996; 66: 1-11. [PubMed]
  • Roitman MF, Stuber GD, Phillips PE, Wightman RM, Carelli RM. Dopamin, qida axtaran bir subsecond modulator kimi fəaliyyət göstərir. Nöroloji jurnalı. 2004; 24: 1265-1271. [PubMed]
  • A, A, A, A, C, C, C, C, M, M, Morgan D, K, C Edwards C, Sunter D, Abusnana S, Goldstone A, Russell S, Stanley S, Smith D, Yagaloff K, Ghatei M, Bloom S. Agouti- bağlı protein qidalanma artırır və in vivo alfa-melanosit stimullaşdırıcı hormonun təsirini qarışdırır. Endokrinoloji. 1998; 139: 4428-4431. [PubMed]
  • Stanhope KL. Obezite və metabolik sindrom epidemiyasında fruktoza malik şəkərlərin rolu. Tibbin İllik Baxışları. 2012; 63: 329-343. [PubMed]
  • Sturman DA, Mandell DR, Moghaddam B. Ergenlər insturmetal öyrənmə və yox olma zamanı böyüklərdən davranış fərqləri nümayiş etdirirlər. Davranış nevrologiyası. 2010; 124: 16-25. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Tracy AL, Clegg DJ, Johnson JD, Davidson TL, Woods SC. Melanokortin antagonisti AgRP (83-132) yağ üçün cavab verən iştahı artırır, lakin karbohidrat deyil, gücləndirici. Farmakoloji Biyokimya və Davranış. 2008; 89: 263-271. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]
  • Vartanian LR, Schwartz MB, Brownell KD. Yumşaq içki istehlakının bəslənmə və sağlamlığa təsiri: sistematik bir baxış və meta-analiz. Amerika İctimai Sağlamlıq Jurnalı. 2007; 97: 667-75. [PMC pulsuz məqalə] [PubMed]