Bir ghrelin reseptoru (GHS-R1A) antagonisti morfin mükafatlandırıcı xüsusiyyətlərini azaldır və farelerdeki mükafat sahələrində (2015) opioid peptid səviyyələrini artırır.

Kəskin və asılılıq dərmanlarının xroniki istifadəsi, beyin mükafatlandırma sistemlərinin (Nestler, 2005) vacib bir dövrəsi olan mezolimbik dopamin sisteminə güclü təsir göstərir. Bu təsirlər, ən azı, qismən narkotik asılılığının inkişafının əsasını qoymağı təklif etdi (Wise, 2004). Narkomaniya, insana, eləcə də cəmiyyətə zərərli təsirlərin geniş olmasına səbəb olur və bu böyük ictimai sağlamlıq problemini müalicə edən yeni farmakoloji müdaxilələrə zəmanət verilir (Koob və Le Moal, 2001). Asılılıq verən dərmanların mezolimbik dopamin sistemini aktivləşdirmə qabiliyyətinə vasitəçilik edən siqnal sistemlərinə aydınlıq gətirərək maddə istifadəsi pozğunluqlarına qarşı unikal müalicə strategiyaları müəyyən edilə bilər.

Tədqiqatlar ümumi neyrobioloji mexanizmlərin qrelin kimi qida tənzimləyici bağırsaq-beyin peptidlərinin rolunu mükafat vasitəçiliyi ilə əlaqələndirdiyini irəli sürərək qida və asılılıq dərmanları (Morganstern et al., 2011) ilə əlaqəli suqəbuledici və mükafat alışını tənzimləyir. Başlanğıcda, ghrelinin böyümə hormonunun (Kojima et al., 1999) sərbəst buraxılmasına səbəb olduğu və siçovullarda adipozite səbəb olduğu göstərilmişdir (Tschop et al., 2000). Bu günə qədər məlumdur ki, grrelin qida qəbulunu, aclığı artırır və iştahı stimullaşdırır vasitəsilə hipotalamik dövrələr (nəzərdən keçirmək üçün Egecioglu et al. (2011)). Hipotalamusa əlavə olaraq, grelin reseptorları (GHS-R1A) amiqdala, striatum, prefrontal korteks, ventral tegmental bölgə (VTA) və hipokampus (nəzərdən keçirmək üçün Engel və Jerlhag (2014)) kimi mükafatla əlaqəli sahələrdə ifadə olunur. qrelin fizioloji rolu, enerji homoeostaz tənzimlənməsindən kənara çıxır. Həqiqətən, oreksigenik peptid qrelin mezolimbik dopamin sisteminin aktivatoru olduğu kimi siçanlarda mükafat, motivasiya və alkoqol, nikotin, amfetamin və kokain qəbulu tənzimləyicisi kimi göstərilmişdir (nəzərdən keçirmək üçün baxın Engel və Jerlhag (2014)).

Opioidlər, digər asılılıq dərmanları kimi, mezolimbik dopamin sistemini aktivləşdirir və accumbal dopamin sərbəst buraxılmasına səbəb olur vasitəsilə Nüvə hüceyrələrində (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) və VTA-da, ehtimal ki, GABA azalması ilə μ- və / və ya δ-opioid reseptorlarının aktivləşdirilməsi -Dopamin neyronlarının maneə törədilməsi (Johnson və North, 1992). Bundan əlavə, accumbal κ opioid reseptorları mezolimbik dopamin sisteminin fəaliyyətini tənzimləyir (Chefer et al., 2005, Spanagel et al., 1992). Opioidlərə təkrar məruz qalma, asılılığın inkişafına töhfə verən (De Vries və Shippenberg, 2002) mükafat sahələrində bir neçə neyrotransmitterin, o cümlədən opioid peptidlərin uyğunlaşma dəyişikliklərini yaradır. Siçovullarda GHS-R1A'nın farmakoloji böhranı morfin təsirli olan accumbal dopamin azad edilməsini, həmçinin stereotipik davranışları (Sustkova-Fiserova et al., 2014) təsir göstərir. Hazırkı seriyaların ilk hissəsinin məqsədi, bir GHS-R1A antaqonisti JMV2959-ın morfinin lokomotor stimullaşdırmaya, accumbal dopamin sərbəst buraxmasına və siçanlara üstünlük verilməsini şərtləndirən təsirini araşdırmaq idi. Bu işin ikinci hissəsinin məqsədi təkrarlanan JMV2959 və ya grrelin müalicəsinin opioid peptid səviyyəsinə təsirini qiymətləndirmək idi (Met-enkephalin-Arg)⁶Phe⁷ (MEAP), dynorphin B (DynB) və Leu-enkephalin-Arg⁶ (LeuArg)) amigdala, striatum, prefrontal korteks, VTA və hipokampus da daxil olmaqla mükafatla əlaqəli sahələrdə.

Yetkinlik yaşından sonrakı yetkin yaşa uyğun kişi NMRI siçanları (8-12 həftəlik və 25-40 g bədən çəkisi; Charles River, Sulzfeld, Almaniya) istifadə edilmişdir. Qısacası, bütün siçanlar bir 12 / 12 h yüngül / qaranlıq dövrdə yerləşdirilmiş və saxlanılmışdır (səhər yeddi saat işıqlar). Tap su və yemək (Normal chow; Harlan Teklad, Norfolk, İngiltərə) verildi ad libitum, eksperimental quraşdırma zamanı istisna olmaqla. Yeni siçanlar hər bir davranış testi üçün, həmçinin opioid peptid analizi üçün istifadə edildi. Təcrübələr Göteborqdakı İsveç Heyvan Tədqiqatları Etik Komitəsi tərəfindən təsdiqləndi. Heyvan əziyyətlərini minimuma endirmək və istifadə olunan heyvanların sayını azaltmaq üçün bütün səylər göstərildi. Təcrübələrin başlamasından ən az bir həftə əvvəl bütün heyvanlara uyğunlaşmağa icazə verildi.

Morfin hidroxloridi (Apoteksbolaget Sahlgrenska Xəstəxanası; Göteborq, İsveç) vasitədə (0.9% natrium xlorid məhlulu) həll edilmiş və təcrübəyə başlamazdan əvvəl 20 mq / kq 10 dəqiqə dozada iplə idarə edilmişdir. Bu doza daha aşağı bir doz (10 mq / kq, ip) siçanlarımızda bir lokomotor stimullaşdırmasına səbəb olmadığı üçün seçildi (məlumat göstərilmir). JMV6 (Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), UMR2959, CNRS, Montpellier 5247 və 1 Universitetləri, Fransa) da sintez edilmiş seçilmiş doza (2 mq / kq, ip) əvvəllər müəyyən edilmiş və müəyyən edilmişdir lokomotor fəaliyyətə, accumbal dopamin sərbəst buraxılmasına və siçanlarda şərtli yer seçiminə təsir göstərmir (Jerlhag et al., 1). JMV2009 vasitə içərisində həll edildi (2959% natrium xlorid məhlulu) və opioid peptid səviyyəsinin təhlili üçün morfin ifrazatından və ya dekapitasiyasından iyirmi dəqiqə əvvəl idarə edildi. Seçilmiş JMV0.9 dozası heç bir təcrübədə siçanların ümumi davranışına təsir göstərməmişdir. Davranış testləri üçün JMV2959 ciddi şəkildə tətbiq olundu, çünki araşdırmalarımız göstərir ki, JMV2959'dan bir inyeksiya dərmanı mükafatlandırır (nəzərdən keçirmək üçün Engel və Jerlhag (2959)). Güclü effekti aşkar etmək imkanını artırmaq üçün opioid peptid analizi üçün JMV2014 sonrakı beş gün ərzində alt xroniki olaraq tətbiq edildi. Bundan əlavə, təkrarlanan enjeksiyonlarla kəskin inyeksiya stressinin peptidlərə təsir edici təsirindən qaçınırsınız. Acilated siçan grelin (Bionuclear; Bromma, İsveç) 2959% sodyum xloriddə seyreltildi və seçilmiş doza (xNUMX mq / kq, ip) siçanlarda (Jerlhag, 0.9) mükafat gətirəcəyi göstərildi. Bütün dərman problemləri üçün balanslı bir dizayn istifadə edildi.

Əvvəlki tədqiqatlar morfinin gəmiricilərdə bir lokomotor stimullaşdırmaya səbəb olduğunu göstərdi (Wise and Bozarth, 1987). Lokomotor fəaliyyəti səkkiz səssiz, havalandırılmış və işıqsız işıqlı lokomotor qutularda (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mat-och reglerteknik AB; Fjärås, İsveç) qeydə alınmışdır. Fotosel aşkarlama yaratmaq, qutunun döşəmə səviyyəsində beş-beş sıra fotoel şüaları, siçanların fəaliyyətini qeydə almağa imkan verdi. Lokomotor fəaliyyət, bir 60 dəqiqəlik bir dövrdə kəsilmiş yeni fotokell şüalarının yığılmış sayı olaraq təyin olundu. Bütün təcrübələrdə siçanlara dərman problemlərindən bir saat əvvəl lokomotor fəaliyyət qutusuna keçməyə icazə verildi. Müalicə qruplarının heç birində yaşayış vəziyyəti arasında heç bir fərq yox idi (məlumatlar göstərilmir).

Təcrübənin ilk seriyasında JMV2959 (6 mq / kq, ip) morfinlə əlaqəli (20 mq / kq, ip) lokomotor stimullaşdırılmasına təsiri araşdırılmışdır. JMV2959, morfindən 20 dəqiqə əvvəl idarə edildi və fəaliyyətin qeydiyyatı son inyeksiyadan on dəqiqə sonra başladı. Hər siçan bir müalicə birləşməsini aldı (vasitə / vasitə, JMV2959 / vasitə, morfin / vasitə və ya JMV2959 / morfin); n= Müalicə birləşməsinə görə 8) və yalnız bir eksperimental sınaqdan keçirildi.

Yeni siçanlarda morfinin mükafatlandırıcı təsirinə JMV2959 təsirini qiymətləndirmək üçün əvvəlcədən təsvir olunduğu kimi (Jerlhag, 2008) şərti yer seçim testləri aparıldı. Qısaca olaraq, 45 lx işıqlandırma və fərqli vizual və toxunma nişanları olan iki kameralı CPP aparatı istifadə edilmişdir. Bir yuva qara və ağ rəngli zolaqlı divarlar və qaranlıq laminat döşəmə, digərində ağ rəngli taxta döşəmə və taxta toxumanın divarları ilə müəyyən edilmişdir. Prosedura əvvəlcədən kondisioner (gün 1), kondisioner (günlər 2-5) və post-kondisioner (gün 6) idi. Əvvəlcədən, siçanlara vasitə ilə ip vuruldu və ilkin yeri (və ya tərəfi) müəyyənləşdirmək üçün 20 dəqiqə ərzində hər iki bölməyə sərbəst giriş imkanı olan kameraya yerləşdirildi. Kondisioner (bir 20 dəqiqə) bir morfin (20 mq / kq) ən az seçilən bölmə və nəqliyyat vasitəsi ilə seçilən bölmə ilə birləşdirildiyi qərəzli bir prosedurdan istifadə edilərək edildi. Bütün siçanlar hər gün bir vasitə morfin və bir injection aldı və enjeksiyonlar balans dizaynında səhər və günortadan sonra dəyişdirildi. Kondisionerdən sonra siçanlar (n= 16) JMV2959 (6 mq / kq, ip) və ya bərabər həcmli vasitə məhlulu ilə vuruldu və 20 min 20 min üçün hər iki bölməyə sərbəst girmə imkanı olan iki bölmə arasındakı orta xəttə yerləşdirildi (aşağıdakı müalicə qruplarını yaratmaq; Morph-Veh və Morph-JMV2959).

Vəziyyət yer seçimi dərmanla cütləşmədə keçirilmiş ümumi vaxtın% nisbətində hesablanmışdır (yəni. post-kondisioner və kondisioner sessiyası zamanı ən az üstünlük verilən) bölmə.

JMV2959 morfin induksiyasına səbəb olan lokomotor stimullaşdırılması və siçanlarda şərtli yer üstünlüyünü təmin etdiyini nəzərə alsaq, JMV2959 (6 mq / kq, ip) morfin təsirli (20 mq / kq, ip) accumbal dopamin azad edilməsinə təsiri araşdırılmışdır. vivo ilə sərbəst hərəkət edən siçanlarda mikrodializ. Hüceyrədənkənar dopamin səviyyəsinin ölçülməsi üçün siçanlar birtərəfli olaraq nüvələrin böyüdülməsinə yerləşdirilmiş bir mikdializ zondu ilə implantasiya edildi. Buna görə siçanlar izofluran ilə anesteziya edildi (Isofluran Baxter; Univentor 400 Anesteziya bölməsi, Univentor Ldt., Zejtun, Malta), stereotaksiya çərçivəsinə (David Kopf Alətləri; Tujunga, CA, ABŞ) yerləşdirildi və qarşısını aldı. hipotermi. Ksilosain adrenalin (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, ABŞ) yerli anesteziya və karprofen kimi istifadə edilmişdir (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Göteborq, İsveç), mümkün olan ağrıları aradan qaldırmaq üçün istifadə edilmişdir. Kəllə sümüyü məruz qaldı və zond üçün bir deşik və lövbər vidası üçün bir qazıldı. Probel təsadüfi olaraq beynin sol və ya sağ tərəfinə dəyişdirildi. 1.5 mm-in ön hissəsində bregma, ± 0.7 yan tərəfdən orta xətt və beyin səthinin səthinin altındakı 4.7 mm koordinatları, nüvələrin böyüməsi üçün (Franklin və Paxinos, 1997) istifadə edilmişdir. Zondun dializ membranının (20,000 kDa, 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, İsveç) bir od / id ilə kəsilmiş 1 mm idi. Bütün zondlar təcrübədən iki gün əvvəl cərrahi şəkildə implantasiya edildi. Əməliyyatdan sonra siçanlar test gününə qədər fərdi qəfəslərdə saxlanıldı (Macrolon III).

Sınaq günündə zond bir mikroperfüzyon nasosuna (U-864 Şpris Nasosu; AgnThós AB) qoşuldu və 1.5 μl / dəq sürətlə Ringer məhlulu ilə mükəmməlləşdirildi. Bir saatlıq mikrodializ quruluşuna getdikdən sonra, hər 20 dəqiqədə perfuziya nümunələri toplandı. Təməl dopamin səviyyəsi ilk dərman / vasitə sınağından əvvəl ardıcıl üç ardıcıl nümunənin ortalaması olaraq təyin olundu və accumbal dopaminin artması bazaldan faiz artımı olaraq hesablandı. Əsas nümunələrdən sonra (N40 min 0 dəqiqəyə qədər), siçanlar JMV2959 və ya nəqliyyat vasitəsinə (0 min) vuruldu, bunun ardınca morfin və ya vasitə enjeksiyonu (20 min) edildi. Bu dərman idarələrindən sonra əlavə səkkiz 20 min nümunə toplanmışdır. Birlikdə aşağıdakı müalicə qrupları (n= Hər qrupda 8): vasitə-nəqliyyat vasitəsi (Veh-Veh), vasitə-morfin (Veh-Morph), JMV2959-vasitə (JMV2959-Veh) və JMV2959-morfin (JMV2959-Morph).

Dializatlardakı dopamin səviyyələri elektrokimyəvi aşkarlama ilə HPLC tərəfindən müəyyən edilmişdir. Bir nasos (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, İsveç), ion mübadiləsi sütunu (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μM SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, İsveç) və bir detektor (Antec Decade; Antec Leyden; Zo) , Hollandiya) VT-03 axın hüceyrəsi (Antec Leyden) ilə təchiz olunmuşdur. Sülfon turşusu 5.6 mM, limon turşusu 10 mM, natrium sitrat 200 mM, 200% EDTA, 10% MeOH olan mobil faza (pH 30) bir 0.2 км membran filtrindən (GH Polypro; PALL Gelman Laboratoriyası) istifadə edərək vakuumla süzülmüşdür. Lund, İsveç). Mobil faza 0.2 ml / dəqiqədə bir degasserdən (Kovalent AB) keçən bir axın sürəti ilə çatdırıldı və analit + 0.4 V-də oksidləşdi.

Mikrodealiz təcrübələri başa çatdıqdan sonra siçanlar çarpışdı və zondların lokalizasiyasını asanlaşdırmaq üçün zondlar pontamin göy 6BX ilə mükəmməlləşdirildi. Beyinlər bir vibroslice cihazına (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, UK) quraşdırılmış və 50 μm hissələrində kəsilmişdir. Probun yeri işıq mikroskopundan istifadə edərək kobud müşahidə ilə müəyyən edildi. Zondun dəqiq mövqeyi təsdiqləndi (Franklin və Paxinos, 1997) və statistik analizdə yalnız düzgün yerləşdirilmiş siçanlar istifadə edilmişdir.

JMV2959 müalicəsinin mükafatla əlaqəli sahələrdə MEAP, DynB və LeuArg səviyyələrinə təsiri araşdırıldı. Siçanlar ya JMV2959 (6 mq / kq, ip, n= 8) və ya bərabər həcmli bir vasitə (ip, n= 8) sonrakı beş gün üçün. Son injectiondan sonra 20 dəqiqə sonra siçanlar qurban verildi və bu siçanların beyinləri toplandı. Ayrı siçanlara ya ghrelin (0.33 mq / kq, ip, n= 8) və ya bərabər həcmli bir vasitə (ip, n= 8) sonrakı beş gün üçün. Son inyeksiyadan beş dəqiqə sonra siçanlar qurban verildi və bu siçanların beyinləri toplandı. Amigdala, striatum, prefrontal korteks, VTA və hipokampus sürətlə parçalanmış və dərhal quru buzun üzərinə qoyulmuş və sonrakı emal olunana qədər −80 ° C-də saxlanılmışdır.

Homogenləşmə və peptidin çıxarılması prosedurları əvvəllər ətraflı təsvir olunan standart bir proseduru izlədi (Nylander et al., 1997). Bir sözlə, dondurulmuş nümunələrə isti (95 ° C) sirkə turşusu (1 M) əlavə edildi. Nümunələr su banyosunda (95 ° C) 5 dəqiqə ərzində qızdırıldı, buz üzərində soyuduldu və sonra Branson Sonifier ilə homogenləşdirildi (Danbury, CT, ABŞ). Homogenate 95 ° C-də 5 dəqiqə ərzində qızdırıldı və 15 ° C və 4 ° də 12,074 min santrifüjdən əvvəl buzda soyuduldug bir Beckman GS-15R santrifüjində (Fullerton, CA, ABŞ). Ekstraktlar daha əvvəl təsvir edilmiş bir prosedura görə təmizləndi (Nylander et al., 1997). İki fraksiya toplandı: III fraksiya (Leu-Arg və MEAP) və V fraksiya (DynB). Nümunələr vakuum santrifüjdə quruduldu (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc, Waltham, MA ABŞ) və peptid analizinə qədər dondurucuda (N20 ° C) saxlanıldı.

DynB, LeuArg və MEAP-ın immunoreaktiv (ir) səviyyələri yaxşı qurulmuş radioimmunoassaylarla təhlil edilmiş və protokollar başqa yerlərdə ətraflı təsvir edilmişdir (Nylander et al., 1997). DynB təhlili zamanı keçi anti-dovşan IgG (GARGG; Bachem, Bubendorf, İsveçrə) sərbəst və antikor bağlı peptidi ayırmaq üçün istifadə edilmişdir. Dyn antiserumu (113 +) 1: 600000 son seyreltilməsində istifadə edildi. Böyük Dyn ilə çarpaz reaktivlik 100% və DynB (1 –29) 1% idi. Digər opioid peptidləri ilə çarpaz reaktivlik müşahidə edilmədi. LeuArg və MEAP təhlillərində sərbəst və antikorla əlaqəli peptidi ayırmaq üçün kömür süspansiyonundan istifadə edildi. LeuArg antiserumu (91: 6D +, son seyreltmə 1: 60000) üçün, çarpaz reaktivlik Leu-enkephalin və MEAP üçün 0.01%, DynB üçün 0.02%, DynA üçün 0.04%, alfa-neoendor üçün 0.08% az idi. MEAP antiserum 90: 3D (II) 1: 160 000 son seyreltilməsində istifadə edildi. Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg ilə qarşılıqlı reaktivlik⁶, Met-enkephalin-Arg⁶Gly⁷Leu⁸, Leu-enkephalin və Leu-enkephalin-Arg⁶ <0.1% idi

Müalicənin ümumi əsas təsiri morfin (20 mq / kq) və JMV2959 (6 mq / kq) (F (3,27) = 7.409, sistematik administrasiyasından sonra siçanlarda lokomotor fəaliyyətə təsbit edildi). P= 0.0009; nVeh-Veh, JMV8-Veh, JMV2959-Morph və 2959 üçün n= Veh-Morph üçün 7). Göstərildiyi kimi Şəkil 1A, posthoc analizi, JMV2959-in bir inyeksiyası ilə əvvəlcədən müalicənin olduğunu göstərdi (P<0.001) morfinə səbəb olan lokomotor stimullaşdırmanı (P<0.01 Veh – Veh vs Veh – Morf). Seçilmiş JMV2959 dozası, vasitə müalicəsi ilə müqayisədə lokomotor fəaliyyətə təsir göstərmədi (P> 0.05). Vasitə ilə işlənmiş siçanlarda və JMV2959-morhpine müalicə olunmuş siçanlarda lokomotor aktivlik reaksiyasında heç bir fərq yox idi (P> 0.05).

  

Şəkil 1

GHS-R1A antaqonisti JMV2959, siçanlarda morfinə səbəb olan lokomotor stimullaşdırılması, accumbal dopamin sərbəst buraxılması və şərtli yerə üstünlük verir. (A) Morfinlə əlaqəli (20 mq / kq ip) lokomotor stimullaşdırılması JMV2959 (6 mq / kq ip) tək bir inyeksiya ilə pozuldu (n= Hər qrupda 7 - 8; **P<0.01, ***P<0.001 tək yönlü ANOVA, ardından Bonferroni post-hoc testi). (B) Morfinə səbəb olan (20 mq / kq ip) vəziyyət yeri seçimi (CPP), siçanlarda kəskin tək JMV2959 (6 mq / kq ip) inyeksiyası ilə zəiflədi (n= Hər qrupda 8, *P<0.05, cütləşdirilməmiş t-test). (C) Əvvəlcə morfinin (20 mq / kq ip) nəqliyyat vasitəsi ilə müqayisədə dopamin sərbəstliyini artırmaq üçün əhəmiyyətli bir təsiri göstərdik (vaxt intervalı 40-180 dəq (P<0.001), Veh – Veh vs Veh – Morf). JMV2959 (6 mq / kq ip) ilə əvvəlcədən müalicə zamanı göstərildiyi kimi, 40 - 100 və 140 - 180 dəqiqə intervalında vasitə ilə əvvəlcədən müalicə ilə müqayisədə dopamin ifrazının morfin təsirli artması azalmışdır.^##P<0.01, ^{# # #}P <0.001, Veh-Morph müalicəsi ilə müqayisədə JMV2959-Morph). Seçilmiş JMV2959 dozasının, hər hansı bir zaman aralığında vasitə müalicəsi ilə müqayisədə akkumbal dopamin sərbəst buraxılmasına heç bir təsiri olmamışdır (P> 0.05, Veh – Veh vs JMV2959-Veh). JMV2959, 60-140 zaman intervalında morfin səbəb olan accumbal dopamin azad edilməsini azaltdı, lakin tamamilə bağlamadı.P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, Veh-Morph müalicəsi ilə müqayisədə JMV2959-Morph). Oklar JMV2959, nəqliyyat vasitəsi və morfinin enjeksiyon vaxtını göstərir. Verilər iki tərəfli ANOVA ilə analiz edildi və ardından Bonferroni post-hoc testi (n= Hər qrupda 8). Veh-veh (Meydan), Veh-Morf (romb), JMV2959-Veh (Üçbucaq), JMV2959-Morf (dairə). Bütün dəyərlər orta ± SEM deməkdir.

Böyük Şəkil bax | Hi-Res Şəkil bax | PowerPoint Slaydını yükləyin

Kondisionerdən sonrakı gündə JMV20 (2959 mq / kq) (Morph-JMV6) kəskin tək bir enjeksiyon ilə morfin təsirli (2959 mq / kq) (Morph-Veh) yer seçimi əhəmiyyətli dərəcədə pozuldu (P= 0.025, n= Hər qrupda 8; Şəkil 1B).

Siçanlardakı dopamin mikroklializ ölçmələri müalicənin ümumi əsas təsirini ortaya qoydu (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), vaxt F(11,308) = 7.05, P<0.0001) və müalicə × vaxt qarşılıqlı təsir (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (Şəkil 1C; n= Hər qrupda 8). Morfin, 40 - 180 dəqiqə intervalında vasitə müalicəsinə nisbətən artan dumbamin dopamin ifrazını artırdı (P<0.001). Göstərildiyi kimi Şəkil 1C təsiri, 2959-40 vaxt aralığında JMV80 ilə əvvəlcədən müalicə ilə azaldılmışdır (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) və 160-180 dəq (P<0.001). JMV2959, vasitə müalicəsi ilə 2959-60 zaman aralığında JMV80-morfin müalicəsi arasında bir fərq olduğu üçün morfinin yaratdığı akkumbal dopamin salınmasını azaldır, lakin tamamilə blok etmir (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) və 160 dəq (P<0.05). Seçilmiş JMV2959 dozasının, hər hansı bir zaman aralığında vasitə müalicəsi ilə müqayisədə akkumbal dopamin sərbəst buraxılmasına heç bir təsiri olmamışdır (P> 0.05).

Hazırkı tədqiqat daha sonra orexigenic peptidin fizioloji rolunun mükafat tənzimləməsinə daxil olması barədə fərziyyəni dəstəkləyir. Həqiqətən, biz bir GHS-R1A antaqonistinin periferik administrasiyasının morfinin lokomotor stimullaşdırma, NAc-dopamin səviyyəsini artırması və siçanlarda şərtli bir yerə üstünlük verilməsini artırdığını göstərdik. Gronin deyil, alt xroniki JMV2959 müalicəsinin, VTA, Hippokampusdakı DynB və striatumdakı LeuArg ir toxuma səviyyələrini artırdığını, grelin siqnalının möhkəmləndirməni tənzimləmək qabiliyyətinin opioid peptidləri ehtiva edə biləcəyinə dair ilk dəlili təmin etdik. .

Burada təqdim olunan məlumatlar GHS-R1A ziddiyyətinin morfinin siçanlardakı mezolimbik dopamin sistemini aktivləşdirmə qabiliyyətini təsir etdiyini göstərir. JMV2959-un morfinin hüceyrədən kənar akkumbal dopamin səviyyələrini artırmaq və siçovullarda stereotip bir davranışa səbəb olma qabiliyyətini maneə törətdiyini göstərən tapıntılar uyğundur (Sustkova-Fiserova et al., 2014). Dəstəkləyici olaraq, mərkəzi grelin rəhbərliyi siçovulların özünü idarə edən eroin olan mütərəqqi nisbət möhkəmləndirmə cədvəlində aktiv qolu preslərinin sayını deyil, qırılma nöqtəsini artırır (Maric et al., 2012). Grelin siqnalının narkotik asılılığının təməlində dayandığı mübahisəsi, JMV2959-un siçovullarda alkoqol istehlakının yanında almanın azaldığını və amfetamin, kokain və nikotinin səbəb olduğu mükafatın kemiricilərdəki GHS-R1A antaqonizmi ilə bloklandığını göstərən tapıntılar tərəfindən də dəstəklənir ( nəzərdən keçirmək üçün baxın Engel və Jerlhag (2014)) və grelinlə əlaqəli genlərdəki polimorfizmlərin alkoqol, siqaret və amfetamin qəbulu ilə əlaqəli olduğunu (nəzərdən keçirmək üçün baxın: Engel və Jerlhag (2014)).

Sub-xroniki JMV2959 müalicəsindən sonra striatumda, VTA və hipokampusda artan opioid peptidləri ilə mövcud tapıntılar, ilk dəfə opioid peptidləri və ghrelin siqnalları arasında qarşılıqlı təsir göstərir. Endogen opioidlər, yalnız opioidlərin deyil, digər sui-istifadə və təbii mükafatların təsirinə məruz qaldıqda və dərmanların təkrar məruz qalmasından sonra görülən uyğunlaşma proseslərində mükafatlandırıcı təsir göstərir (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000). Həqiqətən, mezolimbik dopamin sisteminin fəaliyyəti həm VTA, həm də NAc səviyyəsində (Hirose et al., 2005, Spanagel et al. 1992) endogen opioidlər tərəfindən tənzimlənir və hərəkətlərin birbaşa və ya dolayı olduğu göstərilmişdir. digər ötürücülərin modulyasiyası vasitəsilə (Charbogne et al., 2014).

Burada sub-xroniki JMV2959 müalicəsinin VTA-da MEAP səviyyəsini artırdığını gördük. MEAP, yalnız proenkephalin'dan qaynaqlanır və əsasən δ opioid reseptorlarını aktivləşdirən proenkefalin peptidlərinin markeri olaraq istifadə edilmişdir. JMV2959 müalicəsindən sonra VTA-da endogen MEAP səviyyəsinin artması morfinin mesoaccumbal dopamin neyronlarının (Johnson və North, 1992) GABA inhibe etməsini azalmasına mane ola bilər ki, bu da sonradan görülən azalmış morfin təsirinə səbəb ola bilər. JMV2959. Dəstəkləyərək, GHS-R1A, VTA-dakı GABAergic interneurons-da yerləşir (Abizaid et al., 2006). Bundan əlavə, əvvəlki tədqiqatlar göstərdi ki, JMV2959 intra-VTA infuziyası, vasitəsilə naməlum mexanizmlər, grelin səbəb olan mükafatı (Jerlhag et al., 2011), gəmiricilərdə olan Ghrelin-vasitəçili saxaroza qəbulunu (Skibicka et al., 2011), ventral teimental GHS-R1A-nın mükafat tənzimlənməsi üçün vacib olduğunu göstərir. Belə bir mübahisənin tərəfdarı olan digər aclıq tənzimləyən peptidlərin, məsələn, galanin və orexin, morfinin təltifedici xüsusiyyətlərinin vasitəçilik etdiyini göstərən tapıntılardır. vasitəsilə VTA daxilindəki yerli mexanizmlər (Narita et al., 2006, Richardson and Aston-Jones, 2012).

Striatumda, sub-xroniki JMV2959 LeuArg'ın ir səviyyəsini artırdığını gördük ki, JMV2959'ın morfin səbəbli şərtli yer seçiminə, dopamin sərbəst buraxılmasına və lokomotor stimullaşdırılmasına nail olma qabiliyyəti, heç olmasa qismən inkişaf etmiş accumbaldan asılıdır. opioid reseptorunun fəaliyyəti. LeuArg səviyyəsinin artması, dynorfin peptidlərinin enkefalinlərə enzimatik çevrilməsindən və ya LeuArg-da pozulmanın ardından artan dopaminə cavab olaraq NAc-də gücləndirilmiş Dinin buraxılmasından qaynaqlana bilər. Əvvəlki tədqiqatlar, mesolimbic dopamin sisteminin fəaliyyətinin tənzimləndiyini göstərdi vasitəsilə NAcdakı κ-opioid reseptorları (Spanagel et al., 1992) və endogen κ-opioid reseptorları, mesoaccumbal dopamine neurotransmissions'nın tonik bir inhibisyonunu təmin edir və NAc-da dopaminin sərbəst buraxıldığını təsir edən kokain kokainini azaldır (Chefer et al. 2005, biz etmədik, biz etmədik) göstərir ki, JMV2959 striatumdakı DynB səviyyələrini dəyişdirir. Buna görə, GHS-R1A antaqonizmi və dynorfinlər arasındakı qarşılıqlı təsirləri izah etmək üçün prodynorfin peptidləri barədə əlavə tədqiqatlara zəmanət verilir.

Bu işdə JMV2959 müalicəsinin hippokampal DynB səviyyəsini əhəmiyyətli dərəcədə artırdığını göstərdik. Ghrelin, dendritik onurğa formalaşması ilə yanaşı, yaddaş konsolidasiyasını artırır, uzunmüddətli potensiasiya yaradır və yaddaşın asanlaşdırılmasına təkan verir vasitəsilə kemiricilərdə hippokampal GHS-R1A (Carlini et al., 2010, Diano et al., 2006). Üstəlik, GHS-R1A nokaut siçanları Morris su labirent testində inkişaf etmiş bir məkan yaddaşını və qorxu kondisioner paradiqmasındakı vəhşi siçanlarla müqayisədə pozulmuş kontekstli yaddaş nümayiş etdirir (Albarran-Zeckler et al. 2012). DynB daxil olmaqla, Dynorphin peptidləri hipokampusda çoxdur və uzun müddətli potensiasiyanı artırır (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993), həmçinin siçovullarda məkan öyrənməsini pozur (Sandin et al., 1998). Buna görə də, GHR-R1A antaqonistinin hippokampal uzunmüddətli potensiasiyanı maneə törətməklə mükafat yaddaşı əldə edə biləcəyini fərz edirik vasitəsilə DynB-nin aktivləşdirilməsi. Birgə olaraq, bu məlumatlar JMV2959 tərəfindən yeni potensial mexanizm təqdim edir vasitəsilə opioid peptidlər möhkəmləndirməni dəyişdirə bilər. Bununla birlikdə, opioid reseptorları beyində geniş yayılmışdır ki, bu tədqiqata daxil olmayan digər sahələrin GHS-R1A tənzimlənən morfin təsirli mükafatlandırma işində iştirak edə biləcəyini düşünür. Məsələn, Ghrelin təsirli qida qəbulu və saxaroza basdıran qolu bir opioid reseptor antaqonistinin (Romero-Pico et al. 2013) mərkəzi və ya daxili hipotalamik administrasiyası tərəfindən azalır. Bununla birlikdə, digər sahələrdə opioid peptidlərin rolunu qarşıdakı tədqiqatlarda aydınlaşdırmaq lazımdır.

Endogen μ-reseptor ligandları, endomorfinlər və beta-endorfin burada təhlil edilməmişdir, buna görə JMV2959-in bu peptidlərə təsirini istisna edə bilmərik. Həqiqətən, morfinin təltifedici xüsusiyyətləri VTA-dakı μ-opioid reseptorları, həmçinin NAc (Hirose et al., 2005, Johnson and North, 1992, Murakawa et al. 2004, Yoshida et al., 1999). Bununla birlikdə, bir m-reseptor antaqonisti, GHSR- nin qabiliyyətini ifadə edən grelin təsirli qida qəbulunu (Naleid et al., 2005), ya da grrelin təsirli lokomotor stimullaşdırmasını və dupamin buraxmağı (Jerlhag et al., 2011) təmin etmir. Gücləndirməni tənzimləmək üçün 1A antaqonistinə μ-reseptorlar daxil deyildir. Digər tərəfdən, JMV2959, proenkephalin və prodynorphin-dən əldə edilən opioid peptidlərin GHSR-1A antaqonistləri tərəfindən təsirə məruz qaldıqlarını göstərən təsir göstərmişdir.

Əvvəlki tədqiqatlar göstərdi ki, sistematik grrelin administrasiyası mükafata səbəb olur (Jerlhag, 2008), asılılıq olan dərmanların təltif xüsusiyyətlərini artırır (nəzərdən keçirmək üçün Engel və Jerlhag (2014) baxın), burada sub-xroniki ghrelin müalicəsinin dəyişmədiyini göstəririk. Tədqiq olunan mükafatla əlaqəli hər hansı bir ərazidə opioidlərin peptidlərinin ir toxuma səviyyələri. Sistemli grelin administrasiyası hipotalamik bölgələrdə c-fos ifadəsini aktivləşdirir, lakin mesolimbik və hipokampal bölgələrdə deyil (Pirnik et al., 2011) və flüoresan etiketli grelin bağlanması hipotalamusun qida tənzimləyici neyronları ilə məhdudlaşır (Schaeffer et al., 2013) ). Hipotalamusdakı iz miqdarından xaric olan grrelinin periferik qrelin tətbiqindən sonra daha dərin beyin bölgələrində aşkar edilə bilməyəcəyini göstərən nəticələr ilə birlikdə götürülmüşdür (Furness et al. 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009) ), sistemli ghrelin mükafat sistemini aktivləşdirmə ehtimalını artırır vasitəsilə endogen opioidlərdən asılı olmayan dolayı mexanizmlər. Dəstəkli olaraq, Ghrelin-dən meydana gələn accumbal dopamin salınması yuxarı axan oreksigenik hipotalamik siqnal (Cone et al., 2014) tələb edir, periferik ghrelin administrasiyası siçanlarda alkoqol qəbulunu dəyişdirmir (Lyons et al. 2008) və periferik grelin zərərsizləşdirilməsi alkoqolu gücləndirmir. Siçanlarda və ya siçovullarda alkoqol qəbulunda mükafat (Jerlhag et al., mətbuatda). Ghrelinin sub-xroniki qəbulu, opioid peptidlərin toxuma səviyyəsini artırması ehtimalı nəzərə alınmalıdır, lakin bunun qarşıdakı tədqiqatlarda ətraflı araşdırılması lazımdır.

Asılılıq verən dərmanların stimullaşdırma, dopamin sərbəst buraxması və şərtli bir yerə üstünlük vermə qabiliyyəti asılılıq dərmanların gücləndirici xüsusiyyətləri ilə sıx bağlıdır və bu parametrlər asılılıq prosesinin bir hissəsini təşkil edir (Wise, 2004). Burada JMV2959-in bu mükafat parametrlərini siçanlarda aşındırdığını nəzərə alsaq, GHS-R1A-nın bağımlılık proseslərində əhəmiyyətli bir rol oynaya biləcəyini və bu proseslərdə endogen opioidlərin iştirak etdiyini fərz edirik. Birlikdə bu məlumatlar GHS-R1A antaqonistlərinin narkotik asılılığının müalicəsi olaraq izah edilməli olduğunu göstərir.

JE və EJ, İsveç Tədqiqat Şurasının qrantları ilə (Grant No. 2011-4646, 2009-2782 və 2011-4819), İsveçin beyin fondu olan LUA / ALF (Grant No. 148251) Sahlgrenska Universiteti Xəstəxanasından Alkoqol tərəfindən dəstəklənir İsveç spirt pərakəndə inhisarının araşdırma şurası və Adlerbertska, Fredrik və İnqrid Türinq, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten və Ragnar Söderberg, Vilhelm və Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut və Alice Wallenberg, Magnus Bergvke, Wérrens, Andérrs, Anibes, Enibr, Enibr, Enibr, Enibr, Enibr, Enibs, Anibr, Enbrs, Anibr, Enbrs, Anibr, Andibr, Andibr, Andibr, Andibr, Enibr, Anibr, Vibr, Anibr, Veybrs, Anibr, Tere Nilsson, Längmanska, Torsten və Ragnar Söderberg, Wilhelm və Martina Lundgren , İsveç Tibb Cəmiyyəti, İsveç Tibbi Araşdırma Cəmiyyəti və Göteborq Psixiatriya Araşdırma Vəqfi. İsveç Alkoqol Satış inhisarının Alkoqol Tədqiqat Şurası və İsveç Araşdırma Şurası (K2012-61X-22090-01-3) IN'yi dəstəklədi. Maliyyələşdirmə mənbələrinin öyrənilmə dizaynında, məlumatların toplanmasında, təhlilində və şərhində, hesabatın yazılmasında və məlumatların dərc edilməsində heç bir rolu olmayıb.