Nat Neurosci. Müəllif əlyazması; PMC Jan 1, 2014-də mövcuddur.
Son olaraq redaktə şəklində dərc olunub:
Nat Neurosci. Jul 2013; 16 (7): 10.1038 / nn.3420.
Xəbərlər yayılmışdır Jun 2, 2013. doi: 10.1038 / nn.3420
PMCID: PMC3703824
NIHMSID: NIHMS477621
Hui Wang,*,1,2,3 Florian Duklot,*,1,2 Yan Liu,2,3 Zuoxin Wang,2,3 və Məhəmməd Kabbaj1,2
Bu məqalənin nəşrin son redaktə olunmuş versiyasını əldə edə bilərsiniz Nat Neurosci
PMC-də digər məqalələrə baxın quote dərc edilmiş məqalə.
mücərrəd
Sosial monogam prairie vole (Microtus ochrogaster), çiftleşme, ortaq üstünlük təşkil etməsi ilə başlayan və oksitosin, vazopressin və dopamin daxil olmaqla bir sıra nörotransmitterlər tərəfindən tənzimlənən davamlı bağ əlaqələrini təşviq edir. Burada cüt bağ tənzimlənməsini vasitəçilik edən potensial epigenetik mexanizmləri araşdırdıq. Natrium butirat və TrichoStatin A (TSA) histone deacetylase inhibitorları, cütləşmənin olmadığı təqdirdə qadın priyali boşluqlarda tərəfdaş üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırdığını göstərir. Bu, nüvələrin böyüdülməsində oksitosin (OTR) və vasopressin V1a reseptorlarının (V1aR) müəyyən bir tənzimlənməsi ilə əlaqələndirildi, bu da onların müvafiq təbliğatında histon asetilasiyasının artması ilə baş verdi. Üstəlik, nüvənin böyüdülməsində TSA tərəfindən dəstəklənən tərəfdaş seçiminin OTR və ya V1aR blokadası ilə qarşısı alındı. Əhəmiyyətli olan, çiftleşmeli ortaq üstünlük, OTR və V1aR gen təbliğatçılarının TSA ilə eyni epigenetik tənzimlənməsinə səbəb oldu. Bu müşahidələr, TSA və cütləşmənin, epigenetik hadisələr yolu ilə ortaq seçimini asanlaşdırdığını, cütləşmənin epigenetik tənzimlənməsi üçün ilk birbaşa dəlil təqdim etdiyini göstərir.
giriş
Sosial mənsubiyyət insanın sosial davranışlarının vacib bir xüsusiyyətidir və sosial bilişsel çatışmazlıqlar şizofreniya və autizm spektri pozğunluqları, habelə asılılıq və depressiya da daxil olmaqla bir çox nöropsikiyatrik xəstəliklərdə ümumi xüsusiyyətlərdir.1. Sosial monogam prairie voles (Microtus ochrogaster) həm laboratoriya, həm də sərbəst yaşayan insanlar uzunmüddətli cüt bağlar qurduqları üçün sosial əlavənin neyrobioloji əsaslarının araşdırılması üçün çox maraqlı bir model kimi ortaya çıxdılar2-4, tərəfdaşa üstünlük deyilən tərəfdaşa qarşı seçmə mənsubiyyət davranışlarının formalaşması ilə başlanılan5. Tərəfdaş seçiminin bu formalaşması nöropeptidlər oksitosin və vazopressin (AVP) və mesolimbik dopamin də daxil olmaqla bir sıra nörotransmitterlər və hormonal sistemləri əhatə edir.5.
In ümumi, tərəfdaş üstünlük formalaşması ventral pallidum və lateral septum (LS) ildə AVP neyrotransmissiya, və nüvə accumbens (NAcc) və qadın prairie korteksində oksitosin nörotransmissiyası vasitəsilə vasitəçilik edilir6-8.
Ümumiyyətlə çiftleşme kimi təbii mükafatlandırma ilə məşğul olan dopamin də prairie boşluqlarında tərəfdaş seçimində kritik vasitəçi rolunu oynayır. NAcc-də dopamin D2 tipli reseptorların aktivləşdirilməsi (D2R), dopamin D1 tipli reseptorların aktivləşdirilməsi (D1R) həm kişi, həm də qadın priyom boşluğunda tərəfdaş seçiminin formalaşmasına mane olur.9-11.
Əhəmiyyətli olaraq, oksitosin və AVP V1a reseptorlarının, OTR və V1aR reseptorlarının gen ifadəsindəki dəyişikliklər, özləri tərəfdaş seçiminə təsir edə bilər. Məsələn, qadın prairie boşluqlarında OTR-nin həddindən artıq dərəcədə çox olması, çiftleşmemesi halında tərəfdaş seçimini asanlaşdırır.12-14.
Cüt bağlantıların tənzimlənməsindən başqa, oksitosin və AVP də sosial tanınma, təcavüz və anaya qulluq da daxil olmaqla geniş sosial davranışlarda tətbiq olunur15, 16. Qeyd edək ki, gəmiricilərdə sonuncu davranışın pozulması epigenetik mexanizmlər, o cümlədən estrogen reseptorları alfa-sının DNT metilizasiyası ilə uzun müddət davam edən nöro-kapatmalara səbəb olur.17 və AVP genləri18, həmçinin qlükokortikoid reseptoru stimullaşdırıcısının histon asetilasiyası19. Bundan əlavə, gəmirici beyində artan histon asetilasiyası ilə gen ifadəsini gücləndirən histon deasetilaza (HDAC) inhibitorları20, bu dəyişiklikləri geri ala bilər19, və cinsi reseptivlik kimi sosial davranışlara birbaşa təsir göstərir21. Əhəmiyyətli olan bir ağciyər xərçəngi hüceyrəsi xəttində HDAC inhibitoru trichostatin A (TSA), histon asetilasiyasını təbliğ etməklə birbaşa OTR transkripsiyasını artırır.22.
Buna görə də, prairie boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkilində epigenetik bir əsas təklif edilə bilər. Bu fərziyyəni sınamaq üçün əvvəlcə iki böyük HDAC inhibitorunun, natrium butiratın (NaB) və TSA'nın, yetkin qadın priyom boşluğunda tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinə təsirlərini qiymətləndirdik. Bundan sonra, qadın prairie boşluqlarında tərəfdaş seçiminə səbəb olan TSA'nın təsirlərini vasitəçilik edən molekulyar mexanizmləri araşdırdıq. Nəhayət, birlikdə yaşama zamanı TSA tərəfindən ortaya çıxan epigenetik dəyişikliklərin də cütləşmə ilə başlandığını müəyyənləşdirməyə çalışdıq.
Nəticələr
TSA müalicəsi tərəfdaş seçimini asanlaşdırır
Cinsi cəhətdən sadəlövh qadın prairie boşluqları intracerebroventrikulyar şəkildə vuruldu (icv.) 0.08, 0.4 və ya 4 olan CSF və ya CSF ilə ng TSA, 6 saatlıq bir cütləşmə olmadan bir kişi ilə birlikdə yaşamaqdan dərhal əvvəl və ortaqlarının üstünlükləri sınaqdan keçirildi. Çiftleşmeden bir kişi ilə altı saatlıq yaşama qadın prairie boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinə səbəb olmur.4 və beləliklə bu davranış paradiqması, müxtəlif dərmanların partnyor seçimini asanlaşdırmasına təsirini qiymətləndirmək üçün geniş istifadə edilmişdir5.
CSF ilə müalicə olunan heyvanlar, ortalama və ya qərib ilə 6 saatlıq çiftleşmeden birlikdə yaşadıqdan sonra seçilməyən yan-yana əlaqə yaratdılar (t15= 0.76, P = 0.46; Şəkil 1a). Ancaq bütün dozalarda TSA ilə müalicə olunan heyvanlar, qəriblə müqayisədə ortaqla daha çox vaxt keçirdi (t8= 4.35, P = TSA 0.002 üçün 0.08 ng qrupu; t15= 3.63, P = TSA 0.002 üçün 0.4 ng qrupu; və t8= 2.58, P = TSA 0.03 üçün 4 ng qrupu). Əhəmiyyətli olan, lokomotor fəaliyyətində qrup fərqləri tapılmadı (F3,46 = 1.25, P= 0.30, Şəkil 1b) və test qadın tərəfindən ya qəribə, ya da tərəfdaşa qarşı heç bir aqressiv davranış müşahidə edilmədi, bu TSA-nın təsirinin lokomotiv dəyişikliyindən və ya qəribəyə sosial rəğbətdən daha çox olmaqdan daha çox bir sosial üstünlük olduğunu göstərir.
TSA, ortaq üstünlüklərinin meydana gəlməsində iştirak edən beyin quruluşlarında histon asetilasyonunu artırıb-artırmadığını araşdırmaq üçün ayrıca bir qadın qrupuna orta dozada TSA (0.4) vuruldu. ng) və 30 dəqiqə, 2 və ya 9 saat ərzində cütləşmə olmadıqda bir kişi ilə birlikdə yaşayır. Qeyd edək ki, qlobal histon H3 asetilasyon (Lys14) səviyyələrində hər iki nöqtədə həm NAcc, həm də caudate putamen'də əhəmiyyətli bir dəyişiklik aşkar edilə bilməz (P > Bütün qruplar üçün 0.05, Şəkil 1c & d). Bu, TSA, NAccdə qlobal histon H3 asetilasyonuna və ya caudate putamen'ə təsir etməməsinə baxmayaraq, çiftleşmeden ortaq üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırdığını göstərir.
Əhəmiyyətli olan, natrium butirat, NAcc'də qlobal histon H6 asetilasyonunun (Lys3) artması ilə əlaqəli, cütləşmədən 14 saat ərzində bir kişi ilə bir yerdə yaşadıqdan sonra qadın priyali boşluqlarda tərəfdaş seçimini asanlaşdırdı.Əlavə Şəkil 1). Tərəfdaş seçim üstünlüklərinin formalaşmasına TSA-nın təsiri, digər tərəfdaş üstünlüklərinin asanlaşdırılmasında TSA-nın qeyri-spesifik təsirindən daha çox HDAC inhibisyonunun iştirakını nəzərdə tutan başqa bir HDAC inhibitoru ilə yayıla bilər. TSA'nın daha spesifik və affin sinif I / II HDAC inhibitoru olduğunu nəzərə alsaq23, 24, və TSA'nın davranış təsirlərinin NaB'dan daha çox açıq olduğunu ifadə edərək, tədqiqatın aşağıdakı hissələrində xüsusi molekulyar əlaqələri araşdırmaq üçün TSA-nı NaB üzərində istifadə etməyi seçdik.
TSA tərəfindən dəstəklənən tərəfdaş seçiminin molekulyar əlaqələri
Kütlə NAcc-də gen ifadə səviyyəsindəki dəyişikliklər monoqam və monoqam olmayan boşluqlar arasındakı fərqli cütləşmə strategiyaları ilə əlaqələndirilmiş və xüsusən də prairie boşluqlarında tərəfdaş üstünlüklərinin formalaşması ilə əlaqələndirilmişdir.12, 13, 25, 26, TSA-nın dəstəklədiyi tərəfdaş seçiminin formalaşmasının NAcc-də gen ifadəsinin dəyişməsi ilə əlaqəli olub olmadığını qiymətləndirdik.
TSA müalicəsi (0.4) ng, icv.) CSF ilə müalicə edilən NNcc-də 2 saatlıq bir yerdə yaşamaqdan sonra OTR mRNA səviyyəsinin artmasına səbəb oldu (t10 = 2.38, P = 0.038, Şəkil 2a), 9 saatlıq bir yerdə yaşadıqdan sonra qorunmağa meyllidir (t9 = 2.17, P = 0.058, Şəkil 2b). TSA enjeksiyonundan sonra NAcc 1 saatda V2aR mRNA-da cüzi, lakin əhəmiyyətli bir artım müşahidə olunmasa da, D1R ya da D2R daxil olmaqla ölçülmüş digər mRNA-ların hər hansı bir nöqtəsində digər qrup fərqləri aşkar edilmədi (P > 0.05 , XNUMX, Şəkil 2a, b). Əhəmiyyətli olan, kaudat putamenində hər hansı bir nöqtədə və ölçülmüş hər mRNA üçün qrup fərqləri müşahidə edilmədi (P > Bütün qruplar üçün 0.05, Şəkil 2c, d), TSA ilə müalicə olunan heyvanlarda müşahidə olunan OTR mRNA artımının NAcc'ə xas olduğunu söylədi. Bundan əlavə, belə tənzimləmə yalnız bir kişi ilə birlikdə yaşadıqdan sonra mövcud idi, belə ki NAcc-də OTR və V1aR mRNA səviyyələri TSA inyeksiyasından sonra 2 saat sonra dəyişməz qaldı (CSF qrupu üçün 100.0% ± 11.70, TSA üçün 86.7% ± 12.11) qrup, t12 = 0.79, P = 0.444; V1aR: CSF qrupu üçün 100.0% ± 26.24, TSA qrupu üçün 92.3% ± 13.75, t9 = 0.27, P = 0.791).
Daha yüksək OTR mRNA səviyyəsinə uyğun olaraq, TSA ilə müalicə olunan heyvanlar həm NAcc'də (2 saat) həm də zaman nöqtələrində daha yüksək OTR protein səviyyələrini nümayiş etdirdilər: t10 = 2.34, P = 0.041; 9 saat: t10 = 3.16, P = 0.01, Şəkil 2e, f), lakin ehtiyatsız putamen deyil (t10 = 0.41, P = 0.69, Şəkil 2g, h). Maraqlıdır ki, V1aR mRNA səviyyələrində NAcc-də 2 və ya 9 saatdan sonra TSA enjeksiyonundan sonra aşkar edilə bilməz (Şəkil 2a, b), NAcc-də V1aR protein səviyyəsi, CSF ilə müalicə olunan heyvanlarla müqayisədə 9 saatda əhəmiyyətli dərəcədə artmışdır (t9 = 3.46, P = 0.007, Şəkil 2f) lakin ehtiyatsız putamen deyil (t10 = 0.98, P = 0.35, Şəkil 2h). Bəzi dəyişikliklərə baxmayaraq, NAcc və kaudat putamenindəki D1R və D2R protein səviyyələri TSA rəhbərliyi tərəfindən əhəmiyyətli dərəcədə təsirlənməmişdir (P > 0.05 , XNUMX, Şəkil 2e-h).
TSA, okstr və avpr1a-nın histon asetilasiyasını asanlaşdırır
TSA müalicəsindən sonra birlikdə yaşamaqdan sonra həm MRNA, həm də OTR üçün protein səviyyəsinin artması TSA'nın transkripsiyasını artırdığını söylədi oxtr, zülalın tərcüməsini və ya dövriyyəsini dəyişdirmək əvəzinə, OTR üçün gen kodlaşdırmasıdır. Üstəlik, NX-də V1aR protein səviyyəsi TSA müalicəsinin ardından mRNA səviyyələrində cüzi lakin əhəmiyyətli bir artım olmaması ilə daha yüksək idi (Əncir 2). TSA'nın güclü I və II HDAC inhibitoru olduğunu nəzərə alsaq23, 24, 27, TSA-da histon asetilasiyasının artdığını fərz etdik oxtr və avpr1a NAcc-dəki promouterlər, ardından transkripsiyalarını artırdılar. Heyvanların yeni bir dəstəsi alındı icv. TSA enjeksiyonu (0.4) ng) qurban kəsilmədən əvvəl 30 dəqiqə boyunca cütləşmədən bir kişi ilə birlikdə yaşadı. 30 dəqiqəlik pəncərə, siçovullarda və siçanlarda yerli TSA enjeksiyonundan sonra histon asetilasiyasının maksimum artımını bildirən əvvəlki işlərə əsasən seçilmişdir28, 29. Da H3K14 asetilasiya oxtr və avpr1a sonra promosyonlar, xromatin immunopretajı ilə təhlil edildi.
Əvvəllər müşahidə olunan OTR mRNA və zülal səviyyəsinin artmasına uyğun olaraq, TSA ilə müalicə olunan heyvanlar, histoloji H460 asetilasyonunda çox yüksək bir artım (+ 3%) nümayiş etdirdi. oxtr gen təbliğçisi, NAcc-də CSF ilə müalicə olunan idarəetmə ilə müqayisədə (t10 = 5.88, P = 0.0002), lakin ehtiyatsız putamen deyil (t9= 0.31, P = 0.76, Şəkil 3a). Bundan əlavə, histon H3 asetilasiyası da avpr1a NAcc-də TSA rəhbərliyindən (+ 30%) sonra promouter 196 dəqiqə əhəmiyyətli dərəcədə yüksəldi (t10 = 3.12, P = 0.01) lakin ehtiyatsız putamen deyil (t9= 0.38, P = 0.71), CSF ilə müalicə olunan idarəetmə ilə müqayisədə (Şəkil 3b). Buna görə, TSA, bir kişi ilə birlikdə yaşamağın başlamasından 30 dəqiqə əvvəl NAcc-də histon asetilasiya sahəsini artırdı.
TSA, OTR və V1aR vasitəsilə tərəfdaş seçimini asanlaşdırır
Əvvəlki təcrübələr toplusundan, molekulyar fəaliyyət modeli ortaya çıxır, burada birlikdə yaşama zamanı TSA, histon asetilasiyasını gücləndirir. oxtr və avpr1a təşviq edənlər, bundan sonra transkripsiyalarını artıraraq, birlikdə yaşama dövrünün başlamasından sonra 1 saata qədər daha yüksək OTR və V9aR protein səviyyələrini artırırlar. Əhəmiyyətli olan, bu TSA effekti ehtiyatlı olan putamen təsirsiz qaldığı üçün sayt xarakterlidir. Burada TTR-in OTR və V1aR artımının tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinin asanlaşdırılması ilə əlaqəli olub olmadığını yoxladıq. Qadın prairie voles TSA (0.04) iç içə NAcc inyeksiyasını aldınəvvəlcədən enjeksiyon ilə və ya olmadan (hər tərəfə g) TSA enjeksiyonundan əvvəl 30 dəqiqə, 0.5nİki fərqli OTR antaqonistindən birini, OTA (B) və OTA (T) və ya V1aR antaqonistini (V1aRA) ehtiva edən CSF və ya CSF'nin hər tərəfinə g). TSA inyeksiyasından dərhal sonra, qadınlar cütləşmədən 6 saat ərzində bir kişi ilə birlikdə yaşadılar və ortaq seçim testi edildi.
CSF ilə müalicə olunan heyvanlar ortaq bir üstünlük göstərmədi (t5 = 0.17, P = 0.87, Şəkil 4a). Bununla birlikdə, TSA ilə müalicə olunan heyvanlar "qərib" lə müqayisədə "tərəfdaş" ilə yan-yana təmaslarda daha çox vaxt sərf etdi və bu, birbaşa NAcc-ə tək bir TSA enjeksiyonun, cütləşmədən tərəfdaş seçimini asanlaşdırmaq üçün kifayət olduğunu söylədi (t5 = 7.04, P = 0.0009). Maraqlıdır ki, OTA (B), OTA (T) və ya V1aRA ilə əvvəlcədən müalicə olunaraq ya OTR ya da V1aR-in blokadası TSA-nın təsirinin qarşısını aldı (P > Bütün qruplar üçün 0.05). Lokomotor fəaliyyətdə heç bir qrup fərqi tapılmadığından (F4,32 = 1.89, P = 0.14, Şəkil 4b), bu məlumatlar, NAcc'dəki TSA'nın, OTR- və V1aR vasitəçiliyi mexanizmləri vasitəsi ilə bir davranışa uyğun şəkildə tərəfdaş seçiminin formalaşmasını asanlaşdırdığını göstərir.
Çiftleşme TSA kimi bənzər bir nörodavapasiyanı təşviq edir
Əvvəlki müşahidələrimizdən sonra, qadın NAcc-də oksitosin və vazopressin nörotransmissiyasının epigenetik potensiallığının, çiftleşmemesi halında ortaq üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırmaq üçün kifayət olduğunu müəyyən etdik. Partnyor üstünlüklərinin təbii formalaşması zamanı bu nöroadaptasyonların da baş verib-verməməsini araşdırmaq üçün, qadın prairie boşluqlar 24 saat boyunca bir tərəfdaşın üstünlük əldə etməsinə səbəb olan cütləşmə iştirakı ilə XNUMX saat ərzində bir kişi ilə birlikdə yaşadılar.4, qurban kəsdi. Cinsi sadəlövh qadınlarla müqayisədə həm OTR, həm də V1aR mRNA və NAcc'də protein səviyyəsində artım müşahidə etdik (OTR: + 38%, t10 = 2.68, P = MRNA üçün 0.02, və + 58%, t8 = 3.05, P = Zülal üçün 0.01; V1aR: + 89%, t14= 2.53, P = MRNA üçün 0.02, və + 26%, t20 = 2.23, P Zülal üçün 0.037, Şəkil 5a, b).
Həm OTR, həm də V1aR üçün mRNA və zülal səviyyələri cütləşmə ilə birlikdə yaşadıqları üçün bu tənzimlənmənin epigenetik genişləndirmə ilə əlaqəli olub olmadığını araşdırdıq. oxtr və avpr1a gen transkripsiyası. Beləliklə, yeni bir qadın dəstəsi bir kişi ilə 6 saat çiftleşmə və H3K14 asetilasyonu ilə birlikdə yaşadı oxtr və avpr1a xromatin immunopretajı ilə ölçülən təbliğatçılar. OTR və V1aR mRNA və zülal səviyyəsinə uyğun olaraq, qadın prireie gövdələri daha yüksək H3K14 asetilasyon göstərir oxtr və avpr1a cinsi sadəlövh qadınlarla müqayisədə NAcc-dəki təbliğçilər (oxtr: t9 = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t9 = 2.91, P = 0.017 Şəkil 5c, d). Bu məlumatlar, qadın prairie boşluqlarında tərəfdaş seçimini etibarlı şəkildə təmin edən bir yerdə yaşama paradiqmalarının TSA müalicəsindən sonra müşahidə edildiyi kimi, epigenetik mexanizmlər vasitəsi ilə NAcc-də OTR və V1aR ifadəsinin tənzimlənməsini təşviq etdiyini göstərir.
Müzakirə
Hazırkı araşdırmada ilk dəfə partnyor üstünlük təşkil etməsinin epigenetik tənzimlənməsini bildiririk. Birincisi, bir HDAC inhibitorunun tətbiqi ilə NAcc-də artan histon asetilasyonunun, cütləşmə olmadığı təqdirdə, yetkin qadın priyom boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırdıq. TBuna görə də, qadınlarda tərəfdaş üstünlüklərinin formalaşmasının epigenetik olaraq idarə olunduğuna dair birbaşa dəlil ortaya qoyduq, çünki birlikdə yaşama və kişi ilə cütləşmə artdı. oxtr və avpr1a NAcc'də inkişaf etmiş histon asetilasiyası ilə genlərin ifadə edilməsi. NAcc-də TSA rəhbərliyi tərəfdaş seçimini təşviq etdi və NAcc-də OTR mRNA və zülalların daha yüksək olmasına səbəb oldu. Üstəlik, qlobal histon H3 asetilasyonu TSA ilə müalicə olunan qadınlarda təsirlənməmiş olsa da, bu anda histon asetilasiyasının əhəmiyyətli dərəcədə zənginləşməsi olmuşdur. oxtr NAcc-dəki promouter, TSA rəhbərliyindən sonra 30 dəqiqə əvvəl müşahidə edildi. Nəhayət, NAcc-də OTR-nin bloklanması TSA-nın dəstəklədiyi tərəfdaş seçiminin qarşısını almaq üçün kifayət idi. Bənzər epigenetik yönümlü dəyişikliklər, cütləşmə ilə birlikdə yaşadıqdan sonra ortaq seçimini şərtləndirən məlum prosedurlar altında aşkar edildiyi üçün məlumatlarımız sosial davranışın epigenetik tənzimlənməsi üçün bir model irəli sürdü. DBir kişi, TSA və ya çiftleşmə ilə birlikdə yaşama sürətlə müəyyən bir histon H3 asetilasyonunu sürətləndirir. oxtr transkripsiyasını artıran NAcc-də təbliğatçı daha yüksək OTR mRNA və protein səviyyəsinə səbəb olur və nəticədə tərəfdaş üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırır.
Qadın prairie boşluqlarında, 6 saat bir cütləşmə olmadan bir kişi ilə birlikdə yaşamaq, tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinə səbəb olmur4və bu davranış paradiqması, ortaq seçiminin induksiyasına farmakoloji manipulyasiyaların təsirini araşdırmaq üçün istifadə edilmişdir5. Araşdırmamızda, duzlu və ya CSF ilə müalicə olunan tərəfdaşların üstünlükləri inkişaf etmədiyi halda, NaB və ya TSA ilə müalicə olunan qadın priyali boşluqlar etdi. Nə NaB, nə də TSA ümumi lokomotivə təsir göstərmədiyi üçün ortaq seçiminə təsirləri lokomotivə ikinci dərəcəli təsirlərdən daha çox davranışa bənzəyirdi. TSA-nın bu xüsusi təsiri molekulyar müşahidələrimizlə daha da təsdiqləndi. Həqiqətən idarə olunmasına baxmayaraq icv., NAcc'də gen ifadəsinin müəyyən bir dəyişikliyini aşkar edə bildik, ancaq bitişik bir quruluşda deyil, caudate putamen. Bundan əlavə, hətta NAcc, D1R və D2R mRNA və protein səviyyələri təsirsiz qaldı. Bu spesifiklik həm I, həm II siniflərə təsir edən TSA kimi geniş bir HDAC inhibitoru üçün təəccüblü görünür. Buna baxmayaraq, TSA'nın məməli genomdakı cinslərin yalnız kiçik bir hissəsinin ifadə edilməsinə təsir etdiyi bildirildi30-32, siçanlarda da daxil olmaqla20.
Burada Lys3-də H14 histonunun asetilasiyası olduğunu göstərdik oxtr serebral plastiklik zamanı daxil olmaqla inkişaf etmiş bir gen transkripsiyası ilə əlaqəli bir dəyişiklik33, 34, daha yüksək OTR mRNA və protein səviyyəsini vurğulayır. TSA-ya cavab olaraq, histon asetilasyonu da oxtr təbliğçi artır və insan hüceyrəsi xəttində onun transkripsiyasını aktivləşdirir22, tapmağımızı dəstəkləyir oxtr epigenetik olaraq tənzimlənə bilər. NAcc-dəki OTR-in yerli blokadası TSA-nın davranış təsirlərinin qarşısını almaq üçün kifayət olduğundan, məlumatlarımız, birlikdə yaşama müddətində NAcc-də olan TSA-nın OTR-in ifadəsini tərəfdaş seçiminin formalaşmasına kömək etdiyini göstərir. Üstəlik, 24 saatlıq çiftleşmə ilə birlikdə yaşamaq, qadın priliie boşluqlarında tərəfdaş seçimini etibarlı şəkildə inkişaf etdirmək üçün bilinən bir prosedur, qadın NAcc-də OTR ifadəsinin oxşar artımına səbəb oldu. Bu, oksitosinin və onun reseptorunun qadın boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinin neyrobiologiyasında iştirakı ilə tam uyğundur. Çiftleşme, NAcc'də hüceyrədənkənar oksitosin səviyyəsinin artmasına səbəb olur25, və Oksitosinin NAcc'ə yerli infuziyası, çiftleşmemesi halında ortaq üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırır8. Üstəlik, OTR antaqonistləri oksitosin qəbulu və ya çiftleşmə nəticəsində yaranan tərəfdaş üstünlük təşkilini maneə törədir8, 35. Əhəmiyyətli olan, qadın NAcc-dəki OTR-nin viral vasitəçi overtekspressi, tərəfdaş üstünlük təşkil etməsini asanlaşdırmaq üçün kifayətdir12, 13.
OTR rolunu gücləndirməklə yanaşı, əldə etdiyimiz nəticələr, cütləşmə olmadığı bir kişi ilə birlikdə yaşama zamanı epigenetik mexanizmlər vasitəsilə OTR gen ifadəsinin aktivləşdirilməsinə dair dəlil də təqdim edir. Həqiqətən, tərəfdaş seçimini inkişaf etdirmək üçün kifayət etməsə də, qısa müddət ərzində cütləşmədən bu cür ortaqlıq ortaq üstünlüklərinin formalaşmasına əsaslanan neyrobioloji prosesləri aktivləşdirir. Məsələn, bir kişiyə iki saat sərbəst məruz qalma qadın NAccdə oksitosinin sərbəst buraxılmasında yüngül, lakin əhəmiyyətsiz yüksəlişlərə səbəb olur.25. Buna görə TSA və ya NaB, ortaq üstünlük inkişafını asanlaşdıran bir kişi ilə birlikdə yaşamaqla əlaqəli neyro-gücləndirmə təklif edir. Maraqlıdır ki, bu cür potensiasiya, I və II sinif HDAC inhibitorlarının, o cümlədən NaB və TSA, nəzarət heyvanlarında uzunmüddətli yaddaş meydana gəlməsinə səbəb olmayan bir tədris hadisəsinin konsolidasiyasını asanlaşdırdığı gəmiricilərdə bildirilmişdir.36, 37. Bu anlayışın tərəfdarı olaraq, uzun müddət birlikdə yaşamaq (məsələn., 48 saat) cütləşmə olmadıqda da tərəfdaş seçimini aça bilər4. Qadın NAcc-də birləşən cütləşmə ilə birlikdə yaşanmanın TSA müalicəsi ilə birlikdə yaşadıqdan sonra müşahidə edilənlər ilə eyni epigenetik mexanizmlər vasitəsi ilə OTR və V1aR ifadə ilə tənzimlənməsinin başlandığını qeyd etmək vacibdir ki, bu da TSA və çiftleşmənin təşviq etmək üçün eyni yolları təsir etdiyini göstərir tərəfdaş üstünlük formalaşdırılması. Əhəmiyyətli olan TSA, qadın NAccdə bir kişi ilə birlikdə yaşama halında OTR və V1aR səviyyəsinin yüksəldilməsinə səbəb olmur. Ümumilikdə, bu TSA öz-özünə aktivləşmək əvəzinə, kişi ilə birlikdə yaşadığı endogen neyrodaptasiya potensialı vasitəsilə ortaq üstünlüklərinin formalaşmasını asanlaşdırdığı fərziyəsini dəstəkləyir.
Our araşdırması, NAcc V1aR'nın qadın tərəfdaşına üstünlük verilməsində kritik bir rolunu vurğulayır, çünki TSA ilə müalicə olunan heyvanlar blokada TSA'nın dəstəklədiyi tərəfdaş üstünlük təşkil etməsinin qarşısını almış V1aR səviyyələrini daha yüksək göstərir.. Üstəlik, bu təsirlər daha yüksək histon asetilasiyası ilə əlaqələndirildi avpr1a təşəbbüskar, V1aR mRNA-nın qeyri-optimal vaxt nöqtəsinə görə əhəmiyyətli dərəcədə yüksəlməsinə baxmayaraq. Hissə olmayan zülalların asetilasiyası ilə TSA tərəfindən protein sabitliyinin tənzimlənməsini istisna edə bilmərik38, bu tapıntı oxşar olduğunu göstərir oxtr təqdimatçı, TSA təşviq edə bilər avpr1a yerli histon asetilasiyası ilə transkripsiya. AVP-nin kişilərin cüt bağlanmasında verdiyi töhfələr izah edildi5, qadının davranışındakı rolu hələ də mübahisəlidir. Bir tərəfdən, bir icv. AVP enjeksiyonu həm V1aR, həm də OTR blokadası ilə qarşılanan həm kişi, həm də qadın boşluqlarda tərəfdaş seçimini asanlaşdırır39. Digər tərəfdən, bir icv. V1aR antaqonistinin enjeksiyonu, kişilərdə cütləşməyə səbəb olan tərəfdaş seçimini bloklayır40. Ancaq bütün bu işlər istifadə edildi icv. enjeksiyonlar, cəlb edilən strukturlar haqqında hər hansı bir fikir verməyin qarşısını alır. Burada, NAcc içərisindəki AVP nörotransmisiyasının qadın boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkilində iştirak edə biləcəyinə dair ilk sübutları təqdim edirik, ədəbiyyatın əksəriyyəti ventral pallidum, yan septum, yatağın nüvəsi kimi müxtəlif sahələrdə iştirakını təsvir edir. stria terminalis və kişilərdə amigdala5. Buna görə də, qadının NAcc-də OTR və ya V1aR-in blokadasının TSA müalicəsindən sonra tərəfdaş seçiminin yaranmasının qarşısını almaq üçün kifayət etməsi, tərəfdaş seçiminin formalaşmasının həm V1aR, həm də OTR-in aktivləşdirilməsini tələb etdiyini söyləmək maraqlı olar.. Tonun tapılması, LS-də həm OTR, həm də V1aR-a eyni vaxtda daxil olmağın AVP-lə əlaqəli tərəfdaş seçimi üçün zəruri olduğunu göstərən kişi çuxurlarında daha əvvəl aparılan bir müşahidəyə uyğundur və dəstəkləyir.6. Üstəlik, TSA ilə müalicə olunan heyvanlarda həm OTR, həm də V1aR səviyyəsində müəyyən bir artımın müşahidəsi, cüt birləşmə üçün AVP və oksitosin nörotransmissiyalarının eyni vaxtda aktivləşdirilməsini tələb edir.
Oksitosin və AVP ilə birlikdə, NAcc'dakı dopamin nörotransmesi, qadın boşluqlarında tərəfdaş üstünlük təşkil etməsini tənzimləyir.9. Çiftleşme NAcc-də dopamin sərbəst buraxılmasına səbəb olur9, reseptor səviyyəsindəki dəyişikliklər yalnız cüt müddətli cütləşmə ilə birlikdə yaşayan 24h-dən daha uzun bir müddət sonra müşahidə olunur10. Bu müşahidələrə uyğun olaraq, TSA ilə müalicə olunan qadın çöllükləri, dopamin D1R və D2R reseptorlarında əhəmiyyətli dərəcədə dəyişmədən tərəfdaş seçimini nümayiş etdirdilər. Buna görə də, dopamin reseptor tənzimləməsinin olmaması TSA-nın spesifikliyinə başqa bir sübut təqdim edir.
Məlumat məlumatlarımız ilk dəfə cüt bağlantının neyrobiologiyasında bir epigenetik bir komponentdir və TSA, qadın həyətində təbii molekulyar reaksiya verən və daha güclü sosial qarşılıqlı əlaqələrin meydana gəlməsini təşviq edən qadın meylli boşluqlarda "icazə verilən bir vəziyyət" meydana gətirdiyini təklif edir. tərəfdaş seçiminə aparan. Buna görə TSA tərəfindən dəstəklənən tərəfdaş seçiminin daha da gücləndirilə biləcəyini və davamlı əlaqəyə səbəb ola biləcəyini fərz etmək cazibədardır. İştirak edən xüsusi HDAC-lərin müəyyənləşdirilməməsi qalsa da, seçmə təcavüz və iki valideynli qayğı kimi çöl yerlərində monoqamlı həyat strategiyası ilə əlaqəli digər davranışlara TSA-nın təsirini daha da araşdırmaq maraqlı olardı. İnsanlarda cüt bağların neyrobioloji mexanizmlərinin modelləşdirilməsində prairie boşluqlarının aktuallığını nəzərə alaraq5, və klinik sınaqlarda artıq perspektivli HDAC inhibitorları24, 41, 42, məlumatlarımız sosial davranışlara təsir etmək üçün yeni farmakoloji imkanlar açır.
metodika
Mövzu
Cinsi sadəlövh qadın prairie voles (Microtus ochrogaster) laboratoriya yetişdirmə koloniyasından 21 yaşında süddən keçirilmiş və eyni cinsli bacı cütlüklərdə plastik qəfəslərdə (12 × 28 × 16 sm) su və qida ilə təmin edilmişdir ad libitum. Bütün qəfəslər bir 14: 10 h yüngül qaranlıq bir dövr altında saxlanıldı və temperatur təxminən 20 ° C idi. Bütün heyvanlar 70 - 90 yaşa çatdıqda təsadüfi olaraq eksperimental qruplara ayrıldı. Istifadə olunan heyvanların sayı, güc analizi ilə birlikdə qrupumuz və digərləri tərəfindən sahədəki əvvəllər aparılan tədqiqatlara əsaslanır. Təcrübə prosedurları Florida Dövlət Universitetinin İnstitusional Heyvanlara Qayğı və İstifadə Komitəsi tərəfindən təsdiq edilmişdir.
Narkotiklərlə
Sodyum butyrate (NaB) və salin içərisində həll olunan Trichostatin A (TSA), süni serebrospinal maye daşıyıcısında (CSF, BioFluids, Rockville, MD) hər ikisi Sigma-Aldrich (St Louis, MO) -dən alındı. NaB daxilə enjekte edildi (ip) siçanlarda bir neçə beyin quruluşunda histon asetilasiyasına səbəb olduğu bilinən 600 mq / kq dozada43, 44. Eynilə, TSA üçün istifadə olunan doza diapazonu, yerli histon asetilasyon hadisələrini və gəmiricilərdə gen ifadəsindəki dəyişmələri təhrik etməkdə effektivliyini təyin edən əvvəlki işə əsaslanırdı.19, 20. Seçici V1aR reseptor antaqonisti V1aRA, d(CH2)5[Tyr (Me)] AVP və OTR antaqonisti OTA (B), [d(CH2)5, Tyr (Mən)2, Thr4, Tyr-NH29] -OVT), Bachem-dən (Torrance, CA) əldə edilmişdir. İkinci, daha seçici OTR antaqonisti OTA (T), dGly-NH2-d(CH2)5 [Tyr (Mən)2, Thr4] OVT45, doktor Maurice Manning (Toledo Universiteti, OH) tərəfindən xeyirxahlıqla təmin edildi. İstifadə olunan bu antaqonistlər və dozalar müvafiq olaraq ya V1aR ya da OTR üçün seçiciliyini nümayiş etdirən əvvəlki tədqiqatlar əsasında seçilmişdir35, 39, 46-49.
Stereotaksik konservasiya və mikroinjeksiyon
Qadınlar natrium pentobarbital (1mg / 10g bədən çəkisi) ilə anesteziya edildi və 26 ölçülü paslanmayan polad bələdçi cannulae (Plastics One, Roanoke, VA) stereotaksiya ilə yanal mədəcikə yönəldilmiş (birtərəfli olaraq; bar2.5 mm enində burun çubuğu). rostral, 0.6 mm yanal və 1.0 mm ventral (bregma üçün) və ya xüsusi olaraq NAcc-ə (ikitərəfli; bar2.6 mm-də burun çubuğu, 2.5 mm rostral, ± 1.7 mm ikitərəfli və Bregma üçün 1.0 mm ventral). 4.5 gün ərzində bərpa edildikdən sonra subyektlər TSA-nın müxtəlif konsentrasiyalarını ehtiva edən ya CSF ya da CSF mikroinjeksiyonlarını aldılar. OTR və ya V3aR üçün seçici antaqonistlər istifadə edildikdə, TSA-ya qədər 1 dəqiqə əvvəl vuruldu. Enjeksiyonlar, 30 nL enjeksiyon həcmində yan ventrikülün içərisinə hədəf istiqamətə 33 mm aşağıda uzanan 1 mm ölçülü iynə ilə vuruldu.icv.) və ya hər tərəfə 200 nL NAcc daxil edin. İynə bir polietilen-20 boru vasitəsilə Hamilton şprisinə (Hamilton, Reno, NV) bağlandı və enjeksiyon başına 1 dəqiqə tələb edən plunger depressiyası yavaş-yavaş aparıldı. Təcrübənin sonunda, bütün subyektlər sürətli dezapitasiya ilə qurban verildi və təcrübə şəraitinə kor bir müşahidəçi tərəfindən cannulae yerləşdirilməsini yoxlamaq üçün çıxarıldı. Yerləşdirilməmiş kətillər olan mövzular məlumat təhlilindən kənarlaşdırıldı.
Birgə yaşamaq və tərəfdaş seçim testi
Dərhal izləyin ip., icvvə ya narkotik tərkibli NAcc inyeksiyasında, qadınlar cütləşmədən 6 saat ərzində bir kişi ilə birlikdə yaşadılar. Çiftleşmənin olmaması videokadr davranışını araşdıraraq təsdiqləndi. Çiftleşmə, estrogen köklü qadınlar ilə birlikdə yaşama səbəb olan nöro-kapatmaların tədqiqi üçün (gündə 2µg, ip., 3 gün ərzində) 6 və ya 24 saat ərzində bir kişi ilə yaşadı və cütləşmənin olması təsdiq edildi bir posteriori videotəkildə (ilk 6 saatlıq qonaqlıq dövründə 11-dən 6 döngələrə qədər).
Tərəfdaş seçim imtahanı, əvvəllər təsvir olunduğu kimi, 6 saatlıq qonaqlıqdan dərhal sonra həyata keçirildi11. Qısaca, üç kameralı test aparatı, hər birində bir yaşayış həyatı dövründə istifadə olunan tanımadığı bir kişi “qərib” və ya tanış bir kişi “ortağı” olan bir-birinə paralel eyni iki qəfəsə birləşdirilmiş neytral qəfəsdən ibarət idi. Qadın subyektlər 3 saatlıq sınaq zamanı aparat boyunca sərbəst hərəkət edirdilər və stimul verən kişilər bir-birləri ilə birbaşa təmasa imkan vermədən qəfəslərinə bağlandılar. Bütün sessiya videoya çəkildi və mövzunun tərəfdaşla ya da qəriblə təmasda olma müddəti daha sonra bioloji qruplardan xəbərsiz bir təcrübəli təcrübəçi tərəfindən təyin edildi. Bir tərəfdaşın üstünlüyü, cütlü, iki quyruqlu tərəfindən təyin olunduğu kimi, tərəfdaşla qarşılıqlı bədənə təmasda əhəmiyyətli dərəcədə daha çox vaxt sərf edən subyektlər olaraq təyin olundu t-test. Bundan əlavə, üç kameralı aparat, dölün stimullaşdırıcı kameralara daxil olması ilə göstərilən lokomotor fəaliyyətini təyin etməyə imkan verən fotobayım sensorları ilə təchiz olunmuşdur. Bu lokomotor hesab, beləliklə ümumi fəaliyyət, narahatlıq və ya yeni bir mühitin dəyişdirildiyi kəşfiyyat, qrupumuzun və digərlərinin istifadə etdiyi kimi qadınların davranışlarına dərmanların təsiri ikinci dərəcəli təsirlərini idarə etməyə imkan verir.12.
RNT və zülalların çıxarılması
Sürətli dekapitasiya ilə qadınlar qurban verildi və beyinlər dərhal çıxarıldı və quru buz üzərində donduruldu. Coronal bölmələr (200 µm) bir kriyostatda kəsilmiş və şaxta mikroskop slaydlarına quraşdırılmışdır. Bir 1 mm diametrli ikitərəfli toxuma yumruları bütün NAcc və kaudat putamendən götürüldü, sonuncu bir nəzarət sahəsi olan və işlənilənə qədər −80 ° C-də saxlanılmışdır. Cəmi RNT və zülallar istehsalçı təlimatlarına uyğun olaraq TRI-Reagent protokolundan istifadə edilərək alındı (Molekulyar Tədqiqat Mərkəzi, Cincinnati, OH).
Western-blot tərəfindən zülal ifadələrinin təhlili
Bir 10% poliakrilamid gelində (histonlar üçün 15%) zülallar nitroselüloz membranlarına köçürüldü və aşağıdakı ilkin antikorlarla inkubasiya edildi: anti-OTR (sc-8102, 1: 1000), -V1aR (sc-18096, 1: 500), -D1R (sc-33660, 1: 1000), -D2R (sc-9113, 1: 1000, Santa Cruz Biotexnologiyası, Santa Cruz, CA), -aktin (A2066, 1: 1000, 3, 14: 06, XMUMX, XMUMX: 911, 1: 1000, 3). Louis, MO) və ya anti-asetil histon H05 (Lys928, # 1 – 1000, 81: 96) və ümumi H6.0 (# 3-3, XNUMX: XNUMX, Millipore, Temecula, CA). Bütün antikorlar insanlarda, siçovullarda və siçanlarda istifadəsi üçün təsdiqlənmişdir, bunlarla birlikdə priyali voles homologiyanın yüksək faizlərini bölür (XNUMX-dən XNUMX% -ə qədər). Bir HRP birləşən ikincil antikor ilə hibridləşdikdən sonra ECL (ECL SuperSignal West Dura substratı, Pirs Biotexnologiyaları, Rockford, IL) ilə Fuji XAR filmində (Fuji Film, Tokio, Yaponiya) məruz qalmış membranlar aşkar edildi. Kvantlaşdırma AIS XNUMX Şəkil proqramı (Təsvir Tədqiqatı, Müqəddəs Catharines, Ontario, Kanada) istifadə edərək aparıldı və ümumi histon HXNUMX siqnalına normallaşdırılmış asetil-HXNUMX siqnalından başqa aktin üçün eyni membran daxilində bütün siqnallar normallaşdırıldı. Normalaşdırılmış məlumatlar sonra CSF ilə müalicə olunan heyvanların faizi ilə ifadə edilir.
Yarım kəmiyyət real vaxt polimeraz zəncirvari reaksiya (RT-PCR)
0.5 μg ümumi RNT tamamlayıcı DNT sintezi üçün işləndi və daha əvvəl təsvir edildiyi kimi təhlil edildi50 nikotinamide adenine dinucleotide dehidrogenase (NADH) geninə normallaşma ilə. Bütün reaksiyalar üç qat şəklində və spesifikliyi 2% Agarose gel-də ərimə əyri analizi və ayrılması ilə təsdiqləndi. Istifadə olunan primer ardıcıllığı aşağıdakılar idi: OTR, 5'-GAGGTGAGAGAGAGAGAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQAQGAT - 3'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-5 '(Fwd) və 3'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-5' (Rev) AVP3aR üçün (Rev), (üçün) və 5'-GGCATGAGGGATCAGGTAAA-3 "1'- TTAACAACAATGGGGCTGTG-5 D3R üçün (Rev), (üçün) və 5'-CGGTGTGTTCATCATCTGCT-3" 1'-GTGAAGGCGCTGTAGAGGAC-5 (Rev ) D3R və NADH üçün 5'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-3 '(Üçün) və 2'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-5' (Rev) üçün. Normalaşdırılmış məlumatlar CSF ilə müalicə olunan heyvanların faizi şəklində ifadə edilir.
Xromatin İmmunopraziya
NAcc və caudate putamen toxuma zərbələrində Histon H3 asetilasyonu (Lys14), istehsalçının göstərişlərinə əsasən Magna ChIP protein G Doku dəsti (Millipore, Temecula, CA) istifadə edərək təhlil edildi. Qısaca, 1% formaldehid ilə əlaqələndirildikdən sonra xromatin bir Misonix XL-2000 istifadə edərək 200-600 bp parçaları ilə kəsildi. Daha sonra asetilləşdirilmiş histon H3 (Lys14) immunopraktikası, 10 ° C-də bir gecədə 3µg anti-asetil-H14 (Lys4) antikoru (Millipore) ilə həyata keçirildi. Yuyulduqdan sonra, boncuklardan elütləşdirilmədən və çarpaz əlaqənin tərsinə çevrilib, immunopriptizləşdirilmiş DNT təmizlənmiş və RT-PCR tərəfindən iCycler platformasında (yuxarıda bax) birləşmiş INPUT nümunələrindən düzəldilmiş daxili standart əyri ilə üç qatda təhlil edilmişdir. Astarlar prairie vole OTR üçün ilk ekson kodlaşdırmasının yuxarı hissəsində yerləşən 236 bp uzunluğunda yerləşən bir 128 bp uzunluğunda gücləndirmək üçün hazırlanmışdıroxtr, Genbank'a qoşulma #AF079980) və ya 192 bp uzun bir bölgə, prairie vole V141aR üçün ilk ekson kodlaşdırmanın yuxarı hissəsində yerləşən 1 bpavpr1a, Genbank'a qoşulma #AF069304). Ardıcıllıqlar aşağıdakılar idi: 5 '-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3' (Fwd) və 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3 '(Rev) oxtr, və 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3 '(Fwd) və 5'-TGCAGAGAGAGGCGCTTTCC-3 '(Rev) avpr1a. Hər nümunə müvafiq INPUT dəyəri ilə normallaşdırıldı və məlumatlar CSF ilə müalicə olunan heyvanların faizi ilə ifadə edildi.
Statistik təhlillər və məlumatların işlənməsi
Tərəfdaş seçimini təhlil etmək üçün, birlikdə yaşama dövrü və ya yerləri dəyişdirilməmiş cannulae ilə cütləşmə davranışlarını göstərən heyvanlar xaric edildi. Bütün digər molekulyar analizlər üçün, bioloji qrup başına maksimum bir məlumat nöqtəsi xaricçi kimi müəyyən edildikdə xaric edildi. Nəticələrin çox aydın olduğu hallar istisna olmaqla, təcrübələrin çoxu təkrarlandı. Tərəfdaş seçim imtahanı zamanı ya da stimullaşdırıcı heyvanla yan-yana təmasda olma vaxtı, iki quyruqlu cüt ilə təhlil edildi t-test. Lokomotiv balları iki quyruq istifadə edərək təhlil edildi t-test (iki qrup üçün) və ya bir tərəfli ANOVA (iki qrupdan çox üçün) və uyğun olduqda Fişerin PLSD post-hoc testlər əhəmiyyətli bir ərəfə ilə edildi P <0.05. Normallığın yoxlanılmasından sonra bütün digər məlumatlar iki quyruqlu ilə analiz edildi təvvəlcədən sınaqdan keçirilmiş bərabər və ya bərabər olmayan dəyişikliyi fərz edin. Bütün statistik təhlillər StatView proqramından (SAS İnstitutu) istifadə edərək aparılmışdır. Verilən məlumatlar müvafiq nəzarət standartlarına uyğunlaşdırıldıqda (% CSF, Saline və Mating qrupları) statistik təhlillər xam məlumatlar üzərində aparıldı.
Minnətdarlıq
Bu iş Milli Ruh Sağlamlığı İnstitutu (NIMH) tərəfindən MK və ZW-yə MHR21-083128, MHR01-058616-dan ZW-yə dəstək verilir. OTR antagonisti OTA (T) -ın səxavətli hədiyyəsinə görə doktor Maurice Manning-a da təşəkkür edirik.
Dəyişikliklər
Maraqların toqquşması: Müəlliflər heç bir maraq doğurmur.
Müəllif iştirak edir
HW, FD və YL təcrübələr apardılar. HW və FD məlumatları təhlil etdi. Tədqiqatı HW, FD, ZW və MK hazırladı. FD, ZW və MK yazdı. Müəlliflərin hamısı nəticələri müzakirə edərək əlyazmaya münasibət bildirdilər.
References
;