Proc Natl Acad Sci USA. 2009 Nov 24; 106 (47): 20016 – 20020.
Publicatu online 2009 Nov 9. doi: 10.1073 / pnas.0908789106
PMCID: PMC2785284
Pietro Cottone,a,b,c,d,1,2 Valentina Sabino,a,b,c,d,1 Marisa Roberto,a,c,d Michal Bajo,e Lara Pockros,a Jennifer B. Frihauf,a,c,d,f Eva M. Fekete,a,c,d Luca Steardo,g Kenner C. Rice,h Dimitri E. Grigoriadis,i Bruno Conti,d,e George F. Koob,a,c e Eric P. Zorrillaa,c,d,2
astrattu
Dare per cuntrullà u pesu corporeu implica cicli di privazione da alimenti gustosi chì ponu prumove a cunsumazione compulsiva. L'investimentu prisentatu mostra chì i ratti ritirati da un accessu intermittente à l'alimentu gustosile mostranu un'eccurazione di alimenti gustosi dopu un rinnovatu accessu è un statu affettu-ritiratu cum'è fattore di liberazione di corticotropin-1 (CRF)1) comportamenti reversibili antagonisti-reversibili, cum'è l'ipofagi, e déficit motivazionali per uttene l'alimentu apprezzabile, è un comportamentu anxiogeni. U ritruvamentu era accumpagnatu da una espressione CRF aumentata è CRF1 a reattività elettrofisiologica in u nucleo centrale di l'amigdala. Propunemu quellu assunzioni di CRF-CRF antihypothalamic anti-ricompensa1 sistemi durante u ritruquamentu di l'alimentu gustosu, analogue à l'astinenza da droghe abusate, ponu prumove a selezzione compulsiva di l'alimentu gustosu, sottuffendendu di alternative più sane, è un situamentu emozionale negativu quandu impedisce l'alimentu gustosu.
Forme di obesità è di disordini alimentari, simili à a tossicità, ponu esse cuncettualizzati cume condizioni crunisi recidive cun alternate periodi di astinenza (cioè diete per evitare cibi "proibiti" à gustosi) è ricadute (cioè, cumplicanti, spesso incontrollabili, manghjà di manghjà) alimenti gustosi) chì cuntinuanu invece di conseguenze negative (1). Benchè i prupietà di rinforzamentu positivi di l'alimenti gustosi sò cunnisciuti (2, 3), hè di menu prestu attenu à e so proprietà di rinfurzamentu negativu (4-6), cioè l'augmentazione di a probabilità di una risposta comportamentale pruduttu da a rimozione di un stimulu avversivo (per esempio, l'azione di alimenti gustosi per alleviare i stati emozionali negativi). I cicli intermitenti di usu allargatu di droghe di abusu ponu progressive avè a "dipendenza affettiva", osservatu cum'è necessità di quantità più elevate e / o più regolari di u medicamentu per mantenere un determinatu set point emozionale, è un stato emozionale negativo à a fine di ingestu di droghe (7, 8). Un tali prucessu affettivo pò mantene l'usu è motivà a reciduta cù e proprietà di rinfurzamentu negativu di continuà è ripresenta u consumu di droghe, rispettivamente7, 8).
I sistemi di tensione cerebrale extrahithalamica corticotropin-riluttante di corticotropin (CRF) sò supplicativamente implicati in a transizione da l'usu di droghe à a dipendenza, durante u quali l'ingressu di droghe abusate diventa sempre più motivato da questi meccanismi di rinforzo negativi, piuttosto che positivi. U CRF hà un rolu motivativamente pertinente in e sindromi di ritardu per ogni medicamentu di maiò abusu, cumprendu l'alcol, a nicotina, a cocaina, l'epupaci, l'amfetamine è u tetrahydrocannabinol (7, 8). Per analogia, i cicli ripetuti di l'accessu intermitente, allargatu à l'alimentu altamente gustoso sò statu ipotizati per induce di neuroadaptazioni di u sistema CRF simili à quelli chì si vedenu in i mudelli di dependenza di droghe (4, 5, 9).
Risposte alla lingua
L'accessu intermittente, allargatu à l'alimentu gustosu porta à progressivamente à sfruttamentu di diete micca preferite quandu l'alimentu gustu ùn sia micca dispunibile è à l'alimentazione in eccessu di l'alimentu gustoso dopu l'accesso rinnovatu (10-12). Per pruvà l'ipussise chì CRF1 sistemi sò di mediata sti adattamenti d'alimentazione, masci Wistar ratti (n = 20) sò state fornite una dieta chow ad libitum (Chow / Chow) ogni ghjornu à a settimana o sò state fornite chow ad libitum per i ghjorni 5 (fase C) seguita da una dieta altamente succulente, zuccherata per i ghjorni 2 (fase P) (Chow / Palatable) ) (vede Fig S1 per a pianificazione di a dieta è Fig S2 per l'effetti di u prugramma di a dieta nantu à l'ingimentu di l'alimentu è u pesu di u corpu). Dopu à a settimana 7 di dieta ciclistica, ratti ricevu u CRF non peptidicu1 antagonista di u receptoru R121919 (0, 5, 10, è 20 mg / kg, sc) in un design di quadru latinu (13). I trattamenti anu datu 1 h prima di passà da una dieta palatable à chow o da chow à una dieta palatable. R121919 hè diminuita in quantità dipendente da u prugna di dieta sapè è aumentatu a mangiata di l'alimentu Chow in Raw Chow / Palatable (Fassa di dieta × Pianta di dieta × Dose di droga: F3,54 = 7.25, P <0.001), senza alterà l'ingestione di controlli chow. R121919 diminuzione di l'assunzione di a dieta altamente gustosa dopu l'accessu rinuvatu à l'alimentu gustosu (fase P) (Fig. 1A). In test indipendenti, u CRF1 antagonista di u receptoru aumentò l'ingressu di u chow menu palatable in Chow / ratti gustosi ritirati da a dieta palatable (fase C)Fig. 1B). Dunque, da utenzuratori sia a hypophagia chow che a mangiava in eccitazione di l'alimentu gustu, R121919 attenuava l'amplitudine di u ciclismo in duzione (a differenza tra l'ingressu durante a prima fase P palatable è u primu ritruchju in fase C di C: Dieta Schedule × Dose di droga: F3,54 = 7.25, P <0.001) (Fig. 1C). Cunsultà un assunzione progressiva di CRF-CRF1 sistemi cù l'antichità di a dieta, anzi micca cù un effettu di a dieta acuta, R121919 ùn hà micca riduttu a mangia alimentaria palurosa dopu una sola esposizione à a dieta o aumenta l'ingruzione di chow durante un primu ritruvamentu da alimenti gustosi (Fig S3).
L'arrestazione da un accessu intermittente, allargatu à l'alimentu gustu pò ancu aumentà u comportamentu simile à l'ansia (11). Per pruvà l'ipussise chì CRF1 I recettori sò implicati in i segni cumpresionali negativi chì seguenu a ritruvazione da l'alimentu gustosu, i ratti anu ammessatu R121919 (0, 20 mg / kg, sc, 1-h pretrattamentu) è testati in un design tra i sughjetti in più-labiratu elevatu14), 5 – 9 h dopu à esse passatu da una dieta palatabile à chow. Chow / Palatable trattati cù i veiculi, i ratti presentavanu un tempu di braccio menu apertu cà i controlli di chow-fed, riflettendu un effetto simile anxiogenu, durante u ritiratu da a settimana 7 di dieta ciclistica (Fig. 2A), un effettu chì ùn hè ancu vistu dopu à solu 2 cicli di ritruvamentu (Fig S4). Un pretrattamentu cù R121919 (20 mg / kg, la dose che modulava sia in eccessione di l'alimentu gustoso, sia in travagliu di chow) bloccò a diminuzione in esplorazione di braccio aperto da ratti Chow / Palatable ad una dose che ùn alterò u comportamentu di più-labirinto in controlli chow. Diet Schedule × Dose: F1,43 = 7.25, P <0.02; Fig. 2A sinistra). L'amministrazione di R121919 ùn hà micca cambiatu attività generale di misure cum'è entrate di u fermu chjusu. Dunque, R121919 ha bloccatu u comportamentu anuviculatu più impurtante associatu cù a ritirata da l'accessu intermittente, allargatu à l'alimentu gustosu, senza alterà u comportamentu di i controlli, suggerendu assunzione di CRF1 Sistemi.
L'arrestazione da un estensu intermittente, allargatu à l'alimentu gustosu pò ancu daveri à difetti motivazionali per uttene dieti menu preferite, un indice potenziale di comportamentu hypoedonicu (10). Analogamente, risponde per i rinforzatori gustativi menu preferiti sottu pianificazioni di cussiu progressivu di rinfurzamentu hè ancu ghjuvatu per indexà i deficit di motivazione cundutati in a sfruttamentu di u medicamentu (15). Per determinà a implicazione di CRF1 utchiziu, anu testatu l'effetti di R121919 nantu à e prestazioni di ratti ciclati per a dieta per uttene u so chow menu preferenziale sottu un calendariu di ratio progressiva. A cunfirmazione di i trovu precedenti (10), i ratti Chow / Palatable trattati da i veiculi anu evidenti una motivazione ridotta à travaglià per uttene u Chow meno palatable, riflessu da un diminutivu breakpoint è diminuitu risposte totali emesse rispetto à chow / Chow rat10) (Fig S5). U pretestamentu R121919 (20 mg / kg, a dose efficace in a crescita di a hypophagia da chow, riducendu hyperphagia di l'alimentu gustosa è riduce u comportamentu anxiogeni) selettivamente smunted i deficit in prestazione di rapporto progressivo in ratti ciclati in dieta a dose che era inefficace in controlli chow (breakpoint: Diet Schedule × Drug: F1,15 = 8.17, P <0.02; risposte totali: Schedule di Dieta × Droga: F1,15 = 9.14, P <0.01; Fig. 2B, manca). Incantu à l'interpretazione alternativa chì R121919 hà facilituu a performance in i ratti Chow / Palatable, diminuendu u sazmanezza postestiva, R121919 ha bloccatu i deficit in risposta à u 5 min in a sessione (Diet Schedule × Drug: F1,15 = 2.55, P <0.05) (Fig. 2B diritta). Perciò, u CRF1 l'antagonistu di u receptoru hà smuntatu u deficit di motivazione chì risponde à prugrammi di rinfurzatori gustativi di menu preferite chì si vedenu in animali ritirati da un accessu allettatu à alimenti apprezzabili.
Per pruvà l'ipeseite chì u ritruquamentu da l'alimentu gustosu pò attivà u sistema CRIP extrahyphalamic anu cunnessu cù u stress, i livelli di mRNA CRF è peptide in u nucleo centrale di l'amigdala sò stati misurati cun PCR in quantità reale è RIA. I ratti sò stati ciclati per a dieta per settimane 7 o furmati chow continuamente. Dopu anestesia è decapitazione, i pugni cerebrali da u nucleo centrale di l'amigdala sò stati raccolti durante a ritirata da u dopu à un rinnovamentu di l'accessu à a dieta gustosa. A ritirata di un gustu gustativu in cunnodi Chow / Palatable induceva un aumento di cinque volte in l'espressione di mRNA CRF in u nucleo centrale di l'amigdala paragunatu cù i ratti Chow / Chow (Fig. 3A). À u cuntrariu, l'ARNm CRF hà torna à i livelli cuntrullatori cù un accessu rinnovatu à l'alimentu gustosu (F2,19 = 6.97, P <0.01). L'espressione di CRF mRNA in u nucleu centrale di l'amigdala ùn hè micca cambiata quandu i topi Chow / Palatable sò stati ciclati solu una volta (Chow / Chow vs. Chow / Palatable: 5.5 ± 2.2 vs. 6.3 ± 1.7 ns), supportendu un reclutamentu progressivu di CRF- CRF1 sistemi trà u passatu di u regnu, anu da un effetti acuti di a dieta. Inoltre, l'espressione di mRNA di CRF ùn hà micca cambiatu in u nucleo accumbens, a corticala prefrontale o a corteccia insulare, supportendu a specificità righjunale (2)Fig S6). A curiosità, ùn ci sò micca cambiamenti significativi in l'espressione di mRNA CRF in u nucleo paraventriculare di l'ipotalamo o in corticosterone circundante à u stissu tempu di ritruvamentu in chow / ratti palatabili (Fichi. S6 è S7), suggerendu a ipotesi chì i cambiamenti in l'amygdalar, anziché hypothalamic, i sistemi di stress CRF proximately servatu l'adattazioni comportamentali. Inoltre, l'immunoreattività peptidica CRF in u nucleo centrale di l'amigdala di l'animali ritirati da a dieta palurosa era 70% più alta chì in animali chow-fed, ma torna in i livelli di controllo chow-fedelu cun accessu à a dieta gustosa (F2,24 = 4.01, P <0.01) (Fig. 3B). Dunque, ritirà un cibo gustoso attivava u sistema peptidicu CRF in u stracu in u nucleo centrale di l'amigdala, analogue à i risultati in i mudelli di ritruvamentu di droghe è etanol.7, 8). Chì l'accessu rinnovatu à l'alimentu gustosimentu mi hè diminuitu di l'attivazione di u sistema CRH extrapiritamicu in u nucleo centrali di l'amigdala, in u quali l'attivazione di CRF hè lìcata à l'ansietà (16), i risultati attuali suggerenu ancu chì l'alimentu gustosu possa acquistà proprietà di rinfurzamentu negativu misantendu e conseguenze affettive negative di l'astinenza (17).
Per pruvà l'ipesezione chì i ratti ritirati da l'alimentu gustosanu puderebbenu aumentà a sensibilità à CRF1 modulazione antagonista di l'acqua γ-aminobutirrico (GABA) chì signala in u nucleo centrali di l'amigdala chì si faci durante a ritardata di etanulu (18), avemu esaminatu l'effettu di R121919 in a trasmissione GABAergic di u nucleo centrale di i neuroni amigdali in una preparazione fetta. Maschi Wistar ratti (n = 14) eranu ciclati in dieta per settimane 7 è sacrificati dopu à esse cambiatu à u Chow meno palatable. A trasmissione basica di GABAergic in u nucleo centrali di e sinapsi di l'amigdala ùn hè micca diversa cun una storia di dietan = Celle 23) in tutte e intensità di stimuli usate per evucà i potenziali postinaptici inibitori di GABA (IPSP). Tuttavia, a superfusazione di 20 minu cù R121919 (1 μM) induceva una maggiore riduzione di GABA evocataA-IPSPs in u nucleo centrale di e neurone amigdali di ratti Chow / Palatable (M ± SEM: 30 ± 6%, n = Celle 9) che in quelli di i controlli chow-fed (M ± SEM: 12 ± 6%, P <0.05, n = Celle 11) (Fig. 4). Dopu un periodu 30 minu di lavatu, IPSPs di i dui gruppi tornau à simuli, livelli baseline-like. Allora, aghjunghjendu à a sobtivazione di l'amigdale CRF-CRF1 u sistema è l'effetti vistu durante a ritruzione di l'etanolu18), i ratti ciccinati da dieta anu fattu aumentà a sensibilità à l'effetti inibitori di un CRF1 antagonista di u receptoru nantu à u nucleo centralu di a amiggala GABAergic di trasmissione.
Articulu discussione
I risultati cumposti furnizanu evidenziazione funzionale chì una storia di accesso interstitu, allargatu à l'alimentu gustosu porta à neuroadaptazioni progressive, motivativamente pertinenti in CRF-CRF stressu-related.1 sistemi. In particulare, u CRF selettivu1 l'antagonistu di u receptoru R121919 hà influenzatu l'alimentazione in ratti ciclati da l'alimentazione in modu differenziale è selettivu, aumentendu l'ingestu di chow regularmente è diminuendu l'ingressu di l'alimentu altamente gustoso dopu l'accesso rinnovatu. U CRF1 l'antagonistu di u receptoru hà ancu bloccatu selettivamente l'incremento di u comportamentu simile à l'ansia è u deficit di motivazione in a risposta per u chow meno preferitu chì si sonnu durante u ritiratu da a dieta gustosa. L'arrucazione di l'accessu à a dieta gustosa hà aumentatu l'espressione di u gene CRF è peptidicu in u nucleo centrale di l'amigdala, effetti chì sò stati eliminati cun accessu rinnovatu. Inoltre, i ratti ciclati in dieta anu avutu una crescente sensibilità à l'effetti inibitori di un CRF1 antagonista di u receptoru per a trasmissione di GABAergic in u nucleo centrale di l'amigdala, ancu di più nantu à a suattivazione di l'amigdale CRF-CRF1 sistema. L'eccuranza di l'alimentu gustosu dopu l'accessu rinnovatu pò esse u risultatu da l'incremento di l'attivazione di u sistema CRF di u periodu di ritrughju ghjustu cumplettu, vistu cum'è espressione aumentata di CRF è di sensibilità elettrofisiologica à CRF.1 bloccu di u receptoru in u nucleo centrale di l'amigdala. CRF1 un pretrattamentu antagonista appena prima un accessu à a manghjurazione gustu hè interpretatu per esse oppunitu à u CRF-CRF inizialmente presentu1 sistema di sfruttamentu di u ritruvamentu. A curta volta à tempu di un cibo gustoso chì si mangia troppu in altrimenti vistu in animali senza trattatu (10) pò riflessà a rotazione di u tempu da u quali l'espressione, u liberazione è l'eccevuli di u peptide CRF normalizanu una volta l'accessu à l'alimentu palatinu hè recuperatu, cum'è visu in u stu studiu. Cusì, manghjendu micidamente diete gustosi ponenu induce una mutazione allostatica in i sistemi di ricompensazione di u cervellu cun recrutamentu di u CRF-CRF anti-ricompensazione.1 sistemi in u nucleo centrale di l'amigdala.
Quessi risultati anu implicazioni micca solu per l'alimentu compulsivu, ma ancu per a motivazione in generale. L'attivazione ripetuta di i sistemi hedoni hà stimatu i prucessi cumversari in u cervellu (vale à dì, reclutamentu di CRF1 i circuiti) chì era distinti da una semplice perdita di funzione in i sistemi di trasmittente di premiazione. Tale neuroadaptazioni trà u sistema19) nascenu ancu durante a transizione à a dipendenza da e tutte e droghe principali di l'abusu (7, 8). A generizazione à stimuli chì ùn sò micca duvaturi in u stu studiu suggerisce chì i prucessi motivazionali ponu turbà in individui chì spermentanu cun contrasti repetiti in l'intensità di stimuli hedoniosi in u tempu20). Adattativamente, tali prucessi ponu spostà u comportamentu di ricerca di alimenti è cunsumatori versu alimenti densi in energia, ricumpensati, svalutendu i sforzi per uttene menu alimenti ricchi di energia, à bassa ricompensa (o non alimentari), una adattazione evolutivamente utile quandu ci sò costi per a ricerca di l'alimentazione (per esempiu, esposizione à i predatori, tempu limitatu è risorse energetiche). In l'ambiente d'oghje, tuttavia, i stessi prucessi ponu guidà l'assunzione di alimenti chì prumove l'obesità à u detrimentu di alternative menu gustose, ma forse più nutritive.
Cusì, cambiamenti cum'è a dipendenza in CRF1 sistemi puderanu aiutà à cumparà (i) cunsumu di alimenti gustosu energia-densi, (ii) sottoconsumazione di alternative più sane, è (III) u stato emozionale negativu associatu chì si faci quandu l'accessu à l'alimentu gustu hè impeditu (4, 5, 10-12, 17). Traduttu à a condizione umana, l'attivazione di u sistema CRF pò fà pruvucà una ricaduta in obesità è disturbi alimentarii cumuni è ancu altre sequelazioni di motivazione negativa di a abstinenza ciclica da l'alimentu gustu.
Materiale è Metodi
Subjects.
Maschi Wistar ratti (n = 155, 180 – 230 g, 45 ghjornu vechju) sò stati ottenuti da Charles River è unicu-uni stesi à l'arrivée in cuttaghji in plastica, 19 × 10.5 × 8 in un ciclu di luce 12 h: 12 h (10 : 00 h luci sparite), umidità- (60%) è temperatura vivaria (22 ° C) vivarium. I ratti anu avutu accesso à u chow à urdinatore à base di ceru [Dieta Harlan Teklad LM-485 7012: 65% (kcal) carboidrati, 13% di grassi, proteina 21%, energia metabolizabile 341 cal / 100 g] e acqua ad libitum per settimana 1 prima di principiu di sperienze. Prucie sperimentali aderite à l'Institi Naziunali di Sanità Guida per a Cura è l'Utilizzo di Animali di Laboratoriu (NIH numero di pubblicazione 85 – 23, 1996 rivisitu) è i "Principii di cura di i labbri in laboratorio" (http://www.nap.edu/readingroom / bookslabrats) è sò stati approvati da a Cumpagnia Instituzionale di Cura e Usu Animali di u Scripps Research Institute.
Farmaci.
R121919 hè sintetizatu cum'è descrittu in Chen et al. (21). R121919 hè una alta affinità (Ki = 3.5 nM) CRF selettivu1 antagonista cù e proprietà fisico-chimiche superiori à molti altri CRF1 antagonisti (eg, diminuitu logP è logD, aumentata solubilità in acqua) (13). Per a prova, R121919 hè statu prima solubilized in 1 M HCl (10% di u volume finale), poi diluitu in un veìculu finale di 20% (wt / vol) 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (Sigma-Aldrich), ritinato con NaOH a pH 4.5. A soluzione R121919 hè stata amministrata sc (sc) in un volume di 2 mL / kg.
Al Libitum Diet Alternation.
Dopu acclimatazione, i ratti sò stati spartiti in dui gruppi addivati per l'ingressu di l'alimentu, u pesu di u corpu è l'efficienza di l'alimentu di i ghjorni precedenti 3 – 4. Un gruppu hà ricevutu una dieta Chow («Chow») i ghjorni 7 ad libitum a settimana (Chow / Chow), è un secondu gruppu hè statu furnitu chow ad libitum per i ghjorni 5 ogni settimana è seguitu da i ghjorni 2 di l'accessu ad libitum à u altamente palatable , dieta cù sapore di cioccolata, saccarosio alto ("Palatable"; Chow / Palatable). A dieta palatable hè una dieta nutritivamente completa, cù sapori di cioccolata, saccarosio alto (50% kcal), basata à AIN-76A chì è paragunabile in proporzioni di macronutrienti è di densità di energia à a dieta Chow [TestDiet; Formula 5TUL aromatizzata al cioccolata: 66.8% (kcal) carboidrati, 12.7% di grassu, proteina 20.5%, energia metabolizabile 3.48 kcal / g; formulatu cum'è BNUMX-mg pellet di nutrizzione di precisione per aumentà a so preferenza (22, 23)]. Per a brevità, i primi ghjorni di 5 (chow solu) è l'ultimi ghjorni di 2 (chow o palatable secondu a gruppu sperimentale) di ogni settimana sò riferiti in tutte e sperienze cum e fasi C è P. I reguli ùn sò micca mai presentatu simultaneamente. A dieta di Chow era o dieta di Harlan Teklad LM-485 7012 [65% (kcal) carboidrati, 13% di grassi, proteina 21%, energia metabolizabile 341 cal / 100 g] o dieta 5TUM formulata come 4- a 5-g pellet estrusi [65.5 % (kcal) carboidrati, 10.4% di grassu, proteina 24.1%, energia metabolizabile 330 cal / 100 g; TestDiet]. Simili à i studii precedenti, Harlan Teklad LM-485 chow hè statu adupratu in l'alimentazione è in alzati sperimenti di labirintu in più (a più).11), mentre TestDiet 5TUM chow (10) hè stata usata in u rapportu progressivu, CRF mRNA, CRF peptidi cuntenutu, corticosterone RIA è esperimenti electrophysiological.
Cum'è publicatu in precedenza (10), preferenze di dieta relativa, calculate cum'è a percentuale di assorbimentu ghjornuale (kcal) di a prima dieta in relazione à a seconda dieta, sò stati i seguenti: 5TUL Dieta di cioccolata (dieta zuccherata zuccherata) vs Harow LM-485 chow (M ± SEM preferenza 90.7 ± 3.6%) è 5TUL Dietta di cioccolata (dieta sdiccosa zuccherata) vs. Dieta 5TUM chow (M ± SEM preferenza 91.2 ± 3.7%).
Elevated Plus-Maze.
U testu elevatu di u labirintu elevatu hè statu fattu cum'è descrittu in Cottone et al. (24). I ratti Chow / Palatable sò stati ciclati per à l'alimentazione per almeno settimane 7 è poi sò stati pretrattuti cù u dui veiculi o 20 mg / kg R121919 (−1 h, sc) e testati 5 – 9 h dopo u passu di a dieta gustosa à chow (P → fase C). I topi di cuntrollu Chow / Chow sò stati testati cun ellu in a cuncezione inter-sughjetti (n = 47). A dieta di Chow era dispunibule annantu à u tempu di a prova. Per più particolari, vede u SI Testo.
Progrese di u Ristrutturazione Progressiva di u Rinfurimentu per l'Alimentazione.
U pianu di u prugrammu progressivu di u rinforzamentu per l'alimentu hè statu fattu cum'è descrittu in Cottone et al. (10). L'animali anu ricivutu à libitum A / I chow (5 g granuli estrusi) in e so gaie di casa à tuttu u sperimentu, à u lì micca diversamente specificatu. I rinforzatori di alimenti eranu 45-mg pellet di precisione chow, identichi in composizione à a dieta di a cuspide casa estrusa Chow. E sessioni finìu quandu i sughjetti ùn anu micca finutu un cocimentu per 14 min, cù l'ultimu raportu finitu chjappu cum'è u puntu di frattenu. Chow / Palatable ratti sò stati ciclati per à a dieta per almeno settimane 7 è poi praticati cun R121919 (−1 h, sc) à u mumentu di esse passati da una dieta gustosa à chow (fase P → C). I topi di cuntrollu Chow / Chow sò stati testati cun ellu in a cuncezione inter-sughjetti (n = 17). Dosi di R121919 (0, 20 mg / kg pesu corpu, sc) sò state administrate in un sughjettu trà u sughjettu, contrapattu nantu à dui cicli di dieta. Per più particolari, vede u SI Testo.
PCR in Tempo Reale Quantitativa.
Ratti (n = 20) sò stati ciclo-alimentati per 7 settimane, anestetizzati è decapitati durante e duie cundizioni di dieta (ghjorni 5 è 7 di ogni ciclu settimanale). I cervelli sò stati rapidamente rimossi è affettati coronalmente in una matrice cerebrale, è u nucleu centrale di l'amigdala, nucleus accumbens, cortex insulare è punch cortex prefrontale sò stati raccolti nantu à una tappa fredda. U RNA Totale hè statu preparatu da ogni pugnu cerebrale aduprendu un protocolu standard per l'estrazione di RNA da tessuti animali. U RNA Totale (1 μg) hè statu poi trascrittu inversamente in presenza di Oligo (dT) 20 per e istruzioni di u fabbricante. E reazioni quantitative di RT-PCR sò state effettuate in un volume 20-μL usando 0.5 μM primer e 4 mM MgCl2. I risultati sò stati analizzati da metudi di secondu derivatu è espressi in unità arbitrarie, normalizati à i livelli di espressione di u gene di riferenza, CypA. Tutte e reazioni di RT-PCR per una data sequenza sò state eseguite in a stessa corsa. Per più particolari, vede u SI Testo.
L'estrazione Peptide Acid è CRF RIA.
Ratti (n = 25) sò stati ciclati per à l'alimentazione per almu settimane 7, anestetizzati è decapitati durante e duie condizioni di dieta (ghjorni 5 è 7 di ogni ciculu settimanale). I cervelli sò stati rapidamente rimossi è affettati coronalmente in una matrice cerebrale, è u nucleo centrale di i colpi di amigdala sò stati raccolti in una fase di ghiaccio. L'estrazione di l'acidu peptidicu hà seguitu una procedura già stabilita (25). L'immunoreattività simile a CRF di u tissu era quantificata cun RIA a fase solida sensibile è specifica adattata da Zorrilla et al. (26). Per più particolari, vede u SI Testo.
Corticosterone RIA.
Ratti (n = 12) sò stati ciclo-alimentati per almenu 7 settimane, è u sangue di coda hè statu campionatu durante e duie condizioni di dieta (ghjorni 5 è 7 di ogni ciclu settimanale). I livelli plasmatichi di immunoreattività simile à a corticosterona sò stati determinati cun un kit RIA dispunibile in cummerciu, secondu l'istruzzioni di u fabricatore (MP Biomedicals, Inc.) (26). Per più particolari, vede u SI Testo.
Studi Electrofisiologici
Preparazione fetta.
Nucleu centralu di e fette di l'amigdala sò preparati cum'è descrittu in precedenza (27, 28) da i ratti (n = 7 / group) chì avianu cicatrizzatu per almenu settimane 7, anestetizatu è decapitato 2 – 3 h dopu esse statu ritiratu da l'alimentu gustu. I cervelli sò stati rapidamente rimossi è piazzati in un fluide cerebrospinale artificiale ghjustu (aCSF) gassatu cù 95% O2 è 5% CO2. Le fette sò state tagliate, incubate in una configurazione di l'interfaccia per circa 30 min, è cumpletamenti sommerse è in continuu superfuse cù aCSF calda e gasata. I farmaci sò stati aghjunti à aCSF da e soluzioni di vendita per uttene concentrazioni cunnoscute in u superfusatu. À u ghjuvate di superfusion di 2 – 4 mL / min utilizzati, e concentrazioni di u medicamentu ghjunghjenu 90% di a concentrazione di u reservoir in 2 min.
Electrofisiologia.
Avemu registratu un nucleo centrale di i neuroni amigdali cù micropipette taglienti usando a modalità discontinuu di tensione o di corrente. Avemu amparatu a maggior parte di i neuroni vicinu à u so potenziale di membrana riposata. I dati sò stati acquistati cù un preamplificatore è salvatu per analisi successive cù u software PClamp. Pharmacologically isolated GABAA potenziali post-sinaptici inibitori da u receptoru (GABA)A-IPSPs) sò stati evorti di stimuli lucali in u nucleo centrali di l'amigdala per mezu di un elettrodu di stimolazione bipolare mentre superfluendu i bloccanti di i recettori di glutamatu CNQX è APV è GABAB bloccatore di u CGP 55845A. Per determinà i parametri di risposta per ogni cella, abbiamo fattu un protocollo input-output. A gamma di currenti hè stata applicata, iniziendu à a soglia di a currezza necessaria per sfruttare un IPSP finu à a tensione necessaria per scuscà l'amplità massima. Avemu normalizata trè intensità di u stimulu di stadi di parità (soglia, semisimima, è massima) cum'è 1 – 3 ×. I passaggi attuali di iperpolarizazione è depolarizazione (incrementi 200-pA, durata 750-ms) anu stati applicati per generà curve di tensione-corrente (VI). Avemu quantificatu l'ampiezza IPSP evocata è risposte VI cù Clampfit software. Tutte e misure sò state prese prima di a superfusione cù u CRF selettivu1 antagonista di u receptoru R121919 (1 μM), durante a so superfusione (20 min), è dopu lavatu (30 min). Per più particolari, vede u SI Testo.
Statistiche.
I paraguni di gruppu anu usatu Studiente t-testi (cumparazioni di dui gruppi) o analisi di varianza (ANOVA) (almenu 3 cumparazioni di gruppi), quest'ultima hè stata interpretata da analisi di l'effettu principale o da i paragghi di Newman-Keuls dopu effetti significativi di omnibus.P <0.05). I dati di l'esperimentu d'alimentazione sò stati analizzati da ANOVA misti à tre vie cù Schedule di Dieta cum'è fattore trà sughjetti è Fase di Dose è Dieta cum'è fattori in i sughjetti. I dati da l'esperimentu elevatu di più labirintu sò stati analizzati da ANOVA bidirezionale cù Schedule Diet è Dose cum'è fattori trà i sughjetti. Per u prugramma di u prugressivu di u sperimentu di rinfurzamentu, u puntu di interruzzione è e risposte totali sò stati analizzati da ANOVA misti bidirezionali cù Schema di Dieta cum'è fattore trà i sughjetti è Dose cum'è fattore in i sughjetti. U parcorsu di u tempu di risponde durante i primi 5 min hè statu analizatu da ANOVA misti à tre vie cù Schedule di Dieta cum'è fattore trà sughjetti è Dose è Tempu cum'è fattori in u sughjettu. I dati da i studii elettrofisiulogichi sò stati analizzati cù un ANOVA trà i sughjetti o ANOVA in i sughjetti cù misure ripetute, secondu u casu. Dati da a corticosterona RIA induve analizate da ANOVA mixta bidirezionale cù Schedule di Dieta cum'è fattore trà sughjetti è Fase di Dieta cum'è fattore in u sughjettu. I pacchetti statistichi aduprati eranu Instat 3.0, Prism 4.0 (GraphPad), Systat 11.0, è SPSS 11.5 (SPSS).
Ricunniscenze.
Un ringrazimu per Mike Arends per l'assistenza editoriale, Mary Gichuhi per l'assistenza amministrativa, è Bob Lintz, Jeanette Helfers, Stephanie Dela Cruz, è Molly Brennan per l'assistenza tecnica. Questu travagliu hè statu supportatu da l'Istitutu Naziunale di l'Ufficiale Di Diabeti è Malte Digestive è Malatie Renali DK70118, DK26741, è P30DK56336; Istitutu Naziunale nantu à a Convenzione di l'abuso di droghe DA023680; L'Istitutu Naziunale di l'abuso di alcool è di l'Alcoolismu dà AA016731 è AA015566; Istituto Naziunale di Disordini Neurologichi è Uacciu di Stiura IT32NS061847-01A2; Institutu Naziunale di Aging Grant AG028040; Istitutu Naziunale Cuore, Pulmone è Sangu Grant HL088083; a Ellison Medical Foundation; è u Centru Pearson per l'Alcolism and Addiction Research. Una parte di questu travagliu hè stata supportata da i prugrammi di ricerca intramurale di u Istitutu Naziunale di l'abusu di droghe è da l'Istitutu Naziunale di l'abuso di alcool è l'alcolismu. Questu hè u manoscritte n ° 19807 da u Scripps Research Institute.
Footnotes
L'autori di dichjaranu micca cunflittu di interessu.
St'articulu hè una Submissione Diretta PNAS.
Questu articulu cuntene e informazioni di supportu in linea à www.pnas.org/cgi/content/full/0908789106/DCSupplemental.
Vede ancu
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