Exprese a distribuce dopaminového receptoru se dynamicky mění v nucleus accumbens potkana po vysazení z kokainu. (2010)

Síťování proteinů

Tato metoda byla podrobně popsána dříve (Boudreau a Wolf, 2005; Ferrario a kol., 2010). Krysy byly dekapitovány, jejich mozky byly rychle odstraněny a celá NAc (nebo podoblasti jádra a skořápky) byla pitvána na ledu z 2mm koronální části získané pomocí mozkové matrice. Celá tkáň NAc byla okamžitě nasekána na plátky 400μm pomocí sekáče na tkáňový vrták McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), zatímco menší podoblasti jádra a skořápky byly ručně mleté ​​skalpelem. Tkáň byla poté přidána do Eppendorfových zkumavek obsahujících ledově chladný umělý CSF obohatený o 2 mM bis (sulfosukcinimidyl) suberát (BS)³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Zesíťovací reakce byla ponechána probíhat 30 min při 4 ° C za mírného míchání a potom byla ukončena přidáním 100mM glycinu (10 min při 4 ° C). Tkáň byla peletována krátkou centrifugací, resuspendována v ledově chladném lytickém pufru obsahujícím proteázové a fosfatázové inhibitory, sonikována po dobu 5 sec a znovu centrifugována. Alikvoty supernatantu byly skladovány při -80 ° C, dokud nebyly analyzovány westernovým přenosem.

Analýza DAR metodou Western blot v zesítěné tkáni

Vzorky (celkový protein / lyzát 20-30μg) byly podrobeny elektroforéze na gelech 4-15% Tris-HCI (Biorad, Hercules, CA). Proteiny byly přeneseny na polyvinylidenfluoridové membrány pro imunoblotting za použití konstantního proudu (1.15mA) po dobu 1.5 h. K zabránění nadměrného zahřívání byla použita chladicí cívka. Úplný přenos agregátů s vysokou molekulovou hmotností byl potvrzen barvením gelů po přenosu Coomassie modrou. Dále jsme ověřili, že zesíťované DAR proteiny nebyly detekovány ve stohovacím gelu (data nejsou uvedena). Po přenosu byly membrány promyty v ddH₂O, suší se na vzduchu 1 h při teplotě místnosti (RT), rehydratuje se 100% MeOH, promyje se v 1x Tris pufrovaném solném roztoku (TBS) a ponoří se do 0.1M NaOH, pH 10 po 15 min při RT. Poté byly promyty v TBS, blokovány 3% hovězím sérovým albuminem (Sigma – Aldrich, St. Louis, MO) v TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, po dobu 1 při RT a inkubovány přes noc při 4 ° C s protilátkami rozpoznávajícími D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) a D3 DAR (1; Cat # AB1000P). D1786 a D4 DAR nebyly analyzovány kvůli nedostatku protilátek rozpoznávajících jak zesíťované, tak intracelulární receptory. Je třeba poznamenat, že šarže DAR protilátek použité v těchto experimentech byly zakoupeny v 5-2005; současné šarže těchto protilátek (06-2009) vykazují různé vzory pruhování, které nejsou změněny v tkáni z DAR knockout myší (nepublikovaná pozorování). Po inkubaci primární protilátky byly membrány promyty roztokem TBS-T, inkubovány po dobu 10 min s HRP-konjugovaným anti-králičím IgG nebo anti-myším IgG (60: 1; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), promyty TBS- T, opláchnuté ddH₂O a ponořený do substrátu detekujícího chemiluminiscenci (Amersham GE, Piscataway, NJ). Poté, co byly vyvinuty bloty, byly snímky zachyceny pomocí Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Difuzní hustoty povrchových a intracelulárních pásů byly stanoveny pomocí softwaru Quant One (Bio-Rad). Hodnoty hladin povrchových, intracelulárních a celkových (povrchových + intracelulárních) proteinů byly normalizovány na celkový protein v dráze stanovené pomocí Ponceau S (Sigma-Aldrich) a analyzovány pomocí TotalLab (nelineární dynamika, Newcastle, Velká Británie). Poměr povrch / intracelulární nevyžadoval normalizaci, protože obě hodnoty jsou stanoveny ve stejném pruhu. Pro zkoumání protilátkové specificity byly provedeny preabsorpční studie pro DAR protilátky s peptidem použitým pro generování každé protilátky. Protilátka D1, D2 nebo D3 DAR byla kombinována s 10-násobnou nadměrnou koncentrací peptidu v 500μl TBS, smíchána po dobu 4 v 4 ° C, naředěna na konečný objem 20 ml, přidána na membránu a inkubována přes noc při 4 ° C.

D1 DAR

Na WD45 nebyly zjištěny žádné významné rozdíly mezi kokainovými a solnými skupinami. Na WD1 však byly patrné účinky samopodávání kokainu. Analýza celého NAc ukázala signifikantně vyšší poměr D1 DAR povrch / intracelulární ve skupině WD1-Coc ve srovnání se skupinami, kterým byl podáván fyziologický roztok (Obr. 2a). To bylo způsobeno mírným zvýšením povrchových D1 DAR v kombinaci s mírným poklesem intracelulárních D1 DAR (žádný z těchto posledních dvou účinků nebyl statisticky významný), při absenci jakékoli změny v celkových hladinách D1 DAR (povrch + intracelulární) (Obr. 2a). V jádru NAc nebyl zjištěn žádný významný účinek pro žádné měření D1 DAR (Obr. 2b). Shell NAc však vykazoval změny, které byly podobné změnám pozorovaným v celém NAc, ale o něco robustnější (Obr. 2c). Povrchový / intracelulární D1 DAR poměr byl zvýšen ve skupině WD1-Coc v důsledku významného zvýšení exprese povrchového D1 DAR. Intracelulární hladiny se nezměnily, ale existoval trend směrem ke zvýšení celkových hladin D1 DAR. Celkově lze říci, že větší část D1 DAR proteinu byla povrchově exprimována v NAc obalu u krys WD1-Coc ve srovnání s krysy WD1-Sal. Distribuce D1 DAR se vrátila do kontrolního stavu po 45 dnech od ukončení samopodávání kokainu.

Obr. 2

D1 DAR povrchová exprese byla zvýšena ve skořápce NAc po 1 dnu od samopodání kokainu

D2 DAR

V celé NAc byl hlavním pozorovaným účinkem snížená exprese D2 DAR u potkanů, kteří si sami podávali kokain ve srovnání s kontrolami s fyziologickým roztokem (Obr. 3a). To bylo nejvýraznější na WD45, když bylo pozorováno snížení povrchového pásu, všech tří intracelulárních pásů (~ 55, 75 a 100kDa), a celkově hladiny D2 DAR ve srovnání s kontrolami s fyziologickým roztokem. Poměr povrch / intracelulární D2 DAR byl mírně, ale významně zvýšen ve skupině WD45-Coc, v důsledku většího poklesu intracelulárního než povrchové D2 DAR, což naznačuje, že buňky kompenzují sníženou expresi D2 DAR distribucí větší části dostupné D2 DAR D2 DAR na povrch. Je důležité mít na paměti, že zvýšený povrchový / intracelulární poměr nenaznačuje v tomto konkrétním případě zvýšený přenos D2 DAR, protože absolutní úroveň povrchově exprimovaných D1 DAR byla snížena. Ve skupině WD2-Coc byl jediným významným účinkem pokles intracelulárních hladin monomeru D55 DAR (~ 45kDa) ve srovnání se skupinami WD1-Sal a WDXNUMX-Sal, i když několik dalších opatření také mělo sklon (Obr. 3a).

Obr. 3

Hladiny intracelulárního a povrchového D2 DAR v NAc byly sníženy po 45 dnech od ukončení samopodávání kokainu

Celkové snížení exprese D2 DAR bylo také patrné v podoblastech jádra a skořápky NAc (Obr. 3b a 3c, ačkoli) účinky ve skořápce byly spíše výraznější. Povrchové hladiny D2 DAR tak klesaly u kokainových potkanů ​​pouze na jádru WD45, ale na skořápce WD1 a WD45. Celkový D2 DAR se významně snížil pouze ve skořápce. Snížení v intracelulárních D2 DAR pásech nastalo v obou dnech odtažení jak v jádru, tak ve skořápce, ačkoli existovaly rozdíly specifické pro stažení a oblast, pokud jde o to, který intracelulární pás vykazoval statisticky významný účinek. Stručně řečeno, hladiny D2 DAR a hladiny intracelulárních proteinů byly sníženy v NAc po samopodání kokainu. Některá snížení byla již patrná u WD1.

D1 DAR povrchová exprese přechodně vzrůstá ve skořápce NAc po přerušení podávání kokainu

Po samopodání kokainu byla povrchová exprese D1 DAR zvýšena v NAc shell na WD1, ale normalizována pomocí WD45, zatímco v jádru nebyly pozorovány žádné změny, což naznačuje přechodné zvýšení omezené na shell. Podobné výsledky byly získány v předchozích studiích s použitím autoradiografie receptoru. Ben-Shahar a kol. (2007) nalezli zvýšenou hustotu D1 DAR ve skořápce NAc krys 20 min (ale ne 14 nebo 60 dní) po přerušení prodlouženého přístupu (6 h / den) po podání kokainu, zatímco nebyly pozorovány žádné změny v jádru ani po krátkém přístupu po kokainu -administrace (2 h / den). Nader a kol. (2002) pozorovali malé zvýšení hustoty D1 DAR ve skořápce, ale ne jádro opic rhesus usmrcených po posledních relacích samopodání kokainu 100. Opice hodnocené 30 dny po ukončení stejného režimu vykazovaly zvýšenou D1 DAR hustotu v rostrální NAc a v jádru i skořápce při více kaudálních hladinách, ale D1 DAR hustota se normalizovala podle 90 dnů (Beveridge a kol., 2009). Všechny tyto výsledky, stejně jako ty naše, ukazují na přechodné zvýšení hladin D1 DAR, zejména ve skořápce, po přerušení podávání kokainu. Dřívější studie této skupiny však naznačila pokles hustoty D1 DAR v NAc (nejrobustnější ve skořápce) u opic rhesus, které si samy podávaly kokain po mnohem delší dobu (18 měsíce; Moore a kol., 1998a). Snížené vázání D1 DAR v NAc bylo také nalezeno 18 h po ukončení režimu s rozšířeným přístupem u potkanů, ačkoli celkový příjem kokainu v této studii byl vyšší než ve studiích na potkanech diskutovaných výše (De Montis a kol., 1998). Tyto výsledky ukazují, že adaptace D1 DAR závisí na mnoha aspektech expozice kokainu. Další úvahou je, že autoradiografie receptoru měří celkové buněčné receptory, zatímco naše experimenty síťování proteinů mohou rozlišovat mezi povrchovými a intracelulárními receptory. Je zajímavé, že imunoblottingová studie zjistila trend směrem ke zvýšeným hladinám D1 DAR v NAc uživatelů lidského kokainu (Worsley a kol., 2000).

Je přechodné zvýšení povrchové exprese D1 DAR, které jsme pozorovali ve skořápce NAc, důležité pro inkubaci touhy vyvolané touhou po kokainu? To je obtížné posoudit, protože žádné studie nezkoušely účinek injekce agonistů nebo antagonistů D1 DAR do nitra NAc na cue-indukované hledání kokainu po stažení z domácí klece (nebo cue-indukované obnovení hledání kokainu po ukončení extinkce). Receptory D1 ve středním NAc (skořápce a středním jádru) se však podílejí na navrácení kokainu při hledání kokainu po vyhynutí, zřejmě prostřednictvím mechanismu vyžadujícího kooperativní aktivaci D1 a D2 DAR (Anderson a kol., 2003; 2008; Bachtell a kol., 2005; Schmidt a Pierce, 2006; Schmidt a kol., 2006). Spolu s našimi výsledky by to mohlo naznačovat, že neurony ve skořápce NAc lépe reagují na kokain zprostředkovaný D1 DAR v brzkém stádiu kvůli přechodné regulaci D1R. Při extrapolaci od opětovného zavedení do inkubačních studií je však třeba postupovat obezřetně, protože extinkční výcvik a stažení domácí klece jsou spojeny s různými neuroadaptacemi v NAc (Sutton a kol., 2003; Ghasemzadeh a kol., 2009; Wolf a Ferrario, 2010). Je důležité si uvědomit, že D1 DAR v bazolaterální amygdale a prefrontální kůře jsou také důležité pro naráz navozené vyhledávání kokainu (např. Ciccocioppo a kol., 2001; Alleweireldt a kol., 2006; Berglind a kol., 2006).

Na buněčné úrovni mohou jak presynaptické, tak postsynaptické DAR modulovat excitabilitu středně ostnatých neuronů, převládajícího typu buněk a výstupního neuronu NAc (Nicola a kol., 2000; O'Donnell, 2003). Je známo, že opakované nepodmíněné podávání kokainu zvyšuje některé účinky aktivace D1 DAR v NAc. Jeden den až jeden měsíc po ukončení léčby kokainem byla tedy pozorována zvýšená schopnost agonistů D1 DAR inhibovat aktivitu středně ostnatých neuronů (řízených iontoforetickým glutamátem) v celé NAc (Henry a White, 1991; 1995). Zde uvedená zvýšená povrchová exprese D1 DAR však pravděpodobně nevysvětlí tyto předchozí výsledky, protože je omezena na skořepinu a byla prokázána pouze na WD1. Jeden den po provokační expozici kokainu podané 10-14 dny po ukončení opakovaných injekcí kokainu, Beurrier a Maleka (2002) pozorovali zesílení DA-zprostředkované inhibice excitačních synaptických odpovědí v neuronových neuronech středního ostření NAc, které byly zřejmě zprostředkovány presynaptickými DAR typu D1 na glutamátových nervových zakončeních. Možné účinky injekce provokace (například viz Boudreau a kol., 2007 a Kourrich a kol., 2007), v kombinaci s druhovými rozdíly a nedostatkem záznamů v jádru, je obtížné porovnat jejich nálezy s našimi vlastními. Je třeba také poznamenat, že agonisté a antagonisté DAR používané Henry a bílý (1991; 1995) a Beurrier a Malenka (2002) nerozlišoval mezi D1 a D5 DAR.

Hladiny D2 DAR se snižují v NAc po přerušení podávání kokainu

Hlavním účinkem pozorovaným v naší studii bylo snížení D2 DAR proteinu v NAc jádru i ve skořápce po přerušení podávání kokainu v porovnání s kontrolami solného roztoku. Toto bylo výraznější ve skořápce, kde byly intracelulární, povrchové a celkové pásy sníženy na WD1 i WD45. V jádru byla povrchová exprese D2 DAR snížena pouze na WD45 a celkové hladiny D2 DAR se významně nesnížily. Několik dalších studií podobně zjistilo sníženou expresi D2 DAR po přerušení podávání kokainu. U opic rhesus s rozsáhlými zkušenostmi se samopodáváním kokainu byla hustota D2 DAR, měřená autoradiografií receptoru, snížena v mnoha striatálních oblastech, včetně jádra a skořápky NAc, když byla tkáň získána bezprostředně po poslední relaci (Moore a kol., 1998b; Nader a kol., 2002). Při použití PET byl tento účinek v bazálních gangliích detekován během 1 týdne po zahájení samopodávání kokainu (Nader a kol., 2006). Míra, při které se hladiny D2 DAR během vysazení zotavují, může záviset na celkovém příjmu kokainu. V autoradiografické studii se hladiny D2 DAR v NAc obnovily na kontrolní hodnoty po 30 nebo 90 dnech po stažení z 100 relací samopodávání kokainu (Beveridge a kol., 2009). Ve studii PET u opic s delší expozicí (1 rok) a tedy s vyšším celkovým příjmem kokainu však 3 opic 5 vykázal obnovení hladin D2 DAR po 90 dnech, zatímco opice 2 nevykazovaly zotavení ani po 12 měsících (Nader a kol., 2006). Celkově tyto výsledky dobře odpovídají našim zjištěním snížených hladin D2 DAR během odběru.

Studie PET závislých na kokainu u lidí také zjistily snížené hladiny D2 DAR v mnoha striatálních oblastech, včetně ventrálního striata, které byly patrné jak v časném stažení, tak i po 3-4 měsících detoxikace (Volkow a kol., 1990, 1993, 1997). Význam pro chování je však nejasný, protože dostupnost D2 DAR nekoreluje s pozitivními subjektivními účinky kokainu ani s rozhodnutím vzít více kokainu po úvodní dávce (Martinez a kol., 2004). Je důležité si uvědomit, že i když touha po kokainu vyvolané závislosti na čase vykazuje v průběhu vysazení („inkubace“) časově závislé zvýšení, k tomu však nedochází při hledání kokainem aktivovaného kokainu (Lu a kol., 2004a). Proto výsledky Martinez et al. (2004) ponechte otevřenou možnost, že dostupnost D2 DAR by mohla korelovat s vyhledáním kokainu vyvolaného cue, zaměření zde popsaného inkubačního modelu. Nízká dostupnost D2 DAR u uživatelů kokainu u člověka koreluje se sníženým frontálním kortikálním metabolismem (Volkow a kol., 1993). Spolu s dalšími změnami to může přispět ke ztrátě kontroly, ke které dochází, když jsou závislí vystaveni drogám nebo narázům spárovaným s drogami, ak většímu zvýraznění drog ve srovnání s odměnami bez drog (Volkow a kol., 2007; Volkow a kol., 2009). Je třeba poznamenat, že snížené hladiny D2 DAR ve studii PET mohou naznačovat zvýšené uvolňování DA spíše než snížené hladiny D2 DAR, ale nedávné výsledky argumentují proti tomuto vysvětlení v případě pacientů závislých na kokainu (Martinez a kol., 2009). Navíc postmortální studie uživatelů lidského kokainu zjistila trend snižování hladiny D2 DAR v NAc pomocí imunoblottingu (Worsley a kol., 2000).

Studie u lidí závislých na kokainu nemohou určit, zda snížená dostupnost D2 DAR je predispoziční vlastností nebo výsledkem expozice kokainu, ale jiné výsledky naznačují, že oba jsou pravdivé. Na jedné straně experimenty na lidech, které nezneužívají drogy, našly inverzní korelaci mezi dostupností D2 DAR a zprávami o „drogové zálibě“ při podávání methylfenidátu (Volkow a kol., 1999; 2002). Tato zjištění naznačují, že nízká dostupnost D2 DAR může zvýšit zranitelnost vůči závislosti. Podobný závěr podporují studie u opic rhesus. U sociálně umístěných opic zvyšuje dosažení sociální dominance dostupnost D2 DAR ve striatu, což je spojeno s nižší citlivostí na posilovací účinky kokainu ve srovnání s podřízenými opicemi (Morgan a kol., 2002). Společenské postavení je také korelováno se striatální dostupností D2 DAR u dobrovolníků bez drog (Martinez a kol., 2010). Na druhé straně studie PET i receptorové autoradiografie ukazují, že dlouhodobé užívání kokainu snižuje dostupnost striatálního D2 DAR receptoru u individuálně chovaných opic, jak bylo uvedeno výše (Moore a kol., 1998b; Nader a kol., 2002; Nader a kol., 2006). Chronické užívání kokainu také zdá se, že snižuje dostupnost D2 DAR u dominantních opic umístěných v sociální síti (Czoty a kol., 2004). Po dlouhodobém užívání kokainu tedy již neexistovaly žádné významné rozdíly v dostupnosti receptoru D2 nebo zesilující účinky kokainu mezi dominantními a podřízenými opicemi (Czoty a kol., 2004). Zvýšené hladiny D2 DAR se však během abstinence u dominantních opic rozplynuly, což souviselo s delší latencí v reakci na novost, což je vlastnost predikující sníženou citlivost na posilující účinky kokainu (Czoty a kol., 2010).

Stejně jako u lidí a opic, studie na potkanech naznačují, že nízká dostupnost D2 DAR je rizikovým faktorem pro zranitelnost vůči kokainu. Studie PET u potkanů ​​s vysokou impulsivitou (vlastnost spojená se zvýšeným podáním kokainu) tedy ukazují sníženou dostupnost D2 / D3 DAR ve ventrálním striatu (Dalley a kol., 2007). Hladiny D2 DAR v NAc jsou také sníženy u potkanů, kteří vykazují vysokou lokomotorickou reakci na novost, další vlastnost spojená se zranitelností závislosti (Hooks a kol., 1994). Naše výsledky u potkanů ​​naznačují, že snížené hladiny D2 DAR v NAc mohou být také důsledkem opakované expozice kokainu, v souladu se studiemi na opicích a lidech (výše). Dvě studie autoradiografie receptorů u potkanů ​​však našly výsledky, které se liší od našich. Ben-Shahar a kol. (2007) nepozoroval snížené hladiny D2 DAR v NAc po stažení (20 min, 14 dní 60 dní) z režimu samopodávání kokainu s rozšířeným přístupem podobného našemu (6 hod / den), i když poklesy byly pozorovány ve skořápce NAc po omezeném režimu přístupu (2 hod / den) a 14 dní od odstoupení (Ben-Shahar a kol., 2007). Stéfanski et al. (2007) nenalezli žádné změny v hladinách D2 DAR v jádru nebo skořápce 24 h po přerušení samovolného podávání kokainu s omezeným přístupem (2 hod / den), ačkoli hladiny D2 DAR se snížily v joke kontrolách kokainu. Jak je uvedeno výše, autoradiografie receptoru měří celkové buněčné receptory, zatímco studie zesíťování PET a proteinu měří receptory buněčného povrchu.

Celkově studie o vztahu mezi hladinami D2 DAR a samopodáváním kokainu podporují model, ve kterém D2 DAR normálně omezují samopodávání kokainu. Doporučujeme proto, aby snížené hladiny D2 DAR pozorované v našich experimentech mohly přispět k vyhledání kokainu vyvolaného cue po odběru kokainu. Zejména skutečnost, že povrchová exprese D2 DAR v jádru NAc byla snížena na jádru WD45, ale nikoli WD1, v kombinaci s klíčovou rolí jádra NAc v hledání kokainu vyvolaného cue naznačuje, že časově závislé snížení D2 DAR v jádru NAc může přispívají k časově závislé intenzifikaci vyhledávání kokainu vyvolaného cue. To by předpovědělo, že infúze agonisty D2 v průběhu NAC během odběru by snížila hledání kokainu vyvolaného podnětem. Bohužel, žádné studie nezkoumaly účinky léků intra-NAc D2 DAR v inkubačním modelu. Na druhé straně studie o navrácení na prima kokainu naznačují, že D1 a D2 DAR ve skořápce a středním jádru spolupracují na podpoře vyhledávání kokainu (Anderson a kol., 2003; Bachtell a kol., 2005; Schmidt a Pierce, 2006; Schmidt a kol., 2006). Na základě těchto zjištění lze předpokládat, že snížená exprese D2 DAR pozorovaná v našich experimentech snižuje hledání kokainu, to znamená, že vyvolává účinek opačný k intenzitě závislé na stažení, která je skutečně pozorována. Tento nesoulad může odrážet problémy způsobené zobecněním od znovuzískání po kokainu po tréninku vyhynutí do vyhledání kokainu navozeného po stažení.

Po přerušení podávání kokainu dochází v jádru NAc k časově závislému zvýšení povrchové exprese D3 DAR.

Studie léčiv preferovaných D3 DAR v paradoxech self-podání a opětovného užívání kokainu naznačují, že antagonisty D3 DAR mohou být užitečné při léčbě závislosti na kokainu, a zejména při snižování reaktivity na návyky spojené s kokainem (Heidbreder a kol., 2005; 2008; Le Foll a kol., 2005; Xi a Gardner, 2007). Tyto výsledky naznačují, že aktivace D3 DAR endogenním DA může být zapojena do zprostředkování vyhledávání kokainu vyvolaného podnětem. Naše výsledky ukazují, že povrchová exprese D3 DAR v jádru NAc je nezměněna na WD1 při samopodávání kokainu s rozšířeným přístupem, ale zvýšena na WD45 ve spojení s inkubací kokainové touhy. Exprese povrchu D3 DAR se ve skořápce významně nezvýšila, i když došlo k malému, ale významnému zvýšení poměru povrch / intracelulární. Vzhledem k úloze přenosu D3 DAR při reakci na návyky spojené s kokainem a důležitost jádra pro vyhledávání kokainem vyvolaného cue je lákavé spekulovat, že zvýšená povrchová exprese D3 DAR v jádru NAc přispěla k inkubaci kokainem indukovaného kokainu touha, která je pozorována na WD45. Neurální místo, ve kterém antagonisté D3 DAR působí ke snížení hledání kokainu, však nebylo stanoveno. Konkrétně žádné studie nezkoumaly účinek injekce D3 DAR do nitridu NAc na vyhledávání kokainu vyvolaného podnětem. V jiném modelu Schmidt a kol. (2006) zjistili, že injekce D3-preferujícího agonisty PD 128,907 do jádra nebo skořápky nevedla k opětovnému nastartování hledání kokainu po extinkčním tréninku.

Naše výsledky jsou obecně v souladu s autoradiografickými studiemi receptorů, které měřily celkové hladiny D3 DAR v NAc po expozici kokainu. Staley a Mash (1996) uvádí, že vazba D3 DAR byla vyšší u NAc obětí předávkování kokainem ve srovnání s kontrolami odpovídajícími věku. Po expozici kokainu v preferovaném paradigmatu preferovaného místa a po třech dnech odejmutí vykazovaly myši zvýšenou vazbu D3 DAR v jádru a skořápce NAc (Le Foll a kol., 2002). Neisewander a kol. (2004) měřila vazbu D3 DAR u potkanů ​​s rozsáhlými zkušenostmi se samopodáváním kokainu, které byly testovány na opětovnou aktivaci vyvolanou kokainem po různých ochranných lhůtách a poté 24 h později usmrteny. Vazba D3 DAR v NAc byla na WD1 nezměněna, ale po delším čase (WD31-32) se zvýšila, což je v souladu s naším pozorováním časově závislého zvýšení. Kromě toho léčba léky během vysazení, která snížila hledání kokainu, také zmírnila zvýšení vazby D3 DAR, což naznačuje, že upregulace D3 DAR je funkčně spojena s vyhledáváním kokainu. Je třeba poznamenat, že D3 DAR vzrůstá Neisewander a kol. (2004) byly významné v jádru, zatímco ve skořápce byly pozorovány pouze trendy, ale podoblasti byly analyzovány v rostrální části NAc, kde jádro a skořápka jsou méně výrazné. Naše analýza byla provedena na jádru a skořápce ze rostrálních a kaudálních částí NAc.

Tato práce byla podpořena cenou DA009621, DA00453 a cenou NARSAD Distinguished Investigator Award pro MEW, DA020654 až MM a cenou přednášející National Research Service Award DA021488 pro KLC.