Chronické samo-podávání alkoholu má za následek zvýšené hodnoty ˝ FosB: srovnání hybridních myší s odlišnými pitnými vzory (2012)

BMC Neurosci. 2012 Oct 29;13:130. doi: 10.1186/1471-2202-13-130.
 

Zdroj

Wagonerovo centrum pro alkoholismus a Závislost Výzkum, Institut neurovědy, Texaská univerzita v Austinu, Austin, TX, 78712, USA. [chráněno e-mailem].

Abstraktní

ABSTRAKTNÍ:

POZADÍ:

Neschopnost snížit nebo regulovat příjem alkoholu je charakteristickým příznakem poruch užívání alkoholu. Výzkum nových behaviorálních a genetických modelů zkušeností vyvolaných změn v pití budeme dále informovat o poruchách užívání alkoholu. Zvláštní chování při samovolném podávání alkoholu bylo dříve pozorováno při porovnávání dvou hybridních kmenů F1 myší: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) ukazují snížené preference alkoholu po zkušenostech s vysokou koncentrací alkoholu a obdobích abstinence zatímco C57BL / 6J x FVB / NJ (BxF) vykazují trvalé alkoholové preference. Tyto fenotypy jsou zajímavé, protože tyto hybridy prokazují výskyt genetické aditivity (BxN) a naddominance (BxF) v příjmu ethanolu závislým způsobem.

Konkrétně BxF vykazují trvalé alkoholové preference a BxN vykazují snížené preference alkoholu po zkušenostech s vysokými koncentracemi ethanolu; zkušenosti s nízkými koncentracemi etanolu však přinášejí trvalé alkoholové preference obou hybridů.

V této studii jsme testovali hypotézu, že tyto fenotypy jsou reprezentovány diferenciální produkcí indukovatelného transkripčního faktoru, ΔFosB, v odměňování, averzi a mozkových oblastech souvisejících se stresem.

Výsledky:

Změny neuronální plasticity (měřené úrovněmi ΔFosB) byly závislé na zkušenosti, stejně jako specifické oblasti mozku a genotypu, dále podporovaly to, že neuronové obvody jsou základem motivačních aspektů spotřeby ethanolu.

BxN myši, které vykazovaly sníženou preference alkoholu, měly nižší hladiny ΔFosB v jádře Edinger-Westphal než myši vykazující trvalé alkoholové preference a zvýšené hladiny ΔFosB v centrální mediální amygdii ve srovnání s kontrolními myšimi.

BxN myši vykazující trvalou preference alkoholu vykazovaly vyšší hladiny ΔFosB ve ventrální tegmentální oblasti, Jádro Edinger-Westphal a amygdala (centrální a boční divize).

Navíc v BxN myší hladiny ΔFosB v jádře Edinger-Westphal a ventrálních tegmentálních oblastech významně pozitivně korelovaly s preferencí a příjmem etanolu. Navíc hierarchická shluková analýza ukázala, že mnoho myší, kteří dosud netrpí etanolem s celkovými nízkými hladinami ΔFosB, je v klastru, zatímco mnoho myší, které vykazují trvalé alkoholové preference, s celkovými vysokými hladinami ΔFosB, jsou ve shluku společně.

Závěr:

Porovnáním a kontrastu dvou fenotypů alkoholu tato studie prokazuje, že okruhy související s odměnou a stresem (včetně jádra Edinger-Westphal, ventral tegmental area, amygdala) podléhají výrazné plasticitě, která se projevuje jako snížená preference alkoholu.

Pozadí

Existují známé faktory citlivosti, environmentální a genetické, spojené s alkoholem a alkoholismem. Schopnost pít značné množství alkoholu s malým důsledkem pro jednotlivce je primárním nástupním příznakem u mnoha alkoholiků, což naznačuje, že nízká úroveň reakce na alkohol je hlavním faktorem zranitelnosti ve vývoji alkoholismu [1,2]. Definování neurobiologických faktorů přispívajících ke zmírnění alkoholu pomůže pochopit užívání a zneužívání alkoholu a je účinnou strategií pro rozvoj léčebných postupů pro osoby s diagnózou poruch užívání alkoholu. Používání modelů hlodavců k napodobování lidských onemocnění bylo silným nástrojem pro rozvoj porozumění této nemoci a zlepšení léčby. Existuje několik modelů hlodavců, které se zabývají studiem aspektů zneužívání alkoholu a alkoholismu, nicméně žádný model alkoholismu zcela. Rozsah, v jakém se bude myši orálně podávat etanolové roztoky za podobných ekologických podmínek, silně závisí na genetickém pozadí [3].

Nedávno jsme zjistili, že hybridní myši C57BL / 6JxFVB / NJ (BxF) a FVB / NJxC57BL / 6J (FVBxB6) F1 samy podávají neobvykle vysoké hladiny alkoholu během testů preferencí dvou lahví (ženy konzumují 20-35 g / kg / den a muži 7-25 g / kg / den, v závislosti na koncentraci a paradigmatu) [4]. Tento nový genetický model má významnou výhodu ve srovnání s existujícími inbredními kmeny, včetně důkazů o naddominovém fenotypu a pití k vysokým hladinám alkoholu v krvi [4]. Kromě toho vysoká spotřeba ethanolu, kterou vykazují myši BxF, je pozorována ve dvou přídavných systémech na pití alkoholu (pití ve tmě a přijímání ethanolu během pravidelného přístupu do tekutin) [4]. V porovnání se dvěma kmeny F1 hybridních kmenů jsme zaznamenali odlišné chování při samozásobení alkoholu: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) vykazují snížené preference alkoholu po zkušenostech s vysokou koncentrací alkoholu a dobou abstinence a BxF vykazují trvalé alkoholové preference [5]. Při použití testů chování jsme prokázali, že BxN jsou citlivější než BxF myši na averzivní a sedativní, ale ne odměňující účinky etanolu [6].

Základním výzkumem nových behaviorálních a genetických modelů vysoké konzumace alkoholu a zkušeností vyvolaných změn v pití budou naše znalosti o zneužívání alkoholu a alkoholismu. Fenotyp redukovaného alkoholu je zajímavý, protože BxN myši zpočátku vykazují vysokou přednost pro ethanolové roztoky. Ačkoli motivační aspekt snižování příjmu alkoholu po zkušenostech s vysokou koncentrací etanolu a abstinencí není známo, myši BxN mohou být přirovnávány ke středně silným alkoholickým pijákům v tom, že stále konzumují alkoholové roztoky, ale na snížené úrovni, pravděpodobně kvůli odvrácené zkušenosti.

Rovněž je zajímavý model trvale udržovaného alkoholu, protože myši BxF trvale konzumují extrémně vysoké hladiny etanolu bez ohledu na předchozí zkušenosti. Trvalá a snížená preference alkoholu může souviset s účinkem deprivace alkoholu, fenoménem, ​​kdy zvířata vykazují po období nucené abstinence výrazně vyšší konzumaci alkoholue [7]. Účinnost deprivace alkoholu je užitečným jevem pro studium zvýšeného chování alkoholu. Ačkoliv experimentální schéma, o němž je známo, že indukuje účinek alkoholové deprivace, je zcela odlišné od zde používaného rozvrhu, srovnáváním trvalé a snížené preference alkoholu s účinkem deprivace alkoholu souvisí různé behaviorální fenotypy zde diskutované s důležitým fenoménem v modelech výzkumu alkoholu u hlodavců. Snížená preference alkoholu by byla opakem účinku deprivace alkoholu a trvalá alkoholová preference by mohla být popsána jako nepřítomnost alkoholového deprivačního účinku. Použití různých genetických modelů na zvířatech, jako jsou BxF a BxN, významně přispívá k rozvoji oboru, neboť se předpokládá, že poruchy užívání alkoholu vyplývají ze složitých interakcí mezi genetikou a prostředím. Identifikace diferenciálního okamžitého časného genového exprese pro tyto hybridy nabízí vhled do mozkových obvodů důležitých pro obohacující a averzivní vlastnosti etanolu.

Etanol a jiné neurosurčence spojené s drogami byly studovány na specifických modelech hlodavců s použitím molekulárních markerů neuronální plasticity a / nebo aktivity [8-15]. Samostatně podávaný a experimentálně podávaný ethanol nevyústí v ekvivalentní metabolické mapy mozku, což naznačuje, že specifické obvody jsou základem pro posilující účinky etanolu [8,9].

Jedním z klíčových prvků, které se v rámci alkoholového výzkumu ještě neprojevuje, je zkoumání trvalého a sníženého chování přednostního alkoholu a identifikace neuronálních obvodů zapojených během tohoto chování. Cílem tohoto experimentu bylo identifikovat oblasti mozku, které se zabývají trvalou a sníženou preference alkoholu. Protože bylo prokázáno, že chronické podávání alkoholu (spolu s jinými léky zneužívání) způsobuje regionální rozdíly v hladinách ΔFosB v mozku, testovali jsme hypotézu, že tyto behaviorální fenotypy jsou reprezentovány diferenciální produkcí indukovatelného transkripčního faktoru, ΔFosB, v oblastech mozku, zapojit se do odměny, averzie a stresu [10].

Chronické podněty, které způsobují regionální rozdíly v hladinách ΔFosB, zahrnují drogy zneužívání (alkohol, kokain, amfetamin, nikotin, morfin a antipsychotika), chronické stresové stavy (zádržný stres, nepředvídatelný šok do nohou, elektrokonvulzivní záchvaty)11]. Jako potenciální zprostředkovatel dlouhodobé adaptace v mozku je důležitým rozdílem identifikovat dominantní variantu FosB (FosB nebo ΔFosB) jako odpověď na chronickou léčbu etanolem.

Existuje několik studií, které měřily FosB a ΔFosB po chronických podnětech, pro které nebylo ověřeno, že ΔFosB je dominantní izoformou (jak je popsáno níže). Existují však silné důkazy, že ΔFosB, nikoliv FosB, je dominantní izoformou po chronických podnětech [10-12]. Studie provedená Ryabininem a Wangem (1998) zjistila, že u myší s nízkou hladinou alkoholu, kteří preferují myši DBA / 2J, čtyři dny opakovaných injekcí s etanolem vedly k silnému růstu exprese FosB v následujících oblastech mozku: přední kortikální amygdaloidní jádro, laterální septa ventrale, centrální amygdala , laterální amygdala, laterální hypotalamus, jádro sluníčko, jádro stria terminalis a paraventrikulární jádro thalamu [13]. Jejich výsledky určují neurocirkulaci reagující na etanol. Exprese FosB byla také měřena v myši s vysokým obsahem alkoholu C57BL / 6J během pořizování a udržování etanolového samo-podávání za omezených podmínek přístupu. Během akvizice samo-administrace nedošlo ke změnám hladin FosB [14]. Nicméně po dvou týdnech omezeného přístupu etanolového samo-podávání byly hladiny FosB zvýšeny v centrálním mediálním jádru amygdaly a jádra Edinger-Westphal [15]. Celkově zprávy uvádějí nové oblasti, které se zabývají etnickým podáváním etanolu, a také zahrnují roli pro mezokortikolimbickou dráhu a rozšířenou amygdala [16]. Je však důležité poznamenat, že změny hladin ΔFosB závisí na způsobu podávání ethanolu, dávce a délce času vystaveného léčbě nebo schématu [13-15].

Kmeny myší použité v této studii poskytují zajímavé modely pro porovnání trvale udržovaných a snížených preferencí alkoholu a základních mechanismů odpovědných za tyto odlišné reakce na alkohol. Tato studie ukazuje, že myši vykazující sníženou preference alkoholu také vykazují významnou plastičnost v obvodech spojených s odměnou a stresem (včetně jádra Edinger-Westphal, ventrální tegmentální oblasti, amygdaly, nucleus accumbens a cingulate cortex).

výsledky

Účinky koncentrace alkoholu a doby abstinence na vlastní podávání u myší BxF a BxN

Abychom prokázali, že měnící se koncentrace etanolu a / nebo období abstinence změnily následnou spotřebu ethanolu, navrhli jsme čtyři plány (skupiny) pro měření spotřeby ethanolu (obrázek (Obrázek 1a, b).1a, b). Pro každý hybrid existovaly čtyři experimentální skupiny: vysoké koncentrace, vysoké koncentrace s abstinenčními obdobími, nízké koncentrace a nízké koncentrace s dobami abstinence. Kompletní údaje o preference ethanolu (obr (Obrázek2)2) a spotřeby (obr (Obrázek3)3) (pro všechny skupiny a pro oba genotypy). Pro stanovení a ilustraci behaviorálních fenotypů trvalé a snížené preference alkoholu jsou údaje o preferenci a spotřebě alkoholu 9% etanolu uvedeny na obrázcích Obrázky44 a a5.5. Tyto behaviorální fenotypy jsou založeny na porovnání preference a spotřeby alkoholu 9% z první, druhé, třetí a čtvrté prezentace ve skupinách s vysokým koncentracím a odpovídající experimentální dny pro skupiny s nízkým koncentracím. Byla provedena obousměrná preference a spotřeba ANOVA (genotyp x čas) 9% etanolu. U skupiny s vysokými koncentracemi se preferuje etanol (obr (Obrázek4a)4a) a spotřeby (obr (Obrázek5a)5a) byly vyšší pro BxF než BxN a BxF vykazovaly trvalou preferenci a konzumaci alkoholu, zatímco BxN vykazovaly sníženou preferenci a konzumaci alkoholu (ETHANOL PREFERENCE - interakce F (3,54) = 4.83, P <0, genotyp F (01, 1,54) = 24.10, P <0.001, čas F (3,54) = 9.92, P <0.0001; SPOTŘEBA ETHANOLU - interakce N / S, genotyp F (1,54) = 50.73, P <0.0001, čas F (3,54, 11.68) = 0.0001, P <XNUMX). U skupiny s vysokou koncentrací s abstinencí preferuje ethanol (obrázek (Obrázek4b)4b) a spotřebě (obr (Obrázek5b)5b) byly vyšší pro BxF než BxN a BxF vykazovaly trvalou preferenci a spotřebu alkoholu, zatímco BxN vykazovaly sníženou preferenci a spotřebu alkoholu (PREFERENCE ETHANOLU - interakce F (3,132 15.89) = 0.0001, P <1,132, genotyp F (250.43 0.0001) = 3,132, P <27.48, čas F (0.0001) = 3,132, P <11.35; SPOTŘEBA ETHANOLU - interakce F (0.0001) = 1,132, P <510.88, genotyp F (0.0001) = 3,132, P <22.42, čas F (0.0001) = XNUMX, P <XNUMX). U skupiny s nízkými koncentracemi preferenční obsah ethanolu (obrázek (Obrázek4c)4c) a spotřeby (obr (Obrázek5c)5c) byly vyšší pro BxF než BxN a oba hybridy vykazovaly trvalou preferenci a konzumaci alkoholu (ETHANOL PREFERENCE - interakce N / S, genotyp F (1,54) = 12.2, P <0.01, čas N / S; ETHANOLOVÁ SPOTŘEBA - interakce N / S, genotyp F (1,54) = 74.83, P <0.0001, čas N / S). U skupiny s nízkými koncentracemi s abstinencí upřednostňovaný ethanol (obrázek (Obrázek4d)4d) a spotřebě (obr (Obrázek5d)5d) byly vyšší pro BxF než BxN a oba hybridy vykazovaly mírné snížení preference a konzumace alkoholu (ETHANOL PREFERENCE - interakce N / S, genotyp F (1,132) = 166.58, P <0.0001, čas N / S; ETHANOLOVÁ SPOTŘEBA - interakce F (3,132 3.61) = 0.05, P <1,132, genotyp F (480.64 0.0001) = 3,132, P <7.87, čas F (0.0001 6) = XNUMX, P <XNUMX). Stručně řečeno, ve skupinách s vysokou koncentrací (bez abstinence) vykazoval BxF trvalou preferenci alkoholu, zatímco BxN vykazoval sníženou preferenci alkoholu a ve skupinách s nízkou koncentrací (bez abstinence) vykazovaly preferenci trvalého alkoholu jak BxF, tak BXNUMXxN. Vzhledem k tomu, že sledované fenotypy jsou nejlépe zachyceny ve skupinách bez abstinence, je na ně zaměřena zbývající část studie.

Obrázek 1  

Experimentální plán pro dobrovolnou konzumaci etanolu s nepřetržitým přístupem. a. Experimentální rozvrh pro skupiny s nízkým koncentracím a vysokými koncentracemi. b. Experimentální plán pro nízké koncentrace s abstinenčními dobami a vysokými koncentracemi ...
Obrázek 2  

Etanolová preference závisí na genotypu a koncentraci ethanolu. a. Ve skupinách s vysokým koncentracím je etanolová preference (spotřeba etanolu / celková spotřeba tekutin) vyšší u BxF než BxN a liší se nabízenou koncentrací etanolu. b ...
Obrázek 3  

Spotřeba etanolu závisí na koncentraci genotypu a ethanolu. a. Ve skupinách s vysokým koncentracím je spotřeba ethanolu (g / kg / den čistého ethanolu) pro BxF větší než BxN a mění se nabízená koncentrace etanolu. b. Ve vysokých koncentracích ...
Obrázek 4  

Trvalé a snížené behaviorální fenotypy alkoholu. Porovnání preference 9% etanolu z první, druhé, třetí a čtvrté prezentace ukazuje, že prokázaly behaviorální fenotypy trvalé nebo snížené preference alkoholu. a. ...
Obrázek 5  

Trvalé a snížené behaviorální fenotypy konzumace alkoholu. Porovnání spotřeby etanolu 9% z prvního, druhého, třetího a čtvrtého zobrazení ukázalo, že prokázaly behaviorální fenotypy trvalé nebo snížené spotřeby alkoholu. ...

Úrovně ΔFosB

Kvantifikace a analýza ΔFosB byla použita k identifikaci neurocirkulace chronicky aktivované během trvale udržovaných a snížených preferencí alkoholu. Pro každý hybrid existovaly tři experimentální skupiny: Vysoké koncentrace, nízké koncentrace a voda (kontrola). Údaje ΔFosB jsou uvedeny jako procento ΔFosB pozitivních neuronů [(# ΔFosB pozitivních neuronů) / (# ΔFosB pozitivních neuronů + # Nissl pozitivních neuronů)] (tabulka (Table1).1). Předchozí práce ukázala, že zkušenost s etanolem může vyvolat neurodegeneraci [17]. Proto jsme zkoumali neuronální čísla v této studii a neoznámili jsme žádný významný rozdíl založený na genotypu nebo skupině pro oblasti mozku kvantifikované v této studii. Byly provedeny následující tři analýzy dat ΔFosB: 1) třícestná ANOVA (genotyp x skupina x oblast mozku), 2) dvouvláknová ANOVA (skupina mozkové oblasti x pro každý genotyp a 3) korelační matrice byly vyvinuty pro mapování korelace sítě.

Tabulka 1  

Percento pozitivních neuronů ΔFosB

Opakovaná měření třícestné ANOVA (genotyp x skupina x oblast mozku) odhalily interakci genotyp x oblast mozku [F (15,375 2.01) = 05, P <15.375], interakce skupina x oblast mozku [F (1.99 0.01) = 15,375, P <43.36] a hlavní účinek na oblast mozku [F (000 2,374) = 11.79, P <0001]. Opakovaná měření obousměrná ANOVA (oblast mozku x skupina) pro každý genotyp ukázala, že došlo k hlavnímu účinku skupiny a oblasti mozku jak pro BxF, tak pro BxN [BxF - F (15,374) = 25.64, P <0001, hlavní účinek skupina; F (2,360 43.38) = 0001, P <15,360, hlavní účinek na oblast mozku; BxN - F (23.73 0001) = XNUMX, P <XNUMX, hlavní účinek skupiny; F (XNUMX XNUMX) = XNUMX, P <XNUMX, hlavní účinek genotypu]. Post-hoc analýza odhalila šest významných skupinových rozdílů pro BxN (obrázek (Obrázek 6a-c).6ac). Percentuální hodnoty ΔFosB byly vyšší ve skupině s nízkým koncentrací než ve skupině Water v La, CeC / CeL, EW a VTA. Procento ΔFosB bylo vyšší ve skupině s vysokými koncentracemi než ve skupině Water v CeMPV. Procento ΔFosB bylo vyšší v skupině s nízkými koncentracemi než ve skupině s vysokými koncentracemi v EW. Data ΔFosB pro všechny ostatní kvantifikované oblasti mozku jsou uvedeny v tabulce Table1.1. K určení, zda% z ΔFosB pozitivních neuronů v dané oblasti mozku korelovalo se spotřebou nebo preferencí ethanolu, byla použita Pearsonova r korelační analýza. Spotřeba a preference etanolu vykazovala významnou pozitivní korelaci s% ΔFosB v EW a VTA myší BxN (SPOTŘEBA ETHANOLU - EW r = 0.85; VTA r = 0.85; PREFERENCE ETHANOLU - EW r = 0.83, VTA r = 0.88; p <0.05 pro všechny).

Obrázek 6  

Trvalá a snížená preference alkoholu vyvolává ΔFosB v amygdaly, EW a VTA. Procento ΔFosB pozitivních neuronů v oblastech amygdaly (a.), EW (b.) a VTA (c.). d. a e. Reprezentativní obrazy barvení podle ΔFosB / Nissl ...

Komplexní vztah mezi expresí ΔFosB, genotypem, mozkovou oblastí a spotřebou ethanolu byl dále zkoumán za použití principiální analýzy a hierarchického shluku. Analýza hlavních komponent ukázala, že většina variability (~ 80%) v datech byla reprezentována součástmi 5. Neupravené hierarchické shlukování (shlukované jednotlivci a oblasti mozku) pak bylo provedeno a objednáno za použití první hlavní složky (obrázek (Obrázek7).7). Individuální shlukování odhalilo silné, ale ne dokonalé, vzorce seskupení založené na spotřebě etanolu, bez ohledu na genotyp. Mnoho z myší dosud neléčených etanolem shlukovalo dohromady a vykazovalo méně celkového ΔFosB než průměr a mnoho myší, které vykazovaly trvalé alkoholové preference shlukované dohromady a vykazovaly více celkového ΔFosB než průměr. Tyto dva klastry byly nejvíce divergentní. Tři seskupení představovaly větší, méně než průměrnou kombinaci hodnot ΔFosB a fenotypů pití etanolu.

Obrázek 7  

Hodnoty ΔFosB nejsou poháněny samotnou spotřebou ethanolu. Byla provedena hierarchická shlukování a je zobrazena výsledná mapa tepla jednotlivých úrovní ΔFosB a odpovídající spotřeba 9% ethanolu. Zelená = ΔFosB menší než ...

Diskuse

Při porovnávání dvou hybridních kmenů F1 u myší bylo pozorováno odlišné chování při samozásobení alkoholem: BxN vykazují snížené preference alkoholu po zkušenostech s vysokými koncentracemi alkoholu a obdobím abstinence, zatímco BxF vykazují trvalé alkoholové preference. BxF modely jsou stabilní, mají vysokou spotřebu (trvalé alkoholové preference) a BxN modely mají mírné pití (snížená preference alkoholu). Plastická neuronová aktivita (nebo aktivita měřená hladinami ΔFosB) byla různá v závislosti na zkušenostech s etanolem a dále podporovala základní roli specifických neuronových obvodů při udržované a snížené preference alkoholu.

U kmene náročného na alkohol, C57BL / 6, je přednost a spotřeba etanolu vysoce závislá na počáteční koncentraci ethanolu, délce abstinence a substinu (C57BL / 6Cr nebo C57BL / 6J) [7,18]. Zjistili jsme, že preference a spotřeba etanolu pozorovaná u myší BxF byla ve čtyřech různých testovaných výkazech trvale vyšší (a stabilnější než u BxN). Mírně vysoká preference a spotřeba etanolu v BxN byla potvrzena pouze jedním schématem chronického pití (nízká koncentrace bez abstinence), zatímco u všech ostatních testů chronického pití byly pozorovány snížení preferencí a spotřeby. BxN snížená preference alkoholu nabízí nový zvířecí model, ve kterém zkušenost (opakovaná prezentace etanolu po zkušenostech s vícenásobnými vysokými koncentracemi etanolu a / nebo několika krátkými obdobími abstinence) dramaticky snižuje jejich reakci na dříve vysoce preferovanou koncentraci ethanolu.

Samostatně podávaný a experimentálně podávaný ethanol produkuje různé metabolické mapy mozku, což naznačuje, že specifické obvody jsou základem pro zesilující účinky etanolu [8,9]. Testovali jsme hypotézu, že udržované a snížené fenotypy behaviorálních alkoholových preferencí jsou reprezentovány diferenciální produkcí indukovatelného transkripčního faktoru, ΔFosB, v oblastech mozku, o nichž je známo, že se podílejí na odměně, averzii a stresu. ΔFosB je transkripční faktor s jedinečnou dlouhodobou stabilitou a nepůsobí na stimuly jako c-Fos, spíše se akumuluje během chronické léčby. Zvýšení ΔFosB je způsobeno zvýšenou neuronální aktivitou a předpokládá se, že odráží dlouhodobou neuronovou plasticitu. Zjistili jsme, že procento pozitivních neuronů v oblasti mozku závisí na genotypu (BxF a BxN) a skupině (kontrola vody, nízké koncentrace a vysoké koncentrace).

Fnebo BxN, post-hoc analýza ukázala, že dobrovolná spotřeba etanolu vedla ke zvýšení ΔFosB v jádře EW, VTA a amygdale: což svědčí o zvýšené neuronální plasticitě v oblastech mozku, o nichž je známo, že se podílejí na etanolu, odměnách a reakcích na stres. BxN myši ve skupině s vysokými koncentracemi (snížená preference alkoholu) mají sníženou neuronovou plasticitu v EW, což naznačuje, že tyto neurony reagují na příjem alkoholu s plastickou závislostí na zkušenostech. Ve skupině s nízkými koncentracemi (vykazující trvalou preferenci alkoholu) je neuronová plasticita v EW větší než ve skupinách s vysokou koncentrací a kontrolou vody. Přestože byly provedeny s použitím různých paradigmů na pití alkoholu a genetických myších modelů, naše nálezy u EW myší BxN souhlasí s předchozími studiemi o spotřebě ethanolu [14,15]. Ne preganglionická EW byla nedávno charakterizována jako obsahující neurony obsahující periokulomotor urokortin (Ucn)19]. Ucn1 je peptid podobný faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF), který váže CRF1 a CRF2 receptory. Předchozí studie používající genetické, farmakologické a léze ukázaly, že Ucn1 se podílí na regulaci spotřeby alkoholu [19-22]. Tzde je známá genetická predispozice pro vysoký příjem alkoholu u hlodavců, která je korelována s vyššími bazálními hladinami Ucn1 v EW a LSi [23]. Takže nedostatek post-hoc významu, který jsme pozorovali v EW u vysoce myších BxF myší, které preferují a konzumují alkohol, byla neočekávaná. Možná je to kvůli mírně zvýšené procentuální úrovni ΔFosB ve vodní skupině BxF ve srovnání s vodní skupinou BxN. Úroveň ΔFosB v procentech pro všechny myši s prodlouženou preferencí alkoholu (skupina BxF High Concentrations, skupina BxF Low Concentrations a skupina BxN Low Concentrations) byla docela podobná.

Pro BxN, spotřeba etanolu v skupině s nízkou koncentrací zvýšila neuronovou plasticitu ve VTA (vyšší než ve skupinách s vysokou koncentrací a kontrolou vody). Preference a spotřeba etanolu byla také pro skupinu s nízkými koncentracemi vyšší. Nedostatek post-hoc významu, který jsme pozorovali ve VTA u vysoce myších BxF myší s vysokou konzumací alkoholu, byl neočekávaný a mohl být způsoben mírně vyššími bazálními hladinami ΔFosB ve skupině s kontrolou vody. Percentuální hodnoty ΔFosB byly ve skupině s vodou BxF mírně zvýšeny ve srovnání s vodní skupinou BxN, zatímco procento hladin ΔFosB bylo velmi podobné u všech myší s prodlouženou konzumací alkoholu (skupina BxF High Concentrations, skupina BxF Low Concentrations a skupina BxN Low Concentrations) . Dopaminový systém VTA hraje významnou roli při zprostředkování posilovacích účinků etanolu a podílí se na mnoha vzájemných vztazích důležitých pro etanol a chování související s odměnou [24-26]. Navíc VTA projektuje jádro amygdaly a EW. Bylo prokázáno, že krysy samy podávají etanol přímo do VTA [27]. Také expozice etanolu zvyšuje rychlost spalování dopaminergních neuronů ve VTA [28,29]. Zvýšená rychlost střelby by mohla být spojena s indukcí ΔFosB ve VTA, kterou jsme pozorovali po chronickém dobrovolném podání etanolu v BxN.

Závislost na alkoholu vyvolává dlouhodobé neuroadaptace, což má za následek negativní emocionální stavy; důležitým mechanismem negativní výztuže je signalizace faktoru uvolňujícího kortikotropin (CRF) v amygdální [30]. Farmakologická manipulace neuronů v CeA se zaměřila na GABA, CRF, opioidní, serotoninové, dynorfinové a norepinefrinové receptory [25,31-34]. GAntagonisté ABA, stejně jako antagonisté CRF, snižují spotřebu ethanolu [32,33,35]. Léze CeA redukují dobrovolnou spotřebu etanolu [36]. Naše nálezy dále podporují úlohu CeA v regulaci pití alkoholu. GABAergní neurony v centrální amygdale tvoří heterogenní populaci, jejíž vazby se vztahují k jejich obsahu peptidů. Tyto GABAergní neurony integrují výstupní aktivitu CeA. Jak bylo přezkoumáno v [Wee a Koob (2010]), svěčné studie identifikovaly úlohu dynorfinových a kappa-opiátových receptorů při udržování a zvyšování příjmu ethanolue [37]. V nedávné době Walker a kol. Prokázali, že antagonista k-opioidního receptoru, nor-binaltorfimin, v rozšířené amygdale selektivně snižuje etanolové podávání u závislé zvířata [38]. Kappa opioidní receptor signalizace zůstává klíčovým zájmem výzkumu na křižovatce stresu, odměny a averze. Bylo také prokázáno, že stresem indukované etanolové podávání je zprostředkováno signalizací kappa opioidního receptoru [39]. Centrální CeA lze rozdělit na latero-kapsulární (CeL / CeC) a mediální zadní ventrální. GABAergní neurony CeL / CeC dostávají dopaminergní inervace z VTA; jak již bylo uvedeno, jsou tyto neurony aktivovány po akutním podání etanolu a vykazují zvýšené myši s obsahem DFosB, které vykazují nepřetržité alkoholové preference. Viz také Mc [Nevěsta (2002]) za vynikající přehled o CeA a účincích alkoholu [40]. V naší studii BxN myši s prodlouženou alkoholovou preferencí (skupina Low Concentrations) vykazovaly zvýšenou neuronovou plasticitu u myší CeC / CeL a La a BxN se sníženou preference alkoholu (skupina s vysokým koncentracím) vykazovaly zvýšenou neuronovou plasticitu v CeMPV. Tyto výsledky naznačují, že specifická zkušenost s etanolem zahrnuje plastičnost v GABAergních neuronech v amygdálce. S těmito údaji spolu s odpovídajícími změnami v neuronální plasticitě v VTA a EW navrhujeme, aby tento okruh prošel značnou plasticitou v podmínkách udržovaných alkoholových preferencí.

Dřívější výzkum ukázal, že myši C57BL / 6J mohou dosáhnout vysokých hladin alkoholu v krvi dvěma lahvemi, ale tyto hladiny alkoholu v krvi nejsou udržovány a často pití nesplňuje kritéria pro farmakologickou motivaci stanovená Dolem a Gentrym (1984) [41,42]. BxN myši, které vykazují snížené preference alkoholu, spotřebovaly méně, než by se očekávalo od typické myši C57BL / 6J [1]. Ačkoli jsme však nezobrali vzorky alkoholu v krvi, není pravděpodobné, že BxN myši vykazující snížení alkoholu dosáhly udržovaných farmakologicky významných hladin alkoholu v krvi, což naznačuje, že vysoké koncentrace alkoholu v krvi nejsou nezbytné pro vyvolání plasticity v těchto oblastech mozku. Je důležité poznamenat, že ve skupině BxF existuje i velmi významný účinek, i když post-hoc výsledky (opravené pro vícečetné srovnání) pro oblasti mozku BxF neuvedly významné změny v procentech pozitivních neuronů ΔFosB v žádné oblasti po chronické spotřebě ethanolu s těmito různými plány.

Pro vizualizaci potenciálních vztahů mezi proměnnými bylo provedeno hierarchické shlukování. Teplotní analýza výsledné analýzy ukazuje obecný trend mezi hladinami ΔFosB a spotřebou ethanolu bez ohledu na genotyp. Vyšší hladiny ΔFosB byly spojeny s vysokým obsahem alkoholu a nižší hladiny ΔFosB byly asociovány s kontrolními zvířaty; síla vztahu však nebyla dostatečná k přesnému předpovídání fenotypů pití založených pouze na hladinách ΔFosB.

Závěry

Samostatné chování s odlišným alkoholem bylo pozorováno u dvou hybridních kmenů F1 myší: BxN vykazují snížené preference alkoholu po zkušenostech s vysokou koncentrací alkoholu, zatímco BxF vykazují trvalé alkoholové preference. BxF modely jsou stabilní, mají vysokou spotřebu (trvalé alkoholové preference) a BxN modely mají mírné pití (snížená preference alkoholu). Změny neuronální plasticity (měřené úrovněmi ΔFosB) byly závislými na zkušenosti, stejně jako specifické pro oblast mozku a genotypu, přičemž další definice neuronových obvodů je základem motivačních aspektů spotřeby ethanolu. Tyto výsledky ukazují, že změna jedné rodičovské linie u hybridních myší má za následek změny ve vzorcích konzumace alkoholu a výrazné změny ve vzorcích exprese ΔFosB, což naznačuje, že v těchto různých hybridních myších jsou zapojeny různé sítě mozku.

Metody

Etika

Tato studie byla provedena ve striktním souladu s doporučeními v Příručce pro péči a používání laboratorních zvířat národních ústavů zdraví. Protokol byl schválen Institutem pro péči o zvířata a užitím Výboru Texaské univerzity v Austinu (AUP 2010-00028). Veškerá operace byla provedena za pentobarbitalové anestézy sodou a bylo vyvinuto veškeré úsilí k minimalizaci utrpení.

Zvířata

Studie byly prováděny za použití hybridních myší F1 intercross odvozených z C57BL / 6J a buď myší FVB / NJ nebo NZB / B1NJ (BxF F1 a BxN F1, kmen mateřského kmene x otcovského kmene). Chovatelé C57BL / 6J, FVB / NJ a NZB / B1NJ byli zakoupeni od laboratoře The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) a ​​zakoupili se v týdnech 7-8. Potomci byli odstaveni do isosexuálních skupin každého z genotypů (BxF F1, BxN F1). Testovali jsme pouze myší samice, abychom usnadnili srovnání s dříve shromážděnými daty [1,5,6]. Myši byly umístěny ve standardních klecích s jídlem a vodou podle libosti. Místnost kolonie a zkušební místnost byly umístěny na 12 h: 12 h tmavý cyklus (rozsvítí se na 07: 00).

Test na výběr ethanolu s dvěma lahvami

Metoda výběru dvou lahviček byla použita pro stanovení dobrovolných vzorků samo-administrace etanolu u samic BxF a BxN myší [1,6]. F1 hybridní samice myší (ve věku 63 dnů) byly jednotlivě umístěny ve standardních klecích, zatímco jeden týden obývaly láhve se sondami obsahujícími vodu před zavedením etanolového roztoku. Po habituci měli myši přístup ke dvěma identickým lahvím: jedna obsahující vodu a druhá obsahovala etanolový roztok. Polohy trubice byly každodenně měněny, aby bylo možné nastavit preference polohy. Při zohlednění potenciálního úniku a vypařování byla průměrná hmotnost vyčerpaná ze zkumavek v kontrolních klecích bez myší odečtena od individuálních hodnot pití každý den. Myši byly během experimentu zváženy každý den 4. Veškerá spotřeba tekutin byla měřena denně v průběhu celého experimentu. Množství spotřebovaného ethanolu a preference ethanolu byly vypočteny pro každou myš a tyto hodnoty byly zprůměrovány pro každou koncentraci ethanolu. Účinek koncentrací alkoholu a období abstinence při samo-podávání u myší BxF a BxN byl prokázán označením experimentální skupiny s přístupem k vysokým koncentracím (zvyšující se přístup k roztokům ethanolu 3-35%, následovaným 3 opakovanými cykly 9, 18, a 27% etanolu, končit konečnou úpravou etanolu 9%) a další skupinou s nízkými koncentracemi (zvyšující se přístup k etanolu 3-9%, přičemž zbývající část experimentu byla provedena s přístupem k 9% ethanolu). Každá z těchto skupin měla podskupinu, která trpěla nebo neměla tři týdenní období abstinence. Kontrolní myši zaznamenaly podobné podmínky ve stejnou dobu jako experimentální myši, ale pouze jedna láhev vody.

Celkově existovalo pět skupin pro každý hybrid: voda (n = 14-16), vysoké koncentrace (n = 10), vysoké koncentrace s abstinenčními periody (n = 20), nízké koncentrace (n = 10) s obdobími abstinence (n = 20). Viz obrázek Obrázek11 pro podrobnější dva plány skupinové volby lahví.

ΔFosB Imunohistochemie a kvantifikace

IFosB imunohistochemie (IHC) byla měřena v 16 oblastech mozku od myší, u kterých došlo k 72dennímu nepřetržitému přístupu buď k vodě (kontrola), nebo vodě a alkoholu [vysoké koncentrace a nízké koncentrace]. Účinek vysokých koncentrací na preference a konzumaci ethanolu byl mnohem větší než účinek abstinence; proto skupiny, u kterých došlo k období abstinence, nebyly zahrnuty do měření ΔFosB IHC. Experiment byl dále prováděn nad rámec prvního výskytu trvalé nebo snížené preference alkoholu, aby se ukázalo, že fenotypy chování jsou stabilní při opakovaných cyklech změn koncentrace ethanolu za účelem zkoumání účinků chronické konzumace ethanolu. Čtyři až osm hodin po odstranění alkoholu v 73. den experimentu byly myši hluboce anestetizovány (175 mg / kg pentobarbitalu sodného) a intrakardiálně perfundovány 20 ml 0.01 M fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS), poté 100 ml 4% paraformaldehyd v PBS. Mozky byly odstraněny, dodatečně fixovány ve 4% paraformaldehydu při 4 ° C, uloženy ve 3% agaróze, rozřezány (50 um, coronal) na vibratom, umístěny do kryoprotektiva (30% sacharóza, 30% ethylenglykol a 0.1% polyvinyl) pyrrolidon v PBS) přes noc při 4 ° C a skladován při -20 ° C, dokud nebyl zpracován na IHC. Rozmrazené řezy byly promyty PBS, ošetřeny 0.3% H2 a inkubovány po dobu jedné hodiny ve 2% normálním kozím séru, aby se minimalizovalo nespecifické značení. Tkáňové řezy pak byly inkubovány přes noc při 3 ° C ve 4% normálním kozím séru a anti-FosB (SC-3, ředění 48: 1, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Řezy byly promyty, inkubovány po dobu jedné hodiny v biotinylovaných kozích anti-králičích Ig (ředění 5000: 1, Vector Laboratories, Burlingame, CA), promyty a inkubovány v komplexu avidin-biotin (ředění 200: 1, Elite kit-Vector Laboratories) . Aktivita peroxidázy byla vizualizována reakcí s 200% diaminobenzidinem (obsahujícím 0.05% H2O2). Částice tkáně byly Nissl kontrastní (pomocí methylenové modři / azurové II). Diapozitivy byly kódovány pro počítání slepých. DFosB-IR neurony byly počítány při zvětšení 50X (oleje) metodou optického frakcionátoru a počítačovým softwarem StereoInvestigator. Informace o parametru odběru vzorků: čítací rámec (50um x 50um x 10um) byl stejný pro všechny kvantifikované oblasti; velikost mřížky byla však určena pro každou oblast mozku, aby se zajistilo, že celkový počet bilaterálních buněk by se rovnal 100-300, aby se dosáhlo variačního koeficientu menšího než 0.1. Data byla vypočtena jako procento kladných jader DFosB (počet pozitivních jader DFosB / počet neuronů) pro každou oblast.

FosB protilátka použitá v této studii (SC-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) byla vznesena proti vnitřní oblasti FosB a rozpoznává jak FosB, tak ΔFosB. Ačkoli tato protilátka rozpoznává jak FosB, tak ΔFosB, imunopozitivní neurony kvantifikované v této studii budou označovány jako neurony pozitivní vůči ΔFosB, protože bylo prokázáno, že zneužívající léky, včetně alkoholu, specificky indukují ΔFosB, ne FosB, v neuronech. Perrotti a kol. ([2008]) měřila indukci ΔFosB (jako odpověď na chronické podávání zneužívajících léků včetně alkoholu) s použitím dvou protilátek: jednoho, který rozpoznává FosB a ΔFosB (SC-48) a jeden selektivní pro ΔFosB (není komerčně dostupný) studovaná imunoreaktivita pozorovaná za použití protilátky FosB (SC-48) je způsobena působením ΔFosB, protože nezjistila žádné imunoreaktivní neurony s použitím protilátky selektivní pro FosB [10]. Kromě toho je známo, že ΔFosB je indukován v mozkové oblasti a typu buněčného typu, různými chronickými léčebnými postupy a vynikajícími recenzemi k tomuto tématu jsou k dispozici [11,43,44].

Zkratky a umístění neuroanatomických struktur

Il - infralimbická kůra (+1.70 mm); Cg1 - cingulate cortex 1 (+1.1 mm); Cg2 - cingulate cortex 1 (+1.10 mm); NAcc jádro - jádro nucleus accumbens (+1.10 mm); Shell NAcc - jádro accumbens shell (+1.10 mm); LSi - laterální septum meziprodukt (+1.10 mm); La - laterální amygdala (-1.22 mm); Bla - bazolaterální amygdala (-1.22 mm); CeC / CeL - centrální kapsulární a centrální boční amygdala (-1.22 mm); CeMPV - mediální posterioventrální část centrálního jádra amygdaly (-1.22 mm); PAG - periaquaductal grey (-3.64 mm); EW - Edinger-Westphalovo jádro (-3.64 mm); VTA - ventrální tegmentální plocha (-3.64 mm); DR - hřbetní raphe (- 4.60 mm); PBN - parabrachiální jádro (-5.2 mm); NTS - nucleus tractus solitarius (-6.96 mm). Mouse Brain ve stereotaxických souřadnicích[45] byla použita k subjektivnímu porovnání jedné až tří částí pro kvantifikaci každé oblasti mozku.

Statistické postupy

Data jsou uváděna jako průměr ± SEM, pokud není uvedeno jinak. Data byla normálně distribuována. Statistiky byly provedeny pomocí statistické verze 6 (StatSoft, Tulsa, OK, USA) a GraphPad Prism verze 4.00 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Opakovaně byla provedena obousměrná analýza ANOVA pro účely spotřeby etanolu a preferenčních údajů pro vyhodnocení rozdílů mezi skupinami. Dvě a třícestné ANOVA byly provedeny pro údaje ΔFosB za účelem vyhodnocení interakcí a hlavních účinků pro skupinu (vysoké koncentrace, nízké koncentrace a voda), oblast mozku a genotyp. Bonferroniho korekce pro několikanásobné srovnání a post-hoc Bonferroniho byla provedena, pokud je to vhodné. Konkrétně jsme předpokládali, že obvod napětí a odměny by zvýšil FosB u myší vykazujících nižší preference alkoholu. Pro každý hybridní kříž byl použit Pearsonův r k identifikaci přítomnosti významných korelací mezi hladinami ΔFosB a preference a spotřebu ethanolu u myší s etherem.

Byla provedena hierarchická shlukování, aby bylo možné představit, jak se data vzájemně liší, a posoudit, jak se tato skupina dat shoduje. Imputované mediánové hodnoty nahrazovaly chybějící procento dat ΔFosB, které nepřesáhly 15% dat. Ačkoli existuje větší míra nejistoty, než kdyby byly imputované hodnoty skutečně pozorovány, vyžaduje hierarchická shluková analýza úplné členství nebo úplné vymazání pro případné srovnání. Hierarchické shlukování bylo provedeno Wardovou metodou a výsledné shluky byly uspořádány podle první principiální komponenty analýzy hlavních komponent (JMP®, verze 8, SAS Institute Inc., Cary, NC). V případě skupin, kteří byli zkušeni vodou a etanolem, byly údaje ΔFosB pro každou oblast mozku transformovány z-skóre a byla provedena analýza hlavních složek k určení počtu klastrů. Data byla pak shlukována oblastmi mozku a jednotlivci pomocí supervizované analýzy hierarchického shluku.

Konkurenční zájmy

Autoři prohlašují, že nemají konkurenční zájmy.

Příspěvky autorů

ARO, YAB, RAH, TAJ přispěly k návrhu studie. ARO získala data. ARO, IP, RDM analyzovaly data. ARO, RDM, IP, TAJ, YAB a RAH se podíleli na přípravě a revizi rukopisu. Všichni autoři četli a schválili konečný rukopis.

Poděkování

Rádi bychom poděkovali paní. Jody Mayfield a Colleen McClung za užitečné diskuse a Marni Martinezová, Jennifer Stokesová, Michelle Foshat, Jose Cienfuegos, Jamie Seymour a Darshan Pandya pro technickou pomoc. Tento výzkum byl podpořen Integrovanou neurologickou iniciativou pro syndrom alkoholismu Grant AA13520 a Národní institut pro zneužívání alkoholu a alkoholismus Granty AA06399-S a AA16424.

Reference

  • Garcia-Andrade C, Wall TL, Ehlers CL. Mýtus požární vody a reakce na alkohol v misijních indiánů. Am J Psychiatrie. 1997;154: 983-988. [PubMed]
  • Schuckit MA, Smith TL, Kalmijn J. Závěry v podskupinách ohledně úrovně reakce na alkohol jako rizikového faktoru u poruch užívání alkoholu: vysokoškolská populace žen a Latinos. Alcohol Clin Exp. Res. 2004;10: 1499-1508. [PubMed]
  • Belknap JK, Crabbe JC, Young ER. Dobrovolná konzumace ethanolu u inbredních myších kmenů 15. Psychopharmacology. 1993;112: 503-510. dva: 10.1007 / BF02244901. [PubMed] [Cross Ref]
  • Blednov YA, Metten P, Finn DA, Rhodos JS, Bergeson SE, Harris RA, Crabbe JC. Hybridní myši C57BL / 6J x FVB / NJ pijí více alkoholu než myši C57BL / 6J. Alcohol Clin Exp. Res. 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Blednov YA, Ozburn AR, Walker D, Ahmed S, Belknap JK. et al. Hybridní myši jako genetické modely s vysokou spotřebou alkoholu. Behav Genet. 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Ozburn AR, Harris RA, Blednov YA. Behaviorální rozdíly mezi hybridními myší C57BL / 6JxFVB / NJ a C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1: vztah k kontrole příjmu etanolu. Behav Genet. 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. Vývoj deprivace a eskalace alkoholu v C57BL / 6J. Alcohol Clin Exp. Res. 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Porrino LJ, Whitlow CT, Samson HH. Účinky samotného podávání etanolu a etanolu / sacharózy na míru lokálního využití mozkové glukózy u potkanů. Brain Res. 1998;791(1-2): 18-26. [PubMed]
  • Williams-Hemby L, Porrino LJ. Nízké a střední dávky etanolu produkují odlišné vzorce metabolických změn mozku u potkanů. Alcohol Clin Exp. Res. 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Rozlišující vzory indukce DeltaFosB v mozku drogami zneužívání. Synapse. 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekulární přepínač pro dlouhodobou adaptaci v mozku. Brain Res Mol Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Perrotti LI, Bolaños CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB se akumuluje v populaci GABAergních buněk v zadním ocásku ventrální tegmentální oblasti po léčbě psychostimulanty. Eur J Neurosci. 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Wang YM. Opakované podávání alkoholu ovlivňuje imunoreaktivitu c-Fos a FosB proteinu u myší DBA / 2J. Alcohol Clin Exp. Res. 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Bachtell RK, Freeman P, Risinger FO. ITF exprese v mozku myši při získávání alkoholové samo-administrace. Brain Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [Cross Ref]
  • Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. Pití alkoholu produkuje selektivní změny v oblasti mozku v expresi indukovatelných transkripčních faktorů. Brain Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Kalivas PW. Jak zjistíme, které lékové neuroplastické změny jsou důležité? Nat Neurosci. 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [Cross Ref]
  • Posádky FT, Nixon K. Mechanismy neurodegenerace a regenerace v alkoholismu. Alkohol. 2009;44: 115-127. dva: 10.1093 / alcalc / agn079. [Cross Ref]
  • Khisti RT, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF. Charakterizace účinku deprivátoru etanolu u substrátů myší C57BL / 6. Alkohol. 2006;40: 119-126. dva: 10.1016 / j.alkohol.2006.12.003. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Weitemier AZ, Tsivkovskaia NE, Ryabinin AE. Distribuce urokortinu 1 v mozku myši závisí na kmeni. Neurovědy. 2005;132: 729-740. dva: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE. Léze jádra Edinger-Westphal u myší C57BL / 6J narušují hypotermii a spotřebu ethanolu indukovanou etanolem. Eur J Neurosci. 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuck MA, Mark GP, Finn DA. Urokortin 1 mikroinjekce do bočního septa myší upravuje získávání a vyjádření spotřeby alkoholu. Neurovědy. 2008;151: 780-790. dva: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Turek VF, Tsivkovskaia NO, Hyytia P, Harding S, Lê AD, Ryabinin AE. Exprese urokortinu 1 v pěti párech potkaních linií selektivně chovaných pro rozdíly v pití alkoholu. Psychopharmacology. 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Ryabinin AE, Weitemier AZ. Urokoortin 1 neurocircuit: citlivost na etanol a potenciální zapojení do konzumace alkoholu. Brain Res Rev. 2006;52: 368-380. dva: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007. [PubMed] [Cross Ref]
  • Samson HH, Tolliver GA, Haraguchi M, Hodge CW. Samostatná aplikace alkoholu: role mezolimbického dopaminu. Ann. NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • McBride WJ, Li TK. Zvířecí modely alkoholismu: neurobiologie vysokého pití alkoholu u hlodavců. Crit Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [Cross Ref]
  • Koob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyytiä P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurocircuitry cíle v odměňování ethanolu a závislost. Alcohol Clin Exp. Res. 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Rodd ZA, Melendez RI, Bell RL, Kuc KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ. Intrakraniální sama podávání etanolu v oblasti ventrálního tegmentu samců potkanů ​​Wistar: důkaz o zapojení dopaminových neuronů. J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [Cross Ref]
  • Gessa GL, Muntoni F, Collu M, Vargiu L, Mereu G. Nízké dávky ethanolu aktivují dopaminergní neurony ve ventrální tegmentální oblasti. Brain Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [Cross Ref]
  • Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie TV. Etanol zvyšuje rychlost spalování dopaminových neuronů ventrální tegmentální oblasti potkana in vitro. Brain Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [Cross Ref]
  • Heilig M, Koob GF. Klíčovou roli faktoru uvolňujícího kortikotropin v závislosti na alkoholu. Trendy Neurosci. 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Dyr W, Kostowski W. Důkaz, že amygdala se podílí na inhibičních účincích antagonistů receptoru 5-HT3 na pití alkoholu u potkanů. Alkohol. 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [Cross Ref]
  • Gilpin NW, Richardson HN, Koob GF. Účinky antagonistů CRF1-receptorů a opioidních receptorů na zvýšení závislosti alkoholického nápoje u potkanů ​​s předností alkoholu (P). Alcohol Clin Exp. Res. 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Hyytiä P, Koob GF. Antagonismus receptoru GABAA v rozšířené amygdální snižuje samovolné podávání etanolu u potkanů. Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [Cross Ref]
  • Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Tallent MK, Siggins GR. Etanol zvyšuje GABAergní přenos na obou před- a postsynaptických místech v centrálních amygdálních neuronech potkana. Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053-2058. dva: 10.1073 / pnas.0437926100. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Roberts AJ, Cole M, Koob GF. Intra-amygdala muscimol snižuje samovolné podávání etanolu operantem u závislé krysy. Alcohol Clin Exp. Res. 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [Cross Ref]
  • Möller C, Wiklund L, Sommer W, Thorsell A, Heilig M. Snížená experimentální úzkost a dobrovolná konzumace ethanolu u potkanů ​​po centrálních, ale ne bazolaterálních lézích amygdaly. Brain Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [Cross Ref]
  • Wee S, Koob GF. Úloha opioidního systému dynorfin-kappa v posilujících účincích zneužívání drog. Psychofarmakologie (Berl) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Walker BM, Valdez GR, McLaughlin JP, Bakalkin G. Cílení systémů dynorfin / kappa opioidních receptorů k léčbě zneužívání alkoholu a závislosti. Alkohol. 2012;46: 359-370. dva: 10.1016 / j.alkohol.2011.10.006. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP. Endogenní kappa-opioidní zprostředkování stresem indukované potenciace etanolem podmíněné preference míst a samo-podávání. Psychofarmakologie (Berl) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [Cross Ref]
  • McBride WJ. Centrální jádro amygdaly a účinky alkoholu a pití alkoholu u hlodavců. Pharmacol Biochem Behav. 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Dole VP, Gentry RT. Směrem k analogii alkoholismu u myší: Měřítkové faktory v modelu. Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543-3546. dva: 10.1073 / pnas.81.11.3543. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Dole VP, Gentry RT. Směrem k analogii alkoholismu u myší: Kritéria pro uznání farmakologicky motivovaného pití. Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469-3471. dva: 10.1073 / pnas.82.10.3469. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  • Nestler EJ. Molekulární neurobiologie závislostí. Am J Addict. 2001;10: 201-217. dva: 10.1080 / 105504901750532094. [PubMed] [Cross Ref]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: molekulární mediátor dlouhodobé neurální a behaviorální plasticity. Brain Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [Cross Ref]
  • Franklin KJ, Paxinos G. Myší mozku ve stereotaxických souřadnicích. 2. San Diego, CA: Academic; 2001.