Indukce DeltaFosB ve striatálních subtypech špinavých neuronů v reakci na chronické farmakologické, emoční a optogenetické stimuly (2013)

J Neurosci. 2013 Nov 20; 33 (47):18381-95. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1875-13.2013.

Lobo MK, Zaman S, Damez-Werno DM, Koo JW, Bagot RC, Dinieri JA, Nugent A, Finkel E, Chaudhury D, Chandra R, Riberio E, Rabkin J, Mouzon E, Cachope R, Jsme rádi, Han MH, Dietz DM, Vlastní DW, Hurd YL, Vialou V, Nestler EJ.

Zdroj

Katedra anatomie a neurobiologie, Marylandská lékařská fakulta v Baltimore, Maryland 21201, Fishberg oddělení neurověd a Friedman Brain Institute, Lékařská fakulta Icahn na Mount Sinai, New York, New York 10029, Psychiatrické oddělení a farmakologie a systémů Lékařská fakulta Icahn na Mount Sinai v New Yorku v New Yorku 10029, Katedra psychiatrie, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, Texas 75390, Ústav farmakologie a toxikologie a Výzkumný ústav závislostí na Státní univerzitě v New Yorku v Buffalu, New Yorku, New York 14214 a Institut National de la Santé a Recherche Médicale, U952, Národní centrum vědeckého výzkumu, Unité de Recherche 7224, UPMC, Paříž, 75005, Francie.

Abstraktní

Transkripční faktor, ΔFosB, je robustně a trvale vyvoláván v striatu několika chronickými podněty, jako jsou drogy zneužívání, antipsychotika, přírodní odměny a stres. Velmi málo studií ovšem zkoumalo stupeň indukce ΔFosB ve dvou podtypech řasnatých středních spiny neuronů (MSN). Využíváme transgenních myší fluorescenčních reportérů BAC, abychom vyhodnotili indukci DFosB v obohaceném a dopaminovém receptoru 1 (D1) obohaceném o MSN v dopplemínovém receptoru 2 (D2) ve ventrálním striatu, v jádře a jádře a v dorsálním striatu (dStr ) po chronické expozici několika lékům zneužívání, včetně kokainu, etanolu, Δ (9) -tetrahydrokanabinolu a opiátů; antipsychotikum, haloperidol; obohacování mladistvých; pití sacharózy; omezení kalorií; inhibitory selektivního inhibitoru zpětného vychytávání serotoninu, fluoxetin; a sociální stres. Naše nálezy ukazují, že chronická expozice mnoha stimulům indukuje ΔFosB v selektivním vzorku MSN podtypu ve všech třech striatálních oblastech. Abychom prozkoumali obvodem zprostředkovanou indukci ΔFosB v striatu, používáme optogenetiku ke zvýšení aktivity v limbických oblastech mozku, které posílají synaptické vstupy do NAc; tyto oblasti zahrnují ventrální tegmentální oblast a několik glutamatergických aferentních oblastí: mediální prefrontální kortex, amygdala a ventrální hippocampus. Tyto optogenetické podmínky vedou k vysoce odlišným vzorkům indukce ΔFosB v subtypech MSN v jádře a shellu NAc. Tyto nálezy dohromady zavádějí selektivní vzorce indukce ΔFosB v striatálních subtypech MSN v reakci na chronické podněty a poskytují nový přehled o mechanismech na úrovni obvodu indukce ΔFosB v striatu.

Úvod

Chronické podněty, včetně návykových látek, antipsychotik, stresu a přírodních odměn, způsobují stabilní akumulaci ΔFosB, zkráceného produktu FosB gen, v striatu (např. Hope a kol., 1994; Hiroi a Graybiel, 1996; Hiroi a kol., 1997; Moratalla a kol., 1996; Perrotti a kol., 2004, 2008; Muller a Unterwald, 2005; McDaid a kol., 2006; Teegarden a Bale, 2007; Wallace a kol., 2008; Solinas a kol., 2009; Vialou a kol., 2010, 2011; Kaplan a kol., 2011). Tato akumulace vede k obousměrné regulaci mnoha genů pomocí ΔFosB v této oblasti mozku (McClung a Nestler, 2003; Renthal a kol., 2008, 2009; Vialou a kol., 2010; Robison a Nestler, 2011). Striatum je složeno převážně z (~ 95%) GABAergických projekčních středních špinavých neuronů (MSN), které jsou rozděleny do dvou podtypů založených na jejich obohacování mnoha genů, včetně dopaminového receptoru 1 (D1) nebo dopaminového receptoru 2 (D2) (Gerfen, 1992; Graybiel, 2000; Lobo a kol., 2006; Heiman a kol., 2008) a jejich diferenciálními výstupy do odlišných subkortikálních struktur (Albin a kol., 1989; Gerfen, 1992; Kalivas a kol., 1993; Graybiel, 2000; Nicola, 2007; Smith a kol., 2013). Nedávno bylo zaznamenáno množství hlášení demonstrujících odlišné molekulární a funkční role těchto subtypů MSN ve ventrálním striatu (NAc) a dorzální striatum (dStr) při zprostředkování motivačního a motorického chování (Lobo a Nestler, 2011; Gittis a Kreitzer, 2012).

Předchozí studie prokázaly, že ΔFosB je indukována primárně u D1-MSNs chronickou léčbou kokainem nebo chronickým během kola, formou přirozené odměny (Moratalla a kol., 1996; Werme a kol., 2002; Lee et al., 2006), zatímco chronické zátěžové napětí indukuje ΔFosB v obou subtypech MSN (Perrotti a kol., 2004). Dále, přesvědčivé důkazy z transgenních linií specifických pro buněčné typy nebo virového genového přenosu prokazují, že indukce ΔFosB v D1-MSN zvyšuje behaviorální a strukturální plastičnost kokainu, reakce na chování k morfinu, běh kola, odměna jídla a odolnost vůči chronické sociální porážce stres, zatímco indukce ΔFosB v D2-MSNs negativně reguluje behaviorální reakce na chod kola (Kelz a kol., 1999; Werme a kol., 2002; Colby a kol., 2003; Olausson a kol., 2006; Zachariou a kol., 2006; Vialou a kol., 2010; Grueter a kol., 2013; Robison a kol., 2013).

Vzhledem k zásadní roli pro ΔFosB při regulaci těchto chronických motivačních podnětů s odlišnými účinky v D1-MSN versus D2-MSNs zde provádíme komplexní studii o modelech indukce ΔFosB v subtypech MSN několika chronickými podněty, včetně chronické expozice drogám chronické léčby antipsychotiky, chronické expozice změněným enviromentálním a apretizujícím podnětům, chronický společenský poruchový stres a chronická léčba antidepresivy. Abychom porozuměli mechanismům obvodu, které řídí indukci ΔFosB v striatu několika aferentními limbickými oblastmi mozku, používáme optogenetické technologie k opakovanému aktivaci buněčných těl v dopaminergních nebo glutamatergických aferentních oblastech mozku a zkoumáme výslednou indukci ΔFosB v subtypech MSN. Naše výsledky poskytují nový pohled na indukci ΔFosB v striatálních D1-MSNs a D2-MSNs pomocí chronických podnětů a poprvé demonstrují obvodem zprostředkovanou indukci ΔFosB v striatu a selektivním subtypu MSN.

Materiály a metody

Zvířata.

D1-GFP or D2-GFP hemizygote myší (Gong a spol., 2003) na pozadí C57BL / 6 byly udržovány na cyklu 12 h světle tmavý s podle libosti potraviny a vodu. Všechny studie byly prováděny v souladu s pokyny stanovenými institucemi pro péči o zvířata a užitím zvířat na Lékařské fakultě University of Maryland a Lékařské fakultě Icahn na Mount Sinai. Pro všechny pokusy byly použity samce myší (věk 8 týdny). Všechny myši byly perfundovány a mozky byly shromážděny během odpoledne světelného cyklu. Hemizygote D1-GFP a D2-GFP že myši na pozadí C57BL / 6 nebo FVB / N byly ekvivalentní divokému typu myší s ohledem na chování, fyziologii D1-MSN a D2-MSN a vývoj MSN (Lobo a kol., 2006; Chan a kol., 2012; Nelson a kol., 2012). Kromě toho jsou celkové vzory indukce ΔFosB pozorované v této studii srovnatelné s celkovými vzory indukcí ΔFosB, které jsou pozorovány u zvířat divokého typu pomocí neelektrických typů selektivních nástrojů (např. Perrotti a kol., 2004, 2008).

Léčba kokainem.

D1-GFP (n = 4 na léčbu) a D2-GFP (n = 4 na léčbu) myši dostávaly 7 denně intraperitoneální injekce kokainu (20 mg / kg) nebo 0.9% fyziologického roztoku v domácí kleci. U injekcí 1 nebo 3 d kokainu (20 mg / kg) myši dostávaly 6 nebo 4 d 0.9% fyziologického roztoku a následně 1 nebo 3 d injekcí kokainu. Všechny myši byly perfundovány 24 h po poslední injekci. Tato dávka kokainu byla vybrána na základě předchozích studií (např. Maze a kol., 2010).

Léčba haloperidolem.

D1-GFP (n = 3 nebo 4 na jednu léčbu) a D2-GFP (n = 4 na léčbu), myši dostávaly haloperidol (2 mg / kg) v pitné vodě, pH 6.0 (Narayan a kol., 2007) nebo pravidelné pitné vody, pH 6.0, pro 3 týdny (21 d). Myši byly perfundovány v den 22.

Léčba morfinem.

D2-GFP myší (n = 4 nebo 5 na léčbu) byly krátce anestetizovány isofluranem a podány subkutánní implantáty morfinu (25 mg) nebo podkožní pelety v den 1 a den 3, jak bylo popsáno výše (Mazei-Robison a kol., 2011). Myši byly perfundovány v den 5.

Etanolová úprava.

D2-GFP myší (n = 4 nebo 5 na léčbu) byly vystaveny dávce 10% ethanolu (EtOH), což je dávka, kterou byl C57BL / 6 podáván (Yoneyama a kol., 2008). Myším byl podán test na výběr dvou lahví pro 10% EtOH (láhev A) a vodu (láhev B), zatímco D2-GFP kontrolky obdržely vodu v obou lahvích (lahvička A a B) pro 10 d. Všechny myši, které dostávaly láhve EtOH, vykazovaly přednost pro EtOH, jak je vypočítáno (100 × láhev A objem / [objem láhve A + objem láhve B]). Myši, které dostaly láhev 10% EtOH, spotřebovaly výrazně více EtOH ve srovnání s vodou, zatímco myši, které obdržely vodu v obou lahvích, neprokázaly žádný rozdíl v spotřebě kapaliny. Večer ve dne 10 dostali všechny myši normální pitnou vodu a v den 11 byly perfundovány.

D (9) -tetrahydrokanabinol (Δ (9) -THC).

D2-GFP (n = 3 na léčbu) myši dostávaly intraperitoneální injekce přípravku X (9) -THC (10 mg / kg) nebo vehikula (0.9% fyziologického roztoku s 0.3% Tween)Perrotti a kol., 2008). Myši byly perfundovány 24 h po poslední injekci.

Kokainová samospráva.

D2-GFP myší (n = 4 nebo 5 na léčbu) byly původně vycvičeny pro pákové lisování pro pelety 20 mg sacharózy na fixním poměru 1 (FR1), dokud nebylo dosaženo kritéria pro získání pelet 30 sacharózy spotřebované pro 3 po sobě jdoucí testovací dny podle standardních postupůLarson a kol., 2010). Myši, které se naučily lisu páky, byly chirurgicky implantovány intravenózním jugulárním katetrem, aby umožnily následné intravenózní podání kokainu. Jeden týden po operaci byly myši zavedeny do paradigmatu sebepodnikání během 2 h denních zasedání na FR1 rozvržení výztuže. Zařízení s vlastním podáním (Med Associates) bylo naprogramováno tak, aby odezva na aktivní páce vedla k dodávání (přes 2.5 s) kokainu (0.5 mg / kg / infuze na správný pákový lis), zatímco reakce na neaktivní páku neměl žádný naprogramovaný důsledek. Myši samy podávané kokain v rozvrhu FR1 v denním 2 h sessions, 5 d týdně, pro 3 týdny. D2-GFP myším, kterým byly podávány injekce 0.9% fyziologického roztoku v ekvivalentním časovém období, byly použity jako kontroly. Myši byly perfundovány 24 h po posledním podání kokainu nebo fyziologického roztoku.

Heroinová samospráva.

Před samotnou administrací heroinu, D2-GFP myší (n = 4 na každou léčbu) byly vycvičeny na lisování čokoládových pelet (BioServ, Dustless Precision Pellets) v sedmi denních zasedáních 1 h. Myši, které se naučily lisu páky, byly chirurgicky implantovány intravenózním jugulárním katetrem, aby umožnily následné intravenózní podávání heroinu. Jeden týden po chirurgickém zákroku byly myši zavedeny do paradigmatu sebe-podávání během 3 h denních zasedání na FR1 rozvržení výztuže podle standardních postupů (Navarro a kol., 2001). Zařízení s vlastním podáním (Med Associates) bylo naprogramováno tak, aby odpověď na aktivní páku vedla k dodání (přes 5 s) heroinu (30 μg / kg / injekce, program NIDA pro drogy), zatímco reakce na neaktivní páka neměla žádný naprogramovaný důsledek. Zvířatům byl umožněn přístup k heroinovému samo-podanému postupu pro 14 d. D2-GFP myším, kterým byly podávány injekce 0.9% fyziologického roztoku v ekvivalentním časovém období, byly použity jako kontroly. Myši byly perfundovány 24 h po posledním podání heroinu nebo fyziologického roztoku.

Obohacení životního prostředí pro mladistvé.

D2-GFP (n = 4 na skupinu), myši byly odstaveny do obohaceného prostředí nebo normálních podmínek ustájení na postnatální den 21 (P21) s použitím paradigmatu přizpůsobeného potkanům (Green et al., 2010). Obohacené prostředí sestávalo z větší křečové křečové kůry s obložením obohacené o koblihy (ložní prádlo Andersons Laboratory), které bylo naplněno obohacovacími prostředky, které zahrnovaly mycí tunely, kopulu a kola, plovoucí koule, chaty (Bio Serv) a další hračky. Myši zůstaly v podmínkách bydlení týdny 4 až do doby, než byly podány P50 a poté byly perfundovány.

Léčba sacharózou.

D2-GFP myší (n = 4 nebo 5 na jednu léčbu) byl podáván dva testy výběru lahvičky pro 10% sacharózu podobné předchozí studii (Wallace a kol., 2008). Myším byla podána 10% sacharóza (láhev A) a voda (láhev B), zatímco D2-GFP kontroly obdržely vodu v obou lahvích pro 10 d. Všechny myši, které dostávaly sacharosové lahve, vykazovaly preferenci pro sacharózu, jak je vypočtena (100 × láhev A objem / láhev objem + objem láhve B). Myši, které dostaly láhev sacharózy 10%, konzumovaly významně více sacharózy ve srovnání s vodou, zatímco myši, které obdržely vodu v obou lahvích, neprokázaly žádný rozdíl v spotřebě kapaliny. Večer ve dne 10 dostali všechny myši normální pitnou vodu a v den 11 byly perfundovány.

Omezení kalorií.

D2-GFP myší (n = 4 na genotyp) prošel protokolem omezení kalorií, ve kterém dostali 60% z podle libosti kalorií denně (Vialou a kol., 2011) pro 10 d. D2-GFP kontrolní myši dostaly plný přístup k chow. Večer ve dne 10 dostali všechny myši plný přístup ke krmive a byly perfuzovány v den 11.

Sociální porážkový stres.

D2-GFP myší (n = 4 nebo 5 pro každou skupinu) podstoupil 10 d společenského poranění, jak bylo popsáno výše (Berton a kol., 2006; Krishnan a kol., 2007). Myši byly vystaveny agresivním chovatelům v důchodu CD1 za 5 min ve velké kleci křečka. Myši byly potom uloženy pro 24 h ve stejné kleci na druhé straně perforovaného děliče pro udržení senzorického kontaktu. Následující den byly myši vystaveny nové myši CD1 za stejných podmínek a ustájení. Toto bylo opakováno pro 10 d s novým CD1 každý den. Kontrolní myši byly umístěny za podobných podmínek bez poranění. Myši byly testovány na společenskou interakci v den 11. Myši byly nejprve testovány na dobu strávenou interakcí s novou komorou v otevřeném polním boxu bez přítomnosti jiné myši (bez cíle) a poté následně testovány na dobu strávenou interakcí s novou myší (cílovou) CD1, která byla obsažena za komorou (Berton a kol., 2006; Krishnan a kol., 2007). Myši byly rozděleny do citlivých nebo pružných skupin na základě dříve popsaných parametrů (Krishnan a kol., 2007). To zahrnovalo celkový čas strávený s novou myší a poměrem interakce: (čas strávený s cílovým / čas stráveným bez cíle) × 100. Bylo prokázáno, že toto opatření spolehlivě identifikuje vnímavé a pružné skupiny a vysoce koreluje s jinými behaviorálními rozdíly (Krishnan a kol., 2007). Všechny myši byly po testu sociální interakce (24 h po poslední epizodě sociální porážky) perfundovány 48 h.

Léčba fluoxetinem.

D2-GFP myší (n = 3 nebo 4 v každé skupině) podávali 14 denně intraperitoneální injekce fluoxetinu (20 mg / kg) nebo vehikula (0.9% fyziologický roztok s 10% cyklodextrinu) (Berton a kol., 2006). Myši byly perfundovány 24 h po poslední injekci.

Stereotaxická chirurgie.

D2-GFP myši byly anestetizovány ketaminem (100 mg / kg) / xylazinem (10 mg / kg), umístěny do stereotaxického přístroje malého zvířete a jejich povrch lebky byl vystaven. Pro jednorázovou infuzi 0.5-1 μl, s rychlostí 0.1 μl za minutu, virálně do ventrální tegmentální oblasti (VTA), mediální prefrontální kůry (mPFC), amygdaly nebo ventrálního hippokampu ( vHippo). AAV [adeno-asociovaný virus] -hSyn-ChR2 [channelrhodopsin 2] -EYFP nebo AAV-hSyn-EYFP byl infundován do VTA D2-GFP myší (n = 5 v každé skupině) při stereotaktických souřadnicích (přední-zadní, -3.3 mm, boční-střední, 0.5 mm, zadní-ventrální, -4.4 mm, úhel 0 °). Následovala dvoustranná kanyla (26-gauge) s délkou 3.9 mm, implantace nad VTA (přední-zadní, -3.3 mm, laterální-střední, 0.5 mm, dorsální-ventrální, -3.7 mm).Koo a kol., 2012; Chaudhury a kol., 2013). AAV-CaMKII-ChR2-mCherry nebo AAV-CaMKII-mCherry byly injikovány do mPFC (n = 4 nebo 5 v každé skupině), amygdala (n = 3 nebo 4 v každé skupině) nebo vHippo (n = 3 nebo 4 v každé skupině) D2-GFP myší s následnou implantací chronických implantabilních optických vláken 105 μm (Sparta a kol., 2011). Souřadnice byly následující: mPFC (infralimbic byl cílen, ale pozorovali se přelévání viru do prelimbic regionů: anterior-posterior, 1.7 mm, laterální-mediální, 0.75 mm, hřbet-ventrální, -2.5 mm, 15 ° úhel) (dorsální-ventrální, -2.1 mm); amygdala (objevila se bazolaterální amygdala, ale pozorovali se přenášení viru do centrálního jádra amygdaly, přední-zadní, -1.6 mm, laterální-střední, 3.1 mm, dorsální-ventrální, -4.9 mm, 0 ° úhel) vlákno (dorsální-ventrální, -4.9 mm); VHipo (ventrální subiculum bylo cíleno, pozorovali jsme přelévání viru do jiných oblastí ventrálního hippocampu, přední-zadní, -3.9 mm, laterální-střední, 3.0 mm, dorsální-ventrální, -5.0 mm, 0 ° úhel) (dorsální-ventrální, -4.6 mm).

Optogenetické podmínky.

Pro in vivo optické řízení VTA neuronálního spalování, byl modifikován propojovací kabel s jádrem z optických vláken 200 μm pro připojení ke kanyle. Když bylo vlákno připevněno k kanyle, špička vlákna byla prodloužena o ~ 0.5 mm za kanylu (Lobo a kol., 2010; Chaudhury a kol., 2013). Pro in vivo optická regulace mPFC, amygdaly a vHippo neuronové palby byla na implantovatelná vlákna pro upevnění hlavy (Sparta et al., 62.5) připojena šňůra s dělícím vláknem 2011 μm. Optická vlákna byla připojena pomocí adaptoru FC / PC na laserovou diodu 473 nm (Crystal Lasers, BCL-473-050-M) a světelné impulsy byly generovány stimulátorem (Agilent, 33220A). Pro VTA, fázové impulsy modrého světla (473 nm), 20 Hz pro 40 ms (Chaudhury a kol., 2013), byly doručeny 10 min denně za 5 d. Pro mPFC, amygdala a vHippo byly pulzy modrého světla (473 nm), 20 Hz pro 30 s, dodány pro 10 min za den pro 5 d. V domácí kleci se vyskytlo lehké doručení a myši byly po poslední světelné stimulaci perfundovány 24 h.

Elektrofyziologie patch-clamp in vitro.

Celotělové záznamy byly získány z neuronů VTA dopaminu nebo z glutamatergických neuronů mPFC v akutních mozkových řezech myší injektovaných výše uvedenými viry. Nahrávky na plátky byly provedeny na myších bez č in vivo stimulace, ale s 1 d stimulace řezu (1 d) nebo 4 d in vivo stimulace a 1 d stimulace řezu (5 d). Pro minimalizaci stresu a získání zdravých řezů byly myši anestetizovány okamžitě poté, co byly přeneseny do oblasti elektrofyziologie a perfundovány pro 40-60 s ledově chladným aCSF, který obsahoval 128 mm NaCl, 3 mm KCl, 1.25 mm NaH2PO4, 10 mm d-glukóza, 24 mm NaHCO3, 2 mm CaCl2a 2 mm MgCl2 (okysličenou s 95% O2 a 5% CO2, pH 7.4, 295-305 mOsm). Akutní plátky mozku obsahující mPFC nebo VTA byly nakrájeny za použití mikroskle-ru (Ted Pella) v studené sacharóze-aCSF, která byla odvozena plně nahrazením NaCl 254 mm sacharózou a nasyceným 95% O2 a 5% CO2. Plátky byly udržovány v přídržné komoře s CSF pro 1 h při 37 ° C. Krycí pipety (3-5 MΩ) pro celobuněčný proud byly naplněny vnitřním roztokem obsahujícím následující látky: 115 mm glukonát draselný, 20 mm KCl, 1.5 mm MgCl2, 10 mm fosfokreatin, 10 mm HEPES, 2 mm hořčíku ATP a 0.5 mm GTP (pH 7.2, 285 mOsm). Celobuněčné záznamy byly provedeny použitím aCSF při 34 ° C (průtok = 2.5 ml / min). Modulové vlaky (20 Hz pro mPFC nebo fázové 20 Hz, 40 ms pro VTA) byly generovány stimulátorem připojeným přes adaptér FC / PC k laserové diodě (OEM) 473 nm a dodány na plátky mPFC a VTA pomocí 200 μm optických vláken. Experimenty s aktuálními svorkami byly prováděny za použití zesilovače Multiclamp 700B a sběr dat byl prováděn v pClamp 10 (Molecular Devices). Během experimentů byla sledována odolnost vůči sériím a membránové proudy a napětí byly filtrovány na 3 kHz (Besselův filtr).

Imunohistochemie.

Myši byly anestetizovány chloralhydrátem a perfundovány 0.1 m PBS následovaným 4% paraformaldehydem v PBS. Mozky byly postfixovány v 4% paraformaldehydu přes noc a poté byly uchovávány v 30% sacharóze. Mozky byly rozděleny na kryostat (Leica) při 35 μm do PBS s 0.1% azidem sodným. Pro imunohistochemii byly sekrety blokovány v 3% normálním oslím s 0.01% Triton-X v PBS pro 1 h na třepačce při pokojové teplotě. Sekce byly pak inkubovány v primárních protilátkách v bloku přes noc na třepačce při pokojové teplotě. Jako protilátky byly použity následující protilátky: králičí anti-FosB (1: 2000, katalog # sc-48, Santa Cruz Biotechnology), myší anti-NeuN (1: 1000, katalog #MAB377, Millipore) , katalogové č. 1-5000, Aves) a králičí anti-CREB (protein vázající element cAMP, 10: 20, katalog # 1-1000, Millipore). Následující den byly části promyty v PBS, následované 06 h inkubací v sekundárních protilátkách: oslů anti-králičích Cy863, oslů anti-myší Cy1 a oslů proti kuře DyLight-3 nebo Alexa-5 (Jackson ImmunoResearch Laboratories). Pro immunohistochemii mCherry a tyrosinhydroxylázy byly experimenty provedeny tak, jak bylo popsáno výše (Lobo a kol., 2010; Mazei-Robison a kol., 2011). Sekce byly opláchnuty v PBS, namontovány na sklíčkach a překryty.

Zobrazování a počítání buněk.

Imunofluorescence byla zobrazena na mikroskopu Zeiss Axioscope nebo Olympus Bx61. Počítání buněk bylo prováděno pomocí softwaru ImageJ. Vzorky vzorků 1.42-1.1 NAc (jádro a skořápka) a dorzální striatum byly odebrány z 2 nebo 3 mozkových sekcí / zvíře (viz Obr. 1A). Celkový počet buněk 400-500 byl počítán na oblast mozku na myš pomocí obrazů 250 μm x 250 μm. Buňky byly počítány pomocí softwaru ImageJ podobného předchozí studii (Lobo a kol., 2010). Přibližně 400-500 celkové NeuN buňky byly počítány na oblast mozku na myš a potom počet GFP+, GFP+: ΔFosB+, GFP-, a GFP-: ΔFosB+ buňky byly počítány v každé oblasti. Data byla kvantifikována následovně: (GFP+: ΔFosB+ neurony × 100%) / (celkový GFP+ neurony) a (GFP-: ΔFosB+ neurony × 100%) / (celkový GFP- neurony). Statistické analýzy byly provedeny pomocí softwaru GraphPad Prism. Dvoucestné ANOVA s následnými testy Bonferroni byly použity pro všechny analýzy počítání buněk.

Obrázek 1.  

Chronický kokain selektivně indukuje ΔFosB v D1-MSNs v striatálních oblastech. A, Pro měření počtu buněk byly použity průřezy z bregmy + 1.42 až + 1.10. Obrázek a D2-GFP striatální část demonstruje tři studované striatální oblasti: jádro NAc, ...

výsledky

ΔFosB je diferenciálně indukován u D1-MSNs a D2-MSNs po opakované expozici kokainu oproti haloperidolu

Nejprve jsme zkoumali indukci ΔFosB v subtypech MSN v jazyce D1-GFP a D2-GFP u myší používajících chronické podmínky kokainu, které předtím prokázaly, že přednostně indukují protein DFosB v D1-MSNs (Moratalla a kol., 1996). D1-GFP a D2-GFP Transgenních myší BAC, které exprimují zvýšený zelený fluorescenční protein pod genem D1 nebo D2 receptoru (Obr. 1A), dostali intraperitoneální injekce kokainu (20 mg / kg) nebo fyziologický roztok pro 7 d a mozky se po poslední injekci (24 h) shromáždily (Obr. 1B). Pak jsme provedli imunohistochemii na sekcích mozku s použitím protilátek proti NeuN, GFP nebo FosB a zobrazené a počítané buňky v jádře NAc, NAc shell a dStr (Obr. 1A,C). Zatímco protilátka proti FosB rozpoznává FosB a ΔFosB v plné délce, řada studií, které používají Western blot nebo imunohistochemii, potvrdila, že ΔFosB je jediný detekovatelný druh přítomný v časovém okamžiku odběru 24 h (např. Perrotti a kol., 2008). Proto jsme použili 24 h nebo delší časový bod pro shromáždění mozku po všech podmínkách této studie, abychom zajistili, že detekujeme pouze ΔFosB. Jelikož striatální MSN obsahují ~95% všech neuronů v striatu, použili jsme NeuN imunoznačení k identifikaci GFP- neurony, které jsou obohaceny opačným podtypem MSN (tj. D2-MSNs v D1-GFP myší a D1-MSN v D2-GFP myši). Našli jsme to D1-GFP myši léčené kokainem vykazují významnou indukci ΔFosB v GFP+/ NeuN+ neuronů (D1-MSNs) v jádře NAc, shell NAc a dStr, zatímco GFP-/ NeuN+ (D2-MSNs) neprokázala významnou indukci ΔFosB ve všech striatálních oblastech (Obr. 1D): dvoucestný ANOVA, NAc core: drug × cell type F(1,12) = 16.41, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; Plášť NAc: lék × typ buňky F(1,12) = 12.41, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.001; dStr: lék × typ buňky F(1,12) = 12.07, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01. V souladu s těmito poznatky jsme pozorovali v D2-GFP myším žádná významná indukce ΔFosB v GFP+/ NeuN+ neuronů (D2-MSNs), ale významnou indukcí ΔFosB v GFP-/ NeuN+ (D1-MSNs) ve všech striatálních oblastech po léčbě kokainem (Obr. 1D): dvoucestný ANOVA, NAc core: drug × cell type F(1,12) = 15.76, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.0001; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,12) = 20.33, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; dStr: lék × typ buňky: F(1,12) = 35.96, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.001. Zkoumali jsme kinetiku indukce ΔFosB v MSN po 1, 3 nebo 7 d injekcích kokainu (20 mg / kg, ip). Pozorovali jsme významnou indukci ΔFosB v D1-MSN s 3 nebo 7 d léčbou kokainem ve srovnání s léčbou solným roztokem ve všech striatálních oblastech (Obr. 1F): reprezentativní graf z dStr; obousměrná ANOVA, typ buňky × den F(2,13) = 17.87, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01, p <0.001. To je v souladu s časovým průběhem akumulace ΔFosB ve striatu, který byl dříve pozorován Western blotem (Hope a kol., 1994) a potvrzuje selektivní indukci ΔFosB výhradně v dávkách D1-MSN po celou dobu expozice kokainu.

Dále jsme zkoumali indukci ΔFosB imunohistochemií v subtypech MSN po chronické expozici haloperidolu (Obr. 2). Dřívější práce naznačovala, že chronický haloperidol by mohl indukovat ΔFosB přednostně v D2-MSNs (Hiroi a Graybiel, 1996; Atkins a kol., 1999), ačkoli to dosud nebylo přímo zkoumáno. D1-GFP a D2-GFP myši dostávaly haloperidol (2 mg / kg) v pitné vodě, pH 6.0, zatímco D1-GFP a D2-GFP kontrolní myši dostávaly pravidelnou pitnou vodu, pH 6.0, pro 21 d (týdny 3) a mozky byly odebrány v den 22 (Obr. 2A). Stejně jako u kokainu víme, že veškerá imunoreaktivita podobná FosB v striatu v tomto časovém bodě představuje ΔFosB, nikoli FosB s plnou délkou (Atkins a kol., 1999). Našli jsme to D1-GFP myši, kterým byl podáván haloperidol, nevykazovaly významnou indukci ΔFosB v GFP+/ NeuN+ neurony (D1-MSNs) v jádře NAc, shell NAc nebo dStr; avšak u GFP byl pozorován významný nárůst ΔFosB-/ NeuN+ neuronů (D2-MSN) ve všech striatálních oblastech (Obr. 2B,C): obousměrné ANOVA, NAc jádro: lék × typ buňky: F(1,10) = 23.29, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; NAc shell: droga: droga × typ buňky: F(1,10) = 30.14, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; dStr: lék × typ buňky: F(1,10) = 37.63, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.0001. To bylo potvrzeno zkoumáním D2-GFP myší: pozorovali jsme významnou indukci ΔFosB v GFP+/ NeuN+ neuronů (D2-MSN) ve všech třech striatálních oblastech, ale žádná významná změna v ΔFosB v GFP-/ NeuN+ (D1-MSNs) po léčbě haloperidolem (Obr. 2B,C): obousměrné ANOVA, NAc jádro: lék × typ buňky: F(1,12) = 24.30, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.05; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,12) = 26.07, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.001; dStr: lék × typ buňky: F(1,12) = 21.36, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01. Vzhledem k tomu, že jsme pozorovali podobný vzorec indukce ΔFosB v D1-MSN opakovanou expozicí kokainu u obou D1-GFP (GFP+/ NeuN+) a D2-GFP (GFP-/ NeuN+) a opakovaným haloperidolem v D2-MSNs v ČR D1-GFP (GFP-/ NeuN+) a D2-GFP (GFP+/ NeuN+) myší, zbytek našich experimentů byl použit D2-GFP myší prozkoumat indukci ΔFosB v D1-MSNs (GFP-/ NeuN+) a D2-MSN (GFP+/ NeuN+) po dalších chronických podnětech.

Obrázek 2.  

Chronický haloperidol selektivně indukuje ΔFosB v D2-MSN v striatálních oblastech. A, Časový průběh léčby haloperidolem 21 d (2 mg / kg v pitné vodě) nebo vodou. B, Imunohistochemie NAc D1-GFP a D2-GFP myší po haloperidolu ...

Jako kontrola jsme zkoumali hladiny exprese CREB v podmínkách kokainu a haloperidolu, abychom zjistili, zda by naše nálezy mohly být zobecněny na jiné transkripční faktory (Obr. 3). Nezistili jsme žádný významný rozdíl v expresi CREB mezi kontrolou a léčenými myší. Dále jsme nepozorovali žádný rozdíl v hladinách CREB mezi D2-MSN a D1-MSN (Obr. 3B,C).

Obrázek 3.  

Chronický kokain nebo haloperidol nevyvolává CREB v subtypech MSN. A, Imuno - barvení pro CREB a GFP v striatu D2-GFP myší po chronickém kokainu nebo chronickém haloperidolu (Obr. 1 a A22 legendy pro léčbu drog). Měřítko, 50 μm. ...

Rozlišující vzory indukce ΔFosB v subtypech MSN pomocí návykových látek

Vzhledem k tomu, že předchozí studie ukázaly, že jiné léky zneužívání mohou účinně indukovat ΔFosB v striatálních subregionech (Perrotti a kol., 2008), jsme zkoumali ΔFosB v subtypech MSN po chronické expozici opiátům, EtOH nebo Δ (9) -THC. Nejprve jsme zkoumali, zda chronická expozice morfinu indukuje ΔFosB v specifických subtypech MSN napříč striatálními oblastmi. D2-GFP myši dostaly ve dnech 25 a 1 dva podkožní implantáty sham nebo morfinu (3 mg) a mozky se shromáždily v den 5 (Obr. 4A), když je indukován ΔFosB, ale ne FosB (Zachariou a kol., 2006). V nápadném kontrastu k kokainu vykazovaly oba subtypy MSN významné (a přibližně srovnatelné) zvýšení ΔFosB v jádře NAc, NAc shellu a dStr v morfinové skupině ve srovnání s kontrolami sham, bez indukce diferenciálního podtypu buněk ΔFosB viděného napříč všemi striatálními regiony (Obr. 4A): obousměrná ANOVA; NAc jádro: lék F(1,14) = 75.01, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.001 (D1-MSN); NAc shell: droga F(1,14) = 62.87, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.05 (Dl-MSN); dStr: droga F(1,14) = 60.11, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.05 (D1-MSN).

Obrázek 4.  

Druhy zneužívání indukují ΔFosB v subtypech MSN v striatálních oblastech. A, Chronická léčba morfinem (pelety 25 mg ve dnech 1 a 3) v roce 2008 D2-GFP myší vede k významné indukci ΔFosB v obou subtypech MSN v jádře NAc, NAc shellu a dStr ...

Dále jsme zkoumali způsob indukce ΔFosB v subtypech MSN po chronické expozici EtOH. D2-GFP myším byl podán test výběru dvou lahví pro 10% EtOH (láhev A) a vodu (láhev B), zatímco D2-GFP kontrolní vzorky obdržely vodu v obou lahvích (lahve A a B), pro 10 d a mozky byly odebrány v den 11 (Obr. 4B). Myši, které dostaly láhev 10% EtOH, konzumovaly výrazně více EtOH ve srovnání s vodou, zatímco myši, které obdržely vodu v obou lahvích, neprokázaly žádný rozdíl v spotřebě kapaliny (Obr. 4B): preference pro skupinu vody A: 50.00 ± 4.551%, skupina EtOH: 84.44 ± 8.511%; Studentské t test p <0.05. Chronické podávání EtOH vedlo k významné indukci ΔFosB selektivně v D1-MSN v jádru NAc, NAc plášti a dStr, beze změny v D2-MSN (Obr. 4B): obousměrné ANOVA, NAc jádro: lék × typ buňky: F(1,14) = 24.58, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.05; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,14) = 36.51, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01; dStr: lék × typ buňky: F(1,14) = 29.03, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01.

D2-GFP myším bylo také léčeno dávkou X (9) -THC (10 mg / kg, ip) dvakrát denně pro 7 d a mozky byly shromážděny 24 h po poslední injekci. Podobně jako podmínky kokainu a EtOH jsme pozorovali významné zvýšení ΔFosB selektivně u D1-MSN ve všech striatálních oblastech u myší, které dostávaly chronickou Δ (9) -THCObr. 3E): dvoucestný ANOVA, NAc core: drug × cell type F(1,8) = 26.37, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,8) = 44.49, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.001; dStr: lék × typ buňky F(1,8) = 29.30, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01.

Dále jsme zkoumali, zda pozorovaný vzorec indukce ΔFosB v podtypech MSN podáním kokainu nebo opiátů výzkumným pracovníkem se vyskytuje v kontingenčních paradigmech, u kterých se myši volitivně sama podávají drogu. První, D2-GFP myši byli trénováni k přípravě kokainu (0.5 mg / kg / infuze) v rozvrhu FR1 pro 2 ha den pro 3 týdny a mozky byly shromážděny 24 h po poslední infuzi (Obr. 4D), je známo, že je indukován ΔFosB, ale ne FosB (Larson a kol., 2010). Myši strávily výrazně více času stisknutím aktivní nebo neaktivní páky (Obr. 4D; Studentské t test p <0.01). Průměrná denní dávka kokainu byla 19.1 mg / kg intravenózně (Obr. 4D), podobně jako u 20 mg / kg intraperitoneální dávky použité výše (Obr. 1). Stejně jako u případné expozice kokainu (Obr. 1), zjistili jsme, že samotné podávání kokainu způsobilo významnou indukci ΔFosB pouze u D1-MSN ve všech striatálních oblastech ve srovnání s expozicí fyziologickým roztokům (Obr. 4D): dvoucestný ANOVA, NAc core: drug × cell type F(1,14) = 21.75, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,14) = 26.52, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.01; dStr: lék × typ buňky F(1,14) = 33.68, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.001. Podobně, podobně jako expozice nonkontinentního opiátu (morfinu) (Obr. 4A), zjistili jsme to D2-GFP myší, že samotný heroin (30 μg / kg na infuzi) v rozvrhu FR1 3 ha den pro 2 týdny vyšetřený 24 h po poslední expozici léčiva vykazoval významnou indukci ΔFosB jak u D2-MSN, tak u D1-MSNs u všech striatálních regiony (Obr. 4E): obousměrné ANOVA, NAc jádro: lék F(1,12) = 68.88, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.05 (D1-MSN); NAc shell: droga F(1,12) = 80.08, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.001 (Dl-MSN); dStr: droga F(1,12) = 63.36, p <0.001, Bonferroni po testu: p < 0.05 (D2-MSN), p <0.05 (D1-MSN). Průměrná denní dávka heroinu byla 0.459 mg / kg a myši strávily významně více času stiskem páky aktivní versus neaktivní (Studentova t test p <0.05) (Obr. 4E).

Enrichment životního prostředí a chuťové podněty indukují ΔFosB jak v D1-MSN, tak v D2-MSNs

Vzhledem k tomu, že předchozí studie ukázaly, že přirozené odměny indukují ΔFosB v striatálních oblastech (Werme a kol., 2002; Teegarden a Bale, 2007; Wallace a kol., 2008; Solinas a kol., 2009; Vialou a kol., 2011), s indukcí kola běží selektivně pro D1-MSNs (Werme a kol., 2002), zkoumali jsme, zda indukce jinými přirozenými odměnami prokazuje buněčnou specifičnost. Nejprve jsme použili paradigma pro mladistvé obohacení D2-GFP myši byly umístěny v obohaceném prostředí od odstavení (týdny 3) pro období 4 týdne (Obr. 5A). Tento přístup byl dříve prokázán, že indukuje ΔFosB v myších NAc a dStr (Solinas a kol., 2009; Lehmann a Herkenham, 2011). Ve srovnání s normálními podmínkami ustájení obohacené prostředí výrazně zvýšilo ΔFosB ve všech striatálních oblastech, ale neučinilo tak specifickým způsobem buněčného typu, s porovnatelnou indukcí viděnou v D1-MSNs a D2-MSNs (Obr. 5A): obousměrné ANOVA, NAc jádro: prostředí F(1,12) = 89.13, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.0001 (D2-MSN), p <0.0001 (D1-MSN); NAc shell: prostředí F(1,12) = 80.50, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.001 (D2-MSN), p <0.001 (D1-MSN); dStr: prostředí F(1,12) = 56.42, p <0.01, Bonferroni po testu: p <0.05 (D2-MSN), p <0.05 (D1-MSN).

Obrázek 5.  

Obohacení životního prostředí a chuťové podněty indukují ΔFosB v obou subtypech MSN. A, D2-GFP myši, které byly umístěny v obohaceném prostředí začínajícím v P21 pro týdny 4, vykazovaly indukci ΔFosB v obou subtypech MSN napříč všemi striatálními ...

Dále jsme zkoumali expresi ΔFosB v subtypech MSN po chronických apetitivních podněty. Nejprve jsme zkoušeli účinky chronické konzumace sacharózy, která byla dříve prokázána, že indukuje ΔFosB v potkaní NAc (Wallace a kol., 2008). D2-GFP myším byl podáván dva testy výběru láhve pro 10% sacharosu (láhev A) a vodu (láhev B), zatímco D2-GFP kontrolní vzorky obdržely vodu v obou lahvích (lahvička A a B) pro 10 d a mozky byly odebrány v den 11 (Obr. 5B). Myši, které dostávaly 10% sacharózy, konzumovaly významně více sacharózy, zatímco myši, které obdržely vodu v obou lahvích, neprokázaly žádný rozdíl v spotřebě tekutin (Obr. 5B): preference pro láhev A, voda: 50.00 ± 4.749%, sacharóza: 89.66 ± 4.473%; Studentské t test p <0.001. Zjistili jsme, že spotřeba chronické sacharózy vyvolala ΔFosB v jádru NAc, plášti NAc a dStr a že k tomu došlo u obou podtypů MSN (Obr. 5B): obousměrné ANOVA, NAc jádro: léčba F(1,12) = 76.15 p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.01 (D1-MSN); NAc shell: léčba F(1,12) = 63.35, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.05 (D2-MSN), p <0.01 (D1-MSN); dStr: léčba F(1,12) = 63.36, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.05 (D1-MSN).

Nakonec jsme zkoumali expresi ΔFosB v subtypech MSN po omezení kalorií, protože tento stav, který zvyšuje lokomotorickou aktivitu a motivační stav, dříve ukázal, že zvyšuje hladiny ΔFosB v myších NAcVialou a kol., 2011). D2-GFP myši prošly protokolem s omezeným množstvím kalorií, ve kterém dostávali 60% podle libosti kalorie denně pro 10 d a mozky byly odebrány v den 11 (Obr. 5C). Kalorické omezení zvýšilo hladiny ΔFosB v jádře NAc a NAc shellu, jak bylo dříve prokázáno (Vialou a kol., 2011) a také zvýšené hladiny ΔFosB v dStr. V D1-MSN vs D2-MSNs jsme však nezaznamenali diferenciální indukci (Obr. 5C): obousměrné ANOVA, NAc jádro: léčba F(1,12) = 67.94 p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.01 (D2-MSN), p <0.01 (D1-MSN); NAc shell: léčba F(1,12) = 67.84, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.001 (D2-MSN), p <0.01 (D1-MSN); dStr: léčba F(1,12) = 82.70, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.001 (D2-MSN), p <0.001 (D1-MSN).

Chronický společenský poruchový stres a antidepresivní léčba způsobují diferenciální indukci ΔFosB v subtypech MSN

Dříve jsme prokázali, že ΔFosB je v NAc myší zvýšený po chronickém společenském poranění (Vialou a kol., 2010). I když byla tato indukce pozorována u citlivých myší (těch, které vykazují škodlivé následky stresu), stejně jako u myší, které jsou pružné (ty, které unikly většině z těchto škodlivých účinků), indukce ΔFosB byla v pružné podskupině větší a byla ukázána přímo zprostředkovat stav odolnosti. V této studii jsme zjistili výraznou buněčnou specifitu pro indukci ΔFosB v těchto dvou fenotypových skupinách. D2-GFP myši byly podrobeny 10 d sociálního porážkového stresu a rozděleny do citlivých a pružných populací na základě míry sociální interakce (Obr. 6A), který vysoce koreluje s dalšími příznaky chování (Krishnan a kol., 2007). Myši, které vyvinuly náchylné chování po společenském poranění, vykazovaly významnou indukci ΔFosB v D2-MSNs v jádře NAc, NAc shell a dStr ve srovnání s kontrolními a pružnými myšími, bez D1-MSNs indukce. V kontrastním kontrastu vykazovaly pružné myši signifikantní indukci ΔFosB u D1-MSNs ve všech striatálních oblastech ve srovnání s citlivými a kontrolními myšími, bez dxNUMX-MSNs (Obr. 6A; dvoucestný ANOVA, NAc jádro: skupina × typ buňky F(1,20) = 20.11, p <0.05, Bonferroni po testu: D2-MSN / citlivý p <0.05, D1-MSN / odolný p <0.05; NAc shell: skupina × typ buňky F(1,20) = 27.79, p <0.01, Bonferroni po testu: D2-MSN / citlivý p <0.001, D1-MSN / odolný p <0.01; dStr: skupina × typ buňky F(1,20) = 19.76, p <0.01, Bonferroni po testu: D2-MSN / citlivý p <0.05, D1-MSN / odolný p <0.01).

Obrázek 6.  

Chronický společenský poruchový stres a chronický fluoxetin způsobují indukci ΔFosB v různých podtypech MSN v striatu. A, D2-GFP které jsou náchylné k průběhu 10 d společenského porážkového stresu, vykazují indukci ΔFosB v D2-MSN ve všech striatálních ...

Chronická léčba antidepresivem SSRI fluoxetinem reversuje chování podobné depresi vystavené citlivým myším po chronickém společenském poranění (Berton a kol., 2006). Taková léčba navíc indukuje ΔFosB v NAc vnímavých i kontrolních myší a my jsme ukázali, že taková indukce je nutná pro příznivé účinky chování fluoxetinu na chování (Vialou a kol., 2010). Takto jsme vyšetřili buněčnou specifitu indukce ΔFosB po chronickém podání fluoxetinu. D2-GFP myši dostávaly fluoxetin (20 mg / kg, ip) pro 14 d a mozky byly odebrány v den 15 (Obr. 6B). Pozorovali jsme signifikantní indukci ΔFosB v D1-MSNs, ale ne u D2-MSNs u myší léčených fluoxetinem ve srovnání s kontrolními vehikulemi (Obr. 6B; dvoucestný ANOVA, NAc jádro: lék × buněčný typ F(1,10) = 14.59, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; Plášť NAc: lék × typ buňky: F(1,10) = 26.14, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; dStr: lék × typ buňky F(1,10) = 8.19, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.001).

In vivo optogenetická manipulace NAc aferentních oblastí mozku způsobuje odlišné vzorce indukce ΔFosB v striatálních oblastech a podtypů MSN

Vzhledem k tomu, že dopaminergní a glutamatergické aferentní vstupy do NAc mohou usnadnit hledání odměny a změnit chování podobné depresiím (Tsai a kol., 2009; Covington a kol., 2010; Adamantidis a kol., 2011; Witten a kol., 2011; Britt a kol., 2012; Lammel a kol., 2012; Stuber a kol., 2012; Chaudhury a kol., 2013; Kumar a kol., 2013; Tye a kol., 2013), jsme zkoumali indukci ΔFosB v striatálních subtypech MSN po manipulační aktivitě několika klíčových aferentních oblastí mozku. Virálně jsme exprimovali ChR2 v každé z několika oblastí a aktivovali je modrým světlem (473 nm), jak bylo popsáno výše (Gradinaru a kol., 2010; Yizhar a kol., 2011). Vzhledem k tomu, že nedávná studie prokázala, že fázová stimulace modrým světlem po selekci exprese ChR2 v buněčném tělese bez buněk vyústila ve stejný behaviorální fenotyp jako selektivní chronická stimulace dopaminových neuronů VTAChaudhury a kol., 2013) jsme exprimovali ChR2 pomocí AAV-hsyn-ChR2-EYFP ve VTA D2-GFP myši; kontrolní myši byly injikovány AAV-hsyn-EYFP. Segmenty VTA byly koimmunostained tyrosin hydroxylase a GFP vidět expresi ChR2-EYFP (Obr. 7C). D2-GFP myši exprimující ChR2-EFYP nebo samotný EYFP ve VTA dostaly 5 d 10 min modré světlé fázové stimulace VTA, jak bylo popsáno výše (Koo a kol., 2012; Chaudhury a kol., 2013) (Obr. 7A) a mozky byly shromážděny 24 h po poslední stimulaci. Nedošlo k desenzitizaci schopnosti ChR2 aktivovat VTA dopaminové neurony po stimulaci 5 d (Obr. 7B). Zjistili jsme, že opakovaná fázová stimulace neuronů VTA exprimujících ChR2-EYFP zvyšuje ΔFosB v obou subtypech MSN v jádře NAc, ale pouze v D1-MSNs v NAc shellu (Obr. 7C; dvoucestné ANOVA, NAc jádro: optogenetické stimuly F(1,16) = 51.97, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.001; (oba podtypy MSN) NAc plášť: optogenetické podněty × typ buňky: F(1,16) = 13.82, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01). Nepozorovali jsme žádnou indukci ΔFosB v dStr po fázové stimulaci modrým světlem na ChR2-EYFP exprimující VTA ve srovnání s kontrolami EYFP. Tyto výsledky by měly být interpretovány opatrně, protože jsme se pro optickou stimulaci selektivně nezaměřovali na dopaminové neurony VTA a nedávné studie prokázaly nedopaminergní projekční neurony ve VTA a také značnou heterogenitu VTA, což může vést k odlišným behaviorálním reakcím v závislosti na střelbě parametry a subpopulace ovlivněných neuronů (Tsai a kol., 2009; Lammel a kol., 2011, 2012; Witten a kol., 2011; Kim et al., 2012, 2013; Tan et al., 2012; van Zessen a kol., 2012; Stamatakis a Stuber, 2012; Chaudhury a kol., 2013; Tye a kol., 2013).

Obrázek 7.  

Optogenetická aktivace oblastí mozku, které inervují NAc, způsobuje odlišné vzorce indukce ΔFosB v subtypech MSN a striatálních oblastech. A, Optogenetická stimulační paradigma pro všechny podmínky. Mozky byly sklizeny 24 h po 5 d optogenetické ...

Dále jsme použili AAV-CaMKII-ChR2-mCherry a AAV-CaMKII-mCherry vektory k expresi ChR2-mCherry nebo mCherry samotné jako kontrola v mPFC, amygdala nebo vHippo D2-GFP myší (Obr. 7D-F). ChR2 a exprese mCherry zprostředkované virem CaMKII-ChR2 bylo dříve prokázáno, že kolokalizuje expresi CaMKII, která převážně označuje glutamatergické neurony (Gradinaru a kol., 2009; Warden a kol., 2012). Aktivovali jsme buňky exprimující ChR2 v těchto oblastech s 20 Hz modrým světlem pro 10 min denně pro 5 d a mozky byly shromážděny 24 h po poslední stimulaci (Obr. 7A). Tento stimulační vzorec vyvolal spouštění ~ 27-33 Hz, a to hlavně kvůli pozorovanému dvojitému spiknutí. U stimulace 2 d nebyla pozorována žádná zjevná desenzitizace ChR5u; pozorovali jsme však mírný nárůst střelby z 1 na 5 d (32-33 Hz) stimulace. Zjistili jsme, že optogenetická aktivace neuronů mPFC vedla k indukci ΔFosB v D1-MSNs v jádře NAc, zatímco indukce ΔFosB se vyskytla v obou subtypech MSN v shellu NAc (Obr. 7D; dvoucestné ANOVA, NAc jádro: optogenetické stimuly × buněčný typ F(1,14) = 10.31, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; NAc shell: optogenetické podněty F(1,14) = 57.17, p <0.001, Bonferroni po testu: p <0.05 (D2-MSN), p <0.01 (D1-MSN)). Po aktivaci mPFC nebyla v dStr pozorována žádná změna hladin ΔFosB. Naproti tomu optogenetická aktivace neuronů amygdaly vyvolala ΔFosB v obou podtypech MSN v jádru NAc a selektivně v D1-MSN v plášti NAc, přičemž v dStr nedošlo k žádné změně (Obr. 7E; dvoucestné ANOVA, NAc jádro: optogenetické stimuly F(1,10) = 78.92, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.001 (D2-MSN), p <0.0001 (D1-MSN); Plášť NAc: optogenetické stimuly × typ buňky: F(1,10) = 30.31, p <0.0001, Bonferroni po testu: p <0.0001). A konečně, optogenetická aktivace vHippo neuronů způsobila významnou indukci ΔFosB pouze v D1-MSN v jádru NAc i v plášti NAc, opět nebyla pozorována žádná změna v dStr (Obr. 7F; dvoucestné ANOVA, NAc jádro: optogenetické stimuly × buněčný typ F(1,10) = 18.30, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01; NAc shell: optogenetické stimuly × typ buňky: F(1,10) = 22.69, p <0.05, Bonferroni po testu: p <0.01).

Diskuse

Tato studie zkoumá indukci ΔFosB u D1-MSNs a D2-MSNs v striatálních oblastech po několika chronických podnětech (Tabulka 1). Nejprve stanovujeme proveditelnost použití D1-GFP a D2-GFP reportérové ​​linie k prokázání selektivní indukce ΔFosB v D1-MSNs po chronickém kokainu a v D2-MSN po chronickém haloperidolu. Zjištění kokainu jsou v souladu s předchozími studiemi (Moratalla a kol., 1996; Lee et al., 2006) a zavedenou roli pro ΔFosB v D1-MSNs při podpoře odměňování kokainu (Kelz a kol., 1999; Colby a kol., 2003; Grueter a kol., 2013). Dříve jsme prokázali, že kokain ve vyšetřovaném a samo-podávaném kokainu indukuje ΔFosB v ekvivalentním rozsahu v NAc (Winstanley a kol., 2007; Perrotti a kol., 2008) a je důležité, že zde ukazujeme, že oba způsoby příjmu kokainu indukují selektivně ΔFosB ve skupině D1-MSN ve všech třech striatálních oblastech. Naše nálezy jsou v souladu s předchozími studiemi, které prokazují, že akutní kokain indukuje další okamžité časné geny a fosforylaci několika intracelulárních signalizačních proteinů pouze v D1-MSNsBateup a kol., 2008; Bertran-Gonzalez a kol., 2008). Podobně, opačný vzorec indukce ΔFosB po chronickém haloperidolu je v souladu s blokádou této indukce agonisty receptoru typu D2 (Atkins a kol., 1999) a s akutní haloperidolovou selektivní indukcí okamžitých časných genů a fosforylací několika signálních proteinů v D2-MSN (Bateup a kol., 2008; Bertran-Gonzalez a kol., 2008).

Tabulka 1.  

Indukce ΔFosB v subtypech striatálního MSN po chronických farmakologických, emočních a optogenetických podnětecha

Stejně jako u kokainu jsme zjistili, že chronická expozice dvěma dalším zneužívacím látkám, EtOH a Δ (9) -THC indukuje selektivně ΔFosB v D1-MSN ve všech striatálních oblastech. Dříve jsme prokázali, že EtOH indukuje ΔFosB v jádře NAc, NAc shell a dStr, ale že Δ (9) -THC významně upreguluje ΔFosB v jádře NAc, s trendem pozorovaným v ostatních oblastech (Perrotti a kol., 2008). Podobně jsme zde pozorovali největší indukci ΔFosB (9) -THC v jádře NAc v D1-MSNs; naše schopnost prokázat indukci v jiných striatálních oblastech je pravděpodobně způsobena použitou specifickou buněčnou analýzou. Zajímavé je, že chronický morfin a heroin samo-podávání, na rozdíl od jiných léků zneužívání, indukoval ΔFosB v obou subtypech MSN do srovnatelného rozsahu ve všech striatálních oblastech. Nedávná studie prokázala, že akutní morfin indukuje c-Fos v D1-MSNs, zatímco naloxonem vysrážené stažení po chronickém morfinu indukuje c-Fos v D2-MSNsEnoksson a kol., 2012). Přestože jsme v naší studii neviděli příznaky abstinenčního syndromu, lze předpokládat, že dráždivý ústup, ke kterému dochází při podávání morfinu nebo heroinu v daném časovém bodě, je zodpovědný za indukci ΔFosB u D2-MSN. Ukázali jsme dříve, že ΔFosB v D1-MSNs, ale ne D2-MSNs, zvyšuje odměňující odpovědi na morfin (Zachariou a kol., 2006). Nyní by bylo zajímavé otestovat možnost, že indukce ΔFosB v D2-MSNs přispívá k odvráceným účinkům stažení opiátů. Stejně tak by měl být zkoumán potenciální přínos stažení léčiv a craving k indukci ΔFosB u všech léků.

Předchozí studie ukazují, že obohacování životního prostředí během vývoje indukuje ΔFosB v NAc a dStr (Solinas a kol., 2009; Lehmann a Herkenham, 2011). Naše data ukazují, že tato akumulace se vyskytuje stejně v D1-MSNs a D2-MSNs ve všech striatálních oblastech. Parafigma obohacení byla předtím ukázána jako tupé odměňující a lokomotorické odpovědi na kokain (Solinas a kol., 2009); tento behaviorální fenotyp však pravděpodobně není důsledkem akumulace ΔFosB, protože indukce ΔFosB v samotném D1-MSNs zvyšuje behaviorální odezvy na kokain, zatímco taková indukce v D2-MSNs nemá žádný zřetelný účinek (Kelz a kol., 1999; Colby a kol., 2003; Grueter a kol., 2013). Chronická spotřeba sacharózy byla dříve prokázána zvýšením ΔFosB v NAc a nadměrná exprese ΔFosB, buď samotného D1-MSN nebo obou podtypů, v NAc zvyšuje spotřebu sacharózy (Olausson a kol., 2006; Wallace a kol., 2008). Zde jsme pozorovali srovnatelnou indukci ΔFosB v obou subtypech MSN v NAc a dStr po pití sacharózy. Nakonec jsme předtím ukázali, že indukce ΔFosB v NAc zprostředkovává jisté adaptivní reakce na omezení kalorií prostřednictvím zvýšené motivace pro potraviny s vysokým obsahem tuku a snížení výdajů na energii (Vialou a kol., 2011). Celkově tyto výsledky ukazují, že akumulace ΔFosB v NAc a dStr se vyskytuje jak v D1-MSN, tak v D2-MSNs v reakci na několik přírodních odměn. Toto zjištění je překvapivé vzhledem k pozorování, že se ΔFosB akumuluje v D1-MSNs pouze po další přírodní odměně, chronickém běhu kola a že nadměrná exprese ΔFosB v D1-MSNs zlepšila chod kola, zatímco nadměrná exprese ΔFosB v D2-MSNs snižovala běh kolaWerme a kol., 2002). Běh kola může však aktivovat odlišné dráhy motoru, které jsou zodpovědné za svůj odlišný vzorec indukce ΔFosB. V každém případě výsledky s dalšími přírodními odměnami naznačují, že diferencovaně kontrolují ΔFosB v striatu v porovnání s účinnějšími léky, jako je kokain, EtOH a Δ (9) -THC. Indukce ΔFosB v obou subtypech MSN za těchto přirozených podmínek pro odměňování je v souladu s nedávnou studií, která prokazuje, že zahájení akcí za odměnu za potravu aktivuje oba subtypy MSN (Cui a kol., 2013).

Chronické společenské porážkové napětí indukuje ΔFosB v NAc skořápce náchylných a pružných myší, ale v jádře NAc pouze v pružných myších (Vialou a kol., 2010). Navíc nadměrná exprese ΔFosB v D1-MSNs podporuje odolnost po chronickém společenském porážkovém stresu. Chronická léčba fluoxetinem také způsobuje akumulaci ΔFosB v NAc stresově naivních myší a u vnímavých myší po chronickém sociálním porážkovém stresu a ukázalo se, že nadměrná exprese ΔFosB zprostředkovává antidepresivní chování při těchto stavech (Vialou a kol., 2010). Konečně, předchozí studie prokázala indukci ΔFosB v obou subtypech MSN po chronickém zádržném namáhání (Perrotti a kol., 2004). Výsledky této studie, u kterých se ukázala indukce DFosB selektivně u D1-MSNs u myší ošetřených pružnými a fluoxetinem, ale selektivně u D2-MSNs u vnímavých myší, poskytla důležitý pohled na tyto dřívější nálezy a podporuje hypotézu, že ΔFosB v D1- MSNs zprostředkovává odolnost a antidepresivní účinek, zatímco ΔFosB v D2-MSNs může zprostředkovat citlivost. Další práce je nyní zapotřebí k testování této hypotézy.

Nedávná práce používající optogenetiku demonstruje silnou roli dopaminergních a glutamatergických aferentů na NAc v modulaci odměn a stresových odpovědí (viz výsledky). Tyto optogenetické nástroje využíváme ke zkoumání indukce ΔFosB v D1-MSNs a D2-MSNs po opakované aktivaci aferentních oblastí NAc. Zjistili jsme, že fázová stimulace neuronů VTA nebo aktivace hlavně glutamatergických neuronů v amygdii indukuje ΔFosB v D1-MSNs v NAc skořápce a v obou subtypech MSN v jádře NAc. Naproti tomu aktivace neuronů mPFC má za následek opačný vzorec indukce ΔFosB se zvýšenou hladinou v D1-MSNs v jádře NAc, ale indukcí v obou podtypech MSN v shellu NAc. Konečně, optogenetická aktivace vHippo neuronů způsobuje akumulaci ΔFosB pouze v D1-MSNs v jádře a shellu NAc. Zjištění vHippo jsou v souladu s nedávnými studiemi, které prokazují, že hipokampální vstupy jsou mnohem slabší na D2-MSNs ve srovnání s D1-MSNs (MacAskill a kol., 2012) a že tyto vstupy kontrolují pohyb vyvolaný kokainem (Britt a kol., 2012). Navíc naše demonstrace indukce ΔFosB převážně u D1-MSNs se všemi vstupy je v souladu s předchozími studiemi, které ukazují, že ΔFosB v D1-MSNs zvyšuje odměňující se reakce na drogy zneužívání, stejně jako studie ukazující, že optogenetická stimulace VTA dopaminových neuronů nebo mPFC, amygdala nebo vHippo terminály v NAc podporují odměnu (Kelz a kol., 1999; Zachariou a kol., 2006; Tsai a kol., 2009; Witten a kol., 2011; Britt a kol., 2012; Grueter a kol., 2013).

Nakonec je pravděpodobné, že v těchto dvou podtypech MSN jsou selektivně selektované neuronální komplexy, které jsou diferencovaně aktivovány pozitivními nebo negativními stimuly. To by mohlo vést k našemu pozorování indukce ΔFosB v D2-MSNs za určitých odměňujících podmínek (opiáty a přirozené odměny), stejně jako averzivní (sociální porážky). Striatum je velmi heterogenní za podtypy MSN, včetně patchových a matricových oddílů jak v dorzálním, tak v ventrálním striatu (Gerfen, 1992; Watabe-Uchida a kol., 2012). Dále předcházející studie prokazují aktivaci velmi malého procenta striatálních neuronálních souborů psychostimulanty, se zvýšenou indukcí FosB v těchto aktivovaných neuronech (Guez-Barber a kol., 2011; Liu a kol., 2013), i když není známo, zda jsou tyto aktivované neurony D1-MSN nebo D2-MSNs. Funkce ΔFosB v jádře versus shell ve zprostředkování odměňování a averzivního chování je rovněž neznámá. Nadměrná exprese ΔFosB v D1-MSN zvýšila tiché synapse v jádru a shellu, ale výraz v D2-MSNs snížil tiché synapse pouze v shellu (Grueter a kol., 2013). Navíc indukce ΔFosB v jádře versus skořápce je pravděpodobně zprostředkována různými mechanismy, protože jsme našli kokain-zprostředkovanou CaMKIIa stabilizaci ΔFosB ve skořápce, ale nikoli jádro vedoucí k větší akumulaci ΔFosB ve skořápce (Robison a kol., 2013). Budoucí studie, které selektivně zaměřují podtypy MSN v jádře versus skořápce, aktivované neuronální soubory nebo patch versus maticové oddíly, pomohou definovat behaviorální roli ΔFosB v těchto heterogenních oblastech.

Celkově tyto obvody zprostředkované buněčné typové selektivní indukční vzory ΔFosB v NAc naznačují, že odměňující a stresující podněty různě ovlivňují odlišné NAc aferenty k kódování specifických znaků těchto podnětů. Naše výsledky poskytují nejen komplexní nahlédnutí do indukce ΔFosB v striatálních subtypech MSN chronickými podněty, ale také ilustrují užitečnost při použití ΔFosB jako molekulárního markeru k pochopení trvalých účinků specifických neurálních obvodů ovlivňujících funkci NAc.

Poznámky pod čarou

Autoři neuvádějí žádné konkurenční finanční zájmy.

Reference

  1. Adamantidis AR, Tsai HC, Boutrel B, Zhang F, Stuber GD, Budygin EA, Touriño C, Bonci A, Deisseroth K, de Lecea L. Optogenetické vyšetřování dopaminergní modulace více fází odhodlaného chování. J Neurosci. 2011; 31: 10829-10835. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.2246-11.2011. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  2. Albin RL, Young AB, Penney JB. Funkční anatomie poruch bazálních ganglií. Trendy Neurosci. 1989; 12: 366-375. dva: 10.1016 / 0166-2236 (89) 90074-X. [PubMed] [Cross Ref]
  3. Atkins JB, Chlan-Fourney J, Nye HE, Hiroi N, Carlezon WA, Jr, Nestler EJ. Regionálně specifická indukce δFosB opakovaným podáváním typických versus atypických antipsychotik. Synapse. 1999; 33: 118–128. doi: 10.1002 / (SICI) 1098-2396 (199908) 33: 2 <118 :: AID-SYN2> 3.0.CO% 3B2-L. [PubMed] [Cross Ref]
  4. Bateup HS, Svenningsson P, Kuroiwa M, Gong S, Nishi A, Heintz N, Greengard P. Typ buněčné regulace fosforylace DARPP-32 psychostimulanty a antipsychotiky. Nat Neurosci. 2008; 11: 932-939. dva: 10.1038 / nn.2153. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  5. Berton O, McClung CA, Dileone RJ, Krishnan V, Renthal W, Russo SJ, Graham D, Tsankova NM, Bolanos CA, Rios M, Monteggia LM, Self DW, Nestler EJ. Podstatná role BDNF v mezolimbické cestě dopaminu v sociálním stresu. Věda. 2006; 311: 864-868. dva: 10.1126 / science.1120972. [PubMed] [Cross Ref]
  6. Bertran-Gonzalez J, Bosch C, Maroteaux M, Matamales M, Hervé D, Valjent E, Girault JA. Opačné vzory signalizace aktivace v dopaminu D1 a D2 receptoru exprimující striatální neurony v reakci na kokain a haloperidol. J Neurosci. 2008; 28: 5671-5685. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.1039-08.2008. [PubMed] [Cross Ref]
  7. Britt JP, Benaliouad F, McDevitt RA, Stuber GD, Wise RA, Bonci A. Synaptický a behaviorální profil více glutamatergických vstupů do nucleus accumbens. Neuron. 2012; 76: 790-803. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.09.040. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  8. Chan CS, Peterson JD, Gertler TS, Glajch KE, Quintana RE, Cui Q, Sebel LE, Plotkin JK, Heiman M, Heintz N, Greengard P, Surmeier DJ. Kmenová specifická regulace striatálního fenotypu u transgenních myší Drd2-eGFP BAC. J Neurosci. 2012; 32: 9124-9132. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.0229-12.2012. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  9. Chaudhury D, Walsh JJ, Friedman AK, Juarez B, Ku SM, Koo JW, Ferguson D, Tsai HC, Pomeranz L, Christoffel DJ, Nectow AR, Ekstrand M, Domingos A, Mazei-Robison MS, Mouzon E, Lobo MK, Neve RL, Friedman JM, Russo SJ, Deisseroth K, et al. Rychlá regulace chování související s depresí pomocí kontroly dopaminových neuronů středního mozku. Příroda. 2013; 493: 532-536. dva: 10.1038 / nature11713. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  10. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. ΔFosB zvyšuje motivaci kokainu. J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
  11. Covington HE, 3rd, Lobo MK, Maze I, Vialou V, Hyman JM, Zaman S, LaPlant Q, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Neve RL, Deisseroth K, Nestler EJ. Antidepresivní účinek optogenetické stimulace mediální prefrontální kůry. J Neurosci. 2010; 30: 16082-16090. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.1731-10.2010. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  12. Cui G, Jun SB, Jin X, Pham MD, Vogel SS, Lovinger DM, Costa RM. Souběžná aktivace striatálních přímých a nepřímých cest při zahájení akce. Příroda. 2013; 494: 238-242. dva: 10.1038 / nature11846. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  13. Enoksson T, Bertran-Gonzalez J, Christie MJ. Nucleus accumbens D2- a D1-receptor exprimující středně špinavé neurony jsou selektivně aktivovány stažením morfinu a akutním morfinem. Neurofarmakologie. 2012; 62: 2463-2471. dva: 10.1016 / j.neuropharm.2012.02.020. [PubMed] [Cross Ref]
  14. Gerfen CR. Neostriatální mozaika: vícenásobné uspořádání oddělení v bazálních gangliích. Annu Rev Neurosci. 1992; 15: 285-320. dva: 10.1146 / annurev.ne.15.030192.001441. [PubMed] [Cross Ref]
  15. Gittis AH, Kreitzer AC. Striatální mikrocirkulace a poruchy pohybu. Trendy Neurosci. 2012; 35: 557-564. dva: 10.1016 / j.tins.2012.06.008. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  16. Gong S, Zheng C, Doughty ML, Losos K, Didkovsky N, Schambra UB, Nowak NJ, Joyner A, Leblanc G, Hatten ME, Heintz N. Atlas genové exprese centrálního nervového systému založený na bakteriálních umělých chromozomech. Příroda. 2003; 425: 917-925. dva: 10.1038 / nature02033. [PubMed] [Cross Ref]
  17. Gradinaru V, Mogri M., Thompson KR, Henderson JM, Deisseroth K. Optická dekonstrukce parkinsonských neuronových obvodů. Věda. 2009; 324: 354-359. dva: 10.1126 / science.1167093. [PubMed] [Cross Ref]
  18. Gradinaru V, Zhang F, Ramakrishnan C, Mattis J, Prakash R, Diester I, Goshen I, Thompson KR, Deisseroth K. Molekulární a buněčné přístupy pro diverzifikaci a rozšíření optogenetiky. Buňka. 2010; 141: 154-165. dva: 10.1016 / j.cell.2010.02.037. [PubMed] [Cross Ref]
  19. Graybiel AM. Bazální ganglia. Curr Biol. 2000; 10: R509-R511. dva: 10.1016 / S0960-9822 (00) 00593-5. [PubMed] [Cross Ref]
  20. Green TA, Alibhai IN, Roybal CN, Winstanley CA, Theobald DE, Birnbaum SG, Graham AR, Unterberg S, Graham DL, Vialou V, Bass CE, Terwilliger EF, Bardo MT, Nestler EJ. Obohacení životního prostředí vytváří behaviorální fenotyp zprostředkovaný aktivitou CREB v jádře accumbens zprostředkovanou aktivitou nízké cyklické adenosinmonofosfátové odezvy (CREB). Biol Psychiatry. 2010; 67: 28-35. dva: 10.1016 / j.biopsych.2009.06.022. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  21. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC. ΔFosB diferenciálně moduluje funkci přímých a nepřímých cest jádra accumbens. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110: 1923-1928. dva: 10.1073 / pnas.1221742110. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  22. Guez-Barber D, Fanous S, Golden SA, Schrama R, Koya E, Stern AL, Bossert JM, Harvey BK, Picciotto MR, Hope BT. FACS identifikuje jedinečnou regulaci genu indukovanou kokainem v selektivně aktivovaných neuronech striatálních dospělých. J Neurosci. 2011; 31: 4251-4259. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.6195-10.2011. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  23. Heiman M, Schaefer A, Gong S, Peterson JD, den M, Ramsey KE, Suárez-Farinas M, Schwarz C, Stephan DA, Surmeier DJ, Greengard P, Heintz N. Translační profilovací přístup pro molekulární charakterizaci buněčných typů CNS . Buňka. 2008; 135: 738-748. dva: 10.1016 / j.cell.2008.10.028. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  24. Hiroi N, Graybiel AM. Atypické a typické neuroleptické léčby indukují odlišné programy exprese transkripčních faktorů ve striatu. J Comp Neurol. 1996; 374: 70–83. doi: 10.1002 / (SICI) 1096-9861 (19961007) 374: 1 <70 :: AID-CNE5> 3.0.CO% 3B2-K. [PubMed] [Cross Ref]
  25. Hiroi N, Brown JR, Haile CN, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ. FosB mutantní myši: Ztráta chronické kokainové indukce proteinů souvisejících s Fos a zvýšená citlivost na psychomotorické a odměňující účinky kokainu. Proc Natl Acad Sci US A. 1997; 94: 10397–10402. doi: 10.1073 / pnas.94.19.10397. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  26. Naděje BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Indukce dlouhotrvajícího komplexu AP-1, který se skládá z pozměněných proteinů typu fos v mozku chronickým kokainem a dalšími chronickými léčebnými postupy. Neuron. 1994; 13: 1235-1244. dva: 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2. [PubMed] [Cross Ref]
  27. Kalivas PW, Churchill L, Klitenick MA. GABA a enkefalinové projekce z nucleus accumbens a ventral pallidum do ventrální tegmentální oblasti. Neurovědy. 1993; 57: 1047-1060. dva: 10.1016 / 0306-4522 (93) 90048-K. [PubMed] [Cross Ref]
  28. Kaplan GB, Leite-Morris KA, Fan W, Young AJ, Guy MD. Senzitizace opiátů vyvolává expresi FosB / ΔFosB v prefrontálních oblastech mozku kortikální, striatální a amygdální. PLoS One. 2011; 6: e23574. dva: 10.1371 / journal.pone.0023574. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  29. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Nestler EJ. Exprese transkripčního faktoru ΔFosB v mozku řídí citlivost na kokain. Příroda. 1999; 401: 272-276. dva: 10.1038 / 45790. [PubMed] [Cross Ref]
  30. Kim KM, Baratta MV, Yang A, Lee D, Boyden ES, Fiorillo CD. Optogenetická mimika přechodné aktivace dopaminových neuronů přirozenou odměnou je dostatečná pro operantní zpevnění. PLoS One. 2012; 7: e33612. dva: 10.1371 / journal.pone.0033612. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  31. Kim TI, McCall JG, Jung YH, Huang X, Siuda ER, Li Y, Song J, Song YM, Pao HA, Kim RH, Lu C, Lee SD, Song IS, Shin G, Tan MP, Huang Y, Omenetto FG, Rogers JA a kol. Injektovatelná optoelektronika v celém rozsahu s aplikacemi pro bezdrátovou optogenetiku. Věda. 2013; 340: 211-216. dva: 10.1126 / science.1232437. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  32. Koo JW, Mazei-Robison MS, Chaudhury D, Juarez B, LaPlant Q, Ferguson D, Feng J, Sun H, Scobie KN, Damez-Werno D, Crumiller M, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Mouzon E, Dietz DM, Lobo MK, Neve RL, Russo SJ, Han MH, Nestler EJ. BDNF je negativní modulátor morfinového účinku. Věda. 2012; 338: 124-128. dva: 10.1126 / science.1222265. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  33. Krishnan V, Han MH, Graham DL, Berton O, Renthal W, Russo SJ, Laplant Q, Graham A, Lutter M, Lagace DC, Ghose S, Reister R, Tannous P, Green TA, Neve RL, Chakravarty S, Kumar A , Eisch AJ, Self DW, Lee FS a kol. Molekulární adaptace založená na náchylnosti a odolnosti vůči sociální porážce v oblastech odměňování mozku. Buňka. 2007; 131: 391-404. dva: 10.1016 / j.cell.2007.09.018. [PubMed] [Cross Ref]
  34. Kumar S, Black SJ, Hultman R, Szabo ST, DeMaio KD, Du J, Katz BM, Feng G, Covington HE, 3rd, Dzirasa K. Kortikální ovládání afektivních sítí. J Neurosci. 2013; 33: 1116-1129. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.0092-12.2013. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  35. Lammel S, Ion DI, Roeper J, Malenka RC. Projekčně specifická modulace dopaminových neuronových synapsí pomocí averzních a odměřujících podnětů. Neuron. 2011; 70: 855-862. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.03.025. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  36. Lammel S, Lim BK, Ran C, Huang KW, Betley MJ, Tye KM, Deisseroth K, Malenka RC. Vstupní specifická kontrola odměny a averze ve ventrální tegmentální oblasti. Příroda. 2012; 491: 212-217. dva: 10.1038 / nature11527. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  37. Larson EB, Akkentli F, Edwards S, Graham DL, Simmons DL, Alibhai IN, Nestler EJ, Self DW. Striatální regulace ΔFosB, FosB a cFos během samočinného podávání a stažení kokainu. J Neurochem. 2010; 115: 112-122. dva: 10.1111 / j.1471-4159.2010.06907.x. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  38. Lee KW, Kim Y, Kim Am, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokain-indukovaná dendritická tvorba páteře v D1 a D2 dopaminovém receptoru obsahujících středních spiny neuronů v nucleus accumbens. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 3399-3404. dva: 10.1073 / pnas.0511244103. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  39. Lehmann ML, Herkenham M. Obohacení životního prostředí přináší odolnost vůči stresu k sociální porážce neuroalatomickou cestou závislou na infračerveném kortexu. J Neurosci. 2011; 31: 6159-6173. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.0577-11.2011. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  40. Liu QR, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y, Naděje BT. Detekce molekulárních změn v neuronech exprimujících Fos-aktivované metamfetaminu z jediného krysího dorzálního striatu za použití fluorescenčně aktivovaného třídění buněk (FACS) J Neurochem. 2013 doi: 10.1111 / jnc.12381. dva: 10.1111 / jnc.12381. Advance online publikace. Získané červenec 29, 2013. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  41. Lobo MK, Covington HE, 3rd, Chaudhury D, Friedman AK, Sun H, Damez-Werno D, Dietz DM, Zaman S, Koo JW, Kennedy PJ, Mouzon E, Mogri M, Neve RL, Deisseroth K, Han MH, Nestler EJ. Typová ztráta signalizace BDNF specifické pro buňky napodobuje optogenetickou kontrolu odměny kokainu. Věda. 2010; 330: 385-390. dva: 10.1126 / science.1188472. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  42. Lobo MK, Nestler EJ. Striatální vyvažovací čin v závislosti na drogách: zřetelné role přímé a nepřímé dráhy středních špinavých neuronů. Přední Neuroanat. 2011; 5: 41. dva: 10.3389 / fnana.2011.00041. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  43. Lobo MK, Karsten SL, Grey M, Geschwind DH, Yang XW. FACS-mapování profilů neuronových subtypů striatální projekce v myšlenkách mláďat a dospělých myší. Nat Neurosci. 2006; 9: 443-452. dva: 10.1038 / nn1654. [PubMed] [Cross Ref]
  44. MacAskill AF, Little JP, Cassel JM, Carter AG. Subcelulární připojení spočívá v signalizaci specifické pro dráhu v nucleus accumbens. Nat Neurosci. 2012; 15: 1624-1626. dva: 10.1038 / nn.3254. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  45. Bloky I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Podstatná role histon-methyltransferázy G9a v plasticitě indukované kokainem. Věda. 2010; 327: 213-216. dva: 10.1126 / science.1179438. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  46. Mazei-Robison MS, Koo JW, Friedman AK, Lansink CS, Robinson AJ, Vinish M, Krishnan V, Kim S, Siuta MA, Galli A, Niswender KD, Appasani R, Horvath MC, Neve RL, Hurd YL, Cheer JF, Han MH, Russo SJ a kol. Role pro signalizaci mTOR a neuronovou aktivitu při adaptacích indukovaných morfinem v dopaminových neuronech ventrální tegmentální oblasti. Neuron. 2011; 72: 977-990. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.10.012. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  47. McClung CA, Nestler EJ. Regulace genové exprese a odměny kokainu pomocí CREB a ΔFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-1215. dva: 10.1038 / nn1143. [PubMed] [Cross Ref]
  48. McDaid J, Graham MP, Napier TC. Methamphetaminem indukovaná senzitizace mění různě pCREB a ΔFosB v celém limbickém okruhu savčího mozku. Mol Pharmacol. 2006; 70: 2064-2074. dva: 10.1124 / mol.106.023051. [PubMed] [Cross Ref]
  49. Moratalla R, Vallejo M, Elibol B, Graybiel AM. Dopaminové receptory třídy D1 ovlivňují perzistentní expresi proteinů příbuzných foscinu v striatu. Neuroreport. 1996; 8: 1-5. dva: 10.1097 / 00001756-199612200-00001. [PubMed] [Cross Ref]
  50. Muller DL, Unterwald EM. Dopaminové receptory D1 modulují indukci δFosB v potkaních striatech po intermitentním podání morfinu. J Pharmacol Exp Ther. 2005; 314: 148-154. dva: 10.1124 / jpet.105.083410. [PubMed] [Cross Ref]
  51. Narayan S, Kass KE, Thomas EA. Chronická léčba haloperidolem vede k poklesu exprese genů příbuzných myelinu / oligodendrocytu v myším mozku. J Neurosci Res. 2007; 85: 757-765. dva: 10.1002 / jnr.21161. [PubMed] [Cross Ref]
  52. Navarro M, Carrera MR, Fratta W, Valverde O, Cossu G, Fattore L, Chowen JA, Gomez R, del Arco I, Villanua MA, Maldonado R, Koob GF, Rodriguez de Fonseca F. Funkční interakce mezi opioidními a kanabinoidními receptory drogová samospráva. J Neurosci. 2001; 21: 5344-5350. [PubMed]
  53. Nelson AB, Hang GB, Grueter BA, Pascoli V, Luscher C, Malenka RC, Kreitzer AC. Srovnání chování závislých na striatalitě u transgenních myší divokého typu a hemizygotních Drd1a a Drd2 BAC. J Neurosci. 2012; 32: 9119-9123. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.0224-12.2012. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  54. Nicola SM. Jádro accumbens jako součást okruhu výběru akce bazálních ganglií. Psychopharmacology. 2007; 191: 521-550. dva: 10.1007 / s00213-006-0510-4. [PubMed] [Cross Ref]
  55. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. ΔFosB v nucleus accumbens reguluje instrumentální chování a motivaci. J Neurosci. 2006; 26: 9196-9204. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.1124-06.2006. [PubMed] [Cross Ref]
  56. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukce δFosB v mozkových strukturách souvisejících s odměnou po chronickém stresu. J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.2542-04.2004. [PubMed] [Cross Ref]
  57. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Rozlišující vzory indukce DeltaFosB v mozku drogami zneužívání. Synapse. 2008; 62: 358-369. dva: 10.1002 / syn.20500. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  58. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. ΔFosB zprostředkovává epigenetickou desenzitizaci genu c-fos po chronické expozici amfetaminu. J Neurosci. 2008; 28: 7344-7349. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.1043-08.2008. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  59. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Nestler EJ. Analýza genomu regulace regulace chromatinu pomocí kokainu odhaluje novou roli pro sirtuiny. Neuron. 2009; 62: 335-348. doi: 10.1016 / j.neuron.2009.03.026. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  60. Robison AJ, Nestler EJ. Transkripční a epigenetické mechanismy závislosti. Nat Rev Neurosci. 2011; 12: 623-637. dva: 10.1038 / nrn3111. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  61. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J, Kourrich S, Collins M, Wee S, Koob G, Turecki G, Neve R, Thomas M, Nestler EJ. Behaviorální a strukturní odezvy na chronický kokain vyžadují dopřednou smyčku, zahrnující ΔFosB a proteinkinázu II vápník / kalmodulin dependentní protein v jádře nucleus accumbens. J Neurosci. 2013; 33: 4295-4307. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.5192-12.2013. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  62. Smith RJ, Lobo MK, Spencer S, Kalivas PW. Adaptace vyvolaná kokainem v projekčních neuronech D1 a D2 accumbens (dichotomie nemusí být nutně synonymem přímých a nepřímých cest) Curr Opin Neurobiol. 2013; 23: 546-552. dva: 10.1016 / j.konf.2013.01.026. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  63. Solinas M, Thiriet N, El Rawas R, Lardeux V, Jaber M. Obohacení životního prostředí v časných stádiích života snižuje behaviorální, neurochemické a molekulární účinky kokainu. Neuropsychopharmacology. 2009; 34: 1102-1111. dva: 10.1038 / npp.2008.51. [PubMed] [Cross Ref]
  64. Sparta DR, Stamatakis AM, Phillips JL, Hovelsø N, van Zessen R, Stuber GD. Konstrukce implantabilních optických vláken pro dlouhodobou optogenetickou manipulaci s neuronovými obvody. Nat Protoc. 2012; 7: 12-23. dva: 10.1038 / nprot.2011.413. [PubMed] [Cross Ref]
  65. Stamatakis AM, Stuber GD. Aktivace bočních vstupů habenula do ventrálního středního mozku zvyšuje předcházení chování. Nat Neurosci. 2012; 24: 1105-1107. dva: 10.1038 / nn.3145. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  66. Stuber GD, Britt JP, Bonci A. Optogenetická modulace neurálních obvodů, které jsou základem hledání odměn. Biol Psychiatry. 2012; 71: 1061-1067. dva: 10.1016 / j.biopsych.2011.11.010. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  67. Tan KR, Yvon C, Turiault M, Mirzabekov JJ, Doehner J, Labouèbe G, Deisseroth K, Tye KM, Lüscher C. GABA neurony VTA pohonu podmíněné averzie místo. Neuron. 2012; 73: 1173-1183. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.02.015. [PubMed] [Cross Ref]
  68. Teegarden SL, Bale TL. Snížení dietních preferencí způsobuje zvýšenou emocionalitu a riziko recidivy z jídla. Biol Psychiatry. 2007; 61: 1021-1029. dva: 10.1016 / j.biopsych.2006.09.032. [PubMed] [Cross Ref]
  69. Tsai HC, Zhang F, Adamantidis A, Stuber GD, Bonci A, de Lecea L, Deisseroth K. Phasic střelba v dopaminergních neuronech je dostatečná pro kondicionování chování. Věda. 2009; 324: 1080-1084. dva: 10.1126 / science.1168878. [PubMed] [Cross Ref]
  70. Tyne KM, Mirzabekov JJ, Warden MR, Ferenczi EA, Tsai HC, Finkelstein J, Kim SY, Adhikari A, Thompson KR, Andalman AS, Gunaydin LA, Witten IB, Deisseroth K. Dopaminové neurony modulují neurální kódování a expresi deprese chování. Příroda. 2013; 493: 537-541. dva: 10.1038 / nature11740. [PubMed] [Cross Ref]
  71. van Zessen R, Phillips JL, Budygin EA, Stuber GD. Aktivace neuronů VTA GABA narušuje spotřebu odměn. Neuron. 2012; 73: 1184-1194. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.02.016. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  72. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE, 3rd, Dietz DM, Ohnishi YN, Mouzon E, Rush AJ, 3rd, Watts EL, Wallace DL, Iñiguez SD, Ohnishi YH, Steiner MA, Warren BL, Krishnan V, Bolaños CA, Neve RL, Ghose S, Berton O, Tamminga CA a kol. ΔFosB v obvodech odměňování mozku zprostředkovává odolnost vůči stresu a antidepresivním reakcím. Nat Neurosci. 2010; 13: 745-752. dva: 10.1038 / nn.2551. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  73. Vialou V, Cui H, Perello M, Mahgoub M, Yu HG, Rush AJ, Pranav H, Jung S, Yangisawa M, Zigman JM, Elmquist JK, Nestler EJ, Lutter M. Úloha pro ΔFosB v metabolických změnách indukovaných omezením kalorií . Biol Psychiatry. 2011; 70: 204-207. dva: 10.1016 / j.biopsych.2010.11.027. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  74. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham DL, Green TA, Kirk A, Iñiguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolaños-Guzmán CA. Vliv DeltaFosB v nucleus accumbens na přírodní odměňování. J Neurosci. 2008; 28: 10272-10277. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.1531-08.2008. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  75. Ward MR, Selimbeyoglu A, Mirzabekov JJ, Lo M, Thompson KR, Kim SY, Adhikari A, Tye KM, Frank LM, Deisseroth K. Prefrontální neuronální projekce kortexu-mozku, která řídí reakci na chování. Příroda. 2012; 492: 428-432. dva: 10.1038 / nature11617. [PubMed] [Cross Ref]
  76. Watabe-Uchida M, Zhu L, Ogawa SK, Vamanrao A, Uchida N. Mapování celého mozku přímých vstupů do neuronů dopaminového středního mozku. Neuron. 2012; 74: 858-873. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.03.017. [PubMed] [Cross Ref]
  77. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thorén P, Nestler EJ, Brené S. ΔFosB reguluje chod motocyklů. J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
  78. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Indukce ΔFosB v orbitofronální kůře zprostředkovává toleranci vůči koginické kognitivní dysfunkci. J Neurosci. 2007; 27: 10497-10507. dva: 10.1523 / JNEUROSCI.2566-07.2007. [PubMed] [Cross Ref]
  79. Witten IB, Steinberg EE, Lee SY, Davidson TJ, Zalocusky KA, Brodsky M, Yizhar O, Cho SL, Gong S, Ramakrishnan C, Stuber GD, Tye KM, Janak PH, Deisseroth K. Recombinase- techniky a optogenetické aplikace na dopaminem zprostředkovanou výztuž. Neuron. 2011; 72: 721-733. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.10.028. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  80. Yizhar O, Fenno LE, Davidson TJ, Mogri M, Deisseroth K. Optogenetika v nervových systémech. Neuron. 2011; 71: 9-34. doi: 10.1016 / j.neuron.2011.06.004. [PubMed] [Cross Ref]
  81. Yoneyama N, Crabbe JC, Ford MM, Murillo A, Finn DA. Dobrovolná spotřeba etanolu u inbredních myších kmenů 22. Alkohol. 2008; 42: 149-160. dva: 10.1016 / j.alkohol.2007.12.006. [PMC bezplatný článek] [PubMed] [Cross Ref]
  82. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Podstatná role DeltaFosB v nucleus accumbens při morfinovém působení. Nat Neurosci. 2006; 9: 205-211. dva: 10.1038 / nn1636. [PubMed] [Cross Ref]