Detekce molekulárních změn v neuronech exprimujících Fos-aktivované metamfetaminu z jediného krysího dorzálního striatu za použití fluorescence aktivovaného buněčného třídění (FACS) (2013)

Metamfetamin a další léky aktivují malou část všech neuronů v mozku. Již dříve jsme vyvinuli metodu fluorescenčně aktivovaného třídění buněk (FACS) pro charakterizaci molekulárních změn indukovaných selektivně v aktivovaných neuronech, které exprimují marker neurální aktivity Fos. Tato metoda však vyžaduje sdružování vzorků od mnoha potkanů. Nyní popisujeme modifikovanou metodu založenou na FACS pro charakterizaci molekulárních změn v dorzálních striatálních neuronech exprimujících Fos od jedné krysy pomocí multiplexní pre-amplifikační strategie.

Imunohistochemie Fos a NeuN (neuronální marker) ukazuje, že 5-6% neuronů dorzálního striata bylo aktivováno 90 min po akutních injekcích metamfetaminu (5 mg / kg, ip), zatímco méně než 0.5% neuronů bylo aktivováno injekcemi fyziologického roztoku.

Použili jsme FACS k oddělení neuronů značených NeuN na Fos-pozitivní a Fos-negativní neurony a vyhodnotili jsme expresi mRNA pomocí RT-qPCR z pouhých pěti Fos-pozitivních neuronů. Metamfetamin vyvolal 3-20-násobné zvýšení okamžitých časných časných genů, oblouku, homer-2, c-fos, fosB a jeho izoforem (AfosB a nová isoforma AfosB-2) u Fos-pozitivních, ale nikoli Fos-negativních neuronů. Okamžitá časná indukce genové mRNA byla 10-krát nižší nebo nepřítomná, pokud byla hodnocena v netříděných vzorcích z jediného hřbetního striatum homogenátu. Naše modifikovaná metoda umožňuje studovat jedinečné molekulární alterace v neuronech aktivovaných drogami nebo narážkami spojenými s drogami v komplexních závislostních modelech.

Metamfetamin a další léky aktivují malou část všech neuronů v mozku. Uvádíme vylepšený způsob charakterizace molekulárních alterací indukovaných selektivně v aktivovaných neuronech, které exprimují marker neurální aktivity Fos. Použili jsme FACS spolu s cílenou PCR pre-amplifikací k posouzení akutní genové exprese vyvolané metamfetaminem z tak malého množství, jako jsou neurony exprimující 5 Fos z jednoho dorzálního striata potkana. Metamfetamin vyvolal 3-20-násobné zvýšení okamžitých časných genů (IEG) u Fos-pozitivních, ale nikoli Fos-negativních neuronů. Cílená PCR pre-amplifikace umožňuje studovat jedinečné molekulární změny v neuronech aktivovaných léky nebo narážkami spojenými s léky v komplexních závislostních modelech.

Zveřejněno 2013. Tento článek je prací vlády USA a je veřejným majetkem v USA.