KOMENTÁŘE: Přestože jak stres, drogy zneužívání, tak určité přirozené odměny vyvolávají akumulaci DeltaFosB, stres aktivuje různé downstream buňky a později různé receptory a geny. Jinými slovy závislost a odolnost vůči stresu závisí na zásadně odlišných mechanismech
J Neurosci. 2010 27; 30 (43): 14585-92.
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ.
Zdroj
Fishbergova klinika neurověd, Lékařská fakulta Mount Sinai, New York, New York 10029, USA.
Abstraktní
Molekulární mechanismy, které jsou základem stresových a lékem indukovaných neuronových adaptací, jsou neúplně pochopeny. Jednou molekulou zapojenou do takových adaptací je AFosB, transkripční faktor, který se hromadí v jádru accumbens hlodavců (NAc), klíčové oblasti mozkové odměny, v reakci na chronický stres nebo opakovanou expozici zneužívání drog. Tupstream transkripční mechanismy kontrolující indukci AFosB těmito environmentálními stimuly zůstávají nepolapitelné. Zde identifikujeme transkripční faktor závislý na aktivitě, faktor sérové odpovědi (SRF), jako nový upstreamový mediátor stresu, ale ne kokain-, indukovaný AFosB. SRF je downregulovaný v NAc jak u lidí s depresí, tak u myší chronicky vystavených sociálnímu stresu. Tato redukce SRF chybí u odolných zvířat. Použitím indukovatelné mutageneze ukázáme, že stresem indukovaná indukce AFosB, která se vyskytuje převážně u odolných myší, je závislá na expresi SRF v této oblasti mozku.. Kromě toho NAc-specifická genetická delece SRF podporuje celou řadu proliferačních a proanxietních fenotypů a činí zvířata citlivějšími na škodlivé účinky chronického stresu. Na rozdíl od toho demonstrujeme, že SRF nehraje roli v akumulaci AFosB v NAc v reakci na chronickou expozici kokainu. Kromě toho NAc-specifické knock-out SRF nemá žádný účinek na chování vyvolané kokainem, což ukazuje, že chronický sociální porážkový stres a opakovaná expozice kokainu regulují akumulaci AFB a citlivost na chování prostřednictvím nezávislých mechanismů.
Úvod
Nukleus accumbens (NAc), klíčová oblast odměňování mozku, je důležitá pro integraci senzorických a kognitivních vstupů, které řídí motivačně relevantní chování v reakci na podněty prostředí (Nestler a Carlezon, 2006; Sesack and Grace, 2010). NAc se také podílí na poruchách chování spojených s drogovou závislostí a depresí. V souladu s tím bylo prokázáno, že cílení NAc s hlubokou mozkovou stimulací zmírňuje depresivní a závislostní chování jak u lidí, tak u hlodavců (Schlaepfer a kol., 2008; Vassoler a kol., 2008; Heinze a kol., 2009; Kuhn et al., 2009).
Opakované vystavení drogám zneužívání nebo stresu indukuje změněné vzorce genové exprese v NAc, potenciálně podmíněné chroničností závislosti a deprese (Berton a kol., 2006; Krishnan a kol., 2007; Maze a kol., 2010; Vialou a kol. ., 2010). Je zajímavé, že transkripční faktor AFosB, sestřihový produkt genu fosB, se hromadí v NAc v reakci na opakovanou expozici léku nebo stresu (Nestler, 2008; Perrotti a kol., 2008; Vialou a kol., 2010). FosB byl navržen jako potenciální molekulární přepínač, který řídí přechod od rekreačního užívání drog do chronicky závislého stavu (Nestler a kol., 1999; McClung a kol., 2004; Renthal a kol., 2009), protože jeho akumulace v NAc zvyšuje odměňování odpovědí na několik drog zneužívání. V poslední době byla objasněna role indukce AFosB v NAc po chronickém společenském porážkovém stresu (Nikulina a kol., 2008; Vialou a kol., 2010): FosB podporuje aktivní zvládání reakcí na stresující podněty a zvyšuje odolnost. Ačkoli indukce AFosB probíhá stimulačně závislým způsobem, mechanismy odpovědné za akumulaci AFOSB indukované léky a stresem v NAc zůstávají neznámé.
Faktor sérové odezvy (SRF) je transkripční faktor vyžadovaný pro aktivně závislou transkripční aktivaci několika okamžitých časných genů, včetně c-fos, fosb, Egr1 a Arc (Knöll a Nordheim, 2009). Nedávné studie prokázaly účinky SRF na morfologické a cytoarchitekturní vlastnosti neuronů, včetně regulace synaptické aktivity a tvorby obvodů v mozku dospělého (Knöll a Nordheim, 2009). Tato zjištění nás podnítila k prozkoumání, zda je SRF funkčně regulován chronickým vystavením zneužívaným drogám nebo stresu, jakož i potenciální dopad takové regulace na indukci ΔFosB za těchto podmínek.
Zde popisujeme nový mechanismus, kterým downregulace SRF v NAc podporuje prodepresivní a anxiogenní fenotypy, což v konečném důsledku zvyšuje zranitelnost zvířete vůči škodlivým účinkům chronického stresu. Tyto účinky jsou částečně zprostředkovány ztrátou indukce ΔFosB v NAc stresovaných zvířat. Pozorované poklesy exprese SRF a ΔFosB v posmrtné NAc tkáni získané od pacientů s depresí podporují význam našich nálezů pro depresi u člověka. Je zajímavé, že tento mechanismus řízení akumulace ΔFosB se jeví jako stresově specifický: chronická expozice kokainu nemá žádný vliv na expresi SRF, delece SRF z NAc nemá žádný vliv na akumulaci ΔFosB po chronické expozici kokainu a taková delece SRF nemá žádný účinek na kokain indukované chování. Tato nová souhra mezi SRF a ΔFosB v kontextu stresu může představovat důležitý homeostatický mechanismus regulující citlivost jedince na chronický stres.
Materiály a metody
Zvířata
Ve všech behaviorálních a biochemických experimentech byly použity samci myší C57BL / 6J osm týdnů (Jackson Laboratory). Všechna zvířata byla navyklá do zařízení pro zvířata po dobu alespoň 1 před experimentálními manipulacemi a byla udržována při 23 – 25 ° C v cyklu 12 h světlo / tma (světla z 7: 00 AM až 7: 00 PM) s ad libitum přístup k potravě a vodě. Pokusy byly prováděny v souladu s pokyny Společnosti pro neurovědu a institucionální komise pro péči o zvířata a jejich použití na lékařské fakultě Mount Sinai.
Pro experimenty s kokainem [Western blot a kvantitativní imunoprecipitace chromatinu (ChIP)] byly použity samce myší C8BL / 10J staré 57 až 6 v týdnu. Zvířata obdržela sedm intraperitoneálních injekcí fyziologického roztoku nebo kokainu (20 mg / kg kokain-HCl; Sigma). Myši byly použity 24 h po posledním ošetření. Pro behaviorální experimenty byly myši samostatně umístěny po operaci a byly ošetřeny 10 mg / kg (lokomotorická senzibilizace) nebo 7.5 mg / kg (preferované místo) kokain-HCl intraperitoneálně, jak je popsáno níže.
Myši Srffl / fl byly generovány, jak bylo popsáno dříve (Ramanan et al., 2005). NAc-specifické knock-out Srf bylo dosaženo stereotaxickou injekcí a následnou virovou nadměrnou expresí Cre rekombinázy (Cre) fúzované k zelenému fluorescenčnímu proteinu (GFP) pomocí vektorů adeno-asociovaných virů (AAV). Byla použita neovlivňující Cre. AAV-GFP byl injikován místo AAV-Cre-GFP u Srffl / fl myší jako kontrola. Stručně, myši byly anestetizovány pomocí směsi ketaminu (10 mg / kg) a xylazinu (10 mg / kg), s následujícími stereotaxickými souřadnicemi použitými pro dodání viru: + 1.6 (přední / zadní), + 1.5 (laterální), - 4.4 (hřbetní / ventrální) v úhlu 10 ° od středové linie (vzhledem k bregma). Celkově bylo 0.5 μl čištěného viru podáno bilaterálně během periody 5 min (0.1 μl / min), poté následovalo 5 min. Odpočinku. Myši byly testovány 2 týdny po operaci, kdy byla virová exprese maximální, a místa virové injekce byla potvrzena pro všechna zvířata pomocí standardních histologických metod. Účinnost virem zprostředkované exprese Cre byla potvrzena imunohistochemicky a pomocí reverzní transkriptázy PCR pro Srf prováděné na mikrodisekovaných údech NAc ze zvířat, kterým byly podány AAV-Cre-GFP a AAV-GFP do NAc. Viry AAV-GFP a AAV-Cre-GFP byly vytvořeny, jak bylo popsáno výše (Maze et al., 2010).
Postupy chování
Sociální porážkový stres.
Myši C57BL / 6J byly vystaveny chronickému sociálnímu porážkovému stresu po dobu 10 po sobě jdoucích dnů, jak bylo popsáno dříve (Berton a kol., 2006; Krishnan a kol., 2007; Vialou a kol., 2010). Stručně řečeno, každá myš byla vystavena neznámému a agresivnímu samci chovatelské myši CD1 v důchodu po dobu 5 min. Za den. Po přímé interakci s agresorem CD1 byla zvířata umístěna do sousedního oddílu stejné klece pro další 24 h se senzorickým, ale nikoli fyzickým kontaktem. Kontrolní zvířata byla chována v ekvivalentních klecích, ale s členy stejného kmene. Testy sociální interakce byly provedeny 24 h po posledním dni porážky.
Sociální vyhýbání se neznámému samci myši CD1 bylo hodnoceno podle publikovaných protokolů (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Experimentální myš byla nejprve zavedena do otevřeného pole obsahujícího prázdnou klec z drátěného pletiva po dobu 2.5 minuty. Během druhého sezení byla do kabelové klece zavedena neznámá samčí myš CD1. Byl měřen čas strávený v interakční zóně (chodba široká 8 cm obklopující klec). Segregace poražených myší na citlivé a odolné subpopulace byla provedena, jak bylo popsáno dříve (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Protože většina kontrolních myší strávila více času interakcí se sociálním cílem než s prázdným krytem cíle, byl jako mezní hodnota stanoven poměr interakce 100 (stejný čas strávený v interakční zóně v přítomnosti versus nepřítomnosti sociálního cíle). Myši se skóre <100 byly označeny jako citlivé a myši se skóre ≥ 100 byly označeny jako odolné. Rozsáhlé behaviorální, biochemické a elektrofyziologické analýzy podporují platnost těchto odlišných citlivých a odolných subpopulací (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010).
Pro zkoumání zranitelnosti myší Srffl / fl vůči sociálnímu porážkovému stresu byly myši, které byly injikovány bilaterálně AAV-GFP nebo AAV-Cre-GFP, podrobeny třem následným porážkám ve stejný den a poté testovány na sociální interakci 24 h později. Tento postup submaximální porážky byl dříve ověřen, aby se odhalily fenotypy prosusceptibility po genetických manipulacích (Krishnan a kol., 2007; Vialou a kol., 2010).
Naučená bezmocnost.
Myši Srffl / fl nadměrně exprimující buď AAV-GFP nebo AAV-Cre-GFP byly podrobeny naučenému postupu bezmocnosti, jak bylo popsáno dříve (Berton et al., 2007). Stručně, myši byly vystaveny občasným, nevyhnutelným otřesům nohou pro 1 h po 2 po sobě následujících dnů (0.45 mA, doba trvání 5). V den testu byly myši znovu zavedeny do boxu pro 15 po sobě jdoucí únikové pokusy. Během každé zkoušky byl podán nepřetržitý šok a myši dostaly příležitost uniknout vstupem do sousedního neelektrifikovaného prostoru. Po úspěšném úniku byly dveře automaticky zavřeny a byla zaznamenána úniková latence. Když myši neunikly uvnitř 25, pokus byl ukončen a byl zaznamenán jako selhání. Předchozí studie ukázaly, že virová exprese v NAc a dalších regionech nemá žádný účinek na základní únikové chování v nepřítomnosti stresu (Newton a kol., 2002; Berton a kol., 2007).
Senzibilizace pohybového aparátu.
Dva týdny po injekcích intra-NAc buď AAV-GFP nebo AAV-Cre-GFP byly myši Srffl / fl podrobeny lokomotorické senzibilizaci. Myši byly zvyklé na pohybovou arénu po dobu 30 minut denně po dobu 4 dnů. Po návyku byla zvířatům intraperitoneálně injikována dávka 10 mg / kg kokainu-HCl a umístěna do lokomotorických boxů. Lokomotorické aktivity zvířat se zaznamenávaly pomocí systému fotobunků (San Diego Instruments) jako ambulantní paprskové lomy po dobu 30 minut denně. Senzibilizace lokomotivy byla zaznamenána po dobu 6 dnů.
Upřednostňovaná předvolba místa.
Postup úpravy místa byl proveden tak, jak bylo popsáno výše (Maze et al., 2010), s následujícími úpravami. Stručně, 18 dní po infúzi AAV-GFP nebo AAV-Cre-GFP u myší Srffl / fl byla zvířata umístěna do kondicionovacích komor, které sestávaly ze tří kontextově odlišných prostředí. Myši vykazující významnou preferenci pro kteroukoli ze dvou kondicionovacích komor byly ze studie vyloučeny (<10% všech zvířat). Skupiny kondicionování byly dále vyváženy, aby se přizpůsobily jakémukoli zkreslení komory, které ještě může existovat. Následující dny byla zvířatům injekčně podána fyziologická roztoka a odpoledne byla 30 minut uzavřena v jedné komoře a poté byla injekčně injikována kokainem (7.5 mg / kg, ip) a následující den byla 30 minut uzavřena do druhé komory, což se rovnalo celkem dvě kola asociačního tréninku na léčbu (dvě párování solného roztoku a dvě kokainu). V den testu byly myši umístěny zpět do aparátu bez ošetření na 20 minut a testovány za účelem vyhodnocení preferencí ze strany. Lokomotorické odpovědi na kokain byly hodnoceny pomocí paprskových zlomů v komorách spárovaných s kokainem, aby byla zajištěna účinnost léčby drogami. U všech skupin byla hodnocena základní lokomoce v reakci na fyziologický roztok, aby bylo zajištěno, že lokomoce nebyla ovlivněna virovou léčbou.
Další behaviorální testy.
Myši Srffl / fl byly testovány v testech na otevřeném poli, světle / tmě a nuceném plavání na základě publikovaných protokolů (Vialou et al., 2010). Aktivita myší v otevřeném poli byla zaznamenána po dobu 5 min za použití systému pro sledování videa (Ethovision) za podmínek červeného světla. Pro test světlo / tma byly myši ponechány volně prozkoumat dvoukomorovou krabici složenou z jedné velké osvětlené arény připojené k menší uzavřené aréně. Myši byly testovány po dobu 5 min, aby se vyhodnotilo množství času stráveného v jedné komoře. V testech na otevřeném poli a ve světle / tmě byl čas strávený ve středu a v aréně světla hodnocen jako inverzní index reakcí souvisejících s úzkostí. 1 d vynucený plavecký test byl prováděn po dobu 5 min. Prodloužená doba imobility během testu nuceného plavání byla interpretována jako prodepresivní chování. 1 d vynucený-plavat test byl široce používán u myší a byl validován jako míra prediktivní platnosti, v tom antidepresivní terapie redukují doby imobility.
Imunohistochemie
Myši Srffl / fl byly anestetizovány a perfundovány intrakardiálně pomocí 4% paraformaldehydu / PBS. Mozky byly odstraněny a kryokonzervovány v 30% sacharóze / PBS. Koronální řezy (30 μm) byly nařezány na mrazícím mikrotomu a zpracovány pro imunohistochemické analýzy. Validace knock-outu Srffl / fl byla provedena pomocí polyklonální protilátky namířené proti SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology). Exprese Cre byla potvrzena expresí GFP (kuřecí polyklonální, 1 / 8000, Aves Labs) v rozříznutých mozcích, protože Cre je fúzován s GFP. Pro kvantifikaci indukce AFosB po společenském porážkovém stresu u Srffl / fl knock-out myší byl detekován AFosB pomocí králičí polyklonální protilátky zvýšené proti N-terminální oblasti proteinu (1 / 1000; Santa Cruz Biotechnology). Snímky byly pořízeny konfokálním mikroskopem (20 × zvětšení; Zeiss). Počet GFP-imunopozitivních buněk, počítaných jako negativní a pozitivní na AFOSB imunoreaktivitu, byl kvantifikován na více obrazech pro každé zvíře, se středními hodnotami následně vypočítanými pro každé zvíře. Každé zvíře bylo pro statistickou analýzu považováno za individuální pozorování.
Lidská posmrtná tkáň NAc
Lidská posmrtná mozková tkáň byla získána z Dallas Brain Collection, kde je tkáň odebrána z Dallas Medical Examiner's Office a University of Texas (UT) Southwestern's Tissue Transplant Program po souhlasu nejbližšího příbuzného. Tkáň byla analyzována u mužů i žen podle věku, posmrtného intervalu, čísla integrity RNA (RIN) a pH. Specifické agonální faktory, včetně kómatu, hypoxie, pyrexie, záchvatů, dehydratace, hypoglykémie, selhání více orgánů a požití neurotoxických látek v době smrti, ovlivňují integritu RNA v posmrtných mozkových tkáních (Tomita et al., 2004). Použili jsme stupnici agonálních faktorů (AFS) k charakterizaci vzorků tkáně za každé z těchto osmi podmínek. Absenci agonálního faktoru bylo přiděleno skóre 0 a jeho přítomnost byla hodnocena jako 1, aby poskytlo celkové skóre AFS mezi 0 a 8. Tkáň s agonálním skóre 0 nebo 1 odráží vzorky dobré kvality; demografie případů jsou uvedeny v tabulce 1. Vynikající kvalita tkáně byla potvrzena vysokými hodnotami RIN. Případy byly podrobeny standardní disekci před rychlým zmrazením v -40 ° C isopentanu a skladováním při -80 ° C; další disekce NAc byla provedena na zmrzlé tkáni. Institucionální kontrolní komise UT Southwestern přezkoumala a schválila sběr této tkáně pro výzkumné použití. Později byl pro každý případ deprese proveden přímý informativní rozhovor, kde byly dokumentovány informace týkající se nemoci případu; konsensuální diagnóza závažné depresivní poruchy byla stanovena pomocí kritérií DSM-IV dvěma výzkumnými psychiatry. Žádný z případů zahrnutých v této studii neměl pozitivní testy na toxikologii krve na drogy zneužívání, alkohol nebo léky na předpis jiné než antidepresiva. Navzdory antidepresivní léčbě byli všichni pacienti v době smrti klinicky depresivní. Vzorky tkáně byly dávkovány zaslepeným způsobem pro analýzu.
Tabulka 1.
Demografická data pro postmortální studii u lidí
Western blotting
Lidské a myší NAc vzorky byly zpracovány jak bylo popsáno dříve (Maze et al., 2010). Zmrazená tkáň byla sonikována v lýzovacím pufru 5 mM HEPES obsahujícím 1% SDS s proteázou (Roche) a inhibitory fosfatázy (Sigma). Koncentrace proteinu byly stanoveny pomocí Dc proteinového testu (Bio-Rad). Stejná množství vzorků proteinů byla podrobena SDS-PAGE a Western blotu. Western bloty byly sondovány s použitím protilátky proti SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology) nebo GAPDH (1 / 1500; Abcam) a potom byly skenovány a kvantifikovány pomocí zobrazovacího systému Odyssey (Licor).
Izolace RNA a kvantitativní PCR
Izolace RNA, kvantitativní PCR (qPCR) a analýza dat byly provedeny, jak bylo popsáno dříve (Maze a kol., 2010; Vialou a kol., 2010). Stručně řečeno, RNA byla izolována s TriZol reagentem (Invitrogen) a byla dále purifikována pomocí RNAeasy micro kitů od Qiagen. Bylo stanoveno, že všechny vzorky RNA mají hodnoty 260 / 280 a 260 / 230 ≥1.8. Reverzní transkripce byla provedena pomocí iScript (Bio-Rad). qPCR používající zelenou SYBR (Quanta) bylo provedeno pomocí PCR systému Applied Biosystems 7900HT RT s následujícími parametry cyklu: 2 min při 95 ° C; 40 cykly 95 ° C pro 15 s, 59 ° C pro 30 s, 72 ° C pro 33 s; a odstupňované zahřívání na 95 ° C, aby se vytvořily disociační křivky pro potvrzení jednotlivých produktů PCR. Data byla analyzována porovnáním C (t) hodnot léčebného stavu (kontrola vs vnímavé nebo odolné myši nebo lidské kontroly vs depresivní pacienti) s metodou AC (t) (Tsankova et al., 2006). ΔFosB qPCR primery: foward, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT a reverzní, GCCGAGGACTTGAACTTCACTCG.
Čip
ChIP byl proveden, jak bylo popsáno dříve (Maze et al., 2010) na sdružených bilaterálních údech NAc od kontrolních, vnímavých a odolných myší (čtyři údery 14-měřidla / myš) 1 h po poslední zkušenosti s porážkou a od fyziologického roztoku a kokainu - ošetřená zvířata 24 h po posledním ošetření. Tkáň byla zesíťována v 1% formaldehydu. Fixace byla následně přerušena aplikací glycinu a tkáň byla promyta a udržována při -80 ° C až do použití. Stříhaný chromatin byl inkubován přes noc s anti-SRF protilátkou (Santa Cruz Biotechnology) předem navázanou na magnetické kuličky (Dynabeads M-280; Invitrogen). Po reverzním zesítění a purifikaci DNA byla vazba SRF na fosbový promotor stanovena pomocí qPCR za použití primerů překlenujících oblast promotoru fosb obsahujícího dvě vazebná místa elementu sérových odpovědí. Pulldown SRF byly významně obohaceny ve srovnání s kontrolami bez protilátky. Primery promotoru genu myšího fosb: vpřed, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG a reverzní, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC.
Statistické analýzy
Jednosměrné ANOVA byly použity k porovnání průměrů mezi kontrolními, citlivými a odolnými myšmi v biochemických a behaviorálních analýzách. Obousměrné ANOVA byly použity k porovnání indukce ΔFosB sociální porážkou u místních knof-out myší Srf a také k porovnání účinku knof-outu Srf ve naučených protokolech bezmocnosti a lokomotorické senzibilizace. Studentovy t testy byly použity k porovnání průměrů v účinku vyřazení Srf na indukci ΔFosB a mezi skupinami v lidské posmrtné tkáňové a myší ChIP analýze. Rozdíly mezi experimentálními podmínkami byly považovány za statisticky významné, když p ≤ 0.05.
výsledky
Exprese SRF a AFosB u lidské deprese a sociálně poražených myší
Abychom prozkoumali potenciální roli SRF ve vývoji chování podobného depresi, nejprve jsme hodnotili expresi proteinu SRF v NAc postmortálně depresivních lidských pacientů. Depresivní subjekty vykazovaly významně snížené hladiny SRF v NAc ve srovnání s jejich věkově odpovídajícími kontrolami (t (19) = 1.9; p <0.05) (obr. 1A). Vzhledem k roli SRF při regulaci okamžité časné exprese genu závislé na aktivitě (Ramanan et al., 2005) jsme předpokládali, že SRF může být zapojen do řízení exprese ΔFosB v této oblasti mozku. Na podporu této hypotézy jsme pozorovali, že hladiny mRNA Δfosb byly také významně sníženy v NAc depresivních lidí (t (16) = 1.8; p <0.05) (obr. 1B). To je v souladu s nedávnými nálezy snížených hladin ΔFosB proteinu i za těchto podmínek (Vialou et al., 2010).
Obrázek 1.
Chronická stresem indukovaná represe SRF koreluje se sníženou transkripcí ΔFosB v NAc. A, B, postmortální pacienti s depresí vykazují snížené hladiny proteinu SRF (n = 10 / skupina; A) a exprese mRNA Δfosb v NAc (n = 8 / skupina; B). C, myši vystavené chronickému (10 d) sociálnímu porážkovému stresu byly seskupeny do citlivých a odolných subpopulací. D, Chronický stres sociální porážky snižuje hladiny proteinů SRF v NAc vnímavých myší, ale ne odolných myší, ve srovnání s kontrolami 24 hodin po testu sociální interakce uvedeném v C. E, hladiny mRNA ΔfosB v NAc se u vnímavých myší nezmění, ale významně zvýšena regulace u odolných zvířat (n = 7–15 / skupina). F, SRF protein vykazuje zvýšenou vazbu na promotor genu fosb po chronickém sociálním porážkovém stresu pouze u odolných a ne u citlivých myší (n = 5 / skupina). Zobrazené údaje jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (představované jako chybové sloupce). Con., Control; Dep., Depresivní; Sus., Vnímavý; Res., Odolný. * p <0.05 versus kontrola; *** p <0.001 versus kontrola; #p <0.05 versus citlivý; ## p <0.01 versus citlivý; ### p <0.001 versus vnímavý.
K rozšíření těchto zjištění jsme použili protokol chronické sociální porážky u myší. Byly zjevné dvě rozlišitelné skupiny poražených myší, vnímavé a odolné (Krishnan et al., 2007), založené na míře sociálního vyhýbání se, u nichž vnímavá zvířata vykazovala významně sníženou sociální interakci ve srovnání s kontrolními i odolnými zvířaty (F (2,23, 157.2) = 0.001; p <0.001; t testy s Bonferroniho korekcí, citlivý vs kontrola, p <0.05; pružný vs kontrola, p <0.01; pružný vs citlivý, p <1) (obr. 2,32C). Dva dny po poslední porážkové epizodě byly citlivé, odolné a neporažené kontrolní myši analyzovány na expresi SRF v NAc. Podobně jako u lidské deprese byly hladiny proteinů SRF významně sníženy v NAc vnímavých myší ve srovnání s kontrolami, zatímco hladiny SRF nebyly ovlivněny v NAc odolných myší (F (4.7) = 0.05; p <0.05; t testy s Bonferroniho korekce, citlivý vs kontrola, p <0.05; pružný vs citlivý, p <1) (obr. XNUMXD).
Dále jsme zkoumali expresi mRNA Δfosb v NAc těchto tří skupin zvířat a pozorovali jsme významné zvýšení exprese fosb pouze u odolných zvířat, s trendem, ale u vnímavých myší nebyl pozorován žádný významný nárůst (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (Obr. 1E). K dalšímu zkoumání možných interakcí mezi hladinami SRF a transkripcí Δfosb jsme pomocí ChIP zkoumali, zda se vazba SRF na promotor genu fosb změnila po chronickém stresu ze sociální porážky v samostatných kohortách vnímavých a odolných myší. Pružná zvířata vykazovala významně zvýšenou vazbu SRF na promotor fosbů v NAc ve srovnání s kontrolami (t (8) = 2.1; p <0.05) a ve srovnání s vnímavými myšmi (t (8) = 2.0; p <0.05). Nebyl pozorován žádný rozdíl mezi kontrolami a vnímavými myšmi, což pravděpodobně odráží nedostatek indukce SRF u vnímavých myší (obr. 1F).
Aby se potvrdila role SRF v regulaci ΔFosB po chronickém stresu ze sociální porážky, byly použity Srffl / fl myši ke zkoumání účinku selektivní delece SRF z NAc na indukci stresu ΔFosB. Srffl / fl myši byly stereotaxicky injikovány intra-NAc AAV vektory exprimujícími GFP nebo Cre-GFP. Vyřazení SRF specifického pro NAc vyvolané AAV-Cre-GFP bylo potvrzeno imunohistochemicky (obr. 2A). Ve skutečnosti nedošlo k žádnému překrývání mezi barvením SRF a expresí Cre, což dokazuje účinnost knock-outu. U mikrodisekovaných NAc razníků jsme detekovali významné 50% snížení hladin SRF proteinu (t (11) = 4.3; p <0.001). Velikost pravděpodobně odráží skutečnost, že zlomek tkáně v takových mikrodisekcích není infikován viry.
Obrázek 2.
SRF zprostředkovává indukci ΔFosB chronickým stresem sociální porážky. A, injekce AAV-Cre-GFP do NAc myší Srffl / fl vede k vyřazení proteinu SRF v neuronech exprimujících Cre. Injekce AAV-GFP byla bez viditelného účinku. B, Takové selektivní vyřazení SRF z NAc zcela blokuje indukci ΔFosB v NAc po chronickém sociálním porážkovém stresu (n = 4 / skupina). Zobrazené údaje jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (představované jako chybové sloupce). * p <0.05 versus kontrola AAV-GFP; ** p <0.01 versus porážka AAV-GFP.
Dále jsme provedli kvantitativní imunohistochemii pro ΔFosB v NAc poražených Srffl / fl myší injikovaných intra-NAc buď AAV-Cre-GFP nebo AAV-GFP. Po chronickém stresu ze sociální porážky byla exprese ΔFosB významně indukována u NAc zvířat injikovaných AAV-GFP (interakce virus × léčba, F (1,12) = 6.4; t testy s Bonferroniho korekcí, kontrola vs porážka, p <0.05; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01). Tato indukce však nebyla pozorována u myší Srffl / fl, kterým byl podáván AAV-Cre-GFP (obr. 2B), což ukazuje, že indukce AFosB v NAc chronickým stresem vyžaduje SRF.
Knock-out SRF v NAc podporuje fenotypy podobné prodepresi a proanxii
Protože se dříve prokázalo, že indukce ΔFosB chronickým stresem sociální porážky zprostředkovává odolnost (Vialou et al., 2010), předpokládali jsme, že downregulace SRF a výsledná ztráta indukce ΔFosB u vnímavých zvířat mohou představovat negativní adaptaci, která nakonec způsobí zvířata zranitelnější vůči škodlivým účinkům stresu. Abychom tuto hypotézu otestovali, vyvolali jsme lokální NAc-specifickou deleci genu Srf u dospělých myší Srffl / fl, jak je popsáno výše, a výsledné myši a jejich kontroly byly testovány v sérii paradigmatů chování k hodnocení výchozí deprese a úzkosti jako chování. Lokální NAc delece SRF podporovala účinek podobný prodepresi měřený pomocí testu nuceného plavání (t (30) = 2.5; p <0.05), stejně jako anxiogenní účinek měřený v otevřeném poli (t (38) = 1.9; p <0.05) a testy světlo / tma (t (8) = 1.9; p <0.05). Myši Srffl / fl, které dostávaly AAV-Cre-GFP do NAc, tedy vykazovaly sníženou latenci k nehybnosti v testu nuceného plavání, méně času ve středu otevřeného pole a méně času ve světelném oddělení světelného / tmavého boxu ve srovnání se zvířaty injikovanými AAV-GFP (obr. 3A – C). Avšak intra-NAc delece SRF nezměnila základní hladiny lokomoce, což naznačuje, že pozorované behaviorální účinky u SRF knock-out zvířat nebyly způsobeny abnormalitami obecné pohybové aktivity (obr. 3D). Tato data jsou zajímavá ve světle předchozích zpráv, které naznačují, že ačkoli ΔFosB v NAc reguluje chování podobné depresi, nezdá se, že by byl zapojen do odpovědí souvisejících s úzkostí (Vialou et al., 2010). Naše současná zjištění, že ztráta SRF indukuje anxiogenní odpovědi, naznačují, že tak činí prostřednictvím jiných cílů než ΔFosB.
Obrázek 3.
Vyřazení SRF z NAc podporuje fenotypy podobné prodepresi a proanxiitě. A – C, selektivní vyřazení SRF z NAc, dosažené injekcí AAV-Cre-GFP do NAc myší Srffl / fl, snižuje latenci k nehybnosti v testu nuceného plavání (n = 14–18 / skupina; A) a zkracuje čas strávený ve středu a čas strávený ve světelném oddělení v testech na otevřeném poli (B) a světlo / tma (C) (n = 5–15 / skupina). D, Nebyl pozorován žádný rozdíl v bazální pohybové aktivitě v otevřeném poli myší, které dostaly injekce AAV-GFP nebo AAV-Cre-GFP v rámci NAc. E, F, Zvýšená náchylnost k naučené bezmocnosti (n = 7–8 / skupina; E) a stres sociální porážky (n = 5–6 / skupina; F), měřeno podle latence úniku a času sociální interakce . Zobrazené údaje jsou vyjádřeny jako průměr ± SEM (představované jako chybové sloupce). * p <0.05 versus GFP nebo versus cíl chybí; ** p <0.01 versus GFP; *** p <0.001 oproti GFP.
Dále jsme studovali, zda delece SRF v NAc také zvyšuje zranitelnost zvířete vůči škodlivým účinkům opakovaného stresu. Myši Srffl / fl, kterým byl injekčně podán AAV-Cre-GFP nebo AAV-GFP do NAc, byly zkoumány na dvou modelech deprese, naučené bezmocnosti a stresu chronické sociální porážky. U naučené bezmocnosti zvířata Srffl / fl, která dostávala AAV-Cre-GFP, vykazovala zvýšenou latenci, aby unikly šoku nohou po předchozím vystavení nevyhnutelnému stresu šoku nohou (léčba × pokusy interakce, F (14,180 10.2) = 0.001; t testy s Bonferroniho korekcí, p <0.01; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <3), což naznačuje zvýšenou náchylnost k deficitům chování vyvolaným stresem (obr. 10E). Podobně lokální delece SRF z NAc také zvýšila sociální averzi (t (1.8) = 0.05; p <3) ve srovnání s kontrolními zvířaty injikovanými AAV-GFP po chronickém stresu ze sociální porážky (obr. XNUMXF), což je účinek podobný prodepresi.
Nedostatek účasti SRF na indukci AFOS a behaviorálních reakcích na kokain
Vzhledem k tomu, že ΔFosB je také indukován v NAc v reakci na zneužívané drogy, jako je kokain, bylo zajímavé prozkoumat potenciální roli SRF při působení kokainu. Na rozdíl od stresu chronické sociální porážky nezměnila opakovaná expozice kokainu expresi proteinu SRF v NAc (t (14) = 0.8; p> 0.05) (obr. 4A) a neměla žádný účinek na vazbu SRF na promotor genu fosB v této oblasti mozku (t (4) = 0.7; p> 0.05) (obr. 4B). To naznačuje, že na rozdíl od stresu není indukce ΔFosB po chronickém kokainu zprostředkována prostřednictvím SRF. Testovali jsme to přímo zkoumáním, zda je akumulace ΔFosB po chronickém kokainu změněna u zvířat Srffl / fl dostávajících AAV-Cre-GFP oproti AAV-GFP do NAc. Zjistili jsme, že SRF delece neměla žádný vliv na kokainem indukovanou akumulaci ΔFosB v této oblasti mozku (obr. 4C).
Obrázek 4.
Ztráta SRF neměla žádný vliv na kokainovou indukci ΔFosB nebo chování regulované kokainem. A, B, Opakovaná expozice kokainu (7 d, 20 mg / kg kokain-HCI) neměla žádný účinek na expresi proteinu SRF v NAc (A) nebo na vazbu SRF k promotoru genu fosB v této mozkové oblasti (B) 24 h po expozice léčivu (n = 5 / skupina). Akumulace C, ΔFosB, měřená imunocytochemicky, po chronické expozici kokainu není ovlivněna knock-outem SRF specifickým pro NAc. D, E, Lokální delece SRF z NAc také neměla žádný účinek na lokomotorickou aktivitu po injekci fyziologického roztoku (d 1) na lokomotorickou aktivitu a senzibilizaci indukovanou kokainem (n = 8 / skupina) (d 1 – 7; D) nebo na kokainovém kondicionovaném místě (n = 8 / skupina; E). Zobrazená data jsou vyjádřena jako průměr ± SEM (znázorněné jako sloupce chyb).
Abychom na toto překvapivé zjištění navázali, zkoumali jsme, zda selektivní vyřazení SRF z NAc mění behaviorální reakce na kokain. V souladu s nedostatečnou regulací SRF indukce ΔFosB kokainem nemělo vyřazení SRF specifické pro NAc žádný účinek na pohybovou aktivitu vyvolanou akutním kokainem nebo lokomotorickou senzibilizaci po opakovaných expozicích kokainu (léčba × časová interakce, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (obr. 4D). Podobně vyřazení SRF specifické pro NAc nemělo žádný vliv na preferenci místa podmíněného kokainem (t (14) = 0.1; p> 0.05) (obr. 4E), což poskytuje nepřímou míru odměny za kokain.
Diskuse
Tato studie identifikovala SRF jako nový upstream mediátor AFosB v NAc po chronickém společenském porážkovém stresu a implikuje SRF ve vývoji depresivních a úzkostných chování. Poskytujeme přímé důkazy o tom, že chronický sociální porážkový stres snižuje hladiny SRF u NAc u vnímavých, ale ne odolných zvířat, a že tato downregulace zabraňuje indukci ΔFosB v této oblasti mozku, což jsme ukázali, že je nezbytné pro účinné zvládání chronického stresu, tj. odolnost (Vialou et al., 2010). Podobné snížení exprese SRF bylo nalezeno u NAc depresivních lidí, kde byla také snížena exprese AFOSB mRNA a proteinu. Naproti tomu hladiny AFosB nebyly sníženy v NAc u vnímavých myší, a to navzdory downregulaci SRF, což implikuje další transkripční mechanismy, jak dosud neznámé, při kontrole exprese FosB. Kauzální role SRF při zprostředkování indukce AFosB v NAc po chronickém stresu byla stanovena pomocí indukovatelné genetické delece SRF z této oblasti mozku. Behaviorální analýza myší s tímto NAc-specifickým knock-outem SRF dále implikuje, že SRF hraje klíčovou roli ve vývoji jak základních, tak stresem indukovaných depresí a úzkostných chování. Na rozdíl od toho neměla delece SRF žádný účinek na indukci AFosB v reakci na chronické podávání kokainu nebo na behaviorální účinky kokainu. Tato zjištění podporují novou stimulačně specifickou roli pro SRF v regulaci indukce AFosB a behaviorálních reakcí na odlišné environmentální poruchy.
Ukázalo se, že transkripce zprostředkovaná SRF reaguje na synaptickou aktivitu, do značné míry spouštěnou zvýšeným přítokem vápníku, a také na zvýšenou neurotrofickou aktivitu, zejména v případě neurotrofického faktoru pocházejícího z mozku (BDNF) (Bading et al., 1993; Xia a kol., 1996; Johnson a kol., 1997; Chang a kol., 2004; Kalita a kol., 2006; Knol a Nordheim, 2009). To vyvolává zajímavou otázku, proč je SRF downregulated v NAc vnímavých, ale ne odolných myší po chronickém společenském porážkovém stresu. Tato diferenciální regulace pravděpodobně není zprostředkována dopaminovou nebo BDNF signalizací, protože vnímavé myši vykazují zvýšené hladiny BDNF proteinu a zvýšenou downstream BDNF signalizaci v NAc, jakož i zesílené odpálení dopaminových neuronů ventrální tegmentální oblasti (VTA), které inervují NAc, zatímco odolná zvířata vykazují normální úrovně signalizace BDNF a rychlosti střelby VTA (Krishnan et al., 2007). Alternativní možnost je, že exprese SRF je potlačena v NAc v reakci na změněnou glutamatergickou inervaci této oblasti mozku, kterou jsme ukázali, že je diferencovaně regulovaná u vnímavých versus odolných myší (Vialou et al., 2010). K přímému studiu tohoto a dalších možných mechanismů je zapotřebí další práce.
Nedávné studie využívající celý genom a další metody naznačují, že ∼5 – 10% cílových genů SRF v neuronech jsou okamžité časné geny (Philippar a kol., 2004; Ramanan a kol., 2005; Etkin a kol., 2006; Knöll a Nordheim, 2009). To je v souladu s našimi údaji prokazujícími kritickou roli SRF při indukci AFosB, zkráceného produktu fosb okamžitého raného genu, chronickým stresem. Je zajímavé, že četné cílové geny SRF identifikované v těchto různých studiích také představují známé cíle AFosB v NAc (Kumar a kol., 2005; Renthal a kol., 2008, 2009; Maze a kol., 2010). Mezi těmito běžně regulovanými geny je několik, o kterých je známo, že regulují neuronální cytoskelet (například Cdk5, Arc a Actb). To je zase v souladu se zprávami, že SRF ovlivňuje dynamiku aktinu a neuronální motilitu v několika typech neuronálních buněk (Alberti a kol., 2005; Ramanan a kol., 2005; Knöll a kol., 2006), zatímco o FosB je známo, že ovlivňují růst dendritických páteří neuronů NAc (Maze et al., 2010). Takové běžné funkční parametry mohou odrážet společné účinky SRF v kombinaci s indukcí AFosB, které působí na řadu společných cílových genů, aby ovlivnily morfologii neuronů a nakonec komplexní chování.
Bylo také prokázáno, že SRF hraje rozhodující roli v regulaci synaptické plasticity a genové exprese a chování závislých na neuronální aktivitě. Například ztráta SRF-dependentní indukce okamžitých časných genů v reakci na dobrovolné zkoumání nového prostředí nebo neuronální aktivaci elektrokonvulzivními záchvaty byla spojena se zhoršenou dlouhodobou synaptickou potencí v hipokampu mutantů Srf (Ramanan et al. , 2005; Etkin a kol., 2006). Dále se ukázalo, že deplece SRF v hippocampu způsobuje deficity v dlouhodobé synaptické depresi, okamžité časné expresi genů indukované novým kontextem a zhoršené návyky během zkoumání nového prostředí (Etkin et al., 2006). Tyto údaje potvrzují význam SRF ve schopnosti zvířete přizpůsobit se náležitě poruchám prostředí, jako ve výše uvedeném případě osvojení návyků v novém prostředí, nebo v případě přizpůsobení se negativním stresovým podnětům, aby se zabránilo šíření stresu -indukované deficity chování, jako v naší současné studii. Pozorujeme tedy, že zvířata vykazující deficity v expresi SRF, buď v reakci na stres sociální porážky u vnímavých jedinců, nebo přímým klepnutím SRF, vykazují zvýšené chování podobné depresi a úzkosti. Vzhledem k tomu, že depresivní lidské subjekty také vykazují snížené hladiny SRF v NAc, je možné, že SRF hraje zásadní roli v regulaci schopnosti jedince pozitivně se adaptovat na negativní podněty prostředí, částečně prostřednictvím regulace exprese ΔFosB v NAc.
ROZDĚLUJÍCÍ MECHANISMY: DOPLŇUJÍCÍ VĚTRNÁ ODOLNOST
Překvapivé zjištění předkládané studie je, že ačkoli SRF je vyžadován pro akumulaci AFosB v NAc v reakci na chronický stres, není vyžadován pro indukci AFosB ve stejné mozkové oblasti jako odpověď na chronický kokain. Podobně SRF není vyžadován pro normální behaviorální reakce na léčivo. Tato data ukazují, že navzdory skutečnosti, že AFosB je indukován v NAc v reakci na mnoho typů podnětů (Nestler et al., 1999; Nestler, 2008), zdá se, že existují odlišné molekulární dráhy vedoucí k indukci AFosB. Jedním z možných vysvětlení těchto nálezů jsou částečně odlišné typy buněk, které vykazují akumulaci AFosB v reakci na stres versus kokain. Chronický stres indukuje AFosB přibližně stejně v rámci dvou hlavních subpopulací NAc středně ostnatých neuronů, které exprimují převážně D1 versus D2 dopaminové receptory, zatímco chronický kokain indukuje AFosB převážně v D1 + neuronech (Kelz et al., 1999; Perrotti et al., XNX) . Je tedy možné, že dráhy závislé na SRF mohou být důležité pro indukci AFosB v neuronech D2004 +. To však nevysvětluje úplnou ztrátu indukce AFosB u knock-out myší SRF po chronickém stresu, protože k indukci dochází u obou neuronálních podtypů. Alternativní vysvětlení je, že chronický stres a chronický kokain zasahují do odlišných intracelulárních signálních kaskád, díky jejich odlišným způsobům působení na neurony NAc, přičemž chronický stres může působit prostřednictvím změněného glutamatergického přenosu, jak bylo uvedeno výše, a chronický kokain působící primárně prostřednictvím D1 signální signalizace (Nestler, 2008). Ještě další možnost je, že indukce AFos chronickým stresem versus chronický kokain je závislá na odlišných transkripčních mechanismech, které jsou odlišně kontrolovány odlišnými nervovými vstupy inervujícími NAc z různých glutamatergických projekčních oblastí, například několika oblastí prefrontální kůry, hippocampu a amygdaly. K prozkoumání těchto a alternativních možností je zapotřebí mnohem více práce.
Naše zjištění společně identifikují nový transkripční mechanismus, pomocí kterého je indukován AFosB v NAc k zprostředkování proresilienčních reakcí na stresující podněty. Tato studie rovněž poskytuje důležitý nový pohled na roli, kterou hraje SRF na úrovni NAc při regulaci chování podobného depresím a úzkosti.. Získání lepšího porozumění transkripční roli SRF při regulaci takového chování pomůže při identifikaci nových genových cílů zapojených do odolnosti vůči poruchám souvisejícím se stresem a může usnadnit budoucí vývoj účinnějších antidepresivních terapií.
Tato práce byla podpořena granty Národního ústavu duševního zdraví a Národního ústavu pro zneužívání drog a výzkumnou aliancí se společností AstraZeneca. Děkujeme Davidovi D. Gintymu za poskytnutí myší Srffl / fl.
Korespondence by měla být adresována Ericu J. Nestlerovi, Neurovědnímu oddělení Fishberga, Lékařské fakultě Mount Sinai, One Gustave L. Levy Place, Box 1065, New York, NY 10029-6574. [chráněno e-mailem]
Copyright © 2010 autoři 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
Reference
1. ↵
1. Alberti S,
2. Krause SM,
3. Kretz O,
4. Philippar U,
5. Lemberger T,
6. Casanova E,
7. Wiebel FF,
8. Schwarz H,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Nordheim A
(2005) Neuronální migrace v myším rostrálním migračním proudu vyžaduje faktor sérové odpovědi. Proc Natl Acad Sci USA 102: 6148 – 6153.
Abstrakt / ZDARMA plný text
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Greenberg ME
(1993) Regulace genové exprese v hipokampálních neuronech odlišnými signálními cestami vápníku. Science 260: 181 – 186.
Abstrakt / ZDARMA plný text
3. ↵
1. Berton O,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Krishnan V,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Graham D,
8. Tsankova NM,
9. Bolanos CA,
10. Rios M,
11. Monteggia LM,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2006b) Základní role BDNF v mezolimbické dopaminové dráze při společenském porážkovém stresu. Science 311: 864 – 868.
Abstrakt / ZDARMA plný text
4. ↵
1. Berton O,
2. Covington HE 3rd.,
3. Ebner K,
4. Tsankova NM,
5. Carle TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Krishnan V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ
(2007) Indukce AFosB v periaqueductal grey stresem podporuje aktivní reakce na zvládání. Neuron 55: 289 – 300.
CrossRefMedline
5. ↵
1. Chang SH,
2. Poser S,
3. Xia Z
(2004) Nová role faktoru sérové odpovědi při přežití neuronů. J Neurosci 24: 2277 – 2285.
Abstrakt / ZDARMA plný text
6. ↵
1. Etkin A,
2. Alarcón JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Kandel ER
(2006) Role při učení pro SRF: delece v předním mozku dospělého narušuje LTD a vytváření okamžité paměti nového kontextu. Neuron 50: 127 – 143.
CrossRefMedline
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Voges J,
4. Hinrichs H,
5. Marco-Pallares J,
6. Hopf JM,
7. Müller UJ,
8. Galazky I,
9. Sturm V,
10. Bogerts B,
11. Münte TF
(2009) Proti stimulační senzibilizaci při těžké závislosti na alkoholu pomocí hluboké mozkové stimulace jádra accumbens: klinické a základní vědecké aspekty. Přední Hum Neurosci 3: 22.
Medline
8. ↵
1. Johnson CM,
2. Hill CS,
3. Chawla S,
4. Treisman R,
5. Bading H
(1997) Vápník řídí expresi genu prostřednictvím tří různých cest, které mohou fungovat nezávisle na signální kaskádě Ras / mitogenem aktivovaných proteinových kináz (ERK). J Neurosci 17: 6189 – 6202.
Abstrakt / ZDARMA plný text
9. ↵
1. Kalita K,
2. Kharebava G,
3. Zheng JJ,
4. Hetman M.
(2006) Úloha megakaryoblastické akutní leukémie-1 v ERK1 / 2-dependentní stimulaci transkripce řízené transkripcí faktorem BDNF nebo zvýšené synaptické aktivity. J Neurosci 26: 10020 – 10032.
Abstrakt / ZDARMA plný text
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.,
4. Whisler K,
5. Gilden L,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Zhang YJ,
9. Marotti L,
10. Self DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. Neve RL,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) Exprese transkripčního faktoru ΔFosB v mozku řídí citlivost na kokain. Příroda 401: 272-276.
CrossRefMedline
11. ↵
1. Knöll B,
2. Nordheim A
(2009) Funkční univerzálnost transkripčních faktorů v nervovém systému: paradigma SRF. Trendy Neurosci 32: 432 – 442.
CrossRefMedline
12. ↵
1. Knöll B,
2. Kretz O,
3. Fiedler C,
4. Alberti S,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Nordheim A
(2006) Sérový odezvový faktor řídí sestavení neuronových obvodů v hippocampu. Nat Neurosci 9: 195 – 204.
CrossRefMedline
13. ↵
1. Krishnan V,
2. Han MH,
3. Graham DL,
4. Berton O,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Laplant Q,
8. Graham A,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ghose S,
12. Reister R,
13. Tannous P,
14. Zelená TA,
15. Neve RL,
16. Chakravarty S,
17. Kumar A,
18. Eisch AJ,
19. Self DW,
20. Lee FS,
21. et al.
(2007) Molekulární adaptace, které jsou základem citlivosti a odolnosti vůči sociální porážce v oblastech odměňování mozku. Buňka 131: 391 – 404.
CrossRefMedline
14. ↵
1. Kuhn J,
2. Bauer R,
3. Pohl S,
4. Lenartz D,
5. Huff W,
6. Kim EH,
7. Klosterkoetter J,
8. Sturm V
(2009) Pozorování odvykání od kouření bez pomoci po hluboké mozkové stimulaci jádra accumbens. Eur Addict Res 15: 196 – 201.
CrossRefMedline
15. ↵
1. Kumar A,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Tsankova NM,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Russo SJ,
8. Laplant Q,
9. Sasaki TS,
10. Whistler KN,
11. Neve RL,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2005) Remodelace chromatinu je klíčovým mechanismem, který je základem plasticity vyvolané kokainem ve striatu. Neuron 48: 303 – 314.
CrossRefMedline
16. ↵
1. Bludiště I,
2. Covington HE 3rd.,
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Mechanik M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Haggarty SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath SC,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Tarakhovsky A,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ
(2010) Základní úloha histonmethyltransferázy G9a v plasticitě vyvolané kokainem. Science 327: 213 – 216.
Abstrakt / ZDARMA plný text
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton O,
6. Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: molekulární přepínač pro dlouhodobou adaptaci v mozku. Brain Res Mol Brain Res 132: 146 – 154.
Medline
18. ↵
1. Nestler EJ
(2008) Transkripční mechanismy závislosti: role deltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363: 3245 – 3255.
Abstrakt / ZDARMA plný text
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA Jr.
(2006) Mezolimbický dopaminový odměnový obvod v depresi. Biologická psychiatrie 59: 1151 – 1159.
CrossRefMedline
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Chen J
(1999) ΔFosB: molekulární mediátor dlouhodobé neurální a behaviorální plasticity. Brain Res 835: 10-17.
CrossRefMedline
21. ↵
1. Newton SS,
2. Thome J,
3. Wallace TL,
4. Shirayama Y,
5. Schlesinger L,
6. Sakai N,
7. Chen J,
8. Nikdy,
9. Nestler EJ,
10. Duman RS
(2002) Inhibice proteinu vázajícího se na cAMP nebo dynorfin v jádru accumbens vyvolává antidepresivní účinek. J Neurosci 22: 10883 – 10890.
Abstrakt / ZDARMA plný text
22. ↵
1. Nikulina EM,
2. Arrillaga-Romany I,
3. Miczek KA,
4. Hammer RP Jr.
(2008) Dlouhodobá změna mezokortikoidických struktur po opakovaném společenském stresu u potkanů: časový průběh mopioidního receptoru mRNA a imunoreaktivita FosB / DeltaFosB. Eur J Neurosci 27: 2272 – 2284.
CrossRefMedline
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Duman RS,
7. Nestler EJ
(2004) Indukce AFosB v mozkových strukturách souvisejících s odměnou po chronickém stresu. J Neurosci 24: 10594 – 10602.
Abstrakt / ZDARMA plný text
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Robison B,
4. Renthal W,
5. Bludiště I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Knapp DJ,
9. Selley DE,
10. Martin BR,
11. Sim-Selley L,
12. Bachtell RK,
13. Self DW,
14. Nestler EJ
(2008) Odlišné vzorce indukce DeltaFosB v mozku drogami zneužívání. Synapse 62: 358 – 369.
CrossRefMedline
25. ↵
1. Philippar U,
2. Schratt G,
3. Dieterich C,
4. Müller JM,
5. Galgóczy P,
6. Engel FB,
7. Keating MT,
8. Gertler F,
9. Schüle R,
10. Vingron M,
11. Nordheim A
(2004) Cílový gen SRF Fhl2 antagonizuje aktivaci SRF závislou na RhoA / MAL. Mol Cell 16: 867 – 880.
CrossRefMedline
26. ↵
1. Ramanan N,
2. Shen Y,
3. Sarsfield S,
4. Lemberger T,
5. Schütz G,
6. Linden DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF zprostředkovává expresi genu indukovanou aktivitou a synaptickou plasticitu, ale ne neuronální životaschopnost. Nat Neurosci 8: 759 – 767.
CrossRefMedline
27. ↵
1. Renthal W,
2. Carle TL,
3. Bludiště I,
4. Covington HE 3rd.,
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Kumar A,
8. Montgomery RL,
9. Olson EN,
10. Nestler EJ
(2008) Delta FosB zprostředkovává epigenetickou desenzibilizaci genu c-fos po chronické expozici amfetaminu. J Neurosci 28: 7344 – 7349.
Abstrakt / ZDARMA plný text
28. ↵
1. Renthal W,
2. Kumar A,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Covington HE 3rd.,
6. Bludiště I,
7. Sikder D,
8. Robison AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Russo SJ,
12. Vialou V,
13. Chakravarty S,
14. Kodadek TJ,
15. Stoh A,
16. Kabbaj M,
17. Nestler EJ
(2009) Analýza genomové regulace chromatinu kokainem odhaluje roli sirtuinů. Neuron 62: 335 – 348.
CrossRefMedline
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Cohen MX,
3. Frick C,
4. Kosel M,
5. Brodesser D,
6. Axmacher N,
7. Joe AY,
8. Kreft M,
9. Lenartz D,
10. Sturm V
(2008) Hluboká stimulace mozku k odměňování obvodů zmírňuje anhedonii při refrakterní velké depresi. Neuropsychofarmakologie 33: 368 – 377.
CrossRefMedline
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Grace AA
(2010) Síť odměn Cortico-bazálních ganglií: mikroobvod. Neuropsychofarmakologie 35: 27 – 47.
CrossRefMedline
31. ↵
1. Tomita H,
2. Vawter MP,
3. Walsh DM,
4. Evans SJ,
5. Choudary PV,
6. Li J,
7. Overman KM,
8. Atz ME,
9. Myers RM,
10. Jones EG,
11. Watson SJ,
12. Akil H,
13. Bunney WE Jr.
(2004) Vliv agonistických a posmrtných faktorů na profil genové exprese: kontrola kvality v mikročipových analýzách nebo posmrtný lidský mozek. Biol Psychiatry 55: 346 – 352.
CrossRefMedline
32. ↵
1. Tsankova NM,
2. Berton O,
3. Renthal W,
4. Kumar A,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ
(2006) Trvalá regulace hipokampálního chromatinu v myším modelu deprese a antidepresiva. Nat Neurosci 9: 519 – 525.
CrossRefMedline
33. ↵
1. Vassoler FM,
2. Schmidt HD,
3. Gerard ME,
4. Slavný KR,
5. Ciraulo DA,
6. Kornetsky C,
7. Knapp CM,
8. Pierce RC
(2008) Hluboká mozková stimulace jádra accumbens shell zmírňuje kokainem indukovanou reinstituci hledání drog u potkanů. J Neurosci 28: 8735 – 8739.
Abstrakt / ZDARMA plný text
34. ↵
1. Vialou V,
2. Robison AJ,
3. Laplant QC,
4. Covington HE 3rd.,
5. Dietz DM,
6. Ohnishi YN,
7. Mouzon E,
8. Rush AJ 3rd.,
9. Watts EL,
10. Wallace DL,
11. Iñiguez SD,
12. Ohnishi YH,
13. Steiner MA,
14. Warren BL,
15. Krishnan V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ghose S,
19. Berton O,
20. Tamminga CA,
21. Nestler EJ
(2010) AFOS v mozkových odměňovacích obvodech zprostředkovává odolnost vůči stresovým a antidepresivním reakcím. Nat Neurosci 13: 745 – 752.
CrossRefMedline
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Kumar A,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ
(2009) Léčba a odolnost imipraminu vykazuje podobnou regulaci chromatinu v klíčové oblasti odměňování mozku. J Neurosci 29: 7820 – 7832.
Abstrakt / ZDARMA plný text
36. ↵
1. Xia Z,
2. Dudek H,
3. Miranti CK,
4. Greenberg ME
(1996) Přítok vápníku prostřednictvím receptoru NMDA indukuje okamžitou časnou časovou transkripci genu mechanismem závislým na MAP kináze / ERK. J Neurosci 16: 5425 – 5436.
Abstrakt / ZDARMA plný text
;
