Striatální regulace DeltaFosB, FosB a cFos při samočinném podávání a stažení kokainu (2010)

J Neurochem. Autorský rukopis; k dispozici v PMC Oct 1, 2011.
Publikováno v posledním editovaném formuláři:
Konečná upravená verze tohoto článku vydavatele je k dispozici na adrese J Neurochem
Viz další články v PMC to citovat publikovaný článek.

Abstraktní

Chronická expozice lékům indukuje změny v profilech genové exprese, o nichž se předpokládá, že jsou základem vývoje drogové závislosti. Tato studie zkoumala regulaci transkripčních faktorů rodiny Fos, konkrétně cFos, FosB a AFosB, ve striatálních podoblastích během a po chronickém intravenózním podání kokainu u samodávných a jhacích krys. Zjistili jsme, že cFos, FosB a AFosB vykazují regionálně a časově odlišné expresní vzorce, s větší akumulací AFosB proteinu ve skořápce a jádře nucleus accumbens (NAc) a po chronickém podání kokainu, zatímco AFosB se zvyšuje v caudate-putamenu (CPu). podobné s akutním nebo chronickým podáním. Na rozdíl od toho se vyvinula tolerance vůči kokainem indukované mRNA pro AFosB ve všech striatálních podoblastech 3 s chronickým podáváním. Tolerance se také vyvinula k expresi FosB, zejména ve skořápce NAc a CPu. Je zajímavé, že tolerance k indukci cFos indukované kokainem byla závislá na dobrovolné kontrole příjmu kokainu ve ventrálních, ale nikoli dorzálních striatálních regionech, zatímco regulace FosB a AFosB byla podobná u zvířat, která podávají kokain, a jhacích zvířat. Neoadaptace zprostředkované ΔFosB v CPu se tedy mohou vyskytnout dříve, než se původně předpokládalo, se zahájením intravenózního užívání kokainu a spolu s větší akumulací AFosB v NAc by mohly přispět ke zvýšení návyku v chování při hledání kokainu.

Klíčová slova: kokain, vlastní podání, stažení, striatum, Fos

Úvod

Opakovaná expozice návykovým lékům vede k neuroadaptacím v mozkových odměnových drahách, o nichž se předpokládá, že jsou základem rozvoje nutkavého užívání drog a přetrvávání touhy a návratu k chování při hledání drog při stažení. Mnoho z těchto neuroadaptací je výsledkem indukce transkripčních faktorů a následné regulace genové exprese, což může mít potenciálně dlouhodobé účinky na strukturu a funkci neuronů (Zhang et al. 2006). Zvláště zajímavý je transkripční faktor Fos, protože členové této rodiny vykazují rozdílné indukční vzorce ve striatálních oblastech po akutní i chronické expozici kokainu. Pokud je kokain podáván akutně pasivním, nepodmíněným způsobem (tj. Intraperitoneální (IP) injekcí), zvyšuje cFos a FosB mRNA a protein v obou hřbetních (caudate-putamen, CPu) a ventrálních (nucleus accumbens, NAc). striatum (Graybiel et al. 1990; Mladé et al. 1991; Naděje et al. 1992), zatímco tolerance k této reakci nastává při chronickém pasivním podání (Naděje et al. 1992, 1994; Alibhai et al. 2007). Naproti tomu striatální hladiny AFosB (35-37 kDa), stabilní zkrácené sestřihové varianty fosB gen, jsou zvýšené po chronické, ale ne akutní pasivní expozici kokainu (Naděje et al. 1994; Nye et al. 1995; Chen et al. 1995, 1997). Tyto stabilní izoformy ΔFosB mohou heterodimerizovat s různými proteiny rodiny Jun než cFos nebo FosB (Chen et al. 1995), a může také sám vytvářet funkční homodimery (Jorissen et al. 1997), což naznačuje, že rozdílná tvorba komplexů aktivátorového proteinu-1 (AP-1) po chronickém kokainu může změnit expresi genu v místech AP-1 způsobem, který je odlišný od genové exprese produkované akutní expozicí kokainu (Doufám, 1998; Kelz a Nestler, 2000). K rozdílným změnám v profilech genové exprese také dochází v závislosti na tom, zda zvýšení FosB je krátkodobé nebo dlouhodobé, a tyto změny mohou vést k rozdílné expresi chování zprostředkovaného kokainem. (McClung a Nestler, 2003). Chronická expozice jiným lékům včetně amfetaminu, morfinu, Δ9-THC, nikotin, ethanol a fencyklidin také vedou ke akumulaci stabilních izoforem AFosB ve striatálních oblastech (McClung et al. 2004; Perrotti et al. 2008). Nedávná zjištění dále naznačují negativní interakci mezi akumulací AFosB a amfetaminem indukovaným cFos, což může odpovídat za toleranci k indukci cFos zjištěnou po expozici chronickým stimulačním látkám (Renthal et al. 2008). Tato zjištění společně vedla k hypotéze, že stabilní izoformy FosB mohou působit jako „molekulární přepínač“ a usnadňovat přechod z počátečního užívání drog do závislejších biologických stavů. (Nestler et al. 2001; Nestler, 2008).

Zatímco většina předchozích studií využívala opakované pasivní léčby kokainem ke studiu exprese proteinů rodiny Fos, a existuje relativně málo příkladů této regulace, když je kokain podáván intravenózně (IV) po dobu několika hodin, což je typické pro vzorce zneužívání lidí. Jedna studie zjistila, že cFos mRNA je zvýšena v CPu po jediné 30minutové relaci autokainu s kokainem u myší (Kuzmin a Johansson, 1999), zatímco u CPu potkanů ​​nebyly zjištěny žádné změny ani po subchronickém ( 3 dní) nebo chronické (6-12 týdny) užívání kokainu (Daunais et al. 1993, 1995). Po období vysazení se u potkanů ​​s předchozím zvýšeným příjmem kokainu sníží zvýšení obsahu cFos proteinu zprostředkované kokainem v NAc.Ben-Shahar et al. 2004), zatímco zvýšené hladiny cFos se vyskytují v celém striatu po vystavení narážkám spojeným s kokainem (Neisewander et al. 2000; Kufahl et al. 2009). Na rozdíl od cFos se po chronickém samopodání kokainu ve striatu prokázaly zvýšené hladiny bílkovin ΔFosB a tato akumulace může přetrvávat po dobu minimálně 1 po stažení (Pich et al. 1997; Perotti et al. 2008). Neexistují však žádné zprávy, které by srovnávaly změny v reakci více proteinů rodiny Fos na takové intravenózní podávání kokainu s akutní nebo chronickou expozicí. Vzhledem k potenciálním interakcím mezi FOSB a cFos, schopnosti diferenciální tvorby komplexu AP-1 vyvolat rozdílné účinky na genovou expresi a možnému dopadu těchto rozdílů na chování zprostředkované kokainem, je také důležité potvrdit, že změny v exprese cFos, FosB a AFosB, které se vyskytují po neúmyslném podání, se také nacházejí, když je kokain samostatně podán dobrovolně, a určit, jak dlouho mohou tyto změny přetrvávat i po ukončení podávání kokainu. Proto jsme v této studii porovnávali účinky chronického podávání IV kokainu na expresi AFosB, FosB a cFos ve striatálních podoblastích během podávání i stahování kokainu. Porovnávali jsme regulaci zjištěnou u dobrovolného samopodávání s regulací u zvířat, která dostávaly identické množství a časový průběh kokainu pomocí nevázaných infuzí po akutní nebo chronické expozici. Vzhledem k tomu, že FosB a AFosB jsou jejich sestřihové varianty fosB genu jsme také porovnali regulaci mRNA pro FosB a AFosB s regulací na úrovni proteinu.

Experimentální postupy

Předměty a chirurgie

Dospělí samci potkanů ​​Sprague-Dawley původně vážící přibližně 250-300 g byli chováni v prostředí s regulovanou teplotou a vlhkostí v cyklu 12 h světlo-tma (světla byla zapnuta v 7: 00 AM). Zvířata byla krmena potravou a vodou podle libosti po celou dobu s výjimkou toho, že byly udržovány na 85% své volné krmné hmotnosti během pákového lisování pro sacharózové pelety (45 mg, BioServ). Lever-press školení bylo prováděno ve ventilovaných operačních komorách (Med Associates, Georgia, VT), dokud nebyla splněna kritéria pro získání (pelety 100 na relaci pro 3 po sobě jdoucích relacích) v rámci plánu zesílení 1 s pevným poměrem (FR1). Zvířata byla potom krmena podle libosti alespoň 24 h před operací. V případě chirurgického zákroku byly potkanům podány atropin (0.04 mg / kg, subkutánní) na pomoc dýchání a chronický, zavedený katétr byl vložen do pravé jugulární žíly pod anestézií pentobarbitálem sodným (50 mg / kg, IP) podle dříve publikovaných postupů (Edwards et al. 2007a). Po operaci dostaly krysy injekci penicilinu (200,000 IU / kg, intramuskulární), aby se zabránilo infekci, a katétry se propláchly denně 0.2 ml heparinizovaného (20 IU / ml) bakteriostatického solného roztoku obsahujícího gentamycin sulfát (0.33 mg / ml). Všechny experimentální postupy byly provedeny v souladu s Národním institutem zdraví Průvodce pro péči a používání laboratorních zvířat, a byly schváleny Ústavním výborem pro péči o zvířata a použití zvířat v jihozápadním lékařském centru UT (IACUC).

Přístroje a postupy samosprávy

Po zotavení 1 z chirurgického zákroku byla zvířata rozdělena do několika experimentálních skupin / doba odběru (Obr. 1A) a vrátili se do zkušebních komor operátora v denních sezeních, jak bylo popsáno výše (Edwards et al. 2007b). Krysy v neošetřené kontrolní skupině byly umístěny jednotlivě a denně s nimi bylo manipulováno v jejich domácích klecích, aniž by byly vystaveny prostředí pro vlastní aplikaci. Krysy ve skupině se samoukazováním kokainu (CSA) se nechaly dobrovolně samopodávat kokain (0.5 mg / kg / 50 μl infuze) v plánu 1 s fixním poměrem (FR1) v denních 4 h sezeních, prováděných 6 dnech / týden, celkem 18 dní. Každý aktivní pákový lis vytvořil 2.5's infuze kokainu, která byla spojena s osvětlením cue světla nad aktivní pákou. Během infuze kokainu zhaslo světlo domu a po infuzi došlo k další prodlevě 12.5, po které zůstalo světlo domu zhasnuto. Během infuze a časového limitu byla zaznamenána páka, která reagovala, ale neměla žádné důsledky. V komorách byla přítomna další neaktivní páka, ale reakce na tuto páku byla bez následků. Krysy ve skupině s chronickým jhoem (CY) byly spárovány s aktivními samy podávajícími krysy a dostávaly pasivní infuze kokainu v množství a časových vzorcích shodných s jejich samy podávajícími partnery. Krysy ve skupině s akutním jhoem (AY) byly také spárovány s potkani v chronické skupině CSA, ale místo kokainu dostávaly pasivní solné infuze, až do posledního dne samopodávání, když obdržely jednu relaci pasivních kokainových infuzí pro první čas. Nakonec bylo skupině Saline SA umožněno samostatně podávat solný roztok, aby se identifikovaly možné změny související s chirurgickým zákrokem, testováním nebo jinými experimentálními postupy ve srovnání s neošetřenými kontrolami. Srovnání mezi skupinami AY a CY byla použita k identifikaci změn v citlivosti cFos, FosB nebo AFosB s akutní a chronickou expozicí kokainu, zatímco skupiny CSA a CY byly porovnány za účelem identifikace změn v expresi cFos, FosB nebo AFosB, které byly konkrétně souvisí s prospěšnými versus farmakologickými účinky kokainu. Tkáň ze všech studijních skupin byla odebrána okamžitě po závěrečné testovací relaci 4 h, aby se porovnala regulace vyvolaná kokainem, cFos, FosB a AFosB, a pro některé studijní skupiny byla stanovena perzistence ke změnám vyvolaným kokainem 24 h nebo 3. týdne po závěrečné zkušební relaci. Kvantitativní Western blot a RT-PCR postupy byly použity na řezy striatálních podoblastí k obcházení potenciálních problémů týkajících se zkřížené reaktivity protilátek a ke zlepšení citlivosti pro detekci změn.

Obrázek 1  

(A) Časová osa znázorňující režimy podávání a odběru kokainu (WD). Plné čáry označují intravenózní podávání infuzí kokainu (0.5 mg / kg / infuze) u zvířat s chronickým kokainem (CSA) a chronicky zahojených (CY) zvířat celkem ...

Sběr tkání

Krysy byly utraceny mikrovlnným zářením zaměřeným na oblast hlavy (5 kW, 1.5 s, Murimachi Kikai, Tokio, Japonsko). Mozky byly rychle pitvány a chlazeny a bilaterální tkáňové údery (obrys 14) skořápky nucleus accumbens (NAc), jádro NAc a kaudate-putamen (CPu) byly získány z koronálních řezů 1.5 mm na základě souřadnic získaných z Paxinos a Watson (1998, ilustrováno v Obrázek 1B). Vzorky tkáně byly homogenizovány sonikací v lýzovacím pufru obsahujícím proteázové a fosfatázové inhibitory. Homogenáty byly poté vařeny po dobu 5 min, umístěny na led a následně analyzovány pomocí Lowryho pro stanovení koncentrací proteinu. Homogenáty byly poté alikvotovány ve vzorcích 20 μg a skladovány při -80 ° C až do použití.

Western Blots

Vzorky tkáně byly naneseny na polyakrylamidové gely 12% pro separaci elektroforézou v slaném roztoku Tris / glycin / dodecylsulfát sodný (TGS; Bio-Rad, Hercules, CA). Po separaci byly vzorky přeneseny elektroforézou (250 mA pro 18 h) na polyvinylidenfluoridové membrány (PVDF; Amersham, Piscataway, NJ) a následně blokovány v 3% beztučném mléce a 1% Tris / Tween pufrovaný solný roztok (TTBS; Bio -Rad, Hercules, CA) přes noc při 4 ° C. Membrány pak byly inkubovány v 1: 1000 ředění primární Fra protilátky (laskavě poskytnuté Dr. Michael Iadarola, National Institutes of Health, Bethesda, MD) v roztoku 3% mléko / 1 × TTBS přes noc při 4 ° C. Membrány byly promyty v 1 × TTBS (4 krát, 15 min každý) a inkubovány v 1 × TTBS obsahujícím 1: 25000 ředění kozí protikráličí sekundární protilátky konjugované s křenovou peroxidázou (Bio-Rad, Hercules, CA) pro 1 h v místnosti teplota. Membrány byly znovu promyty a poté vyvíjeny pomocí Pierce Super Signal West Dura (Thermo Fisher Scientific Inc., Rockford, IL) chemiluminiscenčně detekované detekce na Hyperfilmu (ECL plus; Amersham). Lokalizace proteinových pásů cFos, FosB a AFosB je ilustrována na obrázku Obrázek 1C. V této studii jsme se rozhodli zkoumat pouze stabilně exprimované formy AFosB (tj. 35-37 kDa), protože právě tyto formy se akumulují s chronickým užíváním drog a vyvolávají neuroplasticitu, která je základem závislosti (Nestler et al. 2001). Scion Image (Frederick, MD) byl použit pro přiřazení absolutní imunoreaktivity k pásmům a skener byl použit pro pořizování digitálních snímků z filmů. Po detekci byly membrány stripovány a znovu sondovány na P-tubulin (1: 200000, Cell Signaling, Danvers, MA). Hladiny p-tubulinu byly použity jako kontrola plnění pro normalizaci hladin proteinů souvisejících s Fos.

RT-PCR

Kvantitativní RT-PCR (qRT-PCR) byla použita k okamžitému stanovení změn FosB a FosB mRNA a 24 h po podání kokainu. Zvířata byla usmrcena rychlou dekapitací a jádro NAc, NAc shell a CPu byly izolovány, jak je popsáno (Graham et al. 2007; Bachtell et al. 2008). Jednotlivé vzorky byly okamžitě homogenizovány v RNA-STAT-60 (IsoTex Diagnostics Inc, Friendswood, TX) a zmrazeny na suchém ledu, dokud nebyla mRNA extrahována podle pokynů výrobce. Stručně, do každého vzorku byl přidán chloroform a po odstředění byla izolována vodná vrstva. Celková mRNA byla vysrážena isopropanolem v přítomnosti lineárního akrylamidu (Ambion, Austin, TX). Vzorky byly centrifugovány a extrahované pelety mRNA byly promyty 70% ethanolem a resuspendovány ve vodě DEPC. Celková mRNA byla ošetřena DNAázou (Ambion, Foster City, CA) a reverzně transkribována na cDNA náhodnými hexamery za použití Superscript III (Invitrogen, Carlsbad, CA). Sekvence primeru použité k amplifikaci FosB, ΔFosB a glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenázy (GAPDH) byly 5'-GTGAGAGATTTGCCAGGGTC-3 'a 5'-AGAGAGAAGCCGTCAGGTTG-3 ′, 5'-AGGCAGAGCTGGAGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGAG ′ A 3′-AGGTCGGTGTGAACGGATTTG-5 ′, respektive 3′-TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA-5 ′. Prahové hodnoty cyklu (cT) byly vypočteny z triplikátových reakcí s použitím druhé derivace amplifikační křivky. Hodnoty cT FosB a ΔFosB byly normalizovány na hodnoty cT GAPDH (ΔcT), protože GAPDH nebyl regulován kokainem. Přehyby záhybů byly vypočítány pomocí metody AACt, jak je popsáno dříve (manuál Applied Biosystems).

Statistická analýza

Hladiny každého proteinu byly vyjádřeny jako% změny oproti neošetřeným kontrolám pro každou oblast mozku a časový bod a studijní skupiny byly porovnány jednosměrnou analýzou rozptylu (ANOVA), přičemž hladina významnosti byla nastavena na p <0.05. Po celkových účincích následovala post-hoc srovnání pomocí testů Fishers LSD. Korelace mezi příjmem kokainu a změnami v hladinách bílkovin byly hodnoceny pomocí lineární regrese.

výsledky

Zvířata ve skupině CSA, kterým bylo umožněno dobrovolné samopodávání kokainu, vykazovala stabilní vzorce samopodávání kokainu do třetího týdne SA (dny 13-18). Během posledního týdne SA byl průměrný denní příjem kokainu u potkanů ​​CSA a jejich partnerů CY 46.9 (± 1.8) mg / kg / den (rozmezí: 37-60 mg / kg / den). V poslední testovací den krysy CSA ve skupině 0 h stažení (WD) samy podaly 44.5 (± 2.5) mg / kg kokainu (rozmezí 25.5-57.5 mg / kg) a jejich CY dostalo stejné množství kokainu. a AY partneři.

Diferenciální regulace AFOS proteinu ve striatálních podoblastech po akutním nebo chronickém kokainu

Diferenciální regulace AFOS proteinu byla nalezena ve striatálních podoblastech bezprostředně po 4 h po intravenózním podání kokainu (0 h WD). Ve skořápce NAc pouze chronický kokain vyvolal významné zvýšení ve skupinách CSA a CY (45-61%) ve srovnání s neošetřenými kontrolami (Obr. 2A, F4,60 = 4.22, p = 0.005). V jádru NAc bylo po akutní expozici ve skupině AY zjištěno významné zvýšení ΔFosB (41%) (Obr. 2B, F4,60 = 17.04, p <0.001) a po chronickém kokainu bylo zjištěno ještě větší zvýšení (89–95%). Na rozdíl od větší akumulace ΔFosB v NAc s chronickým podáváním kokainu vykazovala CPu podobné zvýšení ΔFosB (86-102%) v obou akutních i chronických skupinách kokainu (Obr. 2C, F4,78 = 19.09, p <0.001). V žádném striatálním subregionu nebyl žádný rozdíl ve zvýšení ΔFosB mezi skupinami CSA a CY, což naznačuje, že regulace souvisela s expozicí kokainu bez ohledu na volnou konzumaci kokainu. Regulace ΔFosB přetrvávala po dobu nejméně 24 hodin po chronickém kokainu v ulitě NAc (F2,32 = 5.19, p = 0.02), jádro NAc (F4,60 = 4.53, p = 0.02) a CPu (F2,34 = 12.13, p <0.001), ale po 3 týdnech se vrátila na základní úroveň. Podobné zvýšení ΔFosB bylo zjištěno, když byly skupiny kokainu srovnávány se skupinou Saline SA, kromě toho, že menší zvýšení NAc pláště zvířat AY dosáhlo významnosti ve srovnání s Saline SA, ale ne u neošetřených kontrol. Ve srovnání s neošetřenými kontrolami však u zvířat, která si sama podávala fyziologický roztok v průběhu tréninku, nedošlo k významné regulaci AFosB, což naznačuje, že regulace AFosB byla způsobena kokainem a nebyla výsledkem chirurgických nebo testovacích postupů.

Obrázek 2  

Regulace ΔFosB ihned po podání kokainu a v 24 ha 3 týdnech WD. Úrovně ΔFosB (35-37 kDa) jsou vyjádřeny jako průměrná ± SEM procentní změna oproti neošetřeným kontrolám domácího klietky (kontrola). Tkáň ze solného roztoku ...

Tolerance k regulaci FosB proteinu po chronickém kokainu

Na rozdíl od regulace ΔFosB, jediná expozice 4 h po podání IV kokainu způsobila podstatně větší zvýšení FosB proteinu ve všech striatálních podoblastech 3, ale podstatná tolerance v této odpovědi se vyvinula po chronickém podání kokainu. Ve skořápce NAc se FosB zvýšila (260%) bezprostředně po 4 h akutního podání kokainu u zvířat AY, ale tato zvýšení byla snížena (na 142-146%) po chronickém podání ve skupinách CY i CSA (Obr. 3A, F4,77 = 23.16, p <0.001). Podobné zvýšení FosB (295%) bylo zjištěno u CPu zvířat AY, které byly také sníženy (na 135-159%) po chronickém podání kokainu ve skupinách CY a CSA (Obr. 3C, F4,69 = 13.362, p <0.001). V jádru NAc vyvolalo akutní podání kokainu méně podstatné zvýšení FosB (164%) u zvířat AY ve srovnání s ostatními oblastmi mozku; tato zvýšení však byla stále větší než zvýšení po chronickém podání (109 - 112%) ve skupinách CY a CSA (Obr. 3B, F4,57 = 20.23, p <0.001). Jak bylo zjištěno u ΔFosB, regulace FosB po chronickém kokainu nebyla modulována dobrovolnou kontrolou příjmu kokainu. Na rozdíl od ΔFosB však zvýšení FosB proteinu přetrvávalo jak v NAc obalu, tak v jádru po 24 hodinách, i když reziduální zvýšení (38-52%) přetrvávala v CPu (F2,32 = 3.590, p <0.05). Hladiny FosB nebyly ovlivněny chirurgickými nebo testovacími postupy u zvířat, která si podávala solný roztok sama.

Obrázek 3  

Regulace FosB ihned po podání kokainu a v 24 ha 3 týdnech WD. Hladiny proteinů FosB (46-50 kDa) jsou vyjádřeny jako průměrná ± SEM procentní změna oproti neošetřeným kontrolám domácího klietky (viz Obrázek 2 legenda pro zkratky) ...

Útlum indukce AOSF a FosB mRNA po chronickém kokainu

Akutní expozice 4 h při intravenózním podání kokainu vyvolala podobná zvýšení (11-16 násobek) v FOSB mRNA ve skořápce NAc (F3,19 = 15.82, p <0.001), jádro NAc (F3,19 = 13.275, p <0.001 a CPu (F3,11 = 5.78, p = 0.03) ve srovnání s kontrolami Saline SA (0 h WD, Obr. 4A). Tato reakce však byla silně potlačena ve skupinách CY a CSA po chronickém podání kokainu ve skořápce NAc (3-4 fold), NAc core (4 fold) a CPu (3 fold). Navzdory skutečnosti, že akutní podávání IV kokainu vedlo k většímu zvýšení FosB proteinu ve srovnání s AFosB, akutní podávání kokainu vyvolalo relativně nižší vzestup mRNA pro FosB (4-9 krát) než pro FosB (11-16 krát) ve všech 3 striatálních podoblastech (Obr. 4B). Tato odpověď byla prakticky zrušena po chronickém kokainu ve skořápce NAc (F3,19 = 26.22, p <0.001) a CPu (F3,11 = 4.24, p <0.05), i když malé, ale významné zvýšení (dvojnásobné) zůstalo ve skupinách CY a CSA v jádru NAc (F3,19 = 11.10, p <0.001). Zvýšení vyvolané kokainem jak u ΔFosB, tak u FosB u AY zvířat nebylo zachováno po 24 hodinách WD ve srovnání se stejnou kontrolní skupinou s fyziologickým roztokem. Další analýza poměru hladin mRNA FosB k ΔFosB v časovém bodě 0 h WD ukázala, že podávání kokainu výrazně snížilo relativní množství mRNA FosB k ΔFosB v plášti NAc (F3,19 = 4.79, p = 0.02), jádro NAc (F3,19 = 4.49, p = 0.02) a CPu (F3,11 = 5.59, p = 0.03) kvůli větší tvorbě izoformy AFosB a bez ohledu na podstatnou toleranci k kokainem indukované odpovědi v obou mRNA po chronickém podání (Obr. 4C). Nebyl zjištěn žádný významný rozdíl v těchto poměrech, zda byl kokain podáván samostatně nebo byl pasivně přijímán pomocí infuze joke, a relativní poměry FosB: AFosB se vrátil k normálu ve všech třech mozkových oblastech v časovém bodě 24h WD (data neuvedena).

Obrázek 4  

Regulace mRNA pro FosB a AFosB ihned po podání kokainu a při 24 h WD. Kvantitativní RT-PCR transkriptů pro AFosB (A), FosB (B) a poměr transkriptů FosB / AFosB (C) jsou vyjádřeny jako průměr ± ...

Tolerance související s kokainem indukovaným cFos v NAc

Na rozdíl od regulace genových produktů FosB, které představovaly farmakologickou odpověď na kokain bez ohledu na pasivní nebo dobrovolné podávání, byla regulace cFos v subregionech NAc silně ovlivněna kontextem samopodávání kokainu ve srovnání se zvířaty, které kokain dostávaly pasivními jukovanými infuzemi. Expozice kokainu zvýšila hladiny bílkovin cFos (109-126%) jak ve skořápce NAc, tak v jádru s akutním nebo chronickým podáním ve skupinách AY a CY (Obr. 5A-B). Když však byly infuze kokainu podány u zvířat, které si samy podávaly, v závislosti na reakci, byla tato odpověď ve skořápce NAc snížena (na 55%) (F4,60 = 9.14, p <0.001) a nedokázalo významně zvýšit cFos v jádru NAc (F4,57 = 5.92, p <0.001). V CPu se tolerance k cFos vyvolanému kokainem vyvinula buď při chronickém pasivním nebo volném podávání kokainu (Obr. 5C) a indukce cFos u zvířat AY (164%) byla snížena (na 45-57%) ve skupinách CY i CSA (F4,67 = 13.29, p <0.001), podobný vývoji tolerance při indukci proteinu FosB ve všech 3 striatálních podoblastech. Tolerance související s posilováním na kokainem indukované cFos se tedy vyskytla konkrétně v mezolimbických oblastech striata. Ve všech 3 striatálních oblastech nebylo zjištěno zvýšení cFos u zvířat s vlastním podáváním solným roztokem a nepřetrvávalo po 24 hodinách WD.

Obrázek 5  

Regulace cFos ihned po podání kokainu a na 24 h WD. Hladiny bílkovin cFos (52-58 kDa) u kontrolních potkanů ​​(Control, Saline SA), u potkanů, kteří dostávali pasivně joke kokain akutně (AY) nebo chronicky (CY), au potkanů, kteří podstoupili ...

Vztah mezi příjmem kokainu, cFos a AFosB ve subregionech striatum

Vzhledem k tomu, že se množství vlastního užívání kokainu u jednotlivých zvířat a jejich joke partnerů lišilo, porovnali jsme množství příjmu kokainu s indukcí hladin proteinu cFos, FosB a AFosB pomocí několika lineárních regresních analýz (viz viz. Doplňková tabulka 1 pro výsledky všech potenciálních korelací). U potkanů, které dostaly akutní podání kokainu pasivními infuzemi, došlo k signifikantní korelaci mezi příjmem kokainu a hladinami cFos a tyto vztahy se lišily v dorzálních a ventrálních striatálních podoblastech. V jádru NAc byla indukce cFos bezprostředně po 4 h po akutním podání IV kokainu silně a negativně korelována s příjmem kokainu, zatímco podobný, ale nevýznamný vztah byl nalezen ve skořápce NAc (Obr. 6). Naopak indukce cFos pozitivně korelovala s příjmem kokainu v CPu. Nebyly zjištěny žádné významné korelace mezi příjmem kokainu (aktivním nebo pasivním) a hladinami proteinu FosB nebo AFosB v žádném striatálním subregionu. Byla však silná pozitivní korelace mezi hladinami cFos a ΔFosB ve skořápce NAc 24 h po kokainu, ale pouze u zvířat, která dostávala kokain prostřednictvím dobrovolného samopodání (Obr. 7), a to i přesto, že celkové hladiny cFos nebyly změněny při 24 h WD. Podobné trendy (p <0.07) pro pozitivní korelace mezi hladinami cFos a ΔFosB proteinů byly nalezeny bezprostředně po 4 hodinách samopodávání kokainu v jádru NAc a v CPu zvířat, která poprvé dostávala kokain (skupina AY).

Obrázek 6  

Regionálně specifická korelace mezi příjmem kokainu a imunoreaktivitou cFos po akutním kokainu (AY). Procento zvýšení imunoreaktivity cFos je negativně korelováno s příjmem kokainu v závěrečné relaci v jádru NAc (A) a pozitivně korelováno ...
Obrázek 7  

Významná korelace mezi cFos a ΔFosB ve skořápce NAc u samoobslužných zvířat. Procento zvýšení imunoreaktivity cFos je pozitivně korelováno s imunoreaktivitou AFosB po 24 h WD při samopodávání kokainu ...

Diskuse

V této studii jsme zkoumali účinky akutní a chronické intravenózní expozice kokainu nebo chronického sebepodávání na regulaci hladin AFosB, FosB a cFos v NAc shell, NAc core a CPu striatal subregions. Předchozí studie trvale zjistily, že ΔFosB se zvyšuje pouze po opakované expozici, a nikoli po akutním podání kokainu pomocí pasivních injekcí IP kokainu (Naděje et al. 1994, Nye et al. 1995; Chen et al. 1995). Podobně jsme zjistili, že chronická expozice IV kokainu zvýšila ΔFosB ve všech zkoumaných striatálních podoblastech, bez ohledu na to, zda byla podávána dobrovolně nebo pasivně. Hlavní rozdíl oproti předchozím studiím však spočívá v tom, že akutní podání kokainu zvýšilo hladiny FosB proteinů v jádru NAc i CPu a přiblížilo se významnosti v NAc shell (p <0.1). Jedním z možných vysvětlení tohoto rozdílu může být dávka a / nebo doba trvání expozice kokainu, protože krysy ve skupině AY dostaly více infuzí IV kokainu během jedné 4hodinové relace, což vedlo k celkovému příjmu kokainu v rozmezí od 25.5 do 57.5 ​​mg / kg napříč jednotlivá zvířata, což výrazně převyšuje dávky 10-20 mg / kg, které se obvykle používají s jednou bolusovou IP injekcí (Naděje et al. 1994; Závětří et al. 2006). Kromě toho byl kokain podáván přímější cestou IV podávání, která produkuje vyšší maximální hladiny kokainu a dopaminu v mozku, které přetrvávají po celou dobu relace, zatímco tyto účinky obvykle zmizí během hodiny po IP injekci (Bradberry, 2002). Schopnost AFOSB se akumulovat po jediné akutní expozici kokainu je tedy pravděpodobně závislá na síle a trvání kokainového stimulu použitého v této studii. V každém případě zjištění, že ΔFosB se může akumulovat po jediné expozici kokainu, naznačuje, že ΔFosB by mohl uplatňovat své účinky rychleji, než se původně myslelo, pravděpodobně vyplývající z počátečního samonávodního záchvatu.

Je zajímavé, že množství akumulace AFosB se v průběhu chronického podávání kokainu lišilo mezi dorzálními a ventrálními striatálními regiony. V jádru NAc bylo množství AFF zjištěné bezprostředně po posledním dni chronického podávání (0 h WD) více než dvojnásobné množství zjištěné po akutním podání a menší zvýšení AFOSB ve skořápce NAc dosáhlo významnosti až po chronickém podání , bez ohledu na to, zda byl kokain podáván samostatně nebo byl obdržen pasivní žíhanou infuzí. Zvýšení při chronickém podávání kokainu pravděpodobně odráží akumulaci vysoce stabilního AFOSB proteinu, protože přetrvávala alespoň 24 hodin po poslední expozici. Naproti tomu velké zvýšení množství AFosB v CPu se nelišilo s akutní nebo chronickou expozicí, což potenciálně odráží strop produkovaný akutní expozicí v této oblasti mozku. Avšak i v CPu akumulace AFOSB proteinu pravděpodobně přispěla k trvalému zvýšení hladin AFOSB po chronické expozici, protože se vyvinula podstatná tolerance ke kokainem indukované mRNA pro AFosB ve všech mozkových oblastech 3 s chronickým podáním.

Akutní podání IV kokainu také zvýšilo hladiny proteinů FosB v plné délce s větším zvýšením CPu a NAc pláště než jádra NAc. Avšak mRNA pro FosB byla indukována téměř 10krát v NAc plášti a méně než 5krát v CPu a NAc jádru. Byla vyvinuta podstatná tolerance ke schopnosti kokainu indukovat jak mRNA, tak protein pro FosB při chronickém podávání, i když zůstala nižší indukce proteinu FosB a mohla by potenciálně soutěžit s ΔFosB o vazebné partnery AP-1. Relativní poměr mRNA FosB / ΔFosB byl také snížen akutním podáním kokainu kvůli relativně větší indukci ΔFosB, což je v souladu s předchozími zprávami používajícími amfetamin (Alibhai et al. 2007). Na rozdíl od předchozích nálezů při opakovaném ošetření amfetaminem zůstalo snížení relativního poměru FosB / AFosB mRNA akutním kokainem i po chronickém podání, což odráží relativně vyšší zbytkovou indukci AFos než FosB.

Skutečnost, že hladiny ΔFosB se zvyšují i ​​po akutním kokainu za použití vzorců a trvání podávání typičtějšího pro lidské intravenózní užívání drog, má důležité důsledky pro proces závislosti. FOSB by tak mohl přispět k vazebné aktivitě AP-1 při počátečním užívání kokainu, pokud by byly samy podány odpovídající dávky. Ale FosB by však konkuroval jak FosB, tak cFos o vazebnou aktivitu AP-1, což by vedlo ke expresi downstream genu a neuroplasticity, která je odlišná od chronického podávání, když je FosB zvýšena s podstatně sníženým cFos a FosB. Proto může AFB mít větší účinky po chronickém podání kokainu, a to díky větší akumulaci ve ventrálním striatu a snížené soutěži o vazebné partnery AP-1 v dorzálním i ventrálním striatu. Vzhledem k tomu, že striatálně specifická nadměrná exprese AFosB zvyšuje motivaci ke kokainu (Colby et al. 2003), taková rychlá akumulace AFosB s počáteční expozicí kokainu by mohla udržet užívání kokainu ve velmi raných fázích procesu závislosti. Kromě toho by taková prominentní a rozšířená exprese AFosB v celém striatu s akutní expozicí změnila vazebnou aktivitu AP-1 způsobem, který by mohl usnadnit tvorbu kompulzivních návyků včasným zapojením dorzálních striatálních obvodů (Belin a Everitt, 2008).

S ohledem na stabilitu izoforem ΔFosB zůstaly hladiny ΔFosB výrazně zvýšené 24 hodiny po poslední relaci podávání kokainu, což je v souladu s předchozími studiemi používajícími chronické intravenózní podávání kokainu (Pich et al. 1997; Perotti et al. 2008). Jiné studie využívající pasivní experimenty s injekcemi IP kokainu zjistily, že akumulace ΔFosB může přetrvávat po 1-2 týdnech od vysazení (Naděje et al. 1994; Brenhouse a Stellar, 2006; Závětří et al. 2006), i když jsme 3 týdny po ukončení užívání kokainu nenašli žádné důkazy o těchto změnách. Společně tyto studie naznačují, že akumulace ΔFosB může přetrvávat po relativně krátká období vysazení (<3 týdny) a přímo přispívat k pokračujícímu užívání kokainu, ale nemusí přímo přispívat k větší náchylnosti k relapsu při prodlouženém vysazení. Imunoreaktivita ΔFosB však byla detekována v striatálních neuronech obsahujících receptor D1 po 30 dnech vysazení z opakovaného kokainu u myší (Závětří et al. 2006). Takový odběr specifický pro buňku může být citlivější na zbytkovou akumulaci AFosB než analýza celé tkáně použitá v této studii, nebo možná změny AFosB pouze přetrvávají déle u myší než u potkanů. Je také možné, že AFosB indukuje kaskádu transkripčních událostí vedoucích k dlouhodobým morfologickým změnám, jako je tvorba dendritické páteře ve striatálních neuronech obsahujících D1 (Závětří et al. 2006; Bludiště et al. 2010). V tomto ohledu je několik ΔFosB cílů včetně Cdk5 a NFkB zvýšeno po chronickém kokainu a tyto faktory mohou modifikovat obvody nucleus accumbens prostřednictvím změn v neuronální struktuře a / nebo funkci (Ang et al. 2001; Benavides a Bibb, 2004; Nestler, 2008). Je tedy možné, že trvalá akumulace ΔFosB během stažení není nutná pro její dlouhodobý dopad na budoucí chování při užívání drog nebo vyhledávání, ale místo toho může představovat „molekulární přepínač“, který spouští více buněčných procesů, které usnadňují přechod k více závislé biologické stavy (Nestler et al. 2001).

Tv této studii bylo zjištěno, že akumulace ΔFosB zprostředkovaná kokainem není ovlivněna dobrovolnou kontrolou příjmu kokainu u zvířat, která podávají samy, v souladu s předchozími studiemi používajícími imunohistochemické postupy a vícenásobné zneužívání drog (Perotti et al. 2008; Pich et al. 1997). To naznačuje, že zvýšení AACos a FosB vyvolané kokainem je pravděpodobně spojeno s farmakologickou odpovědí na kokain nebo jinými downstream událostmi signalizací monoaminergních receptorů. Na rozdíl od ΔFosB jsme zjistili, že vývoj tolerance na kokainem indukovaný cFos byl podstatně ovlivněn volební kontrolou nad příjmem kokainu v NAc, ale nikoli v CPu. Tolerance vůči kokainem indukovaným cFos v NAc se tedy neobjevila u zvířat, která kokain kokainem pasivně podávají chronickou žlučovou infuzí ve srovnání s akutní žlučovou infuzí.. Tato zjištění se výrazně liší od četných zpráv o toleranci vůči psychostimulačně indukovaným cFos v NAc, když jsou drogy podávány pasivní IP injekcí (Naděje et al. 1994; Nye et al. 1995; Chen et al. 1995, 1997; Alibhai et al. 2007). Vzhledem k tomu, že tolerance vůči cFos u zvířat, které si samy podávají kokain, paralelizuje několik studií s opakovanými injekcemi IP, může být nedostatek tolerance při chronickém intravenózním jhacím podání spojen se stresem spojeným s vícenásobnými a nepředvídatelnými jakovanými injekcemi kokainu (Střelci 1997). Ztráta tolerance ve ventrálním spíše než na dorzálním striatu by byla v souladu se selektivním účinkem na limbické obvody zapojené do motivačních a emočních reakcí. Kromě toho, zatímco tolerance u indukce cFos nastala u zvířat, které si samy podaly kokain, zůstalo podstatné increase50% zvýšení proteinu cFos ve skořápce NAc bezprostředně po jejich posledním samo-podáváním relace a trend (p <0.1) pro zvýšení cFos také došlo v jádru. Důvody pro tento nesoulad pravděpodobně odrážejí rozdíly mezi injekcí IP a více intravenózními infuzemi po dobu 4 hodin, jak je uvedeno výše. Reziduální indukce cFos v NAc po chronickém podávání kokainu je novým objevem, který si vynucuje přehodnocení jeho role v procesu závislosti, přičemž po chronické expozici by všechny do určité míry koexistovaly všechny komplexy AP-1 obsahující cFos, ΔFosB a FosB. .

Vzhledem k nedávným důkazům, že cFos je přímo down-regulován akumulací ΔFosB v dorzálním striatu (Renthal et al. 2008), je zajímavé, že kokainem indukovaný cFos v CPu byl paralelizován zvýšením AFosB s akutní expozicí kokainu. Jednou z možností je, že akumulace AFOSB při akutním podání nastává příliš pozdě v relaci 4 h, aby ovlivnila indukci cFos, zatímco její přítomnost 24 h po kokainu u chronicky ošetřených zvířat brání indukci cFos s následnou expozicí kokainu. Tato myšlenka je v souladu s trendem (p = 0.067) mírné pozitivní korelace mezi hladinami cFos a AFosB v CPu s akutním podáním kokainu (0 h WD). Tato představa je také v souladu se silnou pozitivní korelací mezi indukcí cFos a příjmem kokainu v CPu u akutních joke zvířat. Tato zjištění naznačují, že podobně jako AFosB, cFos odpověď může odrážet dávku kokainu, která byla přijata. Avšak v NAc nemůže větší akumulace AFosB s chronickým podáním jakovaného kokainu odpovídat za nedostatek tolerance v odpovědi cFos u těchto zvířat. Kromě toho, ačkoliv tolerance u indukce cFos byla zřejmá u zvířat, které si samy podávaly, silná pozitivní korelace mezi reziduálními hladinami cFos a AFosB ve skořápce NAc po stažení 24 h nepodporuje negativní interakci mezi cFos a AFos ve ventrálním striatu. Dalším rozdílem od údajů CPu je to, že cFos v jádru NAc byl negativně spíše než pozitivně korelován s příjmem kokainu bezprostředně po akutním podání kokainu, což by mohlo odrážet tachyfylaxi v rámci relace, ke které dochází při vyšší expozici dávky ve ventrálním striatu.

Celkově zjištění z této studie naznačují, že cFos, FosB a AFosB podléhají po akutním a chronickém intravenózním podání kokainu odlišným regionálním vzorcům exprese. Tyto vzorce exprese jsou jednoznačně závislé jak na délce, tak na množství expozice léčivu, a tolerance vůči kokainem indukovanému cFos je vysoce závislá na dobrovolném samopodání kokainu. Výsledky také ukazují, že AFosB se může akumulovat jak při akutním, tak chronickém podávání kokainu intravenózní injekcí, což podporuje myšlenku, že akumulace AFosB může být důležitá v časných procesech, které podporují zvýšené chování při hledání kokainu a přispívají k rozvoji závislosti na kokainu. Nakonec bude důležité pochopit, jak AFosB může nepřímo ovlivnit přetrvávající touhu po abstinenčním léku prostřednictvím relativně krátkodobých vlivů na expresi genu během užívání kokainu a časných ochranných období. Úsilí identifikovat různé downstream cíle a jejich účinky na neuronální morfologii a / nebo funkci nakonec objasní roli AFosB a dalších antigenů souvisejících s Fos při expresi návykového chování.

Doplňkový materiál

Supp Table S1

Doplňková tabulka 1. Celkové výsledky korelace pro lineární regresní analýzy. Levé tři panely obsahují korelace mezi příjmem kokainu a hladinami cFos (horní panel), FosB (střední panel) nebo ΔFosB (spodní panel). Pravé tři panely obsahují korelace mezi cFos a ΔFosB (horní panel), cFos a FosB (střední panel) a FosB a ΔFosB (spodní panel). Relativní oblasti mozku a časové body WD jsou uvedeny pro každou jednotlivou analýzu spolu s odpovídajícími hodnotami r- a p. * p <0.05, T0.1> p> 0.05.

Poděkování

Autoři prohlašují, že v souvislosti s touto prací nedošlo ke střetu zájmů. Tuto práci podpořili NIH granty DA 10460 a DA 08227 a Wesley Gilliland Professorship in Biomedical Research.

Použité zkratky

  • Procesor
  • kaudate-putamen
  • NAc
  • nucleus accumbens
  • AY
  • akutní jho
  • CY
  • chronické jho
  • CSA
  • vlastní užívání kokainu
  • WD
  • odnětí
  • IV
  • intravenózní
  • IP
  • intraperitoneální.

Reference

  • Alibhai IN, Green TA, Potashkin JA, Nestler EJ. Regulace fosB a ΔfosB Exprese mRNA: studie in vivo a in vitro. Brain Res. 2007; 1143: 22 – 33. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E, Nestler EJ. Indukce jaderného faktoru -KB v nucleus accumbens chronickým podáváním kokainu. J Neurochem. 2001; 79: 221 – 224. [PubMed]
  • Bachtell RK, Choi KH, Simmons DL, Falcon E, Monteggia LM, Neve LN, Self DW. Role exprese GluR1 v jádru accumbens neurons v senzibilizaci na kokain a chování při hledání kokainu. Eur J Neurosci. 2008; 27: 2229 – 2240. [PubMed]
  • Belin D, Everitt BJ. Návyky při hledání kokainu závisí na dopaminově závislé sériové konektivitě spojující ventrál s dorzálním striatem. Neuron. 2008; 57: 432 – 441. [PubMed]
  • Benavides DR, Bibb JA. Role Cdk5 ve zneužívání drog a plasticitě. Ann NY Acad Sci USA. 2004; 1025: 335 – 344. [PubMed]
  • Ben-Shahar O, Ahmed SH, Koob GF, Ettenberg A. Přechod z kontrolovaného na nutkavé užívání drog je spojen se ztrátou senzibilizace. Brain Res. 2004; 995: 46 – 54. [PubMed]
  • Bradberry CW. Dynamika extracelulárního dopaminu při akutním a chronickém působení kokainu. Neuro vědec. 2002; 8: 315 – 322. [PubMed]
  • Brenhouse HC, Stellar JR. c-Fos a AFosB se odlišně mění v odlišných podoblastech skořápky nucleus accumbens u potkanů ​​senzibilizovaných na kokain. Behav Neurosci. 2006; 137: 773 – 780. [PubMed]
  • Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Regulace ΔFosB a FosB podobných proteinů elektrokonvulzivními záchvaty a kokainem. Mol Pharmacol. 1995; 48: 880 – 889. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ. Chronické antigeny související s Fos: stabilní varianty AFosB indukované v mozku chronickou léčbou. J Neurosci. 1997; 17: 4933 – 4941. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Nadměrná exprese AFosB specifická pro striatální buněčné typy zvyšuje motivaci ke kokainu. J Neurosci. 2003; 23: 2488 – 2493. [PubMed]
  • Edwards S, Whisler KN, Fuller DC, Orsulak PJ, Self DW. Závislosti související se změnami v D1 a D2 reakce na chování dopaminového receptoru po chronickém podání kokainu. Neuropsychopharm. 2007a; 32: 354 – 366. [PubMed]
  • Edwards S, Graham DL, Bachtell RK, Self DW. Regionálně specifická tolerance vůči kokainem regulované cAMP-dependentní fosforylaci proteinu po chronickém samopodání. Eur J Neurosci. 2007b; 25: 2201 – 2213. [PubMed]
  • Goeders NE. Neuroendokrinní role při posílení kokainu. Psychoneuroendocrinol. 1997; 22: 237 – 259. [PubMed]
  • Graybiel AM, Moratalla R, Robertson HA. Amfetamin a kokain indukují drogově specifickou aktivaci genu c-fos v kompartmentech striosomální matrice a limbických subdivizích striata. Proc Natl Acad Sci USA. 1990; 87: 6912 – 6916. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Graham DL, Edwards S, Bachtell RK, DiLeone RJ, Rios M, Self DW. Dynamická aktivita BDNF v jádru accumbens s užíváním kokainu zvyšuje vlastní podání a relaps. Nat Neurosci. 2007; 10: 1029 – 1037. [PubMed]
  • Naděje B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Regulace okamžité rané genové exprese a vazby AP-1 v jádru krysy podle chronického kokainu. Proc Natl Acad Sci USA. 1992; 89: 5764 – 5768. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Naděje BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Indukce dlouhotrvajícího AP-1 komplexu složeného ze změněných proteinů typu Fos v mozku chronickým kokainem a dalšími chronickými léčebnými postupy. Neuron. 1994; 13: 1235-1244. [PubMed]
  • Doufám, BT. Kokain a komplex transkripčního faktoru AP-1. Ann NY Acad Sci. 1998; 844: 1 – 6. [PubMed]
  • Jorissen HJMM, Ulery PG, Henry L, Gourneni S, Nestler EJ, Rudenko G. Dimerizace a DNA-vazebné vlastnosti transkripčního faktoru FosB. Biochemie. 2007; 46: 8360 – 8372. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, et al. Exprese transkripčního faktoru FosB v mozku řídí citlivost na kokain. Příroda. 1999; 401: 272 – 276. [PubMed]
  • Kufahl PR, Zavala AR, Singh A, Thiel KJ, Dickey ED, Joyce JN, Neisewander JL. Exprese c-Fos spojená s obnovením chování při hledání kokainu podmíněnými narážkami závislými na odpovědi. Synapse. 2009; 63: 823 – 835. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Lee K, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Kokainem indukovaná tvorba dendritických páteř u středně ostrých neuronů obsahujících dopaminový receptor D1 a D2 v jádrech accumbens. Proc Natl Acad Sci USA. 2006; 103: 3399 – 3404. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Maze I, Covington HE, III, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, mechanik M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren YH, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Základní role histon-methyltransferázy G9a v plasticitě vyvolané kokainem. Věda. 2010; 327: 213 – 216. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. FOSB: molekulární přepínač pro dlouhodobou adaptaci v mozku. Mol Brain Res. 2004; 132: 146 – 154. [PubMed]
  • Neisewander JL, Baker DA, Fuchs RA, Tran-Nguyen LTL, Palmer A, Marshall JF. Exprese proteinů Fos a chování při hledání kokainu u potkanů ​​po expozici prostředí pro vlastní podání kokainu. J Neurosci. 2000; 20: 798 – 805. [PubMed]
  • Nestler EJ, Barrot M, Self DW. ΔFosB: Trvalý molekulární přechod pro závislost. Proc Natl Acad Sci USA. 2001; 98: 11042 – 11046. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Nestler EJ. Transkripční mechanismy závislosti: role ΔFosB. Phil Trans R Soc B. 2008; 363: 3245 – 3255. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologické studie regulace chronické indukce antigenu FOS souvisejícího s kokainem v striatu a nucleus accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
  • Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukce AFosB v mozkových strukturách souvisejících s odměnami po chronickém stresu. J Neurosci. 2004; 24: 10594 – 10602. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, et al. Odlišné vzorce indukce AFosB v mozku drogami zneužívání. Synapse. 2008; 62: 358 – 369. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson GC. Mozek krysy ve stereotaxických souřadnicích. 4th. New York: Academic Press; 1998.
  • Pich EM, Pagliusi SR, Tessari M, Talabot-Ayer D, van Huijsduijnen RH, Chiamulera C. Společné neurální substráty pro návykové vlastnosti nikotinu a kokainu. Věda. 1997; 275: 83 – 86. [PubMed]
  • Renthal W, Carle TL, Maze I, et al. FosB zprostředkovává epigenetickou desenzibilizaci c-fos gen po chronické expozici amfetaminu. J Neurosci. 2008; 28: 7344 – 7349. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Wallace DL, Vialou V, Rios L, et al. Vliv DeltaFosB v jádru accumbens na přirozené chování související s odměnou. 2008; 28: 10272 – 10277. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Young ST, Porrino LJ, Iadarola MJ. Kokain indukuje striatální c-Fos imunoreaktivní proteiny prostřednictvím dopaminergních D1 receptory. Proc Natl Acad Sci USA. 1991; 88: 1291 – 1295. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos usnadňuje získávání a zánik trvalých změn vyvolaných kokainem. J Neurosci. 2006; 26: 13287-13296. [PubMed]