Opioidní systém v mediální prefrontální kůře zprostředkovává binge-like jídlo (2013)

Addict Biol. 2013 Jan 24. dva: 10.1111 / adb.12033.

Blasio A, Steardo L, Sabino V, Cottone P.

Zdroj

Laboratoř Návykové Poruchy, oddělení farmakologie a psychiatrie, Lékařská fakulta v Bostonu, Boston, MA, USA.

Abstraktní

Porucha příjmu potravy je příčinou závislostpodobné poruchám charakterizovaným nadměrným jídlo spotřebu v diskrétních časových obdobích.

Tato studie byla zaměřena na porozumění úloze opioidního systému v mediální prefrontální kůře (mPFC) v konzumačních a motivačních aspektech stravovacích návyků. Za tímto účelem jsme vycvičili samci potkanů, aby získali buď sladkou, vysoce chutnou stravu (palatable krysy) nebo stravu chow (chow krysy) za 1 hodiny / den.

Pak jsmehodnotili účinky antagonisty opioidního receptoru, naltrexonu, který byl podáván buď systémově nebo specificky specificky do jádra accumbens (NAcc) nebo mPFC pro pevný poměr 1 (FR1) a progresivní poměrový poměr výztuže pro jídlo.

Nakonec jsme zhodnotili expresi genů proopiomelanokortin (POMC), pro-dynorfin (PDyn) a pro-enkefalin (PEnk), kódujících opioidní peptidy v NAcc a mPFC v obou skupinách.

Chutné krysy rychle vyčerpaly svůj příjem čtyřikrát. Naltrexon, pokud je podáván systémově a do NAcc, snížil odpověď FR1 jídlo a motivace k jídlu v progresivním poměru u krys Chow i Palatable; naopak, když byly podávány do mPFC, účinky byly vysoce selektivní pro potkany, které jedly binge. Dále jsme zjistili dvojnásobné zvýšení POMC a ∼50% snížení exprese PDyn genu v mPFC Palatable potkanů ​​ve srovnání s kontrolními potkany; u NAcc však nebyly pozorovány žádné změny.

Naše data naznačují, že neuroadaptace opioidního systému v mPFC se objevují po intermitentním přístupu k vysoce chutným jídlo, které mohou být zodpovědné za vývoj stravy, která se podobá záchvatům.

Úvod

Porucha příjmu potravy je charakterizována nadměrnou a nekontrolovatelnou konzumací potravin vysoce chutných potravin během krátké doby (; ; ). Subjekty, které zažívají nadýchání, jej popisují jako ztrátu kontroly při nadměrné konzumaci jídla, což vede k nepříjemné plnosti a intenzivním pocitům znechucení a rozpaků (). Porucha příjmu potravy se často vyskytuje v komorbiditě s několika chorobami, jako je obezita, cukrovka, kardiovaskulární onemocnění a další psychiatrické poruchy (; ).

Při pokusech o izolaci faktorů, které přispívají k rozvoji příšerného stravování, bylo vynaloženo značné úsilí (; ). Široce přijímaná hypotéza o etiologii nadměrného přejídání je založena na kvalitativní alteraci chutnosti jídla. Ve skutečnosti může omezení na „chutná“ jídla s nízkou chutí, obvykle řízená vnímanými kulturními normami pro hubnutí nebo zdraví, vyvolat touhu po chutnějších chutných potravinách a podporovat přejídání. Systematické střídání chutnosti má proto za následek sebezáchvatelný začarovaný kruh spotřeby vzoru binge / restrikce (; ), což vyvolává otázku, zda poruchu příjmu potravy lze považovat za poruchu závislou na návykových látkách (; ; ; ).

V současné době nejsou k dispozici žádné účinné farmakoterapie poruch příjmu potravy, i když byly navrženy různé experimentální cíle (; ). Opioidní systém byl považován za jeden z hlavních cílů léčby poruch příjmu potravy od 1970ů, a to díky včasným pozorováním, že opioidní antagonisté, jako je naltrexon a naloxon, byli schopni snížit příjem potravy (). Pozdější důkazy ukázaly, že opioidní systém byl zapojen do obousměrné modulace chování při krmení, vzhledem k schopnosti morfinu zvýšit chuť k jídlu u potkanů ​​bez výživy a bez deprivace (). Od těchto počátečních pozorování byla objasněna významná role opioidního systému při zprostředkování potravinové chuti a rozsáhlé důkazy naznačují, že jádro accumbens (NAcc) představuje klíčovou oblast zprostředkující tyto účinky (). Novější studie naznačují, že opioidní modulace hedonické konzumace potravin v NAcc je součástí složitější sítě, která zahrnuje několik mozkových struktur, včetně prefrontokortikálních oblastí ().

Přestože rozsáhlá řada výzkumů zdůrazňuje primární roli opioidního systému v modulaci chutnosti a hedonického krmení, specifická oblast mozku, ve které opioidní systém zprostředkovává stravování podobné závislosti, je stále neznámá.

Cílem této studie proto bylo zjistit, zda opioidní antagonista naltrexon, podávaný systémově, byl schopen potlačit spotřebu a motivaci získat vysoce chutnou stravu v modelu stravování podobnému potkanům. K tomuto účelu jsme použili nově vyvinutý operativní model, kde krysy samy podávají vysoce chutnou sladkou stravu za omezených přístupových podmínek (1 h / den), napodobující konzumační a motivační rysy pozorované při poruchách příjmu potravy (). Poté jsme zjistili, která oblast mozku je zodpovědná za systémové účinky naltrexonu při potlačování konzumace a motivace k získání sladké, vysoce chutné stravy. Za tímto účelem jsme mikroinfikovali místo konkrétně opioidního antagonistu do NAcc shellu a mPFC. Nakonec jsme vyhodnotili expresi genů preOpioMelanoCortin (POMC), Pro-Dynorphin (PDyn) a Pro-Enkephalin (PEnk), které kódují opioidní peptidy v NAcc a mPFC po anamnéze binge-like stravování.

Materiál a metody

Předměty

Samci krys Wistar (n= 70), 41 – 47 dny staré po příjezdu (Charles River, Wilmington, MA) byly umístěny v drátěných, standardních plastových klecích v 12: 12 h zpětném světelném cyklu (světla vypnuta v 10: 00 h), v vivárium s vlhkostí (60%) a teplotou (22 ° C). Po příjezdu měly krysy přístup ke krmivu na bázi kukuřice (Harlan Teklad LM-485 Dieta 7012 (65% (kcal)) uhlohydrát, 13% tuk, 21% protein, 341 cal / 100 g); Harlan, Indianapolis, IN) a voda podle libosti po celou dobu. Postupy dodržované u Národních institutů zdraví Průvodce pro péči a používání laboratorních zvířat (Publikační číslo NIH 85-23, revidované 1996) a Principy péče o laboratorní zvířata (http://www.nap.edu/readingroom/bookslabrats) a byly schváleny Výborem pro ústavní péči a používání zvířat na Bostonské univerzitě (IACUC). Experimentální postupy nezahrnovaly omezení / deprivaci potravin nebo vody, pokud není uvedeno jinak.

Drogy

Naltrexon, (5a) -17- (cyklopropylmethyl) -4,5-epoxy-3,14-dihydromorfinan-6-on hydrochlorid, byl zakoupen od Abcam (Cambridge, MA). Naltrexon byl čerstvě rozpuštěn v isotonickém filtrovaném solném roztoku (0.9%) v den testu. Naltrexon byl podáván subkutánně (0, 0.03, 0.1 a 0.3 mg / kg, 1 ml / kg) 30 minut před relací a místo - konkrétně do NAcc shellu a mPFC (0, 5 a 25 ug / strana, bilaterálně) těsně před relace. Dávky a doby předběžné léčby vycházely z literatury (; ; ).

Operační procedura podobná stravě

Subjekty byly vyškoleny, aby si samy podávaly jídlo a vodu v jednotlivých operačních zkušebních komorách podrobně popsaných v (; ). Další podrobnosti viz Doplňkové materiály a metody.

Trénink

Operativní model přejídání podobného jídlu byl prováděn, jak bylo popsáno výše (). Krysy (n= 70) bylo krmeno standardní stravou Harlan Teklad v jejich domácí kleci. Po období aklimatizace bylo jídlo nahrazeno dietou na bázi AIN-76A, dále označovanou jako „Chow A / I“ (dieta 5TUM formulovaná jako extrudované pelety 4 – 5 g, 65.5% (kcal) uhlohydrát, 10.4% tuk , 24.1% protein, 330 cal / 100 g; TestDiet, Richmond, IN). Krysy byly vyškoleny, aby získaly operativní samopodávání potravy (45-mg přesné potravinové pelety (Chow A / I)) a vody (100 µl) při pevném poměru 1 harmonogramu vyztužení (). Dispenser dodal 45-mg precizní peletu, která je totožná s domácí klecí ~ extrudovanou dietou 5g, aby se zajistilo, že Chow příjem potravy u potkanů ​​byl řízen pouze homeostatickými potřebami (; ). Denní relace byly prováděny před začátkem temného cyklu a jejich trvání trvalo 1 h.

Testování

Po stabilních základních výkonech v relacích samo-administrace 1 h byla zahájena testovací procedura. Krysy, přizpůsobené tělesné hmotnosti, dennímu příjmu potravy, efektivitě krmení, jakož i vodě a potravinám, které reagovaly při samopodávání, byly přiřazeny buď „Chow„Kontrolní skupina, která v operativních boxech obdržela stejné pelety 45-mg chow nabízené ve výcvikové fázi, nebo“Chutný”Skupina, která místo toho obdržela výživně kompletní čokoládu s vysokým obsahem sacharózy (50% kcal) AIN-76A, srovnatelnou ve složení makronutrientů a hustotou energie jako strava pro chow (čokoláda s příchutí 5TUL: 66.7% [kcal ] uhlohydrát, 12.7% tuk, 20.6% protein, metabolizovatelná energie 344 cal / 100g; formulovaný jako 45 mg přesné potravinové pelety; TestDiet, Richmond, IN). Tato strava s příchutí čokolády je silně preferována všemi krysy (, ). Sekce se konaly denně.

Progresivní poměrový poměr zesílení pro potraviny

Po stabilizaci příjmu v procesu podobného přejídání se krysy (n= 53) byly vyškoleny v progresivním poměru pro potravinářské vyztužovače (pelety 45-mg pro přesné krmení pro Chow skupina a 45-mg čokoláda s příchutí čokolády s vysokou přesností pro sacharózu Chutný skupina). Progresivní poměrový poměr zesílení pro jídlo byl proveden tak, jak bylo popsáno dříve (; ; ). Další podrobnosti viz Doplňkové materiály a metody. Na konci každé relace byly předměty vráceny do jejich domácí klece, kde byl Chow A / I vždy k dispozici podle libosti; sezení se konala denně.

Intrakraniální operace a postup mikroinfúze

Intrakraniální operace

Po stabilizaci příjmu v operativních sezeních byly potkanům implantovány intrakraniální kanyly. Stereotaxické operace byly provedeny, jak bylo popsáno výše (; ; ). Další podrobnosti viz Doplňkové materiály a metody. Souřadnice kanyly použité pro plášť NAcc a mPFC byly A / P +1.06 mm, M / L ± 0.75 mm, D / V - 6.0 mm a A / P +3.2 mm, M / L ± 0.65 mm, D / V - 3.5 mm. Interaurální lišta byla nastavena na plochou lebku (hřbetní / břišní: bregma = lambda); souřadnice byly založeny na atlasu Paxinos & Watson (). Patinovaný stylet z nerezové oceli (Plastics One, Inc., Roanoke, VA, USA) udržoval průchodnost. Po operaci se krysy nechaly zotavit z chirurgického zákroku 1 týden před zahájením experimentálního zákroku.

Postup mikroinfúze

Pro mikroinfuzi naltrexonu byl falešný mandrén odstraněn z vodicí kanyly a nahrazen injektorem z nerezové oceli vyčnívajícím 1.0 mm pro pláště NAcc a 1.5 mm pro mPFC za špičku vodicí kanyly; injektor byl připojen přes trubici PE 20 k mikroskopické stříkačce Hamilton poháněné mikroinfuzní pumpou (Kd Scientifics / Biological Instruments, Holliston, MA, USA). Mikrosinfekce dodávaly objem 0.5 µl během 2 min; injektory byly ponechány na místě další minutu, aby se minimalizoval zpětný tok. Ošetření byla podávána v plné latinské čtvercové podobě, přičemž testovací dny bez zásahu 1 – 3 zasahovaly do testovacích dnů bez léčby, kdy se příjem potravy vrátil na základní úroveň. Krysy dostaly 3 dny aklimatizace na denní simulované injekce, před začátkem lékové léčby. Umístění kanyly (Obr. 4) byla ověřena na závěr všech testů mikroinfuzí Indického inkoustu (0.5 ul během 2 minut). Plátky 40 um byly shromážděny pomocí kryostatu a umístění byla ověřena pod mikroskopem. Z potkanů ​​68 použitých pro mikroinfúzní studie byl 3 vyloučen z procedurálních důvodů, mezi něž patřila ztráta nebo uzavření kanyly nebo neschopnost udržet stabilní výkon. U 14 zbývajících krys 65 byla poloha kanyly mimo cílové místo.

Obrázek 4 

Kreslení mozkových plátků koronálních potkanů. Tečky představují místa vpichu v (A) NAcc shell a (B) mPFC zahrnutý do analýzy dat.

Kvantitativní PCR v reálném čase

Jedna skupina Chow a Chutný krysy (n= 15) byl použit pro kvantifikaci mRNA peptidů POMC, PDyn a PEnk. Zvířata byla usmrcena 24 h po posledním denním binge-like jídle. Děrovačky středního prefrontálního kortexu zahrnují jak předimbickou, tak infralimbickou oblast. Děrovačky nucleus accumbens zahrnují jak oblast skořepiny, tak jádro. Postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno dříve (). Podrobnosti viz Doplňkové materiály a metody.

Statistická analýza

Účinky naltrexonu na příjem potravy, příjem vody a bod zlomu byly analyzovány pomocí dvousměrných ANOVA se smíšeným designem, s Dietní historií jako faktorem mezi jedinci a Léčbou jako faktorem uvnitř subjektu, následovaným opakovanými opatřeními jednocestnými ANOVA. Účinky Dietní historie na hladiny mRNA byly analyzovány pomocí nespárovaných Studentových t-testy. Proměnné, které nevyhověly testu normality, byly analyzovány jako hodnocené (). Použitými statistickými balíčky byly Instat 3.0 (GraphPad, San Diego, CA) a Systat 11.0 (SPSS, Chicago, IL).

výsledky

Účinky systémového podávání opioidního antagonisty naltrexonu na operativní stravování podobné binge

Systémové podávání naltrexonu v závislosti na dávce snížilo FR1 reagující na jídlo u obou Chow a Chutný skupiny (Obrázek 1A; Léčba: F(3,54) = 25.00, p<0.001; Historie stravy X Léčba: F(3,54) = 0.64, Ns) Jednosměrné ANOVA potvrdily účinek léčby drogami u obou Chow (Léčba: F(3,27) = 7.62, p<0.0008) a Chutný krysy (Ošetření: F(3,27) = 16.78 p<0.0001). Post hoc analýza odhalila, že zatímco dávka 0.03 mg / kg byla neúčinná, jak dávky 0.1, tak 0.3 mg / kg významně snížily samopodávání potravin u obou skupin ve srovnání s vehikulem. Ošetření navíc ovlivnilo příjem vody (Tabulka 1; Léčba: F(3,54) = 8.46, p<0.0001; Historie stravy X Léčba: F(3,54) = 0.76, Ns). Jednosměrná ANOVA potvrdila účinek léčby léčbou u obou Chow (Léčba: F(3,27) = 4.97, p<0.007) a Chutný (Léčba: F(3,27) = 3.76, p<0.022) krysy. Post hoc analýza odhalila významné snížení příjmu vody po podání dávky 0.1 a 0.3 mg / kg v Chow krysy a dávka 0.3 mg / kg v kg Chutný krysy, ve srovnání se stavem vozidla.

Obrázek 1 

Účinky systémové léčby naltrexonem (0, 0.03, 0.1, 0.3 mg / kg, subkutánně) na (A) vlastní podávání potravin (n= 20) a (B) bod zlomu v progresivním poměru poměru výztuže (n= 19) u samců potkanů ​​Wistar. Panely představují M± SEM. ...
Tabulka 1 

Účinky aplikace naltrexonu na příjem vody

Účinky systémového podávání opioidního antagonisty naltrexonu na progresivní poměrový poměr posílení potravy

Naltrexon podávaný systémově, v závislosti na dávce, snížil bod zlomu u obou Chow a Chutný krysy (Obrázek 1B; Léčba: F(3,51) = 41.31, p<0.0001; Historie stravy X Léčba: F(3,51) = 1.96, Ns). Po významném hlavním účinku léčby (Chow skupina; Léčba: F(3,27) = 5.99, p<0.003; Chutný skupina; Léčba: F(3,24) = 6.87, p<0.002), post hoc analýza odhalila, že dávka 0.3 mg / kg významně snížila hraniční hodnotu v obou skupinách.

Účinky naltrexonové mikroinfúze do skořápky NAcc na operativní stravování podobné binge

Mikrofúze naltrexonu do NAcc v závislosti na dávce se snížila a reagovala na jídlo v obou Chow a Chutný skupiny (Obrázek 2A; Léčba: F(2,32) = 10.76, p<0.0001; Historie stravy X Léčba: F(2,32) = 4.36, p<0.02). Jednosměrné ANOVA odhalily účinek lékové léčby u obou Chow (Léčba: F(2,18) = 5.72, p<0.01) a Chutný krysy (Ošetření: F(2,18) = 5.344, p<0.02). Kromě toho post hoc analýza odhalila významné snížení samopodávání potravin po léčbě nejvyšší dávkou (25 ug) v obou případech Chow a Chutný skupiny. Spotřeba vody nebyla léčbou drogami ovlivněna (Tabulka 1; Léčba: F(2,32) = 2.48, Ns; Léčba historie stravy X: F(2,32) = 0.65, Ns).

Obrázek 2 

Vliv mikroinfúze s naltrexonem (0, 5, 25 µg / side) v NAcc shell na (A) vlastní podávání potravin (n= 18) a (B) bod zlomu v progresivním poměru poměru výztuže (n= 17) u samců potkanů ​​Wistar. Panel představuje M± SEM. Symboly ...

Účinky naltrexonové mikroinfúze do skořápky NAcc na progresivní poměrový diagram vyztužení pro potraviny

Když byl naltrexon místně specificky mikroinfuzován do NAcc, došlo k významnému celkovému snížení bodu zlomu u obou Chow a Chutný skupina byla pozorována (Obrázek 2B; Léčba: F(2,30) = 16.72, p<0.0001; Historie stravy X Léčba: F(2,30) = 5.22, p<0.01). Tento výsledek byl potvrzen jednosměrným provedením ANOVA u každé ze dvou skupin (Chow skupina; Léčba: F(2,16) = 6.11, p<0.01; Chutný skupina; Léčba: F(2,14) = 10.62, p<0.001). Post-hoc analýza odhalila významné snížení bodu zlomu u obou skupin, když byly dávky 5 a 25 ug mikroinfikovány. Snížení bodu zlomu bylo mezi nimi srovnatelné Chow a Chutný krysy (50.8% a 53.2%, ve srovnání s podmínkami vehikula).

Účinky naltrexonové mikroinfúze do mPFC na operativní stravování podobné binge

Naltrexon specificky mikroinfikovaný do mPFC odlišně ovlivňoval potraviny reagující na Chow a Chutný krysy, jak bylo odhaleno významnou interakcí (Obrázek 3A; Léčba: F(2,30) = 4.77, p<0.02; Historie stravy X Léčba: F(2,30) = 5.08, p<0.01). Ve skutečnosti, zatímco naltrexon neovlivňoval reakci na dávku Chow krysy (Ošetření: F(2,12) = 0.68, Ns), sníží to závislost na dávce v závislosti na dávce Chutný krysy (Ošetření: F(2,18) = 9.25, p<0.002), s post hoc analýzou vykazující významné snížení po dávce 25 ug ve srovnání se stavem vehikula. Proto naltrexon, mikroinfundovaný do mPFC, selektivně ovlivňoval přejídání podobné jídlu Chutný krysy, aniž by to mělo vliv na krmení kontrolních krys. Navíc naltrexon neměl žádný vliv na příjem vody (Tabulka 1; Léčba: F(2,30) = 1.89, Ns; Léčba historie stravy X: F(2,30) = 0.69, Ns).

Obrázek 3 

Vliv mikroinfúze s naltrexonem (0, 5, 25 µg / strana) v mPFC na (A) vlastní podávání potravin (n= 17) a (B) bod zlomu v progresivním poměru poměru výztuže (n= 17) u samců potkanů ​​Wistar. Panel představuje M± SEM. Symboly označují: ...

Účinky naltrexonové mikroinfúze do mPFC na progresivní poměrový diagram vyztužení pro potraviny

Obousměrná ANOVA provedla v bodě zlomu Chow a Chutný krysy po mikroinfuzi naltrexonu do mPFC odhalily hlavní účinek léčby léčivem (Obrázek 3B; Léčba: F(2,30) = 9.057, p<0.001; Léčba stravy X Historie: F (2,30) = 1.84, Ns). Přestože jednosměrná analýza ANOVA odhalila účinek léčby drogy v EU Chow skupina (léčba: F(2,18) = 4.43, p<0.027), po post-hoc analýze se ani dávka 5 ug, ani dávka 25 ug významně nelišila od stavu vehikula. Pravděpodobný signifikantní účinek léčby indikovaný ANOVA byl veden trendem směrem ke zvýšenému bodu zlomu po dávce 5 ug ve srovnání se stavem vehikula. Na druhou stranu v Chutný skupiny byl pozorován významný hlavní účinek léčby drogami (Léčba: F(2,12) = 5.31, p<0.02) a nejvyšší dávka mikroinfundovaná do mPFC významně snížila bod zlomu ve srovnání se stavem vehikula.

Kvantitativní PCR v reálném čase

Kvantitativní PCR v reálném čase ukázala, že 24 h po poslední relaci samo-podávání potravy, žádné významné rozdíly v expresi POMC, PDyn a PEnk mezi Chow a Chutný krysy byly pozorovány v NAcc (Obrázky 5A, 5B a 5C). Hladiny mRNA POMC však byly významně vyšší v PFC Chutný krysy, ve srovnání s Chow krysy (zvýšení 117.9%; Obrázek 5D). Kromě toho úrovně PDyn exprese v PFC Chutný krysy byly ve srovnání s Chow krysy (49.3% snížení; Obrázek 5E). Nebyl pozorován žádný rozdíl mezi oběma skupinami v hladinách PEnk mRNA v PFC (Obrázek 5F).

Obrázek 5 

Exprese mRNA POMC, PDyn a PEnk v NAcc (A, B a C) a v mPFC (D, E a F) samců potkanů ​​Wistar. Oblasti mozku byly sbírány 24 h po posledním denním binge-like jídle. Data představují M± SEM vyjádřeno v procentech Chow skupina; ...

Diskuse

V této studii jsme ukázali, že opioidní antagonista naltrexon, systémově podávaný, nespecificky snížil spotřebu a motivaci k získání potravy, jakož i snížil příjem vody u obou krys, které si samy podávaly pravidelnou krmnou stravu, a krys, které se nakláněly na vysoce chutná strava. Důležité je, že zatímco účinky na příjem potravy pro chow i chutný byl zachován, když byl naltrexon mikroinfikován do skořápky NAcc, opioidní antagonista selektivně snížil spotřebu a motivaci k získání vysoce chutného jídla, ale ne pravidelného chow, když byl mikroinfikován do mPFC. Kromě toho byla potvrzena selektivita behaviorálních účinků pozorovaných po mikroinfuzi naltrexonu do mPFC, mRNA exprese POMC a PDyn byla deregulována v mPFC, ale ne v NAcc, u potkanů, kteří jedli binge ve srovnání s kontrolními krysy. Nebyl pozorován žádný účinek na genovou expresi PEnk v obou oblastech.

Systémově podávaný naltrexon proto v závislosti na dávce snížil spotřebu potravy u obou Chutný a Chow krysy. Systémová léčba drogy také snížila motivaci k práci, aby bylo možné získat jak chow, tak chutnou stravu v progresivním poměrovém harmonogramu posilování, což je validované behaviorální paradigma používané k posouzení motivační síly k získání posilovačů (; ). Po subkutánním podání nejvyšší dávky naltrexonu byla velikost maximálních účinků při redukci odpovědi na FR1 a bod zlomu schématu progresivního poměru zesílení v obou skupinách podobná (FR1: 58.2% a 54.0%; progresivní poměr: 40.5 % a 43.3% ve srovnání s podmínkami vozidla v roce 2006 Chow a Chutný krysy). Účinky systémového naltrexonu na příjem potravy proto pravděpodobně zahrnovaly potlačení homeostatického i hedonického chování při krmení (). Zajímavé je, že účinky subkutánního podávání naltrexonu nebyly pro potraviny selektivní, protože léčba léčivem také snížila příjem vody jak u kontrolních krys, tak u potkanů ​​s přejídáním. Celkově tato počáteční pozorování naznačovala obecný supresivní účinek na požité chování po systémovém podání s opioidním antagonistou ().

V této studii jsme chtěli zjistit, zda opioidní receptory ve skořápce NAcc zprostředkovávaly konzumní a motivační aspekty nadměrného stravování. Opioidní systém v této oblasti byl skutečně navržen tak, aby se podílel na modulaci prospěšných vlastností potravin (). Zde ukazujeme, že naltrexon mikroinfikovaný do skořápky NAcc snížil nejen nadměrné stravování vysoce chutné stravy, ale také příjem pravidelného krmení. Podobný výsledek byl získán, když jsme testovali účinky naltrexonové mikroinfúze do skořápky NAcc na bod zlomu progresivního poměrového schématu zesílení pro potraviny. Léčba drogy ve skutečnosti bez rozdílu snížila motivaci k získání potravy jak u potkanů, tak iu kontrolních krys. Tato zjištění naznačují, že opioidní receptory ve skořápce NAcc vykazují obecnou modulaci chování při krmení a zvyšují účinnost potravy, a to nezávisle na typu nebo na motivačním významu stravy. Na podporu této hypotézy Kelley a její kolegové ukázali, že blokáda μ-opioidních receptorů v NAcc snižuje příjem jak standardní krmné stravy, tak roztoku sacharózy (). Na rozdíl od toho, co jsme pozorovali po systémovém podání naltrexonu, mikroinfúze léčiva NAcc shell neovlivňovala příjem vody, což naznačuje, že opioidní receptory v této oblasti mozku jsou specificky zapojeny do modulace stravovacího chování, namísto obecněji při požití, že k potlačení příjmu vody jsou zapotřebí vyšší dávky.

Rovněž jsme zkoumali, zda byl opioidní systém v mPFC důležitý při zprostředkování konzumace vysoce chutného jídla podobného pití. V naší studii mikroinfúze mPFC opioidního antagonisty selektivně a v závislosti na dávce snížila jak spotřebu, tak motivaci získat vysoce chutnou stravu u potkanů, kteří jedli binge, aniž by to ovlivnilo příjem pravidelného krmiva u kontrolních potkanů. Příjem vody nebyl ovlivněn léčbou léčiv v žádné skupině, což naznačuje, že účinky jsou selektivní pro chování při krmení. Frontokortikální oblasti mozku byly zapojeny do modulace chování při krmení (). Nedávná zpráva také ukázala, že μ-opioidní receptory v mPFC hrají důležitou roli při přejídání ().

Je důležité diskutovat o alternativní interpretaci, že účinky naltrexonu mohou vyplývat z jeho rychlé difúze v mozku a periferii, na rozdíl od jiných kvartérních derivátů opiátových antagonistů (; ), které mají nízkou rychlost difúze (). Na rozdíl od této interpretace existují důkazy, že v této studii byl naltrexon mikroinfuzován do dvou různých oblastí mozku (NAcc a PFC) v Chow krysy projevovaly rozdílné účinky. Navíc analýza časového průběhu reakce na jídlo odhalila, že naltrexon injikovaný do mPFC snížil reakci na jídlo v Chutný krysy po pouhých 6 minutách po mikroinfuzi (M± SEM: 84.3 ± 7.5 vs. 75.3 ± 6.6, veh vs. vs. 25 µg / strana, v daném pořadí, p<0.05). Vzhledem k krátkému časovému období je vysoce nepravděpodobná alternativní interpretace, že pozorovaný účinek by mohl vyplývat buď z CNS, nebo z periferní blokády opioidních receptorů. Kromě toho na podporu platnosti údajů získaných v této studii literatura rozsáhle uvádí účinky naltrexonu mikroinfundovaného ve specifických oblastech mozku (). Nelze však vyloučit hypotézu, že účinek naltrexonu může také záviset na mírné difúzi v mozkových oblastech sousedících s Nacc shellem nebo PFC.

Alternativní interpretace nedostatku účinků na příjem potravy po naltrexonové mikroinfuzi do prefrontální kůry mozku Chow krysy je, že pozorovaný účinek by mohl být důsledkem současné blokády opioidních receptorů mu a kappa. Přestože bylo prokázáno, že tyto dva systémy vykazují opačné modulační účinky ve více procesech včetně odměny, ukázalo se, že modulují homeostatické krmení (jako je příjem potravy v Chow zvířata této studie) podobným způsobem. Bylo prokázáno, že jak aktivace opioidního receptoru mu, tak kappa zvyšuje příjem potravy, zatímco jejich blokáda vykazuje anorektické účinky (; ) Naše zjištění proto naznačují rozdílnou roli v modulaci stravovacího chování uplatňovaného opioidním systémem v NAcc a mPFC; zatímco opioidní receptory NAcc se zdají být zapojeny do obecné modulace krmení, nezávisle na typu přijímané potravy (), opioidní systém mPFC se zdá být získáván až po anamnéze omezeného přístupu k sladké, chutné stravě, když krysy ztratí inhibiční kontrolu nad jídlem. Tato hypotéza je v souladu s vyšší kognitivní funkcí a komplexní kontrolou vyhodnocování odměn prováděnou mPFC.

Hypotéza obecnější, nikoliv specifické potravinové role opioidních receptorů NAcc při zprostředkování potravního chování, a selektivní nábor mPFC byly podpořeny analýzou genové exprese POMC, PDyn a PEnk. Při porovnání krysích potravních a kontrolních krys nebyl pozorován žádný významný rozdíl v expresi tří genů v NAcc. Naopak u mPFC vykazovaly křupavé stravovací krysy více než dvojnásobné zvýšení hladin mRNA POMC, doprovázené ~ 50% snížením hladin mRNA PDyn ve srovnání s kontrolními krysy.

Ukázalo se, že geny POMC a PDyn jsou exprimovány v obou těchto oblastech mozku (; ; ). (Důkazy však ukazují, že opioidní peptidy uvolňované v mPFC mohou také pocházet z buněčných těl vyčnívajících z různých oblastí mozku (tj. Ventrální tegmentální oblast ()), což zvyšuje možnost, že účinky pozorované v této studii po naltrexonové mikroinfuzi v mPFC nemusí souviset s odchylkou v expresi POMC a Pdyn ve stejné mozkové oblasti. POMC je prekurzor endorfinů, které přednostně vážou μ (ale také δ) opioidní receptory (), zatímco PDyn je prekurzorem dynorfinů, které se přednostně vážou na κ-opioidní receptory (). Rozsáhlé důkazy naznačují protichůdnou roli μ- a K-opioidních receptorů při modulaci řady procesů v mozku včetně analgézie, tolerance, paměťových procesů a odměny (; ). Zejména a v souladu s touto hypotézou bylo prokázáno, že μ-opioidní receptory značně zprostředkovávají prospěšné vlastnosti jídla a některých drog zneužívání (); na druhé straně bylo prokázáno, že κ-opioidní receptory zprostředkovávají své averzivní a dysforické účinky a byly navrženy jako součást systému „proti odměňování“ (). Ještě důležitější je, že v souvislosti s touto studií byla prokázána farmakologická aktivace μ- nebo K-opioidních receptorů v prefrontální kůře, která má opačné účinky: mikroinfuze selektivního agonisty μ-opioidního receptoru vyvolávají preferenci místo, zatímco mikroinfuze agonisty κ-opioidního receptoru vyvolávají averzi k místu ().

Důležitým bodem diskuse je, zda změny v expresi mRNA pozorované v této studii jsou závislé na rozdílech v kumulativním kalorickém příjmu nebo tělesné hmotnosti mezi Chow a Chutný krysy. Ačkoli příjem potravy a tělesná hmotnost nebyly zaznamenány v kohortě zvířat použitých pro kvantitativní PCR v reálném čase, dříve jsme demonstrovali, že zde používaný postup stravování podobný nárazům neovlivňuje kumulativní příjem potravy ani tělesnou hmotnost. Ve skutečnosti krysy s nadměrným příjmem vykazují nadměrný příjem během přístupu 1h k vysoce chutné stravě, ale během zbývajících 23 hodin denně kompenzují podvýživou pravidelnou stravovací stravou (). Tento aberantní způsob příjmu proto nevede k rozdílnému kumulativnímu kalorickému příjmu nebo tělesné hmotnosti mezi přejídajícími a kontrolními krysy ().

Přestože byly navrženy podobnosti mezi režimem přejídání / restrikce u poruch příjmu potravy a návykovou látkou závislou na návykových látkách (abstinence / abstinenční návyky) (), zda by zvířecí model použitý v této studii mohl být pro studii užitečný, není známa negativní symptomatologie spojená s vysazením z vysoce chutného jídla. Zvýšená exprese POMC (systém „pro-odměna“) a snížená exprese Pdyn („systém proti odměně“) pozorovaný zde po stažení 24h z chutné stravy naznačují, že zvířata pravděpodobně nezažívají negativní emoční stav. K řešení tohoto důležitého aspektu cyklistického stravování však bude zapotřebí dalších studií hodnotících emocionalitu a potenciální zapojení stresových systémů (např. Faktor uvolňující kortikotropin). Proto rozdílné změny v genové expresi POMC a Pdyn pozorované v mPFC mohou být skutečně interpretovány jako obecné potencionalizace prospěšných vlastností chutného jídla, které může být důsledkem nebo podněcováním stravovacích návyků u těchto subjektů.

Celkově výsledky této studie podporují hypotézu, že opioidní systém v prefrontokortikálních oblastech mozku se podílí na kontrole chování při krmení a rozšiřuje jej do specifického kontextu maladaptivního nadměrného příjmu vysoce chutného jídla pozorovaného u jedlíků (). Frontokortikální oblasti mozku hrají hlavní roli při hodnocení odměn a rozhodování (); rozsáhlá literatura ukazuje, že subjekty postižené závislostí a poruchou příjmu potravy vykazují dysfunkce v mPFC, které jsou spojeny s hodnocením změněných odměn (). Naše behaviorální, farmakologické a molekulární pozorování proto podporují hypotézu, že opioidní systém je klíčovým mediátorem hedonického krmení () a naznačují, že neuroadaptace opioidního systému v mPFC mohou být odpovědné za hyperevaluaci vysoce chutných potravin, což vede ke ztrátě kontroly nad jídlem.

 

Doplňkový materiál

Materiál supp

Poděkování

Děkujeme Stephen St. Cyr, Aditi R. Narayan, Vamsee Neerukonda, Noah Kelley, Jin Won Park, Anoop Ravilla a Sishir Yeety za technickou pomoc a Tamara Zeric za redakční pomoc. Tato publikace byla umožněna čísly grantů DA023680, DA030425, MH091945, MH093650A1 a AA016731 ​​od Národního ústavu pro zneužívání drog (NIDA), Národního ústavu pro duševní zdraví (NIMH) a Národního ústavu pro zneužívání alkoholu a alkoholismus (NIAAA) , Peter Paul Career Development Professorship (PC) a Boston University's Undergraduate Research Opportunities Program (UROP). Za jeho obsah odpovídají výhradně autoři a nemusí nutně představovat oficiální názory National Institutes of Health.

Poznámky pod čarou

Příspěvek autorů

Za koncepci a design studie odpovídaly AB, PC a VS. AB, PC a VS prováděly behaviorální a molekulární experimenty. AB a PC provedly analýzu dat. PC, VS a LS asistovaly při interpretaci nálezů. AB a PC vypracovali rukopis. PC, VS a LS poskytly kritickou revizi rukopisu pro důležitý duševní obsah. Všichni autoři kriticky recenzovali obsah a schválili konečnou verzi k publikaci.

 

Reference

  • Akritas MG. Metoda pořadí transformace u některých dvoufaktorových návrhů. Žurnál americké statistické asociace. 1990; 85 (409): 73 – 78.
  • Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Důkaz závislosti na cukru: behaviorální a neurochemické účinky přerušovaného nadměrného příjmu cukru. Neurosci Biobehav Rev. 2008; 32 (1): 20 – 39. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Bals-Kubik R, Ableitner A, Herz A, Shippenberg TS. Neuroanatomická místa zprostředkující motivační účinky opioidů, jak jsou zmapovány podmínkou paradigmatu preferovaného místa u potkanů. J Pharmacol Exp Ther. 1993; 264 (1): 489 – 495. [PubMed]
  • Blasio A, Narayan AR, Kaminski BJ, Steardo L, Sabino V, Cottone P. Upravený úkol zpoždění úpravy, aby se vyhodnotil impulsivní výběr mezi isocalorickými zesilovači u nezbavených samců potkanů: účinky 5-HT (2) A / C a 5 Agonisté receptoru -HT (1) A. Psychofarmakologie (Berl) 2012; 219 (2): 377 – 386. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Bodnar RJ, Glass MJ, Ragnauth A, Cooper ML. Obecně, opioidní antagonisté mu a kappa v jádru accumbens mění příjem potravy za deprivace, glucoprivic a chutných podmínek. Brain Res. 1995; 700 (1 – 2): 205 – 212. [PubMed]
  • Bodnar RJ, Lamonte N, Izrael Y, Kandov Y, Ackerman TF, Khaimova E. Reciproční opioid-opioidní interakce mezi ventrální tegmentální oblastí a jádry accumbens při zprostředkování krmení u potkanů ​​indukovaného agonistou mu. Peptidy. 2005; 26 (4): 621 – 629. [PubMed]
  • Boeka AG, Lokken KL. Zapojení prefrontálních systémů při přejídání. Jíst Hmotnost Disord. 2011; 16 (2): e121 – e126. [PubMed]
  • Carlezon WA, Jr, Devine DP, Wise RA. Habitotvorné účinky nomifensinu v nucleus accumbens. Psychofarmakologie (Berl) 1995; 122 (2): 194 – 197. [PubMed]
  • Clark L, Bechara A, Damasio H, Aitken MR, Sahakian BJ, Robbins TW. Diferenciální účinky ostrovních a ventromediálních prefrontálních lézí kůry na rizikové rozhodování. Mozek. 2008; 131 (Pt 5): 1311 – 1322. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Cooper SJ, Jackson A, Kirkham TC. Endorfiny a příjem potravy: agonisté kappa opioidních receptorů a hyperfagie. Pharmacol Biochem Behav. 1985; 23 (5): 889 – 901. [PubMed]
  • Corwin RL. Bingeing krysy: model občasného nadměrného chování? Chuť. 2006; 46 (1): 11 – 15. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Corwin RL, Grigson PS. Přehled sympozia - závislost na jídle: skutečnost nebo fikce? J Nutr. 2009; 139 (3): 617–619. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Nagy TR, Coscina DV, Zorrilla EP. Krmná mikrostruktura u stravou indukované obezity citlivé vůči rezistentním potkanům: centrální účinky urokortinu 2. J Physiol. 2007; 583 (Pt 2): 487 – 504. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Roberto M, Bajo M, Pockros L, Frihauf JB, Fekete EM, Steardo L, Rice KC, Grigoriadis DE, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Nábor systému CRF zprostředkovává temnou stránku kompulzivního stravování. Proc Natl Acad Sci USA A. 2009; 106 (47): 20016 – 20020. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Přerušovaný přístup k preferované potravě snižuje posilovací účinnost krmiva u potkanů. Am J Physiol Regul Integr Comp Compioliol. 2008a; 295 (4): R1066 – R1076. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP. Očekávaný negativní kontrast závislý na opioidech a nekonečné stravování u potkanů ​​s omezeným přístupem k vysoce preferovanému jídlu. Neuropsychofarmakologie. 2008b; 33 (3): 524 – 535. [PubMed]
  • Cottone P, Wang X, Park JW, Valenza M, Blasio A, Kwak J, Iyer MR, Steardo L, Rice KC, Hayashi T, Sabino V. Antagonismus receptorů Sigma-1 blokuje kompulzivní stravování. Neuropsychofarmakologie. 2012 [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Den R, Lazure C, Basak A, Boudreault A, Limperis P, Dong W, Lindberg I. Zpracování prodynorphinu pomocí proprotein konvertasy 2. Štěpení na jednotlivé základní zbytky a zlepšené zpracování v přítomnosti aktivity karboxypeptidázy. J Biol Chem. 1998; 273 (2): 829 – 836. [PubMed]
  • Epstein DH, Shaham Y. Cheesecake, které jedí sýrový koláč, a otázka závislosti na jídle. Nat Neurosci. 2010; 13 (5): 529 – 531. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Frenk H, Rogers GH. Potlačující účinky naloxonu na příjem potravy a vody u potkanů. Behav Neural Biol. 1979; 26 (1): 23 – 40. [PubMed]
  • Garzon M, Pickel VM. Ultrastrukturální lokalizace Leu5-enkefalinové imunoreaktivity v mezokortikálních neuronech a jejich vstupních terminálech ve ventrální tegmentální oblasti potkana. Synapse. 2004; 52 (1): 38 – 52. [PubMed]
  • Gosnell BA, Levine AS, Morley JE. Stimulace příjmu potravy selektivními agonisty opioidních receptorů mu, kappa a delta. Life Sci. 1986; 38 (12): 1081 – 1088. [PubMed]
  • Hagan MM, Moss DE. Přetrvávání návykových návyků po anamnéze restrikce s přerušovanými záchvaty přeočkování na chutném jídle u potkanů: důsledky pro mentální bulimii. Int J Eat Disord. 1997; 22 (4): 411 – 420. [PubMed]
  • Holtzman SG. Behaviorální účinky odděleného a kombinovaného podávání naloxonu a d-amfetaminu. J Pharmacol Exp Ther. 1974; 189 (1): 51 – 60. [PubMed]
  • Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, Sabino V, Cottone P. Stažení z chronického, přerušovaného přístupu k vysoce chutnému jídlu indukuje depresivní chování u nutkavých stravovacích potkanů. Behav Pharmacol. 2012; 23 (5 – 6): 593 – 602. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Javaras KN, papež HG, Lalonde JK, Roberts JL, Nillni YI, Laird NM, Bulik CM, Crow SJ, McElroy SL, Walsh BT, Tsuang MT, Rosenthal NR, Hudson JI. Společný výskyt poruch příjmu potravy s psychiatrickými a lékařskými poruchami. J Clin Psychiatry. 2008; 69 (2): 266 – 273. [PubMed]
  • Kelley AE, Bless EP, Swanson CJ. Zkoumání účinků opiátových antagonistů infundovaných do jádra accumbens na krmení a pití sacharózy u potkanů. J Pharmacol Exp Ther. 1996; 278 (3): 1499 – 1507. [PubMed]
  • Koob GF, Le Moal M. Drogová závislost, dysregulace odměny a allostáza. Neuropsychofarmakologie. 2001; 24 (2): 97 – 129. [PubMed]
  • Laessle RG, Tuschl RJ, Kotthaus BC, Pirke KM. Behaviorální a biologické koreláty dietních omezení v normálním životě. Chuť. 1989; 12 (2): 83 – 94. [PubMed]
  • Le Merrer J, Becker JA, Befort K, Kieffer BL. Zpracování odměn opioidním systémem v mozku. Physiol Rev. 2009; 89 (4): 1379 – 1412. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Leriche M, Cote-Velez A, Mendez M. Přítomnost pro-opiomelanocortinové mRNA v krysí mediální prefrontální kůře, nucleus accumbens a ventrální tegmentální oblasti: studie pomocí RT-PCR a in situ hybridizačních technik. Neuropeptidy. 2007; 41 (6): 421 – 431. [PubMed]
  • MacDonald AF, Billington CJ, Levine AS. Účinky opioidního antagonisty naltrexonu na krmení indukované DAMGO ve ventrální tegmentální oblasti a v oblasti jádra accumbens v potkanech. Am J Physiol Regul Integr Comp Compioliol. 2003; 285 (5): R999 – R1004. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Akil H, Watson SJ. Exprese mRNA opioidního receptoru v krysím CNS: anatomické a funkční důsledky. Trendy Neurosci. 1995; 18 (1): 22 – 29. [PubMed]
  • Mena JD, Sadeghian K, Baldo BA. Indukce příjmu hyperfagie a uhlohydrátů stimulací mu-opioidních receptorů v ohraničených oblastech čelní kůry. J Neurosci. 2011; 31 (9): 3249 – 3260. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Moran TH, Westerterp-Plantenga M. Potenciální úloha a deficity v frontálních kortikálních mozkových oblastech, které se podílejí na výkonné kontrole příjmu potravy. Int J Obes (Lond) 2012; 36 (5): 625 – 626. [PubMed]
  • Nathan PJ, Bullmore ET. Od chutí hedoniky po motivační pohon: centrální mu-opioidní receptory a chování při přejídání. Int J Neuropsychopharmacol. 2009; 12 (7): 995 – 1008. [PubMed]
  • Pan ZZ. mu-Opposing účinky kappa-opioidního receptoru. Trends Pharmacol Sci. 1998; 19 (3): 94 – 98. [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. Krysí mozek ve stereotaxických souřadnicích. Druhý edn. Orlando: Academic Press; 1986.
  • Polivy J, Herman CP. Dieta a binging. Kauzální analýza. Am Psychol. 1985; 40 (2): 193 – 201. [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Blasio A, Iyer MR, Steardo L, Rice KC, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Aktivace sigma-receptorů indukuje pitné pití u potkanů ​​preferujících alkohol na Sardinii. Neuropsychofarmakologie. 2011; 36 (6): 1207 – 1218. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Steardo L, Schmidhammer H, Zorrilla EP. 14-Methoxymetopon, vysoce účinný mu opioidní agonista, bifázicky ovlivňuje příjem ethanolu u potkanů ​​preferujících alkohol na Sardinii. Psychofarmakologie (Berl) 2007; 192 (4): 537 – 546. [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Zhao Y, Iyer MR, Steardo L, Jr, Steardo L, Rice KC, Conti B, Koob GF, Zorrilla EP. Antagonista sigma-receptoru BD-1063 snižuje příjem ethanolu a posílení u zvířecích modelů nadměrného pití. Neuropsychofarmakologie. 2009; 34 (6): 1482 – 1493. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Sanger DJ, McCarthy PS. Diferenciální účinky morfinu na příjem potravy a vody u potkanů ​​zbavených potravy a volně krmených. Psychofarmakologie (Berl) 1980; 72 (1): 103 – 106. [PubMed]
  • Schroeder RL, Weinger MB, Vakassian L, Koob GF. Methylnaloxonium difunduje z mozku potkana pomaleji než naloxon po přímé intracerebrální injekci. Neurosci Lett. 1991; 121 (1 – 2): 173 – 177. [PubMed]
  • Stein RI, Kenardy J, Wiseman CV, Dounchis JZ, Arnow BA, Wilfley DE. Co je příčinou záchvatů přejídání ?: Prospektivní vyšetření prekurzorů a následků. Int J Jíst disord. 2007; 40 (3): 195–203. [PubMed]
  • Taqi MM, Bazov I, Watanabe H, Nyberg F, Yakovleva T, Bakalkin G. Prodynorphinový promotor SNP spojený s závislostí na alkoholu tvoří nekanonické vazebné místo AP-1, které může ovlivnit genovou expresi v lidském mozku. Brain Res. 2011; 1385: 18 – 25. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blokáda opiátových receptorů nucleus accumbens zeslabuje intravenózní odměnu za heroin u potkanů. Psychofarmakologie (Berl) 1985; 86 (1 – 2): 37 – 42. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Pettit HO, Bloom FE, Koob GF. Účinky intracerebroventrikulárního podání methyl naloxoniumchloridu na samopodávání heroinu potkanům. Pharmacol Biochem Behav. 1985; 23 (3): 495 – 498. [PubMed]
  • Wilfley D, Berkowitz R, Goebel-Fabbri A, Hirst K, Ievers-Landis C, Lipman TH, Marcus M, Ng D, Pham T, Saletsky R, Schanuel J, Van Buren D. Binge, nálada a kvalita života u mládeže s diabetem typu 2: základní údaje z dnešní studie. Péče o cukrovku. 2011; 34 (4): 858 – 860. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Williams KL, Broadbridge CL. Schopnost naltrexonu snížit samopodávání ethanolu u potkanů ​​je větší u subkutánních versus intraperitoneálních injekcí. Alkohol. 2009; 43 (2): 119 – 126. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  • Woolley JD, Lee BS, Kim B, Fields HL. Protichůdné účinky intra-nucleus accumbens mu a kappa opioidních agonistů na smyslově specifickou sytost. Neurovědy. 2007; 146 (4): 1445 – 1452. [PubMed]
  • Zhang M, Kelley AE. Zvýšený příjem potravy s vysokým obsahem tuků po stimulaci striatální mu-opioidy: mapování mikroinjekcí a exprese fos. Neurovědy. 2000; 99 (2): 267 – 277. [PubMed]
  • Ziolkowska B, Stefanski R, Mierzejewski P, Zapart G, Kostowski W, Przewlocki R. Nepředvídatelnost nepřispívá k účinkům kokainového podání na expresi genu prodynorphinu a proenkefalinu v předním mozku krysy. Brain Res. 2006; 1069 (1): 1 – 9. [PubMed]