Orexin zprostředkovává zahájení sexuálního chování u pohlavně naivních samců potkanů, ale není kritický pro sexuální výkon (2011)

Horm Behav. Autorský rukopis; k dispozici v PMC 2011 Aug 1.

Publikováno v posledním editovaném formuláři:

PMCID: PMC2917508

Konečná upravená verze tohoto článku vydavatele je k dispozici na adrese Horm Behav

Viz další články v PMC to citovat publikovaný článek.

Přejít na:

Abstraktní

Hypotalamový neuropeptid orexin zprostředkuje chování vzrušení, spánku a přirozeně prospěšné chování, včetně příjmu potravy. Mužské sexuální chování je pozměněno agonisty nebo antagonisty receptoru orexinu-1, což naznačuje roli orexinu-A v tomto přirozeně prospěšném chování. Specifická role endogenního orexinu-A nebo B v různých prvcích mužského sexuálního chování je však v současné době nejasná. Proto současné studie využívaly markery pro nervovou aktivaci a léze specifické pro orexinové buňky k testování hypotézy, že orexin je kritický pro sexuální motivaci a výkonnost u samců potkanů. Nejprve byla exprese cFos v neuronech orexinu prokázána po prezentaci vnímavé nebo nereaktivní ženy bez další aktivace různými prvky páření. Dále byla testována funkční role orexinu za použití saporinu konjugovaného s orexinem-B, což vedlo k poškození lézí orexinových buněk v hypotalamu. Lézie byly provedeny u sexuálně naivních mužů a následné sexuální chování bylo zaznamenáno během čtyř pokusů s pářením. Samci leze vykazovali zkrácené latence, které se objevily a intromitovaly během prvních, ale nikoli následných párovacích pokusů, což naznačuje, že léze usnadnily zahájení sexuálního chování u sexuálně naivních, ale dosud nezkušených mužů. Podobně léze neovlivnily sexuální motivaci zkušených mužů, což bylo určeno testy na dráze. Konečně zvýšené testy plus bludiště prokázaly snížené chování podobné úzkosti u postižených samců, což podporuje roli orexinu v úzkosti spojené s počátečním vystavením samice naivním zvířatům. Celkově tato zjištění ukazují, že orexin není rozhodující pro mužskou sexuální výkonnost nebo motivaci, ale může hrát roli při vzrušení a úzkosti související se sexuálním chováním u dosud neléčených zvířat.

Klíčová slova: orexin, hypocretin, sexuální chování, kopulace, nervová aktivace, motivace, hypotalamus, novinka, vzrušení, úzkost

Úvod

Orexin, také známý jako hypocretin, je hypothalamický neuropeptid kritický pro chování při krmení (de Lecea a kol., 1998; Sakurai a kol .; 1998, Sakurai, 2006; Benoit a kol., 2008) vzrušení a spánek (Chemelli a kol., 1999; Lin et al., 1999, Sakurai, 2007; Furlong a Carrive, 2007; Furlong a kol., 2009; Carter a kol., 2009). Orexinové neurony jsou lokalizovány do laterální hypotalamické oblasti (LHA) a perifornického dorsomediálního hypotalamu (PFA-DMH) a produkují dva neuropeptidy, orexin-A a B (de Lecea a kol., 1998; Sakurai a kol., 1998). Ukázalo se, že neurony Orexinu promítají do mozkových struktur zapojených do zprostředkování vzrušení včetně lokusu coeruleus, tuberomammilárního jádra a peduculopontinového tegmentálního jádra (Peyron a kol., 1998; Hagan a kol., 1999; Horvath a kol., 1999; Baldo a kol., 2003). Orexin byl také zapojen do odměny a motivace, konkrétně v souvislosti s zneužíváním potravin a drog (Aston-Jones a kol., 2009a; Aston-Jones a kol., 2009b) a neuronů orexinu se ukázalo, že projektují odměnu souvisejících mozkových struktur v mezolimbickém systému včetně ventrální tegmentální oblasti (VTA) a nucleus accumbens (NAc) (Peyron a kol., 1998; Fadel a Deutch, 2002; Martin et al., 2002; Baldo a kol., 2003). Orexinové neurony jsou aktivovány podmíněnými kontextovými narážkami spojenými s odměnou za jídlo a léky (Harris a kol., 2005; de Lecea a kol., 2006; Choi a kol., 2010) a prokázalo se, že hrají roli v stravovacím chování založeném na odměně (Choi a kol., 2010). Navíc intracerebroventrikulární (ICV) nebo intraperitoneální podání antagonisty orexinového receptoru 1 (ORX1) vede ke snížené motivaci pro chutnou stravu (Thorpe a kol., 2005; Nair et al., 2008), zatímco ICV orexin-A může tuto motivaci obnovit (Boutrel a kol., 2005).

Role orexinu v dalším prospěšném chování není v současné době nejasná, ačkoli několik studií implikovalo roli orexinu při kontrole sexuálního chování u samců potkanů. Již dříve se ukázalo, že neurony orexinu jsou aktivovány kopulací u samců potkanů ​​(Muschamp a kol., 2007). Navíc podávání orexinu-A do střední preoptické oblasti (mPOA) vedlo ke zvýšenému sexuálnímu výkonu, což bylo prokázáno snížením latencí k nárůstu a intromitu a zvýšením frekvencí přírůstků a intromise (Gulia a kol., 2003). Naproti tomu ICV podávání orexinu-A zeslabilo sexuální motivaci snížením ženské preference, i když pouze u vysoce sexuálně motivovaných mužů (Bai a kol., 2009). Studie využívající antagonisty ORX1 také prokázaly protichůdné údaje, protože systémové podávání antagonisty ORX1 mírně zhoršilo sexuální výkonnost zvýšením latence k intromitu, aniž by ovlivnilo jiné parametry sexuálního chování (Muschamp a kol., 2007), zatímco ICV podávání antagonisty ORX1 nemělo žádný vliv na sexuální motivaci (Bai a kol., 2009). Společně tyto studie naznačují, že podávání exogenního orexinu-A ovlivňuje sexuální výkon a motivaci; endogenní orexin však nemusí hrát důležitou roli při zprostředkování sexuálního chování (Bai a kol., 2009). Cílem této studie proto bylo zjistit, zda je endogenní orexin nezbytný pro sexuální motivaci a výkon samců potkanů.

Nejprve bylo určeno, kdy během sexuálního chování jsou aktivovány neurony orexinu, přičemž se testuje hypotéza, že neurony orexinu jsou aktivovány po zavedení odměňujícího stimulu. Navíc, jak bylo ukázáno, že sexuální zkušenost ovlivňuje sexuální výkon (Dewsbury, 1969) a prospěšné vlastnosti sexuálního chování (Tenk a kol., 2009), bylo určeno, zda sexuální zkušenost ovlivňuje aktivaci neuronů orexinu během páření. Nakonec bylo testováno, zda orexin hraje rozhodující roli při sexuální motivaci a výkonu pomocí lézí specifických pro orexin neuronů specifických pro buněčné tělo.

Materiály a metody

Dospělé samce krys Sprague Dawley (200 – 250g) byly získány od Harlan (Indianapolis, IN) nebo Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanada) a umístěny jednotlivě nebo ve dvojicích v závislosti na individuálním experimentu (viz níže) v klecích z plexiskla. Místnost kolonie byla udržována v cyklu 12 / 12 s obráceným cyklem světlo-tma (světla vypnuta v 10) a bylo k dispozici jídlo a voda podle libosti kromě během behaviorálního testování. Samice krys Sprague-Dawley byly získány z Harlan (Indianapolis, IN) nebo Charles River Laboratories (Sherbrooke, Quebec, Kanada), byly bilaterálně ovariektomizovány a subkutánně implantovány silastními kapslemi 5% 17-P-estradiol benzoátu. Sexuální vnímavost byla indukována subkutánními injekcemi progesteronu (500 µg v 0.1ml sezamového oleje) přibližně 4 h před pářením. Všechny postupy byly schváleny Výbory pro péči o zvířata na University of Cincinnati a University of Western Ontario a jsou v souladu s pokyny stanovenými Národním institutem zdraví a Kanadskou radou pro péči o zvířata. Veškeré behaviorální testování bylo provedeno v první polovině tmavé fáze při slabém červeném osvětlení, pokud není uvedeno jinak.

Experimentální design

Expresní studie cFos

Samci potkanů ​​(n = 48) byli ustájeni jednotlivě a polovina zvířat získala sexuální zkušenost v domácí kleci během 5 dvakrát týdně páření. V domovské kleci byly provedeny pářivé testy, aby se eliminovala exprese a vzrušení a cFos vyvolaná expozicí jiné pářivé aréně a vystavením kondicionovaným narážkám spojeným s předchozím pářením (Balfour a spol., 2004). Do domácí klece byla zavedena receptivní žena a samci se mohli párovat až do jedné ejakulace nebo po dobu 60 minut. Během každého testu bylo pozorováno sexuální chování. Byl zaznamenán celkový počet přípojek a intromisí, jakož i latence k prvnímu připojení a intromisi (doba od předložení vnímavé ženy k prvnímu připojení nebo intromisi) a ejakulace (doba od prvního intromise k ejakulaci). (Agmo, 1997). Zbývající polovina zvířat zůstala sexuálně naivní. Tato zvířata byla umístěna ve stejné místnosti jako sexuálně prožívaní samci, byla s nimi manipulována a vystavena pachům a zvukům spojeným s pářením, avšak nespárovala se. Naivní a zkušená zvířata byla každá dále rozdělena do experimentálních skupin 6 (n = 4 na skupinu). Mezi naivní a zkušené skupiny 6 patřili: kontrolní muži bez expozice sexuálního chování (domácí klec); samci vystavení nereceptivní samici v domácí kleci po dobu 15 minut (Anestrous Female). Samci mohli vyšetřovat a interagovat, avšak kvůli nedostatku ženské vnímavosti se nespojili; samci vystavení pachům vnímavé ženy umístěné v krabici z drátěného pletiva na horní části domácí klece po dobu 15 minut (Estrous Female); muži, kteří vykazovali úchyty, ale ne intromise nebo ejakulaci s vaginálně maskovanými ženami (Mount); muži, kteří zobrazovali pouze úchyty a intromisie (intromisi); a samci, kteří se spářili k jedné ejakulaci (ejakulaci). Jednu hodinu po skončení testu byli muži obětováni, aby analyzovali expresi cFos. Sexuálně prožité skupiny byly porovnány podle parametrů sexuálního chování a před závěrečným testem nebyly mezi skupinami významné rozdíly. Kromě toho nebyly během závěrečného testu žádné významné rozdíly mezi naivními a zkušenými skupinami v počtech stoupání plus intromisí.

Perfúze: výraz cFos

Všichni samci byli hluboce anestetizováni pentobarbitolem sodným (270 mg / ml) a byli transkardiálně perfundováni 4% paraformaldehydem (500 ml; PFA). Po perfuzi byly mozky okamžitě odstraněny a dodatečně fixovány po dobu jedné hodiny ve stejném fixativu a poté přeneseny do 20% roztoku sacharózy pro kryoprotekci. Mozky byly rozděleny na mrazivý mikrotom (Microm, Walldorf, Německo) v koronálních řezech 35 um a shromážděny v paralelních řezech 4 v kryoprotektantovém roztoku (30% sacharóza v 0.1 M PB obsahující 30% ethylenglykol a 0.01% azid sodný) a uloženy při -20 ° C do dalšího zpracování.

Imunohistochemie

Všechny inkubace byly prováděny při pokojové teplotě za mírného míchání. Volné plovoucí sekce byly důkladně promyty 0.1M fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem sodným (PBS). Řezy byly blokovány 1% H2O2 (30% zásobní roztok) v PBS po dobu 10 minut, poté se znovu důkladně propláchl PBS. Řezy byly inkubovány s inkubačním roztokem (PBS obsahující 0.1% hovězí sérový albumin a 0.4% Triton X-100) po dobu 1 hodiny. Inkubace primárních protilátek byly prováděny v inkubačním roztoku přes noc při teplotě místnosti. Po barvení byly řezy opláchnuty v PBS, upevněny na plus nabitá skleněná sklíčka a zakryty krycí vrstvou dibutylftalát xylenu (DPX).

cFos / Orexin

Jedna série řezů byla imunoprocesována na cFos a orexin. Řezy byly inkubovány přes noc s králičí protilátkou rozpoznávající cFos (králičí anti-cFos, sc-52; 1: 10 000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) následované 1 hodinovou inkubací s biotinylovanou kozou anti-králíkem (1: 500 , Vector Laboratories, Burlingame, CA) a avidinový křenový peroxidázový komplex (1: 1000, ABC kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Řezy byly inkubovány po dobu 10 minut v 0.02% diaminobenzidinu (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) ve fosfátovém pufru 0.1M (PB) obsahujícím 0.012% peroxid vodíku a 0.08% síranu nikelnatého, což vedlo k modro-černému reakčnímu produktu. Řezy byly poté inkubovány přes noc s králičí protilátkou rozeznávající orexin-A (králičí anti-orexin-A, H-003-30; 1: 20 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) následovaná inkubací 1 s biotinylovanou kozou anti -rabbit a ABC, jak je popsáno výše. Nakonec byly řezy inkubovány po dobu 10 minut s 0.02% DAB v 0.1M PB obsahujícím 0.012% peroxid vodíku, což vedlo ke vzniku červenohnědého reakčního produktu.

Všechny protilátky byly již dříve charakterizovány (Chen a kol., 1999; Satoh a kol., 2004; Solomon a kol., 2007). Imunohistochemické kontroly zahrnovaly opomenutí primárních protilátek, analýzu westernovým přenosem prokazující jednotlivé pásy při vhodné hmotnosti (cFos) a ztrátu imunohistochemického signálu orexinu s lézemi orexinu B-saporin (orexin).

Analýza dat

cFos / Orexin

Neurony značené pro orexin nebo orexin a cFos byly počítány bilaterálně ve třech reprezentativních řezech na zvíře, o nichž je známo, že obsahují maximální počet neuronální populace orexinu (Sakurai a kol., 1998) přesahující −2.3 mm až −3.6 mm od bregma (Paxinos a Watson, 1998) (Obrázek 1), pomocí tažné trubice připojené k mikroskopu Leica (Leica Microsystems; Wetzlar Germany), pozorovaným slepým pokusným skupinám. PFA-DMH a LHA byly vymezeny na základě umístění fornixu (Obrázek 1a). Procenta orexinových neuronů exprimujících cFos byla vypočtena a průměrována na hemisféru pro každé zvíře a byly vypočteny střední hodnoty. Statistická významnost mezi skupinami byla stanovena pomocí obousměrné ANOVA se sexuální zkušeností a sexuálním chováním během závěrečného testu jako faktorů následovaných Fisherovými LSD testy s 95% spolehlivostí.

Obrázek 1 

Umístění orexinových neuronů v hypotalamu. (A) Anatomické umístění orexinových neuronů v hypotalamu. (Paxinos a Watson, 1998), Měřítko: 200 um. (B) Jednoznačené orexinové neurony v PFA-DMH u nespojeného kontrolního zvířete. (C) Orexin ...

Studie orexinů

Chirurgie

Samci byli umístěni jednotlivě a dostali jednu předtestovou párovací relaci s vnímavou ženou před operací a lézí. Sexuální chování bylo zaznamenáno, jak je popsáno výše, a skupiny byly přiřazeny na základě parametrů páření. Samci potkanů ​​byli anestetizováni isofluranem (Abbot Laboratories, St. Laurent, Quebec, Kanada) pomocí plynového aparátu Surgivet Isotec4 (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Kanada) a umístěni do stereotaxického aparátu (Kopf Instruments, Tujunga, CA). s plynovou maskou zakrývající nos a ústa pro udržení anestézie. Byl proveden řez k odhalení lebky a byly zjištěny lambda a bregma a bylo stanoveno, že jsou na úrovni. Do lebky byla vyvrtána díra pomocí vrtacího vrtáku (Dremel, Racine, WI) a skleněných mikropipet (průměr 40 um, World Precision Instruments Inc, Sarasota, FL) naplněných cíleným toxinem orexin-B saporin (IT-20, Advanced) Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / ul v PBS); nebo nekonjugovaný toxin BLANK-saporin (IT-21, Advanced Targeting Systems, San Diego, CA; 200ng / ul v PBS; simulované kontroly) byly sníženy do hypotalamu. Ukázalo se, že tento cílený toxin se váže s vysokou afinitou k buňkám exprimujícím orexinový receptor 2 (ORX2) a se signifikantně nižší afinitou k buňkám exprimujícím ORX1 (Gerashchenko a kol., 2001) a bylo prokázáno, že specificky ablaují orexinové neurony v hypotalamu (Frederick-Duus a kol., 2007). Bilaterální infuze 1 µL (2 na hemisféru) byly injikovány na následujících souřadnicích: AP = −2.8 a −3.2; ML = 0.7 a 0.8; DV = −9.0 (Paxinos a Watson, 1998). Po každé infuzi byla jehla ponechána na místě po dobu 3 minut, aby se umožnila difúze. Jehly byly pomalu odstraněny a rány byly uzavřeny sponami na rány. Dva týdny po operaci léze byli všichni muži vyšetřeni na sexuální zážitek během čtyř pářovacích pokusů a poté byli podrobeni testu dráhy a / nebo zvýšeného plus bludiště (viz níže). Chirurgie byly prováděny ve třech různých kohortách oddělených několika týdny, aby bylo dosaženo dostatečného počtu zvířat na skupinu.

Sexuální chování

Všichni muži byli testováni na sexuální chování během páření 4 prováděných každý druhý den v domácí kleci. Během každé sezení se muži spárovali s vnímavou ženou s jednou ejakulací nebo po dobu 60 minut, podle toho, co nastane dříve. Chování páření bylo zaznamenáno, jak je popsáno výše, a byla také vypočtena účinnost kopulace [počty intromisí / (počty přípojek + počty intromisí)]. Statistické rozdíly v parametrech sexuální výkonnosti byly porovnány mezi skupinami lézí a fingovanými skupinami pro každou studii s použitím jednosměrné ANOVA s operací léze jako faktoru a Fisherův LSD test s úrovní spolehlivosti 95%, nebo případně neparametrické testy byly provedeny s použitím Kruskal-Wallis jednosměrná ANOVA s operací lézí jako faktor a Dunnův test s 95% spolehlivostí. Kromě toho byla data pro každou skupinu porovnána s údaji před operací po použití párových t-testů.

Sexuální motivace: Runway Test

Po testování sexuálního chování byla podskupina nyní sexuálně zkušených mužů testována na sexuální motivaci pomocí zařízení s přímou dráhou (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (délka 120 cm; Lopez a kol., 1999). Samci navykli na přistávací dráhu během dvou následných 10 minutových zkoušek provedených ve stejný den. Dále byly provedeny dvě zkušební pokusy. Během prvního pokusu bylo stimulační zvíře (estrální žena, anestézní žena nebo samec) umístěno do brankoviště s děrovanými děliči na konci dráhy. Byl použit ventilátor k vyfukování vůní stimulačních zvířat směrem k samci. Experimentální samci byli umístěni do startovního pole, dveře byly otevřeny, aby umožnily přístup k přistávací dráze, a byl zaznamenán čas pro dosažení cíle. Jakmile dosáhli cíle, dostali samci 30 vteřiny, aby reagovali na zvíře podnětu za obrazovkou. Po 1 o hodinu později následovala identická druhá zkouška. Statistická významnost časů pro dosažení cíle mezi pokusem 1 a pokusem 2 byla analyzována pomocí párových t-testů s 95% spolehlivostí. Statistická významnost mezi skupinami byla stanovena pomocí jednosměrné ANOVA s chirurgií lézí jako faktoru, po kterém následovaly Fisherovy LSD testy s 95% spolehlivostí.

Úzkostné chování: Zvýšené bludiště

Podskupina nyní sexuálně zkušených mužů byla testována na chování podobné úzkosti, aby se určilo, zda účinky lézí orexinu na sexuální výkon nebo motivaci byly způsobeny změnami úzkosti nebo vzrušení. Samci byli vystaveni zařízení se zvýšeným plus bludištěm (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT) v jasně osvětlené místnosti během konce světelné fáze. EPM se skládal z ramen 4, každá délka 50 cm sahajících od centrálního spoje a byl zvýšen 75 cm. Dvě ramena bludiště byla otevřena do vnějšího prostředí a další dvě byla uzavřena s tmavou vlečkou o výšce 40 cm. Zvířata byla umístěna na EPM a monitorována po dobu pěti minut. Čas strávený v otevřených a uzavřených ramenech a celkový počet vstupů do každé paže byly zaznamenány pomocí polí fotobeamu. Statistická významnost mezi skupinami byla stanovena pomocí jednosměrné ANOVA s lézí jako faktorem, po které následovaly Fisherovy LSD testy s 95% spolehlivostí.

Perfúze a pářením indukované cFos

Po všech testech chování byli všichni muži hluboce anestetizováni pentobarbitolem sodným (270mg / ml) a byli transkardiálně perfundováni 500 ml 4% PFA pro ověření léze, jak bylo popsáno výše. Kromě toho, aby se otestovaly účinky orexinových lézí na párování indukovanou expresi cFos, skupiny falešných a lézí samců se párovaly až do jedné ejakulace. Jednu hodinu po ejakulaci byli samci transkardiálně perfundováni 4% PFA, jak je popsáno výše. Polovina mužů v této skupině nebyla představena ženě a byla z domácí klece perfulována, aby sloužila jako nespojené kontroly.

Imunohistochemie

Mozky byly rozděleny pomocí zmrazovacího mikrotomu v 4 paralelní řadě 35 um koronálních řezů a uloženy, jak je popsáno výše. Pro ověření léze byla jedna řada řezů obsahujících hypotalamus ze všech experimentů lézí jednotlivě označena pro orexin pomocí stejného králičího anti-orexin-A a DAB protokolu popsaného výše. Jedna řada řezů od zvířat, která byla pářena, byla obarvena na cFos a orexin, jak je popsáno výše.

Ověření lézí

U každého zvířete byly počty orexinových neuronů imunoreaktivních pro orexin počítány bilaterálně v PFA-DMH a LHA v řezech 3 exprimujících maximální počet orexinových buněk v nechirurgických kontrolách, -2.3 mm až -3.6 mm od bregma, jak je popsáno výše. Buňky na polokouli byly zprůměrovány pro každé zvíře a byly vypočteny střední hodnoty. Kontrolní zvířata bez chirurgického zákroku (z experimentů cFos) byla použita ke stanovení intaktních / výchozích počtů orexinových neuronů a data jsou vyjádřena jako procenta ve srovnání s kontrolními muži bez chirurgického zákroku (Obrázek 2). Do skupiny lézí byli zahrnuti muži, kteří měli méně než 20% orexinových buněk ve srovnání s kontrolními zvířaty bez chirurgického zákroku. Zvířata s více než 20%, ale méně než 80%, byla zařazena do skupiny částečných lézí. Falešné kontroly neměly významné změny v počtu orexinových buněk. Statistická významnost mezi zvířaty s falešnou, částečnou a úplnou lézí byla vypočtena pomocí jednosměrného testu ANOVA a Fisher's LSD s úrovní spolehlivosti 95%.

Obrázek 2 

Verifikace léze. Reprezentativní obrázky ukazující orexinové (A) a MCH (B) buňky u zvířete s falešnou lézí, kterým byl injikován BLANK-saporin. Reprezentativní obrázky ukazující ztrátu orexinových buněk (C), ale neporušených MCH buněk (D) u zvířete léze injikovaného orexinem ...

Specifičnost léze

Aby se ověřilo, že léze byly omezeny na orexinové neurony, byla jedna řada řezů obsahujících hypotalamus z podskupiny zvířat s falešnou a lézí (n = 20) imunoprocesována na hormon koncentrující melanocyty (MCH), hypothalamický peptid, který má překrývající se polohu (ale ne kolokalizace) s orexinovými neurony (Broberger a kol., 1998) za použití králíkem zvýšené protilátky rozpoznávající MCH (králičí anti-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) a DAB, jak bylo popsáno výše. Neurony MCH exprimují ORX1 (Bäckberg a kol., 2002), ale ne ORX2 (Volgin a kol., 2004) a nejsou významně redukovány po orexin B-saporinovém ošetření (Frederick-Duus a kol., 2007). Imunoreaktivní buňky MCH byly počítány bilaterálně ve dvou řezech na zvíře (simulace: n = 7; léze n = 5), za použití alternativních řezů k těm, které byly analyzovány na orexinové neurony. Léze významně nesnížily počet neuronů MCH v PFA-DMH ani LHA (Tabulka 1; Obrázek 2b, d. Obr; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Kromě toho byla krysí indukovaná exprese cFos počítána bilaterálně v jedné reprezentativní sekci na zvíře (simulace: n = 4; léze n = 3), za použití alternativních řezů k těm, které byly analyzovány na orexinové neurony. Léze neovlivnily párování indukovanou expresi cFos v PFA-DMH nebo LHA ​​(Tabulka 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Nakonec byly reprezentativní řezy použité pro počet orexinových buněk (zvířata: simulace: n = 6; léze: n = 6) Nissl kontrastně barveny s použitím krezylové violeti (5 g krezylové violeti (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), 0.5 g trihydrátu octanu sodného (S209, Thermo Fisher Scientific, Ottawa, Ontario, Kanada), 1L dvakrát destilovaná voda s ledovou kyselinou octovou (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontario, Kanada) při pH: 3.14). Počty neuronů obarvených Nissl byly provedeny ve standardních oblastech analýzy (250 um x 200 um) v obecném umístění neuronů orexinu. Počty Nissl-obarvených neuronů se nelišily mezi falešnými a lézemními skupinami (Tabulka 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Tabulka 1 

Ověření specificity lézí: Analýza počtu neuronů obarvených na Nissl, MCH nebo pářením indukované cFos prokázala, že nedošlo k žádné významné ztrátě neuronů obecně, MCH buněk nebo páření indukované nervové aktivace v PFA-DMH nebo ...

Protože se ukázalo, že nedostatek v orexinu přispívá k narkolepsii u myší (Chemelli a kol., 1999), psi (Lin et al., 1999) a lidí (Siegel, 1999; Nishino a kol., 2000; Peyron a kol., 2000; Thannickal a kol., 2000) byla pozorována zvířata, aby byla zajištěna absence narkoleptického fenotypu. Zvířata byla pozorována po celou dobu všech behaviorálních testů hlášených v této studii a nevykazovala žádné charakteristiky narkolepsie.

Exprese cFos indukovaná pářením u zvířat s lézemi

Počty cFos imunoreaktivních buněk byly počítány bilaterálně v řezech 3 na zvířata ve standardních oblastech analýzy ve ventrální tegmentální oblasti (VTA; 900 × 900 um), mPOA (400 × 600 um); nucleus accumbens (NAc) jádro a skořápka (400 × 600 µm) a předimbické, infralimbické a přední cingulační podoblasti středního prefrontálního kortexu (mPFC) (600 × 800 µm na podoblast) pozorovaným slepým experimentálním skupinám . Počty byly zprůměrovány pro každé zvíře a byly vypočteny střední hodnoty. Statistická významnost byla vypočtena s použitím obousměrné ANOVA se sexuální zkušeností a lézí jako faktorů následovaných Fisherovým LSD testem s 95% spolehlivostí.

výsledky

Aktivace neuronů Orexinu během sexuálního chování

Významné zvýšení exprese cFos v orexinových neuronech bylo pozorováno po sexuálním chování u obou PFA-DMH (F(5,31) 63.4; p <0.001; Obrázek 3a) a LHA (F(5,31) 10.4; p <0.001; Obrázek 3b), bez vlivu sexuální zkušenosti. Konkrétně u sexuálně naivních i zkušených zvířat všechny experimentální skupiny samců vykazujících různé parametry sexuálního chování (vyšetřování anestézních samic, vystavení estetickým ženským pachům, projevy vzestupu, intromise nebo ejakulace) vykazovaly stejnou indukci cFos ve srovnání s domácími zvířaty. kontroly klecí s vyšším procentem orexinových buněk aktivovaných v PFA-DMH (60 – 80%) oproti LHA (14 – 33%), bez rozdílů mezi experimentálními skupinami. Tyto výsledky naznačují, že neurony orexinu jsou aktivovány po expozici ženě podnětu bez další aktivace během sexuální výkonnosti. Aktivace navíc nezávisí na motivaci ženského podnětu, protože u sexuálně zkušených mužů aktivace vyvolala nereaktivní i receptivní ženy.

Obrázek 3 

Orexinové neurony v PFA-DMH (A) a LHA (B) exprimovaly cFos podle všech parametrů páření u dosud neléčených a zkušených zvířat. Zkratky: HC, domácí klec; AF: anestézní žena; EF, estrous female; M, Mount; IM, Intromission; E, ejakulace. ...

Účinky lézí orexinu

Sexuální chování

Orexinové léze vedly k usnadnění sexuálního chování (doba latence: F(2,47) 3.962; p = 0.034; latence intromise: H = 9.104; p = 0.011). Během první zkoušky páření vykazovali samci lézí kratší latenci k montáži a intromisi ve srovnání s falešnými zvířaty (latence mount: p = 0.03; latence intromisi: p = 0.01; Obrázek 4a – b) a ve srovnání s latencemi během předoperační zkoušky páření (připojovací latence: p = 0.02; intromisní latence: p = 0.03; data nejsou zobrazena). Samci s částečnou lézí se významně nelišili od falešných samců a žádná skupina se nelišila od předoperační zkoušky páření. Účinky lézí na latenci hor a intromise byly zmírněny sexuálním prožitkem, protože v žádné z následujících studií nebyly rozdíly mezi skupinami (studie 4 ukázaná v Obrázek 4a – b). Ejakulace latence (Obrázek 4c), počet přípojek (Obrázek 4d) a intromise (Obrázek 4e) a také efektivitu kopulace (Obrázek 4f) se významně nelišily mezi skupinami během žádné ze studií ani v rámci každé skupiny mezi první zkouškou páření a předoperačním testem.

Obrázek 4 

Léčení Orexinem zkrátilo latenci k montáži a intromisi u sexuálně naivních mužů během pokusu 1. Orexinové léze neovlivnily páření během pokusu 4 poté, co muži získali sexuální zkušenost. (A) Mount Latency. (B) Latence intromisi. (C) Ejakulace ...
Dráhová zkouška

Orexinové léze neovlivnily sexuální motivaci hodnocenou při testu přímou dráhou u sexuálně zkušených mužů. V průběhu dvou testovacích pokusů se samci lézí běželi výrazně rychleji směrem k estrální ženě ve druhé studii ve srovnání s první studií (p = 0.03; Obrázek 5). Takový zvýšený běh je ukazatelem sexuální motivace (Lopez a kol., 1999). Během pokusu s 2em (p = 0.03) se částečné léze a falešní samci také běželi rychleji směrem k estrální ženě (p = 0.052), i když to nedosáhlo významnosti u falešných samců (p = 2). Žádná ze skupin neprokázala během pokusu s 1 zvýšenou rychlost běhu k anestézní ženě nebo muži. Kromě toho nebyly pozorovány žádné významné rozdíly mezi falešnými, částečnými a lézemními muži, pokud jde o rychlost běhu směrem k jakémukoli stimulačnímu zvířeti, a to ani v pokusu 2 ani v pokusu XNUMX, což prokazuje, že neexistují rozdíly v obecné aktivitě na dráze.

Obrázek 5 

Orexinové léze neovlivnily sexuální motivaci u sexuálně zkušených mužů. Jsou zobrazeny časy, kdy je možné během testu 1 a 2 dosáhnout estetické ženy v testu na dráze. * označuje významné zkrácení času do dosažení ženy v pokusu 2 ve srovnání s ...
Úzkostné chování

Výsledky dosud naznačují, že léze mohou usnadňovat iniciaci sexuálního chování u dosud neléčených zvířat prostřednictvím potenciálního účinku na reakce na novost a / nebo chování podobné úzkosti, když se muži setkají s novou samicí. Na podporu, muži lézí vykazovali snížené úzkostné chování na EPM, viděno jako snížené procento času stráveného v uzavřených ramenech (p = 0.012; Obrázek 6) a zvýšené procento času na otevřených ramenech (p = 0.023; Obrázek 6) ve srovnání s falešnými muži. Částečné léze neměly významný účinek. Tato data dále podporují, že léze snížila chování podobné úzkosti.

Obrázek 6 

Orexinové léze snížily chování podobné úzkosti na zvýšené plus bludiště. Procento času stráveného v uzavřených ramenech (vlevo) bylo sníženo a procento času v otevřených ramenech (vpravo) bylo zvýšeno u lézovaných mužů. * označuje významný rozdíl ...
Exprese cFos

Pro posouzení, zda endogenní orexin přispívá k párování indukované neuronální aktivace v mozkových oblastech inervovaných orexinem, byla provedena analýza párování indukované exprese cFos ve VTA, NAc jádru a skořápce, mPOA a mPFC. U lézí i falešných samců páření významně zvýšilo cFos ve všech analyzovaných oblastech mozku ve srovnání s nespojenými kontrolami (Tabulka 2). Léze neovlivnily nervovou aktivaci, protože simulovaná zvířata a zvířata lézí se nelišily v základní linii nebo pářením indukované expresi cFos.

Tabulka 2 

Páření indukovalo cFos ve skupinách s falešnou, parciální a lézí ve srovnání s kontrolami bez párování stejného stavu lézí.

Diskuse

Tyto studie zkoumaly roli endogenního orexinu v sexuální výkonnosti a motivaci u samců potkanů. Bylo zjištěno, že orexin není nezbytný pro sexuální motivaci nebo výkon. Místo toho jsou neurony orexinu aktivovány ženským podnětem, nezávisle na hormonálním stavu ženy nebo sexuálním prožívání muže. Kromě toho odstranění endogenního orexinu lézemi specifickými pro orexinové buňky snížilo úzkostné chování a usnadnilo zahájení sexuálního chování u sexuálně naivních mužů. Výsledky této studie tedy podporují roli orexinu při vzrušení (de Lecea a kol., 2006; Harris a Aston-Jones, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel a kol., 2009; Furlong a Carrive, 2009; Furlong a kol., 2009) a úzkost (Suzuki a kol., 2005; Davis a kol., 2009; Li et al., 2010), ale nepodporují kritickou roli orexinu při sexuální motivaci nebo výkonu.

Výsledky těchto studií dále objasňují roli endogenního orexinu a zjevně kontrastní nálezy předchozích studií zkoumajících roli orexinu v sexuálním chování mužů pomocí farmakologických nástrojů. Infuze exogenního orexinu-A v rámci mPOA vedly ke zvýšení sexuální vzrušení a zlepšení sexuální výkonnosti, což naznačuje, že orexin může působit v mPOA ke zvýšení motivace a výkonu sexuálního chování (Gulia a kol., 2003). Naproti tomu infuze ICV orexinu-A oslabily sexuální motivaci a vzrušení (Bai a kol., 2009), zatímco antagonista receptoru orexinu neměl žádný účinek na sexuální vzrušení (Bai a kol., 2009), což naznačuje, že endogenní orexin nemusí hrát roli při sexuální motivaci. Nakonec se ukázalo, že blokáda ORX1 pomocí systémových injekcí pouze mírně zhoršuje kopulační výkon (Muschamp a kol., 2007). Z těchto protichůdných studií lze vyvodit několik závěrů. Zaprvé, aplikace exogenního orexinu-A může ovlivnit chování, ale blokáda ORX1 je bez významných účinků, což naznačuje malou roli endogenního orexinu v regulaci sexuálního chování mužů (Bai a kol., 2009). Současné výsledky tuto možnost podporují. Současné studie využívající odstranění orexinu pomocí lézí specifických pro orexinové buňky ukazují, že endogenní orexin není nezbytný pro sexuální motivaci nebo výkon, v souladu s pozorováním Bai a kol. (2009). Je však důležité si uvědomit, že nedostatek účinků lézí orexinu na sexuální motivaci v dráze může být způsoben skutečností, že zvířata získala sexuální zkušenost před testováním sexuální motivace, a proto může být nedostatek účinku v dráze testem na sexuální zkušenost mužů. Budoucí experimenty mohou tuto námitku řešit testováním účinků lézí orexinů na sexuální motivaci naivních mužů.

Je také možné, že dva orexinové ligandy a dva podtypy receptorů orexinu (ORX1 a ORX2; Sakurai a kol., 1998) mohou regulovat sexuální chování v opačných směrech. Použitím technik léze orexinových buněk byly v současné studii eliminovány ligandy pro oba podtypy receptorů orexinu (orexin-A a B). Dva podtypy receptorů jsou exprimovány v různých oblastech mozku (Trivedi a kol., 1998; Marcus a kol., 2001) a bylo prokázáno, že odlišně regulují paměť pro vyhledání kokainu vyvolaného narážkou (Smith a kol., 2009). Předchozí studie sexuálního chování se primárně zaměřily na roli orexinu-A a ORX1 (viz diskuse výše). Antagonista orexinového receptoru SB334867 používaný ve studiích se dosud konkrétně zaměřuje na ORX1, který má vysokou afinitu k orexinu-A a významně nižší afinitu k orexinu-B (Sakurai a kol., 1998). Podobně byl orexin-A používán jako exogenní orexin v předchozích studiích (Gulia a kol., 2003; Bai a kol., 2009). Budoucí studie jsou nezbytné k prozkoumání úlohy orexinu-B a ORX2 při regulaci sexuálního chování mužů.

Současná studie testovala účinky dlouhodobé ztráty orexinu. Muschamp a kol. (2007) navrhl, že dlouhodobé snížení orexinu po kastraci může být příčinou ztráty sexuální motivace a výkonu. Tato hypotéza byla v rozporu se současnými zjištěními, protože léze orexinových buněk nesnížily sexuální motivaci nebo výkon. Je možné, že dlouhodobá ztráta orexinu v současné studii mohla mít za následek kompenzační mechanismy, ačkoli nebyly detekovány žádné změny v nervové aktivaci vyvolané pářením v obvodu zprostředkujícím sexuální chování. Je však zřejmé, že snížení nebo nedostatek orexinu nebrání sexuálnímu chování. Kromě toho výsledky současné studie nepodporují hlavní roli orexinu při indukci exprese cFos sexuálním chováním. Bylo jasně prokázáno, že orexin přispívá k aktivaci neuronů ve VTA (Korotkova a kol., 2003; Borgland a kol., 2006; Narita a kol., 2006; Vittoz a kol., 2008). Léze orexinových buněk však neblokovaly nervovou aktivaci indukovanou párováním ve VTA ani v žádné jiné analyzované mozkové oblasti související s odměnou, navzdory přítomnosti orexin imunoreaktivních vláken v těsné blízkosti aktivovaných neuronů u fingovaných mužů. Zdá se tedy, že nervová aktivace vyvolaná pářením v těchto oblastech mozku není závislá na působení orexinu.

Trochu neočekávaným zjištěním současné studie byl účinek lézí orexinů na usnadnění zahájení sexuálního chování u dosud neléčených, ale dosud nezažívaných zvířat. Ukázalo se, že to souvisí se snížením chování podobného úzkosti. Proto mohou být účinky orexinových lézí na sexuální motivaci a výkon sekundární k jeho účinkům na úzkost a vzrušení. Skutečně předchozí studie navrhly roli orexinu v úzkosti, protože ICV infúze orexinu-A zkrátila dobu na otevřených ramenech EPM u myší (Suzuki a kol., 2005). Infúze orexinu-A do paraventrikulárního jádra talamu samců potkanů ​​zkrátila čas strávený ve středové oblasti otevřené pole a snížila průzkum nových předmětů, což naznačuje, že orexin může být zapojen do vytváření úzkostného chování (Li et al., 2010). Navíc dominantní samci potkanů, kteří vykazují zvýšené riziko podstupování EPM, mají zvýšené hladiny ORX1 mRNA v mPFC (Davis a kol., 2009). Ukázalo se také, že Orexin mění reakce na stres (Ida a kol., 1999; Ida a kol., 2000) a stimulace orexinových receptorů zvyšuje uvolňování faktoru uvolňujícího kortikotropin (Al-Barazanji a kol., 2001; Singareddy et al., 2006), kortikosteron (Ida a kol., 2000; Kuru a kol., 2000) a adrenokortikotropního hormonu (Kuru a kol., 2000). Antagonisté orexinu jsou v současné době v klinických studiích pro léčbu nespavosti, což je porucha, která je často komorbidní s úzkostnými poruchami (Sullivan a Neria, 2009) a předpokládá se, že antagonisty orexinu by mohly být potenciálně použity k léčbě úzkostných poruch (Mathew a kol., 2008). Vzhledem k rostoucímu množství důkazů o roli orexinu v úzkosti a vzrušení se zdá, že léze orexinu mohou usnadnit iniciaci sexuálního chování u naivních mužů snížením úzkostných odpovědí spojených se zavedením nového stimulu, tj. Ženy.

Významná aktivace orexinových neuronů byla pozorována po sexuálním vzrušení a sexuálním chování u sexuálně naivních i zkušených zvířat u PFA-DMH a LHA, přičemž 60 – 80% a 14 – 33% orexinových buněk exprimovaly cFos. Existuje řada důkazů podporujících dichotomii v orexinové neuronální funkci v populaci orexinových buněk, přičemž PFA-DMH je kriticky zapojen do vzrušení a LHA je kritická pro chování související s odměnami (Harris a kol., 2005; Harris a Aston-Jones, 2006, Aston-Jones, 2009a). Proto aktivace orexinových buněk PFA-DMH ženským podnětem podporuje hypotézu, že orexin je aktivován a je kritický pro vzrušení, včetně sexuálního vzrušení u naivních a zkušených mužů a úzkosti spojené s novým ženským podnětem u naivních mužů. Buňky PFA-DMH však byly aktivovány na podobných úrovních nezávisle na zkušenostech mužů a hormonálním stavu ženy, což naznačuje, že buňky PFA-DMH byly aktivovány během obecného vzrušení, a nikoliv konkrétně sexuálním vzrušením. Naše studie navíc plně nepodporují existenci zcela dichotomní populace orexinových buněk, protože došlo k významné aktivaci LHA po expozici všem parametrům sexuálního vzrušení a výkonu, bez ohledu na to, zda chování bylo spojeno s odměnou. Zkušení samci vystavení anestézním ženám tedy vykazovali stejné úrovně aktivace orexinových buněk v LHA ve srovnání se zkušenými muži, kteří se kopulovali k ejakulaci. Pouze druhá skupina však bude vytvářet podmíněné místo pro párování (Tenk a kol., 2009); což naznačuje, že splynutí s ejakulací je přínosnější než jiné prvky páření. Současná studie konkrétně netestovala roli orexinu v sexuální odměně; k řešení této otázky jsou proto zapotřebí budoucí studie.

Souhrnně lze říci, že výsledky těchto studií prokazují, že orexin není rozhodující pro sexuální výkon nebo motivaci. Místo toho bylo prokázáno, že léze orexinových buněk snižují úzkost, což naznačuje, že endogenní orexin se podílí na zvyšování úzkosti. Navíc odstranění orexinu mělo za následek usnadnění iniciace sexuálního chování u sexuálně naivních mužů, což naznačuje, že endogenní orexin může inhibovat zahájení páření, možná zvýšením úzkosti v reakci na nový podnět, tj. Samici. Tato zjištění dále objasňují nervové obvody zapojené do sexuální výkonnosti a úzkosti a přidávají rostoucímu množství literatury o úloze orexinu při zprostředkování vzrušení a úzkosti.

Poděkování

Tento výzkum byl podporován granty od Národních institutů zdraví (R01 DA014591), Kanadských ústavů pro výzkum zdraví (RN 014705), a Národní rady pro vědecké a technické výzkumy Kanady (Discovery Grant (341710)) LMC.

Poznámky pod čarou

Zřeknutí se odpovědnosti vydavatele: Jedná se o soubor PDF s neupraveným rukopisem, který byl přijat k publikaci. Jako službu pro naše zákazníky poskytujeme tuto ranní verzi rukopisu. Rukopis podstoupí kopírování, sázení a přezkoumání výsledného důkazu před jeho zveřejněním ve své konečné podobě. Vezměte prosím na vědomí, že během výrobního procesu mohou být objeveny chyby, které by mohly ovlivnit obsah, a veškeré právní odmítnutí týkající se časopisu.

Reference

  1. Agmo A. Mužské potkanové sexuální chování. Brain Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S., Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Centrální orexin-A aktivuje hypotalamo-hypofyzární-nadledvinovou osu a stimuluje hypothalamický faktor uvolňující kortikotropin a neurony arginin vasopressinu u potkanů ​​při vědomí. J Neuroendocrinol. 2001; 13: 421 – 424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. Role laterálních hypothalamických orexinových neuronů ve zpracování odměn a závislosti. Neurofarmakologie. 2009a; 56 Suppl 1: 112 – 121. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Richardson KA. Boční hypothalamický neuron orexinu / hypocretinu: Role při hledání odměn a závislosti. Brain Res. 2009b; 1314: 74 – 90. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A zeslabuje nepodmíněnou sexuální motivaci u samců potkanů. Pharmacol Biochem Behav. 2009; 91: 581 – 589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S., Meister B. Orexinový receptor-1 (OX-R1) imunoreaktivita v chemicky identifikovaných neuronech hypotalamu: zaměření na cíle orexinu zapojené do kontroly příjmu potravy a vody. Eur J. Neurosci. 2002; 15: 315 – 328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Překrývající se distribuce imunoreaktivních vláken orexinu / hypocretinu a dopaminu-beta-hydroxylázy v mozkových oblastech potkana zprostředkující vzrušení, motivaci a stres. J Comp Neurol. 2003; 464: 220 – 237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Sexuální chování a environmentální příznaky spojené s pohlavím aktivují mezolimbický systém u samců potkanů. Neuropsychopharmacology. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  9. Benoit SC, Tracy AL, Davis JF, Choi D, Clegg DJ. Nové funkce orexigenních hypothalamických peptidů: od genů k chování. Výživa. 2008; 24: 843 – 847. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Orexin A ve VTA je rozhodující pro indukci synaptické plasticity a behaviorální senzibilizace na kokain. Neuron. 2006; 49 (4): 589 – 601. [PubMed]
  11. Boutrel B, Cannella N, de Lecea L. Role hypokretinu při řízení vzrušení a chování orientovaného na cíl. Brain Res. 2009 [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. Úloha pro hypocretin při zprostředkování stresem navozeného opětovného navádění chování při hledání kokainu. Proc Natl Acad Sci USA A. 2005; 102: 19168 – 19173. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  13. Buňky Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Hokfelt T. Hypocretin / orexin a melanin koncentrující hormon tvoří různé populace v hlodavčím laterálním hypotalamu: vztah k neuropeptidovému Y a proteinovému systému souvisejícímu s agouti genem. J Comp Neurol. 1998; 402: 460 – 474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Mozkové hypokretiny a jejich receptory: mediátory alostatického vzrušení. Curr Opin Pharmacol. 2009; 9: 39 – 45. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Willie JT, Sinton CM, Elmquist JK, Scammell T, Lee C, Richardson JA, Williams SC, Xiong Y, Kisanuki Y, Fitch TE, Nakazato M, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa M. Narcolepsy u orexinových knockout myší : molekulární genetika regulace spánku. Buňka. 1999; 98: 437 – 451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Imunoreaktivita podobná orexinu A v mozku krysy. Neurosci Lett. 1999; 260: 161 – 164. [PubMed]
  17. Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Úloha orexinu-A v motivaci potravy, stravovacím chování založeném na odměnách a neuronální aktivaci vyvolané potravou u potkanů. Neurovědy. 2010; 167: 11 – 20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Dominantní krysy jsou příjemci přírodních rizik a projevují zvýšenou motivaci pro odměnu za jídlo. Neurovědy. 2009; 162: 23 – 30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Závislost a vzrušení: alternativní role hypothalamických peptidů. J. Neurosci. 2006; 26 (41): 10372 – 10375. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol AN, Blo FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Hypocretiny: hypothalamus-specifické peptidy s neuroexcitační aktivitou. Proc Natl Acad Sci USA A. 1998; 95: 322 – 327. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  21. Dewsbury DA. Kopulační chování potkanů ​​(Rattus norvegicus) jako funkce předchozí kopulační zkušenosti. Anim Behav. 1969; 17: 217 – 223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Anatomické substráty interakce orexin-dopamin: laterální hypothalamické projekce do ventrální tegmentální oblasti. Neurovědy. 2002; 111: 379 – 387. [PubMed]
  23. Frederick-Duus D, Guyton MF, Fadel J. Zvýšení uvolňování kortikálního acetylcholinu vyvolané potravou vyžaduje přenos orexinu. Neurovědy. 2007; 149: 499 – 507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Neurotoxické léze zaměřené na perifornický hypotalamus ruší kardiovaskulární a behaviorální reakce podmíněného strachu na kontext, ale nikoli omezování. Brain Res. 2007; 1128: 107 – 119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Liu L, Carrive P. Hypocretin / orexin přispívá k expresi některých, ale ne všech forem stresu a vzrušení. Eur J Neurosci. 2009; 8: 1603 – 1614. [PubMed]
  26. Gerashchenko D, Kohls MD, Greco M, Waleh NS, Salin-Pascual R, Kilduff TS, Lappi DA, Shiromani PJ. Hypocretin-2-saporinové léze laterálního hypotalamu vyvolávají u potkana narkoleptické spánkové chování. J Neurosci. 2001; 21: 7273 – 7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Kumar VM. Aplikace orexinu A (hypocretin-1) ve střední preoptické oblasti potencuje sexuální chování u potkanů. Neurovědy. 2003; 116: 921 – 923. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Taylor SG, Routledge C, Hemmati P, Munton RP, Ashmeade TE, Shah AS, Hatcher JP, Hatcher PD, Jones DN, Smith MI , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Upton N. Orexin A aktivuje aktivaci buněk locus coeruleus a zvyšuje vzrušení u potkanů. Proc Natl Acad Sci USA A. 1999; 96: 10911 – 10916. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  29. Harris GC, Aston-Jones G. Vzrušení a odměna: dichotomie ve funkci orexinu. Trendy Neurosci. 2006; 29: 571 – 577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Úloha pro laterální hypotalamické orexinové neurony v hledání odměny. Příroda. 2005; 437 (7058): 556 – 559. [PubMed]
  31. Horvath TL, Peyron C, Diano S, Ivanov A, Aston-Jones G, Kilduff TS, van Den Pol AN. Aktivace hypocretinu (orexin) a synaptická inervace noradrenergního systému lokus coeruleus. J Comp Neurol. 1999; 415: 145 – 159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Vliv laterální cerebroventrikulární injekce neuropeptidu stimulujícího chuť k jídlu, orexinu a neuropeptidu Y, na různé behaviorální aktivity potkanů. Brain Res. 1999; 821: 526 – 529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Možné zapojení orexinu do stresové reakce u potkanů. Biochem Biophys Res Commun. 2000; 270: 318 – 323. [PubMed]
  34. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Excitace dopaminergních a nondopaminergních neuronů ventrální tegmentální oblasti orexiny / hypokretiny. J Neurosci. 2003; 23 (1): 7 – 11. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Centrálně podávaný orexin / hypocretin aktivuje osu HPA u potkanů. Neuroreport. 2000; 11: 1977 – 1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Změny emočního chování vyvolané mikroinjekcemi orexinu v paraventrikulárním jádru thalamu. Pharmacol Biochem Behav. 2010; 95: 121 – 128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, de Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Narkolepsie psí narušení spánku je způsobena mutací v genu 2 hypokretinového (orexinového) receptoru . Buňka. 1999; 98: 365 – 376. [PubMed]
  38. Lopez HH, Olster DH, Ettenberg A. Sexuální motivace u samců potkanů: role primárních pobídek a kopulačních zkušeností. Horm Behav. 1999; 36: 176 – 185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Diferenciální exprese orexinových receptorů 1 a 2 v mozku potkana. J Comp Neurol. 2001; 435: 6 – 25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Interakce hypokretinů s neurotransmitery v nucleus accumbens. Regul Pept. 2002: 104: 111 – 117. [PubMed]
  41. Mathew SJ, Cena RB, Charney DS. Nedávný pokrok v neurobiologii úzkostných poruch: důsledky pro nová terapeutika. Am J Med Genet C Seminář Med Genet. 2008; 148C: 89 – 98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. Role hypokretinu (orexinu) v mužském sexuálním chování. J Neurosci. 2007; 27: 2837 – 2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Diferenciální účinky antagonisty receptoru hypocretinu 1 SB 334867 na samoadministraci s vysokým obsahem tuků a obnovení vyhledávání potravy u potkanů. Br J Pharmacol. 2008; 154: 406 – 416. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  44. Narita M, Nagumo Y, Hashimoto S, Khotib J, Miyatake M, Sakurai T, Yanagisawa M, Nakamachi T, Shioda S, Suzuki T. Přímé zapojení orexinergních systémů do aktivace mezolimbické dopaminové dráhy a související chování vyvolané morfinem. J Neurosci. 2006; 26: 398 – 405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Hypocretin (orexin) nedostatek u lidské narkolepsie. Lanceta. 2000; 355: 39 – 40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Krysí mozek ve stereotaxických souřadnicích. San Diego, CA: Academic Press; 1998.
  47. Peyron C, Faraco J, Rogers W, Ripley B, Overeem S, Charnay Y, Nevsimalova S, Aldrich M, Reynolds D, Albin R, Li R, Hungs M, Pedrazzoli M, Padigaru M, Kucherlapati M, Fan J, Maki R , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot E. Mutace v případě narkolepsie s časným nástupem a generalizované absence hypokretinových peptidů v lidských narkoleptických mozcích. Nat Med. 2000; 6: 991 – 997. [PubMed]
  48. Peyron C, Tighe DK, van den Pol AN, de Lecea L, Heller HC, Sutcliffe JG, Kilduff TS. Neurony obsahující hypocretin (orexin) se promítají do mnoha neuronálních systémů. J Neurosci. 1998; 18: 9996 – 10015. [PubMed]
  49. Sakurai T. Role orexinů a orexinových receptorů v centrální regulaci chování při krmení a homeostáze energie. CNS Neurol Disord Drug Cíle. 2006; 5: 313 – 325. [PubMed]
  50. Sakurai T. Neurální obvod orexinu (hypocretin): udržování spánku a bdění. Nat Rev Neurosci. 2007; 8: 171 – 181. [PubMed]
  51. Sakurai T, Amemiya A, Ishii M, Matsuzaki I, Chemelli RM, Tanaka H, ​​Williams SC, Richardson JA, Kozlowski GP, Wilson S, Arch JR, Buckingham RE, Haynes AC, Carr SA, Annan RS, McNulty DE, Liu WS , Terrett JA, Elshourbagy NA, Bergsma DJ, Yanagisawa M. Orexiny a orexinové receptory: rodina hypothalamických neuropeptidů a receptorů spojených s G proteiny, které regulují chování při krmení. Buňka. 1998; 92: 573 – 585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS exprese v orexinových neuronech po muscimolové perfuzi preoptické oblasti. Neuroreport. 2004; 15: 1127 – 1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Narkolepsie: klíčová role pro hypokretiny (orexiny) Buňka. 1999; 98: 409 – 412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Diferenciální účinky hypokretinů na šum samotný versus zesílené překvapivé reakce. Physiol Behav. 2006; 89: 650 – 655. [PubMed]
  55. Smith RJ, viz RE, Aston-Jones G. Orexin / hypocretinová signalizace na receptoru orexinu 1 reguluje vyhledávání kokainu vyvolaného cue. Eur J Neurosci. 2009; 30: 493 – 503. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  56. Solomon A, De Fanti BA, Martinez JA. Periferní ghrelin interaguje s orexinovými neurony v glukostatické signalizaci. Regul Pept. 2007; 144: 17 – 24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Farmakoterapie u posttraumatických stresových poruch: důkaz z randomizovaných kontrolovaných studií. Curr Opin Investig Drugs. 2009; 10: 35 – 45. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai T. Orexin-A (hypocretin-1) se pravděpodobně podílí na vytváření chování podobného úzkosti. Brain Res. 2005; 1044: 116 – 121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Sexuální odměna u samců potkanů: účinky sexuálního zážitku na podmíněné preference místa spojené s ejakulací a intromacemi. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Snížený počet neuronů hypocretinu při lidské narkolepsii. Neuron. 2000; 27: 469 – 474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Levine AS, Kotz CM. Centrálně podávaný orexin A zvyšuje motivaci sladkých pelet potkanů. Psychofarmakologie (Berl) 2005; 182: 75 – 83. [PubMed]
  62. Trivedi P, Yu H, MacNeil DJ, Van der Ploeg LH, Guan XM. Distribuce mRNA orexinového receptoru v mozku potkana. FEBS Lett. 1998; 438: 71 – 75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Hypocretin / orexin přednostně aktivuje dopaminové neurony kaudomediální ventrální tegmentální oblasti. Eur J Neurosci. 2008; 28: 1629 – 1640. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  64. Volgin DV, Swan J, Kubin L. Profilování exprese genů jednobuněčné RT-PCR genu akutely. disociované a imunocytochemicky identifikované centrální neurony. J. Neurosciho metody. 2004; 136: 229 – 236. [PubMed]