DeltaFosB v Nucleus Accumbens je kritická pro posílení účinků sexuální odměny. (2010)

KOMENTÁŘE: Delta FosB je značka pro všechny závislosti, jak behaviorální, tak chemické. Jak se tato molekula zvyšuje v okruhu odměn, zvyšuje se i návykové chování. Je to jedna z molekul podílejících se na neuroplastických změnách. Tento experiment ukazuje, že se zvyšuje se sexuální zkušeností, podobně jako u drogových závislostí. V experimentu použili genetické inženýrství ke zvýšení jeho úrovní nad „normální“. To mělo za následek lepší usnadnění sexuální aktivity. Myslíme si, že k tomu dochází u závislosti na pornografii.


FULL STUDY

Džbány KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM.

Genes Brain Behav. 2010 Oct; 9 (7): 831-40 doi: 10.1111 / j.1601-183X.2010.00621.x. Epub 2010 Aug 16.

Oddělení anatomie a buněčné biologie, Schulichova lékařská škola a stomatologie, University of Western Ontario, Londýn, Ontario, Kanada.

Abstrakt

Sexuální chování u samců potkanů ​​je obohacující a posilující. Nicméně je málo známo o specifických buněčných a molekulárních mechanismech, které zprostředkovávají sexuální odměnu nebo o posilujícím účinku odměny na následné vyjádření sexuálního chování. Tato studie testuje hypotézu, že ΔFosB, stabilně vyjádřená zkrácená forma FosB, hraje rozhodující roli při posílení sexuálního chování a zkušenosti vyvolané usnadnění sexuální motivace a výkonu.

Bylo prokázáno, že sexuální zkušenost způsobuje akumulaci ΔFosB v několika limbických oblastech mozku, včetně jádra accumbens (NAc), mediální prefrontální kůru, ventrální tegmentální oblast a caudate putamen, ale ne mediální preoptické jádro.

Dále byla u sexuálně zkušených a naivních zvířat měřena indukce c-Fos, downstream (potlačení) cíle ΔFosB. Počet zvířat c-Fos-imunoreaktivních buněk indukovaných pářením byl u sexuálně zkušených zvířat významně snížen ve srovnání s sexuálně nedovolenými kontrolami.

Nakonec byly hladiny ΔFosB a její aktivita v NAc manipulovány pomocí virového zprostředkování genového přenosu, aby se zjistila jeho potenciální úloha při zprostředkování sexuálních zkušeností a zkušeností vyvolaných zjednodušení sexuální výkonnosti. Zvířata s nadměrnou expresí ΔFosB prokázaly zlepšení sexuální výkonnosti se sexuální zkušeností v porovnání s kontrolami. Naproti tomu exprese ΔJunD, dominantního negativního vazebného partnera ΔFosB, zeslabila sexuální výkonnost indukovanou sexuální zkušeností a prodlouženou dlouhodobou udržovací facilitaci v porovnání se zeleným fluorescenčním proteinem a nadpřirozenými skupinami ΔFosB.

Společně tyto poznatky podporují kritickou úlohu pro expresi ΔFosB v NAc pro posílení účinků sexuálního chování a sexuálně motivovaných sexuálních zkušeností.

ÚVOD

Sexuální chování je vysoce obohacující a posilující pro mužské hlodavce (Coolen a kol. 2004; Pfaus et al. 2001). Navíc sexuální zkušenost pozměňuje následné sexuální chování a odměnu (Tenk et al. 2009). Při opakovaném zážitku z páření je pohlavní chování usnadněno nebo "zesíleno", což svědčí o snížení latencí, aby bylo možné zahájit páření a usnadnit sexuální výkon (Balfour et al. 2004; Pfaus et al. 2001). Podkladové buněčné a molekulární mechanismy sexuální odměny a vyztužení jsou však špatně pochopitelné. Bylo prokázáno, že sexuální chování a podmíněné podněty, které předpovídají páření, přechodně vyvolávají expresi okamžitého časného genu c-fos v mezolimbickém systému samců potkanů ​​(Balfour et al. 2004; Pfaus et al. 2001). Navíc bylo nedávno prokázáno, že sexuální zkušenost indukuje dlouhodobou neuroplasticitu v mezolimbickém systému krysích samců (Frohmader et al. 2009; Džbány et al. 2010). Navíc u samců potkanů ​​bylo prokázáno, že sexuální zkušenost indukuje AFosB, a Člen rodiny Fos, v nucleus accumbens (NAc) (Wallace et al. 2008). ΔFosB, zkrácený spletení variant FosB, je díky své větší stabilitě jedinečný člen rodiny Fos (Carle et al. 2007; Ulery-Reynoldsová et al. 2008; Ulery et al. 2006) a hraje roli v zlepšené motivaci a odměně za drogy zneužívání a dlouhodobou neurální plasticitu zprostředkovávající závislost (Nestler et al. 2001). ΔFosB tvoří komplex heteromerického transkripčního faktoru (aktivátorový protein-1 (AP-1)) s proteiny Jun, přednostně JunDChen et al. 1995; Hiroi et al. 1998). Prostřednictvím indukovatelné nadměrné exprese ΔFosB, primárně omezené na striatum s použitím bi-transgenních myší, se produkuje behaviorální fenotyp podobný drogám, a to navzdory absenci předchozí expozice léčiva (McClung et al. 2004). Tento behaviorální fenotyp zahrnuje senzibilizovanou lokomotorickou odpověď na kokain (Kelz et al. 1999), zvýšené preference kokainu (Kelz et al. 1999) a morfin (Zachariou et al. 2006) a zvýšenou samo-administrací kokainu (Colby et al. 2003).

Podobně jako odměna léku je ΔFosB upregulován přirozeným odměňujícím se chováním a zprostředkovává vyjádření tohoto chování. Nadměrná exprese ΔFosB v modelu NAc pomocí modelů hlodavců zvyšuje dobrovolný chod kola (Werme et al. 2002), instrumentální reakce na jídlo (Olausson et al. 2006), příjem sacharózy (Wallace et al. 2008), a usnadňuje mužům (Wallace et al. 2008) a ženy (Bradley et al. 2005) sexuální chování. Tak, AFosB může být zapojen do zprostředkování účinků přirozených odměňujících zkušeností. Tsoučasná studie se rozšiřuje na předchozí studie konkrétním vyšetřením úlohy ΔFosB v NAC v dlouhodobých výsledcích sexuální zkušenosti s následným chováním a nervovou aktivací v mezolimbickém systému.

  • Za prvé, bylo zjištěno, které oblasti mozku, které se podílejí na odměňování a sexuálním chování, vyjadřují ΔFosB vyvolané sexuálními zkušenostmi.
  • Dále, účinek sexuálně prožitého ΔFosB indukovaného exprese c-Fos indukovaného sexuálním zážitkem, což je cílový cíl potlačený pomocí ΔFosB (Renthal et al. 2008), byl zkoumán.
  • Nakonec byl určen účinek manipulace s aktivitou ΔFosB v NAc (genová nadměrná exprese a exprese dominantního partnera negativního vazby) na sexuální chování a zkušenosti vyvolané zprostředkování sexuální motivace a výkonu s použitím technologie dodávání virových vektorů.

METODY

Zvířata

Dospělí samci krys Sprague Dawley (200-225 gramy) byli získáni od Charles River Laboratories (Senneville, QC, Kanada). Zvířata byla umístěna v plexisklových klecích s tunelovou trubicí v párech stejného pohlaví v průběhu experimentů. Místnost kolonie byla regulována teplotou a udržována na cyklu 12 / 12 hr světle tmavé s jídlem a vodou podle libosti s výjimkou testování chování. Stimulační samice (210-220 gramů) pro páření se zúčastnily subkutánního implantátu obsahujícího 5% estradiolbenzoátu a 95% cholesterolu po bilaterální ovariektomii v hluboké anestezii (0.35g ketamin / 0.052g Xylazine). Sexuální receptivita byla vyvolána podáním 500μg progesteronu v sezamovém oleji 0.1 mL přibližně 4 hodin před testováním. Všechny postupy byly schváleny Výborem pro péči o zvířata a užitím na Univerzitě v západním Ontariu a byly v souladu s pokyny CCAC týkajícími se obratlovců ve výzkumu.

Sexuální chování

Během časné tmavé fáze (mezi 2-6 hodinami po začátku tmavého období) a podtlumeným červeným osvětlením došlo k páření. Před nástupem experimentu byla zvířata náhodně rozdělena do skupin. Během páření se samci potkanů ​​ponechali kopulovat na ejakulaci nebo 1 hodinu a zaznamenaly se parametry pro sexuální chování včetně: latence (ML, čas od zavedení ženy do první expozice), latentní intromise (IL, čas od zavedení (EL, doba od první intromise po ejakulaci), interval po ejakulaci (PEI, čas od ejakulace po první následnou intromission), počet podpěr (M, pánevní výtlak bez vaginálního podání penetrace), počet intromise (IM, fixace včetně vaginální penetrace) a účinnost kopulace (CE = IM / (M + IM)) (Agmo 1997). Počty nosičů a intromise nebyly zahrnuty do analýzy u zvířat, která nevykazovala ejakulaci. Pevnostní a intromise latence jsou parametry indikující sexuální motivaci, zatímco ejakulační latence, počet úchylek a kopulační účinnost odrážejí sexuální výkonnost (Hull 2002).

Experiment 1: Exprese ΔFosB

Sexuálně naivní samci potkanů ​​se nechali spárovat v čistých testovacích klecích (60 × 45 × 50 cm) pro 5 po sobě jdoucí, denní páření nebo zůstalo sexuálně naivní. Doplňková tabulka 1 (NNS; n = 5), naivní sex (NS; n = 5), bez pohlaví (ENS, n = 5) a zkušený sex (ES, n = 4). NS a ES zvířata byla usmrcena 1 hodinu po ejakulaci v poslední den páření za účelem vyšetření exprese c-Fos indukovaného pářením. Zvířata NNS byla usmrcena souběžně s živými zvířaty ENN 24 hodiny po konečném páření k prozkoumání ΔFosB vyvolaného sexuálními zkušenostmi. Sexuálně zkušené skupiny byly shromážděny pro sexuální chování před následným testováním. Mezi skupinami nebyly zjištěny žádné významné rozdíly v jakýchkoli opatřeních týkajících se chování v rámci vhodného sňatku a zkušenosti získané oběma skupinami (Doplňková tabulka 2). Ovládací prvky zahrnovaly sexuálně naivní samce, které se současně ošetřovaly s pářeními zvířat, které zajišťují vystavení ženám pachům a vokalizacím bez přímého kontaktu žen.

Pro usmrcení byly zvířata hluboce anestetizována za použití pentobarbitalu sodného (270mg / kg; ip) a intrakardiálně perfundovány 50 ml 0.9% fyziologického roztoku a následně 500 ml 4% paraformaldehydu v fosfátovém pufru 0.1 M (PB). Mozky byly odstraněny a následně fixovány na 1 h při pokojové teplotě ve stejném fixačním činidle, potom ponořeny do 20% sacharózy a 0.01% azidu sodného v 0.1 M PB a uloženy při 4 ° C. Koronální řezy (35 μm) byly rozřezány zmrazením mikrotromu (H400R, Micron, Německo), které byly shromážděny ve čtyřech paralelních řadách v roztoku kryoprotektantu (30% sacharózy a 30% ethylenglykolu v 0.1 M PB) a skladovány při -20 ° C. Volné plovoucí úseky byly intenzivně promyty fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem 0.1 M (PBS, pH 7.3-7.4) mezi inkubacemi. Části byly vystaveny 1% H2O2 pro 10 min při pokojové teplotě za účelem zničení endogenních peroxidáz, pak se blokuje v PBS + inkubačním roztoku, kterým je PBS obsahující 0.1% bovinní sérový albumin (katalogová položka 005-000-121; Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) a 0.4% Triton X -100 (katalogová položka BP151-500; Sigma-Aldrich) pro 1 h. Sekce byly pak inkubovány přes noc při teplotě 4 ° C v poly-koncové protilátce králičího pan-FosB (1: 5K; sc-48 Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Pan-FosB protilátka byla vznesena proti vnitřní oblasti sdílené FosB a ΔFosB. ΔFosB-IR buňky byly specificky ΔFosB-pozitivní, protože v době po stimulaci (24 hodinách) byl veškerý detekovatelný stimulačně indukovaný FosB degradován (Perrotti et al. 2004; Perrotti et al. 2008). Navíc v tomto pokusu byla zvířata po posledním dni (NS, ES) usmrcena 1 h po páření, tedy před expresí FosB. Western blot analýza potvrdila detekci ΔFosB při přibližně 37 kD. Po inkubaci primárních protilátek byly sekcie inkubovány pro 1 h v kozích anti-králičích IgG konjugovaných s biotinem (1: 500 v PBS +, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) a potom 1 h v peroxidáze avidin-biotin-hoseradish peroxidase , 1: 1K v PBS, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Po této inkubaci byly úseky zpracovány jedním z následujících způsobů:

1. Označení jedné peroxidázy

Části zvířat NNS a ENS byly použity pro mozkovou analýzu nahromadění ΔFosB indukované sexuálními zkušenostmi. Po ABC inkubaci byl peroxidázový komplex vizualizován po ošetření 10 minut na chromogenový roztok obsahující 0.02% 3,3'-diaminobenzidin-tetrahydrochlorid (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) s 0.02% síranem nikelnatým v 0.1 M PB s peroxid vodíku (0.015%). Sekce byly důkladně promyty v 0.1 M PB, aby se ukončila reakce a namontovala se na kódované Skleněné sklíčka Superfrost plus (Fisher, Pittsburgh, PA, USA) s 0.3% želatinou v ddH20. Po dehydrataci byly všechny sklíčka pokryty pokryty DPX (dibutylftalát xylen).

2. Duální imunofluorescence

Pro analýzu ΔFosB a c-Fos byly použity sekce ze všech čtyř experimentálních skupin obsahujících NAc a mPFC. Po inkubaci ABC byly sekce inkubovány pro 10 min s biotinylovaným tyramidem (BT, 1: 250 v PBS + 0.003% H2O2 Tyramid Signal Amplification Kit, NEN Life Sciences, Boston, MA) a pro 30 min s Alexa 488-konjugovaným strepavidinem (1: 100, Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Sekce byly potom inkubovány přes noc s polyklonální protilátkou králíka specificky rozpoznávajícím c-Fos (1: 150; sc-52; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), následovanou inkubací 30 min s sekundární protilátkou konjugovanou s kozím anti-králičím Cy3 (1: 200, Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA, USA). Po vyfarbení byly části důkladně promyty v 0.1 M PB, namontovány na sklíčka s kódovaným sklem s 0.3% želatinou v ddH20 a krycím klouzáním s vodným médiem (Gelvatol) obsahujícím protizánětlivé činidlo 1,4-diazabicyklo (2,2) oktan (DABCO, 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Imunohistochemické kontroly zahrnovaly vynechání jedné nebo obou primárních protilátek, což vedlo k nepřítomnosti značení ve vhodné vlnové délce.

Analýza dat

Mozková analýza ΔFosB

Dva experimentovaní slepí k léčbě prováděli rozsáhlé vyšetření mozku na kódovaných diapozitivích. DFosB-imunoreaktivní (-IR) buňky v celém mozku byly semikvantitativně analyzovány pomocí stupnice, aby reprezentovaly počet buněk pozitivních na ΔFosB, jak je uvedeno v Tabulka 1. Navíc se na základě semikvantitativních nálezů počítali počty buněk ΔFosB-IR za použití standardních oblastí analýzy v oblastech mozku, které se podílely na odměňování a sexuálním chování, pomocí kamery na snímání kamery lucida připojené k mikroskopu Leica DMRD (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar , Německo): NAc (jádro (C) a skořápka (S), 400 × 600μm) analyzované na třech úrovních rostral-caudální (Balfour et al. 2004); ventrální tegmentální oblast (VTA, 1000 × 800μm) analyzované na třech úrovníchch rostrál-kaudální (Balfour et al. 2004) a VTA ocasu (Perrotti et al. 2005); prefrontální kortex (přední oblast cinglulátu (ACA), prelimbální kůra (PL), infralimbická kůra (IL), 600 × 800μm); caudate putamen (CP; 800 × 800μm); a mediální preoptické jádro (MPN, 400 × 600 μm) (Doplňkové údaje 1-3). Dvě sekce byly počítány na subregion a byly vypočteny v průměru na zvíře pro výpočet průměrného průměru skupiny. Sexuálně naivní a zkušené skupinové průměry buněk ΔFosB-IR byly porovnány pro každou subregion za použití nepárových t-testů.

Tabulka 1     

Shrnutí exprese ΔFosB u sexuálně naivních a zkušených zvířat
Analýza ΔFosB a c-Fos

Snímky byly zachyceny pomocí chlazené CCD kamery (Microfire, Optronics) připojené k mikroskopu Leica (DM5000B, Leica Microsystems, Wetzlar, Německo) a softwaru Neurolucida (MicroBrightfield Inc) s pevným nastavením fotoaparátu pro všechny subjekty (pomocí cílů 10x). Počet buněk exprimujících c-Fos-IR nebo ΔFosB-IR ve standardních oblastech analýzy v jádře a shellu NAc (každé 400 × 600μm; Doplňkový obrázek 1) a ACA mPFC (600 × 800μm; Doplňkový obrázek 3) byly ručně počítány pozorovatelem zaslepeným k experimentálním skupinám, v sekcích 2 na zvířeti s použitím softwaru Neurolucida (MBF Bioscience, Williston, VT) a průměrně u každého zvířete. Skupinové průměry buněk c-Fos nebo ΔFosB byly porovnávány pomocí dvoucestného ANOVA (Faktory: sexuální zkušenost a sexuální aktivita) a Fishera LSD pro post-hoc srovnání na úrovni významnosti 0.05.

Experiment 2: manipulace s výrazem ΔFosB

Transfer genů zprostředkovaný virovým vektorem

Sexuálně naivní samci krys Sprague Dawley byli náhodně rozděleni do skupin před stereotaxickou operací. Všechna zvířata dostávala bilaterální mikroinjekce rekombinantních adeno-asociovaných virových vektorů kódujících GFP (kontrola, n = 12), divokého typu ΔFosB (n = 11) nebo dominantního negativního vazebného partnera ΔFosB nazvaného ΔJunD (n = 9) do NAc. ΔJunD snižuje transkripci zprostředkovanou ΔFosB kompetitivní heterodimerizací s ΔFosB před vazbou oblasti AP-1 do genových promotorů (Winstanley et al. 2007). Virový titr byl stanoven qPCR a vyhodnocen in vivo před zahájením studie. Titer byl 1-2 × 1011 infekčních částic na ml. rAAV vektory byly injikovány v objemu 1.5 uL / ​​strana přes 7 minuty (souřadnice: AP + 1.5, ML +/- 1.2 z Bregma, DV -7.6 z povrchu lebky podle Paxina a Watsona, 1998) za použití Hamiltonovy injekční stříkačky (5μL , Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA). Vektory neprodukují větší toxicitu než kontrolní infuze samotné (Winstanley a kol., 2007; pro podrobnosti o přípravě AAV, viz Hommel a kol., 2003). Behaviorální experimenty začaly 3 týdny po vektorových injekcích umožňujících optimální a stabilní virovou infekci (Wallace et al. 2008). Transgenní exprese u myších druhů vrcholí v 10 dnech a zůstává zvýšena nejméně po dobu 6 (Winstanley et al. 2007). Na konci experimentu byla zvířata transkardiálně perfundována a NAc řezy byly imunologicky zpracovány pro GFP (1: 20K; králičí anti-GFP protilátka; Molecular Probes) za použití ABC-peroxidázy-DAB reakce (jak je popsáno výše) ověřte místo injekčního podání pomocí markeru GFP (Doplňkový obrázek 4). ΔFosB a ΔJunD vektory také obsahují segment vyjadřující GFP oddělenou vnitřním ribosomálním vstupním místem, což umožňuje ověření místa injekce pomocí vizualizace GFP u všech zvířat. Do statistických analýz byla zahrnuta pouze zvířata s místy injekce a šíření viru omezeného na NAc. Rozptýlení viru bylo obecně omezeno na část NAc a nerozptylovalo se kralovně-kaudálně v celém jádru. Navíc šíření viru se většinou omezilo buď na skořápku nebo jádro. Avšak variace místa vpichu a šíření v rámci NAc neovlivnily účinky na chování. Konečně, injekce GFP neovlivnily sexuální chování nebo zkušenosti vyvolané zjednodušení sexuálního chování ve srovnání s neoperačními zvířaty z předchozích studií (Balfour et al. 2004).

Sexuální chování

Tři týdny po dodávce virových vektorů se zvířata spojená s jednou ejakulací (nebo za 1 hodinu) pro 4 po sobě jdoucích denních sňatků k získání sexuálních zkušeností (zkušenosti) a následně se testovaly na dlouhodobé vyjádření zkušeností vyvolaných zjednodušení sexuálního chování 1 a týdny 2 (testovací relace 1 a 2) po závěrečném zasedání. Parametry sexuálního chování byly zaznamenány během všech setkání, jak bylo popsáno výše. Statistické rozdíly pro všechny parametry během každé slepé relace byly porovnávány v rámci skupin a mezi skupinami pomocí dvoucestných opakovaných měření ANOVA (faktory: léčba a páření) nebo jednosměrných ANOVA (latence ejakulace, počet úchytů a intromise; Faktor: léčba nebo páření ), následované testy Fisher LSD nebo Newman-Keuls pro post-hoc srovnání na úrovni významu 0.05. Konkrétně byly porovnávány doprovodné účinky sexuálních zkušeností na parametry páření mezi zkušenostní relací 1 (naivní) a zkušenostní relace 2, 3 nebo 4, stejně jako mezi experimentálními skupinami v rámci každé relace zážitku. Navíc k analýze účinků léčby (vektoru) na dlouhodobé ulehčení sexuálního chování byly porovnány parametry páření mezi zážitkovou relací 4 a testovací relací 1 a 2 v každé skupině léčby a porovnány mezi experimentálními skupinami v rámci každé testovací relace.

VÝSLEDKY

Sexuální zkušenost způsobuje akumulaci ΔFosB

Zpočátku bylo provedeno semikvantitativní vyšetření akumulace ΔFosB v mozku u sexuálně zkušených mužů ve srovnání s sexuálně naivními kontrolami. Shrnutí obecných zjištění je uvedeno v Tabulka 1. Analýza ΔFosB-IR byla podpořena stanovením počtu buněk ΔFosB-IR v několika oblastech mozku spojených s limbickým použitím pomocí standardních oblastí analýzy. Obrázek 1 demonstruje reprezentativní obrazy barvení DAB-Ni NAc na sexuálně naivních a zkušených zvířatech. Významná up-regulace ΔFosB byla nalezena v subregionech mPFC (Obrázek 2A), NAc jádro a shell (2B), caudate putamen (2B) a VTA (2C). V NAc existovaly významné rozdíly ve všech rostral-caudálních úrovních v jádře a shellu NAc a údaje uvedené v tabulce Obrázek 2 je průměr nad všemi rostrova-caudální úrovně. Na rozdíl od toho nedošlo k signifikantnímu zvýšení ΔFosB-IR v mediálním preoptickém jádře hypotalamu (NNS: Avg 1.8 +/- 0.26; ENS: Avg 6.0 +/- 1.86).

Obrázek 1    

 

Reprezentativní snímky zobrazující buňky ΔFosB-IR (černé) v NAc naivního bez pohlaví (A) a nezaznamenávají žádné skupiny (B). aco: anterior commissure Scale bar označuje 100 μm.
Obrázek 2      

Počet buněk ΔFosB-IR v: subregiony mediální prefrontální kůry A. infralimbic (IL), prelimbic (PL) a anterior cingulate cortex (ACA); B. Nucleus accumbens jádro a skořápka a kaudate putamen (CP); C. Rostrál, střední, chvost a ocas ...

Sexuální zkušenost zmírňuje páření vyvolané c-Fos

Účinky sexuálních zkušeností na hladinách ΔFosB v NAc byly potvrzeny za použití fluorescenčních barevných technik. Navíc byly analyzovány účinky sexuální zkušenosti na expresi c-Fos. Obrázek 3 demonstruje reprezentativní zobrazení buněk ΔFosB- (zelená) a c-Fos (červená) -IR ve všech experimentálních skupinách (A, NNS, B, NS, C, ENS, D, ES). Sexuální zkušenost výrazně zvýšila expresi ΔFosB v jádře NAc (Obrázek 4A: F1,15 = 12.0; p = 0.003) a shell (Obrázek 4C: F1,15 = 9.3; p = 0.008). Naproti tomu párování 1 hodiny před perfuzí nemělo vliv na expresi ΔFosB (Obrázek 4A, C) a nebyla zjištěna žádná interakce mezi sexuálními zkušenostmi a páření bezprostředně před perfuzí. Celkový efekt páření před perfuzí na expresi c-Fos v obou jádrech NAc (Obrázek 4B: F1,15 = 27.4; p <0.001) a skořápka (Obrázek 4D: F1,15 = 39.4; p <0.001). Kromě toho byl v jádru NAc zjištěn celkový účinek sexuálního zážitku (Obrázek 4B: F1,15 = 6.1; p = 0.026) a shell (Obrázek 4D: F1,15 = 1.7; p = 0.211) a interakce mezi sexuálním zážitkem a pářením před perfuzí byla detekována v jádře NAc (F1,15 = 6.5; p = 0.022), s trendem v shellu (F1,15 = 1.7; p = 0.211; F1,15 = 3.4; p = 0.084). Post hoc analýzy prokázaly expresi c-Fos indukovanou pářením v jádru a skořápce sexuálně naivních mužů (Obrázek 4B, D). U sexuálně zkušených mužů však nebyl c-Fos významně zvýšen v jádře NAc (Obrázek 4B) a výrazně zmírněný ve skořápce (Obrázek 4D). Sexuální zkušenost tak způsobila snížení exprese c-Fos indukovaného pářením. Hodnoty P pro specifické párové srovnání jsou uvedeny v legendách.

Obrázek 3      

Reprezentativní snímky zobrazující ΔFosB (zelené) a c-Fos (červené) v NAc pro každou experimentální skupinu. Bar měřítka označuje 100 μm.
Obrázek 4      

DFosB indukované sexuální zkušeností a c-Fos indukované pářením. Pro každou skupinu imunoreaktivních buněk ΔFosB (jádra, A; Shell, C, ACA, E) nebo c-Fos (Jádro, B; Shell, D; ACA, F) 5), ENS (n = 5) nebo ES (n = 5). Data jsou vyjádřena ...

Účinek sexuálních zkušeností na úrovních c-Fos indukovaných pářením nebyl omezen na NAc. Podobný útlum exprese c-Fos byl pozorován u ACA u sexuálně zkušených zvířat ve srovnání s sexuálně nepostiženými kontrolami. Sexuální zkušenost měla významný vliv na expresi ΔFosB v ACA (Obrázek 4E: F1,15 = 154.2; p <0.001). Páření před perfúzí nemělo vliv na expresi ΔFosB (Obrázek 4C), ale významně zvýšil c-Fos (Obrázek 4F: F1,15 = 203.4; p <0.001) v ACA. Exprese c-Fos indukovaná pářením v ACA byla navíc významně snížena sexuální zkušeností (Obrázek 4F: F1,15 = 15.8; p = 0.001). Byla zjištěna dvoucestná interakce mezi sexuální zkušeností a páření před perfuzí pro expresi c-Fos (Obrázek 4F: F1,15 = 15.1; p <0.001). Hodnoty P pro konkrétní srovnání párů jsou v legendách na obrázku. Nakonec nedošlo k významnému snížení exprese c-Fos vyvolané párením v mediálním preoptickém jádru (NS: Avg 63.5 +/− 4.0; ES: Avg 41.4 +/− 10.09), což je oblast, kde zkušenost s párením nezpůsobila významný zvýšení exprese ΔFosB, což naznačuje, že exprese c-Fos vyvolaná párením nebyla ovlivněna ve všech oblastech mozku.

ΔFosB v NAc zprostředkovává posílení sexuálního chování

Prozkoumat potenciální molekulární mechanismus pro posílení sexuálního chování, jak je demonstrováno usnadněním sexuálního chování vyvolaným zkušenostmi, byly určeny účinky místní manipulace s hladinami ΔFosB a jeho transkripční aktivity. Sexuální zkušenost během čtyř po sobě jdoucích zážitkových zasedání měla významný vliv na latenci (Obrázek 5A: F1,23 = 13.8; p = 0.001), latence intromise (Obrázek 5B: F1,23 = 18.1; p <0.001) a latence ejakulace (Obrázek 5C: GFP, F11,45 = 3.8; p = 0.006). GFP kontrolní zvířata vykazovaly očekávané zkušenosti vyvolané urychlení sexuálního chování a vykazovaly signifikantně nižší latence při první montáži, první intromise a ejakulaci během zážitkové relace 4 ve srovnání se zkušeností relace 1Obrázek 5A-C; viz legenda k hodnotám p). Tato zkušenostně indukovaná facilita sexuálního chování byla také pozorována v skupině ΔFosB pro latenci v kopii a intromise, ale nebyl zjištěn signifikantní rozdíl v latenci ejakulace (Obrázek 5A-C). Na rozdíl od toho, zvířata DJunD projevili uklidňující zjednodušení; i když latence pro úchyty, intromise a ejakulace se s opakovanými pářeními snížily, žádný z těchto parametrů nedosáhl statistické významnosti při porovnávání zkušeností s relacími 1 a 4 (Obrázek 5A-C). Mezi srovnávacími skupinami pro každou relaci zkušeností je zřejmé, že ΔJunD má při testování zkušeností významně delší latenci k montáži, intromitaci a ejakulaci ve srovnání s ΔFosB a GFPObrázek 5A-C). Kromě toho jak sexuální zkušenosti, tak léčba měly významné účinky na účinnost kopulace (Obrázek 5F: sexuální zkušenost, F1,12 = 22.5; p <0.001; léčba, F1,12 = 3.3; p = 0.049). Muži ΔFosB zvýšili efektivitu kopulace během zážitkové relace 4 ve srovnání se zkušeností 1 (Obrázek 5F). Navíc zvířata ΔFosB měly významně méně výčnělků před ejakulací během dne 4 v porovnání se zkušeností 1 (Obrázek 5D: F10,43 = 4.1; p = 0.004) a že muži ze skupiny DJunD měli významně více opěrných bodů před ejakulací, a tak významně snížili účinnost kopulace než kterákoli z ostatních dvou skupin (Obrázek 5D a F). Zvířata GFP a ΔFosB tedy vykazovaly zkušenosti vyvolané usnadnění iniciace sexuálního chování a sexuální výkonnosti, zatímco zvířata DJunD ne.

Obrázek 5      

Sexuální chování zvířat GFP (n = 12), ΔFosB (n = 11) a ΔJunD (n = 9): latence (A), latence intromise (B), latence ejakulace počet intromise (E) a účinnost kopulace (F). Data jsou vyjádřena ...

Pro testování hypotézy, že exprese ΔFosB je kritická pro dlouhodobé vyjádření zkušeností vyvolaného ulehčování sexuálního chování, byly zvířata po závěrečné zkušenosti testovány týdny 1 (testovací relace 1) a 2 týdny (testovací relace 2). Ve skupinách GFP a ΔFosB bylo zachováno ulehčené sexuální chování, protože žádný z parametrů chování se lišil mezi testovacími relacemi 1 nebo 2 a závěrečnou session 4 v rámci skupin GFP a ΔFosB (Obrázek 5A-C; s výjimkou ejakulační latence a účinnosti kopulace v testovací relaci 1 u zvířat ΔFosB). Významné rozdíly mezi zvířaty ΔJunD a skupinami GFP nebo ΔFosB byly zjištěny v obou testovacích seznamech pro všechny parametry sexuálního chování (Obrázek 5A-F). Nebyly zjištěny žádné rozdíly mezi skupinami nebo uvnitř skupin při porovnávání počtu intromise, PEI nebo procenta zvířat, která byla ejakulována (100% mužů ve všech skupinách ejakulovaných během posledních čtyř partnerů).

DISKUSE

Současná studie prokázala, že sexuální zkušenost způsobuje akumulaci ΔFosB v několika oblastech mozku spojených s limbem, včetně jádra a skořápky NAc, mPFC, VTA a caudate putamen. Navíc sexuální zkušenost oslabila expresi c-Fos indukovanou pářením v NAc a ACA. A konečně, ukázalo se, že ΔFosB v NAc je kritický ve zprostředkování usnadnění páření při získávání sexuálních zkušeností a dlouhodobého vyjádření zkušeností vyvolaného usnadnění sexuálního chování. Konkrétně, snižování transfekce zprostředkované transkripcí pomocí DFosB zeslabilo zkušenosti vyvolané zprostředkování sexuální motivace a výkonu, zatímco nadměrná exprese ΔFosB v NAc způsobila posílení sexuálního chování, pokud jde o zvýšení sexuální výkonnosti s menšími zkušenostmi. Současné poznatky současně podporují hypotézu, že ΔFosB je kritickým molekulárním mediátorem pro dlouhodobou nervovou a behaviorální plasticitu vyvolanou sexuálními zkušenostmi.

Současná zjištění rozšiřují předchozí studie, které ukazují na sexuálně prospěšnou aktivitu ΔFosB v NAc u samců potkanů (Wallace et al. 2008) a samice křečků (Hedges et al. 2009). Wallace a kol. (2008) ukázala, že rAAV-Nadměrná exprese ΔFosB v NAc zvýšila sexuální chování u sexuálně naivních zvířat během prvního páření, což svědčí o méně intromise k ejakulaci a kratším poe-ejakulačním intervalech, ale nemělo žádný vliv u pohlavně zkušených mužů (Wallace et al. 2008).

Naopak, současná studie neprokázala žádné účinky nadměrného exprese ΔFosB u pohlavně naivních mužů během prvního testu, ale během a po získání sexuálních zkušeností. Nadměrné expresory ΔFosB prokázaly zvýšenou sexuální výkonnost (zvýšenou účinnost kopulace) ve srovnání se zvířaty GFP.

Současná studie dále zkoumala úlohu ΔFosB blokováním transkripce zprostředkované ΔFosB za použití virového vektoru exprimujícího DJunD. Prevence zkušeností vyvolaného nárůstu exprese ΔFosB zabránila zprostředkování sexuální motivace vyvolané zkušeností (zvýšená latence v úvodní a intromisní lhůtě) stejně jako sexuální výkonnost (zvýšená latence ejakulace a počet ústupů) a následné dlouhodobé projevy usnadněného sexuálního chování.

Proto jsou tyto údaje první, které naznačují povinnou roli pro ΔFosB při získávání zkušeností vyvolaných zjednodušení sexuálního chování. Navíc tato data ukazují, že ΔFosB je také kriticky zapojen do dlouhodobého vyjádření ulehčeného chování vyvolaného zkušenostmi. Navrhujeme, aby toto dlouhodobé vyjádření ulehčeného chování představovalo formu paměti pro přirozenou odměnu, tudíž ΔFosB v NAc je prostředníkem odměny. Sexuální zkušenost také zvýšila hladiny ΔFosB v oblastech VTA a mPFC, v oblastech, které se účastní odměny a paměti (Balfour et al. 2004; Phillips et al. 2008). Budoucí studie jsou zapotřebí k objasnění potenciálního významu up-regulace ΔFosB v těchto oblastech pro odměnu.

Exprese ΔFosB je vysoce stabilní, a proto má velký potenciál jako molekulární mediátor přetrvávající adaptace mozku po chronických poruchách (Nestler et al. 2001). Ukázalo se, že ΔFosB postupně zvyšuje NAc u více injekcí kokainu a přetrvává až několik týdnů (Naděje et al. 1992; Naděje et al. 1994). Tyto změny v expresi NAc ΔFosB souvisí s senzibilizací a závislostí na odměňování drog (Chao & Nestler 2004; McClung & Nestler 2003; McClung et al. 2004; Nestler 2004, 2005, 2008; Nestler et al. 2001; Zachariou et al. 2006). Naproti tomu úloha ΔFosB při zprostředkování přirozené odměny byla podceňována. Objevily se nové důkazy, které naznačují, že indukce ΔFosB v NAc se podílí na přirozené odměně. Úrovně ΔFosB se podobně zvyšují v NAc po příjmu sacharózy a běhu kola. Nadměrná exprese ΔFosB v striatu pomocí bitransgenních myší nebo virových vektorů u potkanů ​​způsobuje zvýšení příjmu sacharózy, zvýšená motivace k jídlu a zvýšené spontánní běh kola (Olausson et al. 2006; Wallace et al. 2008; Werme et al. 2002). Současná data podstatně doplňují tyto zprávy a dále podporují myšlenku, že ΔFosB je kritickým prostředníkem pro posílení odměňování a přirozené odměňování.

ΔFosB může zprostředkovat zkušenosti vyvolané posílení sexuálního chování prostřednictvím indukce plasticity v mezolimbickém systému. Vskutku, sexuální zkušenost způsobuje řadu dlouhotrvajících změn mezolimbického systému (Bradley & Meisel 2001; Frohmader et al. 2009; Džbány et al. 2010). t byla zjištěna úroveň chování, senzitizovaná lokomotorická odpověď na amfetamin a zvýšená odměna amfetaminu u sexuálně zkušených samců potkanů ​​(Džbány et al. 2010); změněna lokomotorická odpověď na amfetamin byla také pozorována u samic křečků (Bradley & Meisel 2001). Kromě toho bylo zjištěno zvýšení počtu dendritických trnů a složitost dendritických arborů po období abstinence od sexuální zkušenosti samců potkanů ​​(Džbány et al. 2010). Současná studie naznačuje, že ΔFosB může být specifickým molekulárním mediátorem dlouhodobých výsledků sexuálních zkušeností. Po shodě se nedávno ukázalo, že ΔFosB je důležitý pro vyvolání změn dendritické páteře v reakci na chronické podávání kokainu (Dietz et al. 2009; Bludiště et al. 2010).

Není jasné, který neurotransmiter (primární) neurotransmiter je zodpovědný za vyvolání ΔFosB v NAc, ale DA byl navržen jako kandidát (Nye et al. 1995). Prakticky všechny drogy zneužívání, včetně kokainu, amfetaminu, opiátů, kanabinoidů a etanolu, stejně jako přirozené odměny, zvyšují ΔFosB v NAc (Perrotti et al. 2005; Wallace et al. 2008; Werme et al. 2002). Oba léky zneužívání a přírodní odměny zvyšují koncentraci synaptické DA v NAc (Damsma et al. 1992; Hernandez a Hoebel 1988a, b; Jenkins & Becker 2003). Indukce dFosB pomocí léčiv zneužívání byla prokázána v buňkách obsahujících DA receptor a kofain-indukovaný ΔFosB je blokován antagonistou D1 DA receptorut (Nye et al. 1995). Proto je uvolnění DA předpokládáno k stimulaci exprese ΔFosB a tím k zprostředkování neuroplasticity související s odměnou. Další podporou myšlenky, že hladiny ΔFosB jsou závislé na DA, je zjištění, že oblasti mozku, kde sexuální zkušenost změnila hladiny ΔFosB, dostává silný dopaminergní vstup z VTA, včetně mediální prefrontální kůry a bazolaterální amygdaly.

Naproti tomu se ΔFosB v mediální preoptické oblasti nezvětšuje, přestože tato oblast dostává dopaminergní vstup, i když z hypothalamických zdrojů (Miller & Lonstein 2009). Budoucí studie jsou potřebné k otestování, zda jimi vyvolaná exprese ΔFosB a účinky sexuální zkušenosti na sexuální motivaci a výkon závisí na činnosti DA. Úloha DA v sexuální odměně u samců potkanů ​​není v současnosti zcela jasná (Agmo & Berenfeld 1990; Pfaus 2009). Existuje dostatek důkazů o tom, že DA se uvolňuje v NAc během expozice ženské nebo páření (Damsma et al. 1992) a DA neurony jsou aktivovány během sexuálního chování (Balfour et al. 2004). Systémové injekce antagonisty receptoru DA však nebrání přednost sexuální odměny podmíněné místo (Agmo & Berenfeld 1990) a hypotéza, že DA je kritická pro zkušenosti vyvolané zesílení páření, není testováno.

Není také jasné, jaké jsou následné mediátory vlivu ΔFosB na sexuální chování. Bylo prokázáno, že ΔFosB působí jako transkripční aktivátor a represor prostřednictvím mechanismu závislého na AP-1 (McClung & Nestler 2003; Peakman et al. 2003). Bylo identifikováno mnoho cílových genů, včetně okamžitého časného genu c-fos (Naděje et al. 1992; Naděje et al. 1994; Morgan & Curran 1989; Renthal et al. 2008; Zhang et al. 2006), cdk5 (Bibb et al. 2001), dynorfin (Zachariou et al. 2006), sirtuin-1 (Renthal et al. 2009), NFκB podjednotky (Ang et al. 2001) Za podjednotku GluR2 AMPA glutamátového receptoru (Kelz et al. 1999). Současné výsledky ukazují, že hladiny indukované pářením c-Fos byly sníženy sexuálními zkušenostmi v oblastech mozku se zvýšeným ΔFosB (NAc a ACA). Potlačení c-Fos se zdá být závislé na období od posledního páření a opakovaných páření, stejně jako v předchozích studiích, takový pokles c-Fos nebyl zjištěn u samců potkanů ​​testovaných na týden 1 po konečném páření (Balfour et al. 2004) nebo po sexuální zkušenosti sestávající pouze z jediného páření (Lopez a Ettenberg 2002). Současné zjištění je navíc v souladu s důkazy, že ΔFosB potlačuje gen c-fos po chronické expozici amfetaminem (Renthal et al. 2008). V souladu s těmito nálezy byla po opakovaných injekcích s kokainem v porovnání s akutními injekcemi léků snížena indukce několika okamžitých časných genových mRNA (c-fos, fosB, c-jun, junB a zif268)Naděje et al. 1992; Naděje et al. 1994) a amfetaminem indukovaný c-fos byl potlačen po stažení z chronického podávání amfetaminu (Jaber et al. 1995; Renthal et al. 2008). Funkční význam dolů regulace exprese c-Fos po chronické léčbě nebo pohlavním styku zůstává nejasný a bylo navrženo, že je důležitým homeostatickým mechanismem pro regulaci citlivosti zvířete na opakovanou expozici odměňování (Renthal et al. 2008).

Závěrem, současná studie ukazuje, že ΔFosB v NAc hraje integrální roli v paměti sexuální odměny, podporující možnost, že ΔFosB je důležitá pro všeobecné vyměřování výplaty a paměť. Závěry ze současné studie dále objasňují naše chápání buněčných a molekulárních mechanismů, které zprostředkovávají sexuální odměnu a motivaci, a přidávají do souboru literatury, která ukazuje, že ΔFosB je důležitým hráčem ve vývoji závislosti, tím, že demonstruje roli pro ΔFosB v přirozené odměně vyztužení.

Doplňkový materiál

Supp obr. S1-S4 a tabulka S1-S2

Poděkování

Tento výzkum byl podpořen granty od kanadských institucí výzkumu zdraví LMC, Národní institut duševního zdraví pro EJN a Přírodovědné a inženýrské výzkumné rady Kanady KKP a LMC.

REFERENCE

  1. Agmo A. Mužské potkanové sexuální chování. Brain Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Zesilující vlastnosti ejakulace u samců potkanů: úloha opioidů a dopaminu. Behav Neurosci. 1990; 104: 177-182. [PubMed]
  3. Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E, Nestler EJ. Indukce jaderného faktoru-kappaB v nucleus accumbens chronickým podáváním kokainu. J Neurochem. 2001: 79: 221 – 224. [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Sexuální chování a environmentální příznaky spojené s pohlavím aktivují mezolimbický systém u samců potkanů. Neuropsychopharmacology. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  5. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Účinky chronické expozice kokainu jsou regulovány neuronálním proteinem Cdk5. Příroda. 2001: 410: 376 – 380. [PubMed]
  6. Bradley KC, Haas AR, Meisel RL. Léze 6-Hydroxydopamin u křečků samiček (Mesocricetus auratus) ruší senzibilizované účinky sexuálního zážitku na kopulační interakce s muži. Behav Neurosci. 2005: 119: 224 – 232. [PubMed]
  7. Bradley KC, Meisel RL. Indikace indukce sexuálního chování c-Fos v nucleus accumbens a lokomoční aktivity stimulované amfetaminem jsou senzitizovány předchozím sexuálním zážitkem u ženských syrských křečků. J Neurosci. 2001: 21: 2123 – 2130. [PubMed]
  8. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Proteasomálně závislý a nezávislý mechanismus pro destabilizaci FosB: identifikace FosB degron domén a důsledky pro stabilitu DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3009-3019. [PubMed]
  9. Chao J, Nestler EJ. Molekulární neurobiologie drogové závislosti. Annu Rev Med. 2004: 55: 113 – 132. [PubMed]
  10. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Regulace delta FosB a FosB-podobných proteinů elektrokonvulzivním záchvatem a léčbou kokainem. Molekulární farmakologie. 1995: 48: 880 – 889. [PubMed]
  11. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Nadměrná exprese DeltaFosB specifického pro typ buňky zvyšuje motivaci kokainu. J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
  12. Coolen LM, Allard J, Truitt WA, Mckenna KE. Centrální regulace ejakulace. Physiol Behav. 2004: 83: 203 – 215. [PubMed]
  13. Damsma G, Pfaus JG, Wenkstern D, Phillips AG, Fibiger HC. Sexuální chování zvyšuje přenos dopaminu v nucleus accumbens a striatum samců krys: srovnání s novinkou a lokomoce. Behav Neurosci. 1992: 106: 181 – 191. [PubMed]
  14. Dietz DM, Maze I, Mechanik M, Vialou V, Dietz KC, Iniguez SD, Laplant Q, Russo SJ, Ferguson D, Nestler EJ. Základní úloha AFosB v regulaci kokainu dendritických páteří neuronů nucleus accumbens. Společnost pro neurověda Abstrakt. 2009
  15. Frohmader KS, Pitchers KK, Balfour ME, Coolen LM. Míchání potěšení: Přehled účinků léků na sexuální chování u lidí a zvířecích modelů. Horm Behav. 2009 In press.
  16. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL. Nadměrná exprese Delta FosB v nucleus accumbens zvyšuje sexuální odměnu u ženských syrských křečků. Geny Brain Behav. 2009: 8: 442 – 449. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  17. Hernandez L, Hoebel BG. Krmení a hypotalamická stimulace zvyšují obrat dopaminu v akumulatech. Physiol Behav. 1988a: 44: 599 – 606. [PubMed]
  18. Hernandez L, Hoebel BG. Potravní odměna a kokain zvyšují extracelulární dopamin v nucleus accumbens, měřeno mikrodialýzou. Život Sci. 1988b; 42: 1705 – 1712. [PubMed]
  19. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Základní úloha genu fosB v molekulárních, buněčných a behaviorálních účincích chronických elektrokonvulzivních záchvatů. J Neurosci. 1998: 18: 6952 – 6962. [PubMed]
  20. Hommel JD, Sears RM, Georgescu D, Simmons DL, DiLeone RJ. Lokální genový knockdown v mozku s použitím virové zprostředkované RNA interference. Nat Med. 2003; 9: 1539-1544. [PubMed]
  21. Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Regulace okamžité časné genové exprese a vazby AP-1 v jádru krysy akumuluje chronický kokain. Proc Natl Acad Sci US A. 1992: 89: 5764 – 5768. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  22. Naděje BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Indukce dlouhotrvajícího AP-1 komplexu složeného ze změněných proteinů typu Fos v mozku chronickým kokainem a dalšími chronickými léčebnými postupy. Neuron. 1994; 13: 1235-1244. [PubMed]
  23. Hull EM, Meisel RL, Sachs BD. Mužské sexuální chování. Horm Behav. 2002: 1: 1 – 139.
  24. Jaber M, Cador M, Dumartin B, Normand E, Stinus L, Bloch B. Akutní a chronické amfetaminové léčby odlišně regulují hladiny neuropeptidové messenger RNA a Fos imunoreaktivitu v krysích neuronech potkana. Neurověda. 1995: 65: 1041 – 1050. [PubMed]
  25. Jenkins WJ, Becker JB. Dynamické zvýšení dopaminu během stimulace u samic krysy. Eur J Neurosci. 2003: 18: 1997 – 2001. [PubMed]
  26. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Nestler EJ. Exprese transkripčního faktoru deltaFosB v mozku řídí citlivost na kokain. Příroda. 1999; 401: 272-276. [PubMed]
  27. Lopez HH, Ettenberg A. Vystavení samic potkanům vyvolává rozdíly v indukci c-fos mezi pohlavně naivními a zkušenými samci krys. Brain Res. 2002: 947: 57 – 66. [PubMed]
  28. Bloky I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Podstatná role histon-methyltransferázy G9a v plasticitě indukované kokainem. Věda. 2010; 327: 213-216. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  29. McClung CA, Nestler EJ. Regulace genové exprese a odměny kokainu CREB a DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-1215. [PubMed]
  30. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekulární přepínač pro dlouhodobou adaptaci v mozku. Brain Res Mol Brain Res. 2004: 132: 146 – 154. [PubMed]
  31. Miller SM, Lonstein JS. Dopaminergní projekce mediální preoptické oblasti poporodních potkanů. Neurověda. 2009: 159: 1384 – 1396. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  32. Morgan JI, Curran T. Stimul-transkripční vazba v neuronech: úloha buněčných bezprostředně časných genů. Trendy Neurosci. 1989: 12: 459 – 462. [PubMed]
  33. Nestler EJ. Molekulární mechanismy drogové závislosti. Neurofarmakologie. 2004; 47 Suppl 1: 24 – 32. [PubMed]
  34. Nestler EJ. Neurobiologie závislosti na kokainu. Perspektiva Sci Practice. 2005: 3: 4 – 10. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  35. Nestler EJ. Posouzení. Transkripční mechanismy závislosti: role DeltaFosB. Philos Trans R. Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245-3255. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  36. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: trvalý molekulární přepínač pro závislost. Proc Natl Acad Sci US A. 2001; 98: 11042-11046. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  37. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologické studie regulace chronické indukce antigenu FOS souvisejícího s kokainem v striatu a nucleus accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
  38. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. DeltaFosB v nucleus accumbens reguluje instrumentální chování a motivaci. J Neurosci. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
  39. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducibilní exprese dominantního negativního mutantu c-Jun u transgenních myší specifickou pro oblast mozku snižuje citlivost na kokain. Brain Res. 2003; 970: 73-86. [PubMed]
  40. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB se hromadí v populaci GABAergních buněk v zadním konci ventrální tegmentální oblasti po psychostimulační léčbě. Eur J Neurosci. 2005: 21: 2817 – 2824. [PubMed]
  41. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukce deltaFosB v mozkových strukturách souvisejících s odměnou po chronickém stresu. J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602. [PubMed]
  42. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Rozlišující vzory indukce DeltaFosB v mozku drogami zneužívání. Synapse. 2008; 62: 358-369. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  43. Pfaus JG. Cesty sexuální touhy. J Sex Med. 2009: 6: 1506 – 1533. [PubMed]
  44. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Kondicionování a sexuální chování: recenze. Horm Behav. 2001; 40: 291-321. [PubMed]
  45. Phillips AG, Vacca G, Ahn S. Pohled shora dolů na dopamin, motivaci a paměť. Pharmacol Biochem Behav. 2008: 90: 236 – 249. [PubMed]
  46. Pitchers KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Neuroplasticita v mezolimbickém systému vyvolaná přirozenou odměnou a následnou abstinencí odměny. Biol Psychiatry. 2010; 67: 872-879. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  47. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Delta FosB zprostředkovává epigenetickou desenzibilizaci genu c-fos po chronické expozici amfetaminu. J Neurosci. 2008: 28: 7344 – 7349. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  48. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Analýza genomové regulace chromatinu kokainem odhaluje úlohu sirtuinů. Neuron. 2009: 62: 335 – 348. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  49. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Sexuální odměna u samců potkanů: účinky sexuálního zážitku na podmíněné preference místa spojené s ejakulací a intromacemi. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  50. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforylace DeltaFosB zprostředkovává jeho stabilitu in vivo. Neurověda. 2008
  51. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulace stability DeltaFosB fosforylací. J Neurosci. 2006; 26: 5131-5142. [PubMed]
  52. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham DL, Green TA, Kirk A, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolanos-Guzman CA. Vliv DeltaFosB v nucleus accumbens na přirozené chování související s odměnou. J Neurosci. 2008: 28: 10272 – 10277. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  53. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB reguluje běh kola. J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
  54. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Indukce DeltaFosB v orbitofronální kůře zprostředkovává toleranci k kokainem indukované kognitivní dysfunkci. J Neurosci. 2007; 27: 10497-10507. [PubMed]
  55. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Podstatná role DeltaFosB v nucleus accumbens při morfinovém působení. Nat Neurosci. 2006; 9: 205-211. [PubMed]
  56. Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos usnadňuje získávání a zánik trvalých změn vyvolaných kokainem. J Neurosci. 2006; 26: 13287-13296. [PubMed]