Metamfetamin působí na subpopulace neuronů, které regulují sexuální chování u samců potkanů ​​(2009)

Neurovědy. 2010 Mar 31; 166 (3): 771-84. dva: 10.1016 / j.neuroscience.2009.12.070. Epub 2010 Jan 4.

Frohmader KS, Wiskerke J, Wise RA, Lehman MN, Cooled LM.

Zdroj

Oddělení anatomie a buněčné biologie, Schulichova lékařská škola a stomatologie, University of Western Ontario, Londýn, ON, Kanada, N6A 5C1.

Abstraktní

Metamfetamin (Meth) je vysoce návykový stimulant. Mýtné zneužívání je běžně spojeno s praktikou sexuálního rizikového chování a zvýšeného výskytu viru lidské imunodeficience a uživatelé Meth hlásí zvýšenou sexuální touhu, vzrušení a sexuální potěšení. Biologický základ tohoto spojení drog a sexu není znám. Současná studie demonstruje, že podávání Meth u samců potkanů ​​aktivuje neurony v mozkových oblastech mezolimbického systému, které se podílejí na regulaci sexuálního chování. Konkrétně Meth a páření aktivují buňky jádra jádra a jádra, bazolaterální amygdala a přední cingulární kůra. Tato zjištění ukazují, že na rozdíl od současného přesvědčení mohou zneužívání drogy aktivovat stejné buňky jako přírodní posilovač, tj. Sexuální chování, a naopak mohou ovlivňovat nutkané hledání této přirozené odměny.

Klíčová slova: nucleus accumbens, bazolaterální amygdala, prefrontální kortex, zneužívání látek, reprodukce, závislost

Motivace a odměna jsou řízeny mezolimbickým systémem, propojenou sítí mozkových oblastí, obsažených v nucleus accumbens (NAc) ventrální tegmentální oblasti (VTA), bazolaterální amygdale a mediální prefrontální kůře (mPFC) (Kelley, 2004, Kalivas a Volkow, 2005). Existuje dostatek důkazů, že mezolimbický systém je aktivován v reakci na obě zneužívané látky (Di Chiara a Imperato, 1988, Chang et al., 1997, Ranaldi a kol., 1999) a přirozeně odměňování chování, jako je sexuální chování (Fiorino a kol., 1997, Balfour a spol., 2004). Sexuální chování mužů, a zejména ejakulace, je vysoce hodnocené a posiluje u modelů zvířat (Pfaus a kol., 2001). Hlodavci vyvinou kondici podmíněného místa (CPP) ke kopulaci (Agmo a Berenfeld, 1990, Martinez a Paredes, 2001, Tenk, 2008) a bude provádět operantské úkoly, aby získal přístup k sexuálně vnímavé ženě (Everitt a kol., 1987, Everitt a Stacey, 1987). Drogy zneužívání jsou také odměňovány a posilovány a zvířata se naučí sama podávat látky zneužívání, včetně opiátů, nikotinu, alkoholu a psychostimulantů (Wise, 1996, Pierce a Kumaresan, 2006, Feltenstein a See, 2008). I když je známo, že obě drogy zneužívání a sexuálního chování aktivují mezolimbické oblasti mozku, v současné době není jasné, zda drogy zneužívání ovlivňují stejné neurony, které zprostředkovávají sexuální chování.

Elektrofyziologické studie ukázaly, že potraviny a kokain aktivují neurony v NAc. Nicméně, tyto dvě výztuže neaktivují stejné buňky uvnitř NAc (Carelli a kol., 2000, Carelli a Wondolowski, 2003). Kromě toho samotné podávání potravin a sacharózy nezpůsobuje dlouhodobé změny elektrofyziologických vlastností, které vyvolávají kokain (Chen a kol., 2008). Naproti tomu sbírka důkazů naznačuje, že mužské sexuální chování a drogy zneužívání mohou skutečně působit na stejné mesolimbické neurony. Psychostimulanty a opioidy mění expresi sexuálního chování u samců potkanů ​​(Mitchell a Stewart, 1990, Fiorino a Phillips, 1999a, Fiorino a Phillips, 1999b). Nedávné údaje z naší laboratoře ukázaly, že sexuální zkušenost mění reakci na psychostimulanty, jak dokazuje senzibilizovaná lokomotorická odezva a senzibilizované vnímání odměn d-amfetaminu u sexuálně zkušených zvířat (Pitchers a kol., 2009). Podobná odpověď byla již dříve pozorována při opakovaném vystavení amfetaminu nebo jiným lékům zneužívání (Lett, 1989, Shippenberg a Heidbreder, 1995, Shippenberg a kol., 1996, Vanderschuren a Kalivas, 2000). Společně tyto poznatky naznačují, že sexuální chování a reakce na drogy zneužívání jsou zprostředkovány stejnými neurony v mezolimbickém systému. Proto je prvním cílem této studie vyšetření neurální aktivace mezolimbického systému sexuálním chováním a podáváním léčiva u stejného zvířete. Konkrétně jsme testovali hypotézu, že psychostimulant, metamfetamin (Meth), působí přímo na neurony, které normálně zprostředkovávají sexuální chování.

Meth je jedním z nejvíce zneužívaných nelegálních drog ve světě (NIDA, 2006, Ellkashef a kol., 2008) naje často spojeno se změněným sexuálním chováním. Je zajímavé, že uživatelé Meth hlásí zvýšenou sexuální touhu a vzrušení, stejně jako zvýšené sexuální potěšení (Semple a kol., 2002, Schilder a kol., 2005). Navíc, Mýtné zneužívání je běžně spojeno s sexuálně kompulzivním chováním (Rawson a kol., 2002). Uživatelé často uvádějí, že mají mnoho sexuálních partnerů a mají méně pravděpodobné, že budou užívat ochranu než jiní uživatelé drog (Somlai a kol., 2003, Springer a kol., 2007). Studie, které ukazují, že Meth používá jako prediktor chování sexuálního rizika, jsou však bohužel omezené, protože se spoléhají na nepotvrzené vlastní zprávy (Elifson a kol., 2006). Z tohoto důvodu je pro pochopení tohoto komplexního souvislost mezi drogovým a sexuálním vyšetřením potřeba vyšetření buněčné základny Meth-indukovaných změn v sexuálním chování u zvířecího modelu.

Vzhledem k shora uvedeným důkazům, které naznačují, že zneužívání drog a zejména Meth mohou působit na neurony, které se normálně podílejí na zprostředkování sexuálního chování, cílem této studie bylo vyšetřit neurální aktivaci sexuálním chováním a podáním psychostimulantu Meth. Tato studie provedla neuroanatomickou techniku ​​s využitím imunohistochemické vizualizace okamžitých časných genů Fos a fosforylované mapové kinázy (pERK) k detekci souběžné nervové aktivace sexuálním chováním a respektive Meth. Fos je exprimován pouze v jádře buněk s maximálním stupněm exprese 30-90 minut po aktivaci neuronu. Existuje dostatečný důkaz, že sexuální aktivita indukuje expresi Fos v mozku (Pfaus a Heeb, 1997, Veening a Coolen, 1998), včetně mezokorticolimbického systému (Robertson a kol., 1991, Balfour a spol., 2004). Existují také důkazy, že zneužívající drogy indukují expresi pERK v mezokorticolimbickém systému (Valjent a kol., 2000, Valjent a kol., 2004, Valjent a kol., 2005). Na rozdíl od exprese Fos je fosforylace ERK velmi dynamickým procesem a dochází k 5-20 minutám po neuronální aktivaci. Zřetelné časové profily Fos a pERK z nich dělají ideální soubor markerů pro následnou neuronovou aktivaci dvěma různými stimuly.

EXPERIMENTÁLNÍ POSTUPY

Předměty

Dospělí samci potkanů ​​Sprague Dawley (210-225 g), získaných od laboratoře Charles River Laboratories (Montreal, QC, Kanada), byli umístěni dva na klec ve standardních klecích plexiskla (domácí klece). Zvířecí místnost byla udržována na cyklu 12 / 12 h s obráceným světlem (světla byla vypnuta při 10.00 h). Jídlo a voda byly k dispozici podle libosti. Všechna testování byla provedena během první poloviny tmavé fáze za tlumeného červeného osvětlení. Stimulační ženy používané k sexuálnímu chování byly bilaterálně ovariectomizovány za hluboké anestezie (13 mg / kg ketaminu a 87 mg / kg xylazinu) a podstoupily subkutánní implantát obsahující 5% estradiolbenzoátu (EB) a 95% cholesterolu. Sexuální receptivita byla indukována subkutánním (sc) podáním 500 μg progesteronu v 0.1 ml sezamového oleje 4 h před testováním. Všechny postupy byly schváleny Výborem pro péči o zvířata na Univerzitě v západním Ontariu a byly v souladu s pokyny Kanadské rady pro péči o zvířata.

Experimentální vzory

Pokusy 1 a 2: Samci potkanů ​​(n = 37) se nechali psy s jednou receptivní ženou na jednu ejakulaci (E) nebo pro 30 min, která se objevila nejprve v čistých testovacích klecích (60 × 45 × 50 cm) - týdně před testováním páření, získat sexuální zážitky. Během posledních dvou zasedání byly zaznamenány všechny standardní parametry pro sexuální výkon, včetně: latence (ML, čas od zavedení ženy do první expozice), latentní intromise (IL, čas od zavedení ženy do první ), ejakulační latence (EL, doba od první intromise po ejakulaci), interval po ejakulaci (PEI, čas od ejakulace po první následnou intromission), počet úchytů (M) a počet intromise (IM)Agmo, 1997). Všichni muži dostávali 1 ml / kg denně injekce 0.9% NaCl (fyziologický roztok, sc) 3, po sobě následujících dnů před testovacím dnem, pro přizpůsobení manipulaci a injekci. Jeden den před testovacím dnem byli všichni muži jediní ubytovaní. U zkušených mužů může být Fos indukován podmíněnými kontextuálními vjemy spojenými s předchozí sexuální zkušeností (Balfour a spol., 2004). Proto byly všechny závěrečné a kontrolní manipulace během závěrečných testů prováděny v domácí kleci (vyhnout se prediktivním podmínkám), aby se zabránilo aktivaci podmíněně indukované indukce u nedospělých kontrolních samců. Muži byli rozděleni do osmi experimentálních skupin, které se během posledních dvou párovacích relací nelišily v žádné míře sexuální výkonnosti (data nejsou zobrazena). Během závěrečného testu byli muži buď propuštěni do své domácí klece, dokud nevykazovali ejakulaci (sex) nebo nedostali ženský partner (žádný sex). Všichni páření muži byli perfundováni 60 minut po nástupu páření, což umožnilo analýzu páření vyvolané Fos-exprese. Samci dostali injekci přípravku 4 mg / kg Meth nebo 1 ml / kg fyziologického roztoku (sc) (n = 4 každý) buď 10 (experiment 1) nebo 15 (experiment 2) min před perfuzí pro analýzu fosforylace vyvolané léčivem MAP kinázy. Dávkování a čas před perfuzí byly založeny na předchozích zprávách (Choe a kol., 2002, Choe a Wang, 2002, Chen a Chen, 2004, Mizoguchi a kol., 2004, Ishikawa a kol., 2006). Kontrolní skupiny zahrnovaly samce, které se nepodrobily matce, ale před usmrcením obdržely přípravky Meth 10 (n = 7) nebo 15 (n = 5) min nebo před podáním injekce 10 (n = 5) nebo 15 . Po usmrcení byly mozky zpracovány pro imunohistochemii.

Pokus 3: Vzhledem k tomu, že při experimentu 1 a 2 byla použita vysoká dávka Meth, byl proveden další neuroanatomický pokus, aby se zjistilo, zda sexuální chování a nižší dávka Meth indukují vzory závislého na dávce překrývající se nervové aktivace. Tato studie byla provedena stejným způsobem jako experimenty 1 a 2. Při závěrečném testu však dosáhly páry a nespojené skupiny (n = 6 každý) 1 mg / kg Meth (sc) 15 min před usmrcením.

Experiment 4: Abychom si ověřili, zda je neurální aktivace způsobená pohlavím a Meth specifická pro Meth, tento experiment zkoumal, zda u psychostimulantního d-amfetaminu (Amph) lze pozorovat podobné vzorce překrývající se nervové aktivace. Tento experiment byl proveden stejným způsobem jako pokusy 1 a 2. Při závěrečném testu však byli muži před usmrcením (n = 5 každý) podáni buď Amph (1 mg / kg) nebo fyziologický roztok (15 mg / kg) (sc) 5 min. Kontrolní nedospělí muži dostali fyziologický roztok nebo Amph 15 minuty před usmrcením. Přehled experimentálních skupin použitých v experimentech 1-4 je uveden v sekci Tabulka 1.

Tabulka 1       

Přehled experimentálních skupin zahrnutých do experimentů 1-4.

Příprava tkání

Zvířata byla anestetizována pentobarbitalem (270 mg / kg; ip) a perfenzována transkardiálně 5 ml fyziologického roztoku a následně 500 ml 4% paraformaldehydu v fosfátovém pufru 0.1M (PB). Mozky byly odstraněny a následně fixovány na 1 h při pokojové teplotě ve stejném fixačním činidle, potom ponořeny do 20% sacharózy a 0.01% sodného azidu v 0.1 M PB a skladovány při 4 ° C. Koronální části (35 μm) byly rozřezány na zmrazovací mikrotom (H400R, Micron, Německo), shromážděny ve čtyřech paralelních řadách v kryoprotektantním roztoku (30% sacharózy a 30% ethylenglykolu v 0.1 M PB) a uloženy při 20 ° C zpracovává se.

Imunohistochemie

Všechny inkubace byly prováděny při pokojové teplotě za mírného míchání. Volné plovoucí části byly intenzivně promyty fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem 0.1 M (PBS) mezi inkubacemi. Sekce byly inkubovány v 1% H2O2 pro 10 min, pak se zablokuje v inkubačním roztoku (PBS obsahující 0.1% bovinní sérový albumin a 0.4% Triton X-100) pro 1 h.

pERK / Fos

Tkáň byla inkubována přes noc králičím polyklonálním protilátkem proti p42 a mapovým kinázám p44 ERK1 a ERK2 (pERK, 1: 400 experiment 1 šarže 19, 1: 4.000 experiment 2 a 3 šarže 21, Cell Signaling Cat # 9101;), 1 h inkubace s biotinylovaným oslím proti králičím IgG (1: 500, Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA) a komplexem avidin-chrenovou peroxidázou (ABC Elite, 1: 1000, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Poté byla tkáň inkubována za 10 min s biotinylovaným tyramidem (BT; 1: 250 v PBS + 0.003% H2O2; Tyramid Signal Amplification Kit, NEN Life Sciences, Boston, MA) a pro 30 min s Alexa 488 konjugovaným strepavidinem (1: 100, Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Poté byla tkáň inkubována přes noc králičím polyklonálním protilátkem proti c-Fos (1: 500, SC-52, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) a následně 30 min inkubace s kozím anti-králíkem Alexa 555 (1: 200, Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Po vyfarbení byly části důkladně promyty v 0.1 M PB, namontovány na skleněné sklíčka s 0.3% želatinou v ddH20 a krycím sklíčkem s vodným médicím prostředkem (Gelvatol) obsahujícím protizánětlivé činidlo 1,4-diazabicyklo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Imunohistochemické kontroly zahrnovaly vynechání jedné nebo obou primárních protilátek, což vedlo k nepřítomnosti značení ve vhodné vlnové délce.

Analýza dat

Sexuální chování

Pro všechny čtyři experimenty byly zaznamenány standardní parametry pro sexuální výkonnost, jak je popsáno výše, a analyzovány analýzou rozptylu (ANOVA). Analýza dat sexuálního chování během posledního zkušebního dne neodhalila žádné významné rozdíly mezi skupinami v žádném z parametrů sexuální výkonnosti.

Počet buněk pERK / Fos

Jednotlivé a dvojitě značené buňky pro Fos a pERK byly počítány v caudálních hladinách subregionů NAc jádra a skořápky, bazolaterální amygdaly (BLA), mediální amygdala (MEApd), centrální amygdala (CeA), mediální preoptické jádro (MPN) posterolaterální ložiskové jádro stria terminalis (BNSTpm a BNSTpl) a přední cingulované oblasti (ACA), prelimbic (PL) a infralimbické (IL) subregiony mPFC. Snímky byly zachyceny pomocí chlazené CCD kamery (Microfire, Optronics) připojené k mikroskopu Leica (DM500B, Leica Microsystems, Wetzlar, Německo) a softwaru Neurolucida (MicroBrightfield Inc) s pevným nastavením fotoaparátu pro všechny subjekty (pomocí cílů 10x). Pomocí softwaru neurolucida byly oblasti analýzy definovány na základě orientačních bodů (Swanson, 1998) jedinečné pro každou oblast mozku (viz Obrázek 1). Standardní oblasti analýzy byly použity ve všech oblastech kromě jádra a shellu NAc. V těchto oblastech nebyla exprese pERK a Fos homogenní a objevila se v patch-like vzorech. Celé jádro a shell byly proto načrtnuty na základě orientačních bodů (boční komory, přední komfort a ostrovy Calleja). Oblasti analýzy se mezi experimentálními skupinami nelišily a byly 1.3 mm2 v jádře a shellu NAc. Standardní oblasti analýzy pro zbývající oblasti byly: 1.6 mm2 v BLA, 2.5 a 2.25 mm2 v MEApd a CeA, 1.0 mm2 v MPN, 1.25 mm2 v subregionech BNST a mPFC a 3.15 mm2 ve VTA. Dvě úseky byly počítány pro každou z obou oblastí v obou oblastech mozku a počítáno bylo množství jednoregumentovaných a dvojitě značených buněk pro pERK a Fos, stejně jako procenta buněk pERK, které exprimovaly Fos marker. Při experimentech 1, 2 a 4 byly průměrné skupiny porovnávány pomocí dvoustupňové analýzy ANOVA (faktorů: páření a léků) a Fischerova LSD pro post hoc srovnání na úrovni významu 0.05. Pro experiment 3 byly průměrné skupiny porovnány pomocí nepárových t-testů na úrovni významnosti 0.05.

Obrázek 1       

Schematické výkresy a obrazy ilustrující oblasti analýzy mozku. Uvedené oblasti analýzy byly založeny na orientačních bodech jedinečných pro každou oblast mozku, nelišili se mezi experimentálními skupinami a byly 1.25 mm2 v subregio mPFC (a), 1.3 mm2 v ...

snímky

Digitální obrázky pro Obrázek 3 byly zachyceny pomocí CCD kamery (DFC 340FX, Leica) připojené k mikroskopu Leica (DM500B) a byly importovány do softwaru Adobe Photoshop 9.0 (Adobe Systems, San Jose, CA). Obrázky nebyly změněny jinak než s úpravou jasu.

Obrázek 3       

Reprezentativní obrazy sekcí NAc imunologicky zbarvených pro Fos (červená, a, d, g, j) a pERK (zelená, b, e, h, k) zvířat z každé experimentální skupiny: , Sex + Sal (d, e, f), Žádný sex + Meth (g, h, i) a Sex + Meth (j, k, l). Pravé panely jsou ...

VÝSLEDKY

Neurální aktivace lymského systému sexuálním chováním a správou

Experiment 1: Analýza jednobuněčných a dvojitě značených buněk pro párovou indukovanou FOS a Meth-indukovanou pERK u mužů, kteří dostali Meth 10 minuty před usmrcením, odhalila Fos indukovanou páření v MPN, BNSTpm, NAc jádru a skořápce, BLA, VTA, a všech subregionů mPFC, v souladu s předchozími studiemi demonstrujícími expresi Fos indukovanou pářením v těchto oblastech (Baum a Everitt, 1992, Pfaus a Heeb, 1997, Veening a Coolen, 1998, Hull a kol., 1999). Meth podávání 10 minut před porušením vyvolalo pERK v jádře a shellu NAc, BLA, MeApd, CeA, BNSTpl a oblastech mPFC, v souladu s aktivačními vzory indukovanými jinými psychostimulanci (Valjent a kol., 2000, Valjent a kol., 2004, Valjent a kol., 2005).

Kromě toho byly pozorovány tři vzorce koexprese neurální aktivace sexuálním chováním a Meth: Nejdříve byly zjištěny oblasti mozku, kde sex a drogy aktivovaly ne-překrývající se nervové populace (Tabulka 2). Konkrétně v CeA, MEApd, BNSTpl a mPFC došlo k významnému zvýšení jak pERK (F (1,16) = 7.39–48.8; p = 0.015- <0.001), tak Fos vyvolaného sexem (F (1,16, 16.53) = 158.83–0.001; p <1,16). V těchto oblastech však nedošlo k významnému zvýšení dvojitě značených neuronů u spářených mužů léčených meth. Jedinou výjimkou byl MEApd, kde byl zjištěn účinek páření na počet duálních značených buněk (F (9.991) = 0.006; p = XNUMX). Neexistoval však žádný celkový účinek léčby drogami a dvojí značení ve skupinách léčených pervitinem nebylo významně vyšší než ve skupinách léčených solným roztokem, a proto nebylo způsobeno lékem (Tabulka 2). Za druhé, mozkové oblasti byly identifikovány, kde nervová aktivizace byla indukována pouze pářením (Tabulka 3). Konkrétně MPN, BNSTpm a VTA byly aktivovány pouze pářením a obsahovaly signifikantní zvýšení Fos (F (1,16) = 14.99-248.99, p <xNUMX) indukované pářením, ale žádný pERK indukovaný Meth.

Tabulka 2       

Přehled zprostředkované indukce Fos a Meth-indukované exprese pERK v oblastech mozku, kde pohlaví a léky aktivují nepřekrývající se nervové populace.
Tabulka 3       

Přehled zprostředkované indukce Fos a Meth-indukované exprese pERK v oblastech mozku, kde nervová aktivace byla indukována pouze pářením.

Nakonec byly zjištěny oblasti mozku, kde sex a drogy aktivovaly překrývající se populace neuronů (Obrázek 2 a A3) .3). V jádru a plášti NAc, BLA a ACA byly celkové účinky páření (F (1,16) = 7.87–48.43; p = 0.013- <0.001) a medikamentózní léčby (F (1,16) = 6.39– 52.68; p = 0.022- <0.001), stejně jako interakce mezi těmito dvěma faktory (F (1,16) = 5.082–47.27; p = 0.04- <0.001; žádná významná interakce v ACA) na počty buněk exprimujících oba páření indukované Fos a Meth indukované pERK. Post hoc analýza odhalila, že počty duálních značených neuronů byly významně vyšší u spářených mužů s injekcí Meth ve srovnání s nespárovanými muži, kterým byl podáván Meth (p = 0.027- <0.001), nebo u spárovaných solných roztoků (p = 0.001- <0.001) mužů (Obrázek 2 a A3) .3). Když byly údaje vyjádřeny jako procenta aktivovaných neuronů, 39.2 ± 5.3% v jádře NAc, 39.2 ± 5.8% v shellu NAc, 40.9 ± 6.3% v BLA a 50.0 ± 5.3% ACA neuronů byly aktivovány jak páření tak Meth.

Obrázek 2       

Pohlavně indukovaná exprese pERK indukovaná Fos a Meth v NAc, BLA a ACA neuronech 10 min po podání 4 mg / kg Meth. V jádru NAc (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) a duální (c, f, i, ...

Neočekávané pozorování bylo, že sexuální chování ovlivnilo pERK indukovaný Meth. Ačkoli Meth významně indukoval hladiny pERK v obou skupinách se skupinou injekcí, která byla ve skupině s matrixem injekčně spojena, v NAc, BLA a ACA, značení pERK bylo signifikantně nižší u mužů s injekčním podáním injekčně podávaných mužů ve srovnání s nezaměstnanými muži (Obrázek 2b, e, h, k; p = 0.017- <0.001). Toto zjištění může dále podporovat hypotézu, že pohlaví a léky působí na stejné neurony, ale může také svědčit o změnách indukovaných pářením v absorpci nebo metabolismu drogy, které zase způsobují změněné nervové odpovědi na Meth. Aby se zjistilo, zda sexuální chování způsobuje jiný časový průběh aktivace indukované léčivem, byly částice NAc, BLA a ACA barveny pro samce usmrcené v pozdějším časovém bodě (15 min) po podání léku (experiment 2).

Experiment 2: Analýza jednobuněčných a dvojitě značených buněk potvrdila shora popsané poznatky, že sexuální chování a následná expozice Meth 15 minut před usmrcením vedly k významnému zvýšení Fos a pERK imuno-značení v jádře a shellu NAc, BLA a ACA. Kromě toho byla v těchto oblastech opět nalezena významná koexprese páření-indukovaného Fos a Meth-indukovaného pERK (Obrázek 4; páření: F (1,12) = 15.93–76.62; p = 0.002 - <0.001; účinek léku: F (1,12) = 14.11–54.41; p = 0.003 - <0.001). Počet dvojitě značených neuronů u spářených mužů s injekcí Meth byl významně vyšší ve srovnání s nespářenými muži ošetřenými Meth (p <0.001) nebo spářenými fyziologickými roztoky (p <0.001). Když byly údaje vyjádřeny jako procenta neuronů aktivovaných léčivem, aktivovalo se 47.2 ± 5.4% (jádro NAc), 42.7 ± 7.6% (NAc plášť), 36.7 ± 3.7% (BLA) a 59.5 ± 5.1% (ACA) neuronů pářením byly také aktivovány Meth. Kromě toho se pERK vyvolaná drogami nelišila mezi krytými a nepářenými zvířaty (Obrázek 4b, e, h, k), ve všech oblastech kromě ACA (p <0.001). Tyto údaje naznačují, že sexuální chování skutečně způsobuje změnu časového vzorce indukce pERK Meth.

Obrázek 4       

Pohlavně indukovaná exprese pERK indukovaná Fos a Meth v NAc, BLA a ACA neuronech 15 min po podání 4 mg / kg Meth. V jádru NAc (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) a duální (c, f, i, ...

Neurální aktivace po sexuálním chování a 1 mg / kg Meth

Výsledky doposud odhalily, že sexuální chování a 4 mg / kg Meth aktivují překrývající se populace neuronů v jádře a shellu NAc, BLA a ACA. To zkoumat vliv dávkování léků na toto překrytí při aktivaci byly také studovány vzorce nervové aktivace za použití nižší dávky Meth. Jádro a shell NAc, BLA a ACA byly analyzovány pro aktivaci indukovanou sexem a Meth. Vskutku, sexuální chování a následná expozice Meth vedla k významnému zvýšení Fos a pERK imuno-značení v NAc jádrových a shell oblastech, BLA, stejně jako neurony v oblasti ACA mPFCObrázek 5). Je zajímavé, že nižší dávka Meth vedla k podobnému počtu neuronů značených pERK, které byly indukovány 4 mg / kg Meth ve čtyřech analyzovaných oblastech mozku. Ještě důležitější je, že NAc jádro a skořápka, BLA a ACA vykazují významné zvýšení počtu dvojitě značených buněk (Obrázek 5c, f, i, l) ve srovnání s nespojenými muži s injekcí pervitinu (p = 0.003 - <0.001). Když byla data vyjádřena jako procento neuronů aktivovaných léčivem, 21.1 ± 0.9% a 20.4 ± 1.8% v jádru NAc a obalu, 41.9 ± 3.9% v BLA a 49.8 ± 0.8% neuronů ACA bylo aktivováno podle pohlaví a Meth.

Obrázek 5       

Pohlavně indukovaná exprese pERK indukovaná Fos a Meth v NAc, BLA a ACA neuronech 15 min po podání 1 mg / kg Meth. V jádru NAc (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) a duální (c, f, i, ...

Neurální aktivace po sexuálním chování a podávání d-amfetaminu

Pro ověření, zda výše uvedené výsledky byly specifické pro Meth, byl proveden další experiment pro studium neurální aktivace vyvolané pářením a Amphem. Analýza jednobuněčných a dvojitě značených buněk pro pERK a Fos ukázala, že sexuální chování a následná expozice Amphu vedla k významnému zvýšení Fos a pERK imuno-značení v jádře a shellu NAc a BLAObrázek 6; páření: F (1,15) = 7.38–69.71; p = 0.016 - <0.001; účinek léku: F (1,15) = 4.70–46.01; p = 0.047- <0.001). Kromě toho byl počet duálních značených neuronů významně vyšší u spářených Amph ošetřených ve srovnání s nepárovanými Amph ošetřenými (p = 0.009- <0.001), nebo u spřízněných fyziologickým roztokem (p = 0.015- <0.001) mužů (Obrázek 6c, f, i). Když byly údaje vyjádřeny jako procenta neuronů aktivovaných léčivem, 25.7 ± 2.8% a 18.0 ± 3.2% v jádře NAc a v shellu a 31.4 ± 2.0% neuronů BLA byly aktivovány oběma pářeními a Amph. Oblast ACA mPFC vykazovala významné hladiny Fos indukovaného pářením (Obrázek 6j; F (1,15) = 168.51; p <0.001). Na rozdíl od Meth však Amph nevedl k významnému zvýšení hladin pERK vyvolaných drogami v ACA (Obrázek 6k) nebo počty duálních značených neuronů v ACA (Obrázek 6l) ve srovnání se spřízněnými a nespojenými samci injektovanými fyziologickým roztokem.

Obrázek 6       

Sexuálně indukovaná exprese pRK indukovaná Fos a Amph v NAc, BLA a ACA neuronech 15 min po podání 5 mg / kg Amph. V jádru NAc (a, d, g, j), pERK (b, e, h, k) a duální (c, f, i, ...

DISKUSE

Současná studie demonstruje na buněčné úrovni překrytí mezi neurální aktivací přírodním posilujícím sexuálním chováním a psychostimulantem Meth. Proto tyto údaje ukazují, že nejen drogy působí na stejné oblasti mozku, které regulují přirozenou odměnu, ale ve skutečnosti drogy aktivují stejné buňky, které se podílejí na regulaci přirozené odměny. Konkrétně se zde ukázalo, že sexuální chování a Meth aktivují populaci neuronů v oblasti NAc jádra a skořápky, BLA a ACA mPFC, přičemž identifikují potenciální místa, kde může Meth ovlivňovat sexuální chování.

Současné zjištění, že sexuální chování a podávání Meth aktivují překrývající se populace neuronů v NAc, BLA a ACA, je v rozporu s výsledky jiných studií, které ukazují, že různé populace NAc neuronů kódují drogu a přirozenou odměnu.

Konkrétně, elektrofyziologické studie, které porovnávaly nervovou aktivaci při samo-podávání přírodních odměn (potraviny a voda) a intravenózního kokainu, ukázaly, že kokainová samospráva aktivuje diferenciální, nepřekrývající se populaci neuronů, která obecně neodpovídá při reakci operandu na vodu a posílení potravin (92%). Pouze 8% nahromaděných neuronů ukázalo aktivaci kokainem i přirozenou odměnou (Carelli a kol., 2000).

Naproti tomu většina (65%) buňky v NAc vykazovala aktivaci různými přírodními odměnami (jídlo a voda), a to i v případě, že jedna z nich byla chutnější (sacharóza) (Roop a kol., 2002).

Několik faktorů mohlo přispět k nesrovnalostem se současnými výsledky. Nejprve byly použity různé technické přístupy k vyšetřování neurální aktivity. Současná studie využila neuroanatomickou metodu pro detekci souběžné nervové aktivace dvěma různými stimuly za použití duální fluorescenční imunocytochemie pro Fos a pERK, což umožnilo vyšetření aktivace jednotlivých buněk na velkých rozptylech oblastí mozku. Naproti tomu studie společnosti Carelli a spolupracovníků používala elektrofyziologické záznamy omezené na NAc chování zvířat, aby řešily, zda samo-podávání zneužívajících léků aktivuje stejné neurální obvody používané přirozenými odměnami.

Za druhé, současná studie zkoumala jinou přirozenou odměnu, tj. Sexuální chování ve srovnání s předchozími studiemi, které používaly potraviny a vodu u omezených krys (Carelli, 2000). Potraviny a voda mohou mít menší hodnotu než páření. Sexuální chování je vysoce obohacující a krysy snadno tvoří CPP ke kopulaci (Agmo a Berenfeld, 1990, Martinez a Paredes, 2001, Tenk, 2008). Ačkoli krysy s omezenou stravou tvoří CPP pro vodu (Agmo et al., 1993, Perks a Clifton, 1997) a jídla (Perks a Clifton, 1997), dneomezené krysy přednostně konzumují a vytvářejí CPP pro chutnější potraviny (Jarosz a kol., 2006, Jarosz a kol., 2007).

Za třetí, naše studie obsahovaly různé léky proti zneužívání ve srovnání s předchozími studiemi, které používaly metamfetamin a amfetamin místo kokainu. Dosavadní výsledky ukazují, že Meth, a v menší míře amfetamin, vedlo k aktivaci neuronů aktivovaných sexuálním chováním. Zkušenosti s drogami mohou také hrát faktor v našich zjištěních. Současné studie používaly zvířata, které byly sexuálně zkušené, ale naivní. Naproti tomu elektrofyziologické studie společnosti Carelli a spolupracovníků používaly "dobře vyškolené" zvířata, u nichž došlo k opakované expozici kokainu.

Proto je možné, že Meth-indukovaná aktivace neuronů aktivovaných sexuálním chováním je pozměněna u potkanů ​​zažívajících léčbu. Nicméně předběžné studie z naší laboratoře naznačují, že zkušenost s léčbou je nepravděpodobné, že by byl hlavním faktorem, jako je sexuální chování a léčba Meth u mužů chronicky léčených Meth ko-aktivovanými podobnými procenty aktivovaných neuronů, jak je uvedeno v současné studii (20.3 ± 2.5% v jádře NAc a 27.8 ± 1.3% v shellu NAc, Frohmader a Coolen, nepublikované pozorování).

Současná studie zkoumala "přímý" účinek léčiv užívajících pasivní podávání. Současná analýza proto nezjistila informace týkající se nervových obvodů podílejících se na hledání léčivých přípravků nebo podnětů souvisejících s odměnou léků, ale spíše odhaluje nervovou aktivitu způsobenou farmakologickým působením léčiva. V předchozích elektrofyziologických studiích není NAc neurální aktivita vyskytující se během sekund po zesílených odezvách výsledkem farmakologického účinku kokainu, ale je značně závislá na asociativních faktorech v rámci paradigmatu samosprávy (Carelli, 2000, Carelli, 2002). Konkrétně je NAc neurální aktivita ovlivněna odpověďmi nezávislými prezentacemi podnětů spojených s intravenózním podáním kokainu, jakož i instrumentálními nepředvídatelnými událostmi (tj. Stisknutím páky), která jsou vlastní této paradigmatě chování (Carelli, 2000, Carelli a Ijames, 2001, Carelli, 2002, Carelli a Wightman, 2004). Stručně řečeno, naše zjištění o koaktivaci přírodou a odměnou léků mohou být specifické pro aktivaci sexuálním chováním a pasivní podávání Meth a Amph.

Meth a sex aktivovaly překrývající se populace neuronů v jádře a shellu NAc způsobem závislým na dávce. Ko-aktivované neurony v NAc mohou zprostředkovat potenciální účinky Meth na motivaci a odměňování vlastností sexuálního chování, protože léze NAc narušují sexuální chování (Liu a kol., 1998, Kippin a kol., 2004). Kromě toho jsou tyto neurony potenciálně místem účinku léku závislého na dávce při páření, protože nižší dávka Meth (1 mg / kg) snížila počet dvojitě značených buněk o 50% ve srovnání s vyšší dávkou Meth (4 mg / kg). Ačkoli tato studie neidentifikuje chemický fenotyp ko-aktivovaných neuronů, předchozí studie ukázaly, že exprese pERK a Fos indukovaná léčivou látkou v NAc závisí jak na dopaminovém (DA), tak na glutamátovém receptoru (Valjent a kol., 2000, Ferguson a kol., 2003, Valjent a kol., 2005, Sun a kol., 2008). Ačkoliv není jasné, zda je na Ncc závislá tvorba nervové aktivity závislá na těchto receptorů, bylo toto prokázáno na jiných oblastech mozku, zejména v oblasti mediální preoptiky (Lumley a Hull, 1999, Dominguez a kol., 2007). Thus, Meth může působit na neurony také aktivované během sexuálního chování prostřednictvím aktivace dopaminových a glutamátových receptorů. Úloha glutamátu NAc v sexuálním chování je v současné době nejasná, ale je dobře známo, že DA hraje rozhodující roli v motivaci sexuálního chování (Hull a kol., 2002, Hull a kol., 2004, Pfaus, 2009). Mikrodialyzační studie uvádějí zvýšení výtoku NAc DA během apetitivní a konzumační fáze mužského sexuálního chování (Fiorino a Phillips, 1999a, Lorrain a kol., 1999) a mezolimbický DA eflux byl korelován s usnadněním zahájení a udržování sexuálního chování u potkanů ​​(Pfaus a Everitt, 1995). Navíc manipulační studie DA ukazují, že DA antagonisté v NAc inhibují sexuální chování, zatímco agonisté usnadňují zahájení sexuálního chovánír (Everitt a kol., 1989, Pfaus a Phillips, 1989). Meth může tedy ovlivnit motivaci sexuálního chování prostřednictvím aktivace DA receptorů.

Na rozdíl od NAc, počet duálně značených buněk v BLA a ACA zůstal relativně nezměněn bez ohledu na dávku Meth. BLA je kritická pro diskrétní asociativní učení a je silně zapojena do podmíněného posílení a odměňování během instrumentální odezvy (Everitt a kol., 1999, Cardinal a kol., 2002, Podívejte se na 2002). BLA lézené krysy ukazují sníženou páku stisknutí pro podmíněné podněty spárované s jídlem (Everitt a kol., 1989) nebo sexuální posilování (Everitt a kol., 1989, Everitt, 1990). Naproti tomu tato manipulace nemá vliv na konzumační fázi krmení a sexuálního chování (Cardinal a kol., 2002). BLA také hraje klíčovou roli v paměti podmíněných podnětů spojených s drogovými podněty (Grace a Rosenkranz, 2002, Laviolette a Grace, 2006). Léze nebo farmakologická inaktivace BLA blokují akvizici (Whitelaw et al., 1996) a výraz (Grimm a See, 2000) podmíněné obnovení kokainu, aniž by to ovlivnilo proces podávání léků. Dále, Amph infuze přímo do BLA má za následek potenciální obnovu léku za přítomnosti podmíněných podnětů (Viz et al., 2003). Proto je možné, že přenos DA DA v BLA má za následek potenciální emocionální projev a hledání (Ledford a kol., 2003) sexuální odměny, čímž přispívají ke zlepšení pohlavního styku a touhy, které hlásily osoby zneužívající léčbu (Semple a kol., 2002, Zelená a Halkitis, 2006).

V ACA byla neuronová aktivizace sexuálně aktivovaných neuronů nezávislá na dávce a specifická pro Meth, protože nebyla pozorována u Amph. Ačkoli Meth a Amph mají podobné strukturní a farmakologické vlastnosti, Meth je silnější psychostimulant než Amph s dlouhodobějšími účinky (NIDA, 2006). Studie od Goodwina a kol. že Meth generuje větší DA eflux a inhibuje clearance místně aplikovaného DA účinněji u potkaní NAc než Amph. Tyto vlastnosti by mohly přispět k návykovým vlastnostem Meth ve srovnání s Amph (Goodwin a kol., 2009) a možná rozdíly v neurální aktivaci pozorované mezi oběma léky. Není však jasné, zda jsou rozdílné vzorce výsledků kvůli rozdílům účinnosti mezi léky nebo účinnostmi týkajícími se použitých dávek a je zapotřebí dalšího vyšetření.

Současná aktivace Meth a sexu nebyla pozorována v dalších subregionech mPFC (IL a PL). U potkanů ​​byla ACA rozsáhle studována pomocí apretičních úkolů a podporovala roli ve sdruženích podporujících stimulaci (Everitt a kol., 1999, Podívejte se na 2002, Cardinal a kol., 2003). Existuje dostatek důkazů o tom, že mPFC se podílí na touze po drogách a relapsu k chování drog a chování k užívání drog jak u lidí, tak u potkanů (Grant a kol., 1996, Childress a kol., 1999, Capriles a kol., 2003, McLaughlin a See, 2003, Shaham a kol., 2003, Kalivas a Volkow, 2005). jáV souladu s tím bylo navrženo, že dFfunkce mPFC způsobená opakovanou expozicí zneužívání drog by mohla být odpovědná za sníženou kontrolu impulsů a zvýšené chování zaměřené na léčbu, jak bylo pozorováno u mnoha závislých (Jentsch a Taylor, 1999). Nedávné údaje z naší laboratoře prokázaly, že léze mPFC vedou k pokračujícímu hledání sexuálního chování, když je to spojeno s averzivním podnětem (Davis a kol., 2003). I když tato studie nezkoumala ACA, podporuje hypotézu, že mPFC (a ACA specificky) zprostředkovává účinky Meth na ztrátu inhibiční kontroly nad sexuálním chováním,Salo a kol., 2007).

Závěrem společně tyto studie tvoří kritický první krok k lepšímu pochopení toho, jak zneužívání drog působí na nervové cesty, které zpravidla zprostředkovávají přirozené odměny. Navíc tyto poznatky ukazují, že na rozdíl od současného přesvědčení, že zneužívání drog neaktivuje stejné buňky v mezolimbickém systému jako přirozená odměna, Meth a v menší míře Amph aktivují stejné buňky jako sexuální chování. Na druhé straně tyto společně aktivované nervové populace mohou ovlivnit hledání přirozené odměny po expozici léčiva. Konečně, výsledky této studie mohou významně přispět k pochopení základů závislosti obecně. Srovnání podobností a rozdílů, jakož i změny v neurální aktivitě mezolimbického systému vyvolané sexuálním chováním v porovnání s drogami zneužívání mohou vést k lepšímu pochopení zneužívání návykových látek a souvisejících změn v přirozené odměně.

Poděkování

Tento výzkum byl podpořen granty od národních institucí zdravotnictví R01 DA014591 a kanadských ústavů výzkumu zdraví RN 014705 až po LMC.

ZKRATKY

  • ABC
  • avidin-biotin-křenová peroxidáza
  • ACA
  • přední cingulární oblast
  • Amph
  • d-amfetamin
  • BLA
  • bazolaterální amygdala
  • BNSTpl
  • posterolaterální ložiskové jádro Stria terminis
  • BNSTpm
  • posteromediální ložisko jádra Stria terminis
  • BT
  • biotinylovaného tyramidu
  • CeA
  • centrální amygdala
  • CPP
  • podmíněné místo
  • E
  • ejakulace
  • EL
  • ejakulační latence
  • IF
  • infralimbic oblast
  • IL
  • latence intromise
  • IM
  • intromise
  • M
  • namontovat
  • MAP Kinase
  • mitogenem aktivovanou proteinovou kinázu
  • MEApd
  • posterodorsální mediální amygdala
  • meth
  • metamfetamin
  • ML
  • latence připojení
  • mPFC
  • mediální prefrontální kortex
  • MPN
  • mediální preoptické jádro
  • NAc
  • jádro Accumbens
  • PB
  • fosfátového pufru
  • PBS
  • fosfátovým pufrovaným solným roztokem
  • PEI
  • po ejakulačním intervalu
  • vyzdobit
  • fosforylované MAP kinázy
  • PL
  • prelimbic oblast
  • VTA
  • ventrální tegmentální oblast

Poznámky pod čarou

Zřeknutí se odpovědnosti vydavatele: Jedná se o soubor PDF s neupraveným rukopisem, který byl přijat k publikaci. Jako službu pro naše zákazníky poskytujeme tuto ranní verzi rukopisu. Rukopis podstoupí kopírování, sázení a přezkoumání výsledného důkazu před jeho zveřejněním ve své konečné podobě. Vezměte prosím na vědomí, že během výrobního procesu mohou být objeveny chyby, které by mohly ovlivnit obsah, a veškeré právní odmítnutí týkající se časopisu.

Reference

  1. Agmo A. Mužské potkanové sexuální chování. Brain Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Zesilující vlastnosti ejakulace u samců potkanů: úloha opioidů a dopaminu. Behav Neurosci. 1990; 104: 177-182. [PubMed]
  3. Agmo A, Federman I, Navarro V, Padua M, Velazquez G. Odměna a výztuž vyrobená pitnou vodou: Úloha opioidů a subtypů receptorů dopaminu. Pharmacol Biochem Behav. 1993; 46 [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Sexuální chování a environmentální příznaky spojené s pohlavím aktivují mezolimbický systém u samců potkanů. Neuropsychopharmacology. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  5. Baum MJ, Everitt BJ. Zvýšená exprese c-fos v mediální preoptické oblasti po páření u samců potkanů: Role aferentních vstupů z mediální amygdaly a středního mozku centrálního tegmentálního pole. Neurovědy. 1992; 50: 627-646. [PubMed]
  6. Capriles N, Rodaros D, Sorge RE, Stewart J. Úloha prefrontální kůry při obnovení hledání kokainu u potkanů ​​vyvolaného stresem a kokainem. Psychopharmacology (Berl) 2003; 168: 66-74. [PubMed]
  7. Kardinál RN, Parkinson JA, hala J, Everitt BJ. Emoce a motivace: role amygdaly, ventrálního striata a prefrontální kůry. Neurovědy a biobehaviorální recenze. 2002; 26: 321–352. [PubMed]
  8. Kardinál RN, Parkinson JA, Marbini HD, Toner AJ, Bussey TJ, Robbins TW, Everitt BJ. Úloha předního cingulárního kortexu při kontrole chování podmíněných Pavlovských podnětů u potkanů. Behaviorální neurovědy. 2003; 117: 566-587. [PubMed]
  9. Carelli RM. Aktivace akumulační akumulace buněk stimulacemi spojenými s podáváním kokainu při samo-podávání. Synapse. 2000; 35: 238-242. [PubMed]
  10. Carelli RM. Nucleus accumbens střílí buňky během chování zaměřeného na cíl pro kokain vs. „přirozené“ posílení. Fyziologie a chování. 2002; 76: 379–387. [PubMed]
  11. Carelli RM, Ijames SG. Selektivní aktivace accumbensových neuronů stimulacemi souvisejícími s kokainem v průběhu vícenásobného rozvrhu vody / kokainu. Výzkum mozku. 2001; 907: 156-161. [PubMed]
  12. Carelli RM, Ijames SG, Crumling AJ. Důkaz, že oddělené neurální okruhy v nucleus accumbens kódují kokain versus "přírodní" (voda a jídlo) odměnu. J Neurosci. 2000; 20: 4255-4266. [PubMed]
  13. Carelli RM, Wightman RM. Funkční mikrocirkulaci v závislosti na drogové závislosti: náhled z signalizace v reálném čase během chování. Současné stanovisko v neurobiologii. 2004; 14: 763-768. [PubMed]
  14. Carelli RM, Wondolowski J. Selektivní kódování kokainu versus přirozené odměny neuronů nucleus accumbens není příbuzné chronické expozici léku. J Neurosci. 2003; 23: 11214-11223. [PubMed]
  15. Chang JY, Zhang L, Janák PH, Woodward DJ. Neuronové odpovědi v prefrontální kůře a nucleus accumbens při samo-podávání heroinu u volně se pohybujících krys. Brain Res. 1997; 754: 12-20. [PubMed]
  16. Chen BT, Bowers MS, Martin M, Hopf FW, Guillory AM, Carelli RM, Chou JK, Bonci A. Kokain, ale ne přírodní odměna Samospráva ani pasivní infuze kokainu produkuje trvalý LTP ve VTA. Neuron. 2008; 59: 288-297. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  17. Chen PC, Chen JC. Zvýšená aktivita Cdk5 a translace p35 ve Ventral Striatum akutních a chronických potkanů ​​léčených metamfetaminy. Neuropsychopharmacology. 2004; 30: 538-549. [PubMed]
  18. Childress AR, Mozley PD, McElgin W, Fitzgerald J., Reivich M., O'Brien CP. Limbická aktivace během touhy po vyvolání kokainu. Am J Psychiatrie. 1999; 156: 11-18. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  19. Choe ES, Chung KT, Mao L, Wang JQ. Amfetamin zvyšuje fosforylaci extracelulárních signálně regulovaných kináz a transkripčních faktorů v potkaních striářích prostřednictvím metabotropních glutamátových receptorů skupiny I. Neuropsychopharmacology. 2002; 27: 565-575. [PubMed]
  20. Choe ES, Wang JQ. CaMKII reguluje amfetaminem indukovanou fosforylaci ERK1 / 2 v striatálních neuronech. Neuroreport. 2002; 13: 1013-1016. [PubMed]
  21. Davis JF, Loos M, Coolen LM. Společnost pro behaviorální neuroendokrinologii. Vol. 44. Cincinnati, Ohio: Hormony a chování; 2003. Léze mediální prefrontální kůry nenarušují sexuální chování u samců potkanů; str. 45.
  22. Di Chiara G, Imperato A. Léky užívané lidmi přednostně zvyšují koncentrace synaptických dopaminů v mezolimbickém systému volně se pohybujících krys. Proc Natl Acad Sci US A. 1988; 85: 5274-5278. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  23. Dominguez JM, Balfour ME, Lee HS, Brown HJ, Davis BA, Coolen LM. Páření aktivuje NMDA receptory v oblasti mediální preoptiky samců potkanů. Behaviorální neurovědy. 2007; 121: 1023-1031. [PubMed]
  24. Elifson KW, Klein H, Sterk CE. Předpovědi sexuálního ohrožení mezi novými uživateli drog. Časopis sexuálního výzkumu. 2006; 43: 318-327. [PubMed]
  25. Ellkashef A, Vocci F, Hanson G, White J, Wickes W, Tiihonen J. Farmakoterapie závislostí na methamfetaminu: Aktualizace. Zneužívání návykových látek. 2008; 29: 31-49. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  26. Everitt BJ. Sexuální motivace: neurální a behaviorální analýza mechanismů, které jsou základem reakce apelace a kopulace samců potkanů. Neurosci Biobehav Rev. 1990; 14: 217-232. [PubMed]
  27. Everitt BJ, Cador M, Robbins TW. Interakce mezi amygdálou a ventrálním striatem v stimulačních a asociačních odměnách: Studie používající program sexuální výztuže druhého řádu. Neurovědy. 1989; 30: 63-75. [PubMed]
  28. Everitt BJ, Fray P, Kostarczyk E, Taylor S, Stacey P. Studie instrumentálního chování se sexuálním zesílením u samců potkanů ​​(Rattus norvegicus): I. Kontrola krátkými vizuálními podněty spárovanými s receptivní ženou. J Comp Psychol. 1987; 101: 395-406. [PubMed]
  29. Everitt BJ, Parkinson JA, Olmstead MC, Arroyo M, Robledo P, Robbins TW. Asociativní procesy závislostí a odměňování rolí amygdala-ventrálních striatálních podsystémů. Annals z Newyorské akademie věd. 1999; 877: 412-438. [PubMed]
  30. Everitt BJ, Stacey P. Studie instrumentálního chování se sexuální výztuží u samců potkanů ​​(Rattus norvegicus): II. Účinky lézí preoptické oblasti, kastrace a testosteronu. J Comp Psychol. 1987; 101: 407-419. [PubMed]
  31. Feltenstein MW, viz RE. Neurocirkulace závislosti: přehled. Br J Pharmacol. 2008; 154: 261-274. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  32. Ferguson SM, Norton CS, Watson SJ, Akil H, Robinson TE. Amfetaminem vyvolaná exprese c-fos mRNA v caudate-putamen: účinky DA a NMDA receptorových antagonistů se liší jako funkce neuronového fenotypu a environmentálního kontextu. Journal of Neurochemistry. 2003; 86: 33-44. [PubMed]
  33. Fiorino DF, Coury A, Phillips AG. Dynamické změny jaderného výtoku nucleus accumbens dopaminu během Coolidge efektu u samců potkanů. J Neurosci. 1997; 17: 4849-4855. [PubMed]
  34. Fiorino DF, společnost Phillips AG. Ulehčování sexuálního chování a zlepšeného dopaminového efektu v jaderných pohřebištích samců potkanů ​​po senzibilizaci chování vyvolanou D-amfetaminem. J Neurosci. 1999a; 19: 456-463. [PubMed]
  35. Fiorino DF, společnost Phillips AG. Zajištění sexuálního chování u samců krys po d-amfetaminem indukované behaviorální senzitizaci. Psychopharmacology. 1999b; 142: 200-208. [PubMed]
  36. Goodwin JS, Larson GA, Swant J, Sen N, Javitch JA, Zahniser NR, De Felice LJ, Khoshbouei H. Amfetamin a metamfetamin různě ovlivňují transportéry dopaminu in vitro a in vivo. J Biol Chem. 2009; 284: 2978-2989. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  37. Grace AA, Rosenkranz JA. Regulace podmíněných odpovědí bazolaterálních neuronů amygdaly. Fyziologie a chování. 2002; 77: 489–493. [PubMed]
  38. Grant S, Londýn ED, Newlin DB, Villemagne VL, Liu X, Contoreggi C, Phillips RL, Kimes AS, Margolin A. Aktivace paměťových obvodů během coka vyvolaného kokainem. Proc Natl Acad Sci US A. 1996; 93: 12040-12045. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  39. Zelená AI, Halkitis PN. Krystalový metamfetamin a sexuální socialita v městské gay subkultuře: volitelná afinita. Kultura, zdraví a sexualita. 2006; 8: 317–333. [PubMed]
  40. Grimm JW, viz RE. Disociace primárních a sekundárních lymfatických jader významných pro odměny v modelu relapsu na zvířatech. Neuropsychopharmacology. 2000; 22: 473-479. [PubMed]
  41. Hull EM, Lorrain DS, Du J, Matuszewich L, Lumley LA, Putnam SK, Moses J. Interakce hormon-neurotransmiterů v řízení sexuálního chování. Behaviorální výzkum mozku. 1999; 105: 105-116. [PubMed]
  42. Hull EM, Meisel RL, Sachs BD. Mužské sexuální chování. In: Pfaff DW, a kol., Editoři. Hormony mozku a chování. San Diego, CA: Elsevier Science (USA); 2002. str. 1-138.
  43. Hull EM, Muschamp JW, Sato S. Dopamin a serotonin: vlivy na mužské sexuální chování. Fyziologie a chování. 2004; 83: 291–307. [PubMed]
  44. Ishikawa K, Nitri A, Mizoguchi H, Mohri A, Murai R, Miyamoto Y, Noda Y, Kitaichi K, Yamada K, Nabeshima T. Účinky jednorázového a opakovaného podávání metamfetaminu nebo morfinu na expresi genu neuroglykan C v mozku krys. Mezinárodní žurnál neuropsychofarmakologie. 2006; 9: 407-415. [PubMed]
  45. Jarosz PA, Kessler JT, Sekhon P, Coscina DV. Podmíněná preference míst (CPP) na vysoce kalorické "občerstvení" u kmenů potkanů ​​geneticky náchylných vůči rezistenci na diety vyvolanou obezitou: odolnost proti blokádě naltrexonu. Farmakologická biochemie a chování. 2007; 86: 699-704. [PubMed]
  46. Jarosz PA, Sekhon P, Coscina DV. Účinky opioidního antagonismu na kondicionované preference míst na občerstvení. Farmakologická biochemie a chování. 2006; 83: 257-264. [PubMed]
  47. Jentsch JD, Taylor JR. Impulsivita vyplývající z dysfunkce frontostriatal při zneužívání drog: důsledky pro kontrolu chování podněcujícími stimuly. Psychopharmacology (Berl) 1999; 146: 373-390. [PubMed]
  48. Kalivas PW, Volkow ND. Neurální základ závislosti: patologie motivace a volby. Am J Psychiatrie. 2005; 162: 1403-1413. [PubMed]
  49. Kelley AE. Paměť a závislost: sdílené neurální obvody a molekulární mechanismy. Neuron. 2004; 44: 161-179. [PubMed]
  50. Kippin TE, Sotiropoulos V, Badih J, Pfaus JG. Opačné role jádra accumbens a přední boční hypotalamické oblasti při kontrole sexuálního chování u samců potkanů. European Journal of Neuroscience. 2004; 19: 698-704. [PubMed]
  51. Laviolette SR, Grace AA. Cannabinoidy posílí plasticitu v emočním učení v neuronech mediálního prefrontálního kortexu prostřednictvím bazolaterálních vstupů amygdaly. J Neurosci. 2006; 26: 6458-6468. [PubMed]
  52. Ledford CC, Fuchs RA, viz RE. Potenciální obnovení chování vyvolaného kokainem po infuzi D-amfetaminu do basolaterální amygdaly. Neuropsychopharmacology. 2003; 28: 1721-1729. [PubMed]
  53. Lett BT. Opakované expozice zesilují spíše než snižují efekty odměňování amfetaminu, morfinu a kokainu. Psychopharmacology (Berl) 1989; 98: 357-362. [PubMed]
  54. Liu YC, Sachs BD, Salamone JD. Pohlavní chování u samců potkanů ​​po radiofrekvenčních lécích nebo lécích poškozujících dopamin v nucleus accumbens. Pharmacol Biochem Behav. 1998; 60: 585-592. [PubMed]
  55. Lorrain DS, Riolo JV, Matuszewich L, Hull EM. Laterální hypotalamický serotonin inhibuje nukleární akumulace dopaminu: důsledky pro sexuální satiety. J Neurosci. 1999; 19: 7648-7652. [PubMed]
  56. Lumley LA, Hull EM. Účinky antagonisty D1 a sexuálních zkušeností na imunitní reakci podobnou Fos-indukované kopulaci v mediálním preoptickém jádru. Výzkum mozku. 1999; 829: 55-68. [PubMed]
  57. Martinez já, Paredes RG. Pouze self-paced páření je odměňování u potkanů ​​obou pohlaví. Horm Behav. 2001; 40: 510-517. [PubMed]
  58. McLaughlin J, viz RE. Selektivní inaktivace dorsomediální prefrontální kůry a bazolaterální amygdaly zeslabují podmíněnou obnovu vyhubeného chování kokainu u potkanů. Psychopharmacology (Berl) 2003; 168: 57-65. [PubMed]
  59. Mitchell JB, Stewart J. Facilita sexuálního chování u samčích krys za přítomnosti podnětů dříve spojených se systémovými injekcemi morfinu. Farmakologická biochemie a chování. 1990; 35: 367-372. [PubMed]
  60. Mizoguchi H, Yamada K, Mizuno M, Mizuno T, Nitta A, Noda Y, Nabeshima T. Pravidla odměňování metamfetaminu pomocí extracelulární signální regulace kinázy 1 / 2 / ets jako Gene-1 signalizační cesta prostřednictvím aktivace dopaminu NIDA Výzkumná série: zneužívání metamfetaminu a návykové látky 2006 NIH číslo publikace 06-4210.PubMed]
  61. Výhody SM, Clifton PG. Přehodnocení vyztužovače a preference podmíněného místa. Fyziologie a chování. 1997; 61: 1–5. [PubMed]
  62. Pfaus JG. Cesty sexuální touhy. Časopis sexuální medicíny. 2009; 6: 1506-1533. [PubMed]
  63. Pfaus JG, Everitt BJ. Psychofarmakologie sexuálního chování. V: Bloom FE, Kupfer DJ, redaktoři. Psychopharmacology: čtvrtá generace pokroku. New York: Raven; 1995. str. 743-758.
  64. Pfaus JG, Heeb MM. Důsledky okamžité genetické indukce v mozku po sexuální stimulaci ženských a mužských hlodavců. Brain Research Bulletin. 1997; 44: 397-407. [PubMed]
  65. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Kondicionování a sexuální chování: recenze. Horm Behav. 2001; 40: 291-321. [PubMed]
  66. Pfaus JG, Phillips AG. Diferenciální účinky antagonistů receptoru dopaminu na sexuální chování samců potkanů. Psychopharmacology. 1989; 98: 363-368. [PubMed]
  67. Pierce RC, Kumaresan V. Mezolimbický dopaminový systém: Poslední společná cesta pro zesilující účinek návykových látek? Neurovědy a biobehaviorální recenze. 2006; 30: 215–238. [PubMed]
  68. Pitchers KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Sexuální zkušenost vyvolává funkční a strukturní plasticitu v mezolimbickém systému. Biologická psychiatrie. 2009 Stiskněte tlačítko.
  69. Ranaldi R, Pocock D, Zereik R, Wise RA. Kolísání dopaminu v nucleus accumbens během udržování, zániku a obnovení intravenózního samoadministrace D-amfetaminu. J Neurosci. 1999; 19: 4102-4109. [PubMed]
  70. Rawson RA, Washton A, Domier CP, Reiber C. Drogy a sexuální efekty: role typu a pohlaví. Věstník léčby zneužívání látek. 2002; 22: 103-108. [PubMed]
  71. Robertson GS, Pfaus JG, Atkinson LJ, Matsumura H, Phillips AG, Fibiger HC. Sexuální chování zvyšuje expresi c-fos v předním mozku samčích krys. Brain Res. 1991; 564: 352-357. [PubMed]
  72. Roop RG, Hollander RJ, Carelli RM. Akumuluje aktivitu během vícečetného schématu pro zpevnění vody a sacharózy u potkanů. Synapse. 2002; 43: 223-226. [PubMed]
  73. Salo R, Nordahl TE, Natsuaki Y, Leamon MH, Galloway GP, Waters C, Moore CD, Buonocore MH. Kontrola pozornosti a úrovně metabolického mozku u žadatelů o metamfetamin. Biologická psychiatrie. 2007; 61: 1272-1280. [PubMed]
  74. Schilder AJ, Lampinen TM, Miller ML, Hogg RS. Křišťálový metamfetamin a extáze se liší ve vztahu k nebezpečnému sexu mezi mladými homosexuálními muži. Kanadský časopis o veřejném zdraví. 2005; 96: 340-343. [PubMed]
  75. Viz RE. Neurální substráty podmíněného podněcování k relapsu k drogovému chování. Farmakologická biochemie a chování. 2002; 71: 517-529. [PubMed]
  76. Viz RE, Fuchs RA, Ledford CC, McLaughlin J. Drug Addiction, Relapse a Amygdala. Annals z Newyorské akademie věd. 2003; 985: 294-307. [PubMed]
  77. Semple SJ, Patterson TL, Grant I. Motivace spojené s užíváním metamfetaminu u HIV mužů, kteří mají sex s muži. Věstník léčby zneužívání látek. 2002; 22: 149-156. [PubMed]
  78. Shaham Y, Shalev U, Lu L, De Wit H, Stewart J. Rekonstrukční model relapsu: historie, metodologie a hlavní nálezy. Psychopharmacology (Berl) 2003; 168: 3-20. [PubMed]
  79. Shippenberg TS, Heidbreder C. Senzibilizace podmíněných efektů odměňování kokainu: farmakologické a časové charakteristiky. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 273: 808-815. [PubMed]
  80. Shippenberg TS, Heidbreder C, Lefevour A. Senzibilizace k podmíněným efektům odměňování morfinu: farmakologie a časové charakteristiky. Eur J Pharmacol. 1996; 299: 33-39. [PubMed]
  81. Somlai AM, Kelly JA, McAuliffe TL, Ksobiech K, Hackl KL. Prediktory chování sexuálního rizika HIV v komunitním vzorku mužů a žen užívajících injekční drogy. AIDS a chování. 2003; 7: 383-393. [PubMed]
  82. Springer A, Peters R, Shegog R., White D, Kelder S. Metamfetamin užívání a sexuální riziko chování v amerických studentů středních škol: Nálezy z národního přehledu chování rizik. Preventivní věda. 2007; 8: 103-113. [PubMed]
  83. Sun WL, Zhou L, Hazim R, Quinones-Jenab V, Jenab S. Účinky dopaminu a NMDA receptorů na expresi Fos indukovanou kokainem v striatu Fischer potkanů. Výzkum mozku. 2008; 1243: 1-9. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  84. Swanson LW, redaktor. Mapy mozku: struktura mozku krysy. Amsterdam: Elsevier věda; 1998.
  85. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Sexuální odměna u samců potkanů: Účinky sexuální zkušenosti na podmínkách podmíněného místa spojených s ejakulací a intromisemi. Horm Behav. 2008 [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  86. Valjent E, Corvol JC, Stránky C, Besson MJ, Maldonado R, Caboche J. Zapojení extracelulární kaskády kinázy řízené signálem pro kokain-odměňující vlastnosti. J Neurosci. 2000; 20: 8701-8709. [PubMed]
  87. Valjent E, Stránky C, Herve D, Girault JA, Caboche J. Návykové a non-návykové drogy indukují odlišné a specifické vzorce aktivace ERK v myším mozku. Eur J Neurosci. 2004; 19: 1826-1836. [PubMed]
  88. Valjent E, Pascoli V, Svenningsson P, Paul S, Enslen H, Corvol JC, Stipanovich A, Caboche J, Lombroso PJ, Nairn AC, Greengard P, Herve D, Girault JA. Regulace kaskády proteinové fosfatázy umožňuje konvergentní dopaminové a glutamátové signály k aktivování ERK v striatu. Proc Natl Acad Sci US A. 2005; 102: 491-496. [PMC bezplatný článek] [PubMed]
  89. Vanderschuren LJ, Kalivas PW. Změny v dopaminergním a glutamatergickém přenosu při indukci a expresi behaviorální senzitizace: kritická revize předklinických studií. Psychopharmacology (Berl) 2000; 151: 99-120. [PubMed]
  90. Veening JG, Coolen LM. Neurální aktivace po sexuálním chování u mužského a ženského mozku krys. Behaviorální výzkum mozku. 1998; 92: 181-193. [PubMed]
  91. Whitelaw RB, Markou A, Robbins TW, Everitt BJ. Excitotoxické léze bazolaterální amygdaly zhoršují získávání chování kokainu podle druhého řádu výztuže. Psychopharmacology. 1996; 127: 213-224. [PubMed]
  92. Wise RA. Neurobiologie závislosti. Současné stanovisko v neurobiologii. 1996; 6: 243-251. [PubMed]