ΣΧΟΛΙΑ: Οι μελέτες DeltaFosB που αναφέρουμε συχνά επικεντρώθηκαν όλες στον πυρήνα accumbens (κέντρο ανταμοιβής) και διαπίστωσαν ότι το σεξ ενεργοποιεί σχεδόν τους ίδιους εγκεφαλικούς μηχανισμούς με τη μεθαμφεταμίνη και την κοκαΐνη. Από την ιστορική μελέτη του ίδιου ερευνητή ( Natural and Drug Rewards Act on Common Neural Plasticity Mechanisms with ΔFosB as a Key Mediator (2013) ):
Έτσι, οι φυσικές ανταμοιβές και τα ναρκωτικά όχι μόνο συγκλίνουν στην ίδια νευρική οδό, αλλά συγκλίνουν στους ίδιους μοριακούς μεσολαβητές, και πιθανότατα στους ίδιους νευρώνες στο Nucleus Accumbens, για να επηρεάσουν το κίνητρο και την «επιθυμία» και των δύο τύπων ανταμοιβών
Η απόσυρση: το μεθ, η κοκαΐνη και το σεξ κάνουν όλα τα ίδια θεμελιώδη πράγματα με τα ίδια νευρικά κύτταρα στο κέντρο ανταμοιβής (nucleus accumbens), ανεξάρτητα από το αν μπορούν να κάνουν διαφορετικά αλλού στον εγκέφαλο. Αυτό αποσυναρμολόγησε το συνηθισμένο σημείο συζήτησης ότι τα φυσικά οφέλη και τα φάρμακα διαφέρουν σε μηχανισμούς και αποτελέσματα.
Αυτή η νέα μελέτη εξέτασε τι κάνει το σεξ στο VTA. Το VTA είναι το σημείο όπου ξεκινούν τα νευρικά κύτταρα που παράγουν ντοπαμίνη - και διακλαδώνονται στον πυρήνα accumbens, τον μετωπιαίο φλοιό και την αμυγδαλή. Βασικά, το VTA είναι η πηγή (πηγή) του μεγαλύτερου μέρους της ντοπαμίνης μας. Δείτε αυτές τις 2 εικόνες του κυκλώματος ανταμοιβής: Εικ.1 , Εικ.2
Οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι το σεξ (κλιμάκωση) προκαλεί προσωρινή συρρίκνωση των κυτταρικών σωμάτων στο VTA (στους άνδρες). Τα κυτταρικά σώματα και οι δενδρίτες τους αποτελούν τη φαιά ουσία του εγκεφάλου. Αυτό ακριβώς κάνει ο εθισμός στην ηρωίνη στο VTA (όχι μια εφάπαξ χρήση ηρωίνης, αλλά χρόνια χρήση ηρωίνης). Σημειώστε ότι η ίδια συρρίκνωση των κυτταρικών σωμάτων του VTA συμβαίνει και σε ανθρώπους εθισμένους στην ηρωίνη.
Η συρρίκνωση κυττάρων που προκαλείται από το φύλο διαρκεί για τουλάχιστον 7 ημέρες. Οι αλλαγές που προκλήθηκαν από το φύλο είχαν επιστρέψει στο φυσιολογικό στις 30 ημέρες, αλλά οι ερευνητές αξιολόγησαν μόνο τις ημέρες 1, 7 και 30.
Η συρρίκνωση των κυτταρικών σωμάτων στον εθισμό στην ηρωίνη έχει ως αποτέλεσμα χαμηλότερη ντοπαμίνη στον επικλινή πυρήνα - ή αυτό που ονομάζουμε απευαισθητοποίηση . Οι ερευνητές χορήγησαν μορφίνη στους αρουραίους για να αξιολογήσουν την αντίδρασή τους (μετά το σεξ), αλλά δεν συνέβη τίποτα. Συνήθως οι αρουραίοι αγαπούν πολύ τη μορφίνη, αλλά εδώ απευαισθητοποιήθηκαν προσωρινά. Με λίγα λόγια, το κύκλωμα ανταμοιβής των αρουραίων μετά την εκσπερμάτιση δεν ανταποκρινόταν στο χαμηλό επίπεδο ηρωίνης. Οι ερευνητές υπέθεσαν ότι θα χρειάζονταν υψηλότερες δόσεις για να προκληθεί μια «φυσιολογική» αντίδραση στους αρουραίους.
Συνοψίζοντας - το σεξ (προσωρινά) κάνει ακριβώς το ίδιο πράγμα στο VTA όπως και ο εθισμός στην ηρωίνη: συρρίκνωση των νευρικών κυττάρων που παράγουν ντοπαμίνη. Αυτό οδηγεί σε χαμηλότερη ντοπαμίνη στο κέντρο ανταμοιβής και λιγότερη ανταπόκριση στα ναρκωτικά - και χρειάζονται τουλάχιστον 7 ημέρες για να ανακάμψουν οι εγκέφαλοι αρουραίων.
J Neurosci. 25 Ιουνίου 2014;34(26):8825-36 . doi: 10.1523/JNEUROSCI.0133-14.2014.
Κανάτες KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.
Περίληψη
Η φυσική ανταμοιβή και τα ναρκωτικά κατάχρησης συγκλίνουν στην μεσολομυϊκή οδό και ενεργοποιούν τον κοινό μηχανισμό νευρικής πλαστικότητας στον επικλινή πυρήνα. Η χρόνια έκθεση σε οπιοειδή προκαλεί πλαστικότητα στους ντοπαμινεργικούς νευρώνες της κοιλιακής καλυπτρικής περιοχής (VTA), η οποία ρυθμίζει την ανοχή στην ανταμοιβή στη μορφίνη.
Εδώ δοκιμάζουμε τις υποθέσεις ότι η προκαλούμενη από ζευγάρωμα απελευθέρωση ενδογενών οπιοειδών στο VTA προκαλεί μορφολογικές μεταβολές των ντοπαμινικών κυττάρων VTA σε αρσενικούς αρουραίους, οι οποίοι με τη σειρά τους ρυθμίζουν τη μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την εμπειρία ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς.
Καταρχάς, η σεξουαλική εμπειρία μείωσε το μέγεθος του ντοπαμινοσώματος VTA 1 και 7 ημέρες, αλλά όχι 30 ημέρες μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος . Αυτό το φαινόμενο μπλοκαρίστηκε με ναλοξόνη πριν από κάθε συνεδρία ζευγαρώματος. Έτσι, η πλαστικότητα των ντοπαμινοκυττάρων VTA εξαρτιόταν από τη δράση των ενδογενών οπιοειδών.
Με τη σειρά του, η πλαστικότητα του VTA συσχετίστηκε με μεταβαλλόμενη ανταμοιβή οπιούχων, καθώς τα σεξουαλικά έμπειρα αρσενικά δεν σχημάτισαν την προτιμώμενη θέση για το 0.5 mg / kg μορφίνης.
Στη συνέχεια, προσδιορίστηκε εάν η ενδογενής δράση των οπιοειδών προκαλεί τη σεξουαλική ανταμοιβή και τη μνήμη σε αρσενικούς αρουραίους που έλαβαν ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της εμπειρίας ζευγαρώματος, είτε συστηματικά είτε ενδο-VTA. Η ναλοξόνη δεν εμπόδισε την αρχική διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία σε επαναλαμβανόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος ή την εξαρτημένη προτίμηση θέσης για ζευγάρωμα. Ωστόσο, η θεραπεία με ναλοξόνη εξασθένησε τη μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία και της νευρωνικής ενεργοποίησης σε μεσολομυϊκές περιοχές που προκαλούνται από εξαρτημένα ερεθίσματα που σχετίζονται με το ζευγάρωμα.
Μαζί, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι τα ενδογενή οπιοειδή κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος προκαλούν νευρική πλαστικότητα στους ΝΤΑ ντοπαμινικούς νευρώνες που φαίνονται κρίσιμοι για την ανταμοιβή της μορφίνης και τη μακροπρόθεσμη μνήμη για τη φυσική ανταμοιβή.
Εισαγωγή
Οι φυσικές συμπεριφορές ανταμοιβής μεσολαβούν από το μεσοκορτικολυμβικό σύστημα (Meisel και Mullins, 2006; Hoebel et αϊ., 2009; Frohmader et αϊ., 2010a; Pitchers et αϊ., 2010a; Young et αϊ., 2011; Blum et αϊ., 2012). Τα ναρκωτικά της κατάχρησης προκαλούν νευρικές αλλοιώσεις στο σύστημα αυτό, οι οποίες με τη σειρά τους συμβάλλουν στην ανάπτυξη και στην έκφραση της κατάχρησης ουσιών (Hyman et αϊ., 2006; Nestler, 2012). Προηγουμένως διαπιστώσαμε ότι η εμπειρία με τη φυσική ανταμοιβή συμπεριφορά, δηλαδή η σεξουαλική εμπειρία σε αρσενικούς αρουραίους, προκαλεί επίσης νευρική πλαστικότητα στον πυρήνα accumbens (NAc), συμπεριλαμβανομένης της αύξησης των δενδριτικών αγκώνων (Pitchers et αϊ., 2010a) και deltaFosB (Pitchers et αϊ., 2013). Εν τω μεταξύ, αυτή η πλαστικότητα που προκαλείται από το φύλο είναι κρίσιμη για τις συνέπειες της σεξουαλικής εμπειρίας στο επακόλουθο ζευγάρωμα, που εκδηλώνεται ως διευκόλυνση της έναρξης και της εκτέλεσης της σεξουαλικής συμπεριφοράςPitchers et αϊ., 2010b, 2012, 2013). Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία μεταβάλλει την ανταπόκριση στα ψυχοδιεγερτικά, συμπεριλαμβανομένης της ευαισθητοποίησης της κινητικής δραστηριότητας και της ενισχυμένης ανταμοιβής (Frohmader et αϊ., 2010a; Pitchers et αϊ., 2010a, 2013).
Το NAc είναι ένας κατάντη στόχος των ντοπαμινεργικών νευρώνων στην κοιλιακή καλυπτρική περιοχή (VTA). Οι νευρώνες ντοπαμίνης VTA ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος και μετά από έκθεση σε εξαρτημένα ερεθίσματα που προβλέπουν τη σεξουαλική ανταμοιβή ( Balfour et al., 2004 ; Frohmader et al., 2010a ), μέσω ενδογενούς σύνδεσης οπιοειδών πεπτιδίων (EOP) σε μ-οπιοειδείς υποδοχείς (MORs; Matthews and German, 1984 ; Johnson and North, 1992 ; Klitenick et al., 1992 ; Ikemoto et al., 1997 ; Balfour et al., 2004 ). Ως εκ τούτου, η έκθεση σε εξαρτημένα ερεθίσματα που προβλέπουν τη σεξουαλική συμπεριφορά προκαλεί απελευθέρωση ενεργοποίησης ντοπαμίνης-κυττάρων EOP και VTA, η οποία διευκολύνει το σεξουαλικό κίνητρο ( Mitchell and Stewart, 1990 ; van Furth et al., 1995 ; van Furth and van Ree, 1996 ) και την απελευθέρωση ντοπαμίνης στο NAc ( Fiorino et al., 1997 ).
Η επαναλαμβανόμενη έκθεση σε εξωγενή οπιοειδή προκαλεί μορφολογικές αλλαγές στο VTA ( Mazei-Robison et al., 2011 ; Mazei-Robison and Nestler, 2012 ), μειωμένο μέγεθος σώματος των νευρώνων ντοπαμίνης VTA ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Spiga et al., 2003 ; Chu et al., 2007 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ), μειωμένα επίπεδα πρωτεϊνών νευρονημάτων ( Beitner-Johnson et al., 1992 ), αυξημένη διεγερσιμότητα των κυττάρων ντοπαμίνης και μειωμένη αξονοπλασματική μεταφορά και παραγωγή ντοπαμίνης προς το NAc ( Beitner-Johnson et al., 1992 ; Mazei-Robison et al., 2011 ). Αυτές οι αλλαγές στους νευρώνες ντοπαμίνης VTA προκαλούν ανοχή στην ανταμοιβή της μορφίνης και είναι παροδικές καθώς εξαφανίζονται εντός ενός μήνα αποχής από τα ναρκωτικά ( Russo et al., 2007 ). Προς το παρόν δεν είναι σαφές εάν η πλαστικότητα στους νευρώνες ντοπαμίνης VTA είναι μοναδική στις δράσεις των οπιοειδών ή εάν παράγονται επίσης από την απελευθέρωση της EOP κατά τη διάρκεια φυσικών ανταποδοτικών συμπεριφορών.
Εδώ δοκιμάζουμε την υπόθεση ότι η φυσική εμπειρία ανταμοιβής προκαλεί νευροπλαστικότητα παρόμοια με εκείνη που προκαλείται από τα οπιούχα και έτσι τα οπιούχα συγκλίνουν σε έναν μηχανισμό πλαστικότητας ο οποίος είναι κρίσιμος για τη φυσική ανταμοιβή και την ανταμοιβή της μνήμης. Ελέγχουμε αν η σεξουαλική εμπειρία σε αρσενικούς αρουραίους μειώνει το μέγεθος soma των ντοπαμινικών νευρώνων VTA μέσω μιας διαδικασίας που εξαρτάται από τη δράση EOP στο VTA. Επιπλέον, διερευνάμε αν οι επαγόμενες από την ΕΟΡ αλλοίωση των ντοπαμινικών νευρώνων VTA συνδέονται με την ενίσχυση της φυσικής ανταμείβουσας συμπεριφοράς και την απόδοση της κληρονομιάς κινήτρου σε συναισθήματα που σχετίζονται με τη φυσική ανταμοιβή, ενώ προκαλούν διασταυρούμενη ανοχή στην ανταμοιβή μορφίνης.
Υλικά και Μέθοδοι
Animal
Ενήλικοι αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (200-225 g) ελήφθησαν από το Charles River και στεγάστηκαν ανά ζεύγη σε τεχνητά φωτισμένα δωμάτια με κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών σε όλα τα πειράματα (φώτα σβησμένα στις 10:00 π.μ. εκτός από το πείραμα ανοχής στη μορφίνη, φώτα σβησμένα στις 5:00 μ.μ.). Τροφή και νερό ήταν διαθέσιμα ad libitum εκτός από τις δοκιμές συμπεριφοράς. Τα θηλυκά ερεθίσματα υποβλήθηκαν σε ωοθηκεκτομή και εμφυτεύτηκαν υποδόρια κάψουλες SILASTIC 5% βενζοϊκής 17-β-οιστραδιόλης (εσωτερική διάμετρος 1.98 mm, μήκος 0.5 cm, Dow-Corning). Χορηγήθηκαν ενέσεις προγεστερόνης (υποδόρια, 500 μg σε 0.1 ml σησαμέλαιου) 3-6 ώρες πριν από τη δοκιμή για την πρόκληση σεξουαλικής δεκτικότητας. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από τις Επιτροπές Φροντίδας Ζώων του Πανεπιστημίου του Δυτικού Οντάριο και του Πανεπιστημίου του Μίσιγκαν και συμμορφώθηκαν με τις κατευθυντήριες γραμμές του Καναδικού Συμβουλίου Φροντίδας Ζώων και των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας που αφορούν σπονδυλωτά ζώα στην έρευνα.
Η χρονική πορεία των μεταβολών του μεγέθους της ντοπαμίνης Soma μεγέθους
Καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος.
Για να μελετηθεί η χρονική πορεία των αλλαγών στο μέγεθος του σωματικού νευρώνα ντοπαμίνης στο VTA, ζώα με και χωρίς σεξουαλική εμπειρία θανατώθηκαν 1, 7 ή 31 ημέρες ( n = 5-8 ανά ομάδα) μετά την τελευταία ημέρα ζευγαρώματος (έμπειρα) ή χειρισμού (άμεση). Οι ομάδες με σεξουαλική εμπειρία αντιστοιχίστηκαν ως προς τη σεξουαλική συμπεριφορά κατά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος, καθώς και ως προς τον συνολικό αριθμό εκσπερματώσεων στις πέντε συνεδρίες (μέσος όρος 5 για κάθε ομάδα) και δεν διέφεραν σε καμία παράμετρο της σεξουαλικής συμπεριφοράς.
Συνεδρίες ζευγαρώματος.
Τα σεξουαλικά αφελή αρσενικά ταξινομήθηκαν σε μία από τις δύο πειραματικές συνθήκες: σεξουαλικά αφελή ή σεξουαλικά έμπειρα. Τα σεξουαλικά έμπειρα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν πέντε φορές σε συνεχόμενες ημέρες με δεκτικά θηλυκά σε ορθογώνια δοκιμαστικά κλουβιά (60 × 45 × 50 cm) μέχρι την εμφάνιση εκσπερμάτισης ή έως 1 ώρα (όποιο από τα δύο συμβεί πρώτο). Τα κλουβιά καθαρίστηκαν σχολαστικά με διάλυμα αιθανόλης 70% και προστέθηκε φρέσκια στρωμνή μεταξύ των συνεδριών ζευγαρώματος. Η σεξουαλική συμπεριφορά πραγματοποιήθηκε κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης (2-6 ώρες μετά την έναρξη του σκότους). Μόνο τα ζώα που εκσπερμάτισαν κατά τη διάρκεια τουλάχιστον τεσσάρων από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος θεωρήθηκαν σεξουαλικά έμπειρα και συμπεριλήφθηκαν στα πειράματα. Όλες οι συνεδρίες ζευγαρώματος παρατηρήθηκαν και καταγράφηκε η σεξουαλική συμπεριφορά. Καταγράφηκαν ο αριθμός των ενωμοτήσεων (M), οι εισαγωγές (IMs), η καθυστέρηση ενωμοτίας (ML, χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού στην πρώτη ενωμοτία), η καθυστέρηση ενωμοτίας (IL, χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού στην πρώτη ενωμοτία) και η καθυστέρηση εκσπερμάτισης (EL, χρόνος από την πρώτη ενωμοτία έως την εκσπερμάτιση) ( Agmo, 1997 ). Τα αφελή ζώα τοποθετήθηκαν σε ένα καθαρό κλουβί δοκιμής για 1 ώρα ταυτόχρονα με αρσενικά με σεξουαλική εμπειρία που ζευγαρώναν στο ίδιο δωμάτιο, έτσι ώστε να εκτίθενται σε μακρινές οσμές θηλυκών και σε παρόμοια επίπεδα διαταραχής και περιβαλλοντικής καινοτομίας με τα έμπειρα αρσενικά.
Απεικόνιση ανοσοφθορισμού.
Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν βαθιά χρησιμοποιώντας πεντοβαρβιτάλη νατρίου (270 mg/kg, ip) και εγχύθηκαν ενδοκαρδιακά με 50 ml φυσιολογικού ορού 0.9%, ακολουθούμενα από 500 ml παραφορμαλδεΰδης 4% σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου (PB) 0.1 m. Οι εγκέφαλοι αφαιρέθηκαν και στερεώθηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου (RT) στο ίδιο στερεωτικό και στη συνέχεια εμβαπτίστηκαν σε 20% σακχαρόζη και 0.01% αζίδιο του νατρίου σε 0.1 m PB για αποθήκευση στους 4°C. Οι στεφανιαίες τομές κόπηκαν στα 35 μm σε μικροτόμο κατάψυξης (H400R, Microm) και συλλέχθηκαν σε τέσσερις παράλληλες σειρές σε κρυοπροστατευτικό διάλυμα (30% σακχαρόζη, 30% αιθυλενογλυκόλη σε 0.1 m PB) και στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν στους 20°C. Όλες οι επωάσεις πραγματοποιήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου με ήπια ανάδευση και άφθονες εκπλύσεις με 0.1 m PBS, pH 7.35, μεταξύ των επωάσεων. Οι τομές εκτέθηκαν σε 1% H2O2 για 10 λεπτά για την καταστροφή των ενδογενών υπεροξειδασών και στη συνέχεια μπλοκαρίστηκαν για 1 ώρα σε διάλυμα επώασης (PBS+: PBS που περιέχει 0.4% Triton X-100· Sigma-Aldrich) και 0.1% λευκωματίνη ορού βοοειδών (Jackson Immuno Research Laboratories). Στη συνέχεια, οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου σε αντίσωμα ποντικού τυροσινικής υδροξυλάσης (TH) (1:20 000· Millipore ) . Μετά την επώαση του πρωτογενούς αντισώματος, οι τομές επωάστηκαν σε αντίσωμα κατσίκας κατά ποντικού συζευγμένο με AlexaFluor 555 (1:100· Invitrogen, Eugene, OR) για 30 λεπτά. Τέλος, οι τομές πλύθηκαν με 0.1 m PB, τοποθετήθηκαν σε γυάλινες αντικειμενοφόρες πλάκες Superfrost Plus, ξηράνθηκαν και καλύφθηκαν με ζελατόλη που περιείχε τον αντι-ξεθωριαστικό παράγοντα 1,4-διαζαδικυκλο(2,2)οκτάνιο (DABCO· 50 mg/ml, Sigma-Aldrich· Lennette, 1978 ).
Ανάλυση δεδομένων: μέγεθος νευρώνων soma.
Εικόνες των TH-ανοσοαντιδραστικών (IR) νευρώνων στο VTA ελήφθησαν σε μεγέθυνση 40× σε τρία επίπεδα από το πρόσθιο έως το ουραίο ( Balfour et al., 2004 ). Δεν ανιχνεύθηκαν διαφορές μεταξύ των κυττάρων στα διαφορετικά επίπεδα. Το μέγεθος του σώματος των TH-IR νευρώνων αναλύθηκε χρησιμοποιώντας το ImageJ (Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας). Η μέση επιφάνεια, η περίμετρος και η κυκλικότητα μετρήθηκαν όπως περιγράφεται από τους Sklair-Tavron et al. (1996) . Αναλύθηκε κατά μέσο όρο 25 κύτταρα ανά ζώο (συνδυασμός και των 3 επιπέδων VTA) και συμπεριλήφθηκαν μόνο κύτταρα με σαφώς ορατό πυρήνα. Για κάθε ζώο, υπολογίστηκε η μέση επιφάνεια, η περίμετρος και η κυκλικότητα. Για τη στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε αμφίδρομη ANOVA [παράγοντες: σεξουαλική εμπειρία (σεξουαλική εμπειρία ή σεξουαλική αφέλεια) και χρόνος (1, 7 ή 31 ημέρες)] ακολουθούμενη από συγκρίσεις post hoc χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Holm-Sidak με επίπεδο σημαντικότητας 0.05.
Οι αλλαγές στη ντοπαμίνη του VTA
Διαδοχικές συνεδρίες ζευγαρώματος.
Για να εξεταστεί εάν απαιτείται σεξουαλική εμπειρία κατά τη διάρκεια ημερήσιων συνεδριών ζευγαρώματος για μειώσεις του μεγέθους του νευρώνα του TH-IR, αναλύθηκαν νευρώνες νταπαμίνης VTA ζώων που είχαν ζευγαρώσει κατά τη διάρκεια πέντε συνόδων ζευγαρώματος διάρκειας δύο εβδομάδων. Οι συνεδρίες ζευγαρώματος ήταν όπως περιγράφηκαν παραπάνω, αλλά σε μια περίοδο 2.5 εβδομάδων. Οι εγκέφαλοι συλλέχθηκαν το 7 d μετά από τελευταίο ζευγάρωμα ή χειρισμό.
Ετικέτα ανοσοϋπεροξειδάσης.
Επιπλέον, εξετάστηκε εάν η χρήση ευαίσθητων τεχνικών χρώσης με ανοσοϋπεροξειδάση και ανίχνευση χρωμογόνου θα επέτρεπε επίσης την απεικόνιση των αλλαγών στο μέγεθος του σώματος TH-IR. Η έγχυση και η επεξεργασία των ιστών πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Μετά από επεξεργασία με 1% H2O2 και PBS + , οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου σε ένα πολυκλωνικό αντίσωμα ποντικού έναντι της τυροσινικής υδροξυλάσης (TH) (1:20 000, Millipore ). Μετά την επώαση του πρωτογενούς αντισώματος, οι τομές επωάστηκαν με IgG κατσίκας κατά του κουνελιού συζευγμένη με βιοτίνη (1 ώρα, 1:500 σε PBS+· Vector Laboratories), υπεροξειδάση αβιδίνης-βιοτίνης-χρένου (1 ώρα, ABC elite· 1:1 000 σε PBS· Vector Laboratories) και τετραϋδροχλωρική 3,3'-διαμινοβενζιδίνη (10 λεπτά, 0.02%, DAB· Sigma-Aldrich) ενισχυμένη με θειικό νικέλιο σε (0.02% σε 0.1 m PB) με υπεροξείδιο του υδρογόνου (0.015%). Οι τομές πλύθηκαν καλά σε 0.1 m PB για να τερματιστεί η αντίδραση και τοποθετήθηκαν σε κωδικοποιημένες γυάλινες αντικειμενοφόρες πλάκες Superfrost plus (Fisher) με 0.3% ζελατίνη σε ddH2O . Μετά την αφυδάτωση, όλες οι αντικειμενοφόρες πλάκες καλύφθηκαν με υλικό DPX (φθαλικό διβουτύλιο ξυλόλιο· Sigma-Aldrich).
Ανάλυση δεδομένων: μέγεθος νευρώνων soma.
Τα κύτταρα TH-IR αναλύθηκαν ως προς την περιοχή, την περίμετρο και την κυκλικότητα όπως περιγράφεται παραπάνω. Επιπλέον, αναλύθηκαν τα κύτταρα TH-IR στη μέλαινα ουσία (SN), στις ίδιες τομές που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των κυττάρων TH-IR VTA. Τέλος, μετά την ανάλυση των κυττάρων TH-IR VTA και SN, οι τομές αντιχρωματίστηκαν χρησιμοποιώντας ιώδες κρεσυλίου και τα κύτταρα που δεν ήταν TH-IR αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τις ίδιες μεθόδους όπως περιγράφηκαν παραπάνω. Οι διαφορές μεταξύ των ομάδων χωρίς προηγούμενη και των έμπειρων ασθενών συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίπλευρες δοκιμές t του Student με επίπεδο σημαντικότητας 0.05.
Επιδράσεις της ναλοξόνης στη μείωση της έκτασης της ντοπαμίνης που προκαλείται από την εμπειρία
Για να προσδιοριστεί εάν οι MORs έπαιξαν ρόλο στις αλλαγές που προκαλούνται από τη σεξουαλική εμπειρία στο μέγεθος του σώματος νευρώνα ντοπαμίνης, οι MOR μπλοκαρίστηκαν κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Τα μισά από τα ζώα απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία, ενώ τα άλλα μισά χειρίστηκαν αλλά παρέμειναν σεξουαλικά αφελή. Ζώα με σεξουαλική εμπειρία αφέθηκαν να ζευγαρώσουν για 5 συνεχόμενες ημέρες. Εντός των ομάδων με και χωρίς σεξουαλική εμπειρία, τα ζώα έλαβαν θεραπεία με τον μη επιλεκτικό ανταγωνιστή MOR ναλοξόνη (10 mg/kg, sc· Sigma-Aldrich, διαλυμένο σε 0.9% φυσιολογικό ορό) ή φυσιολογικό ορό 30 λεπτά πριν από την εισαγωγή του θηλυκού (με και χωρίς σεξουαλική εμπειρία) ή πριν από τον χειρισμό (με και χωρίς σεξουαλική εμπειρία). Δημιουργήθηκαν έτσι τέσσερις πειραματικές ομάδες: σεξουαλικά αφελής φυσιολογικός ορός (Naive Sal), σεξουαλικά αφελής ναλοξόνη (Naive NLX), σεξουαλικά αφελής φυσιολογικός ορός (Exp Sal) και σεξουαλικά αφελής ναλοξόνη (Exp NLX· n = 5–8 ανά ομάδα). Η θεραπεία με ναλοξόνη δεν είχε στατιστικά σημαντικές επιδράσεις σε καμία παράμετρο της σεξουαλικής συμπεριφοράς, σε καμία από τις 5 ημέρες, και οι ομάδες που έλαβαν ναλοξόνη και φυσιολογικό ορό ήταν πανομοιότυπες στη σεξουαλική εμπειρία. Όλα τα ζώα θανατώθηκαν μέσω ενδοκαρδιακής έγχυσης 7 ημέρες μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος. Η τομή, η ανοσοϊστοχημεία και η ανάλυση δεδομένων (αμφίδρομη ANOVA· παράγοντες: σεξουαλική εμπειρία και φαρμακευτική αγωγή) για το μέγεθος του ντοπαμινοσώματος πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω.
Προσαρμοσμένη θέση προτιμήσεων με μορφίνη
Πειραματικό σχέδιο.
Προηγουμένως, οι Russo et al. (2007) έδειξαν ότι η χρόνια μορφίνη προκαλεί ανοχή στην ανταμοιβή με μορφίνη. Δεδομένου ότι η σεξουαλική εμπειρία και η χρόνια μορφίνη προκαλούν παρόμοιες μειώσεις στο μέγεθος του σώματος των νευρώνων ντοπαμίνης στο VTA, η λειτουργική σημασία των μορφολογικών αλλαγών που προκαλούνται από το φύλο εξετάστηκε για την ανταμοιβή με μορφίνη. Ζώα με σεξουαλική εμπειρία και ζώα που δεν είχαν λάβει ποτέ θεραπεία χωρίστηκαν σε έξι διαφορετικές πειραματικές ομάδες ( n = 9-13 ανά ομάδα) με βάση τη σεξουαλική συμπεριφορά (σεξουαλικά αφελή ή σεξουαλικά έμπειρα) και τη δόση μορφίνης (0.5, 5.0 ή 10.0 mg/kg, ip) και εξετάστηκαν για την προκαλούμενη από μορφίνη εξαρτημένη προτίμηση θέσης (CPP).
Μορφίνη-CPP.
Η προετοιμασία πραγματοποιήθηκε 1 ημέρα μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος και οι ομάδες αντιστοιχίστηκαν ως προς τη σεξουαλική τους απόδοση κατά τη διάρκεια της τελευταίας συνεδρίας ζευγαρώματος. Το χρησιμοποιούμενο παράδειγμα CPP αποτελούνταν από μια προκαταρκτική δοκιμή, ημέρες προετοιμασίας και μετα-δοκιμασία, και η συσκευή βασίστηκε στους Tenk et al. (2009) . Εν συντομία, η συσκευή CPP (MED Associates) αποτελούνταν από τρεις ξεχωριστούς θαλάμους. Μεταξύ κάθε συνεδρίας, η συσκευή καθαριζόταν σχολαστικά με διάλυμα αιθανόλης 70% για την ελαχιστοποίηση των επίμονων οσφρητικών ενδείξεων. Για τον προσδιορισμό των ατομικών προτιμήσεων, διεξήχθη μια προκαταρκτική δοκιμή κατά την οποία τα ζώα είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε ολόκληρη τη συσκευή για 15 λεπτά. Ως ομάδα, τα ζώα δεν έδειξαν σημαντική προτίμηση για έναν συγκεκριμένο θάλαμο, αλλά κάθε μεμονωμένο ζώο είχε μια μικρή αρχική προτίμηση. Οι αρουραίοι που έδειξαν σημαντική προτίμηση για έναν από τους θαλάμους (διαφορά >200 s μεταξύ του χρόνου που αφιερώθηκε σε κάθε έναν από τους θαλάμους· <5% των ζώων) κατά τη διάρκεια της προκαταρκτικής δοκιμής αποκλείστηκαν από τη μελέτη. Κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας, το φάρμακο συζευγνύθηκε είτε με τον αρχικά προτιμώμενο είτε με τον μη προτιμώμενο θάλαμο χρησιμοποιώντας ένα αμερόληπτο παράδειγμα ( Tzschentke, 2007 ) και τα ζώα περιορίστηκαν στους θαλάμους για 30 λεπτά. Στα ζώα εγχύθηκε φυσιολογικός ορός (ενδοφλέβια) το πρωί (9:00 π.μ. έως 12:00 μ.μ.) και περιορίστηκαν στον θάλαμο με φυσιολογικό ορό (μάρτυρας). Το απόγευμα (1:00–4:00 μ.μ.), στα ζώα εγχύθηκε μορφίνη (ενδοφλέβια, 0.5 mg/kg, 5.0 mg/kg ή 10.0 mg/kg· θειική μορφίνη διαλυμένη σε 0.9% φυσιολογικό ορό, Johnson Matthey) και περιορίστηκαν στον θάλαμο με μορφίνη. Τα ζώα υποβλήθηκαν σε δύο ημέρες προετοιμασίας. Την επόμενη ημέρα (3 ημέρες μετά την τελευταία ημέρα ζευγαρώματος) διεξήχθη μια μετα-δοκιμασία, διαδικαστικά πανομοιότυπη με την προ-δοκιμασία. Για στατιστική ανάλυση, ο χρόνος που αφιερώθηκε στον θάλαμο με τη μορφίνη κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμασίας συγκρίθηκε με τον χρόνο που αφιερώθηκε στον θάλαμο με φυσιολογικό ορό κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμασίας για αρσενικά που δεν είχαν σεξουαλική επαφή ή είχαν εμπειρία σε κάθε δόση χρησιμοποιώντας μια δοκιμασία t- ζευγών . Το p < 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό. Πρόσθετες ομάδες ελέγχου ζώων που δεν είχαν σεξουαλική επαφή και είχαν εμπειρία έλαβαν φυσιολογικό ορό τόσο σε ζευγαρωμένους όσο και σε μη ζευγαρωμένους θαλάμους για να χρησιμεύσουν ως αρνητικοί μάρτυρες. Δεν ανιχνεύθηκαν διαφορές στον χρόνο που αφιερώθηκε μεταξύ των θαλάμων για καμία από τις δύο ομάδες.
Επιδράσεις της συστηματικής ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς
Πειραματικό σχέδιο.
Η σεξουαλική εμπειρία έχει ως αποτέλεσμα τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που διατηρείται για τουλάχιστον 1 μήνα ( Pitchers et al., 2012 ). Για να αναλυθεί η επίδραση του αποκλεισμού της MOR στη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία, τα ζώα με σεξουαλική εμπειρία έλαβαν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό πριν από τις πέντε διαδοχικές συνεδρίες ζευγαρώματος ( n = 12 η καθεμία) όπως περιγράφεται παραπάνω. Μία εβδομάδα μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος, διεξήχθη μια τελική δοκιμή ζευγαρώματος κατά την οποία όλα τα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν μέχρι μία εκσπερμάτιση ή έως και 1 ώρα. Δεν χορηγήθηκε θεραπεία με ναλοξόνη ή φυσιολογικό ορό πριν από το ζευγάρωμα την τελική ημέρα της δοκιμής. Οι παράμετροι ζευγαρώματος συγκρίθηκαν για να προσδιοριστεί εάν η ναλοξόνη επηρέασε είτε τη διευκόλυνση του ζευγαρώματος που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία (ημέρα 1 έναντι ημέρας 5) είτε τη διατήρηση αυτής της διευκόλυνσης (ημέρα 5 έναντι δοκιμής) χρησιμοποιώντας μια αμφίδρομη ANOVA [παράγοντες: θεραπεία (φυσιολογικός ορός έναντι ναλοξόνης) και ημέρα (ημέρα 1, ημέρα 5 ή δοκιμή)] και τη μέθοδο Holm-Sidak για συγκρίσεις post hoc . Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, το p < 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.
Πρόσθετα πειράματα ελέγχου
Συστηματική ναλοξόνη την ημέρα της δοκιμής.
Για να δείξουμε ότι η αλλοιωμένη σεξουαλική συμπεριφορά την ημέρα του τελικού τεστ ζευγαρώματος δεν οφειλόταν στην απουσία ναλοξόνης, χορηγήσαμε είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό την ημέρα του τελικού τεστ ζευγαρώματος σε ζώα που έλαβαν ζευγάρωμα με ναλοξόνη ενώ απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία. Συγκεκριμένα, όλα τα ζώα έλαβαν ένεση ναλοξόνης (10 mg/kg, sc) 30 λεπτά πριν από το ζευγάρωμα έως μία εκσπερμάτιση για 5 συνεχόμενες ημέρες. Την ημέρα του τεστ 7 ημέρες αργότερα, περίπου τα μισά ζώα έλαβαν ένεση ναλοξόνης (10 mg/kg, n = 7) ή φυσιολογικό ορό ( n = 6) 30 λεπτά πριν από την εισαγωγή ενός δεκτικού θηλυκού. Η σεξουαλική συμπεριφορά παρατηρήθηκε και καταγράφηκε. Οι παράμετροι του ζευγαρώματος συγκρίθηκαν για να προσδιοριστεί εάν η ναλοξόνη επηρέασε είτε τη διευκόλυνση του ζευγαρώματος που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία (ημέρα 1 έναντι ημέρας 5) είτε τη διατήρηση αυτής της διευκόλυνσης (ημέρα 5 έναντι δοκιμής) χρησιμοποιώντας μια αμφίδρομη ANOVA [παράγοντες: θεραπεία (φυσιολογικός ορός έναντι ναλοξόνης) και ημέρα (ημέρα 1, ημέρα 5 ή δοκιμή)] και τη μέθοδο Holm-Sidak για συγκρίσεις post hoc . Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, το p < 5% θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.
Επιδράσεις της ναλοξόνης στη βραχυπρόθεσμη έκφραση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς.
Οι επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη (10 mg/kg, sc) κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος ελέγχθηκαν στην επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά κατά τη διάρκεια μιας τελευταίας ημέρας δοκιμής ζευγαρώματος, η οποία διεξήχθη μόνο 1 ημέρα μετά το τελευταίο ζευγάρωμα (φυσιολογικός ορός, n = 5· ναλοξόνη, n = 4).
Συστηματική προεπεξεργασία ναλοξόνης.
Για να προσδιοριστεί εάν η επαναλαμβανόμενη θεραπεία μόνο με ναλοξόνη προκαλεί βλάβη στη σεξουαλική συμπεριφορά 7 ημέρες μετά την τελευταία θεραπεία, ζώα που δεν είχαν λάβει σεξουαλικά καμία ένεση έλαβαν πέντε ημερήσιες ενέσεις ναλοξόνης (10 mg/kg, υποδορίως) ή φυσιολογικού ορού σε συνεχόμενες ημέρες πριν από μια δοκιμασία ζευγαρώματος 7 ημέρες μετά την τελική ένεση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού. Σε αυτήν την τελευταία ημέρα της δοκιμής, τα ζώα δεν έλαβαν καμία ένεση. Η σεξουαλική συμπεριφορά παρατηρήθηκε και καταγράφηκε όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι παράμετροι ζευγαρώματος συγκρίθηκαν μεταξύ των ομάδων χρησιμοποιώντας μη ζευγαρωμένες δοκιμές t . Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, το p < 5% θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.
Συστηματική επιβράβευση ναλοξόνης και φύλου.
Μία πιθανότητα για εξασθενητικές επιδράσεις της ναλοξόνης στην εμφάνιση της διατήρησης της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς είναι ότι η ναλοξόνη εμποδίζει τις επιβλαβείς επιδράσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να ελεγχθεί αυτή η πιθανότητα, το παράδειγμα CPP πραγματοποιήθηκε για σεξουαλική συμπεριφορά αμέσως μετά την ένεση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού σε άντρες χωρίς προηγούμενη σεξουαλική εμπειρία. Η διαδικασία CPP ήταν παρόμοια με αυτήν που περιγράφηκε παραπάνω για τη μορφίνη-CPP, συμπεριλαμβανομένων των προκαταρκτικών δοκιμών, των ημερών προετοιμασίας και μετά τη δοκιμή.
Η σεξουαλική συμπεριφορά συνδυάστηκε με τον αρχικά μη προτιμώμενο θάλαμο. Με αντισταθμιστικό τρόπο, κάθε ζώο έλαβε μια ένεση ναλοξόνης ( n = 12) ή φυσιολογικού ορού ( n = 11) 30 λεπτά πριν αποκτήσει πρόσβαση σε ένα δεκτικό θηλυκό. Η μέση διάρκεια της συνεδρίας ζευγαρώματος ήταν ~13 λεπτά. Ένα λεπτό μετά την εκσπερμάτιση, το ζώο τοποθετήθηκε στον ζευγαρωμένο θάλαμο για 30 λεπτά. Την άλλη ημέρα προετοιμασίας, τα ζώα έλαβαν μια ένεση είτε ναλοξόνης είτε φυσιολογικού ορού (όποιο έλαβαν πριν από το ζευγάρωμα) και τοποθετήθηκαν στον μη ζευγαρωμένο θάλαμο για 30 λεπτά. Στη συνέχεια, διεξήχθη μια μετα-δοκιμασία, πανομοιότυπη με την προ-δοκιμασία. Για να προσδιοριστεί η προτίμηση του θαλάμου, συγκρίθηκε ο χρόνος που αφιερώθηκε στον ζευγαρωμένο θάλαμο κατά τη διάρκεια της προ-δοκιμασίας και της μετα-δοκιμασίας. Για στατιστική ανάλυση, χρησιμοποιήθηκαν ζευγαρωμένες δοκιμασίες t για τη σύγκριση των βαθμολογιών προτίμησης και διαφοράς, και ο χρόνος στον ζευγαρωμένο θάλαμο κατά τη διάρκεια της προ-δοκιμασίας και της μετα-δοκιμασίας για να προσδιοριστεί εάν σχηματίστηκε σημαντικό CPP για σεξουαλική συμπεριφορά. Το p < 0.05 θεωρήθηκε σημαντικό.
Επιδράσεις της ενδο-VTA ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς
Πειραματικό σχέδιο.
Για να προσδιοριστεί εάν η δράση της EOP ειδικά στο VTA ήταν υπεύθυνη για τις επιπτώσεις των αλλαγών που προκαλούνται από τη σεξουαλική εμπειρία στη σεξουαλική συμπεριφορά, τα ζώα υποβλήθηκαν σε τοπική έγχυση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού στο VTA πριν από πέντε ημερήσιες συνεδρίες ζευγαρώματος. Το συμπεριφορικό παράδειγμα ήταν παρόμοιο με το πείραμα συστηματικής ναλοξόνης. Ζώα με σεξουαλική εμπειρία αφέθηκαν να ζευγαρώσουν για 5 συνεχόμενες ημέρες μέχρι μία εκσπερμάτιση ή έως και 1 ώρα. Δεκαπέντε λεπτά πριν από την εισαγωγή του δεκτικού θηλυκού, οι αρσενικοί αρουραίοι έλαβαν αμφοτερόπλευρες εγχύσεις είτε ναλοξόνης (10 μg/μl ανά ημισφαίριο· όγκος 0.5 μl· διαλυμένο σε 0.9% φυσιολογικό ορό) είτε φυσιολογικού ορού (0.5 μl ανά ημισφαίριο). Χορηγήθηκαν αμφοτερόπλευρες μικροεγχύσεις με ρυθμό ροής 0.5 μl/min σε διάστημα 1 λεπτού, ακολουθούμενο από ένα επιπλέον λεπτό με την κάνουλα ένεσης στη θέση της για διάχυση. Η κάνουλα ένεσης στη συνέχεια αντικαταστάθηκε με την εικονική κάνουλα και το καπάκι σκόνης. Μία εβδομάδα μετά την τελευταία ημέρα ζευγαρώματος (ημέρα δοκιμής), όλα τα ζώα ζευγάρωσαν για άλλη μια φορά μέχρι εκσπερμάτισης χωρίς έγχυση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού. Το Σχήμα 3 Α περιγράφει τον πειραματικό σχεδιασμό. Η ανάλυση δεδομένων πραγματοποιήθηκε όπως περιγράφεται στο πείραμα συστηματικής ναλοξόνης.
Θεραπεία σωληναρίου.
Οι αρσενικοί αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (0.1 ml/kg) κεταμίνης (0.87 mg/ml) και ξυλαζίνης (0.13 mg/ml) και τοποθετήθηκαν σε στερεοταξική συσκευή (Kopf Instruments). Αμφοτερόπλευροι οδηγοί καθετήρες 21 gauge (Plastics One) κατέβηκαν μέσω μικρών οπών στο κρανίο στον εγκέφαλο προς την κοιλιακή χώρα (VTA) στα -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML από το βρέγμα και -7.8 mm DV από την κορυφή του κρανίου σύμφωνα με τους Paxinos και Watson (2013) . Οι καθετήρες ασφαλίστηκαν με οδοντικό ακρυλικό που προσκολλήθηκε σε τρεις βίδες που τοποθετήθηκαν στο κρανίο. Στα ζώα δόθηκε μια περίοδος ανάρρωσης 2 εβδομάδων και χειρίζονταν καθημερινά για να εξοικειωθούν με τον χειρισμό και τις διαδικασίες ένεσης που χρησιμοποιούνται κατά τη διάρκεια των δοκιμασιών συμπεριφοράς.
Επαλήθευση τοποθέτησης κασέτας.
Η τοποθέτηση των κανούλων εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ανοσοχρώση TH για να επιβεβαιωθεί ότι η VTA είχε στοχευθεί με ακρίβεια. Μόνο ζώα με σωστές τοποθετήσεις συμπεριλήφθηκαν στις αναλύσεις (τελικά μεγέθη ομάδων: n = 8 με εμπειρία σε φυσιολογικό ορό · n = 6 με εμπειρία σε ναλοξόνη). Τρία επιπλέον ζώα που έλαβαν ενδο-VTA ενέσεις ναλοξόνης εκτός της VTA ομαδοποιήθηκαν σε μια ομάδα «χαμένων» ενέσεων. Η ομάδα που χάθηκε αναλύθηκε ξεχωριστά για να χρησιμεύσει ως ανατομικός έλεγχος και χρησιμοποιήθηκε η δοκιμασία Mann-Whitney U για τη σύγκριση της συμπεριφοράς την τελική ημέρα της δοκιμής με αρσενικά που είχαν εμπειρία σε ναλοξόνη και φυσιολογικό ορό.
Εξέλιξη pERK που προκαλείται από σχετιζόμενη με τη δημιουργία πλαισίου συμφόρησης
Πειραματικό σχέδιο.
Η έκθεση στο κλουβί στο οποίο τα αρσενικά απέκτησαν εμπειρία ζευγαρώματος έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί ενεργοποίηση MOR στο VTA και νευρική δραστηριότητα στο VTA και το NAc ( Balfour et al., 2004 ). Ως εκ τούτου, το περιβάλλον ζευγαρώματος χρησιμεύει ως ένα εξαρτημένο σύνθημα που προβλέπει τη σεξουαλική ανταμοιβή. Η παρούσα μελέτη εξέτασε εάν η ενεργοποίηση MOR κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας απαιτείται για την επακόλουθη εξαρτημένη νευρική ενεργοποίηση που προκαλείται από σύνθημα. Η ναλοξόνη ή ο φυσιολογικός ορός χορηγήθηκαν συστηματικά (ip) 30 λεπτά πριν από την τοποθέτηση στην αρένα ζευγαρώματος και την εισαγωγή ενός δεκτικού θηλυκού για ζευγάρωμα (έμπειρο) ή πριν από τον χειρισμό ελέγχου που συνίστατο στην τοποθέτηση στο κλουβί χειρισμού χωρίς την παρουσίαση του θηλυκού (ουδέτερο περιβάλλον, αφελές). Έτσι, δημιουργήθηκαν τέσσερις πειραματικές ομάδες: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal και Exp NLX. Μία εβδομάδα μετά την τελική συνεδρία ζευγαρώματος, τα μισά ζώα σε κάθε ομάδα εκτέθηκαν στο κλουβί ζευγαρώματος (αρσενικά Exp: εξαρτημένα σήματα που σχετίζονται με το φύλο) ή στο κλουβί χειρισμού (αφελή αρσενικά: μη εμφανή/ουδέτερα σήματα), ενώ το άλλο μισό δεν εκτέθηκε σε κανένα σήματα και αντ' αυτού παρέμεινε στα κλουβιά-σπίτια (για να προσδιοριστεί η αρχική έκφραση pERK). Αυτό το πειραματικό παράδειγμα παρήγαγε 8 ομάδες: Naive Sal-No Cue, Naive Sal+Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX+Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal+Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX+Cue ( n = 4 το καθένα εκτός από τα Naive NLX-No Cue, n = 3). Τα ζώα έλαβαν έγχυση 10-15 λεπτά μετά την έκθεση στο σήματα. Τα ζώα ελέγχου απομακρύνθηκαν από τα κλουβιά-σπίτια τους και έλαβαν έγχυση ταυτόχρονα.
Ανοσοϊστοχημεία.
Η τομή και η ανοσοϊστοχημεία διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Εδώ, χρησιμοποιήσαμε ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι των κινασών MAP p42 και p44 ERK1 και ERK2 (pERK; 1:4 000; Cell Signaling Technology). Το πρωτογενές αντίσωμα έχει χαρακτηριστεί εκτενώς στη βιβλιογραφία ( Roux and Blenis, 2004 ; Murphy and Blenis, 2006 ; Frohmader et al., 2010b ). Επιπλέον, η παράλειψη του πρωτογενούς αντισώματος εμπόδισε κάθε ανοσοαντιδραστικότητα και η ανάλυση Western blot ιστού εγκεφάλου αρουραίου αποκάλυψε δύο ζώνες στα κατάλληλα μοριακά βάρη.
Ανάλυση δεδομένων.
Τα pERK-ανοσοαντιδραστικά (-IR) κύτταρα καταμετρήθηκαν σε διάφορες περιοχές του εγκεφάλου χρησιμοποιώντας έναν σωλήνα σχεδίασης camera lucida συνδεδεμένο σε μικροσκόπιο Leica DMRD: NAc [πυρήνας (C) και κέλυφος (S)· 400 × 600 μm· έσω προμετωπιαίος φλοιός· mPFC· πρόσθια περιοχή του προσαγωγίου (ACA)· προμεταιχμιακός φλοιός (PL)· υπομεταιχμιακός φλοιός (IL)· 600 × 800 μm έκαστο], κερκοφόρος-κελυφωτός φλοιός (CP· 800 × 800 μm) και βασοπλάγια αμυγδαλή (BLA· 900 × 1200 μm· Balfour et al., 2004 · Frohmader et al., 2010b · Pitchers et al., 2010b ). Μετρήθηκαν δύο τομές ανά περιοχή του εγκεφάλου και ο αριθμός των κυττάρων στις τυπικές περιοχές ανάλυσης υπολογίστηκε στη συνέχεια ως αριθμός κυττάρων ανά mm2 . Οι δύο μετρήσεις υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο ανά ζώο για τον υπολογισμό των μέσων όρων της ομάδας. Οι μέσοι όροι των ομάδων εντός ομάδων με ή χωρίς σεξουαλική εμπειρία συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ANOVA [παράγοντες: φαρμακευτική αγωγή (NLX ή Sal) και ένδειξη (ένδειξη ή απουσία ένδειξης)], ακολουθούμενες από συγκρίσεις εκ των υστέρων χρησιμοποιώντας τις δοκιμές αθροίσματος Holm-Sidak ή Mann-Whitney, όπου ήταν σκόπιμο, με επίπεδο σημαντικότητας p < 0.05. Στο κέλυφος NAc των ζώων με σεξουαλική εμπειρία, υπήρξε ισχυρή τάση προς τη σημαντικότητα των παραγόντων και, ως εκ τούτου, διεξήχθησαν συγκρίσεις ανά ζεύγη για να συγκριθούν μόνο οι ομάδες με φυσιολογικό ορό (Sal-Χωρίς Ένδειξη) και ένδειξη φυσιολογικού ορού (Sal+Ένδειξη).
Εικόνες.
Οι ψηφιακές εικόνες καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας μια κάμερα CCD (Macrofire, Optronics) συνδεδεμένη σε ένα μικροσκόπιο Leica (DM5000B) με σταθερές ρυθμίσεις κάμερας. Οι εικόνες εισήχθησαν στο λογισμικό Adobe Photoshop 9.0. Οι εικόνες δεν τροποποιήθηκαν με κανέναν τρόπο εκτός από την προσαρμογή της φωτεινότητας και της αντίθεσης.
Αποτελέσματα
Επηρεασμένες από εμπειρία σεξουαλικών αλλαγών στα κύτταρα ντοπαμίνης VTA
Η σεξουαλική εμπειρία οδήγησε σε μείωση του μεγέθους του VTA ντοπαμίνης soma (Σύκο. 1ΜΕΤΑ ΧΡΙΣΤΟΝ). Η σεξουαλική εμπειρία μείωσε σημαντικά την περιοχή και την περίμετρο του soma των κυττάρων VTA TH-IR (περιοχή: F(1,31) = 23.068, p <0.001; περίμετρος, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Υπήρχε επίσης μια σημαντική σημαντική επίδραση του χρόνου (περιοχή: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; περίμετρος, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) και σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ εμπειρίας και χρόνου (περιοχή: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; περίμετρος, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Οι συζευγμένες συγκρίσεις αποκάλυψαν ότι η περιοχή και η περίμετρος των κυττάρων TH-IR μείωσαν σημαντικά τα 1 και 7d μετά την τελευταία ημέρα σεξουαλικής συμπεριφοράς σε σεξουαλικά έμπειρα ζώα σε σύγκριση με σεξουαλικά μη-ελεγχόμενα ζώα [Σύκο. 1B, περιοχή: p = 0.002 (1d), p <0.001 (7 η); C, περίμετρος: p = 0.009 (1d), p <0.001 (7 d)]. Η επίδραση της σεξουαλικής συμπεριφοράς εξαφανίστηκε όταν ακολούθησε η περίοδος αποχής από την ανταμοιβή καθώς το σωματικό μέγεθος των νευρώνων TH-IR επανήλθε στην αρχική τιμή 31 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος (Σύκο. 1B, περιοχή: p = 0.798; C, περίμετρος: p = 0.785). Οι επαγόμενες από την εμπειρία της σεξουαλικής επαφής αλλοιώσεις δεν ανιχνεύθηκαν σε κυκλικότητα σε κανένα από τα χρονικά σημεία (Σύκο. 1D). Η μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης soma στο μέγεθος της ντοπαμίνης δεν εξαρτιόταν από τις καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος, καθώς η εμπειρία ζευγαρώματος κατά τη διάρκεια πέντε συνόδων ζευγαρώματος διάρκειας δύο εβδομάδων παρήγαγε επίσης μειωμένο μέγεθος VTA ντοπαμίνης somaΣύκο. 2A,B, E-H, περιοχή: p = 0.004; περίμετρος: p <0.001). Αντίθετα, η σεξουαλική εμπειρία δεν επηρέασε το μέγεθος του TH-IR soma στο ουσιαστικό nigra (Σύκο. 2C, I-J, περιοχή: p = 0.13; περίμετρος: p = 0.16) ούτε αλλοιωμένο μέγεθος soma σε κοντινούς νευρώνες VTA μη-TH-IR (Σύκο. 2D, E-H, περιοχή: p = 0.46; περίμετρος: p = 0.45).
Ενδογενείς μεταβολές μεγέθους soma που προκαλούνται από οπιοειδείς νευρώνες νταπαμίνης VTA. A, Αντιπροσωπευτικές εικόνες νευρώνων νταπαμίνης VTA από σεξουαλικά αθώα και έμπειρα ζώα που δείχνουν τη μείωση του μεγέθους soma 7 d μετά την τελική σύζευξη. Κλίμακα κλίμακας, 5 μm. Ποσοτικά στοιχεία που δείχνουν ότι η σεξουαλική εμπειρία (Exp, μαύρες ράβδοι) προκάλεσε σημαντική μείωση στην περιοχή (B. σε μm2) και περίμετρο (C. σε μm) κυττάρων νταπαμίνης VTA, το 1 d (Naive, Εχρ. n = 6) και 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), αλλά όχι 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) μετά την τελική ζευγαρώματος, σε σύγκριση με τα σεξουαλικά μη φυσιολογικά μάρτυρες (Naive, λευκές ράβδοι). Η περιοχή μειώθηκε στο 84% σε έμπειρους άρρενες σε σύγκριση με τους μη κατοίκους μάρτυρες σε 1 ή 7 d. Η περίμετρος μειώθηκε σε 91.6 και 90% σε έμπειρες ομάδες σε σύγκριση με τον έλεγχο σε 1 και 7 d resp. Δεν υπήρξε καμία επίδραση στην κυκλικότητα (D). Αυτή η πλαστικότητα κυττάρων ντοπαμίνης στην περιοχή (E) και περίμετρο (F) παρεμποδίστηκε με ναλοξόνη (NLX, n = 8), αλλά όχι αλατούχο (Sal, n = 7) κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος, το 7 d μετά την τελική περίοδο ζευγαρώματος σε σύγκριση με τους σεξουαλικά μη-ελεγχόμενους μάρτυρες (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους πρωταρχικούς σεξουαλικούς ελέγχους της ίδιας ημέρας (B, C) ή σε σύγκριση με θεραπευόμενους με αλατούχο σεξουαλικά μη κατοίκους μάρτυρες και σεξουαλικά έμπειρους άρρενες που έλαβαν ναλοξόνη (E, F).
Η σεξουαλική εμπειρία δεν μείωσε το μέγεθος soma στους νευρώνες ντοπαμίνης ουσίας nigra ή τους ντοντοπαμινικούς νευρώνες VTA. Περιοχή VTA TH-IR neuron soma (A. σε μm2) και περίμετρο (B. σε μm) σε σεξουαλικά αφελείς (λευκούς) και έμπειρους (μαύρους) ζώα που απέκτησαν εμπειρία από το ζευγάρωμα δύο φορές την εβδομάδα και όχι κατά τη διάρκεια διαδοχικών ημερών. Υποστατική περιοχή της περιοχής TH-IR (C) και VTA μη-TH-IR περιοχή soma (D) σε σεξουαλικά αφελείς (λευκούς) και έμπειρους (μαύρους) ζώα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα σεξουαλικά μη-ελεγχόμενα φάρμακα. Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν TH-IR (καφέ) νευρώνες σε VTA σε σεξουαλικά αφελείς (E) και έμπειρους (F) αρσενικά. G, H, Εικόνα υψηλότερης μεγέθυνσης του νευρώνα που υποδεικνύεται από το βέλος στο E και F αντίστοιχα. Οι χρωματισμένοι με Nissl νευρώνες εμφανίζονται με μπλε χρώμα σε αυτές τις εικόνες. Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν νευρώνες TH-IR σε SN με σεξουαλική αφέλεια (I) και έμπειρους (J) αρσενικά. Γραμμές κλίμακας: E-J, 20 μm.
Η επαγόμενη από τη σεξουαλική επαγόμενη μείωση του μεγέθους soma των ντοπαμινικών νευρώνων VTA εξαρτάται από την ενεργοποίηση του υποδοχέα οπιοειδών
Η μείωση του μεγέθους του ντοπαμινικού νωτιαίου σμήματος VTA που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία παρεμποδίστηκε από τον μη-εκλεκτικό ανταγωνιστή MOR ναλοξόνη, που χορηγήθηκε πριν από κάθε συνεδρία ζευγαρώματος. Η θεραπεία με ναλοξόνη πριν από τις συνεδρίες ζευγαρώματος είχε σημαντική επίδραση στην περιοχή (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) και τείνει προς μια σημαντική επίδραση στην περίμετρο (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ της εμπειρίας και της θεραπείας με ναλοξόνη βρέθηκε για την περιοχή (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) και περίμετρο (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Οι συζευγμένες συγκρίσεις έδειξαν ότι η σεξουαλική εμπειρία σε ζώα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό μειώνει σημαντικά την περιοχή και την περίμετρο των ντοπαμινικών νευρώνων 7 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος σε σύγκριση με άνδρες που έχουν υποβληθεί σε σεξουαλική αγωγή χωρίς θεραπείαΣύκο. 1E, περιοχή: p = 0.018; F, περίμετρος: p = 0.007). Αντίθετα, τα σεξουαλικά υποβληθέντα σε θεραπεία με ναλοξόνη ζώα δεν διέφεραν από τους άνδρες που δεν είχαν λάβει θεραπεία με ναλοξόνη (Σύκο. 1E, περιοχή: p = 0.483; F, περίμετρος: p = 0.330). Επιπλέον, το μέγεθος soma των έμπειρων αλατούχων ζώων μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με τα έμπειρα ζώα ναλοξόνης (Σύκο. 1E, περιοχή: p = 0.002; F, περίμετρος: p = 0.002). Αυτή η επίδραση της ναλοξόνης ήταν ειδική για την σεξουαλική εμπειρία, καθώς η αγωγή με ναλοξόνη μόνη της δεν επηρέασε το μέγεθος των σωματικών κυττάρων TH-IR σε αρσενικά που είχαν υποβληθεί σε θεραπεία με σεξουαλική αγωγή με ναλοξόνη σε σύγκριση με τους μάρτυρες που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορόΣύκο. 1E,F). Επιπλέον, αυτό το αποτέλεσμα της ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία ελάττωση του μεγέθους soma δεν οφείλεται στα αποτελέσματα της ναλοξόνης στη σεξουαλική συμπεριφορά, καθώς η συμπεριφορά ζευγαρώματος δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των αρσενικών που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη και φυσιολογικό ορό, εκτός από ένα μεγαλύτερο χρονικό διάστημα για να ξεκινήσει το ζευγάρωμα μετά την εκσπερμάτωση (διάστημα μετά την εκσπερμάτιση) σε αρσενικά που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της πρώτης και πέμπτης συνεδρίας ζευγαρώματος (p = 0.03 και p = 0.004, αντίστοιχα). Τόσο οι άνδρες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο όσο και με ναλοξόνη συνδύαζαν την εκσπερμάτιση κατά τη διάρκεια καθεμιάς από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος.
Η ανοχή ανταμοιβής μορφίνης που προκαλείται από την σεξουαλική εμπειρία
Οι επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στο μέγεθος του ντοπαμινοσώματος VTA μέσω της δράσης της EOP στο VTA είναι παρόμοιες με εκείνες που αναφέρθηκαν για τα εξωγενή οπιοειδή ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Russo et al., 2007 ). Επομένως, εξετάστηκε εάν η φυσική πλαστικότητα των ντοπαμινοκυττάρων VTA που προκαλείται από την ανταμοιβή επηρεάζει την ανταμοιβή για την οπιοειδή μορφίνη. Πράγματι, η σεξουαλική εμπειρία προκάλεσε ανοχή ανταμοιβής στη μορφίνη, παρόμοια με τις επιδράσεις των χρόνιων οπιοειδών ( Russo et al., 2007 ). Τα σεξουαλικά έμπειρα αρσενικά απέτυχαν να αναπτύξουν CPP για δόση μορφίνης 0.5 mg/kg. ενώ τα σεξουαλικά αφελή αρσενικά σχημάτισαν CPP για αυτή τη δόση, όπως υποδεικνύεται από το γεγονός ότι πέρασαν μεγαλύτερο χρονικό διάστημα στον θάλαμο ζευγαρωμένου με μορφίνη σε σύγκριση με τον θάλαμο ζευγαρωμένου με φυσιολογικό ορό κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμής ( Εικ. 3 ; p = 0.039). Τόσο οι ομάδες με σεξουαλική αφέλεια όσο και οι ομάδες με σεξουαλική εμπειρία πέρασαν σημαντικά μεγαλύτερο χρονικό διάστημα στον θάλαμο με μορφίνη σε σύγκριση με τον θάλαμο με φυσιολογικό ορό με υψηλότερες δόσεις μορφίνης: 5.0 mg/kg ( Εικ. 3 , Αφροαμερικανός: p = 0.029, Πείραμα: p = 0.012) και 10.0 mg/kg ( Εικ. 3 , Αφροαμερικανός: p < 0.001, Πείραμα: p = 0.002).
Οι επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στην ανταμοιβή με μορφίνη. Χρόνοι που διανύθηκαν σε θαλάμους φυσιολογικού ορού (Sal) ή σε θαλάμους με μορφίνη (Mor· 0.5, 5 ή 10 mg/kg σωματικού βάρους) κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμής σε αρσενικά που δεν είχαν λάβει ποτέ σεξουαλική επαφή (Naive, n = 10–13) ή είχαν εμπειρία (Exp, n = 9–13). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τον θάλαμο με μορφίνη που είχε λάβει αγωγή με Sal στα ίδια ζώα. NS, Μη σημαντικό.
Η επαγόμενη από τη σεξουαλική επαφή διευκόλυνση της συμπεριφοράς ζευγαρώματος εξαρτάται από την ενεργοποίηση του υποδοχέα οπιοειδών
Τα ευρήματα μέχρι τώρα καταδεικνύουν ότι η ΕΟΡ που δρουν στο VTA κατά τη διάρκεια των καθημερινών μικρών συνόδων ζευγαρώματος 5 προκαλεί πλαστικότητα των νευρώνων ντοπαμίνης VTA που είναι παρόμοια με τις επιδράσεις της χρόνιας μορφίνης ή της αυτο-χορήγησης ηρωίνηςRusso et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Υποθέσαμε ότι η μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης soma-size είναι κρίσιμη για την εκμάθηση ανταμοιβής και ειδικά για τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς από την εμπειρία της σεξουαλικής συμπεριφοράς όσον αφορά τα κίνητρα και τις επιδόσεις. Αυτή η υπόθεση δοκιμάστηκε με αποκλεισμό του MOR χρησιμοποιώντας ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος και την εξέταση των επιδράσεων στη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκλήθηκε από τη σεξουαλική εμπειρία κατά τις πέντε καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος. Τα δεδομένα παρουσιάζονται στο Εικόνα 4 για την πρώτη και την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος μόνο, καθώς αυτά είναι τα δεδομένα που απεικονίζουν καλύτερα την επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της συμπεριφοράς ζευγαρώματος. Επιπλέον, οι μακροπρόθεσμες επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια των συνεδριών ζευγαρώματος εξετάζονται για τη διατήρηση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της συμπεριφοράς ζευγαρώματος, κατά τη διάρκεια μιας τελικής δοκιμής ζευγαρώματος 1 εβδομάδα αργότερα. Εικόνα 4A δείχνει το πειραματικό σχέδιο. Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της σύζευξης σε όλες τις παραμέτρους της σεξουαλικής συμπεριφοράς (latency mount: F(2,55) = 11.286, p <0.001; καθυστέρηση εισόδου: F(2,55) = 8.767, p <0.001; καθυστέρηση εκσπερμάτωσης: F(2,55) = 10.368, p <0.001) και θεραπεία με ναλοξόνη σε λανθάνουσα κατάσταση για προσάρτηση (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) και intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Συγκριτικές συγκρίσεις έδειξαν ότι η θεραπεία με ναλοξόνη επηρέασε τη σεξουαλική συμπεριφορά κατά την πρώτη συνεδρία ζευγαρώματος επειδή τα ζώα ναλοξόνης είχαν σημαντικά μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδους για πρώτη φορά (p = 0.002) και intromission (p = 0.002) σε σύγκριση με τους ελέγχους φυσιολογικού ορού κατά την πρώτη ημέρα του ζευγαρώματος. Αυτή η επίδραση ναλοξόνης στην αρχική σεξουαλική συμπεριφορά μειώθηκε από τη σεξουαλική εμπειρία και δεν παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια οποιασδήποτε από τις επόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος (Πίνακας 1). Επιπλέον, η χορήγηση ναλοξόνης πριν από κάθε μία από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος δεν εμπόδισε την αρχική διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς με σεξουαλική εμπειρία. Σύμφωνα με τις ενισχυτικές επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας, τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με αλατούχα εμφάνισαν μειωμένες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 4B; p = 0.032) intromission (Σύκο. 4C; p = 0.033) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 4D; p <0.001) κατά την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος σε σύγκριση με την πρώτη συνεδρία ζευγαρώματος, η οποία έδειξε διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Παρομοίως, τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη εμφάνισαν σημαντικά μικρότερες καθυστερήσεις για προσάρτηση (Σύκο. 4B; p <0.001), είσοδος (Σύκο. 4C; p <0.001) και εκσπερμάτωση (Σύκο. 4D; p = 0.017) στην πέμπτη σε σύγκριση με την πρώτη ημέρα. Επιπλέον, οι άντρες που έλαβαν ναλοξόνη δεν διέφεραν από τους ελέγχους αλατόνερου σε οποιαδήποτε από τις λανθάνουσες περιόδους κατά τη διάρκεια της πέμπτης συνεδρίας ζευγαρώματος.
Τα ενδογενή οπιοειδή παίζουν κρίσιμο ρόλο στην διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία. A , Πειραματικός σχεδιασμός. B – D , Παράμετροι σεξουαλικής συμπεριφοράς για αρσενικά που έλαβαν φυσιολογικό ορό (Sal, λευκές μπάρες, n = 11) ή ναλοξόνη (NLX, μαύρες μπάρες, n = 12) με συστηματική χορήγηση. Τα δεδομένα που εμφανίζονται είναι η καθυστέρηση έως την εμφάνιση ( B , δευτερόλεπτα), η ενδομύηση ( C , δευτερόλεπτα) και η εκσπερμάτιση ( D , δευτερόλεπτα) τις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχόμενων ημερών ζευγαρώματος. Επιπλέον, εμφανίζονται δεδομένα για την τελική δοκιμασία ζευγαρώματος, 7 ημέρες μετά την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. το + υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ημερών 1 και 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. το * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας δοκιμής και της ημέρας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. το # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων ναλοξόνης και φυσιολογικού ορού εντός της ημέρας.
Η χορήγηση ναλοξόνης πριν από το ζευγάρωμα αύξησε τις λανθάνουσες δόσεις μέχρι την πρώτη ημέρα ζευγαρώματος
Αντίθετα, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της συνεδρίας σεξουαλικής εμπειρίας διακόπηκε τη διατήρηση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά την τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος. Η ημέρα δοκιμής διεξήχθη 7 d μετά την τελική σύζευξη απουσία μιας έγχυσης ναλοξόνης. Οι αρσενικοί μάρτυρες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο εμφάνισαν την αναμενόμενη εμπειρία που προκαλείται από την εμπειρία της σεξουαλικής συμπεριφοράς Συγκεκριμένα, οι λανθάνουσες περιόδους κατά την τοποθέτηση, την εισαγωγή και την εκσπερμάτιση δεν διέφεραν μεταξύ της πέμπτης συνεδρίασης ζευγαρώματος και της τελικής ημέρας εξέτασης (Σύκο. 4Β-Δ). Ενώ οι άντρες που έλαβαν ναλοξόνη έδειξαν σημαντική αύξηση των λανθάνουσας κατάστασης (Σύκο. 4B; p = 0.033), intromission (Σύκο. 4C; p = 0.036) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 4D; p = 0.049) την ημέρα της δοκιμής σε σύγκριση με την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος. Επίσης, την ημέρα δοκιμής τα ζώα ναλοξόνης βρέθηκαν να είναι σημαντικά βραδύτερα από τα αρσενικά που έχουν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό όπως φαίνεται από μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 4B; p = 0.017) και intromission (Σύκο. 4C; p = 0.043). Έτσι, η θεραπεία με ναλοξόνη παρεμπόδισε τη συντήρηση, αλλά όχι την αρχική, ανάπτυξη της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν έναν κρίσιμο ρόλο για την επαγόμενη από ΕΟΡ πλαστικότητα νταπαμινικού νευρώνα επαγόμενη από ΕΟΡ σε μακροχρόνια έκφραση ενίσχυσης της φυσικής ανταμοιβής συμπεριφοράς.
Διεξήχθησαν διάφορα επιπρόσθετα πειράματα ελέγχου για να προσδιοριστεί ότι οι επιδράσεις του αποκλεισμού των υποδοχέων οπιοειδών στην απώλεια της μακροπρόθεσμης ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς έλαβαν χώρα ανεξάρτητα από την έλλειψη της χορήγησης ναλοξόνης στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος (Σύκο. 5A,B), ήταν ειδικά για την απώλεια της μακροπρόθεσμης, αλλά όχι βραχυπρόθεσμης διατήρησης της διευκόλυνσης ζευγαρώματος (Σύκο. 5E,F), δεν προκλήθηκαν από ημερήσια έκθεση στη ναλοξόνη μόνη της (Σύκο. 5C,D) και δεν προκλήθηκαν από απώλεια σεξουαλικής ανταμοιβής σε αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη (Σύκο. 5G,H). Πρώτον, για να αποδειχθεί ότι η αλλοίωση της σεξουαλικής συμπεριφοράς στην τελική ζευγαρώματος δεν οφείλεται στην απουσία ναλοξόνης, χορηγήθηκε ναλοξόνη ή φυσιολογικός ορός στην τελική ημέρα δοκιμών ζευγαρώματος σε ζώα που έλαβαν ζευγάρωμα σε συνδυασμό με ναλοξόνη ενώ απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία (Σύκο. 5A). Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος στις λανθάνουσες περιόδους (Σύκο. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) και intromission (Πίνακας 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Δεν υπήρξε καμία κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος για λανθάνουσα κατάσταση στην εκσπερμάτιση (Πίνακας 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Παρόμοια με αυτά που περιγράφηκαν παραπάνω, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος δεν επηρέασε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια των αρχικών πέντε συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας. Και οι δύο ομάδες (που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αλατόνερο και ναλοξόνη όπως προσδιορίστηκαν με τη θεραπεία που λήφθηκε κατά τη διάρκεια της τελικής ζευγαρώματος και οι δύο έλαβαν ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος) κατέδειξαν διευκολυνόμενη σεξουαλική συμπεριφορά την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1 και εμφάνισαν σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5B. αλατούχος: p = 0.033; ναλοξόνη: p = 0.014) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.034; ναλοξόνη: p = 0.026). Τα ζώα που έλαβαν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό άλατος στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος είχαν μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5B. αλατούχος: p = 0.018; ναλοξόνη: p = 0.029) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.019; ναλοξόνη: p = 0.020) σε σύγκριση με την πέμπτη ημέρα της εμπειρίας ζευγαρώματος. Συνεπώς, η χορήγηση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού άλατος την ημέρα της δοκιμασίας αμέσως πριν από το ζευγάρωμα δεν επηρέασε την επίδραση της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας και η εξασθένιση της μακροπρόθεσμης διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς ήταν ίδια με αυτή που αποδείχθηκε σε ζώα που δεν έλαβαν καμία ένεση στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος (Σύκο. 4).
Τα ενδογενή οπιοειδή είναι σημαντικά στη μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία. A , Πειραματικός σχεδιασμός για το πείραμα σχετικά με την επίδραση της θεραπείας με NLX την ημέρα της δοκιμής. B , Λανθάνουσα κατάσταση προσδιορισμού τις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχόμενων ημερών ζευγαρώματος και την ημέρα της τελικής δοκιμής ζευγαρώματος (Δοκιμή) μετά από ένεση φυσιολογικού ορού (γκρι) ή ναλοξόνης (μαύρη). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέσο όρο ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας 1 και της ημέρας 5 εντός της θεραπείας. # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας δοκιμής και της ημέρας 5 εντός της θεραπείας. C , Πειραματικός σχεδιασμός για το πείραμα για να ελεγχθεί η επίδραση της προ-θεραπείας με ναλοξόνη μόνο χωρίς σεξουαλική εμπειρία στη συμπεριφορά ζευγαρώματος. D , Λανθάνουσα κατάσταση προσδιορισμού την ημέρα της τελικής δοκιμής ζευγαρώματος, 7 ημέρες μετά από 5 ημέρες ένεσης είτε φυσιολογικού ορού είτε ναλοξόνης απουσία ζευγαρώματος. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέσο όρο ± SEM. E , Πειραματικός σχεδιασμός για το πείραμα για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με ναλοξόνη επηρέασε τη βραχυπρόθεσμη εμφάνιση διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς σε ζώα με σεξουαλικά έμπειρα ζώα. F , Λανθάνουσα κατάσταση Mount την ημέρα 1 και την ημέρα 5 πέντε συνεχόμενων ημερών ζευγαρώματος και την ημέρα της τελικής δοκιμής ζευγαρώματος, 1 ημέρα μετά την ημέρα 5 παρουσία ένεσης φυσιολογικού ορού (γκρι) ή ναλοξόνης (μαύρο). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας 1 και της ημέρας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. G , Πειραματικός σχεδιασμός για το πείραμα για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με ναλοξόνη μπλόκαρε τις ανταποδοτικές επιδράσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. H , Χρόνος που αφιερώθηκε στον θάλαμο ζευγαρώματος (σε δευτερόλεπτα) κατά τη διάρκεια της προ-δοκιμασίας (λευκό) και της μετα-δοκιμασίας (μαύρο) για ζώα που έλαβαν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό πριν από το ζευγάρωμα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την προ-δοκιμασία.
Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι η λανθάνουσα κατάσταση στην ενδοπρόσθεση και την εκσπερμάτιση (δευτερόλεπτα) από τα πειράματα ελέγχου που διεξήχθησαν για να προσδιοριστεί ότι οι επιδράσεις του αποκλεισμού MOR στην απώλεια της μακροπρόθεσμης ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς συνέβησαν ανεξάρτητα από την έλλειψη χορήγησης ναλοξόνης στην τελική ημέρα τεστ ζευγαρώματος
Για να προσδιοριστεί εάν η θεραπεία με ναλοξόνη, σε συνδυασμό με σεξουαλική εμπειρία και όχι με επανάληψη της ναλοξόνης αυτή καθαυτή, προκάλεσε βλάβη στη σεξουαλική συμπεριφορά 7 ημέρες μετά την τελευταία θεραπεία, τα ζώα που δεν είχαν λάβει ποτέ σεξουαλικά επαφή έλαβαν είτε πέντε ημερήσιες ενέσεις ναλοξόνης είτε ενέσεις φυσιολογικού ορού πριν από μια τελική δοκιμασία ζευγαρώματος 7 ημέρες αργότερα ( Εικ. 5 Γ ). Δεν ανιχνεύθηκαν σημαντικές διαφορές για καμία παράμετρο ζευγαρώματος μεταξύ των ομάδων που έλαβαν φυσιολογικό ορό και αυτών που έλαβαν προ-θεραπεία με ναλοξόνη ( Εικ. 5 Δ , καθυστέρηση τοποθέτησης, καθυστέρηση εισαγωγής: φυσιολογικός ορός 139.7 ± 40.3 έναντι ναλοξόνης 121.83 ± 42.55, καθυστέρηση εκσπερμάτισης: φυσιολογικός ορός 887.9 ± 70.0 έναντι ναλοξόνης 1050.8 ± 327.31). Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η ναλοξόνη από μόνη της δεν επαρκεί για να αλλάξει την επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά, παρόμοια με την έλλειψη επιδράσεων της ναλοξόνης από μόνη της στην πλαστικότητα των νευρώνων ντοπαμίνης VTA.
Υποθέτουμε ότι η θεραπεία με ναλοξόνη κατά την απόκτηση της σεξουαλικής εμπειρίας διαταράσσει τη μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την σεξουαλική επαφή διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να εξεταστεί περαιτέρω αυτό, οι επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος εξετάστηκαν σε επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά κατά τη διάρκεια μιας τελικής δοκιμής ζευγαρώματος, η οποία διεξήχθη μόνο με 1 d μετά από τελευταίο ζευγάρωμα (πειραματικός σχεδιασμός, Σύκο. 5E). Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος στο mount (Σύκο. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) και καθυστέρηση εισόδου (Πίνακας 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Δεν υπήρχε σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας στον λανθάνοντα χρόνο εκσπερμάτωσης (Πίνακας 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Παρόμοια με αυτά που περιγράφηκαν παραπάνω, όλοι οι άνδρες (παρά τις θεραπείες αλατόνερου ή ναλοξόνης) έδειξαν διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια των πέντε συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας που υποδεικνύονται από σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5F. αλατούχος: p = 0.002; ναλοξόνη: p = 0.018) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.006; ναλοξόνη: p = 0.009) την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1. Παρομοίως, η διεξαχθείσα σεξουαλική συμπεριφορά καταδείχθηκε την ημέρα της δοκιμής σε σύγκριση με την ημέρα 1 που υποδεικνύεται από σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδους για την προσπέλαση (Σύκο. 5F. αλατούχος: p = 0.001; ναλοξόνη: p = 0.020) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.004; ναλοξόνη: p = 0.009). Το πιο σημαντικό, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος δεν επηρέασε σημαντικά την επαγόμενη από την εμπειρία της σεξουαλικής διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη δοκιμασία του 1 d μετά από σεξουαλική εμπειρία, ανεξάρτητα από τη θεραπεία με ναλοξόνη σε αυτήν την τελική ημέρα τεστ ζευγαρώματος.
Τέλος, εξετάσαμε την πιθανότητα οι εξασθενητικές επιδράσεις της ναλοξόνης στη μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς να οφείλονται σε μια ανασταλτική επίδραση της ναλοξόνης στις ιδιότητες ανταμοιβής της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Ωστόσο, η ναλοξόνη που χορηγήθηκε αμέσως πριν από το ζευγάρωμα δεν άλλαξε τον σχηματισμό CPP για το ζευγάρωμα ( Εικ. 5 G ), υποδηλώνοντας ότι η θεραπεία με ναλοξόνη δεν άλλαξε τη σεξουαλική ανταμοιβή. Τόσο οι ομάδες που έλαβαν φυσιολογικό ορό όσο και οι ομάδες που έλαβαν ναλοξόνη σχημάτισαν σημαντικό CPP για τη σεξουαλική συμπεριφορά, όπως υποδεικνύεται από τον σημαντικά αυξημένο χρόνο που αφιερώθηκε σε θάλαμο ζευγαρωμένου φύλου ( Εικ. 5 H , φυσιολογικό ορό: p = 0.038, ναλοξόνη: p = 0.002) κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμασίας σε σύγκριση με την προ-δοκιμασία. Επομένως, η ναλοξόνη δεν ασκεί την αρνητική της επίδραση στη διατήρηση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς αναστέλλοντας την ανταμοιβή που σχετίζεται με τη σεξουαλική συμπεριφορά.
Η διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς εξαρτάται από τη δράση ΕΑΠ στο VTA
Για να επιβεβαιωθεί ότι η EOP ενεργεί ειδικά στο VTA για να επιφέρει μακροπρόθεσμη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, ο πειραματικός σχεδιασμός που περιγράφεται στο Εικόνα 3A επαναλήφθηκε με εγχύσεις ενδο-VTA ναλοξόνης και όχι με συστηματικές ενέσεις. Τα αποτελέσματα ήταν ίδια με τη συστηματική χορήγηση που περιγράφηκε παραπάνω. Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος σε όλες τις παραμέτρους της σεξουαλικής συμπεριφοράς (Σύκο. 6A, χρόνος εγκατάστασης: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, καθυστέρηση intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, λανθάνουσα εκσπερμάτωση: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) και ενδο-VTA κατεργασία ναλοξόνης σε λανθάνουσες περιόδους (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) και intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Η ενδο-VTA ναλοξόνη δεν εμπόδισε την αρχική εμπειρία που προκάλεσε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια του 5 d του ζευγαρώματος, καθώς τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη παρουσίασαν μειωμένες λανθάνουσες δόσεις για να τοποθετήσουν (Σύκο. 6A; p = 0.001), intromission (Σύκο. 6B; p <0.001) και εκσπερμάτωση (Σύκο. 6C; p = 0.001) την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1. Τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη δεν διέφεραν από τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορό κατά την πέμπτη ημέρα του ζευγαρώματος σε οποιαδήποτε από τις λανθάνουσες περιόδους. Η ενδο-VTA θεραπεία με ναλοξόνη, όπως η συστηματική χορήγηση, προκάλεσε σημαντικά αυξημένη αύξηση (Σύκο. 6A; p <0.001) και καθυστέρηση εισόδου (Σύκο. 6B; p <0.001) την πρώτη ημέρα ζευγαρώματος σε σύγκριση με τα αρσενικά που έλαβαν αλατούχο διάλυμα, το οποίο δεν παρατηρήθηκε κατά τις επόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος (κατά τη διάρκεια των οποίων τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη και αλατούχο διάλυμα δεν διέφεραν). Μια απροσδόκητη παρατήρηση ήταν ότι σε αυτό το πείραμα, τα αρσενικά που έλαβαν αλατούχο διάλυμα δεν έδειξαν στατιστικά σημαντική διευκόλυνση των καθυστερήσεων προσαύξησης ή ενδοσκόπησης (όπως φαίνεται σε όλα τα πειράματα που περιγράφονται παραπάνω) και μόνο ο λανθάνων χρόνος εκσπερμάτωσης μειώθηκε την πέμπτη ημέρα σε σύγκριση με την πρώτη ημέρα (αλατούχος: p = 0.001).
Τα ενδογενή οπιοειδή στο VTA μεσολαβούν στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και στη μακροχρόνια διατήρησή της. Παράμετροι σεξουαλικής συμπεριφοράς για αρσενικά που έλαβαν φυσιολογικό ορό (Sal, λευκές μπάρες, n = 8) ή NLX (μαύρες μπάρες, n = 6) με ενδο-VTA χορήγηση. Τα δεδομένα που εμφανίζονται είναι η καθυστέρηση στην εμφάνιση ( A ), η ενδομύηση ( B ) και η εκσπερμάτιση ( C ) τις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχόμενων ημερών ζευγαρώματος. Επιπλέον, εμφανίζονται δεδομένα για την τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος, 7 ημέρες μετά την ημέρα 5 απουσία ένεσης φυσιολογικού ορού ή ναλοξόνης. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± SEM. Το + υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ημερών 1 και 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Το * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας δοκιμής και της ημέρας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. Το # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ομάδων ναλοξόνης και Sal εντός της ημέρας. Σχηματικά σχέδια στεφανιαίων τομών VTA (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25 από το βρέγμα) που υποδεικνύουν σημεία ενδο-VTA ένεσης για όλα τα ζώα στο Πείραμα 5 (φυσιολογικός ορός, λευκός, ναλοξόνη, μαύρος, Missed, γκρι), χρησιμοποιώντας σχέδια προτύπων από τους Χάρτες Εγκεφάλου Swanson ( Swanson, 2004 ). Οι κάνουλες ήταν αμφοτερόπλευρες, αλλά τα σημεία ένεσης αναπαρίστανται μονομερώς για ευκολία παρουσίασης. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, substantia nigra.
Η θεραπεία με ναξολόνη εντός-VTA εμποδίζει τη διατήρηση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς που παρατηρείται σε σεξουαλικά έμπειρους άρρενες, παρόμοια με τα αποτελέσματα της συστηματικής ναλοξόνης. Συγκεκριμένα, την ημέρα της τελικής δοκιμής, οι άνδρες που έλαβαν ναλοξόνη είχαν μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 6A; p = 0.011), intromission (Σύκο. 6B; p = 0.010) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 6C; p = 0.015) σε σύγκριση με την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος και συγκρίθηκε με τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορό κατά την τελική ημέρα δοκιμής (Σύκο. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Αντίθετα, τα ζώα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό δεν διέφεραν κατά τη διάρκεια των λανθάνουσας κατάστασης και της εισόδου μεταξύ της τελικής ημέρας και της ημέρας 5 του ζευγαρώματος. Αυτές οι επιδράσεις ήταν συγκεκριμένες για την παροχή ναλοξόνης στο VTA, καθώς τα αρσενικά με σημεία σωληναριάς πλησίον αλλά δεν στοχεύουν το VTAΣύκο. 6D; n = 3) εμφάνισαν μακροπρόθεσμη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς παρόμοια με τους μάρτυρες που είχαν υποβληθεί σε αγωγή με αλατούχο ορό (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 και σημαντικά διαφορετικά συγκριτικά με ζώα ενδο-VTA ναλοξόνης στην τελική ημέρα ελέγχου ζευγαρώματος (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).
Η δράση EOP απαιτείται για την επαγόμενη από το φύλο κλινική επαγόμενη νευρική ενεργοποίηση
Με βάση τα ευρήματα μέχρι τώρα, υποθέσαμε ότι η ενεργοποίηση του EOP στο VTA κατά τη διάρκεια της εμπειρίας ζευγαρώματος και η επακόλουθη μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης Voma είναι ζωτικής σημασίας για την κατανομή των κρουσμάτων κινήτρων σε ζευγαρωτικά ερεθίσματα που συνδέονται με τη ανταμοιβή και συνεπώς τη διατήρηση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να δοκιμαστεί αυτή η υπόθεση, εξετάστηκαν τα αποτελέσματα του αποκλεισμού των υποδοχέων οπιοειδών κατά τη διάρκεια της ζευγαρωτικής εμπειρίας στη νευρική δραστηριότητα που προκλήθηκε από την επακόλουθη έκθεση σε κλινικά συμφραζόμενα πειράματα που προέβλεπαν τη σεξουαλική ανταμοιβή (συναφή με το περιβάλλον συμφραζόμενα). Τα σεξουαλικά αφελείς ζώα εκτέθηκαν επίσης σε περιβαλλοντικές ενδείξεις, αλλά αυτές δεν συσχετίστηκαν με προηγούμενη εμπειρία ζευγαρώματος, επομένως ήταν ουδέτερες ενδείξεις. Τέλος, τα επίπεδα ρΕΚΚ βασικής γραμμής προσδιορίστηκαν σε σεξουαλικά έμπειρους και απείθαρχους ομάδες ελέγχου που παρέμειναν στα κλουβιά του σπιτιού και δεν εκτέθηκαν σε τυχόν σημάδια (-No Cue). Επιβεβαιώνοντας και επεκτείνοντας τα προηγούμενα ευρήματα (Balfour et αϊ., 2004), η έκθεση σε συμφραζόμενα συναισθήματα που σχετίζονται με την προηγούμενη ανταμοιβή φύλου αύξησε σημαντικά την έκφραση pERK σε σεξουαλικά έμπειρους άνδρες στο NAc (Σύκο. 7) και mPFC (Σύκο. 8ΜΕΤΑ ΧΡΙΣΤΟΝ), αλλά δεν προκάλεσε νευρωνική ενεργοποίηση στο BLA (Σύκο. 8D) ή CPu (τα δεδομένα δεν εμφανίζονται). Υπήρχαν κύριες επιδράσεις της έκθεσης στην ουσία στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) και PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) και θεραπεία με ναλοξόνη στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) και PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Υπήρξε σημαντική αλληλεπίδραση στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) και IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Πρώτον, η σχετιζόμενη με το ζευγάρωμα έκφραση Cue αύξησε σημαντικά το pERK σε πειραματόζωα που είχαν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό (Exp Sal + Cue) σε σύγκριση με τους μάρτυρες που δεν εκτέθηκαν σε τυχόν σημάδια και λήφθηκαν από τον κλωβό (Exp Sal-No Cue) στον πυρήνα NAcΣύκο. 7A; p <0.001) και mPFC υποπεριφέρειες ACA (Σύκο. 8A; p = 0.001), PL (Σύκο. 8B; p = 0.003) και IL (Σύκο. 8C; p = 0.029). Αντίθετα, σε σεξουαλικά αθώα ζώα που έχουν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό, η έκθεση στα συμφραζόμενα, τα οποία δεν σχετίζονταν με τη σεξουαλική ανταμοιβή, δεν προκάλεσε το pERK σε καμία από τις περιοχές του εγκεφάλου (Naive Sal + Cue σε σύγκριση με το naive Sal-No Cue. Εικ. 7, 8), αποδεικνύοντας ότι η επαγωγή του pERK είναι συγκεκριμένη στην έκθεση των συνειρμών που σχετίζονται με τη σεξουαλική εμπειρία. Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία από μόνη της δεν αλλοίωσε την βασική έκφραση του pERK σε καμία από τις περιοχές του εγκεφάλου, καθώς δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των ομάδων που λήφθηκαν από τους κλωβούς του σπιτιού, είτε είχαν σεξουαλική αγωγή είτε είχαν εμπειρία, και υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο ή ναλοξόνη.
Απαιτείται ενδογενής δράση οπιοειδών για την νευρική ενεργοποίηση στο NAc που προκαλείται από εξαρτημένα σήματα που σχετίζονται με το φύλο. Αριθμός κυττάρων pERK-IR ανά mm2 στον πυρήνα του nucleus accumbens ( A ) και στο κέλυφος ( B ) σε σεξουαλικά αφελή (λευκά) και έμπειρα (Exp, μαύρα) ζώα που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με συστηματικό NLX ή φυσιολογικό ορό (Sal) κατά τη διάρκεια συνεδριών ζευγαρώματος (αρσενικά Exp) ή συνεδριών χειρισμού (αφελή αρσενικά). Οι ομάδες είτε εκτέθηκαν σε συμφραζόμενα σήματα (Cue), τα οποία ήταν σήματα που σχετίζονται με το ζευγάρωμα σε αρσενικά Exp και ουδέτερα σήματα σε αφελή ζώα, είτε ελήφθησαν από τα οικιακά κλουβιά (No Cue· υποδεικνύεται από την έλλειψη ετικέτας Cue). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους μάρτυρες που δεν είχαν εκτεθεί σε σήματα και είχαν προεπεξεργαστεί με φυσιολογικό ορό (Naive Sal-No Cue και Exp Sal-No Cue). # υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την ομάδα Exp που είχε εκτεθεί σε σήματα και είχε υποβληθεί σε αγωγή με Sal (Exp Sal+Cue). Αντιπροσωπευτικές εικόνες κυττάρων pERK-IR ανά mm2 στον πυρήνα NAc αρσενικών με σεξουαλική εμπειρία με Sal ( C , D ) ή NLX ( E , F ) που είτε ελήφθησαν από το κλουβί του σπιτιού (No Cue, C, E) είτε εκτέθηκαν στα συμφραζόμενα που σχετίζονται με το ζευγάρωμα (Cue; D , F ). N = 4 σε κάθε ομάδα εκτός από το Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Πρόσθια συμβολή. Γραμμή κλίμακας, 100 μm.
Οι επιδράσεις της ναλοξόνης στην έκφραση pERK που προκαλείται από σεξουαλικά ερεθίσματα ζευγαρώματος σε άλλες περιοχές-στόχους VTA. Αριθμός κυττάρων pERK-IR ανά mm2 σε σεξουαλικά αφελή (λευκά) και έμπειρα (Exp, μαύρα) ζώα που υποβλήθηκαν σε προεπεξεργασία με συστηματικό NLX ή φυσιολογικό ορό (Sal) κατά τη διάρκεια των συνεδριών ζευγαρώματος και εκτέθηκαν στα συμφραζόμενα ερεθίσματα (Cue) ή στο κλουβί στο σπίτι (χωρίς ερεθίσματα) στα ACA ( A ), PL ( B ), IL ( C ) και BLA ( D ). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τον μέσο όρο ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους μάρτυρες που δεν είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά ερεθίσματα και είχαν προεπεξεργαστεί με φυσιολογικό ορό (Naive Sal-No Cue και Exp Sal-No Cue). # υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους μάρτυρες που είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά αφελή και είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά ερεθίσματα και είχαν υποβληθεί σε θεραπεία με Sal (Naive Sal+Cue).
Προς υποστήριξη της υπόθεσής μας, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας εξασθένησε σημαντικά την επαγωγή του pERK από τα εξαρτημένα από το φύλο ερεθίσματα. Η έκφραση του pERK σε αυτά τα αρσενικά με εμπειρία που είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά ερεθίσματα και είχαν λάβει θεραπεία με ναλοξόνη (Exp NLX+Cue) δεν διέφερε από την αρχική έκφραση του pERK σε καμία από τις ομάδες ελέγχου χωρίς σεξουαλική επαφή ή με εμπειρία που ελήφθησαν από τα οικιακά κλουβιά (Naive Sal-No Cue ή Naive NLX-No Cue). Επιπλέον, η έκφραση του pERK στα αρσενικά με εμπειρία που είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά ερεθίσματα και είχαν λάβει θεραπεία με ναλοξόνη (Exp NLX+Cue) ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε σύγκριση με τα ζώα με εμπειρία που είχαν εκτεθεί σε σεξουαλικά ερεθίσματα και είχαν λάβει θεραπεία με φυσιολογικό ορό (Exp Sal+Cue) στον πυρήνα NAc ( Εικ. 7Α , p = 0.002) και στις υποπεριοχές mPFC ( Εικ. 8Α , ACA: p < 0.001; B , PL: p = 0.002; C , IL: p = 0.015).
Στο κέλυφος NAc, η αμφίδρομη ανάλυση ANOVA δεν απέδωσε στατιστικά σημαντικές επιδράσεις των παραγόντων έκθεσης σε σήματα και θεραπείας με ναλοξόνη. Ωστόσο, μια σύγκριση ανά ζεύγη έδειξε ότι η έκθεση σε σήματα προκάλεσε pERK στην ομάδα που έλαβε φυσιολογικό ορό με σεξουαλική εμπειρία (Exp SAL+Cue) σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου που δεν είχε εκτεθεί σε σήματα και δεν είχε λάβει φυσιολογικό ορό ( Εικ. 7 Β ; Naive SAL-No Cue: p = 0.0163).
Ερωτήσεις - Συζήτηση
Η τρέχουσα μελέτη καταδεικνύει ότι η EOP που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς, μια φυσική συμπεριφορά ανταμοιβής, προκάλεσε μια ισχυρή αλλά παροδική μείωση στο μέγεθος του σώματος των ντοπαμινοκυττάρων VTA. Η μείωση στο μέγεθος του σώματος δεν παρατηρήθηκε σε μη ντοπαμινοειδείς νευρώνες VTA, ούτε σε ντοπαμινοειδείς νευρώνες στην κοντινή μέλαινα ουσία, υποδηλώνοντας ότι αυτή η αλλαγή ήταν ειδική για τα ντοπαμινοειδικά κύτταρα VTA. Αυτή η πλαστικότητα ντοπαμίνης VTA φαίνεται παρόμοια με αυτή που προκαλείται από τη χρόνια έκθεση σε οπιοειδή ( Sklair-Tavron et al., 1996 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ) και προκάλεσε παρόμοια ανοχή στην εξωγενή ανταμοιβή οπιοειδών (μορφίνη). Καταδείξαμε ότι η πλαστικότητα ντοπαμίνης VTA είναι κρίσιμη για τη μακροπρόθεσμη (συντήρηση) αλλά όχι τη βραχυπρόθεσμη (ανάπτυξη), ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και τη νευρωνική δραστηριότητα που σχετίζεται με την ανταμοιβή (pERK) στις περιοχές-στόχους VTA: NAc και mPFC. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν τον ρόλο της πλαστικότητας της ντοπαμίνης VTA στη μακροπρόθεσμη έκφραση της κινήτρου των φυσικών προγνωστικών ενδείξεων ανταμοιβής ή της μνήμης ανταμοιβής.
Έχει τεκμηριωθεί ότι η σεξουαλική εμπειρία έχει ως αποτέλεσμα τη διευκόλυνση της επακόλουθης σεξουαλικής συμπεριφοράς, συμπεριλαμβανομένης της ταχύτερης εμφάνισης της έναρξης του ζευγαρώματος και της αυξημένης απόδοσης (Balfour et αϊ., 2004; Pitchers et αϊ., 2010a,b, 2012). Αυτή η διευκόλυνση ή ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς διατηρείται τουλάχιστον για το 28 d μετά από ζευγάρωμα (Pitchers et αϊ., 2012). Επιπρόσθετα, έχει αποδειχθεί ότι η σεξουαλική συμπεριφορά και τα κλινικά συνθήματα που προάγουν την ανταμοιβή φύλου προκαλούν εσωτερίκευση του MOR στο VTA και προκαλούν νευρωνική ενεργοποίηση σε ολόκληρο το μεσολομυϊκό σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των VTA (ντοπαμίνη και νευροπαμίνη νευρώνες), NAc, PFC και BLABalfour et αϊ., 2004, 2006). Είναι καθιερωμένο ότι οι νευρώνες νταπαμίνης VTA διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη μάθηση και στην απόδοση της κληρονομιάς κινήτρων των ερεθισμάτων που σχετίζονται με ανταμοιβή (Berridge και Robinson, 1998; Berridge et αϊ., 2009; Flagel et αϊ., 2011) και είναι κρίσιμα για την πρόβλεψη ανταμοιβής (Schultz, 2010). Τα τρέχοντα ευρήματα επεκτείνονται στις τρέχουσες γνώσεις μας αποδεικνύοντας ότι η επαγόμενη από ανταμοιβή νευροπλαστικότητα VTA είναι κρίσιμη για αυτές τις λειτουργίες και εξαρτάται από την ενεργοποίηση του MOR από την EOP στο VTA. Είναι σήμερα άγνωστο ποιο EOP είναι ο συνδέτης MOR που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς των ανδρών. Αν και η β ενδορφίνη και η εγκεφαλίνη εμπλέκονται σε κίνητρα κινήτρων για ενισχυτικά τροφίμων (Hayward et αϊ., 2002), αυτό παραμένει να καθοριστεί για την ανδρική σεξουαλική συμπεριφορά. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι οι νευρώνες β-ενδορφίνης δεν ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος, ούτε υπάρχουν αυξήσεις στο POMC mRNA. υποδηλώνοντας ότι η β-ενδορφίνη μπορεί να μην είναι η κρίσιμη ΕΟΠ που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της ζευγαρώματος (Davis et αϊ., 2007). Αυτή η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA ήταν ουσιώδης για τη νευρική δραστηριότητα στα mPFC, NAc και VTA μετά την έκθεση στους περιβαλλοντικούς δείκτες για τη σεξουαλική επιβράβευση. Επιπλέον, η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA ήταν κρίσιμη για τη μακροπρόθεσμη έκφραση της αυξημένης έναρξης και της απόδοσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Αντίθετα, η νευροπλαστικότητα του VTA που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία δεν ήταν απαραίτητη για την ηδονική ανταπόκριση, καθώς η ανταμοιβή φύλου (που καθορίζεται από την CPP) και η βραχυπρόθεσμη διευκόλυνση των σεξουαλικών κινήτρων και επιδόσεων (κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας ή του 1 d αργότερα)Mehrara και Baum, 1990). Αντ 'αυτού, τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η νευροπλαστικότητα νταπαμίνης VTA μεσολαβεί στον πιο μακροπρόθεσμο (7 d μετά την τελευταία σεξουαλική εμπειρία, Pitchers et αϊ., 2012) έκφραση της "θέλησης" της σεξουαλικής επιβράβευσης και των ενισχυμένων κίνητρων απαντήσεων σε συνθέσεις ζευγαρώματος (Miller και Baum, 1987; Berridge και Robinson, 1998).
Τα σεξουαλικά έμπειρα ζώα επέδειξαν διασταυρούμενη ανοχή στην ανταμοιβή μορφίνης, παρόμοια με τις επιδράσεις του τροχού που τρέχει σε ποντίκια, μια άλλη φυσική ανταμοιβή συμπεριφορά, αποτέλεσμα που αποκλείστηκε από τη θεραπεία με ναλοξόνη (Lett et αϊ., 2001, 2002) και προσδιορίστηκε ότι εξαρτάται από την πλαστικότητα κυττάρων ντοπαμίνης VTA (τρέχον ευρήματα). Παρόμοια με τις φυσικές ανταμοιβές, η επανειλημμένη έκθεση στα οπιούχα μορφίνη ή ηρωίνη οδηγεί σε παροδική μείωση του μεγέθους της ντοπαμίνης Soma (Sklair-Tavron et αϊ., 1996; Spiga et αϊ., 2003; Russo et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Επιπλέον, η έκθεση σε οπιούχα με σύντομες περιόδους διακοπής προκαλεί ανοχή ανταμοιβής, όπως απαιτείται από τις υψηλότερες δόσεις ναρκωτικών που απαιτούνται για τη σύσταση ανταμοιβών ενώσεις (Shippenberg et αϊ., 1987; Russo et αϊ., 2007) και προκαλεί την αυτο-χορήγηση των ζώων για την κλιμάκωση της πρόσληψης φαρμάκων (Ahmed et αϊ., 2000; Walker κ.ά., 2003). Ως εκ τούτου, τα EOP και τα οπιούχα δρουν σε κοινά νευρικά υποστρώματα για να προκαλέσουν ανοχή ανταμοιβής κατά τη διάρκεια της πρόωρης απόσυρσης, η οποία μπορεί να αντανακλά έναν αντισταθμιστικό ομοιοστατικό μηχανισμό για την εξουδετέρωση της διέγερσης με επαναλαμβανόμενη έκθεση (Koob και Le Moal, 2005). Αντίθετα, κατά τη μακροχρόνια αποχή από τα ναρκωτικά με οπιοειδή, η ανοχή αντιστρέφεται σε μια ευαισθησία στις ανταμείβοντας ιδιότητες του φαρμάκου (Χάρις και Άστον-Τζόουνς, 2003; Aston-Jones και Harris, 2004; Harris και Gewirtz, 2004). Είναι ενδιαφέρον ότι η σεξουαλική εμπειρία που ακολουθείται από μια περίοδο αποχής από το σεξ του 7-28 d έχει διαπιστωθεί ότι προκαλεί διασταυρούμενη ευαισθητοποίηση για ψυχοδιεγερτική ανταμοιβή (Pitchers et αϊ., 2010a), η οποία εξαρτάται από την επαγόμενη από ζευγαρώματα έκφραση deltaFosB και την ενεργοποίηση του 1 υποδοχέα ντοπαμίνης στο ΝΑο (Pitchers et αϊ., 2013). Ως εκ τούτου, η εμπειρία σεξουαλικής ανταμοιβής προκαλεί ταυτόχρονη ανοχή ανταμοιβής οπιούχων και ευαισθητοποίηση ψυχοδιεγερτικής επιβράβευσης, αν και παραμένει να ελεγχθεί η παρατεταμένη περίοδος αποχής από σεξουαλική επαφή στην ανοχή ανταμοιβής μορφίνης. Θεωρούμε ότι αυτές οι αντίθετες επιδράσεις στην ανταμοιβή των φαρμάκων μπορεί να μεσολαβούν από διαφορετικές μορφές νευρικής πλαστικότητας στις διάφορες περιοχές του μεσολομυϊκού συστήματος: η δράση VTA EOP και η πλαστικότητα της ντοπαμίνης διαμεσολαβούν στην ανοχή ανταμοιβής οπιούχων (τρέχουσα μελέτη), ενώ η έκφραση NAc deltaFosB ελέγχει την ψυχοδιεγερτική ευαισθητοποίηση (Pitchers et αϊ., 2013). Και τα δύο αυτά συμβάντα μπορούν να συμβάλλουν στην κλιμάκωση της λήψης φαρμάκων (Ahmed και Koob, 1998, 1999; Ahmed et αϊ., 2000, 2002, 2003; Walker κ.ά., 2003).
Οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους η ΕΟΠ επηρεάζει τους νευρώνες ντοπαμίνης VTA κατά τη διάρκεια της φυσικής συμπεριφοράς ανταμοιβής παραμένουν άγνωστοι. Η οδός IRS2-Akt-mTORC2 είναι ένας σημαντικός μεσολαβητής της μείωσης του μεγέθους του σώματος στο VTA που προκαλείται από την επαναλαμβανόμενη χορήγηση μορφίνης ( Jaworski et al., 2005 ; Russo et al., 2007 ; Mazei-Robison et al., 2011 ). Οι αλλαγές στο μέγεθος των νευρώνων ντοπαμίνης στο VTA που προκαλούνται από την επαναλαμβανόμενη χορήγηση μορφίνης μπορούν να αποτραπούν με ενδο-VTA εγχύσεις εγκεφαλικού νευροτροφικού παράγοντα (BDNF; Sklair-Tavron and Nestler, 1995 ). Το BDNF ενεργοποιεί αυτήν την οδό μέσω της σηματοδότησης TrkB ( Russo et al., 2007 ), μιας κινάσης υποδοχέα με υψηλή συγγένεια για το BDNF και μέρος της οδού IRS2-Akt ( Seroogy and Gall, 1993 ; Numan and Seroogy, 1999 ), και εκφράζεται σε νευρώνες ντοπαμίνης και GABA στο VTA. Η μείωση της ρύθμισης των διαφόρων συστατικών της οδού IRS2-Akt χρησιμοποιώντας τεχνολογία μεταφοράς γονιδίων ιικού φορέα μιμείται τις επιδράσεις της χρόνιας έκθεσης σε οπιοειδή. Επιπλέον, οι επιδράσεις της έκθεσης σε οπιοειδή μπορούν να ανακτηθούν με την αποκατάσταση αυτής της οδού σηματοδότησης ( Russo et al., 2007 ) και η υπερέκφραση ενός συστατικού του mTORC2 αποτρέπει τη μείωση του σωματικού ντοπαμίνης VTA που προκαλείται από τη μορφίνη ( Mazei-Robison et al., 2011 ). Επομένως, προηγούμενη εργασία που διερεύνησε τις επιδράσεις των χρόνιων οπιοειδών στο μέγεθος του σωματικού ντοπαμίνης VTA δείχνει ότι η μείωση της οδού IRS2-Akt-mTOR που προκαλείται από τη μορφίνη είναι επαρκής και απαραίτητη για αυτό το αποτέλεσμα ( Mazei-Robison και Nestler, 2012 ). Επομένως, είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι οι επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στη νευροπλαστικότητα της ντοπαμίνης VTA προκαλούνται παρομοίως από τον BDNF και την οδό IRS2-Akt-mTORC2.
Συμπερασματικά, η τρέχουσα μελέτη κατέδειξε ότι η νευροπλαστικότητα του VTA προκαλείται από την εμπειρία με τη φυσική ανταμείβοντας συμπεριφορά, ιδίως από την επαναλαμβανόμενη αρσενική σεξουαλική συμπεριφορά. Συγκεκριμένα, η ΕΟΡ δρουν στο VTA για τη μείωση του μεγέθους της σαρκώδους ντοπαμίνης, η οποία υποτίθεται ότι σχετίζεται με αυξημένη νευρική διεγερσιμότητα και λιγότερη παραγωγή ντοπαμίνης που οδηγεί σε ένα υποδωπαμινεργικό σύστημα και μεταβάλλει τη λειτουργία του μεσολομυϊκού συστήματος σε απόκριση σε συνθήματα που προβλέπουν τη σεξουαλική ανταμοιβή. Επιπλέον, η νευροπλαστικότητα του VTA είναι κρίσιμη για το κίνητρο των κινήτρων και την ανταμοιβή της μνήμης, αλλά όχι για τις ηδονικές επιπτώσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Τέλος, η νευροπλαστικότητα του VTA που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή, ακολουθούμενη από μια σύντομη περίοδο ανταμοιβής ανταμοιβής, επηρεάζει την ανταμοιβή των οπιούχων και μπορεί συνεπώς να επηρεάσει την ευπάθεια στην ανάπτυξη της τοξικομανίας.
Υποσημειώσεις
- Λήφθηκε τον Ιανουάριο 12, 2014.
- Η αναθεώρηση έλαβε τον Μάιο 17, 2014.
- Αποδεκτό May 20, 2014.
-
Η έρευνα αυτή υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Καναδικό Ινστιτούτο Έρευνας Υγείας στο LMC και το Συμβούλιο Ερευνών Φυσικών Επιστημών και Τεχνολογίας στην KKP
-
Οι δημιουργοί ανακοίνωσαν μη ανταγωνιζόμενα οικονομικά συμφέροντα.
- Η αλληλογραφία θα πρέπει να απευθύνεται στο Δρ Lique M. Coolen, στο Πανεπιστήμιο του Μισισιπή, στο Τμήμα Φυσιολογίας και Βιοφυσικής, στο 2500 North State Street, στο Jackson, MS 39216-4505. [προστασία μέσω email]
- Copyright © 2014 οι συγγραφείς 0270-6474 / 14 / 348825-12 $ 15.00 / 0
Αναφορές
- ↵
- Agmo A
(1997) Αρσενική σεξουαλική συμπεριφορά αρουραίων. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.
- ↵
- Ahmed SH,
- Koob GF
(1998) Μετάβαση από μέτρια έως υπερβολική λήψη φαρμάκων: αλλαγή στο ηδονικό σημείο αναφοράς. Επιστήμη 282: 298-300.
- ↵
- Ahmed SH,
- Koob GF
(1999) Μακράς διάρκειας αύξηση του σημείου ρύθμισης για αυτοκατανάλωση κοκαΐνης μετά από κλιμάκωση σε αρουραίους. Ψυχοφαρμακολογία 146: 303-312.
- ↵
- Ahmed SH,
- Walker JR,
- Koob GF
(2000) Επίμονη αύξηση του κινήτρου για λήψη ηρωίνης σε αρουραίους με ιστορικό κλιμάκωσης ναρκωτικών. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.
- ↵
- Ahmed SH,
- Kenny PJ,
- Koob GF,
- Μάρκου Α
(2002) Νευροβιολογικές ενδείξεις για ηδονική αλλοστάση που σχετίζεται με κλιμάκωση της χρήσης κοκαΐνης. Nat Νευροσκι 5: 625-626.
- ↵
- Ahmed SH,
- Lin D,
- Koob GF,
- Parsons LH
(2003) Η κλιμάκωση της αυτοκατανομής της κοκαΐνης δεν εξαρτάται από τα τροποποιημένα επίπεδα κοκαΐνης που προκαλούνται από πυρήνα πυρήνα accumbens. J Neurochem 86: 102-113.
- ↵
- Aston-Jones G,
- Harris GC
(2004) Υποστρώματα εγκεφάλου για αυξημένη αναζήτηση φαρμάκων κατά τη διάρκεια παρατεταμένης απομάκρυνσης. Νευροφαρμακολογία 47: 167-179.
- ↵
- Balfour ME,
- Yu L,
- Coolen LM
(2004) Η σεξουαλική συμπεριφορά και τα περιβαλλοντικά συναισθήματα που σχετίζονται με το φύλο ενεργοποιούν το μεσολομυϊκό σύστημα σε αρσενικούς αρουραίους. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.
- ↵
- Balfour ME,
- Brown JL,
- Yu L,
- Coolen LM
(2006) Πιθανές συνεισφορές αποχωριστών από τον μεσαίο προμετωπιαίο φλοιό σε νευρική ενεργοποίηση μετά από σεξουαλική συμπεριφορά στον αρσενικό αρουραίο. Νευροεπιστήμες 137: 1259-1276.
- ↵
- Beitner-Johnson D,
- Guitart X,
- Nestler EJ
(1992) Πρωτεΐνες νευροεμφυτευμάτων και το σύστημα μεσολομυϊκής ντοπαμίνης: κοινή ρύθμιση από χρόνια μορφίνη και χρόνια κοκαΐνη στην κοιλιακή τμηματική περιοχή του αρουραίου. J Neurosci 12: 2165-2176.
- ↵
- Berridge KC,
- Robinson TE
(1998) Ποιος είναι ο ρόλος της ντοπαμίνης σε ανταμοιβή: ηδοντική επίδραση, μάθηση ανταμοιβής ή κίνητρο; Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.
- ↵
- Berridge KC,
- Robinson TE,
- Aldridge JW
(2009) Αναλύοντας τα συστατικά της ανταμοιβής: "αρέσουν", "θέλουν" και μαθαίνουν. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.
- ↵
- Blum Κ,
- Werner Τ,
- Carnes S,
- Carnes Ρ,
- Bowirrat Α,
- Giordano J,
- Oscar-Berman Μ,
- Χρυσό Μ
(2012) Το φύλο, τα ναρκωτικά και το rock 'n' roll: υποθέτοντας την κοινή μεσοσχηματική ενεργοποίηση ως συνάρτηση του πολυμορφισμού των γονιδίων επιβράβευσης. J Psychoactive Drugs 44: 38-55.
- ↵
- Chu NN,
- Zuo YF,
- Meng L,
- Lee DY,
- Han JS,
- Cui CL
(2007) Η περιφερειακή ηλεκτρική διέγερση αναστέλλει τη μείωση του μεγέθους των κυττάρων και το αυξημένο επίπεδο BDNF στην κοιλιακή περιοχή τμηματοποίησης σε χρόνιους αρουραίους που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μορφίνη. Brain Res 1182: 90-98.
- ↵
- Davis BA,
- Fitzgerald ME,
- Brown JL,
- Amstalden ΚΑ,
- Coolen LM
(2007) Ενεργοποίηση νευρώνων του POMC κατά τη διάρκεια της γενικής διέγερσης αλλά όχι της σεξουαλικής συμπεριφοράς σε αρσενικούς αρουραίους. Behav Neurosci 121: 1012-1022.
- ↵
- Fiorino DF,
- Coury A,
- Phillips AG
(1997) Δυναμικές αλλαγές στην εκροή ντοπαμίνης nucleus accumbens κατά τη διάρκεια του αποτελέσματος Coolidge σε αρσενικούς αρουραίους. J Neurosci 17: 4849-4855.
- ↵
- Flagel SB,
- Clark JJ,
- Robinson TE,
- Mayo L,
- Czuj Α,
- Willuhn I,
- Akers CA,
- Clinton SM,
- Phillips PE,
- Akil H
(2011) Ένας επιλεκτικός ρόλος για την ντοπαμίνη στην εκμάθηση ερεθισμού-ανταμοιβής. Φύση 469: 53-57.
- ↵
- Frohmader KS,
- Pitchers KK,
- Balfour ME,
- Coolen LM
(2010a) Απολαύσεις ανάμειξης: ανασκόπηση των επιπτώσεων των ναρκωτικών στη σεξουαλική συμπεριφορά στους ανθρώπους και τα ζωικά μοντέλα. Ο ορνός Behav 58: 149-162.
- ↵
- Frohmader KS,
- Wiskerke J,
- Wise RA,
- Lehman MN,
- Coolen LM
(2010b) Η μεθαμφεταμίνη δρα σε υποπληθυσμούς νευρώνων που ρυθμίζουν τη σεξουαλική συμπεριφορά σε αρσενικούς αρουραίους. Νευροεπιστήμες 166: 771-784.
- ↵
- Harris AC,
- Gewirtz JC
(2004) Αυξημένη έκπληξη κατά τη διάρκεια της απόσυρσης από την οξεία μορφίνη: ένα μοντέλο απόσυρσης και άγχους από τα οπιοειδή. Ψυχοφαρμακολογία 171: 140-147.
- ↵
- Harris GC,
- Η Aston-Jones G
(2003) Τροποποιημένο κίνητρο και εκμάθηση μετά την απόσυρση οπιοειδών: στοιχεία για παρατεταμένη δυσλειτουργία της επεξεργασίας ανταμοιβής. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.
- ↵
- Hayward MD,
- Pintar JE,
- Χαμηλή MJ
(2002) Επιλεκτικό έλλειμμα ανταμοιβής σε ποντίκια που δεν έχουν β-ενδορφίνη και εγκεφαλίνη. J Neurosci 22: 8251-8258.
- ↵
- Hoebel BG,
- Avena ΝΜ,
- Bocarsly ME,
- Rada P
(2009) Φυσικός εθισμός: ένα μοντέλο συμπεριφοράς και κυκλώματος που βασίζεται στην εξάρτηση από ζάχαρη σε αρουραίους. J Addict Med 3: 33-41.
- ↵
- Hyman SE,
- Malenka RC,
- Nestler EJ
(2006) Νευρικοί μηχανισμοί εθισμού: ο ρόλος της μάθησης και της μνήμης που σχετίζονται με τη ανταμοιβή. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.
- ↵
- Ikemoto S,
- Kohl RR,
- McBride WJ
(1997) Η παρεμπόδιση του υποδοχέα GABA (A) στην πρόσθια κοιλιακή τμηματική περιοχή αυξάνει τα εξωκυτταρικά επίπεδα ντοπαμίνης στους πυρήνες των αρουραίων. J Neurochem 69: 137-143.
- ↵
- Jaworski J,
- Spangler S,
- Seeburg DP,
- Hoogenraad CC,
- Sheng M
(2005) Έλεγχος της δενδριτικής αρθροποίησης με τον στόχο του μονοπατιού ραπαμυκίνης από φωσφοϊνοσιτίδιο-3'-κινάση-Akt-θηλαστικό. J Neurosci 25: 11300-11312.
- ↵
- Johnson SW,
- North RA
(1992) Τα οπιοειδή διεγείρουν τους νευρώνες της ντοπαμίνης μέσω της υπερπόλωσης των τοπικών interneurons. J Neurosci 12: 483-488.
- ↵
- Klitenick MA,
- DeWitte Ρ,
- Kalivas PW
(1992) Ρύθμιση της απελευθέρωσης σωματοδεντριμικής ντοπαμίνης στην κοιλιακή τμηματική περιοχή από οπιοειδή και GABA: μια in vivo μελέτη μικροδιάλυσης. J Neurosci 12: 2623-2632.
- ↵
- Koob GF,
- Le Moal M
(2005) Ο πλαστικότητα του νευροκυκλώματος ανταμοιβής και η "σκοτεινή πλευρά" του εθισμού στα ναρκωτικά. Nat Νευροσκι 8: 1442-1444.
- ↵
- Lennette DA
(1978) Ένα βελτιωμένο μέσο στήριξης για μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. Am J Clin Pathol 69: 647-648.
- ↵
- Lett BT,
- Grant VL,
- Koh MT
(2001) Η ναλοξόνη εξασθενεί την προαπαιτούμενη θέση που προτιμάται από τον τροχό που τρέχει σε αρουραίους. Physiol Behav 72: 355-358.
- ↵
- Lett BT,
- Grant VL,
- Koh MT,
- Flynn G
(2002) Η προηγούμενη εμπειρία με τη λειτουργία του τροχού προκαλεί διασταυρούμενη αντοχή στην ανταμείβοντας δράση της μορφίνης. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.
- ↵
- Matthews RT,
- Γερμανική DC
(1984) Ηλεκτροφυσιολογικά στοιχεία για διέγερση νευρώνων ντοπαμίνης στην κοιλιακή περιοχή του νωτιαίου μυελού αρουραίων από μορφίνη. Νευροεπιστήμες 11: 617-625.
- ↵
- Mazei-Robison MS,
- Koo JW,
- Friedman AK,
- Lansink CS,
- Robison AJ,
- Vinish Μ,
- Krishnan V,
- Kim S,
- Siuta MA,
- Galli A,
- Niswender KD,
- Appasani R,
- Horvath MC,
- Neve RL,
- Worley PF,
- Snyder SH,
- Hurd YL,
- Cheer JF,
- Han MH,
- Russo SJ,
- et αϊ.
(2011) Ρόλος για σηματοδότηση mTOR και νευρωνική δραστηριότητα σε επαγόμενες από μορφίνη προσαρμογές σε κοιλιακούς νευρώνες ντοπαμίνης κοιλιακής περιοχής. Νευρώνας 72: 977-990.
- ↵
- Mazei-Robison MS,
- Nestler EJ
(2012) Επαγόμενη από οπιοειδή μοριακή και κυτταρική πλαστικότητα της κοιλιακής τεκτονικής περιοχής και των νευρώνων της κατεχολαμίνης coeruleus locus. Κρύα άνοιξη Harb Perspect Med 2: a012070.
- ↵
- Mehrara BJ,
- Baum MJ
(1990) Η ναλοξόνη διαταράσσει την έκφραση αλλά όχι την απόκτηση από αρσενικούς αρουραίους μιας κλινικής ανταπόκρισης απόκρισης θέσης για ένα θηλυκό θηλυκό. Ψυχοφαρμακολογία 101: 118-125.
- ↵
- Meisel RL,
- Mullins AJ
(2006) Σεξουαλική εμπειρία σε θηλυκά τρωκτικά: κυτταρικοί μηχανισμοί και λειτουργικές συνέπειες. Brain Res 1126: 56-65.
- ↵
- Miller RL,
- Baum MJ
(1987) Η ναλοξόνη αναστέλλει τη ζευγαρωμένη και κλινική προτίμηση του θηλυκού οισοφάγου σε αρσενικούς αρουραίους αμέσως μετά τον ευνουχισμό. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.
- ↵
- Mitchell JB,
- Stewart J
(1990) Διευκόλυνση των σεξουαλικών συμπεριφορών στον αρσενικό αρουραίο που σχετίζεται με ενδοφλέβιες ενέσεις οινοπνεύματος. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.
- ↵
- Murphy LO,
- Blenis J
(2006) Ειδικότητα σήματος MAPK: η σωστή θέση στην κατάλληλη στιγμή. Trends Biochem Sci 31: 268-275.
- ↵
- Nestler EJ
(2012) Μεταγραφικοί μηχανισμοί εθισμού στα ναρκωτικά. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.
- ↵
CrossRefMedlineGoogle Scholar
- Paxinos G,
- Watson C
(2013) Ο εγκέφαλος αρουραίου σε στερεοταξικές συντεταγμένες (Academic, Boston), Ed 7.
- Pitchers KK,
- Balfour ME,
- Lehman MN,
- Richtand ΝΜ,
- Yu L,
- Coolen LM
(2010a) Νευροπλαστικότητα στο μεσολομυϊκό σύστημα που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή και την επακόλουθη απολαβή ανταμοιβής. Biol Ψυχιατρική 67: 872-879.
- Pitchers KK,
- Frohmader KS,
- Vialou V,
- Mouzon Ε,
- Nestler EJ,
- Lehman MN,
- Coolen LM
(2010b) Το DeltaFosB στον πυρήνα accumbens είναι κρίσιμο για την ενίσχυση των αποτελεσμάτων της σεξουαλικής ανταμοιβής. Genes Brain Behav 9: 831-840.
- Pitchers KK,
- Schmid S,
- Di Sebastiano AR,
- Wang X,
- Laviolette SR,
- Lehman MN,
- Coolen LM
(2012) Η εμπειρία της φυσικής ανταμοιβής μεταβάλλει την κατανομή και λειτουργία των υποδοχέων AMPA και NMDA στον πυρήνα accumbens. PLoS One 7: e34700.
- Pitchers KK,
- Vialou V,
- Nestler EJ,
- Laviolette SR,
- Lehman MN,
- Coolen LM
(2013) Οι φυσικές ανταμοιβές και τα ναρκωτικά δρουν στους κοινούς μηχανισμούς νευρικής πλαστικότητας με το DeltaFosB ως βασικό μεσολαβητή. J Neurosci 33: 3434-3442.
- Roux PP,
- Blenis J
(2004) ERK και p38 MAPK ενεργοποιημένες πρωτεϊνικές κινάσες: οικογένεια πρωτεϊνικών κινασών με ποικίλες βιολογικές λειτουργίες. Microbiol ΜοΙ ΒίοΙ Rev 68: 320-344.
- Russo SJ,
- Bolanos CA,
- Theobald DE,
- DeCarolis NA,
- Renthal W,
- Kumar Α,
- Winstanley CA,
- Renthal NE,
- Wiley MD,
- Αυτο DW,
- Russell DS,
- Neve RL,
- Eisch AJ,
- Nestler EJ
(2007) Η οδός IRS2-Akt στους νευρώνες ντοπαμίνης του μεσεγκεφάλου ρυθμίζει τις συμπεριφορικές και κυτταρικές αποκρίσεις στα οπιούχα. Nat Νευροσκι 10: 93-99.
- Schultz W
(2010) Πολλαπλές λειτουργίες νευρώνων ντοπαμίνης. F1000 Biol Rep 2: 2.
- Seroogy KB,
- Gall CM
(1993) Έκφραση νευροτροφινών από ντοπαμινεργικούς νευρώνες μεσαίου εγκεφάλου. Exp Neurol 124: 119-128.
- Shippenberg TS,
- Bals-Kubik R,
- Herz A
(1987) Οι κινητικές ιδιότητες των οπιοειδών: απόδειξη ότι η ενεργοποίηση των δέλτα-υποδοχέων διαμεσολαβεί τις διαδικασίες ενίσχυσης. Brain Res 436: 234-239.
- Sklair-Tavron L,
- Nestler EJ
(1995) Αντίθετα αποτελέσματα της μορφίνης και των νευροτροφινών, NT-3, NT-4 και BDNF, στους νευρώνες του νευρικού συστήματος locus in vitro. Brain Res 702: 117-125.
- Sklair-Tavron L,
- Shi WX,
- Lane SB,
- Harris HW,
- Bunney BS,
- Nestler EJ
(1996) Η χρόνια μορφίνη επάγει ορατές μεταβολές στη μορφολογία των μεσολανδικών νευρώνων ντοπαμίνης. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.
- Spiga S,
- Serra GP,
- Puddu MC,
- Foddai Μ,
- Diana M
(2003) Ανωμαλίες που προκλήθηκαν από την απόσυρση της μορφίνης στη μικροσκοπία σάρωσης με λέιζερ VTA: ομοεστιακή σάρωση. Eur J Neurosci 17: 605-612.
- Swanson LW
(2004) Χάρτες εγκεφάλου: δομή του εγκεφάλου αρουραίου (Academic, San Diego), Ed 3.
- Tenk CM,
- Wilson Η,
- Zhang Q,
- Pitchers KK,
- Coolen LM
(2009) Σεξουαλική ανταμοιβή σε αρσενικούς αρουραίους: επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στις προτιμώμενες τοποθετήσεις που σχετίζονται με την εκσπερμάτιση και τις εισβολές. Ο ορνός Behav 55: 93-97.
- Tzschentke TM
(2007) Ανταπόκριση μέτρησης με το πρότυπο προτιμώμενης θέσης προτίμησης (CPP): ενημέρωση της τελευταίας δεκαετίας. Addict ΒίοΙ 12: 227-462.
- van Furth WR,
- van Ree JM
(1996) Σεξουαλικό κίνητρο: εμπλοκή των ενδογενών οπιοειδών στην κοιλιακή περιοχή τρυπήματος. Brain Res 729: 20-28.
- van Furth WR,
- Wolterink G,
- van Ree JM
(1995) Ρύθμιση αρσενικής σεξουαλικής συμπεριφοράς: εμπλοκή εγκεφαλικών οπιοειδών και ντοπαμίνης. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.
- Walker JR,
- Chen SA,
- Moffitt Η,
- Inturrisi CE,
- Koob GF
(2003) Η έκθεση σε χρόνια οπιοειδή προκαλεί αυξημένη αυτο-χορήγηση ηρωίνης σε αρουραίους. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.
- Young KA,
- Gobrogge KL,
- Liu Y,
- Wang Z
(2011) Η νευροβιολογία της δέσμευσης ζευγαριών: πληροφορίες από ένα κοινωνικά μονογαμικό τρωκτικό. Μπροστινή νευροενδοκρινόλη 32: 53-69.