Η ενδογενής νευροπλαστικότητα που προκαλείται από οπιοειδή των ντοπαμινεργικών νευρώνων στην κοιλιακή περιοχή τμημάτων επηρεάζει τη φυσική και την ανταμοιβή των οπιούχων (2014)

ΣΧΟΛΙΑ: The Μελέτες DeltaFosB συχνά αναφέρουμε όλους εστιάζοντας το πυρήνα accumbens (κέντρο ανταμοιβής), και διαπίστωσε ότι το σεξ ταξιδεύει σχεδόν τους ίδιους μηχανισμούς του εγκεφάλου με τη μεθ & κοκαΐνη. Από τη μελέτη ορόσημο αυτού του ίδιου ερευνητή (Φυσική πράξη και νόμος περί ανταμοιβής φαρμάκων για κοινούς μηχανισμούς πλαστικής νευρικής λειτουργίας με ΔFosB ως βασικό μεσολαβητή (2013)):

Έτσι, οι φυσικές ανταμοιβές και τα ναρκωτικά όχι μόνο συγκλίνουν στην ίδια νευρική οδό, αλλά συγκλίνουν στους ίδιους μοριακούς μεσολαβητές, και πιθανότατα στους ίδιους νευρώνες στο Nucleus Accumbens, για να επηρεάσουν το κίνητρο και την «επιθυμία» και των δύο τύπων ανταμοιβών

Η απόσυρση: το μεθ, η κοκαΐνη και το σεξ κάνουν όλα τα ίδια θεμελιώδη πράγματα με τα ίδια νευρικά κύτταρα στο κέντρο ανταμοιβής (nucleus accumbens), ανεξάρτητα από το αν μπορούν να κάνουν διαφορετικά αλλού στον εγκέφαλο. Αυτό αποσυναρμολόγησε το συνηθισμένο σημείο συζήτησης ότι τα φυσικά οφέλη και τα φάρμακα διαφέρουν σε μηχανισμούς και αποτελέσματα.

Αυτή η νέα μελέτη εξέτασε τι κάνει το σεξ στο VTA. Το VTA είναι το σημείο όπου ξεκινούν τα νευρικά κύτταρα που παράγουν ντοπαμίνη - και διακλαδίζονται στον πυρήνα, στον μετωπιαίο φλοιό και στην αμυγδαλή. Βασικά το VTA είναι η πηγή (πηγάδι) των περισσότερων ντοπαμίνης. Δείτε αυτές τις 2 φωτογραφίες του κυκλώματος ανταμοιβής: Pic1, Pic2

Οι ερευνητές διαπίστωσαν ότι το φύλο (κορύφωση) προκαλεί τη συρρίκνωση των κυτταρικών σωμάτων του VTA προσωρινά (σε άνδρες). Κύτταρα κυττάρων και τους δενδρίτες τους περιλαμβάνουν τη γκρίζα ύλη του εγκεφάλου. Αυτό ακριβώς κάνει ο εθισμός της ηρωίνης στο VTA (όχι μια φορά χρήση ηρωίνης, αλλά χρόνια χρήση ηρωίνης). Σημειώστε ότι αυτή η ίδια συρρίκνωση των κυττάρων κυττάρων VTA εμφανίζεται σε εθισμένους με ηρωίνη ανθρώπους.

Η συρρίκνωση κυττάρων που προκαλείται από το φύλο διαρκεί για τουλάχιστον 7 ημέρες. Οι αλλαγές που προκλήθηκαν από το φύλο είχαν επιστρέψει στο φυσιολογικό στις 30 ημέρες, αλλά οι ερευνητές αξιολόγησαν μόνο τις ημέρες 1, 7 και 30.

Η συρρίκνωση των κυτταρικών σωμάτων στον εθισμό της ηρωίνης έχει ως αποτέλεσμα χαμηλότερη ντοπαμίνη στον πυρήνα - ή αυτό που ονομάζουμε απευαισθητοποίηση. Οι ερευνητές έδωσαν μορφίνη στους αρουραίους για να εκτιμήσουν την απόκρισή τους (μετά το σεξ), αλλά τίποτα δεν συνέβη. Συνήθως οι αρουραίοι αρέσουν πολύ στη μορφίνη, αλλά εδώ ήταν προσωρινά απευαισθητοποιημένοι. Εν ολίγοις, το κύκλωμα ανταμοιβής των αρουραίων μετά την εκσπερμάτιση δεν ανταποκρίνεται στο χαμηλό επίπεδο ηρωίνης. Οι ερευνητές υπολόγισαν ότι θα χρειαζόταν υψηλότερες δόσεις για να προκαλέσουν μια «φυσιολογική» αντίδραση αρουραίου.

Συνοψίζοντας - το σεξ (προσωρινά) κάνει ακριβώς το ίδιο πράγμα στο VTA όπως και ο εθισμός στην ηρωίνη: συρρίκνωση των νευρικών κυττάρων που παράγουν ντοπαμίνη. Αυτό οδηγεί σε χαμηλότερη ντοπαμίνη στο κέντρο ανταμοιβής και λιγότερη ανταπόκριση στα ναρκωτικά - και χρειάζονται τουλάχιστον 7 ημέρες για να ανακάμψουν οι εγκέφαλοι αρουραίων.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Κανάτες KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Περίληψη

Η φυσική ανταμοιβή και τα ναρκωτικά της κατάχρησης συγκλίνουν στο μονολιθικό μονοπάτι και ενεργοποιούν τον κοινό μηχανισμό νευρικής πλαστικότητας στον πυρήνα του πυρήνα. Η χρόνια έκθεση σε οπιούχα προκαλεί πλαστικότητα στους ντοπαμινεργικούς νευρώνες της κοιλιακής τμηματικής περιοχής (VTA), που ρυθμίζει την ανοχή ανταμοιβής μορφίνης.

Εδώ δοκιμάζουμε τις υποθέσεις ότι η προκαλούμενη από ζευγάρωμα απελευθέρωση ενδογενών οπιοειδών στο VTA προκαλεί μορφολογικές μεταβολές των ντοπαμινικών κυττάρων VTA σε αρσενικούς αρουραίους, οι οποίοι με τη σειρά τους ρυθμίζουν τη μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την εμπειρία ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς.

Κατ 'αρχάς, η σεξουαλική εμπειρία μείωσε το μέγεθος ντοπαμίνης VTA μεγέθους 1 και 7 ημερών, αλλά όχι τις 30 ημέρες μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος. Αυτή η επίδραση εμποδίστηκε με τη ναλοξόνη πριν από κάθε σύνοδο ζευγαρώματος. Έτσι, η πλαστικότητα κυττάρων ντοπαμίνης VTA εξαρτάται από τη δράση ενδογενών οπιοειδών.

Με τη σειρά του, η πλαστικότητα του VTA συσχετίστηκε με μεταβαλλόμενη ανταμοιβή οπιούχων, καθώς τα σεξουαλικά έμπειρα αρσενικά δεν σχημάτισαν την προτιμώμενη θέση για το 0.5 mg / kg μορφίνης.

Στη συνέχεια, προσδιορίστηκε κατά πόσον η ενδογενής δράση οπιοειδών προκαλεί σεξουαλική ανταμοιβή και μνήμη σε αρσενικούς αρουραίους που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ναλοξόνη κατά την εμπειρία ζευγαρώματος, είτε συστηματικά είτε ενδο-VTA. Η ναλοξόνη δεν εμπόδισε την αρχική εμπειρία που προκάλεσε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια επανειλημμένων συνόδων ζευγαρώματος, ή την προϋπόθεση για την κατάλληλη θέση για το ζευγάρωμα. Ωστόσο, η θεραπεία με ναλοξόνη εξασθένησε την μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς και της νευρικής ενεργοποίησης σε μεσοεπιβραδικές περιοχές που προκλήθηκαν από κλινικά συναισθήματα που σχετίζονται με ζευγαρώματα.

Μαζί, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι τα ενδογενή οπιοειδή κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος προκαλούν νευρική πλαστικότητα στους ΝΤΑ ντοπαμινικούς νευρώνες που φαίνονται κρίσιμοι για την ανταμοιβή της μορφίνης και τη μακροπρόθεσμη μνήμη για τη φυσική ανταμοιβή.

 

Εισαγωγή

Οι φυσικές συμπεριφορές ανταμοιβής μεσολαβούν από το μεσοκορτικολυμβικό σύστημα (Meisel και Mullins, 2006; Hoebel et αϊ., 2009; Frohmader et αϊ., 2010a; Pitchers et αϊ., 2010a; Young et αϊ., 2011; Blum et αϊ., 2012). Τα ναρκωτικά της κατάχρησης προκαλούν νευρικές αλλοιώσεις στο σύστημα αυτό, οι οποίες με τη σειρά τους συμβάλλουν στην ανάπτυξη και στην έκφραση της κατάχρησης ουσιών (Hyman et αϊ., 2006; Nestler, 2012). Προηγουμένως διαπιστώσαμε ότι η εμπειρία με τη φυσική ανταμοιβή συμπεριφορά, δηλαδή η σεξουαλική εμπειρία σε αρσενικούς αρουραίους, προκαλεί επίσης νευρική πλαστικότητα στον πυρήνα accumbens (NAc), συμπεριλαμβανομένης της αύξησης των δενδριτικών αγκώνων (Pitchers et αϊ., 2010a) και deltaFosB (Pitchers et αϊ., 2013). Εν τω μεταξύ, αυτή η πλαστικότητα που προκαλείται από το φύλο είναι κρίσιμη για τις συνέπειες της σεξουαλικής εμπειρίας στο επακόλουθο ζευγάρωμα, που εκδηλώνεται ως διευκόλυνση της έναρξης και της εκτέλεσης της σεξουαλικής συμπεριφοράςPitchers et αϊ., 2010b, 2012, 2013). Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία μεταβάλλει την ανταπόκριση στα ψυχοδιεγερτικά, συμπεριλαμβανομένης της ευαισθητοποίησης της κινητικής δραστηριότητας και της ενισχυμένης ανταμοιβής (Frohmader et αϊ., 2010a; Pitchers et αϊ., 2010a, 2013).

Το ΝΑο είναι ένας κατάντη στόχος των ντοπαμινεργικών νευρώνων στην κοιλιακή περιοχή τρυπήματος (VTA). Οι ντοπαμινικοί νευρώνες VTA ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος και μετά την έκθεση σε κλινικά υποδηματοποιημένα πρότυπα σεξουαλικής ανταμοιβής (Balfour et αϊ., 2004; Frohmader et αϊ., 2010a), μέσω ενδογενούς πεπτιδίου οπιοειδούς (ΕΟΡ) -σύνδεσης σε μ-οπιοειδείς υποδοχείς (MORs, Matthews και Γερμανικά, 1984; Johnson και Βόρεια, 1992; Klitenick et αϊ., 1992; Ikemoto et αϊ., 1997; Balfour et αϊ., 2004). Ως εκ τούτου, η έκθεση σε κλινικά υποδείγματα που προδίδουν σεξουαλική συμπεριφορά προκαλεί απελευθέρωση ενεργοποίησης κυττάρων ντοπαμίνης EOP και VTA, γεγονός που διευκολύνει τη σεξουαλική κίνητρο (Mitchell και Stewart, 1990; van Furth et αϊ., 1995; van Furth και van Ree, 1996) και απελευθέρωση ντοπαμίνης στο ΝΑο (Fiorino et αϊ., 1997).

Η επαναλαμβανόμενη έκθεση σε εξωγενή οπιούχα προκαλεί μορφολογικές αλλαγές στο VTA (Mazei-Robison et αϊ., 2011; Mazei-Robison και Nestler, 2012), μειωμένο μέγεθος soma των ΝΤ ντοπαμινικών νευρώνων (Sklair-Tavron et αϊ., 1996; Spiga et αϊ., 2003; Chu et αϊ., 2007; Russo et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011), μειωμένα επίπεδα νευροϊνών πρωτεϊνών (Beitner-Johnson et αϊ., 1992), αυξημένη διέγερση των κυττάρων ντοπαμίνης και μειωμένη αμοπλασματική μεταφορά και παραγωγή ντοπαμίνης στο ΝΑο (Beitner-Johnson et αϊ., 1992; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Αυτές οι αλλαγές VTA ντοπαμινικών νευρώνων προκαλούν ανοχή ανταμοιβής μορφίνης και είναι μεταβατικές καθώς διαχέονται μέσα σε ένα μήνα από αποχή από το φάρμακο (Russo et αϊ., 2007). Επί του παρόντος δεν είναι σαφές εάν η πλαστικότητα στους νευρώνες ντοπαμίνης VTA είναι μοναδική για τις δράσεις των οπιούχων ή αν παράγονται επίσης από την απελευθέρωση του EOP κατά τη διάρκεια φυσιολογικής ανταμοιβής συμπεριφορών.

Εδώ δοκιμάζουμε την υπόθεση ότι η φυσική εμπειρία ανταμοιβής προκαλεί νευροπλαστικότητα παρόμοια με εκείνη που προκαλείται από τα οπιούχα και έτσι τα οπιούχα συγκλίνουν σε έναν μηχανισμό πλαστικότητας ο οποίος είναι κρίσιμος για τη φυσική ανταμοιβή και την ανταμοιβή της μνήμης. Ελέγχουμε αν η σεξουαλική εμπειρία σε αρσενικούς αρουραίους μειώνει το μέγεθος soma των ντοπαμινικών νευρώνων VTA μέσω μιας διαδικασίας που εξαρτάται από τη δράση EOP στο VTA. Επιπλέον, διερευνάμε αν οι επαγόμενες από την ΕΟΡ αλλοίωση των ντοπαμινικών νευρώνων VTA συνδέονται με την ενίσχυση της φυσικής ανταμείβουσας συμπεριφοράς και την απόδοση της κληρονομιάς κινήτρου σε συναισθήματα που σχετίζονται με τη φυσική ανταμοιβή, ενώ προκαλούν διασταυρούμενη ανοχή στην ανταμοιβή μορφίνης.

Υλικά και Μέθοδοι

Animal

Ενήλικες αρσενικοί αρουραίοι Sprague-Dawley (200-225 g) ελήφθησαν από τον Charles River και στεγάστηκαν σε ζεύγη σε τεχνητά φωτισμένους χώρους σε έναν κύκλο 12 h φωτός / σκότους σε όλα τα πειράματα (τα φώτα σβήνουν στο 10: 00 AM εκτός από το πείραμα αντοχής στη μορφίνη , ανάβει στο 5: 00 PM). Τα τρόφιμα και το νερό ήταν διαθέσιμα ad libitum εκτός από τις δοκιμές συμπεριφοράς. Τα θηλυκά διεγέρσεως υποβλήθηκαν σε ωοθηκεκτομή και εμφυτεύθηκαν υποδόρια με κάψουλες βενζυλίου 5% 17-β-οιστραδιόλης SILASTIC (εσωτερική διάμετρος 1.98 mm, μήκος 0.5 cm, Dow-Corning). Εγχύσεις προγεστερόνης (υποδόρια, 500 μg σε 0.1 ml σησαμέλαιο) χορηγήθηκαν 3-6 h πριν από τη δοκιμασία για την πρόκληση σεξουαλικής δεκτικότητας. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από το Πανεπιστήμιο του Western Ontario και τις επιτροπές φροντίδας των ζώων του Πανεπιστημίου του Μίτσιγκαν και συμμορφώθηκαν με τις κατευθυντήριες γραμμές του Καναδικού Συμβουλίου για την Φροντίδα των Ζώων και των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας που περιλαμβάνουν σπονδυλωτά ζώα στην έρευνα.

Η χρονική πορεία των μεταβολών του μεγέθους της ντοπαμίνης Soma μεγέθους

Καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος.

Για να μελετηθεί η χρονική πορεία των μεταβολών στο μέγεθος ντοπαμινικού νεύρου στο VTA, τα σεξουαλικά πεπειραμένα και αφελή ζώα θανατώθηκαν σε 1, 7 ή 31 d (n = 5-8 ανά ομάδα) μετά την τελευταία ημέρα του ζευγαρώματος (έμπειρου) ή του χειρισμού (αθώος). Οι σεξουαλικά έμπειρες ομάδες συμφωνήθηκαν για τη σεξουαλική συμπεριφορά κατά τη διάρκεια της τελικής συνόδου ζευγαρώματος, καθώς και ο συνολικός αριθμός εκσπερμάτιων κατά τη διάρκεια των πέντε συνεδριών (μέσος όρος 5 για κάθε ομάδα) και δεν διέφεραν σε καμία παράμετρο σεξουαλικής συμπεριφοράς.

Συνεδρίες ζευγαρώματος.

Τα σεξουαλικά αφελείς αρσενικά ανατέθηκαν σε δύο από τις δύο πειραματικές συνθήκες: σεξουαλικά αφελείς ή σεξουαλικά έμπειρους. Τα σεξουαλικά πεπειραμένα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν πέντε φορές σε διαδοχικές ημέρες με θηλυκά δεκτά σε ορθογώνια κλουβιά δοκιμών (60 × 45 × 50 cm) μέχρι την εμφάνιση εκσπερμάτωσης ή έως το 1 h (όποιο και αν ήρθε πρώτο). Οι κλωβοί καθαρίστηκαν λεπτομερώς με διάλυμα αιθανόλης 70% και προστέθηκαν φρέσκα στρώματα μεταξύ περιόδων ζευγαρώματος. Η σεξουαλική συμπεριφορά εκτελέστηκε κατά τη διάρκεια της σκοτεινής φάσης (2-6 h μετά την έναρξη του σκοτάδι). Μόνο ζώα που εκσπερματίστηκαν κατά τη διάρκεια τουλάχιστον τεσσάρων από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος θεωρήθηκαν σεξουαλικά και περιλήφθηκαν σε πειράματα. Όλες οι συνεδρίες ζευγαρώματος παρατηρήθηκαν και καταγράφηκε η σεξουαλική συμπεριφορά. Ο αριθμός των intromissions των mounts (M), η λανθάνουσα κατάσταση (ML, ο χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού στην πρώτη), η λανθάνουσα δόση (IL, χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού στην πρώτη εισαγωγή) και η λανθάνουσα κατάσταση εκσπερμάτωσης (EL; από την πρώτη εισαγωγή σε εκσπερμάτιση) καταγράφηκαν (Agmo, 1997). Τα αδέσποτα ζώα τοποθετήθηκαν σε ένα καθαρό κλουβί για το 1 h ταυτόχρονα με αρσενικά σεξουαλικά έμπειρα αρσενικά που ζευγαρώνονταν στον ίδιο χώρο, έτσι ώστε να εκτίθενται σε απομακρυσμένες γυναικείες μυρωδιές και παρόμοια επίπεδα διαταραχής και περιβαλλοντικής καινοτομίας όπως τα έμπειρα αρσενικά.

Απεικόνιση ανοσοφθορισμού.

Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν βαθιά χρησιμοποιώντας πεντοβαρβιτάλη νατρίου (270 mg / kg, ip) και διαχύθηκαν ενδοκαρδιακά με 50 ml ρυθμιστικού διαλύματος 0.9%, ακολουθούμενα από 500 ml 4% παραφορμαλδεΰδης σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού νατρίου 0.1 m (PB). Οι εγκέφαλοι απομακρύνθηκαν και τοποθετήθηκαν για 1 h σε θερμοκρασία δωματίου (RT) στο ίδιο σταθεροποιητικό μέσο και στη συνέχεια βυθίστηκαν σε 20% σακχαρόζη και 0.01% αζίδιο του νατρίου σε 0.1 m PB για αποθήκευση στους 4 ° C. Οι κοραλικές τομές κόπηκαν σε 35 μm σε ένα μικροτόμο ψύξης (H400R, Microm) και συλλέχθηκαν σε τέσσερις παράλληλες σειρές σε διάλυμα κρυοπροστατευτικού (30% σακχαρόζη, 30% αιθυλενογλυκόλη σε 0.1 m PB) και στη συνέχεια αποθηκεύτηκαν στους 20 ° C. Όλες οι επωάσεις πραγματοποιήθηκαν σε RT με ήπια ανάδευση και άφθονες εκπλύσεις με 0.1 m PBS, ρΗ 7.35, μεταξύ επωάσεων. Οι τομές εκτέθηκαν σε 1% Η2O2 για 10 min για να καταστρέψουν τις ενδογενείς υπεροξειδάσες, στη συνέχεια μπλοκαρίστηκαν για 1 h σε διάλυμα επώασης (PBS +: PBS που περιέχει 0.4% Triton X-100, Sigma-Aldrich) και 0.1% αλβουμίνη βόειου ορού (Jackson Immuno Research Laboratories). Ακολούθως, τα τμήματα επωάστηκαν όλη τη νύκτα σε RT σε αντιγόνο τυροσίνης υδροξυλάσης (ΤΗ) ποντικού (1: 20 000; Millipore). Μετά την επώαση πρωτεύοντος αντισώματος, οι τομές επωάστηκαν σε αντίσωμα κατσίκας αντι-ποντικού συζευγμένο με AlexaFluor 555 (1: 100, Invitrogen, Eugene, OR) για 30 min. Τέλος, οι τομές πλύθηκαν με 0.1 m ΡΒ, τοποθετήθηκαν σε υαλοπίνακες Superfrost Plus, ξηράνθηκαν και καλύφθηκαν με gelvatol που περιέχει τον παράγοντα κατά του ξεθώριασμα 1,4-διαζαδικυκλο (2,2) οκτάνιο (DABCO, 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Ανάλυση δεδομένων: μέγεθος νευρώνων soma.

Εικόνες των ΝΤ-ανοσοαντιδραστικών (IR) νευρώνων στο VTA ελήφθησαν σε μεγέθυνση 40 × σε τρία επίπεδα στο ουραίο έως ουραίο (Balfour et αϊ., 2004). Δεν εντοπίστηκαν διαφορές μεταξύ των κυττάρων στα διαφορετικά επίπεδα. Το μέγεθος soma των νευρώνων TH-IR αναλύθηκε χρησιμοποιώντας ImageJ (Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας). Η μέση περιοχή, η περίμετρος και η κυκλικότητα μετρήθηκαν όπως περιγράφεται από το Sklair-Tavron et αϊ. (1996). Καταμετρήθηκε ένας μέσος όρος κυττάρων 25 ανά ζώο (συνδυασμένα όλα τα επίπεδα 3 VTA) και συμπεριλήφθηκαν μόνο κύτταρα με έναν εμφανή πυρήνα. Για κάθε ζώο υπολογίστηκε η μέση έκταση, η περίμετρος και η κυκλικότητα. Για τη στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε μια αμφίδρομη ANOVA [παράγοντες: σεξουαλική εμπειρία (σεξουαλική εμπειρία ή σεξουαλική επαφή) και χρόνος (1, 7 ή 31d)] που ακολουθείται από post hoc συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Holm-Sidak με επίπεδο σημαντικότητας 0.05.

Οι αλλαγές στη ντοπαμίνη του VTA

Διαδοχικές συνεδρίες ζευγαρώματος.

Για να εξεταστεί εάν απαιτείται σεξουαλική εμπειρία κατά τη διάρκεια ημερήσιων συνεδριών ζευγαρώματος για μειώσεις του μεγέθους του νευρώνα του TH-IR, αναλύθηκαν νευρώνες νταπαμίνης VTA ζώων που είχαν ζευγαρώσει κατά τη διάρκεια πέντε συνόδων ζευγαρώματος διάρκειας δύο εβδομάδων. Οι συνεδρίες ζευγαρώματος ήταν όπως περιγράφηκαν παραπάνω, αλλά σε μια περίοδο 2.5 εβδομάδων. Οι εγκέφαλοι συλλέχθηκαν το 7 d μετά από τελευταίο ζευγάρωμα ή χειρισμό.

Ετικέτα ανοσοϋπεροξειδάσης.

Επιπροσθέτως, εξετάστηκε εάν η χρήση ευαίσθητων τεχνικών χρώσης με ανίχνευση ανοσοϋπεροξειδάσης και χρωμογόνου, θα επέτρεπε επίσης την απεικόνιση των μεταβολών μεγέθους soma του TH-IR. Η διάχυση και η επεξεργασία των ιστών ήταν συμπεριφορά όπως περιγράφεται παραπάνω. Μετά τη θεραπεία με 1% H2O2 και PBS +, τα τμήματα επωάστηκαν όλη τη νύκτα σε RT σε ένα πολυκλωνικό αντι-στέλεχος υδροξυλάσης τυροσίνης ποντικού (1: 20 000; Millipore). Μετά την επώαση πρωτεύοντος αντισώματος, τα τμήματα επωάσθηκαν με IgG αιγός αντι-κουνελιού συζευγμένο με βιοτίνη (1 h, 1: 500 σε PBS +, Vector Laboratories), υπεροξειδάση αγριδίνης-βιοτίνης-ραπανίδας (1 h, ABC ellite 1: 1 000 σε PBS (3,3%, DAB, Sigma-Aldrich) ενισχυμένο με θειικό νικέλιο σε (10% σε 0.02 m PB) με υπεροξείδιο του υδρογόνου (0.02%). Οι τομές πλύθηκαν διεξοδικά σε 0.1 m PB για τερματισμό της αντίδρασης και τοποθετήθηκαν σε κωδικοποιημένες γυάλινες πλάκες Superfrost plus (Fisher) με ζελατίνη 0.015% σε ddH2Ο. Μετά την αφυδάτωση, όλες οι πλάκες καλύφθηκαν με επικάλυψη με DPX (φθαλικό διβουτύλιο ξυλόλιο, Sigma-Aldrich).

Ανάλυση δεδομένων: μέγεθος νευρώνων soma.

Τα κύτταρα TH-IR αναλύθηκαν για περιοχή, περίμετρο και κυκλικότητα όπως περιγράφεται παραπάνω. Επιπροσθέτως, αναλύθηκαν τα κύτταρα TH-IR σε ουσιαστικά nigra (SN), στα ίδια τμήματα που χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση των κυττάρων VTA TH-IR. Τελικά, μετά από ανάλυση των κυττάρων VTA και SN TH-IR, οι τομές χρωματίστηκαν με χρήση βιολετί κρεσυλίου και τα κύτταρα μη-ΤΗ-IR αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας τις ίδιες μεθόδους όπως περιγράφηκε παραπάνω. Οι διαφορές μεταξύ αφελών και έμπειρων ομάδων συγκρίθηκαν με τη χρήση φοιτητών δύο ουρών t δοκιμές με επίπεδο σημαντικότητας 0.05.

Επιδράσεις της ναλοξόνης στη μείωση της έκτασης της ντοπαμίνης που προκαλείται από την εμπειρία

Για να προσδιοριστεί κατά πόσον τα MOR παίζουν ρόλο στις μεταβολές που προκαλούνται από εμπειρίες σεξουαλικής επαφής στο μέγεθος ντοπαμινικού νεύρου, το MOR μπλοκάρεται κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Τα μισά από τα ζώα απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία, ενώ το άλλο μισό χειρίστηκε αλλά παρέμεινε σεξουαλικά αφελής. Τα σεξουαλικά πεπειραμένα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν σε διαδοχικές ημέρες 5. Μέσα στις σεξουαλικά δοκιμασμένες και αθώες ομάδες, τα ζώα υποβλήθηκαν σε αγωγή με τη μη-εκλεκτική ανταγωνιστή MOR ναλοξόνη (10 mg / kg, sc, Sigma-Aldrich, διαλυμένη σε αλατόνερο 0.9%) ή αλατούχο 30 λεπτό πριν από την εισαγωγή του θηλυκού (αφελής); δημιουργώντας με αυτόν τον τρόπο τέσσερις πειραματικές ομάδες: σεξουαλικά αθώα φυσιολογικό ορό (Naive Sal), σεξουαλικά αθωή ναλοξόνη (Naive NLX), σεξουαλικά έμπειρο φυσιολογικό ορό (Exp Sal) και σεξουαλικά έμπειρη ναλοξόνη (Exp NLX, n = 5-8 ανά ομάδα). Η θεραπεία με ναλοξόνη δεν είχε στατιστικά σημαντικές επιδράσεις σε οποιαδήποτε παράμετρο σεξουαλικής συμπεριφοράς, σε οποιαδήποτε από τις ομάδες που έλαβαν 5 d και ναλοξόνη και αλατούχο ήταν ταυτόσημες σε σεξουαλική εμπειρία. Όλα τα ζώα θανατώθηκαν μέσω ενδοκαρδιακής διάχυσης 7 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος. Η διατομή, η ανοσοϊστοχημεία και η ανάλυση δεδομένων (αμφίδρομες μέθοδοι ANOVA: εμπειρία σεξουαλικής επαφής και φαρμακευτική αγωγή) για μέγεθος soma ντοπαμίνης διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω.

Προσαρμοσμένη θέση προτιμήσεων με μορφίνη

Πειραματικό σχέδιο.

Προηγουμένως, Russo et αϊ. (2007) έδειξε ότι η χρόνια μορφίνη προκαλεί ανοχή στην ανταμοιβή της μορφίνης. Δεδομένου ότι η σεξουαλική εμπειρία και η χρόνια μορφίνη προκαλούν παρόμοιες μειώσεις του μεγέθους soma των νευρώνων ντοπαμίνης στο VTA, η λειτουργική καταλληλότητα των επαγόμενων από το φύλο μορφολογικών αλλαγών δοκιμάστηκε για την ανταμοιβή της μορφίνης. Τα σεξουαλικά πεπειραμένα και αφελή ζώα χωρίστηκαν σε έξι διαφορετικές πειραματικές ομάδες (n = 9-13 ανά ομάδα) με βάση τη σεξουαλική συμπεριφορά (σεξουαλικά αθωή ή έμπειρη) και τη δόση μορφίνης (0.5, 5.0 ή 10.0 mg / kg, ip) και εξετάστηκαν για την προαγωγή κλινικής θέσης που προκαλείται από τη μορφίνη (CPP).

Μορφίνη-CPP.

Ο κλιματισμός έγινε 1 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος και οι ομάδες συμφωνήθηκαν για σεξουαλική απόδοση κατά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος. Το χρησιμοποιηθέν υπόδειγμα CPP συνίστατο σε μια προ-δοκιμασία, ημέρες προετοιμασίας και μετά την δοκιμή, και βασίστηκε η συσκευή Tenk et αϊ. (2009). Εν συντομία, η συσκευή CPP (MED Associates) αποτελείται από τρεις ξεχωριστούς θαλάμους. Μεταξύ κάθε συνεδρίας, η συσκευή καθαρίστηκε σχολαστικά με διάλυμα αιθανόλης 70% για να ελαχιστοποιηθούν τα παρατεταμένα οσφρητικά στοιχεία. Για τον προσδιορισμό των μεμονωμένων προτιμήσεων, πραγματοποιήθηκε μια δοκιμασία κατά την οποία τα ζώα είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε ολόκληρη τη συσκευή για 15 λεπτά. Ως ομάδα, τα ζώα δεν έδειξαν σημαντική προτίμηση για έναν συγκεκριμένο θάλαμο, αλλά κάθε μεμονωμένο ζώο είχε μια μικρή αρχική προτίμηση. Οι αρουραίοι που έδειξαν ουσιαστική προτίμηση για έναν από τους θαλάμους (διαφορά> 200 δευτερολέπτων μεταξύ του χρόνου που αφιερώθηκε σε καθένα από τους θαλάμους · <5% των ζώων) κατά τη διάρκεια της δοκιμασίας αποκλείστηκαν από τη μελέτη. Κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας, το φάρμακο συνδυάστηκε είτε με αρχικά προτιμώμενο είτε σε μη προτιμώμενο θάλαμο χρησιμοποιώντας ένα αμερόληπτο παράδειγμα (Tzschentke, 2007) και τα ζώα περιορίστηκαν στους θαλάμους για 30 min. Τα ζώα εγχύθηκαν με αλατούχο διάλυμα (Ιρ) το πρωί (9: 00 ΑΜ έως 12: 00 ΡΜ) και περιορίστηκαν στον αλατούχο ζευγαρωμένο θάλαμο (έλεγχος). Το απόγευμα (1: 00-4: 00 ΡΜ), τα ζώα εγχύθηκαν με μορφίνη (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg ή 10.0 mg / kg, θειική μορφίνη διαλυμένη σε αλατόνερο 0.9%, Johnson Matthey) στο θάλαμο που συνδυάζεται με μορφίνη. Τα ζώα υποβλήθηκαν σε δύο ημέρες προετοιμασίας. Την επόμενη μέρα (3 d μετά την τελευταία ημέρα του ζευγαρώματος) διεξήχθη μια μετα-δοκιμασία, η οποία ήταν ίδια με την προ-δοκιμασία. Για τη στατιστική ανάλυση, ο χρόνος που δαπανάται στον θάλαμο ζευγαρώματος μορφίνης κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμής συγκρίθηκε με το χρόνο που πέρασε στον αλατούχο ζεύγος κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμασίας για σεξουαλικά αθώους ή έμπειρους άρρενες σε κάθε δόση χρησιμοποιώντας ένα ζευγαρωμένο t δοκιμή. p <0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. Πρόσθετες ομάδες ελέγχου σεξουαλικά αφελών και έμπειρων ζώων έλαβαν αλατόνερο τόσο σε ζευγάρια όσο και σε μη ζευγάρια θαλάμους για να χρησιμεύσουν ως αρνητικοί μάρτυρες. Δεν εντοπίστηκαν διαφορές στο χρόνο που αφιερώθηκε μεταξύ των θαλάμων για καμία ομάδα.

Επιδράσεις της συστηματικής ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς

Πειραματικό σχέδιο.

Η σεξουαλική εμπειρία έχει ως αποτέλεσμα τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που διατηρείται τουλάχιστον για το μήνα 1 (Pitchers et αϊ., 2012). Για να αναλυθεί η επίδραση της παρεμπόδισης της MOR στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, τα σεξουαλικά πεπειραμένα ζώα έλαβαν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό πριν από τις πέντε διαδοχικές συνεδρίες ζευγαρώματος (n = 12 έκαστο) όπως περιγράφεται παραπάνω. Μία εβδομάδα μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος, διεξήχθη μια τελική δοκιμή ζευγαρώματος κατά τη διάρκεια της οποίας όλα τα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν μέχρι μία εκσπερμάτιση ή μέχρι το 1 h. Δεν χορηγήθηκε αγωγή με ναλοξόνη ή φυσιολογικό ορό πριν από το ζευγάρωμα την τελευταία ημέρα δοκιμής. Οι παράμετροι του ζευγαρώματος συγκρίθηκαν για να προσδιοριστεί κατά πόσο η ναλοξόνη επηρέασε είτε την επαγόμενη από εμπειρία σεξουαλικής διευκόλυνσης του ζευγαρώματος (ημέρα 1 έναντι της ημέρας 5) είτε τη διατήρηση αυτής της διευκόλυνσης (ημέρα 5 έναντι δοκιμής) με τη χρήση αμφίδρομης ANOVA [παράγοντες: αγωγή με αλατόνερο έναντι ναλοξόνης ) και ημέρα (ημέρα 1, ημέρα 5, ή δοκιμή)] και τη μέθοδο Holm-Sidak για post hoc συγκρίσεις. Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, p <0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

Πρόσθετα πειράματα ελέγχου

Συστηματική ναλοξόνη την ημέρα της δοκιμής.

Για να δείξουμε ότι η αλλοίωση της σεξουαλικής συμπεριφοράς στην τελική ημέρα ελέγχου ζευγαρώματος δεν οφειλόταν στην απουσία ναλοξόνης, χορηγήσαμε είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό σε τελική ημέρα ζευγαρώματος σε ζώα που έλαβαν ζευγάρωμα με ναλοξόνη ενώ απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία. Συγκεκριμένα, όλα τα ζώα έλαβαν ένεση ναλοξόνης (10 mg / kg, sc) 30 λεπτό πριν από τη ζευγαρώματος σε μία εκσπερμάτωση κατά τη διάρκεια διαδοχικών ημερών 5. Την ημέρα δοκιμής 7 d αργότερα, περίπου τα μισά ζώα έλαβαν ένεση ναλοξόνης (10 mg / kg, n = 7) ή αλατόνερο (n = 6) 30 λεπτά πριν από την εισαγωγή ενός δεκτικού θηλυκού. Η σεξουαλική συμπεριφορά παρατηρήθηκε και καταγράφηκε. Οι παράμετροι του ζευγαρώματος συγκρίθηκαν για να προσδιοριστεί κατά πόσο η ναλοξόνη επηρέασε είτε την επαγόμενη από εμπειρία σεξουαλικής διευκόλυνσης του ζευγαρώματος (ημέρα 1 έναντι της ημέρας 5) είτε τη διατήρηση αυτής της διευκόλυνσης (ημέρα 5 έναντι δοκιμής) με τη χρήση αμφίδρομης ANOVA [παράγοντες: αγωγή με αλατόνερο έναντι ναλοξόνης ) και ημέρα (ημέρα 1, ημέρα 5, ή δοκιμή)] και τη μέθοδο Holm-Sidak για post hoc συγκρίσεις. Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, p Το <5% θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

Επιδράσεις της ναλοξόνης στη βραχυπρόθεσμη έκφραση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς.

Οι επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη (10 mg / kg, sc) κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος εξετάστηκαν σε επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά κατά τη διάρκεια μιας τελικής ημέρας ελέγχου ζευγαρώματος, η οποία διεξήχθη μόνο με 1 d μετά από τελευταίο ζευγάρωμα (αλατούχο, n = 5; ναλοξόνη, n = 4).

Συστηματική προεπεξεργασία ναλοξόνης.

Για να προσδιοριστεί εάν η επανειλημμένη θεραπεία της ναλοξόνης από μόνη της προκαλεί βλάβη στη σεξουαλική συμπεριφορά του 7 d μετά την τελευταία θεραπεία, τα σεξουαλικά αφέριστα ζώα έλαβαν πέντε ημερήσιες εγχύσεις ναλοξόνης (10 mg / kg, sc) ή αλατούχο διάλυμα σε διαδοχικές ημέρες πριν από τη δοκιμή ζευγαρώματος 7 d μετά την τελική ναλοξόνη ή ένεση σε φυσιολογικό ορό. Την τελευταία ημέρα δοκιμής, τα ζώα δεν έλαβαν καμία ένεση. Η σεξουαλική συμπεριφορά παρατηρήθηκε και καταγράφηκε όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι παράμετροι του ζευγαρώματος συγκρίθηκαν μεταξύ των ομάδων χρησιμοποιώντας μη ζευγαρωμένο t δοκιμές. Για όλες τις στατιστικές δοκιμές, p Το <5% θεωρήθηκε στατιστικά σημαντικό.

Συστηματική επιβράβευση ναλοξόνης και φύλου.

Μία πιθανότητα για εξασθενητικές επιδράσεις της ναλοξόνης στην εμφάνιση της διατήρησης της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς είναι ότι η ναλοξόνη εμποδίζει τις επιβλαβείς επιδράσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να ελεγχθεί αυτή η πιθανότητα, το παράδειγμα CPP πραγματοποιήθηκε για σεξουαλική συμπεριφορά αμέσως μετά την ένεση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού σε άντρες χωρίς προηγούμενη σεξουαλική εμπειρία. Η διαδικασία CPP ήταν παρόμοια με αυτήν που περιγράφηκε παραπάνω για τη μορφίνη-CPP, συμπεριλαμβανομένων των προκαταρκτικών δοκιμών, των ημερών προετοιμασίας και μετά τη δοκιμή.

Η σεξουαλική συμπεριφορά συνδυάστηκε με τον αρχικά μη προωθημένο θάλαμο. Με αντισταθμισμένο τρόπο, κάθε ζώο έλαβε ένεση ναλοξόνης (n = 12) ή αλατόνερο (n = 11) 30 λεπτά πριν από την πρόσβαση σε ένα θηλυκό. Η μέση διάρκεια της συνεδρίασης ζευγαρώματος ήταν ~ 13 λεπτά. Ένα λεπτό μετά την εκσπερμάτωση, το ζώο τοποθετήθηκε στον ζευγαρωμένο θάλαμο για 30 min. Την άλλη ημέρα προετοιμασίας, τα ζώα έλαβαν ένεση είτε ναλοξόνης είτε φυσιολογικού ορού άλατος (όποια και αν έλαβαν πριν από το ζευγάρωμα) και τοποθετήθηκαν στο μη ζευγαρωμένο θάλαμο για το λεπτό 30. Έπειτα, διεξήχθη μετα-δοκιμή, όμοια με την προεπιλογή. Για να προσδιοριστεί η προτίμηση του θαλάμου, συγκρίθηκε ο χρόνος που πέρασε στον ζευγαρωμένο θάλαμο κατά τη διάρκεια του προ-δοκιμαστικού και του μετα-τεστ. Για στατιστική ανάλυση, ζεύγη t οι δοκιμές χρησιμοποιήθηκαν για να συγκριθούν οι βαθμολογίες προτιμήσεων και διαφορών και ο χρόνος στον ζευγαρωμένο θάλαμο κατά τη διάρκεια του προ-δοκιμαστικού και του μετα-τεστ για να προσδιοριστεί αν σχηματίστηκε μια σημαντική CPP για τη σεξουαλική συμπεριφορά. p <0.05 θεωρήθηκε σημαντική.

Επιδράσεις της ενδο-VTA ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς

Πειραματικό σχέδιο.

Για να προσδιοριστεί εάν η δράση EOP ειδικά στο VTA ήταν υπεύθυνη για τις επιδράσεις των αλλαγών που προκαλούνται από τη σεξουαλική εμπειρία στη σεξουαλική συμπεριφορά, τα ζώα υποβλήθηκαν σε τοπική έγχυση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού εντός του VTA πριν από πέντε καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος. Το παράδειγμα συμπεριφοράς ήταν παρόμοιο με το συστηματικό πείραμα ναλοξόνης. Τα σεξουαλικά έμπειρα ζώα αφέθηκαν να ζευγαρώσουν κατά τη διάρκεια διαδοχικών ημερών 5 μέχρι μία εκσπερμάτιση ή μέχρι το 1 h. Δεκαπέντε λεπτά πριν την εισαγωγή του θηλαστικού υποδοχής, οι αρσενικοί αρουραίοι έλαβαν διμερείς εγχύσεις είτε ναλοξόνης (10 μg / μl ανά ημισφαίριο, όγκος 0.5 μl, διαλυμένο σε αλατόνερο 0.9%) ή αλατούχο διάλυμα (0.5 μl ανά ημισφαίριο). Διμερείς μικροέγχυσης χορηγήθηκαν με ρυθμό ροής 0.5 μΐ / λεπτό σε ένα διάστημα 1 min ακολουθούμενο από ένα πρόσθετο 1 λεπτό με τον σωληνίσκο έγχυσης να παραμένει στη θέση του για διάχυση. Στη συνέχεια, ο σωληνίσκος έγχυσης αντικαταστάθηκε με τον ανδρεικέτα σωληνίσκο και το κάλυμμα σκόνης. Μία εβδομάδα μετά την τελική ημέρα ζευγαρώματος (ημέρα δοκιμασίας), όλα τα ζώα ζευγαρώθηκαν ακόμη μία φορά στην εκσπερμάτωση χωρίς έγχυση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού. Εικόνα 3A περιγράφει το πειραματικό σχέδιο. Η ανάλυση δεδομένων διεξήχθη όπως περιγράφεται στο συστηματικό πείραμα ναλοξόνης.

Θεραπεία σωληναρίου.

Αρσενικοί αρουραίοι αναισθητοποιήθηκαν με ενδοπεριτοναϊκή ένεση (0.1 ml / kg) κεταμίνης (0.87 mg / ml) και ξυλαζίνη (0.13 mg / ml) και τοποθετήθηκαν σε μια στερεοταξική συσκευή (Kopf Instruments). Οι διπλοί καθετήρες οδηγού διατομής 21 (Plastics One) μειώθηκαν μέσω μικρών οπών διάτρησης στο κρανίο στον εγκέφαλο προς το VTA στα -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML από το βρεγμένο και -7.8 mm DV από την κορυφή του κρανίου σύμφωνα με Παξίνος και Γουάτσον (2013). Οι σωληνίσκοι ήταν ασφαλισμένοι με οδοντικό ακρυλικό που προσκολλάται σε τρεις βίδες που τοποθετούνται στο κρανίο. Τα ζώα έλαβαν μια περίοδο ανάκτησης εβδομάδας 2 και αντιμετωπίστηκαν καθημερινά για συνηθισμένη χρήση σε διαδικασίες χειρισμού και ένεσης που χρησιμοποιήθηκαν κατά τη διάρκεια της δοκιμής συμπεριφοράς.

Επαλήθευση τοποθέτησης κασέτας.

Η τοποθέτηση των σωληνίσκων εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ΤΗ-ανοσοχρώση για να επιβεβαιωθεί ότι το VTA ήταν στοχευμένο με ακρίβεια. Μόνο ζώα με σωστή τοποθέτηση συμπεριλήφθηκαν στις αναλύσεις (τελικά μεγέθη ομάδων: πεπειραμένο αλατούχο διάλυμα n = 8; έμπειρη ναλοξόνη n = 6). Τρία επιπλέον ζώα που έλαβαν ενέσεις ενδο-VTA ναλοξόνης κατευθυνόμενα έξω από το VTA ομαδοποιήθηκαν σε μία ομάδα "έχασε" ένεση. Η χαμένη ομάδα αναλύθηκε χωριστά για να χρησιμεύσει ως ανατομικός έλεγχος και Mann-Whitney U δοκιμή χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί η συμπεριφορά στην τελική ημέρα δοκιμής με πειραματόζωα που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη και φυσιολογικό ορό.

Εξέλιξη pERK που προκαλείται από σχετιζόμενη με τη δημιουργία πλαισίου συμφόρησης

Πειραματικό σχέδιο.

Η έκθεση στο κλουβί στην οποία απέκτησαν εμπειρία αρσενικών έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί ενεργοποίηση MOR στο VTA και νευρική δραστηριότητα σε VTA και NAc (Balfour et αϊ., 2004). Ως εκ τούτου, το περιβάλλον ζευγαρώματος χρησιμεύει ως ένα κλιμακωτό δάκτυλο πρόβλεψης της σεξουαλικής ανταμοιβής. Η τρέχουσα μελέτη εξέτασε κατά πόσο απαιτείται ενεργοποίηση MOR κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας για επακόλουθη κλινική επαγόμενη νευρική ενεργοποίηση. Η ναλοξόνη ή ο φυσιολογικός ορός χορηγήθηκε συστηματικά (ΙΡ) 30 λεπτό πριν από την τοποθέτηση στην αρένα ζευγαρώματος και την εισαγωγή ενός δεκτικού θηλυκού για ζευγαρώματος (έμπειρο) ή πριν από τον χειρισμό ελέγχου που συνίστατο στην τοποθέτηση στον κλωβό χειρισμού χωρίς παρουσίαση της θηλυκής περιβάλλον · αφελής). Έτσι, δημιουργήθηκαν τέσσερις πειραματικές ομάδες: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​και Exp NLX. Μία εβδομάδα μετά την τελική συνεδρία ζευγαρώματος, τα μισά ζώα σε κάθε ομάδα εκτέθηκαν στο ζευγαρωτό κλουβί (Exp males: συνδεδεμένα με το φύλο κλιμακωτά σημάδια) ή στο κλουβί (άνδρες: μη ευαίσθητα / ουδέτερα), ενώ το άλλο μισό δεν εκτέθηκε τυχόν συνθήματα και αντίθετα παρέμειναν στα κλουβιά του σπιτιού (για να προσδιοριστεί η βασική έκφραση pERK). Αυτό το πειραματικό μοντέλο παρήγαγε ομάδες 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 έκαστο εκτός από Naive NLX-No Cue, n = 3). Τα ζώα εγχύθηκαν 10-15 λεπτά μετά την έκθεση. Τα ζώα ελέγχου απομακρύνθηκαν από τους κλωβούς της οικίας τους και διαχύθηκαν ταυτόχρονα.

Ανοσοϊστοχημεία.

Η διατομή και η ανοσοϊστοχημεία διεξήχθησαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Εδώ χρησιμοποιήσαμε ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού έναντι p42 και p44 ΜΑΡ Κινάσες ERK1 και ERK2 (pERK, 1: 4 000, Cell Signaling Technology). Το πρωτογενές αντίσωμα χαρακτηρίστηκε εκτενώς στη βιβλιογραφία (Roux και Blenis, 2004; Murphy και Blenis, 2006; Frohmader κ.ά., 2010b). Επιπλέον, η παράλειψη του πρωτεύοντος αντισώματος παρεμπόδισε όλη την ανοσοαντιδραστικότητα και η ανάλυση στυπώματος Western του εγκεφαλικού ιστού αρουραίου αποκάλυψε δύο ζώνες στα κατάλληλα μοριακά βάρη.

Ανάλυση δεδομένων.

Τα ρΕΚΚ-ανοσοαντιδραστικά (-IR) κύτταρα μετρήθηκαν σε έναν αριθμό εγκεφαλικών περιοχών χρησιμοποιώντας ένα σωλήνα τραβήγματος κάμερας που προσαρτήθηκε σε ένα Leica DMRD μικροσκόπιο: NAc [πυρήνας (C) και κέλυφος (S); 400 × 600 μm; μετωπικό προμετωπιαίο φλοιό. mPFC; την πρόσθια περιοχή του αυχένα (ACA). προφανούς φλοιού (PL). αφαίμαξος φλοιός (IL); 600 × 800 μm το καθένα], caudate-putamen (CP · 800 × 800 μm) και βασόφραξη αμυγδαλής (BLA · 900 × 1200 μm; Balfour et αϊ., 2004; Frohmader κ.ά., 2010b; Pitchers et αϊ., 2010b). Δύο τομές υπολογίστηκαν ανά περιοχή εγκεφάλου και οι αριθμοί των κυττάρων στις πρότυπες περιοχές των αναλύσεων στη συνέχεια υπολογίστηκαν ως αριθμοί κυττάρων ανά mm2. Οι δύο μετρήσεις υπολογίστηκαν κατά μέσον όρο ανά ζώο για τον υπολογισμό των μέσων ομάδας. Οι μέσοι όροι των ομάδων σε σεξουαλικά πεπειραμένες ή αθώες ομάδες συγκρίθηκαν με τη χρήση αμφίδρομων φορέων ANOVA (θεραπεία με φάρμακα (NLX ή Sal) post hoc συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τις δοκιμές αθροίσματος Holm-Sidak ή Mann-Whitney όπου είναι απαραίτητο με επίπεδο σημαντικότητας p <0.05. Στο κέλυφος NAc σεξουαλικά έμπειρων ζώων, υπήρχε μια ισχυρή τάση προς τη σημασία των παραγόντων και έτσι, πραγματοποιήθηκαν συγκρίσεις κατά ζεύγη για τη σύγκριση των ομάδων αλατούχου ορού (Sal-No Cue) και αλατούχου ορού (Sal + Cue) μόνο.

Εικόνες.

Οι ψηφιακές εικόνες συλλέχθηκαν χρησιμοποιώντας μια κάμερα CCD (Macrofire, Optronics) συνδεδεμένη με ένα Leica μικροσκόπιο (DM5000B) με σταθερές ρυθμίσεις κάμερας. Οι εικόνες εισήχθησαν στο λογισμικό Adobe Photoshop 9.0. Οι εικόνες δεν αλλοιώνονται με κανέναν τρόπο εκτός από τη ρύθμιση της φωτεινότητας και της αντίθεσης.

Αποτελέσματα

Επηρεασμένες από εμπειρία σεξουαλικών αλλαγών στα κύτταρα ντοπαμίνης VTA

Η σεξουαλική εμπειρία οδήγησε σε μείωση του μεγέθους του VTA ντοπαμίνης soma (Σύκο. 1ΜΕΤΑ ΧΡΙΣΤΟΝ). Η σεξουαλική εμπειρία μείωσε σημαντικά την περιοχή και την περίμετρο του soma των κυττάρων VTA TH-IR (περιοχή: F(1,31) = 23.068, p <0.001; περίμετρος, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Υπήρχε επίσης μια σημαντική σημαντική επίδραση του χρόνου (περιοχή: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; περίμετρος, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) και σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ εμπειρίας και χρόνου (περιοχή: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; περίμετρος, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Οι συζευγμένες συγκρίσεις αποκάλυψαν ότι η περιοχή και η περίμετρος των κυττάρων TH-IR μείωσαν σημαντικά τα 1 και 7d μετά την τελευταία ημέρα σεξουαλικής συμπεριφοράς σε σεξουαλικά έμπειρα ζώα σε σύγκριση με σεξουαλικά μη-ελεγχόμενα ζώα [Σύκο. 1B, περιοχή: p = 0.002 (1d), p <0.001 (7 η); C, περίμετρος: p = 0.009 (1d), p <0.001 (7 d)]. Η επίδραση της σεξουαλικής συμπεριφοράς εξαφανίστηκε όταν ακολούθησε η περίοδος αποχής από την ανταμοιβή καθώς το σωματικό μέγεθος των νευρώνων TH-IR επανήλθε στην αρχική τιμή 31 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος (Σύκο. 1B, περιοχή: p = 0.798; C, περίμετρος: p = 0.785). Οι επαγόμενες από την εμπειρία της σεξουαλικής επαφής αλλοιώσεις δεν ανιχνεύθηκαν σε κυκλικότητα σε κανένα από τα χρονικά σημεία (Σύκο. 1D). Η μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης soma στο μέγεθος της ντοπαμίνης δεν εξαρτιόταν από τις καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος, καθώς η εμπειρία ζευγαρώματος κατά τη διάρκεια πέντε συνόδων ζευγαρώματος διάρκειας δύο εβδομάδων παρήγαγε επίσης μειωμένο μέγεθος VTA ντοπαμίνης somaΣύκο. 2A,B, E-H, περιοχή: p = 0.004; περίμετρος: p <0.001). Αντίθετα, η σεξουαλική εμπειρία δεν επηρέασε το μέγεθος του TH-IR soma στο ουσιαστικό nigra (Σύκο. 2C, I-J, περιοχή: p = 0.13; περίμετρος: p = 0.16) ούτε αλλοιωμένο μέγεθος soma σε κοντινούς νευρώνες VTA μη-TH-IR (Σύκο. 2D, E-H, περιοχή: p = 0.46; περίμετρος: p = 0.45).

Εικόνα 1. 

Ενδογενείς μεταβολές μεγέθους soma που προκαλούνται από οπιοειδείς νευρώνες νταπαμίνης VTA. A, Αντιπροσωπευτικές εικόνες νευρώνων νταπαμίνης VTA από σεξουαλικά αθώα και έμπειρα ζώα που δείχνουν τη μείωση του μεγέθους soma 7 d μετά την τελική σύζευξη. Κλίμακα κλίμακας, 5 μm. Ποσοτικά στοιχεία που δείχνουν ότι η σεξουαλική εμπειρία (Exp, μαύρες ράβδοι) προκάλεσε σημαντική μείωση στην περιοχή (B. σε μm2) και περίμετρο (C. σε μm) κυττάρων νταπαμίνης VTA, το 1 d (Naive, Εχρ. n = 6) και 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), αλλά όχι 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) μετά την τελική ζευγαρώματος, σε σύγκριση με τα σεξουαλικά μη φυσιολογικά μάρτυρες (Naive, λευκές ράβδοι). Η περιοχή μειώθηκε στο 84% σε έμπειρους άρρενες σε σύγκριση με τους μη κατοίκους μάρτυρες σε 1 ή 7 d. Η περίμετρος μειώθηκε σε 91.6 και 90% σε έμπειρες ομάδες σε σύγκριση με τον έλεγχο σε 1 και 7 d resp. Δεν υπήρξε καμία επίδραση στην κυκλικότητα (D). Αυτή η πλαστικότητα κυττάρων ντοπαμίνης στην περιοχή (E) και περίμετρο (F) παρεμποδίστηκε με ναλοξόνη (NLX, n = 8), αλλά όχι αλατούχο (Sal, n = 7) κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος, το 7 d μετά την τελική περίοδο ζευγαρώματος σε σύγκριση με τους σεξουαλικά μη-ελεγχόμενους μάρτυρες (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τους πρωταρχικούς σεξουαλικούς ελέγχους της ίδιας ημέρας (B, C) ή σε σύγκριση με θεραπευόμενους με αλατούχο σεξουαλικά μη κατοίκους μάρτυρες και σεξουαλικά έμπειρους άρρενες που έλαβαν ναλοξόνη (E, F).

Εικόνα 2. 

Η σεξουαλική εμπειρία δεν μείωσε το μέγεθος soma στους νευρώνες ντοπαμίνης ουσίας nigra ή τους ντοντοπαμινικούς νευρώνες VTA. Περιοχή VTA TH-IR neuron soma (A. σε μm2) και περίμετρο (B. σε μm) σε σεξουαλικά αφελείς (λευκούς) και έμπειρους (μαύρους) ζώα που απέκτησαν εμπειρία από το ζευγάρωμα δύο φορές την εβδομάδα και όχι κατά τη διάρκεια διαδοχικών ημερών. Υποστατική περιοχή της περιοχής TH-IR (C) και VTA μη-TH-IR περιοχή soma (D) σε σεξουαλικά αφελείς (λευκούς) και έμπειρους (μαύρους) ζώα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα σεξουαλικά μη-ελεγχόμενα φάρμακα. Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν TH-IR (καφέ) νευρώνες σε VTA σε σεξουαλικά αφελείς (E) και έμπειρους (F) αρσενικά. G, H, Εικόνα υψηλότερης μεγέθυνσης του νευρώνα που υποδεικνύεται από το βέλος στο E και F αντίστοιχα. Οι χρωματισμένοι με Nissl νευρώνες εμφανίζονται με μπλε χρώμα σε αυτές τις εικόνες. Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν νευρώνες TH-IR σε SN με σεξουαλική αφέλεια (I) και έμπειρους (J) αρσενικά. Γραμμές κλίμακας: E-J, 20 μm.

Η επαγόμενη από τη σεξουαλική επαγόμενη μείωση του μεγέθους soma των ντοπαμινικών νευρώνων VTA εξαρτάται από την ενεργοποίηση του υποδοχέα οπιοειδών

Η μείωση του μεγέθους του ντοπαμινικού νωτιαίου σμήματος VTA που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία παρεμποδίστηκε από τον μη-εκλεκτικό ανταγωνιστή MOR ναλοξόνη, που χορηγήθηκε πριν από κάθε συνεδρία ζευγαρώματος. Η θεραπεία με ναλοξόνη πριν από τις συνεδρίες ζευγαρώματος είχε σημαντική επίδραση στην περιοχή (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) και τείνει προς μια σημαντική επίδραση στην περίμετρο (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Σημαντική αλληλεπίδραση μεταξύ της εμπειρίας και της θεραπείας με ναλοξόνη βρέθηκε για την περιοχή (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) και περίμετρο (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Οι συζευγμένες συγκρίσεις έδειξαν ότι η σεξουαλική εμπειρία σε ζώα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό μειώνει σημαντικά την περιοχή και την περίμετρο των ντοπαμινικών νευρώνων 7 d μετά την τελευταία συνεδρία ζευγαρώματος σε σύγκριση με άνδρες που έχουν υποβληθεί σε σεξουαλική αγωγή χωρίς θεραπείαΣύκο. 1E, περιοχή: p = 0.018; F, περίμετρος: p = 0.007). Αντίθετα, τα σεξουαλικά υποβληθέντα σε θεραπεία με ναλοξόνη ζώα δεν διέφεραν από τους άνδρες που δεν είχαν λάβει θεραπεία με ναλοξόνη (Σύκο. 1E, περιοχή: p = 0.483; F, περίμετρος: p = 0.330). Επιπλέον, το μέγεθος soma των έμπειρων αλατούχων ζώων μειώθηκε σημαντικά σε σύγκριση με τα έμπειρα ζώα ναλοξόνης (Σύκο. 1E, περιοχή: p = 0.002; F, περίμετρος: p = 0.002). Αυτή η επίδραση της ναλοξόνης ήταν ειδική για την σεξουαλική εμπειρία, καθώς η αγωγή με ναλοξόνη μόνη της δεν επηρέασε το μέγεθος των σωματικών κυττάρων TH-IR σε αρσενικά που είχαν υποβληθεί σε θεραπεία με σεξουαλική αγωγή με ναλοξόνη σε σύγκριση με τους μάρτυρες που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορόΣύκο. 1E,F). Επιπλέον, αυτό το αποτέλεσμα της ναλοξόνης στην επαγόμενη από την εμπειρία ελάττωση του μεγέθους soma δεν οφείλεται στα αποτελέσματα της ναλοξόνης στη σεξουαλική συμπεριφορά, καθώς η συμπεριφορά ζευγαρώματος δεν διέφερε σημαντικά μεταξύ των αρσενικών που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη και φυσιολογικό ορό, εκτός από ένα μεγαλύτερο χρονικό διάστημα για να ξεκινήσει το ζευγάρωμα μετά την εκσπερμάτωση (διάστημα μετά την εκσπερμάτιση) σε αρσενικά που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της πρώτης και πέμπτης συνεδρίας ζευγαρώματος (p = 0.03 και p = 0.004, αντίστοιχα). Τόσο οι άνδρες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο όσο και με ναλοξόνη συνδύαζαν την εκσπερμάτιση κατά τη διάρκεια καθεμιάς από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος.

Η ανοχή ανταμοιβής μορφίνης που προκαλείται από την σεξουαλική εμπειρία

Τα αποτελέσματα της σεξουαλικής εμπειρίας στο μέγεθος VTA ντοπαμίνης soma με τη δράση του EOP στο VTA είναι παρόμοια με εκείνα που αναφέρθηκαν για τα εξωγενή οπιούχα (Sklair-Tavron et αϊ., 1996; Russo et αϊ., 2007). Επομένως, εξετάστηκε εάν η φυσική πλασματικότητα κυττάρων ντοπαμίνης που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή επηρεάζει την ανταμοιβή για την ορφική μορφίνη. Πράγματι, η σεξουαλική εμπειρία προκάλεσε ανοχή ανταμοιβής μορφίνης, παρόμοια με την επίδραση χρόνιων οπιούχων (Russo et αϊ., 2007). Τα σεξουαλικά έμπειρα αρσενικά απέτυχαν να αναπτύξουν CPP για δόση μορφίνης 0.5 mg / kg. ενώ οι σεξουαλικά αφελείς άνδρες σχημάτισαν μια CPP για αυτή τη δόση, όπως υποδεικνύεται με το πέρασμα μεγαλύτερου χρονικού διαστήματος στον θάλαμο που συνδυάζεται με μορφίνη σε σύγκριση με τον θαλάμο που έχει συσχετιστεί με αλατούχο διάλυμα κατά τη διάρκεια του μετα-τεστ (Σύκο. 3; p = 0.039). Τόσο οι σεξουαλικά αθώες όσο και οι έμπειρες ομάδες διατήρησαν σημαντικά μεγαλύτερο χρονικό διάστημα στον θάλαμο που συνδυάστηκε με μορφίνη σε σύγκριση με τον θάλαμο σε συνδυασμό με αλατούχο με υψηλότερες δόσεις μορφίνης: 5.0 mg / kg (Σύκο. 3. Αφελής: p = 0.029; Εχ: p = 0.012) και 10.0 mg / kg (Σύκο. 3. Αφελής: p <0.001; Λήξη: p = 0.002).

Εικόνα 3. 

Οι επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στην ανταμοιβή της μορφίνης. Οι χρόνοι που διαμένουν σε θαλάμους (Sal, Morning 0.5, 5 ή 10 mg / kg σωματικού βάρους) κατά τη διάρκεια του μετα-τεστ σε σεξουαλικά αφελείς (Naive, n = 10-13) ή με εμπειρία (Exp, n = 9-13) αρσενικά. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τον θάλαμο ζευγαρώματος Sal σε ίδια ζώα. NS, Δεν είναι σημαντικό.

Η επαγόμενη από τη σεξουαλική επαφή διευκόλυνση της συμπεριφοράς ζευγαρώματος εξαρτάται από την ενεργοποίηση του υποδοχέα οπιοειδών

Τα ευρήματα μέχρι τώρα καταδεικνύουν ότι η ΕΟΡ που δρουν στο VTA κατά τη διάρκεια των καθημερινών μικρών συνόδων ζευγαρώματος 5 προκαλεί πλαστικότητα των νευρώνων ντοπαμίνης VTA που είναι παρόμοια με τις επιδράσεις της χρόνιας μορφίνης ή της αυτο-χορήγησης ηρωίνηςRusso et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Υποθέσαμε ότι η μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης soma-size είναι κρίσιμη για την εκμάθηση ανταμοιβής και ειδικά για τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς από την εμπειρία της σεξουαλικής συμπεριφοράς όσον αφορά τα κίνητρα και τις επιδόσεις. Αυτή η υπόθεση δοκιμάστηκε με αποκλεισμό του MOR χρησιμοποιώντας ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος και την εξέταση των επιδράσεων στη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκλήθηκε από τη σεξουαλική εμπειρία κατά τις πέντε καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος. Τα δεδομένα παρουσιάζονται στο Εικόνα 4 για την πρώτη και την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος μόνο, καθώς αυτά είναι τα δεδομένα που απεικονίζουν καλύτερα την επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της συμπεριφοράς ζευγαρώματος. Επιπλέον, οι μακροπρόθεσμες επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια των συνεδριών ζευγαρώματος εξετάζονται για τη διατήρηση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της συμπεριφοράς ζευγαρώματος, κατά τη διάρκεια μιας τελικής δοκιμής ζευγαρώματος 1 εβδομάδα αργότερα. Εικόνα 4A δείχνει το πειραματικό σχέδιο. Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της σύζευξης σε όλες τις παραμέτρους της σεξουαλικής συμπεριφοράς (latency mount: F(2,55) = 11.286, p <0.001; καθυστέρηση εισόδου: F(2,55) = 8.767, p <0.001; καθυστέρηση εκσπερμάτωσης: F(2,55) = 10.368, p <0.001) και θεραπεία με ναλοξόνη σε λανθάνουσα κατάσταση για προσάρτηση (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) και intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Συγκριτικές συγκρίσεις έδειξαν ότι η θεραπεία με ναλοξόνη επηρέασε τη σεξουαλική συμπεριφορά κατά την πρώτη συνεδρία ζευγαρώματος επειδή τα ζώα ναλοξόνης είχαν σημαντικά μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδους για πρώτη φορά (p = 0.002) και intromission (p = 0.002) σε σύγκριση με τους ελέγχους φυσιολογικού ορού κατά την πρώτη ημέρα του ζευγαρώματος. Αυτή η επίδραση ναλοξόνης στην αρχική σεξουαλική συμπεριφορά μειώθηκε από τη σεξουαλική εμπειρία και δεν παρατηρήθηκε κατά τη διάρκεια οποιασδήποτε από τις επόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος (Πίνακας 1). Επιπλέον, η χορήγηση ναλοξόνης πριν από κάθε μία από τις πέντε συνεδρίες ζευγαρώματος δεν εμπόδισε την αρχική διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς με σεξουαλική εμπειρία. Σύμφωνα με τις ενισχυτικές επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας, τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με αλατούχα εμφάνισαν μειωμένες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 4B; p = 0.032) intromission (Σύκο. 4C; p = 0.033) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 4D; p <0.001) κατά την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος σε σύγκριση με την πρώτη συνεδρία ζευγαρώματος, η οποία έδειξε διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Παρομοίως, τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη εμφάνισαν σημαντικά μικρότερες καθυστερήσεις για προσάρτηση (Σύκο. 4B; p <0.001), είσοδος (Σύκο. 4C; p <0.001) και εκσπερμάτωση (Σύκο. 4D; p = 0.017) στην πέμπτη σε σύγκριση με την πρώτη ημέρα. Επιπλέον, οι άντρες που έλαβαν ναλοξόνη δεν διέφεραν από τους ελέγχους αλατόνερου σε οποιαδήποτε από τις λανθάνουσες περιόδους κατά τη διάρκεια της πέμπτης συνεδρίας ζευγαρώματος.

Εικόνα 4. 

Τα ενδογενή οπιοειδή διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς. A, Πειραματικό σχέδιο. B-D, Παράμετροι σεξουαλικής συμπεριφοράς για αρσενικά που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό (Sal, n = 11) ή ναλοξόνη (NLX, μαύρες ράβδοι, n = 12) με συστηματική χορήγηση. Τα δεδομένα που εμφανίζονται είναι η καθυστέρηση στην εγκατάσταση (B. δευτερόλεπτα), intromission (C. δευτερολέπτων) και εκσπερμάτιση (D. δευτερόλεπτα) στις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχών ημερών ζευγαρώματος. Επιπλέον, τα δεδομένα παρουσιάζονται για την τελική δοκιμή ζευγαρώματος, 7 d μετά την πέμπτη συνεδρίαση ζευγαρώματος. Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. + υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ημερών 1 και 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ ημέρας και ημέρας δοκιμασίας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ ομάδων ναλοξόνης και φυσιολογικού ορού εντός της ημέρας.

Προβολή αυτού του πίνακα: 

Πίνακας 1. 

Η χορήγηση ναλοξόνης πριν από το ζευγάρωμα αύξησε τις λανθάνουσες δόσεις μέχρι την πρώτη ημέρα ζευγαρώματος

Αντίθετα, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της συνεδρίας σεξουαλικής εμπειρίας διακόπηκε τη διατήρηση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά την τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος. Η ημέρα δοκιμής διεξήχθη 7 d μετά την τελική σύζευξη απουσία μιας έγχυσης ναλοξόνης. Οι αρσενικοί μάρτυρες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο εμφάνισαν την αναμενόμενη εμπειρία που προκαλείται από την εμπειρία της σεξουαλικής συμπεριφοράς Συγκεκριμένα, οι λανθάνουσες περιόδους κατά την τοποθέτηση, την εισαγωγή και την εκσπερμάτιση δεν διέφεραν μεταξύ της πέμπτης συνεδρίασης ζευγαρώματος και της τελικής ημέρας εξέτασης (Σύκο. 4Β-Δ). Ενώ οι άντρες που έλαβαν ναλοξόνη έδειξαν σημαντική αύξηση των λανθάνουσας κατάστασης (Σύκο. 4B; p = 0.033), intromission (Σύκο. 4C; p = 0.036) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 4D; p = 0.049) την ημέρα της δοκιμής σε σύγκριση με την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος. Επίσης, την ημέρα δοκιμής τα ζώα ναλοξόνης βρέθηκαν να είναι σημαντικά βραδύτερα από τα αρσενικά που έχουν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό όπως φαίνεται από μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 4B; p = 0.017) και intromission (Σύκο. 4C; p = 0.043). Έτσι, η θεραπεία με ναλοξόνη παρεμπόδισε τη συντήρηση, αλλά όχι την αρχική, ανάπτυξη της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν έναν κρίσιμο ρόλο για την επαγόμενη από ΕΟΡ πλαστικότητα νταπαμινικού νευρώνα επαγόμενη από ΕΟΡ σε μακροχρόνια έκφραση ενίσχυσης της φυσικής ανταμοιβής συμπεριφοράς.

Διεξήχθησαν διάφορα επιπρόσθετα πειράματα ελέγχου για να προσδιοριστεί ότι οι επιδράσεις του αποκλεισμού των υποδοχέων οπιοειδών στην απώλεια της μακροπρόθεσμης ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς έλαβαν χώρα ανεξάρτητα από την έλλειψη της χορήγησης ναλοξόνης στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος (Σύκο. 5A,B), ήταν ειδικά για την απώλεια της μακροπρόθεσμης, αλλά όχι βραχυπρόθεσμης διατήρησης της διευκόλυνσης ζευγαρώματος (Σύκο. 5E,F), δεν προκλήθηκαν από ημερήσια έκθεση στη ναλοξόνη μόνη της (Σύκο. 5C,D) και δεν προκλήθηκαν από απώλεια σεξουαλικής ανταμοιβής σε αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη (Σύκο. 5G,H). Πρώτον, για να αποδειχθεί ότι η αλλοίωση της σεξουαλικής συμπεριφοράς στην τελική ζευγαρώματος δεν οφείλεται στην απουσία ναλοξόνης, χορηγήθηκε ναλοξόνη ή φυσιολογικός ορός στην τελική ημέρα δοκιμών ζευγαρώματος σε ζώα που έλαβαν ζευγάρωμα σε συνδυασμό με ναλοξόνη ενώ απέκτησαν σεξουαλική εμπειρία (Σύκο. 5A). Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος στις λανθάνουσες περιόδους (Σύκο. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) και intromission (Πίνακας 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Δεν υπήρξε καμία κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος για λανθάνουσα κατάσταση στην εκσπερμάτιση (Πίνακας 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Παρόμοια με αυτά που περιγράφηκαν παραπάνω, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος δεν επηρέασε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια των αρχικών πέντε συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας. Και οι δύο ομάδες (που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με αλατόνερο και ναλοξόνη όπως προσδιορίστηκαν με τη θεραπεία που λήφθηκε κατά τη διάρκεια της τελικής ζευγαρώματος και οι δύο έλαβαν ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος) κατέδειξαν διευκολυνόμενη σεξουαλική συμπεριφορά την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1 και εμφάνισαν σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5B. αλατούχος: p = 0.033; ναλοξόνη: p = 0.014) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.034; ναλοξόνη: p = 0.026). Τα ζώα που έλαβαν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό άλατος στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος είχαν μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5B. αλατούχος: p = 0.018; ναλοξόνη: p = 0.029) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.019; ναλοξόνη: p = 0.020) σε σύγκριση με την πέμπτη ημέρα της εμπειρίας ζευγαρώματος. Συνεπώς, η χορήγηση ναλοξόνης ή φυσιολογικού ορού άλατος την ημέρα της δοκιμασίας αμέσως πριν από το ζευγάρωμα δεν επηρέασε την επίδραση της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας και η εξασθένιση της μακροπρόθεσμης διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς ήταν ίδια με αυτή που αποδείχθηκε σε ζώα που δεν έλαβαν καμία ένεση στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος (Σύκο. 4).

Εικόνα 5. 

Τα ενδογενή οπιοειδή είναι σημαντικά στη μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. A, Πειραματικός σχεδιασμός για πειράματα με αποτέλεσμα τη θεραπεία NLX την ημέρα δοκιμής. B, Λήξη λανθάνουσας κατάστασης στις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχών ημερών ζευγαρώματος και τελικής ημέρας δοκιμής ζευγαρώματος (Test) μετά από έγχυση αλατούχου (γκρι) ή ναλοξόνης (μαύρο). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας 1 και της ημέρας 5 εντός της θεραπείας. # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας δοκιμής και της ημέρας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. C, Πειραματικός σχεδιασμός για πείραμα για να ελεγχθεί η επίδραση της προεπεξεργασίας ναλοξόνης μόνο χωρίς σεξουαλική εμπειρία στη συμπεριφορά ζευγαρώματος. D, Λήξη λανθάνουσας κατάστασης στην τελική ημέρα δοκιμής ζευγαρώματος, 7 ημέρες μετά από 5 ημέρες είτε αλατούχου είτε με ένεση ναλοξόνης απουσία ζευγαρώματος. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. E, Πειραματικός σχεδιασμός για πειράματα για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με ναλοξόνη επηρέασε τη βραχυπρόθεσμη εμφάνιση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς σε σεξουαλικά έμπειρα ζώα. F, Λήξη λανθάνουσας λειτουργίας την ημέρα 1 και ημέρα 5 πέντε συνεχών ημερών ζευγαρώματος και τελικής ζευγαρώματος δοκιμαστικής ημέρας, 1 ημέρα μετά την ημέρα 5 παρουσία ένεσης αλατούχου (γκρίζου) ή ναλοξόνης (μαύρου χρώματος). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ της ημέρας 1 και της ημέρας 5 εντός της θεραπείας. G, Πειραματικός σχεδιασμός για πείραμα για να ελεγχθεί εάν η θεραπεία με ναλοξόνη παρεμπόδισε τις ανταμείβοντας επιπτώσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. H, Ο χρόνος που αφιερώνεται σε ζευγαρωμένο θάλαμο (σε δευτερόλεπτα) κατά τη διάρκεια του προ-δοκιμαστικού ελέγχου (λευκό) και μετά την εξέταση (μαύρο) για τα ζώα που λαμβάνουν είτε ναλοξόνη είτε φυσιολογικό ορό πριν από το ζευγάρωμα. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σχέση με τον προ της δοκιμής.

Προβολή αυτού του πίνακα: 

Πίνακας 2. 

Τα δεδομένα που παρουσιάζονται είναι η λανθάνουσα κατάσταση στην ενδοπρόσθεση και την εκσπερμάτιση (δευτερόλεπτα) από τα πειράματα ελέγχου που διεξήχθησαν για να προσδιοριστεί ότι οι επιδράσεις του αποκλεισμού MOR στην απώλεια της μακροπρόθεσμης ενίσχυσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς συνέβησαν ανεξάρτητα από την έλλειψη χορήγησης ναλοξόνης στην τελική ημέρα τεστ ζευγαρώματος

Για να προσδιοριστεί αν ήταν θεραπεία με ναλοξόνη όταν συνδυάστηκε με σεξουαλική εμπειρία και δεν επαναλήφθηκε στην ναλοξόνη αυτή καθεαυτή που προκάλεσε βλάβη της σεξουαλικής συμπεριφοράς 7 d μετά την τελευταία θεραπεία, τα σεξουαλικά αδέσμευτα ζώα έλαβαν είτε πέντε ημερήσιες ενέσεις ναλοξόνης ή εγχύσεις αλατόνερου πριν από την τελική εξέταση ζευγαρώματος 7 δ αργότερα (Σύκο. 5C). Δεν ανιχνεύθηκαν σημαντικές διαφορές για οποιαδήποτε παράμετρο ζευγαρώματος μεταξύ αλατούχου και προ-κατεργασμένου με ναλοξόνη ομάδων (Σύκο. 5D. λανθάνουσα κατάσταση εγκατάστασης λανθάνουσα δόση: φυσιολογικό ορό 139.7 ± 40.3 έναντι ναλοξόνης 121.83 ± 42.55; λανθάνουσα εκσπερμάτωση: φυσιολογικό ορό 887.9 ± 70.0 έναντι ναλοξόνης 1050.8 ± 327.31). Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι μόνο η ναλοξόνη δεν επαρκεί για να μεταβάλλει την επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά, παρόμοια με την έλλειψη επιδράσεων μόνο της ναλοξόνης στην πλαστικότητα νταμίνης ντουραμίνης VTA.

Υποθέτουμε ότι η θεραπεία με ναλοξόνη κατά την απόκτηση της σεξουαλικής εμπειρίας διαταράσσει τη μακροπρόθεσμη έκφραση της επαγόμενης από την σεξουαλική επαφή διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να εξεταστεί περαιτέρω αυτό, οι επιδράσεις της θεραπείας με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος εξετάστηκαν σε επακόλουθη σεξουαλική συμπεριφορά κατά τη διάρκεια μιας τελικής δοκιμής ζευγαρώματος, η οποία διεξήχθη μόνο με 1 d μετά από τελευταίο ζευγάρωμα (πειραματικός σχεδιασμός, Σύκο. 5E). Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος στο mount (Σύκο. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) και καθυστέρηση εισόδου (Πίνακας 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Δεν υπήρχε σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας στον λανθάνοντα χρόνο εκσπερμάτωσης (Πίνακας 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Παρόμοια με αυτά που περιγράφηκαν παραπάνω, όλοι οι άνδρες (παρά τις θεραπείες αλατόνερου ή ναλοξόνης) έδειξαν διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια των πέντε συνεδριών σεξουαλικής εμπειρίας που υποδεικνύονται από σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 5F. αλατούχος: p = 0.002; ναλοξόνη: p = 0.018) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.006; ναλοξόνη: p = 0.009) την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1. Παρομοίως, η διεξαχθείσα σεξουαλική συμπεριφορά καταδείχθηκε την ημέρα της δοκιμής σε σύγκριση με την ημέρα 1 που υποδεικνύεται από σημαντικά μικρότερες λανθάνουσες περιόδους για την προσπέλαση (Σύκο. 5F. αλατούχος: p = 0.001; ναλοξόνη: p = 0.020) και intromission (Πίνακας 2. αλατούχος: p = 0.004; ναλοξόνη: p = 0.009). Το πιο σημαντικό, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος δεν επηρέασε σημαντικά την επαγόμενη από την εμπειρία της σεξουαλικής διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη δοκιμασία του 1 d μετά από σεξουαλική εμπειρία, ανεξάρτητα από τη θεραπεία με ναλοξόνη σε αυτήν την τελική ημέρα τεστ ζευγαρώματος.

Τέλος, δοκιμάσαμε την πιθανότητα ότι οι εξασθενητικές επιδράσεις της ναλοξόνης στη μακροπρόθεσμη έκφραση διευκολυνμένης σεξουαλικής συμπεριφοράς οφείλονται στην παρεμπόδιση της ναλοξόνης στις ανταμείβουσες ιδιότητες της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Ωστόσο, η ναλοξόνη που χορηγήθηκε αμέσως πριν το ζευγάρωμα δεν άλλαξε τον σχηματισμό CPP για ζευγάρωμα (Σύκο. 5G), γεγονός που υποδηλώνει ότι η θεραπεία με ναλοξόνη δεν αλλοιώνει τη σεξουαλική ανταμοιβή. Τόσο οι ομάδες που υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο όσο και με ναλοξόνη σχημάτισαν μια σημαντική CPP για σεξουαλική συμπεριφορά, όπως υποδεικνύεται από σημαντικά αυξημένο χρόνο στο θάλαμο ζευγαρώματος σε φύλο (Σύκο. 5H. αλατούχος: p = 0.038; ναλοξόνη: p = 0.002) κατά τη διάρκεια της μετα-δοκιμής σε σύγκριση με τον προ της δοκιμής. Ως εκ τούτου, η ναλοξόνη δεν ασκεί τη δυσμενή επίδρασή της στη διατήρηση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς, εμποδίζοντας την ανταμοιβή που συνδέεται με τη σεξουαλική συμπεριφορά.

Η διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς εξαρτάται από τη δράση ΕΑΠ στο VTA

Για να επιβεβαιωθεί ότι η EOP ενεργεί ειδικά στο VTA για να επιφέρει μακροπρόθεσμη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, ο πειραματικός σχεδιασμός που περιγράφεται στο Εικόνα 3A επαναλήφθηκε με εγχύσεις ενδο-VTA ναλοξόνης και όχι με συστηματικές ενέσεις. Τα αποτελέσματα ήταν ίδια με τη συστηματική χορήγηση που περιγράφηκε παραπάνω. Υπήρξε μια σημαντική κύρια επίδραση της ημέρας ζευγαρώματος σε όλες τις παραμέτρους της σεξουαλικής συμπεριφοράς (Σύκο. 6A, χρόνος εγκατάστασης: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, καθυστέρηση intromission: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, λανθάνουσα εκσπερμάτωση: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) και ενδο-VTA κατεργασία ναλοξόνης σε λανθάνουσες περιόδους (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) και intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Η ενδο-VTA ναλοξόνη δεν εμπόδισε την αρχική εμπειρία που προκάλεσε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς κατά τη διάρκεια του 5 d του ζευγαρώματος, καθώς τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη παρουσίασαν μειωμένες λανθάνουσες δόσεις για να τοποθετήσουν (Σύκο. 6A; p = 0.001), intromission (Σύκο. 6B; p <0.001) και εκσπερμάτωση (Σύκο. 6C; p = 0.001) την ημέρα 5 σε σύγκριση με την ημέρα 1. Τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη δεν διέφεραν από τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορό κατά την πέμπτη ημέρα του ζευγαρώματος σε οποιαδήποτε από τις λανθάνουσες περιόδους. Η ενδο-VTA θεραπεία με ναλοξόνη, όπως η συστηματική χορήγηση, προκάλεσε σημαντικά αυξημένη αύξηση (Σύκο. 6A; p <0.001) και καθυστέρηση εισόδου (Σύκο. 6B; p <0.001) την πρώτη ημέρα ζευγαρώματος σε σύγκριση με τα αρσενικά που έλαβαν αλατούχο διάλυμα, το οποίο δεν παρατηρήθηκε κατά τις επόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος (κατά τη διάρκεια των οποίων τα αρσενικά που έλαβαν ναλοξόνη και αλατούχο διάλυμα δεν διέφεραν). Μια απροσδόκητη παρατήρηση ήταν ότι σε αυτό το πείραμα, τα αρσενικά που έλαβαν αλατούχο διάλυμα δεν έδειξαν στατιστικά σημαντική διευκόλυνση των καθυστερήσεων προσαύξησης ή ενδοσκόπησης (όπως φαίνεται σε όλα τα πειράματα που περιγράφονται παραπάνω) και μόνο ο λανθάνων χρόνος εκσπερμάτωσης μειώθηκε την πέμπτη ημέρα σε σύγκριση με την πρώτη ημέρα (αλατούχος: p = 0.001).

Εικόνα 6. 

Τα ενδογενή οπιοειδή στη VTA μεσολαβούν στην επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και τη μακροχρόνια συντήρησή της. Οι παράμετροι σεξουαλικής συμπεριφοράς για αρσενικά που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό (Sal, n = 8) ή NLX (μαύρες ράβδοι, n = 6) με ενδο-VTA χορήγηση. Τα δεδομένα που εμφανίζονται είναι η καθυστέρηση στην εγκατάσταση (A), intromission (B) και εκσπερμάτιση (C) στις ημέρες 1 και 5 πέντε συνεχών ημερών ζευγαρώματος. Επιπλέον, τα δεδομένα παρουσιάζονται για την τελική ημέρα ελέγχου ζευγαρώματος, 7 d την επόμενη ημέρα 5 απουσία ένεσης αλατούχου ή ναλοξόνης. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. + υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ των ημερών 1 και 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ ημέρας και ημέρας δοκιμασίας 5 κατά τη διάρκεια της θεραπείας. # υποδεικνύει σημαντική διαφορά μεταξύ ομάδων ναλοξόνης και Sal κατά τη διάρκεια της ημέρας. Σχηματικά σχέδια των στεφανιαίων τομών VTA (Η, -4.60, I, -5.00, J, -5.25 από το βράγμα) υποδεικνύοντας τοποθεσίες ένεσης ενδο-VTA για όλα τα ζώα στο Πείραμα 5 (αλατούχο διάλυμα, λευκή · ναλοξόνη, χρησιμοποιώντας πρότυπα σχέδια από τους χάρτες Swanson Brain (Swanson, 2004). Οι σωληνίσκοι ήταν διμερείς, αλλά οι θέσεις ένεσης αντιπροσωπεύονται μονομερώς για ευκολία παρουσίασης. fr, Fasciculus retroflexus. ML, Medial lemniscus. SN, ουσία nigra.

Η θεραπεία με ναξολόνη εντός-VTA εμποδίζει τη διατήρηση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς που παρατηρείται σε σεξουαλικά έμπειρους άρρενες, παρόμοια με τα αποτελέσματα της συστηματικής ναλοξόνης. Συγκεκριμένα, την ημέρα της τελικής δοκιμής, οι άνδρες που έλαβαν ναλοξόνη είχαν μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδουςΣύκο. 6A; p = 0.011), intromission (Σύκο. 6B; p = 0.010) και εκσπερμάτιση (Σύκο. 6C; p = 0.015) σε σύγκριση με την πέμπτη συνεδρία ζευγαρώματος και συγκρίθηκε με τα αρσενικά που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορό κατά την τελική ημέρα δοκιμής (Σύκο. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Αντίθετα, τα ζώα που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό δεν διέφεραν κατά τη διάρκεια των λανθάνουσας κατάστασης και της εισόδου μεταξύ της τελικής ημέρας και της ημέρας 5 του ζευγαρώματος. Αυτές οι επιδράσεις ήταν συγκεκριμένες για την παροχή ναλοξόνης στο VTA, καθώς τα αρσενικά με σημεία σωληναριάς πλησίον αλλά δεν στοχεύουν το VTAΣύκο. 6D; n = 3) εμφάνισαν μακροπρόθεσμη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς παρόμοια με τους μάρτυρες που είχαν υποβληθεί σε αγωγή με αλατούχο ορό (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 και σημαντικά διαφορετικά συγκριτικά με ζώα ενδο-VTA ναλοξόνης στην τελική ημέρα ελέγχου ζευγαρώματος (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

Η δράση EOP απαιτείται για την επαγόμενη από το φύλο κλινική επαγόμενη νευρική ενεργοποίηση

Με βάση τα ευρήματα μέχρι τώρα, υποθέσαμε ότι η ενεργοποίηση του EOP στο VTA κατά τη διάρκεια της εμπειρίας ζευγαρώματος και η επακόλουθη μείωση του μεγέθους του ντοπαμίνης Voma είναι ζωτικής σημασίας για την κατανομή των κρουσμάτων κινήτρων σε ζευγαρωτικά ερεθίσματα που συνδέονται με τη ανταμοιβή και συνεπώς τη διατήρηση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Για να δοκιμαστεί αυτή η υπόθεση, εξετάστηκαν τα αποτελέσματα του αποκλεισμού των υποδοχέων οπιοειδών κατά τη διάρκεια της ζευγαρωτικής εμπειρίας στη νευρική δραστηριότητα που προκλήθηκε από την επακόλουθη έκθεση σε κλινικά συμφραζόμενα πειράματα που προέβλεπαν τη σεξουαλική ανταμοιβή (συναφή με το περιβάλλον συμφραζόμενα). Τα σεξουαλικά αφελείς ζώα εκτέθηκαν επίσης σε περιβαλλοντικές ενδείξεις, αλλά αυτές δεν συσχετίστηκαν με προηγούμενη εμπειρία ζευγαρώματος, επομένως ήταν ουδέτερες ενδείξεις. Τέλος, τα επίπεδα ρΕΚΚ βασικής γραμμής προσδιορίστηκαν σε σεξουαλικά έμπειρους και απείθαρχους ομάδες ελέγχου που παρέμειναν στα κλουβιά του σπιτιού και δεν εκτέθηκαν σε τυχόν σημάδια (-No Cue). Επιβεβαιώνοντας και επεκτείνοντας τα προηγούμενα ευρήματα (Balfour et αϊ., 2004), η έκθεση σε συμφραζόμενα συναισθήματα που σχετίζονται με την προηγούμενη ανταμοιβή φύλου αύξησε σημαντικά την έκφραση pERK σε σεξουαλικά έμπειρους άνδρες στο NAc (Σύκο. 7) και mPFC (Σύκο. 8ΜΕΤΑ ΧΡΙΣΤΟΝ), αλλά δεν προκάλεσε νευρωνική ενεργοποίηση στο BLA (Σύκο. 8D) ή CPu (τα δεδομένα δεν εμφανίζονται). Υπήρχαν κύριες επιδράσεις της έκθεσης στην ουσία στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) και PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) και θεραπεία με ναλοξόνη στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) και PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Υπήρξε σημαντική αλληλεπίδραση στον πυρήνα NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) και IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Πρώτον, η σχετιζόμενη με το ζευγάρωμα έκφραση Cue αύξησε σημαντικά το pERK σε πειραματόζωα που είχαν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό (Exp Sal ​​+ Cue) σε σύγκριση με τους μάρτυρες που δεν εκτέθηκαν σε τυχόν σημάδια και λήφθηκαν από τον κλωβό (Exp Sal-No Cue) στον πυρήνα NAcΣύκο. 7A; p <0.001) και mPFC υποπεριφέρειες ACA (Σύκο. 8A; p = 0.001), PL (Σύκο. 8B; p = 0.003) και IL (Σύκο. 8C; p = 0.029). Αντίθετα, σε σεξουαλικά αθώα ζώα που έχουν υποστεί αγωγή με φυσιολογικό ορό, η έκθεση στα συμφραζόμενα, τα οποία δεν σχετίζονταν με τη σεξουαλική ανταμοιβή, δεν προκάλεσε το pERK σε καμία από τις περιοχές του εγκεφάλου (Naive Sal + Cue σε σύγκριση με το naive Sal-No Cue. Εικ. 7, 8), αποδεικνύοντας ότι η επαγωγή του pERK είναι συγκεκριμένη στην έκθεση των συνειρμών που σχετίζονται με τη σεξουαλική εμπειρία. Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία από μόνη της δεν αλλοίωσε την βασική έκφραση του pERK σε καμία από τις περιοχές του εγκεφάλου, καθώς δεν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των ομάδων που λήφθηκαν από τους κλωβούς του σπιτιού, είτε είχαν σεξουαλική αγωγή είτε είχαν εμπειρία, και υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο ή ναλοξόνη.

Εικόνα 7. 

Η ενδογενής δράση οπιοειδούς απαιτείται για νευρική ενεργοποίηση στο ΝΑο που προκαλείται από κλινικά συναισθήματα που σχετίζονται με το φύλο. Αριθμοί κυττάρων pERK-IR ανά mm2 στον πυρήνα nucleus accumbens (A) και το κέλυφος (B) σε σεξουαλικά αφελείς (λευκούς) και έμπειρους (Εχρ, μαύρο) ζώα που είχαν υποβληθεί σε προκαταρκτική αγωγή με συστηματικό NLX ή φυσιολογικό ορό (Sal) κατά τη διάρκεια συνεδριών ζευγαρώματος (Exp males) ή συνεδριών χειρισμού (Naive male). Οι ομάδες είτε εκτέθηκαν σε συμφραζόμενα συνθήματα (Cue), τα οποία σχετίζονταν με τα ζευγαρωτά δείγματα σε Exp males και ουδέτερα σημεία σε Naive ζώα, είτε ελήφθησαν από τα κλουβιά στο σπίτι (No Cue, που υποδεικνύεται από την έλλειψη Cue-label). Τα δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα μάρτυρα που δεν είχαν υποβληθεί σε αγωγή με αλατόνερο (Naive Sal-No Cue και Exp Sal-No Cue). # υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την εξεταζόμενη από Sal ομάδα Cue-exposed Exp (Exp Sal ​​+ Cue). Αντιπροσωπευτικές εικόνες κυττάρων pERK-IR ανά mm2 στον πυρήνα NAc των σεξουαλικά έμπειρων αρσενικών με Sal (C, D) ή NLX (E, F) που είτε ελήφθησαν από τον κλωβό του σπιτιού (No Cue, C, E), είτε εκτέθηκαν στις σχετικές με το ζευγάρωμα συμφραζόμενα (Cue; D, F). N = 4 κάθε ομάδα εκτός από Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Προηγούμενη σύνθεση. Κλίμακα κλίμακας, 100 μm.

Εικόνα 8. 

Οι επιδράσεις της ναλοξόνης στην επαγόμενη από συνθετικό τρόπο έκφραση pERK σε άλλες περιοχές στόχου VTA. Αριθμοί κυττάρων pERK-IR ανά mm2 σε λευκά και έμπειρα ζώα που είχαν προ-θεραπευθεί με συστηματικό NLX ή φυσιολογικό ορό (Sal) κατά τη διάρκεια συνεδριών ζευγαρώματος και εκτέθηκαν στα συμφραζόμενα (Cue) ή στο κλουβί στο σπίτι (δεν υπάρχουν ενδείξεις) στο ACA (A), PL (B), IL (C) και BLA (D). Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν μέση ± SEM. * υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα μάρτυρα που δεν είχαν υποβληθεί σε αγωγή με αλατόνερο (Naive Sal-No Cue και Exp Sal-No Cue). # υποδεικνύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με τα άτομα που έχουν υποβληθεί σε σεξουαλική εξέταση που δεν είχαν υποβληθεί σε θεραπευτική αγωγή με Sal (Naive Sal + Cue).

Για τη στήριξη της υπόθεσής μας, η θεραπεία με ναλοξόνη κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας εξασθένησε σημαντικά την επαγωγή του pERK από τα κλινικά συναισθήματα που σχετίζονται με το φύλο. Η έκφραση pERK σε αυτούς τους έμπειρους άνδρες που έλαβαν θεραπεία με ναλοξόνη (Exp NLX + Cue) δεν διέφερε από την έκφραση pERK κατά την έναρξη σε οποιαδήποτε από τις σεξουαλικά αθώες ή έμπειρες ομάδες ελέγχου που λήφθηκαν από τα κλουβιά στο σπίτι (Naive Sal-No Cue ή Naive NLX- Δεν Cue). Επιπλέον, η έκφραση ρΕΚΚ στα έμπειρα αρσενικά που είχαν υποστεί αγωγή με ναλοξόνη (Exp NLX + Cue) ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε σύγκριση με έμπειρα ζώα που έλαβαν αγωγή με φυσιολογικό ορό (Exp Sal ​​+ Cue) σε πυρήνα NAc (Σύκο. 7A; p = 0.002) και τις υποπεριοχές του mPFC (Σύκο. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

Στο κέλυφος NAc, η ανάλυση αμφίδρομης ANOVA δεν έδωσε στατιστικά σημαντικές επιδράσεις των παραγόντων έκθεσης και της θεραπείας με ναλοξόνη. Εντούτοις, μια σύγκριση ανά ζεύγος έδειξε ότι η έκθεση από την ουσία προκάλεσε pERK στην αγωγή με αλατούχο σεξουαλικώς έμπειρη ομάδα (Exp SAL + Cue) σε σύγκριση με την ομάδα που δεν είχε εκτεθεί σε αθώα που δεν είχε υποβληθεί σε αγωγή με Saline (Σύκο. 7B. Άκυρο SAL-No Cue: p = 0.0163).

Ερωτήσεις - Συζήτηση

Η τρέχουσα μελέτη καταδεικνύει ότι η ΕΟΡ που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς, μια φυσική συμπεριφορά ανταμοιβής, προκάλεσε μια ισχυρή αλλά παροδική μείωση του μεγέθους soma των κυττάρων νταπαμίνης VTA. Η μείωση του μεγέθους soma δεν παρατηρήθηκε στους νευρώνες μη ντοπαμίνης VTA ούτε στους νευρώνες της ντοπαμίνης στο κοντινό substantia nigra, υποδηλώνοντας ότι αυτή η αλλαγή ήταν ειδική για τα κύτταρα ντοπαμίνης VTA. Αυτή η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA εμφανίζεται παρόμοια με αυτή που προκαλείται από χρόνια έκθεση σε οπιοειδή (Sklair-Tavron et αϊ., 1996; Russo et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011) και προκάλεσε παρόμοια ανοχή στην ανταμοιβή του εξωγενούς οπιούχου (μορφίνης). Αποδείξαμε ότι η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA είναι κρίσιμη για την μακροπρόθεσμη (συντήρηση) αλλά όχι βραχυπρόθεσμη (ανάπτυξη), ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και σχετιζόμενη με ανταμοιβή επαγόμενη νευρική δραστηριότητα (pERK) στις περιοχές στόχου VTA: NAc και mPFC. Αυτά τα ευρήματα είναι ενδεικτικά ενός ρόλου της πλαστικότητας νταπαμίνης VTA στη μακροπρόθεσμη έκφραση της κληρονομιάς κινήτρων των προγνωστικών συνθηκών φυσικής ανταμοιβής ή της μνήμης ανταμοιβής.

Έχει τεκμηριωθεί ότι η σεξουαλική εμπειρία έχει ως αποτέλεσμα τη διευκόλυνση της επακόλουθης σεξουαλικής συμπεριφοράς, συμπεριλαμβανομένης της ταχύτερης εμφάνισης της έναρξης του ζευγαρώματος και της αυξημένης απόδοσης (Balfour et αϊ., 2004; Pitchers et αϊ., 2010a,b, 2012). Αυτή η διευκόλυνση ή ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς διατηρείται τουλάχιστον για το 28 d μετά από ζευγάρωμα (Pitchers et αϊ., 2012). Επιπρόσθετα, έχει αποδειχθεί ότι η σεξουαλική συμπεριφορά και τα κλινικά συνθήματα που προάγουν την ανταμοιβή φύλου προκαλούν εσωτερίκευση του MOR στο VTA και προκαλούν νευρωνική ενεργοποίηση σε ολόκληρο το μεσολομυϊκό σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των VTA (ντοπαμίνη και νευροπαμίνη νευρώνες), NAc, PFC και BLABalfour et αϊ., 2004, 2006). Είναι καθιερωμένο ότι οι νευρώνες νταπαμίνης VTA διαδραματίζουν κρίσιμο ρόλο στη μάθηση και στην απόδοση της κληρονομιάς κινήτρων των ερεθισμάτων που σχετίζονται με ανταμοιβή (Berridge και Robinson, 1998; Berridge et αϊ., 2009; Flagel et αϊ., 2011) και είναι κρίσιμα για την πρόβλεψη ανταμοιβής (Schultz, 2010). Τα τρέχοντα ευρήματα επεκτείνονται στις τρέχουσες γνώσεις μας αποδεικνύοντας ότι η επαγόμενη από ανταμοιβή νευροπλαστικότητα VTA είναι κρίσιμη για αυτές τις λειτουργίες και εξαρτάται από την ενεργοποίηση του MOR από την EOP στο VTA. Είναι σήμερα άγνωστο ποιο EOP είναι ο συνδέτης MOR που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς των ανδρών. Αν και η β ενδορφίνη και η εγκεφαλίνη εμπλέκονται σε κίνητρα κινήτρων για ενισχυτικά τροφίμων (Hayward et αϊ., 2002), αυτό παραμένει να καθοριστεί για την ανδρική σεξουαλική συμπεριφορά. Έχουμε δείξει προηγουμένως ότι οι νευρώνες β-ενδορφίνης δεν ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια του ζευγαρώματος, ούτε υπάρχουν αυξήσεις στο POMC mRNA. υποδηλώνοντας ότι η β-ενδορφίνη μπορεί να μην είναι η κρίσιμη ΕΟΠ που δρα στο VTA κατά τη διάρκεια της ζευγαρώματος (Davis et αϊ., 2007). Αυτή η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA ήταν ουσιώδης για τη νευρική δραστηριότητα στα mPFC, NAc και VTA μετά την έκθεση στους περιβαλλοντικούς δείκτες για τη σεξουαλική επιβράβευση. Επιπλέον, η πλαστικότητα νταπαμίνης VTA ήταν κρίσιμη για τη μακροπρόθεσμη έκφραση της αυξημένης έναρξης και της απόδοσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Αντίθετα, η νευροπλαστικότητα του VTA που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία δεν ήταν απαραίτητη για την ηδονική ανταπόκριση, καθώς η ανταμοιβή φύλου (που καθορίζεται από την CPP) και η βραχυπρόθεσμη διευκόλυνση των σεξουαλικών κινήτρων και επιδόσεων (κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής εμπειρίας ή του 1 d αργότερα)Mehrara και Baum, 1990). Αντ 'αυτού, τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι η νευροπλαστικότητα νταπαμίνης VTA μεσολαβεί στον πιο μακροπρόθεσμο (7 d μετά την τελευταία σεξουαλική εμπειρία, Pitchers et αϊ., 2012) έκφραση της "θέλησης" της σεξουαλικής επιβράβευσης και των ενισχυμένων κίνητρων απαντήσεων σε συνθέσεις ζευγαρώματος (Miller και Baum, 1987; Berridge και Robinson, 1998).

Τα σεξουαλικά έμπειρα ζώα επέδειξαν διασταυρούμενη ανοχή στην ανταμοιβή μορφίνης, παρόμοια με τις επιδράσεις του τροχού που τρέχει σε ποντίκια, μια άλλη φυσική ανταμοιβή συμπεριφορά, αποτέλεσμα που αποκλείστηκε από τη θεραπεία με ναλοξόνη (Lett et αϊ., 2001, 2002) και προσδιορίστηκε ότι εξαρτάται από την πλαστικότητα κυττάρων ντοπαμίνης VTA (τρέχον ευρήματα). Παρόμοια με τις φυσικές ανταμοιβές, η επανειλημμένη έκθεση στα οπιούχα μορφίνη ή ηρωίνη οδηγεί σε παροδική μείωση του μεγέθους της ντοπαμίνης Soma (Sklair-Tavron et αϊ., 1996; Spiga et αϊ., 2003; Russo et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Επιπλέον, η έκθεση σε οπιούχα με σύντομες περιόδους διακοπής προκαλεί ανοχή ανταμοιβής, όπως απαιτείται από τις υψηλότερες δόσεις ναρκωτικών που απαιτούνται για τη σύσταση ανταμοιβών ενώσεις (Shippenberg et αϊ., 1987; Russo et αϊ., 2007) και προκαλεί την αυτο-χορήγηση των ζώων για την κλιμάκωση της πρόσληψης φαρμάκων (Ahmed et αϊ., 2000; Walker κ.ά., 2003). Ως εκ τούτου, τα EOP και τα οπιούχα δρουν σε κοινά νευρικά υποστρώματα για να προκαλέσουν ανοχή ανταμοιβής κατά τη διάρκεια της πρόωρης απόσυρσης, η οποία μπορεί να αντανακλά έναν αντισταθμιστικό ομοιοστατικό μηχανισμό για την εξουδετέρωση της διέγερσης με επαναλαμβανόμενη έκθεση (Koob και Le Moal, 2005). Αντίθετα, κατά τη μακροχρόνια αποχή από τα ναρκωτικά με οπιοειδή, η ανοχή αντιστρέφεται σε μια ευαισθησία στις ανταμείβοντας ιδιότητες του φαρμάκου (Χάρις και Άστον-Τζόουνς, 2003; Aston-Jones και Harris, 2004; Harris και Gewirtz, 2004). Είναι ενδιαφέρον ότι η σεξουαλική εμπειρία που ακολουθείται από μια περίοδο αποχής από το σεξ του 7-28 d έχει διαπιστωθεί ότι προκαλεί διασταυρούμενη ευαισθητοποίηση για ψυχοδιεγερτική ανταμοιβή (Pitchers et αϊ., 2010a), η οποία εξαρτάται από την επαγόμενη από ζευγαρώματα έκφραση deltaFosB και την ενεργοποίηση του 1 υποδοχέα ντοπαμίνης στο ΝΑο (Pitchers et αϊ., 2013). Ως εκ τούτου, η εμπειρία σεξουαλικής ανταμοιβής προκαλεί ταυτόχρονη ανοχή ανταμοιβής οπιούχων και ευαισθητοποίηση ψυχοδιεγερτικής επιβράβευσης, αν και παραμένει να ελεγχθεί η παρατεταμένη περίοδος αποχής από σεξουαλική επαφή στην ανοχή ανταμοιβής μορφίνης. Θεωρούμε ότι αυτές οι αντίθετες επιδράσεις στην ανταμοιβή των φαρμάκων μπορεί να μεσολαβούν από διαφορετικές μορφές νευρικής πλαστικότητας στις διάφορες περιοχές του μεσολομυϊκού συστήματος: η δράση VTA EOP και η πλαστικότητα της ντοπαμίνης διαμεσολαβούν στην ανοχή ανταμοιβής οπιούχων (τρέχουσα μελέτη), ενώ η έκφραση NAc deltaFosB ελέγχει την ψυχοδιεγερτική ευαισθητοποίηση (Pitchers et αϊ., 2013). Και τα δύο αυτά συμβάντα μπορούν να συμβάλλουν στην κλιμάκωση της λήψης φαρμάκων (Ahmed και Koob, 1998, 1999; Ahmed et αϊ., 2000, 2002, 2003; Walker κ.ά., 2003).

Οι μοριακοί μηχανισμοί με τους οποίους η ΕΟΡ επηρεάζει τους νευρώνες νταπαμίνης VTA κατά τη διάρκεια της φυσικής ανταμοιβής συμπεριφοράς παραμένουν άγνωστες. Η οδός IRS2-Akt-mTORC2 είναι ένας κύριος μεσολαβητής μειωμένου μεγέθους soma στο VTA που προκαλείται από επαναλαμβανόμενη μορφίνη (Jaworski et αϊ., 2005; Russo et αϊ., 2007; Mazei-Robison et αϊ., 2011). Η επανειλημμένη χορήγηση μορφίνης που προκαλείται από αλλαγές στο μέγεθος των νευρώνων ντοπαμίνης στο VTA μπορεί να προληφθεί με ενδοφλέβιες ενδοφλέβιες εγχύσεις εγκεφαλικού νευροτροφικού παράγοντα (BDNF, Sklair-Tavron και Nestler, 1995). Το BDNF ενεργοποιεί αυτή τη διαδρομή μέσω σηματοδότησης TrkB (Russo et αϊ., 2007), μια κινάση υποδοχέα με υψηλή συγγένεια για BDNF και μέρος της οδού IRS2-Akt (Seroogy και Gall, 1993; Numan και Seroogy, 1999), και εκφράζεται σε ντοπαμίνη και GABA νευρώνες στο VTA. Η μείωση της ρύθμισης των διαφόρων συνιστωσών της οδού IRS2-Akt με τη χρήση τεχνολογίας μεταφοράς γονιδίων ιογενών φορέων μιμείται τα αποτελέσματα της χρόνιας έκθεσης σε οπιούχα. Επιπλέον, τα αποτελέσματα της έκθεσης σε οπιούχα μπορούν να διασωθούν με την αποκατάσταση αυτής της οδού σηματοδότησης (Russo et αϊ., 2007) και η υπερέκφραση ενός συστατικού του mTORC2 αποτρέπει τη επαγόμενη από τη μορφίνη μείωση VTA του ντοπαμίνης soma (Mazei-Robison et αϊ., 2011). Επομένως, η προηγούμενη εργασία που διερευνά τις επιδράσεις των χρόνιων οπιούχων στο μέγεθος VTA ντοπαμίνης soma δείχνει ότι η προκαλούμενη από μορφίνη downregulation της οδού IRS2-Akt-mTOR είναι και επαρκής και αναγκαία για αυτό το αποτέλεσμα (Mazei-Robison και Nestler, 2012). Έτσι, είναι δελεαστικό να υποθέσουμε ότι τα αποτελέσματα της σεξουαλικής εμπειρίας στη νευροπλαστικότητα νταπαμίνης VTA μεσολαβούν παρομοίως από το BDNF και την οδό IRS2-Akt-mTORC2.

Συμπερασματικά, η τρέχουσα μελέτη κατέδειξε ότι η νευροπλαστικότητα του VTA προκαλείται από την εμπειρία με τη φυσική ανταμείβοντας συμπεριφορά, ιδίως από την επαναλαμβανόμενη αρσενική σεξουαλική συμπεριφορά. Συγκεκριμένα, η ΕΟΡ δρουν στο VTA για τη μείωση του μεγέθους της σαρκώδους ντοπαμίνης, η οποία υποτίθεται ότι σχετίζεται με αυξημένη νευρική διεγερσιμότητα και λιγότερη παραγωγή ντοπαμίνης που οδηγεί σε ένα υποδωπαμινεργικό σύστημα και μεταβάλλει τη λειτουργία του μεσολομυϊκού συστήματος σε απόκριση σε συνθήματα που προβλέπουν τη σεξουαλική ανταμοιβή. Επιπλέον, η νευροπλαστικότητα του VTA είναι κρίσιμη για το κίνητρο των κινήτρων και την ανταμοιβή της μνήμης, αλλά όχι για τις ηδονικές επιπτώσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Τέλος, η νευροπλαστικότητα του VTA που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή, ακολουθούμενη από μια σύντομη περίοδο ανταμοιβής ανταμοιβής, επηρεάζει την ανταμοιβή των οπιούχων και μπορεί συνεπώς να επηρεάσει την ευπάθεια στην ανάπτυξη της τοξικομανίας.

Υποσημειώσεις

  • Λήφθηκε τον Ιανουάριο 12, 2014.
  • Η αναθεώρηση έλαβε τον Μάιο 17, 2014.
  • Αποδεκτό May 20, 2014.

  • Η έρευνα αυτή υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Καναδικό Ινστιτούτο Έρευνας Υγείας στο LMC και το Συμβούλιο Ερευνών Φυσικών Επιστημών και Τεχνολογίας στην KKP

  • Οι δημιουργοί ανακοίνωσαν μη ανταγωνιζόμενα οικονομικά συμφέροντα.

  • Η αλληλογραφία θα πρέπει να απευθύνεται στο Δρ Lique M. Coolen, στο Πανεπιστήμιο του Μισισιπή, στο Τμήμα Φυσιολογίας και Βιοφυσικής, στο 2500 North State Street, στο Jackson, MS 39216-4505. [προστασία μέσω email]

Αναφορές

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Αρσενική σεξουαλική συμπεριφορά αρουραίων. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Μετάβαση από μέτρια έως υπερβολική λήψη φαρμάκων: αλλαγή στο ηδονικό σημείο αναφοράς. Επιστήμη 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Μακράς διάρκειας αύξηση του σημείου ρύθμισης για αυτοκατανάλωση κοκαΐνης μετά από κλιμάκωση σε αρουραίους. Ψυχοφαρμακολογία 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Επίμονη αύξηση του κινήτρου για λήψη ηρωίνης σε αρουραίους με ιστορικό κλιμάκωσης ναρκωτικών. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Μάρκου Α

    (2002) Νευροβιολογικές ενδείξεις για ηδονική αλλοστάση που σχετίζεται με κλιμάκωση της χρήσης κοκαΐνης. Nat Νευροσκι 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Η κλιμάκωση της αυτοκατανομής της κοκαΐνης δεν εξαρτάται από τα τροποποιημένα επίπεδα κοκαΐνης που προκαλούνται από πυρήνα πυρήνα accumbens. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Υποστρώματα εγκεφάλου για αυξημένη αναζήτηση φαρμάκων κατά τη διάρκεια παρατεταμένης απομάκρυνσης. Νευροφαρμακολογία 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Η σεξουαλική συμπεριφορά και τα περιβαλλοντικά συναισθήματα που σχετίζονται με το φύλο ενεργοποιούν το μεσολομυϊκό σύστημα σε αρσενικούς αρουραίους. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Πιθανές συνεισφορές αποχωριστών από τον μεσαίο προμετωπιαίο φλοιό σε νευρική ενεργοποίηση μετά από σεξουαλική συμπεριφορά στον αρσενικό αρουραίο. Νευροεπιστήμες 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Πρωτεΐνες νευροεμφυτευμάτων και το σύστημα μεσολομυϊκής ντοπαμίνης: κοινή ρύθμιση από χρόνια μορφίνη και χρόνια κοκαΐνη στην κοιλιακή τμηματική περιοχή του αρουραίου. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Ποιος είναι ο ρόλος της ντοπαμίνης σε ανταμοιβή: ηδοντική επίδραση, μάθηση ανταμοιβής ή κίνητρο; Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Αναλύοντας τα συστατικά της ανταμοιβής: "αρέσουν", "θέλουν" και μαθαίνουν. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum Κ,
    2. Werner Τ,
    3. Carnes S,
    4. Carnes Ρ,
    5. Bowirrat Α,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman Μ,
    8. Χρυσό Μ

    (2012) Το φύλο, τα ναρκωτικά και το rock 'n' roll: υποθέτοντας την κοινή μεσοσχηματική ενεργοποίηση ως συνάρτηση του πολυμορφισμού των γονιδίων επιβράβευσης. J Psychoactive Drugs 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Η περιφερειακή ηλεκτρική διέγερση αναστέλλει τη μείωση του μεγέθους των κυττάρων και το αυξημένο επίπεδο BDNF στην κοιλιακή περιοχή τμηματοποίησης σε χρόνιους αρουραίους που υποβλήθηκαν σε θεραπεία με μορφίνη. Brain Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden ΚΑ,
    5. Coolen LM

    (2007) Ενεργοποίηση νευρώνων του POMC κατά τη διάρκεια της γενικής διέγερσης αλλά όχι της σεξουαλικής συμπεριφοράς σε αρσενικούς αρουραίους. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Δυναμικές αλλαγές στην εκροή ντοπαμίνης nucleus accumbens κατά τη διάρκεια του αποτελέσματος Coolidge σε αρσενικούς αρουραίους. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj Α,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Ένας επιλεκτικός ρόλος για την ντοπαμίνη στην εκμάθηση ερεθισμού-ανταμοιβής. Φύση 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Απολαύσεις ανάμειξης: ανασκόπηση των επιπτώσεων των ναρκωτικών στη σεξουαλική συμπεριφορά στους ανθρώπους και τα ζωικά μοντέλα. Ο ορνός Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Wise RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Η μεθαμφεταμίνη δρα σε υποπληθυσμούς νευρώνων που ρυθμίζουν τη σεξουαλική συμπεριφορά σε αρσενικούς αρουραίους. Νευροεπιστήμες 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Αυξημένη έκπληξη κατά τη διάρκεια της απόσυρσης από την οξεία μορφίνη: ένα μοντέλο απόσυρσης και άγχους από τα οπιοειδή. Ψυχοφαρμακολογία 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Η Aston-Jones G

    (2003) Τροποποιημένο κίνητρο και εκμάθηση μετά την απόσυρση οπιοειδών: στοιχεία για παρατεταμένη δυσλειτουργία της επεξεργασίας ανταμοιβής. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Χαμηλή MJ

    (2002) Επιλεκτικό έλλειμμα ανταμοιβής σε ποντίκια που δεν έχουν β-ενδορφίνη και εγκεφαλίνη. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena ΝΜ,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Φυσικός εθισμός: ένα μοντέλο συμπεριφοράς και κυκλώματος που βασίζεται στην εξάρτηση από ζάχαρη σε αρουραίους. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Νευρικοί μηχανισμοί εθισμού: ο ρόλος της μάθησης και της μνήμης που σχετίζονται με τη ανταμοιβή. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) Η παρεμπόδιση του υποδοχέα GABA (A) στην πρόσθια κοιλιακή τμηματική περιοχή αυξάνει τα εξωκυτταρικά επίπεδα ντοπαμίνης στους πυρήνες των αρουραίων. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Έλεγχος της δενδριτικής αρθροποίησης με τον στόχο του μονοπατιού ραπαμυκίνης από φωσφοϊνοσιτίδιο-3'-κινάση-Akt-θηλαστικό. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. North RA

    (1992) Τα οπιοειδή διεγείρουν τους νευρώνες της ντοπαμίνης μέσω της υπερπόλωσης των τοπικών interneurons. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte Ρ,
    3. Kalivas PW

    (1992) Ρύθμιση της απελευθέρωσης σωματοδεντριμικής ντοπαμίνης στην κοιλιακή τμηματική περιοχή από οπιοειδή και GABA: μια in vivo μελέτη μικροδιάλυσης. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Ο πλαστικότητα του νευροκυκλώματος ανταμοιβής και η "σκοτεινή πλευρά" του εθισμού στα ναρκωτικά. Nat Νευροσκι 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Ένα βελτιωμένο μέσο στήριξης για μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Η ναλοξόνη εξασθενεί την προαπαιτούμενη θέση που προτιμάται από τον τροχό που τρέχει σε αρουραίους. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Η προηγούμενη εμπειρία με τη λειτουργία του τροχού προκαλεί διασταυρούμενη αντοχή στην ανταμείβοντας δράση της μορφίνης. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Γερμανική DC

    (1984) Ηλεκτροφυσιολογικά στοιχεία για διέγερση νευρώνων ντοπαμίνης στην κοιλιακή περιοχή του νωτιαίου μυελού αρουραίων από μορφίνη. Νευροεπιστήμες 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish Μ,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et αϊ.

    (2011) Ρόλος για σηματοδότηση mTOR και νευρωνική δραστηριότητα σε επαγόμενες από μορφίνη προσαρμογές σε κοιλιακούς νευρώνες ντοπαμίνης κοιλιακής περιοχής. Νευρώνας 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Επαγόμενη από οπιοειδή μοριακή και κυτταρική πλαστικότητα της κοιλιακής τεκτονικής περιοχής και των νευρώνων της κατεχολαμίνης coeruleus locus. Κρύα άνοιξη Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Η ναλοξόνη διαταράσσει την έκφραση αλλά όχι την απόκτηση από αρσενικούς αρουραίους μιας κλινικής ανταπόκρισης απόκρισης θέσης για ένα θηλυκό θηλυκό. Ψυχοφαρμακολογία 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Σεξουαλική εμπειρία σε θηλυκά τρωκτικά: κυτταρικοί μηχανισμοί και λειτουργικές συνέπειες. Brain Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Η ναλοξόνη αναστέλλει τη ζευγαρωμένη και κλινική προτίμηση του θηλυκού οισοφάγου σε αρσενικούς αρουραίους αμέσως μετά τον ευνουχισμό. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Διευκόλυνση των σεξουαλικών συμπεριφορών στον αρσενικό αρουραίο που σχετίζεται με ενδοφλέβιες ενέσεις οινοπνεύματος. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Ειδικότητα σήματος MAPK: η σωστή θέση στην κατάλληλη στιγμή. Trends Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Μεταγραφικοί μηχανισμοί εθισμού στα ναρκωτικά. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Ο εγκέφαλος αρουραίου σε στερεοταξικές συντεταγμένες (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand ΝΜ,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Νευροπλαστικότητα στο μεσολομυϊκό σύστημα που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή και την επακόλουθη απολαβή ανταμοιβής. Biol Ψυχιατρική 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon Ε,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) Το DeltaFosB στον πυρήνα accumbens είναι κρίσιμο για την ενίσχυση των αποτελεσμάτων της σεξουαλικής ανταμοιβής. Genes Brain Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Η εμπειρία της φυσικής ανταμοιβής μεταβάλλει την κατανομή και λειτουργία των υποδοχέων AMPA και NMDA στον πυρήνα accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Οι φυσικές ανταμοιβές και τα ναρκωτικά δρουν στους κοινούς μηχανισμούς νευρικής πλαστικότητας με το DeltaFosB ως βασικό μεσολαβητή. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK και p38 MAPK ενεργοποιημένες πρωτεϊνικές κινάσες: οικογένεια πρωτεϊνικών κινασών με ποικίλες βιολογικές λειτουργίες. Microbiol ΜοΙ ΒίοΙ Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar Α,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. Αυτο DW,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Η οδός IRS2-Akt στους νευρώνες ντοπαμίνης του μεσεγκεφάλου ρυθμίζει τις συμπεριφορικές και κυτταρικές αποκρίσεις στα οπιούχα. Nat Νευροσκι 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Πολλαπλές λειτουργίες νευρώνων ντοπαμίνης. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Seroogy KB,
    2. Gall CM

    (1993) Έκφραση νευροτροφινών από ντοπαμινεργικούς νευρώνες μεσαίου εγκεφάλου. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Οι κινητικές ιδιότητες των οπιοειδών: απόδειξη ότι η ενεργοποίηση των δέλτα-υποδοχέων διαμεσολαβεί τις διαδικασίες ενίσχυσης. Brain Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Αντίθετα αποτελέσματα της μορφίνης και των νευροτροφινών, NT-3, NT-4 και BDNF, στους νευρώνες του νευρικού συστήματος locus in vitro. Brain Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Η χρόνια μορφίνη επάγει ορατές μεταβολές στη μορφολογία των μεσολανδικών νευρώνων ντοπαμίνης. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai Μ,
    5. Diana M

    (2003) Ανωμαλίες που προκλήθηκαν από την απόσυρση της μορφίνης στη μικροσκοπία σάρωσης με λέιζερ VTA: ομοεστιακή σάρωση. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Χάρτες εγκεφάλου: δομή του εγκεφάλου αρουραίου (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson Η,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Σεξουαλική ανταμοιβή σε αρσενικούς αρουραίους: επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στις προτιμώμενες τοποθετήσεις που σχετίζονται με την εκσπερμάτιση και τις εισβολές. Ο ορνός Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Ανταπόκριση μέτρησης με το πρότυπο προτιμώμενης θέσης προτίμησης (CPP): ενημέρωση της τελευταίας δεκαετίας. Addict ΒίοΙ 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Σεξουαλικό κίνητρο: εμπλοκή των ενδογενών οπιοειδών στην κοιλιακή περιοχή τρυπήματος. Brain Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Ρύθμιση αρσενικής σεξουαλικής συμπεριφοράς: εμπλοκή εγκεφαλικών οπιοειδών και ντοπαμίνης. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt Η,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Η έκθεση σε χρόνια οπιοειδή προκαλεί αυξημένη αυτο-χορήγηση ηρωίνης σε αρουραίους. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Η νευροβιολογία της δέσμευσης ζευγαριών: πληροφορίες από ένα κοινωνικά μονογαμικό τρωκτικό. Μπροστινή νευροενδοκρινόλη 32: 53-69.

    •