Esprimo kaj distribuo de dopaminaj receptoroj ŝanĝiĝas dinamike en la kerno de ratoj accumbens post retiriĝo de kokainfabrikado. (2010)

Retrovinca proteino

Ĉi tiu metodo estis priskribita detale antaŭe (Boudreau kaj Lupo, 2005; Ferrario et al., 2010). La ratoj estis dekapitaj, iliaj cerboj estis rapide forigitaj, kaj la tuta NAc (aŭ kerno kaj ŝelaj subregionoj) estis dissekcitaj sur glacio de korona sekcio de 2mm akirita uzante cerban matricon. Tuta NAc-histo estis tuj hakita en 400μm-tranĉaĵoj uzante McIllwain-histo-ĉifilon (Vibratome, Sankta Luiso, MO), dum la pli malgrandaj kernaj kaj ŝelaj subregionoj estis pikitaj mane per skalpelo. Tipaĵo tiam estis aldonita al Eppendorf-tuboj enhavantaj glacie malvarman artefaritan CSF spikitan kun 2 mM bis (sulfosuccinimidil) subigita (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). La interkruciĝanta reago permesis daŭrigi 30 min je 4 ° C kun milda agitado, kaj tiam estis finita per aldono de 100mM glicino (10 min ĉe 4 ° C). Ŝtofo estis pelita per mallonga centrifugado, re-suspendita en glacia malvarma liza bufro enhavanta proteinojn kaj fosfatazajn inhibilojn, sonciated por 5-sekundo, kaj centrifugita denove. Alikotoj de la supernatanto estis konservitaj je -80 ° C ĝis analizitaj de Okcidenta blotado.

Western blot-analizo de DARoj en interligita histo

Specimenoj (20-30μg totala proteino / lizato) estis elektroforitaj sur 4-15% Tris-HCl-geleloj (Biorad, Hercules, CA). Proteinoj estis translokigitaj al polivinilidenaj fluoridaj membranoj por imunobluzado per konstanta kurento (1.15mA) por 1.5 h. Malvarmiga bobeno estis uzata por malhelpi troan hejtadon. Kompleta translokigo de altaj molekulaj pecoj estis konfirmita makulante ĝelojn post translokigo kun Coomassie blua. Plue, ni kontrolis, ke interligitaj DAR-proteinoj ne estis detektitaj en la stela ĝelo (datumoj ne montritaj). Post translokiĝo, membranoj estis lavitaj en ddH₂O, sekigita per aero por 1 hr al ĉambra temperaturo (RT), re-hidratita kun 100% MeOH, lavita en bufrita salo 1x Tris (TBS) kaj mergita en 0.1M NaOH, pH 10 por 15 min ĉe RT. Poste, ili estis lavitaj en TBS, blokitaj kun 3% Bovine Serum Albumin (Sigma – Aldrich, Sankta Luiso, MO) en TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, por 1-horo ĉe RT, kaj inkubitaj nokte. je 4 ° C kun antikorpoj rekonantaj la D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P), kaj D3 DAR (1; Mill; 1000; Mill; Kato # AB1786P). D4 kaj D5 DARs ne estis analizitaj pro manko de antikorpoj agnoskantaj ambaŭ retligajn kaj intracelajn ricevilojn. Oni devas rimarki, ke la DAR-antikorpoj uzataj en ĉi tiuj eksperimentoj estis aĉetitaj en 2005-06; Nuntempaj multoj de ĉi tiuj antikorpoj (2009-10) montras malsamajn bandajn padronojn, kiuj ne estas ŝanĝitaj en histo de DAR-frapaj musoj (nepublikigitaj rimarkoj). Post la primara antikva inkubacio, membranoj estis lavitaj kun TBS-T-solvo, inkubitaj por 60 min kun HRP-konjugita kontraŭ-rabista IgG aŭ kontraŭ-musa IgG (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), lavitaj kun TBS- T, rinsigita per ddH₂O, kaj enmiksiĝis en kemiiluminiscencia detektanta substraton (Amersham GE, Piscataway, NJ). Post kiam blots estis evoluigitaj, bildoj estis kaptitaj kun Versa Doc Imaging Programaro (Bio-Rad). Difektaj densecoj de surfacaj kaj intracelaj bandoj estis determinitaj uzante Quantity One-programon (Bio-Rad). Valoroj por surfacaj, intracelulaj kaj totalaj (surfacaj + intracelulaj) proteinaj niveloj estis normaligitaj al totala proteino en la strateto determinita uzante Ponceau S (Sigma-Aldrich) kaj analizitaj kun TotalLab (Non Linear Dynamics, Newcastle, UK). La surfaco / intracelula rilatumo ne postulis normaligon, ĉar ambaŭ valoroj estas determinitaj en la sama strateto. Por ekzameni la specifecon de antikorpoj, studoj de preabsorción estis faritaj por la DAR-antikorpoj kun la peptido uzita por generi ĉiun antikorpon. Antikvaĵo D1, D2, aŭ D3 DAR estis kombinita kun 10-obla troa koncentriĝo de peptido en 500μl de TBS, miksita dum 4-horoj ĉe 4 ° C, diluita al fina volumo de 20ml, aldonita al la membrano, kaj inkubita dumnokte ĉe 4 ° C.

D1 DARoj

Neniuj signifaj diferencoj inter kokaino kaj salaj grupoj estis trovitaj en WD45. Tamen, efikoj de mem-administrado de kokaino estis evidentaj sur WD1. Analizo de la tuta NAc indikis signife pli altan D1 DAR surfacan / intracelan rilatumon en la WD1-Coc-grupo kompare kun grupoj, kiuj mem-administris salan (Fig. 2). Ĉi tio estis atribuebla al modesta kresko de surfacaj D1 DAR-oj kombinitaj kun modesta malkresko en intracelulaj D1 DAR-oj (neniu el ĉi-lastaj du efikoj estis statistike signifaj), en la foresto de ia ŝanĝo en totalaj D1 DAR-niveloj (surfaco + intracelular) (Fig. 2). Ene de la NAc-kerno, neniu signifa efiko estis trovita por iu D1 DAR-mezuro (Fig. 2b). Tamen, la ŝelo de NAc montris ŝanĝojn similajn al tiuj observitaj en la tuta NAc, sed iomete pli fortikaj (Fig. 2c). La surfaco / intracelula D1 DAR-proporcio estis pliigita en la WD1-Coc-grupo pro signifa kresko de surfaco D1 DAR-esprimo. Interĉelaj niveloj estis senŝanĝaj, sed estis tendenco al pliigitaj totalaj D1 DAR-niveloj. En resumo, pli granda porcio de D1 DAR-proteino estis surfac-esprimita en la ŝelo de NAc de WD1-Coc-ratoj kompare kun ratoj WD1-Sal. D1 DAR-distribuo revenis al la kontrolŝtato post 45-tagoj de retiriĝo de kokain-memadministrado.

Figo. 2

D1 DAR surfac-esprimo estis pliigita en la NAc-ŝelo post 1-tago de retiriĝo de kokain-memadministrado

D2 DARoj

En la tuta NAc, la plej granda efiko observita estis malpliigita D2 DAR-esprimo ĉe ratoj, kiuj mem-administris kokainon kompare kun salaj kontroloj (Fig. 3). Ĉi tio estis plej prononcita ĉe WD45, kiam malpliigoj estis observitaj en la surfac-bando, ĉiuj tri intracelulaj bandoj (~ 55, 75 kaj 100kDa), kaj entute D2 DAR-niveloj kompare kun salaj kontroloj. La surfaco / intracelula D2 DAR-proporcio estis iomete sed signife pliigita en la WD45-Coc-grupo, pro pli granda malkresko en intracelular ol surfacaj D2 DARoj, eble indikas ke la ĉeloj kompensas malpliigitan esprimon D2 DAR per distribuado de pli granda parto de disponeblaj D2 DARs al la surfaco. Gravas memori, ke la levita surfaco / intracelula proporcio ne sugestas pliigon de D2 DAR-transdono en ĉi tiu aparta kazo, ĉar la absoluta nivelo de surfac-esprimitaj D2 DARoj malpliiĝis. En la grupo WD1-Coc, la sola signifa efiko estis malkresko en intracelulaj niveloj de la monomero D2 DAR (~ 55kDa), kompare al ambaŭ grupoj WD45-Sal kaj WD1-Sal, kvankam multaj aliaj mezuroj ankaŭ tendencis malpliiĝi (Fig. 3).

Figo. 3

Intracellular kaj surfacaj D2 DAR-niveloj en la NAc malpliiĝis post 45-tagoj de retiriĝo de kokain-memadministrado

Suma malkresko en D2 DAR-esprimo ankaŭ estis evidenta en kernaj kaj ŝelaj subregionoj de la NAc (Fig. 3b kaj 3c, respektive), kvankam efektoj tendencis esti pli prononcitaj en la ŝelo. Tiel, surfacaj D2 DAR-niveloj malpliiĝis ĉe kokainaj ratoj nur sur WD45 en kerno, sed sur WD1 kaj WD45 en ŝelo. Entutaj D2 DARoj malpliigis signife nur en ŝelo. Malpliiĝoj de intracelulaj D2 DAR-bandoj okazis en ambaŭ retiriĝaj tagoj en kaj kerno kaj ŝelo, kvankam estis retiriĝo- kaj region-specifaj diferencoj rilate al kiuj intracelula bando montris statistike signifan efikon. En resumo, D2 DAR-surfaco kaj intracelulaj proteinaj niveloj estis malpliigitaj en la NAc post kokain-memadministrado. Iuj malpliiĝoj estis jam evidentaj per WD1.

D1 DAR surfac-esprimo provizore pliiĝas en la NAc-ŝelo post ĉesigado de kokain-memadministrado

Post mem-administrado de kokaino, D1 DAR surfac-esprimo estis pliigita en la ŝelo de NAc sur WD1 sed normaligita per WD45, dum neniuj ŝanĝoj estis observitaj en la kerno, indikante transigan kreskon limigitan al ŝelo. Similaj rezultoj estis akiritaj en antaŭaj studoj per aŭtradiografia ricevilo. Ben-Shahar et al. (2007) trovita pliigita D1 DAR-denseco en la NAc-ŝelo de ratoj 20 min (sed ne 14 aŭ 60-tagoj) post ĉesigi plilongigitan aliron (6 hr / tago) kokain-mem-administrado, dum neniuj ŝanĝoj estis observitaj en la kerno aŭ post mallonga aliro kun kokaino mem. -administrado (2 hr / tago). Nader et al. (2002) observis malgrandan kreskon de D1 DAR-denseco en ŝelo sed ne kerno de simioj de ruso mortigitaj post la lastaj el 100-kokainaj memadministraj sesioj. Simioj taksis 30 tagojn post ĉesigado de la sama reĝimo montris pliigitan D1 DAR-densecon en rostral NAc kaj en kerno kaj ŝelo ĉe pli kaŭdaj niveloj, sed D1 DAR-denseco normaligis je 90-tagoj (Beveridge et al., 2009). Ĉiuj ĉi tiuj rezultoj, kiel la niaj, indikas transigan kreskon de D1 DAR-niveloj, precipe en ŝelo, post ĉesigo de kokain-memadministrado. Tamen, pli frua studo de ĉi tiu grupo indikis malpliiĝon de D1 DAR-denseco en la NAc (plej fortika en la ŝelo) de rusa simioj, kiuj havis mem-administritan kokainon dum multe pli longa periodo (18 monatoj; Moore et al., 1998a). Malpliiĝinta D1 DAR-ligado en la NAc ankaŭ estis trovita 18 hr post maldaŭrigado de plilongigita alira reĝimo en ratoj, kvankam totala konsumado de kokaino en ĉi tiu studo estis pli alta ol en rataj studoj diskutitaj supre (De Montis et al., 1998). Ĉi tiuj rezultoj indikas, ke D1 DAR-adaptoj dependas de multaj aspektoj de kokaina ekspozicio. Alia konsidero estas, ke aŭtoreradiografio de la riceviloj mezuras totalajn ĉelajn ricevilojn, dum niaj eksperimentoj de interligaj proteinoj povas distingi inter surfacaj kaj intracelaj riceviloj. Interese, imunoblotting studo trovis tendencon al pliigitaj D1 DAR-niveloj en la NAc de homaj kokainaj uzantoj (Worsley et al., 2000).

Ĉu la transira pliiĝo de D1 DAR-supraĵa esprimo, kiun ni observis en la ŝelo de NAc, estas grava por la kovado de avido de kokaino-induktita? Ĉi tio malfacilas taksi, ĉar neniuj studoj testis la efikon de intra-NAc-injekto de agonistoj de D1 DAR aŭ antagonistoj sur induktita kokaino serĉanta hejmen-kaĝon retiriĝon (aŭ induktitan reintegriĝon de kokaino serĉanta estingan trejnadon). Tamen, D1-riceviloj en la meza NAc (ŝelo kaj media kerno) estas implikitaj en kokaina rekomenca restarigo de kokaino serĉanta formorton, ŝajne per mekanismo postulanta kunlabora aktivado de D1 kaj D2 DARs (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt kaj Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Kune kun niaj rezultoj, ĉi tio povus sugesti, ke neŭronoj en la NAc-ŝelo pli respondas al kokaino kun D1-DAR-serĉado en frua retiriĝo pro transira reguligo de D1R. Tamen singardemo devas esti uzata en ekstrapolado de restarigo ĝis inkubaj studoj, ĉar formala trejnado kaj hejm-kaŝa retiriĝo estas asociitaj kun malsamaj neŭroadaptoj en la NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Lupo kaj Ferrario, 2010). Gravas noti, ke D1 DARoj en la basolateral amigdala kaj prefrontal-kortekso gravas ankaŭ por kviet-induktita restarigo de serĉado de kokaino (ekz. Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

Sur ĉela nivelo, ambaŭ presinápticos kaj postsinápticos DARs povas moduli la eksciteblecon de mezaj spinoj neŭronoj, la superreganta ĉela tipo kaj eligo neŭrono de la NAc (Nicola et al., 2000; Aŭ'Donnell, 2003). Ripeta senkontingenta administrado de kokaino estas konata por plibonigi iujn efikojn de D1 DAR-aktivigo en la NAc. Tiel, tagon post unu monato post ĉesigo de kokainina traktado, plibonigita kapablo de agantoj de D1 DAR inhibi la agadon de mezaj spinecaj neŭronoj (pelataj de iontoforetika glutamato) estis observita en la tuta NAc (Henry and White, 1991; 1995). Tamen, la pliigita D1 DAR surfac-esprimo raportita ĉi tie estas malverŝajne klarigi ĉi tiujn antaŭajn rezultojn, ĉar ĝi estas limigita al la ŝelo kaj nur pruviĝis sur WD1. Unu tagon post kokaina defio administrita 10-14 tagojn post ĉesado de ripetaj kokainaj injektoj, Beurrier kaj Maleka (2002) observis plibonigon de DA-mediaciita inhibicio de sinaptaj respondoj en NAc-mezaj spinecaj neŭronoj, kiu estis ŝajne mediaciita de presinaptaj D1-similaj DARoj en glutamataj nervaj fina stacioj. Tamen, eblaj efikoj de la defia injekto (ekzemple, vidu Boudreau et al., 2007 kaj Kourrich et al., 2007), kombinita kun specoj-diferencoj kaj manko de registroj kernaj, malfaciligas kompari iliajn trovojn al niaj. Oni ankaŭ rimarku, ke la DAR agonistoj kaj antagonistoj uzataj de Henry and White (1991); 1995) kaj Beurrier kaj Malenka (2002) ne distingis inter D1 kaj D5 DARoj.

D2 DAR-niveloj malpliiĝas en la NAc post ĉesigado de kokain-memadministrado

La ĉefa efiko observita en nia studo estis malpliiĝo de D2 DAR-proteino en kaj NAc-kerno kaj ŝelo post ĉesigo de kokain-memadministrado rilate al salaj kontroloj. Ĉi tio estis pli prononcita en la ŝelo, kie intracelulaj, surfacaj kaj totalaj bandoj malpliiĝis ambaŭ WD1 kaj WD45. En kerno, D2 DAR surfac-esprimo malpliiĝis nur sur WD45 kaj totalaj D2 DAR-niveloj ne malpliiĝis signife. Pluraj aliaj studoj simile trovis malpliigis D2 DAR-esprimon post ĉesigado de kokain-memadministrado. En simioj de ruso kun ampleksa kokain-mem-administra sperto, D2 DAR-denseco, mezurita kun aŭtoradiografio de riceviloj, malpliiĝis en multaj striaj regionoj inkluzive de NAc-kerno kaj ŝelo kiam histo estis akirita tuj post la lasta kunsido (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Uzante PET, ĉi tiu efiko en la bazaj ganglioj estis detektita ene de 1 semajno de komenci kokainan memadministradon (Nader et al., 2006). La indico ĉe kiu D2 DAR-niveloj reakiras dum retiriĝo eble dependas de totala konsumado de kokaino. En autoradiografia studo, D2 DAR-niveloj en la NAc reakiris por kontroli valorojn post 30 aŭ 90-tagoj de retiriĝo de 100-sesioj de kokain-mem-administrado (Beveridge et al., 2009). Tamen, en studo de PET pri simioj kun pli longa ekspozicio (1-jaro) kaj tiel pli alta totala konsumado de kokaino, 3 de 5 simioj montris reakiron de D2 DAR-niveloj post 90-tagoj dum 2-simioj montris neniun reakiron eĉ post 12-monatoj (Nader et al., 2006). Entute, ĉi tiuj rezultoj konformas bone kun niaj trovoj de malpliigitaj D2 DAR-niveloj dum la retiriĝo.

PET-studoj pri toksomaniuloj al homaj kokainoj ankaŭ trovis reduktitajn nivelojn de D2 DAR en multaj regionoj estriales, inkluzive de ventra striato, kiuj estis evidentaj en frua retiriĝo same kiel post 3-4-monatoj da sentoksiĝo (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Tamen la signifo por konduto ne estas klara, ĉar la havebleco de D2 DAR ne korelaciis kun pozitivaj subjektivaj efikoj de kokaino aŭ la decido preni pli da kokaino post primokula dozo (Martinez et al., 2004). Estas grave noti, ke kvankam la avido de kokaino induktita de provoj montras kreskon de tempo dependanta dum retiro ("inkubacio"), ĉi tio ne okazas por serĉado de kokaino kun kokaino (Lu et al., 2004a). Sekve, la rezultoj de Martinez et al. (2004) lasu malferma la eblecon, ke D2 DAR-disponebleco eble rilatas al serĉado de kokaino induktita de la kuracisto, la fokuso de la inkuba modelo studita ĉi tie. Malalta havebleco D2 DAR en homaj kokainaj uzantoj rilatas al malkreska frontala kortika metabolo (Volkow et al., 1993). Kune kun aliaj ŝanĝoj, ĉi tio povus kontribui al la perdo de kontrolo okazanta kiam la toksomaniuloj estas elmontritaj al drogoj aŭ al drogoj, kaj al pli granda saleco de drogoj kompare al ne-drogaj rekompencoj (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Oni devas rimarki, ke malpliiĝis D2 DAR-niveloj en PET-studo povas indiki altan DA-liberigon anstataŭ ol malpliiĝis D2 DAR-nivelojn, sed lastatempaj rezultoj argumentas kontraŭ ĉi tiu klarigo kaze de kokainaj dependaj pacientoj (Martinez et al., 2009). Plue, postmortema studo de homaj kokainaj uzantoj trovis tendencon al malpliigitaj D2 DAR-niveloj en la NAc uzante imunoblotting (Worsley et al., 2000).

Studoj pri toksomaniuloj de homa kokaino ne povas determini, ĉu malkreskanta havebleco de D2 DAR estas antaŭdirektiga trajto aŭ rezulto de kokaina ekspozicio, sed aliaj rezultoj indikas, ke ambaŭ veras. Unuflanke, eksperimentoj en homoj ne-drogemaj homoj trovis inversan korelacion inter D2 DAR-havebleco kaj raportoj pri "ŝatado de drogoj" kiam administrita metilfenidato (Volkow et al., 1999; 2002). Ĉi tiuj trovoj sugestas, ke malalta D2 DAR-havebleco eble pliigos vundeblecon al toksomanio. Simila konkludo estas subtenata de studoj en simioj de rizo. En sociaj gastigitaj simioj, la atingo de socia regado pliigas la haveblecon de D2 DAR en la striato kaj tio estas asociita kun pli malalta sentiveco al la plifortigaj efikoj de kokaino kompare al subordaj simioj (Morgan et al., 2002). Socia statuso ankaŭ estas korelaciita kun striaj D2 DAR-havebleco en drogaj liberaj homaj volontuloj (Martinez et al., 2010). Aliflanke, ambaŭ studoj pri aŭradiografio pri PET kaj ricevilo montras, ke longtempa administrado de kokaino malpliigas striatal D2 DAR-receptoron en individuaj gastigitaj simioj, kiel diskutite pli supre (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Kronika kokain-memadministrado ankaŭ ŝajnas malpliigi D2 DAR-haveblecon en regantaj socie loĝataj simioj (Czoty et al., 2004). Tiel, post longtempa mem-administrado de kokaino, ne plu estis signifaj diferencoj en la havebleco de riceviloj de D2 aŭ plifortigantaj efikoj de kokaino inter regantaj kaj subordaj simioj (Czoty et al., 2004). Tamen altaj D2-DAR-niveloj reaperis ĉe la regantaj simioj dum abstinado kaj ĉi tio rilatis kun pli longa latencia reago al noveco, trajto prognozanta malpliigitan sentemon al la plifortigaj efikoj de kokaino (Czoty et al., 2010).

Kiel ĉe homoj kaj simioj, studoj pri ratoj indikas, ke malalta havebleco de D2 DAR estas riska faktoro por vundebleco al kokaino. Tiel, PET-studoj ĉe ratoj kun alta impulsiveco (trajto asociita kun pliigita kokain-memadministrado) montras reduktitan haveblecon de D2 / D3 DAR en la ventrala striatumo (Dalley et al., 2007). D2 DAR-niveloj en la NAc ankaŭ reduktiĝas en ratoj, kiuj montras altan lokomotivan respondon al noveco, alia trajto asociita kun vundebleco al toksomanio (Hokoj et al., 1994). Niaj rezultoj en ratoj indikas, ke malpliigitaj D2 DAR-niveloj en la NAc ankaŭ povas esti konsekvenco de ripetita kokainekspozicio, konforme al studoj en simioj kaj homoj (supre). Tamen du aŭtoradiografiaj receptoroj en ratoj trovis rezultojn, kiuj diferencas de niaj. Ben-Shahar et al. (2007) ne observis malpliiĝantajn nivelojn de D2 DAR en la NAc post retiriĝo (20 min, 14 tagoj de 60 tagoj) de plilongigita reĝimo de kokain-memadministrado simila al nia propra (6 hr / tago), kvankam malpliigoj estis observitaj en la ŝelo de NAc post limigita reĝimo de aliro (2 hr / tago) kaj 14 tagoj de retiro (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) trovis neniujn ŝanĝojn en D2 DAR-niveloj en kerno aŭ ŝelo 24 h post ĉesigo de limigita aliro kun kokain-memadministrado (2 hr / tago), kvankam D2 DAR-niveloj ja malpliiĝis en jugosaj kokainaj kontroloj. Kiel notite pli supre, aŭtoreradiografio de riceviloj mezuras totalajn ĉelajn ricevilojn, dum studoj pri PET kaj proteino interligaj mezuroj mezuras ĉelajn surfacajn ricevilojn.

Entute, studoj pri la rilato inter D2 DAR-niveloj kaj kokain-memadministrado subtenas modelon, en kiu D2 DAR-oj normale limigas kokain-memadministradon. Tial ni sugestas, ke la malpliiĝintaj D2 DAR-niveloj observitaj en niaj eksperimentoj povus kontribui al kaŝe induktita kokaino serĉanta retiriĝon de kokaino. Precipe, la fakto, ke D2 DAR surfac-esprimo en la NAc-kerno malpliiĝis sur WD45 sed ne WD1, kombinita kun ŝlosila rolo por NAc-kerno en cue-induktita kokaino, sugestas, ke tempo-dependa D2 DAR-malsuprenreguligo en la NAc-kerno eble kontribuu al la temp-dependa intensigo de serĉado de kokaino induktita de kuracisto. Ĉi tio antaŭdirus, ke intra-NAc-infuzaĵo de D2-agonisto dum retiriĝo reduktus serĉadon de kokaino induktita de cue. Bedaŭrinde, neniuj studoj ekzamenis efikojn de intra-NAc D2 DAR-drogoj en la inkuba modelo. Aliflanke, studoj pri restarigo de kokaino indikas, ke D1 kaj D2 DARs en la ŝelo kaj meza kerno laboras kunlabore por antaŭenigi serĉadon de kokaino (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt kaj Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Surbaze de ĉi tiuj trovoj, la malpliigita esprimo D2 DAR observita en niaj eksperimentoj povus esti antaŭvidita malpliigi kokainan serĉadon, tio estas, produkti efikon kontraŭ la retiro-dependa intensiĝo, kiu efektive estas observita. La diskreteco povas reflekti problemojn enkondukitajn per ĝeneraligado de restarigo de kokaino post formorto-trejnado ĝis induktita kokaino serĉanta retiriĝon.

Tempo-dependa kresko de D3 DAR surfac-esprimo okazas en la NAc-kerno post ĉesigado de kokain-memadministrado

Studoj pri D3 DAR-preferantaj drogoj en kokain-memadministrado kaj restarigaj paradigmoj sugestas, ke D3 DAR-antagonistoj eble utilos por trakti kokainan toksomanion kaj precipe en reduktado de reakciado al kokaino-asociaj indikoj (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi kaj Gardner, 2007). Ĉi tiuj rezultoj implicas, ke aktivigo de D3 DAR per endogena DA eble okupiĝas pri mediado serĉanta kokainon. Niaj rezultoj montras, ke D3 DAR surfac-esprimo en la NAc-kerno estas senŝanĝa sur WD1 de plilongigita alira kokain-memadministrado sed pliiĝis sur WD45 en asocio kun la kovado de kokaa avido. D3 DAR surfac-esprimo ne pliiĝis signife en la ŝelo, kvankam ekzistis malgranda sed signifa kresko de la surfaco / intracelula rilatumo. Konsiderante la rolon de D3 DAR-transdono en respondado de kokaino-asociaj kvereloj kaj la graveco de kerno por serĉado de kokaino induktita de kukino, ĝi estas tenta konjekti, ke pliigis D3 DAR-surfacan esprimon en la NAc-kerno kontribuita al la inkubacio de induktita kokaino. avido, kiu estas observata sur WD45. Tamen, la neŭra loko ĉe kiu D3 DAR-antagonistoj agas por redukti serĉadon de kokaino ne estis establita. Specife, neniuj studoj ekzamenis la efikon de intra-NAc-injekto de D3 DAR preferantaj drogojn sur tae-induktita kokaino-serĉado. En malsama modelo, Schmidt et al. (2006) trovis, ke injekto de la aganto de D3-preferata PD 128,907 en kernon aŭ ŝelon ne produktis restarigon de kokaino serĉanta formorton.

Niaj rezultoj estas ĝenerale konformaj al studoj pri aŭradiografiaj riceviloj, kiuj mezuris totalajn D3 DAR-nivelojn en la NAc post kokaina ekspozicio. Staley and Mash (1996) raportis ke D3 DAR-ligado estis pli alta en la NAc de kokainaj superdozaj viktimoj kompare kun aĝaj egalitaj kontroloj. Post ekspozicio al kokaino en preferita paradigma loko kaj tri tagoj de retiriĝo, musoj elmontris pliigitan ligon de D3 DAR en la kerno kaj ŝelo de NAc (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) mezuris D3 DAR-ligadon en ratoj kun vasta mem-administra sperto de kokaino, kiuj estis provitaj pri restarigo de kokaino post diversaj retiriĝaj periodoj kaj poste mortigis 24 h poste. D3 DAR-ligado en la NAc estis senŝanĝa sur WD1 sed pliiĝis post pli longa tempo (WD31-32), konforme al nia observado de tempo-dependa kresko. Plue, drogokuracado dum retiriĝo, kiu reduktis kokainan serĉadon, ankaŭ mildigis la kreskon de D3 DAR-ligado, sugestante, ke la regregado de D3 DAR estas funkcie ligita al serĉado de kokaino. Oni devas rimarki, ke D3 DAR pliiĝas je Neisewander et al. (2004) estis signifaj en la kerno dum nur tendencoj estis observitaj en ŝelo, sed la subregionoj estis analizitaj en vizaĝa porcio de la NAc kie kerno kaj ŝelo estas malpli distingaj. Nia analizo estis farita sur kerno kaj ŝelo de vizaĝaj kaj kaŭdaj porcioj de la NAc.

Ĉi tiu laboro estis subtenita de DA009621, DA00453 kaj NARSAD Distinguished Investigator Award al MEW, DA020654 al MM, kaj antaŭdoktora Nacia Esplora Premio DA021488 al KLC.