Detektado de molekulaj ŝanĝoj en metametamina-aktivigitaj Fos-esprimantaj neŭronoj de ununura rato dorsa striatumo uzanta fluoreskencan aktivigitan ĉelon (FACS) (2013)

Metametetamino kaj aliaj drogoj aktivigas malgrandan proporcion de ĉiuj neŭronoj en la cerbo. Ni antaŭe disvolvis fluoreskencan aktivigitan ĉelon (FACS) bazitan metodon por karakterizi molekulajn ŝanĝojn induktitaj selecte en aktivigitaj neŭronoj kiuj esprimas la neŭtralan agadon Mark. Tamen, ĉi tiu metodo postulas kunigi specimenojn de multaj ratoj. Ni nun priskribas modifitan modon FACS-bazitan por karakterizi molekulajn ŝanĝojn en Fos-esprimantaj dorsajn striatajn neŭronojn de ununura rato per multiplexa antaŭ-amplifila strategio.

La inmunohistoquímica Fos kaj NeuN (neŭtrala markilo) indikas ke 5-6% de dorsaj striataj neŭronoj estis aktivigitaj 90-min post akraj metametetaminaj injektoj (5 mg / kg, ip) dum malpli ol 0.5% de neŭronoj estis aktivigitaj per salaj injektoj.

Ni uzis FACS por disigi NeuN-etikeditajn neŭronojn en Fos-pozitivaj kaj Fos-negativaj Neŭronoj kaj taksis mRNA-esprimon uzanta RT-qPCR de ĝis malmultaj kvin Fos-pozitivaj neŭronoj. Metametetamina induktita 3-20-faldaj pliigoj de tuja frua geno-arko, homer-2, c-fos, fosB, kaj ĝiaj isoformoj (ΔfosB kaj nova isoformo ΔfosB-2) en Fos-pozitivaj sed ne Fos-negativaj neŭronoj. Tuja frua geno-mRNA-indukto estis 10-falo pli malalta aŭ ausente kiam taksita en senortigitaj specimenoj de ununura dorsa striatum-homogenatoj. Nia modifita metodo ebligas studi unikajn molekulajn ŝanĝojn en neŭronoj aktivigitaj de drogoj aŭ drogokunataj modeloj en kompleksaj diktimoj.

Metametetamino kaj aliaj drogoj aktivigas malgrandan proporcion de ĉiuj neŭronoj en la cerbo. Ni ĉi tie raportas plibonigitan metodon por karakterizi molekulajn ŝanĝojn induktitaj selecte en aktivigitaj neŭronoj, kiuj esprimas la neŭtralan agadon Fos. Ni uzis FACS kune kun celataj PCR-antaŭ-amplifiko por taksi akran metanfetaminon-induktitan genan esprimon de malmultaj kiel 5 Fos-esprantaj neŭronoj de ununura rato dorsala strio. Metametetamino induktis 3-20-faldajn kreskojn de tuja fruaj genoj (IEG) en Fos-pozitivaj sed ne Fos-negativaj neŭronoj. La antaŭ-amplifiĝo de PCR celanta ebligas studi unikajn molekulajn ŝanĝojn en neŭronoj, aktivigitaj de drogoj aŭ drogokunataj modeloj en kompleksaj diktimoj.

2013 eldonita. Ĉi tiu artikolo estas usona registaro kaj estas publika havaĵo en Usono.