Eltiro induktas malsamajn ŝablonojn de FosB / ΔFosB-esprimo en eksterordinaraj svisaj musoj klasifikitaj kiel susceptibles kaj imunaj al etanol-induktita lokomotila sento (2014)

Ŝlosilvortoj

• FosB;
• DeltaFosB;
• Lokomotora sentivigo;
• retiriĝita;
• Kondutebla variado;
• Musoj

1. Enkonduko

La defio de nuna neurobiologia esplorado pri drogodependeco estas kompreni la mekanismojn de neŭtrala plasticeco, kiuj peras la transiron de distra uzado al la perdo de konduta kontrolo de serĉado de drogoj kaj drogado. Unu el la plej gravaj teorioj pri drogomanio, nomita "la malhela flanko de la toksomanio", sugestas, ke estas progreso de impulsemo (rilata al pozitiva plifortigo) al compulsividad (rilata al negativa plifortigo). Ĉi tiu progreso, en kolapsita ciklo, konsistas el la sekvaj ŝtatoj: maltrankvilo / antaŭvido, plenplena toksado, kaj retiro / negativa influo (Koob kaj Le Moal, 2005, Koob kaj Le Moal, 2008 kaj Koob kaj Volkow, 2010). De ĉi tiu scenaro, studoj pri drogodependoj fokusiĝas al la neŭobiologiaj mekanismoj ligitaj al negativaj emociaj statoj aperantaj de ambaŭ akutaj kaj longdaŭraj abstinado. Laŭ la teorio de "la malhela flanko de toksomanio", ŝajnas okazi longdaŭraj kaj konstantaj plastecaj ŝanĝoj en neŭralaj cirkvitoj celantaj limigi rekompencon. Tamen ĉi tiuj ŝanĝiĝoj de plasticeco kondukas al negativa emocia stato, kiu aperas kiam oni malpermesas la aliron al la drogo. Ĉi tiu mekanismo provizas fortan motivigan movon por la establado de dependeco, kaj ankaŭ por ĝia prizorgado.Koob kaj Le Moal, 2005 kaj Koob kaj Le Moal, 2008).

La lokomotora sentivigo estas utila animala modelo bazita sur la fakto, ke pliigoj de subjektivaj efikoj de la medikamentoj laŭ sia ripeta ekspozicio estas similaj al pliigoj de la efikoj de la lokomotoro de stimulaj drogoj.Vanderschuren kaj Kalivas, 2000 kaj Vanderschuren kaj Pierce, 2010). Kvankam lokomotora sentivigado ne imitas kelkajn kondutojn ligitajn al drogomanio, ĝiaj tempaj morfologiaj kaj neŭrokemiaj trajtoj estas paralelaj al tiuj kondukantaj la transiron de distra uzado al drogomanio mem (Robinson kaj Kolb, 1999, Vanderschuren kaj Kalivas, 2000 kaj Vanderschuren kaj Pierce, 2010). Tradicie, lokomotora sentiviga protokolo konsistas el tri fazoj: akiro (ripetata medikamenta ekspozicio), retiro kaj defio (nova kontakto kun la drogo post la retiro). Bedaŭrinde, la plej multaj el la studoj uzantaj la lokomotora sentivigado fokusis nur en la akira kaj defia fazo, superante la retretan periodon.

Estas bone establite, ke ripetata ekspozicio al medikamentoj de misuzo (Perrotti et al., 2008) kaj kronika streĉo (Perrotti et al., 2004) pliigas la esprimon de la transkriba faktoro fosB / deltafosB en la sistemo corticolimbic. FosB / DeltaFosB-akumulado en ĉi tiuj regionoj estis supozita ludi centran rolon en la elasteco al streĉo.Berton et al., 2007 kaj Vialou et al., 2010) kaj en la rekompencaj efikoj de kokaino (Harris et al., 2007 kaj Muschamp et al., 2012), etanolo (Kaste et al., 2009 kaj Li et al., 2010), kaj opioidoj (Zachariou et al., 2006 kaj Solecki et al., 2008). Sekve, estas eble, ke FosB / DeltaFosB modulas kelkajn el la okazaĵoj de neŭtrala plasticeco ligitaj al la sensilo de lokomotora induktita etanolo, kaj ankaŭ al la retiro, kiu rezultas en la akira fazo de lokomotora sentivigo.

Notindas, ke ekzistas individuaj diferencoj observitaj dum la transiro de distra uzado al drogomanuo.Flagel et al., 2009, Georgo kaj Koob, NENIU kaj Swendsen kaj Le Moal, 2011). Ekzemple, musoj DBA / 2 J pli emas respondi ol C57BL / 6 J al etanola induktita lokomotora sentiveco (Phillips et al., 1997 kaj Melono kaj Boehm, 2011a). En outbred svisaj musoj, konduteca variemo koncerne al etanolo induktita lokomotora sentemo estis unue priskribita de Masur kaj dos Santos (1988). De tiam, aliaj studoj montris gravajn neŭrokemiajn ecojn rilatajn al konduta variado en la akiro de etanolo-induktita lokomotora sentivigo (Souza-Formigoni et al., 1999, Abrahão et al., 2011, Abrahão et al., 2012, Quadros et al., 2002a kaj Quadros et al., 2002b). Tamen, ĉi tiuj studoj ne traktis la efikon de konduta variado dum la foriro post la akira fazo de lokomotora sentivigo. En lastatempa studo, nia laboratorio priskribis signifan diferencon inter sentivigitaj kaj ne sentivigitaj svisaj musoj rilate al la esprimo de cannabinoidaj receptoroj de tipo 1 (CB1R) dum retiro. En tiu studo, sentivigitaj (sed ne sensivaj musoj) pliigis esprimon de CB1R en la antaŭfronta kortekso, ventra tegmentala areo, amigdalo, striato kaj hipokampo (Coelhoso et al., 2013).

Donita la bone establitan kondutan ŝanĝeblecon en eksterlandaj svisaj musoj rilate al etanol-induktita lokomotora sentiveco, kaj ke ĉi tiu ŝanĝebleco estas akompanata de apartaj neŭro featuresemiaj trajtoj dum posta retiro, la nuna studo esploris la esprimon de FosB / DeltaFosB ĉe musoj sentivigitaj kaj ne sentemigitaj. (18 h) kaj post 5 tagoj de retiro.

2. Materialo kaj metodoj

2.1. Temoj

Masklaj eksterlandaj svisaj Webster-musoj (EPM-1-Kolonio, San-Paŭlo, SP, Brazilo), origine derivitaj de la albina svisa Webster-linio de la Centro por la Disvolviĝo de Bestaj Modeloj en Biologio kaj Medicino ĉe la Universidade Federal de San-Paŭlo, estis uzataj . Musoj aĝis 12 semajnojn (30-40 g) ĉe la komenco de testado. Grupoj de 10 musoj estis loĝigitaj en kaĝoj (40 × 34 × 17 cm) kun lignopecaj litoj. La temperaturo (20–22 ° C) kaj humideco (50%) kontrolis bestan kolonion estis konservata dum malpeza / malhela ciklo (12/12 h), kun lumoj ekbruligitaj je 07:00 h, kun musaj manĝaĵaj buletoj kaj krana akvo. libitum, krom dum testado. Musoj estis tenataj en ĉi tiuj loĝejaj kondiĉoj dum almenaŭ 7 tagoj antaŭ la komenco de drogokuracado kaj kondutaj testoj. Besta prizorgo kaj eksperimentaj proceduroj estis faritaj laŭ protokoloj aprobitaj de la Etika Komitato pri Besta Prizorgo kaj Uzo de la Universitato (protokola numero: 2043/09), laŭ EU-Direktivo 2010/63 / EU pri bestaj eksperimentoj (http://ec.europa.eu/environmental/chemicals/lab_animals/legislation_en.htm).

2.2. Lokomotora sentivigo

La protokolo de lokomotora sentivigo baziĝis sur antaŭa studo de nia propra laboratorio (Coelhoso et al., 2013). Komence de la protokolo, ĉiuj bestoj estis injektitaj perperitone (ip) kun salozaĵo kaj tuj testitaj en aŭtomatigita agadkesto (Insight, Brazilo) dum 15 min por establi bazan movadon. Du tagojn poste, bestoj ĉiutage injektis etanolon (2 g / kg, 15% p / v en 0.9% NaCl, ip-EtOH-grupo, N = 40) aŭ saloza (simila volumo, ip, - Kontrola grupo, N = 12), dum 21 tagoj. Tuj post la 1-a, la 7-a, la 14-a kaj la 21-a injektoj, bestoj estis metitaj en la agadkaĝon dum 15 min. La horizontala movado en ĉiu situacio estis mezurita per kondutanaliza sistemo (Pan Lab, Hispanio). Kiel atendite ( Masur kaj dos Santos, 1988 kaj Coelhoso et al., 2013), konduteca variado en la lokomotora agado en la 21a tago de akiro permesas al ni distribui la bestojn de EtOH-grupo en 2-subgrupoj: EtOH_High (prenita de la supra 30% de la distribuo) kaj EtOH_Low (prenita de la pli malalta 30% de la distribuo). Tiel, nur la 60% de bestoj estis inkluzivita en la analizo. Ĉi tiu strategio estas identa al tiuj uzataj en la studoj esplorantaj individuajn variablojn ene de la etanola sentiviga paradigmo ( Masur kaj dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Quadros et al., 2002a, Quadros et al., 2002b, Abrahão et al., 2011, Abrahão et al., 2012 kaj Coelhoso et al., 2013).

Post la klasifiko difinanta la eksperimentajn grupojn, ni faris 2 sendependajn eksperimentojn laŭ la tempaj kriterioj de retiriĝa periodo: (i) bestoj submetitaj al la akira fazo kaj oferitaj post 18 h de retiriĝo kaj (ii) bestoj submetitaj al la akira fazo kaj oferitaj post 5 tagoj de retiro. Do ĉi tiu studo konsistis el 3 eksperimentaj grupoj (Kontrolo, EtOH_High kaj EtOH_Low), kiuj estis dividitaj en 2 subgrupojn (18 h kaj 5 tagoj de retiro) (N = 6 por subgrupo). La elekto de ĉi tiuj du tempaj markoj ene de la retiriĝa periodo ŝuldiĝis al la kinetaj aspektoj de FosB kaj DeltaFosB-esprimo post 18 h de retiro (kiel klarigita en la diskuta sekcio), kaj post 5 tagoj de retiro, surbaze de antaŭaj studoj de nia laboratorio kiu esploris iujn neŭrokemiajn trajtojn pri retirperiodo ene de la lokomotora sentiviga paradigmo ( Fallopa et al., 2012 kaj Escosteguy-Neto et al., 2012). Fine, por plenumi korelaciojn inter lokomotora sentiveco kaj FosB / DeltaFosB-esprimo, ni kalkulis la poentaron de lokomotora sentiveco por ĉiu besto, per la formulo: poentaro = (Lokomocio en la 21a tago - Movado en la 1a tago) * 100 / Locomocio en la 1-a tago.

2.3. Immunohistoquímica

Post la respektiva retiriĝa periodo, bestoj estis profunde anestezitaj per koktelo enhavanta ketaminon (75 mg / kg, ip) kaj ksilazinon (25 mg / kg, ip). Post la perdo de kornea reflekso, ili estis perfuzitaj transkardie kun 100 ml da fosfara bufra solvo 0.1 M [fosfata bufra salo (PBS)], sekvita de 100 ml da 4% paraformaldehido (PFA). La cerboj estis forigitaj tuj post trafluado, konservitaj en PFA dum 24 h kaj poste konservitaj en 30% sakarozo / PBS-solvo dum 48 h. Seriaj koronaj sekcioj (30 μm) estis tranĉitaj per frosta mikrotomo kaj konservitaj ene de kontraŭfrosta solvo por esti uzataj en la imunohistoochememiaj proceduroj per libere flosanta makulo.

Por imunohistoochememio, konvencia tekniko de avidino-biotino-imunoperoksidazo estis farita. La cerbaj sekcioj de ĉiuj eksperimentaj grupoj estis inkluzivitaj en la sama kurado, pretraktitaj kun hidrogena peroksidazo (3%) dum 15 min kaj poste lavitaj per PBS dum 30 min. Tiam ĉiuj sekcioj estis elmontritaj dum 30 min en PBS-BSA .5% por eviti nespecifajn reagojn. Poste sekcioj estis kovataj subite kun la ĉefa antikorpa kuniklo kontraŭ-FosB / DeltaFosB (1: 3,000; Sigma Aldrich, Sankta Luiso, MO, Usono. No.cat. AV32519) en solvo de PBS-T (30 ml PBS, 300 μl tritono X-100). Poste sekcioj estis kovataj dum 2 h en biotinilata kapra kontraŭkuniklo IgG duaranga antikorpo (1: 600; Vector, Burlingame, CA, Usono) ĉe ĉambra temperaturo. La sekcioj tiam estis traktataj per avidina-biotina komplekso (Vectastain ABC-Norma ilaro; Vector, Burlingame, Kalifornio, Usono) dum 90 minutoj kaj submetitaj al nikel-intensigita diaminobenzidina reago. Inter ŝtupoj, la sekcioj estis ellavitaj en PBS kaj agititaj sur rotacianto. Sekcioj estis muntitaj sur diapozitivoj kovritaj per gelateno, sekigitaj, senakvigitaj kaj kovritaj.

La jenaj encefalaj regionoj estis analizitaj: prefrontala kortekso [antaŭa cingula kortekso (Cg1), prelimba kortekso (PrL) kaj infralimbic kortekso (IL)], motora kortekso [primara (M1) kaj sekundara (M2)], dorsa striato [dorsomedial-striatum ( DmS) kaj dorsolateral-striatum (DlS)], ventra striatum [kerno kerno accumbens (Acbco) kaj ŝelo (Acbsh), ventra pallidum (VP)], hipokampo [piramida tavolo de Cornus Ammong 1 kaj 3 (CA1 kaj CA3, respektive), granulara tavolo de dentita cirko (DG)], amigdala [basolateria kerno (BlA), kaj centra kerno (CeA)], ventromedial kerno de hipotalamo (VMH) kaj ventra tegmenta areo [antaŭa (VTAA) kaj posta (VTAP) partoj] ( Vidu Fig. 1). Nikon Eclipse E200 mikroskopo konektita al komputilo estis uzata por kapti bildojn de ĉiu sekcio ĉe × 20-pligrandigo. La bildoj estis konservitaj kiel .tiff-arkivoj por posta analizo de imunoreaktiveco FosB / DeltaFosB. La imunoreaktivaj ĉeloj estis kalkulitaj per la programaro ImageJ (NIH Image, Bethesda, MD, Usono). La cerbaj regionoj estis konturitaj sur ĉiu foto laŭ La Stereotaksa Musa Cerba Atlaso (Franklin kaj Paxinos, 1997). Ĉar fotomikrografioj prenitaj per la mikroskopo reprezentas 2.5 × 10³ μm² en 20 × pligrandigo, la kvantigo de FosB / DeltaFosB-etikeditaj ĉeloj estas esprimita kiel la mezumo de imunomakulaj ĉeloj per 2.5 × 10³ μm². La valoroj akiritaj en la grupoj EtOH estis normaligitaj al la kontrolaj valoroj, kaj esprimitaj kiel%. (Kontrolo = 100%).

2.4. Statistika analizo

Komence, Shapiro-Wilk estis uzata por kontroli la normalecon de distribuado de ĉiuj variabloj. La kondutaj rezultoj estis analizitaj per unudirekta ANOVA por ripeta mezuro konsiderante kiel faktoro la 5 periodojn de lokomotora sentiveco: baza, tago 1, tago 7, tago 14 kaj tago 21. La histologiaj rezultoj estis analizitaj per dudirekta ANOVA, konsiderante kiel faktoroj: periodo de retiro (18 h kaj 5 tagoj) kaj eksperimenta grupo (Kontrolo, EtOH_High kaj EtOH_Low). La neparametraj variabloj estis normigitaj en Z-poentaroj por malpliigi la disvastigon de datumoj, kaj poste aplikitaj en la dudirekta ANOVA, kiel antaŭe priskribite. Newman Keuls post-hoc estis uzata kiam necese. Fine ni esploris eblajn korelaciojn inter pozitivaj ĉeloj FosB / DeltaFosB kaj la interpunkcioj de lokomotora sentiveco. Ĉi tiuj korelacioj estis kalkulitaj nur por la kernoj, kie estis trovitaj statistikaj diferencoj inter eksperimentaj grupoj. Ĉar ĉi tiuj diferencoj estis limigitaj al la 5-tagoj de retiro (Vidi rezultojn-sekcion), la valoroj FosB / DeltaFosB konsideritaj en ĉi tiuj korelacioj rilatas al ĉi tiu specifa periodo de retiro. Ĉar ĉi tiuj diferencoj estis limigitaj al la 5-tagoj de retiro (Vidu rezultojn-sekcion), la valoroj FosB / DeltaFosB konsideritaj en ĉi tiuj rilatoj rilatas al ĉi tiu specifa tempo de retiro. La signifa nivelo estis fiksita je 5% (p <0.05).

3. Rezulto

3.1. Lokomotora sentivigo

ANOVA por ripetaj mezuroj detektis gravajn diferencojn en la grupa faktoroF_(2,32) = 68.33, p <0.001], en la periodo de protokolo [F_(4,128) = 9.13, p <0.001], kaj la interago inter ili [F_(8,128) = 13.34, p <0.001]. Ne estis diferencoj en la baza movado, kaj ambaŭ EtOH-grupoj havis similajn pliiĝojn en movado en la unua tago de akiro, kompare kun la grupo de kontrolo (p <0.01). Tamen EtOH_High (sed ne EtOH_Low) prezentis progreseman pliiĝon en lokomotora agado dum akira fazo (p <0.01, rilate al grupoj Control kaj EtOH_Low, en la lasta tago de akiro; p <0.01 rilate al ĝia lokomotora agado en la unua tago de akiro) ( Fig. 2). Ĉi tiuj datumoj konfirmis la rezultojn de la origina studo ( Masur kaj dos Santos, 1988) kaj de nia antaŭa raporto ( Coelhoso et al., 2013) pri konduta variado en outbred svisaj musoj submetitaj al etanolo-induktita lokomotora sentivigo.

3.2. Esprimo FosB / DeltaFosB

La ilustra fotomicrografio de FosB / DeltaFosB-imunoreateco estas prezentita en Fig. 3 kaj la normaligitaj valoroj estas montritaj en Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6 kaj Fig. 7. Du-vizaĝa ANOVA detektis signifajn diferencojn en la M1, M2, DmS, DlS, Acbco, Acbsh, VP kaj VTA (por ne-normaligitaj valoroj de FosB / DeltaFosB-imunoreactiveco kaj statistikaj analizoj de ĉiuj strukturoj, vidu Tabelo Suppl1 kaj Tabelo 1, respektive). En la strukturoj, kie statistikaj diferencoj povis esti observitaj, estis kvar malsamaj ŝablonoj de esprimo FosB / DeltaFosB. En la unua, observita en M1 kaj M2, estis pliigo de FosB / DeltaFosB-esprimo en la kvina tago de etanola retiro nur en la grupo EtOH_High (kompare kun EtOH_High-valoroj ĉe 18 h de retiro, same kiel al la Kontrolo kaj EtOH_Low-grupoj ĉe 5 tagoj de retiro) (vidu Fig. 4). En la dua ŝablono, observita en la VTAA, FosB / DeltaFosB-esprimo pliiĝis je 5 tagoj de etanola retiro nur en la grupo EtOH_Low (kompare kun EtOH_Low-valoroj ĉe 18 h de retiriĝo, same kiel al la Kontrola grupo ĉe 5 tagoj de retiro ) (vidu Fig. 5). En la tria ŝablono, observita en la DmS, Acbco kaj Acbsh, FosB / DeltaFosB-esprimo pliiĝis je 5 tagoj de etanola retiriĝo en ambaŭ grupoj EtOH_High kaj EtOH_Low (kompare kun iliaj respektivaj valoroj ĉe 18 h de retiriĝo), tamen nur EtOH_Low-grupo diferencis de Kontrola grupo (vidu Fig. 6). Fine, en la kvara ŝablono, observita en DlS kaj VP, FosB / DeltaFosB-esprimo pliiĝis je 5 tagoj de etanola retiriĝo en ambaŭ grupoj EtOH_High kaj EtOH_Low (kompare kun iliaj respektivaj valoroj ĉe 18 h de retiriĝo), kvankam ĉi tiu pliigo estis statistike pli esprimplena. en EtOH_Low ol en EtOH_High-grupo, kaj nur EtOH_Low-grupo diferencis de Kontrola grupo (vidu Fig. 7).

Por konfirmi, ke ŝanĝoj en FosB / DeltaFosB-esprimo ŝuldiĝis, kaj ne al etanolo-ekspozicio, ni faris korelaciojn inter la poentaro de lokomotora sentiveco kaj la FosB / DeltaFosB-immunelektitaj ĉeloj je la 5a tago de retiro en la nukleoj supre menciitaj (M1, M2, Acbco, Acbsh, DmS, DlS, VP, VTAA). Kiel atendis, ne estis signifaj korelacioj por iu ajn el ĉi tiuj nukleoj (M1 - r² = 0.027862, p = 0.987156; M2 - r² = 0.048538, p = 0.196646; Acbco - r² = 0.001920, p = 0.799669; Acbsh - r² = 0.006743, p = 0.633991; DmS - r² = 0.015880, p = 0.463960; DlS - r² = 0.023991, p = 0.914182; VP - r² = 0.002210, p = 0.785443; VTAA - r² = 0.001482, p = 0.823630).

4. Diskuto

La rezultoj observitaj en la nuna studo sugestas, ke la pliigita esprimo de FosB / DeltaFosB observita en la paradigmo de sensibilización de locomotor induktita de etanol probable estas rilatigita kun la retiriĝita en loko de la ekspozicio al kronika drogo. Tamen, la konduteca variebleco en la evoluiga lokomotora sentivigado estis akompanata de distingaj ŝablonoj de esprimo de FosB / DeltaFosB dum retiro. La rolo de motora kortekso, ventra tegmentala areo kaj striato en la akiro kaj esprimo de lokomotora sentiviga paradigmo estas bone establitaVanderschuren kaj Pierce, 2010). Plue, malregulado de mesolimbic-vojo estas unu el la centraj neŭrobiologiaj ecoj de retiriĝoperiodo, kune kun la apero de etendita amigdalo (Koob kaj Le Moal, 2005 kaj Koob kaj Le Moal, 2008). Tamen nur malmultaj studoj esploris la retretan periodon de la lokomotora sentiviga paradigmo. Niaj rezultoj renkontis interesajn ŝanĝojn en la esprimo de FosB / DeltaFosB en la motora kortekso, ventra tegmentala areo, kaj striato ene de ĉi tiu periodo.

FosB-cDNA kodas la esprimon de 33, 35 kaj 37 kDa-proteinoj. Ekspozicio de akraj stimuloj kondukas fortan indukton de proteinoj Fos 33- kaj 35- kaj 37- kDa. Sekve, sub akra aktivigo, la superrega FosB-esprimo rilatas al 33 kDa (McClung et al., 2004 kaj Nestler, 2008). Estas alia rimarkinda diferenco inter ĉi tiuj proteinoj: nur 35-37 kDa-proteinoj estas tre stabilaj izoformoj. Pro ĉi tiu alta stabileco, ĉi tiuj detranĉitaj formoj de FosB, ankaŭ nomataj DeltaFosB, amasiĝas en la cerbo kaj estas tre esprimitaj kiel respondo al kronikaj stimuloj, kiel psikotropaj drogaj traktadoj, kronikaj elektrokonvulsivaj kaptoj kaj streso (Kelz kaj Nestler, NUMO, Nestler et al., 2001 kaj McClung et al., 2004). Sekve, DeltaFosB estis rigardita kiel daŭra molekula ŝaltilo por peri formojn de longdaŭra neŭra kaj konduta plasticeco. Interese, eleganta studo uzanta musajn liniojn esprimante diference FosB kaj DeltaFosB montris, ke FosB estas esenca por plibonigi streĉan toleremon kaj ankaŭ neŭtrigas la korelacion inter psikosimulanto-induktita lokomotora sentivigo kaj akumulado de DeltaFosB en la striatoOhnishi et al., 2011). Tial ambaŭ proteinoj povus ludi gravajn rolojn en la eksperimenta protokolo uzata en la nuna studo. Rimarkindas, ke la FosB-antikorpo uzata rekonas kaj FosB kaj DeltaFosB. Ĉar FosB malpliiĝas al bazaj niveloj ene de 6 h post akuta stimulo (Nestler et al., 2001) kaj DeltaFosB amasiĝas post ripetaj stimulaj ekspozicioj, ni decidis oferi la bestojn 18 h post la akira fazo, por eviti eblajn antaŭjuĝojn de etanola traktado super FosB-esprimo. Tamen, por esti te precisenike preciza, ni nomos en la nuna studo esprimon FosB / DeltaFosB. Gravas noti, ke ĉi tiu strategio estis uzata en aliaj studoj, inkluzive de tiuj, kiuj uzis la saman primaran antikorpon priskribitan ĉi tie (Conversi et al., 2008, Li et al., 2010, Flak et al., 2012 kaj García-Pérez et al., 2012). Sekve, krom ĉi tiuj eksperimentaj limoj, ni diskutos niajn rezultojn konsiderante la rolon de DeltaFosB en neŭrona plastiko.

Estas bone establita, ke kronika drogo-ekspozicio pliigas la esprimon de FosB / DeltaFosB en pluraj regionoj de cerbo (Nestler et al., 2001 kaj Perrotti et al., 2008). Kurioze, en la nuna studo nek etanolo-sensivigita nek etanola-ne-sentemigitaj musoj diferencis de kronikaj salaj traktitaj musoj pri FosB / DeltaFosB-esprimo 18 h post akira fazo. Plue, ne estis signifaj korelacioj inter FosB / DeltaFosB-esprimo kaj la poentaroj de lokomotora sentiveco. Ĉi tiu diverĝo povus esti klarigita, almenaŭ parte, per la diferencoj trovitaj en la eksperimenta protokolo. Ekzemple, konsiderante la etanolan ekspozicion, en du studoj la du botela libera elekta paradigmo estis uzata en 15 intermitaj trinkaj sesioj (Li et al., 2010) aŭ nutre kompleta likva dieto aŭtomate administrata dum 17 tagoj (kie bestoj konsumas etanolon en dozoj de 8 ĝis 12 g / kg / tago) (Perrotti et al., 2008). En alia studo, kvankam la aŭtoroj rilatas al kronika kuracado, la protokolo konsistis nur el ekspozicioj al 4-etanolo.Ryabinin kaj Wang, 1998). Do, protokoloj uzataj aliloke estas tute apartaj de ĉi tie uzata, kiu konsistis el 21 tagoj da kuracado, kie ĉiutagaj etanolaj injektoj estis administritaj de eksperimentisto. Malgraŭ ĉi tiuj diferencoj, ekzistas pluraj studoj pri intraperitoneaj injektoj raportantaj pliiĝojn en FosB / DeltaFosB-esprimo post protokoloj de lokomotora sentiveco induktita de psikostimuloj (Brenhouse kaj Stellar, 2006, Conversi et al., 2008 kaj Vialou et al., 2012) kaj opioidoj (Kaplan et al., 2011). Tamen, la protokoloj de lokomotora sentivigado en tiuj studoj implikas multe malpli ol 21-drogaj ekspozicioj, kaj en iuj el ili, kuracilo estis administrita intermite. En kontrasto, nia protokolo uzis la saman kuracadon priskribitan en antaŭaj studoj implikantaj 21-tagajn injektojn de etanol.Masur kaj dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Quadros et al., 2002a, Quadros et al., 2002b, Abrahão et al., 2011 kaj Abrahão et al., 2012). Ekzistas indico ke kvankam kronika kokain-administrado antaŭenigas amasiĝon de DeltaFosB-esprimo en la nukleo accumbens, ĝi ankaŭ antaŭenigas toleremon al DeltaFosB-mRNA-indukto en kaj ventra kaj dorsa striatoLarson et al., 2010). Tial, ni hipotezis, ke la manko de diferencoj en niaj eksperimentaj grupoj en la akira fazo eble ŝuldiĝos al toleremo koncerne FosB / DeltaFosB-indukton, ĉar en la nuna protokolo estis pli granda periodo de akiraĵo kompare kun periodoj uzitaj por psikosimulantoj kaj opioidoj. en aliaj studoj.

Studoj uzantaj knokaŭton kaj transgenajn musojn montris ke FosB-mutaj musoj plibonigis kondutan respondon al kokaino, kiel ekzemple stimulilaj lokomotivaj efikoj kaj kondiĉita prefero de loko. Plue, la esprimo de basa kaj kokain-indukta DeltaFosB forestas en ĉi tiu mutaciaj musoj (Hiroi et al., 1997). En kontrasto, transgenaj musoj kun induktebla troesprimo de DeltaFosB montras pli grandan sentivecon al la rekompencaj efikoj de kokaino kaj morfino (Muschamp et al., 2012). Ĉi tiuj rezultoj disponigis rektan ateston pri proksima rilato inter DeltaFosB kaj la rekompencanta procezo. Krom ripetataj medikamentoj, kronika streĉo ankaŭ pliigas la esprimon de DeltaFosB en kortikolvaj cirkvitoj (Perrotti et al., 2004). Interese, transgenaj musoj tro-subpremantaj DeltaFosB estas malpli sentemaj pri la por-depresiaj efikoj de kappa-opi-agona agonisto, konata kiel indukto de disforo kaj stresaj efikoj en ronĝuloj (Muschamp et al., 2012). Do, krom rekompensa procezo, DeltaFosB ankaŭ ludas pivotan rolon en la emociaj aspektoj de la fenomenoj. En ĉi tiu scenaro, retiro povus ankaŭ ekigi esprimon FosB / DeltaFosB, ĉar streso estas ŝlosila ero de retiriĝo de drogo. Ĉi tiu perspektivo konformas al niaj rezultoj, ĉar ne estis korelacioj inter FosB / DeltaFosB-esprimo kaj la interpunkcioj de sentiveco, kaj krome la pliigo de FosB / DeltaFosB-esprimo estis observita nur en la kvina tago de retiro.

Interese, en iuj strukturoj, kreskoj de FosB / DeltaFosB estis vidataj en kaj EtOH_High kaj EtOH_Low-grupo, kvankam pli esprimaj en la antaŭa grupo, sugestante ke ĉi tiuj pliiĝoj povus havi malsamajn funkciajn konsekvencojn, laŭ ilia intenseco. Ĉi tiu hipotezo povus esti klarigita per pluraj klaraj funkciaj roloj de FosB / DeltaFosB. Ekzemple, ratoj kronike eksponitaj al kokaino pliigis la esprimon de DeltaFosB en la kerno accumbens dum retiro, efiko pozitive korelaciita kun kokainkreskado, sed negative kun novecaj preferoj. Krome, streĉo dum retiro pliigas la kondutan respondon al psikostimuliloj per pliigo de la esprimo de DeltaFosB en kortikbalaj neŭronoj (Nikulina et al., 2012). Do, DeltaFosB povis antaŭdiri la malreguladon de hedona prilaborado, kiu okazas dum longdaŭra retiro.Marttila et al., 2007). Aliflanke ambaŭ resilancoj al streso kaj antidepresiaj respondoj rilatas al pli alta esprimo de DeltaFosB en striatoVialou et al., 2010). Sekve, ni konjektas, ke pliigo de FosB / DeltaFosB sur striato en la EtOH_High povus plibonigi la rekompencajn efikojn de etanolo, donante pli altan susceptibilidad al postaj drogaj ekspozicioj. Aliflanke pli intensa kresko de FosB / DeltaFosB vidata en la EtOH_Low-grupo povus malpliigi la sentemon al ambaŭ disforiaj kaj stresaj efikoj, minimizante la efikojn de negativa plifortigo de posta drogo-ekspozicio kaj, sekve, klarigante pli altan rezistadon en ĉi tio grupo. Interese, ĉi tiu paradokso havis neŭrokemian bazon. Ekzemple, transgenaj musoj sobreexpresan FosB en meza spino GABAergic neŭronoj de kerno accumbens havis pliigitajn nivelojn de ambaŭ mu- kaj kappa-opioid receptoroj (Sim-Selley et al., 2011), kaj tiuj receptoroj respektive pliigas kaj malhelpas mesolimban tonon (Manzanares et al., 1991 kaj Devine et al., 1993). Krome, la ĉela tipo-esprimo ankaŭ povus draste ŝanĝi la funkciajn konsekvencojn de la pliigita FosB / DeltaFosB. En eleganta studo uzanta musojn sobreexpressing DeltaFosB en D1- aŭ D2-esprimanta neŭronojn en la kerno accumbens malkaŝis ke DeltaFosB en la D1- (sed ne en la D2) neŭronoj plibonigas kondutajn respondojn al kokaino (Grueter et al., 2013).

Kurioze, rilate al la motora kortekso, estis pliigo de FosB / DeltaFosB-esprimo nur en grupo EtOH_High, kaj ĝi estis limigita al la 5a tago de retiro. La manko de pliigo je 18 h de retiriĝo povus esti klarigita per ebla tolerema mekanismo en la esprimo FosB / DeltaFosB en ĉi tiu regiono post kronika etanola ekspozicio. Plue, niaj rezultoj sugestas, ke ekzistas aktivaj neŭroicalemiaj ŝanĝoj en la motora kortekso dum retiriĝa periodo, malgraŭ la fakto, ke la bestoj ne estis manipulitaj dum ĉi tiu periodo. Ĉi tio estas interesa, ĉar ĉi tiu plastikeco povus roli, almenaŭ parte, en la prizorgado de lokomotora sentiveco. Kvankam la daŭra hiperlomovo post kelkaj tagoj da retiriĝado ne estis studita ĉi tie, ekzistas pluraj studoj, inkluzive de antaŭaj de nia laboratorio, montrante, ke sentemigitaj musoj (sed ne sentemaj) plibonigis movadon kiam defiita kun etanolo post donita periodo de retiro (Masur kaj dos Santos, 1988, Souza-Formigoni et al., 1999, Quadros et al., 2002a, Quadros et al., 2002b, Abrahão et al., 2011, Abrahão et al., 2012, Fallopa et al., 2012 kaj Coelhoso et al., 2013).

Fine, estas rimarkinde, ke nur la EtOH_ow-grupo montris pliigitan esprimon de FosB / DeltaFosB en la antaŭa (sed ne posta) parto de la ventra tegmenta areo. Ĉi tiuj partoj havas malsamajn projekciojn kaj profilojn neŭroquímicos, kaj ilia partopreno en la rekompenca procezo dependas de pluraj faktoroj (Ikemoto, 2007). Ekzemple, la memadministrado de ratoj de etanolo rilatas al la posta, sed ne al la ventra parto de la ventra tegmenta areo (Rodd-Henricks et al., 2000 kaj Rodd et al., 2004). Plue, la endocannabinoida sistemo, same kiel GABA-A, dopaminergiaj D1-D3, kaj serotoninergiaj 5HT3-riceviloj, ludas gravan rolon en serĉado de etanolo.Linsenbardt kaj Boehm, 2009, Rodd et al., 2010, Melono kaj Boehm, 2011b kaj Hauser et al., 2011). Tamen, GABA-B en la antaŭa parto de ventra tegmenta areo estas grava laŭ la rekompencoj (Moore kaj Boehm, 2009) kaj stimulaj lokomotivaj efikoj (Boehm et al., 2002) De etanolo. Krome, kolinergiaj nikotinaj riceviloj en la antaŭa parto estas implikitaj en la pliigita niveloj de dopaminoj induktitaj de etanolo (Ericson et al., 2008). Tial, sendepende de la klara profilo de ĉi tiuj partoj, estas eble ke ŝanĝoj vidataj en la EtOH_Low-grupo en la antaŭaj partoj povus esti rilataj al la rekompencanta procezo. Kronika kokaino sed ne kronika morfino aŭ kronika strata ekspozicio pliigas DeltaFosB en ventra tegmenta areo, specife en gama-aminobutirika acida ĉela populacio (GABA)Perrotti et al., 2005). Ĉi tiu fakto povus klarigi la normalajn nivelojn de FosB / DeltaFosB dum retiro renkontita en ventra tegmenta areo de EtOH_High musoj, sendepende de la supozata alta streĉo sperto en ĉi tiu periodo. Plue, ĉi tiuj datumoj konfirmas, almenaŭ parte, la hipotezon, ke la pliiĝo de FosB / DeltaFosB-esprimo dum forigo en EtOH_Low povus esti karakterizita kiel adapta respondo.

Individuaj diferencoj observitaj dum la transiro de distra uzado al drogomanuo estas rimarkindaj (Flagel et al., 2009, Georgo kaj Koob, NENIU kaj Swendsen kaj Le Moal, 2011). Sekve, estas nepre studi la neŭrobiologiajn ecojn rilatajn al individua variemo. La konduteca sentemo estas best-modelo komune uzita por esplori la neŭrobiologiajn ecojn de drogodependeco. La bazo de ĉi tiu modelo estas, ke la subjektivaj efikoj de la medikamentoj pliiĝas laŭ sia ripeta ekspozicio. Post kiam akirita, lokomotora sentivigo estas longa daŭra kaj estas en rekta tempa rilato kun morfologiaj kaj neŭrokemiaj ŝanĝoj en la mesolimbic vojo kaj pluraj encefalaj kernoj rilatita al emocio kaj motora konduto (Robinson kaj Kolb, 1999 kaj Vanderschuren kaj Pierce, 2010). Pionira studo farita de Masur kaj dos Santos (1988) pruvis, ke estas granda konduteca variebleco en outbred svisaj musoj rilate al etanolo-induktita lokomotora sentivigo. De tiam aliaj studoj montris gravan korelacion inter neŭrokemiaj ecoj kaj konduta variado, ĉefe tiuj rilataj al la dopaminergiaj (Abrahão et al., 2011, Abrahão et al., 2012 kaj Souza-Formigoni et al., 1999) kaj la glutamatergaj sistemoj (Quadros et al., 2002a kaj Quadros et al., 2002b). Krome, antaŭa studo de nia laboratorio uzanta la paradigmon de lokomotora sentivigado de etanolo montris, ke musoj sentivigitaj (sed ne sensensitaj) prezentis rimarkindan pliiĝon de cannabinoidaj receptoroj de tipo 1 (CB1R) dum la retiro.Coelhoso et al., 2013). Ĉi tie ni identigis malsamajn padrojn de FosB / DeltaFosB-esprimo dum retiro inter EtOH_High kaj EtOH_Low-grupoj.

Resume, konduteca variemo observita en akira fazo de etanolo induktita lokomotora sentivigo estas akompanita de klara neuronal plasticity dum retira periodo. Kurioze, niaj rezultoj sugestas, ke malsamaj padronoj de FosB / DeltaFosB-esprimo detektitaj en sentivigitaj kaj ne sentivigitaj musoj pli rilatas al retiriĝperiodo ol al la kronika drogo, probable pro la toleremo de drog-induktita FosB / DeltaFosB-transskribo.

Jen la suplementaj datumoj pri ĉi tiu artikolo.

Referencoj

• Nikulina et al., 2012
• EM Nikulina, MJ Lacagnina, S. Fanous, J. Wang, RP Hammer Jr.
• Intertempa socia malvenko-streĉo plibonigas kunekspresadon de mesocorticolimbic BFosB / BDNF kaj persiste aktivigas kortikotegmentajn neŭronojn: implikiĝo por vundebleco al psikosimulantoj
• Neŭroscienco, 212 (2012), pp 38-48
• artikolo

  |

   PDF (1552 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (12)
•  
• Vialou et al., 2012
• V. Vialou, J. Feng, AJ Robison, SM Ku, D. Ferguson, KN Scobie, et al.
• La faktoro de respondo de la serumo kaj la proteino de ligo al la elemento de respondo AMP estas ambaŭ postulitaj por la inducción de kokaino de .FosB
• J Neurosci, 32 (2012), pp 7577-7584
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (17)
• Vanderschuren kaj Pierce, 2010
• LJ Vanderschuren, RC Pierce
• Procezoj de sentivigo en drogomanio
• Curr Top Behav Neurosci, 3 (2010), pp 179 – 195
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (53)
• Vanderschuren kaj Kalivas, 2000
• LJ Vanderschuren, PW Kalivas
• Alteraciones en dopaminergia kaj glutamateria transdono en la indukto kaj esprimo de kondutra sentiveco: kritika revizio de precinikaj studoj
• Psikofarmacologio (Berl), 151 (2000), pp 99 – 120
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (884)
• Swendsen kaj Le Moal, 2011
• J. Swendsen, M. Le Moal
• Individua vundebleco al dependeco
• Ann NY Acad Sci, 1216 (2011), pp 73-85
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (35)
• Souza-Formigoni et al., 1999
• ML Souza-Formigoni, EM De Lucca, DC Hipólide, SC Enns, MG Oliveira, JN Nobrega
• Sentivigado al la stimula efiko de etanolo estas asociita kun lokigitaj pliiĝoj en cerbaj D2-receptoraj ligiloj
• Psikofarmacologio, 146 (1999), pp 262-267
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (54)
• Solecki et al., 2008
• W. Solecki, T. Krowka, J. Kubik, L. Kaczmarek, R. Przewlocki
• Rolo de fosB en kondutoj ligitaj al morfina rekompenco kaj spaca memoro
• Behav Brain Res, 190 (2008), pp 212-217
• artikolo

  |

   PDF (328 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (7)
• Sim-Selley et al., 2011
• LJ Sim-Selley, parlamentano Cassidy, A. Sparta, V. Zachariou, EJ Nestler, DE Selley
• Efekto de ΔFosB sobreexpremado sur opioide kaj cannabinoide-ricevilo-amasigita signalo en la kerno accumbens
• Neŭrofarmakologio, 61 (2011), pp 1470-1476
• artikolo

  |

   PDF (446 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (10)
• Ryabinin kaj Wang, 1998
• AE Ryabinin, YM Wang
• Ripeta alkoholadministrado diferencige influas c-Fos kaj FosB-proteinmunoreaktivecon en DBA / 2 J-musoj
• Alkohola kliniko Exp Res, 22 (1998), pp 1646-1654
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (33)
• Rodd-Henricks et al., 2000
• ZA Rodd-Henricks, DL McKinzie, RS Crile, JM Murphy, WJ McBride
• Regiona heterogeneco por la intracraneala mem-administrado de etanolo en la ventra tegmenta areo de inaj Wistar-ratoj
• Psikofarmacologio (Berl), 149 (2000), pp 217 – 224
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (130)
• Rodd et al., 2010
• ZA Rodd, RL Bell, SM Oster, JE Toalston, TJ Pommer, WJ McBride, et al.
• Riceviloj de serotonino-3 en la areo ventral tegmental posta reguligas etanolan memadministradon de ratoj (P) kun alkoholo.
• Alkoholo, 44 (2010), pp 245 – 255
• artikolo

  |

   PDF (604 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (19)
• Rodd et al., 2004
• ZA Rodd, RI Melendez, RL Bell, KA Kuc, Y. Zhang, JM Murphy, et al.
• Intracrania mem-administrado de etanolo en la ventra tegmenta areo de masklaj Wistar-ratoj: indico por partopreno de dopaminaj neŭronoj
• J Neurosci, 24 (2004), pp 1050-1057
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (111)
• Robinson kaj Kolb, 1999
• TE Robinson, B. Kolb
• Alteriĝoj en la morfologio de dendritoj kaj dendritaj dornoj en la nukleo accumbens kaj prefrontala kortekso post ripeta traktado kun anfetamino aŭ kokaino
• Eur J Neurosci, 11 (1999), pp 1598-1604
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (427)
• Quadros et al., 2002b
• IM Quadros, JN Nóbrega, Dc. Hipolide, EM de Lucca, ML Souza-Formigoni
• Diferenciala inklino al etanola sentimigo ne asocias kun ŝanĝita ligado al D1-riceviloj aŭ dopaminaj transportiloj en muskolo.
• Addic Biol, 7 (2002), pp 291-299
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (21)
• Quadros et al., 2002a
• IM Quadros, DC Hipólide, R. Frussa Filho, EM De Lucca, JN Nóbrega, ML Souza-Fomigoni
• Rezisto al etanola sentimigo estas asociita kun pliigo de NMDA-receptora ligo en specifaj cerbaj areoj
• Eur J Pharmacol, 442 (2002), pp 55-61
• artikolo

  |

   PDF (128 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (36)
• Phillips et al., 1997
• TJ Phillips, AJ Roberts, CN Lessov
• Sensiva konduto al etanolo: genetiko kaj efikoj de streso
• Pharmacol Biochem Behav, 57 (1997), pp 487 – 493
• artikolo

  |

   PDF (186 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (101)
• Perrotti et al., 2008
• LI Perrotti, RR Weaver, B. Robison, W. Renthal, I. Labirinto, S. Yazdani, et al.
• Distingaj skemoj de indukto DeltaFosB en cerbo per drogoj de misuzo
• Sinapsi, 62 (2008), pp 358-369
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (79)
• Perrotti et al., 2004
• LI Perrotti, Y. Hadeishi, PG Ulery, M. Barrot, L. Monteggia, RS Duman, et al.
• Indukto de deltaFosB en rekompencaj cerbaj strukturoj post kronika streso
• J Neurosci, 24 (2004), pp 10594-10602
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (148)
• Perrotti et al., 2005
• LI Perrotti, CA Bolaños, KH Choi, SJ Russo, S. Edwards, PG Ulery et al.
• DeltaFosB akumuliĝas en populacio de GABAergic-ĉelo en la posta vosto de la ventra tegmentala areo post psikostimulanta traktado
• Eur J Neurosci, 21 (2005), pp 2817-2824
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (85)
• Ohnishi et al., 2011
• YN Ohnishi, YH Ohnishi, M. Hokama, H. Nomaru, K. Yamazaki, Y. Tominaga, et al.
• FosB estas esenca por plibonigi streĉan toleremon kaj kontraŭas lokomotoran sentivigadon de ΔFosB
• Biol Psikiatrio, 70 (2011), pp 487-495
• artikolo

  |

   PDF (2016 K)

  |

  Rigardi rekordon en Scopus

   | 

  Citante artikolojn (13)
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  
•  

• Vialou et al., 2010
• V. Vialou, AJ Robison, QC Laplant, HE Covington III, DM Dietz, YN Ohnishi, et al.
• DeltaFosB en cerbaj rekompensaj cirkvitoj peras resilancon al streso kaj antidepresiaj respondoj
• Nat Neurosci, 13 (2010), pp 745-752
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (141)
•  
• Zachariou et al., 2006
• V. Zachariou, CA Bolanos, DE Selley, D. Theobald, parlamentano Cassidy, MB Kelz, et al.
• Esenca rolo por DeltaFosB en la kerno accumbens en morfina ago
• Nat Neurosci, 9 (2006), pp 205-211
• Rigardi rekordon en Scopus

  |

  plena Teksto vojo CrossRef

   | 

  Citante artikolojn (138)

•  
• Koresponda aŭtoro ĉe: Rua Cesário Mota Jr, 61, 12 andar, San-Paŭlo, SP 01221-020, Brazilo. Tel./fakso: + 55 11 33312008.
• 1
• Ĉi tiuj aŭtoroj same partoprenis la nunan studon.