Longatempa Alta Grasa Dieto Reduktas Dopamine Reuptake Sen Alteranta DATa Gene-Esprimo (2013)

  • Jackson J. Cone,
  • Elena H. Chartoff,
  • David N. Potter,
  • Stephanie R. Ebner,
  • Mitchell F. Roitman

abstrakta

La disvolviĝo de diet-induktita obezeco (DIO) povas potence ŝanĝi multoblajn aspektojn de dopamina signalado, inkluzive de esprimo de dopamina transportilo (DAT) kaj dopamina reakiro. Tamen, la tempo-kurso de diet-induktitaj ŝanĝoj en DAT-esprimo kaj funkcio kaj ĉu tiaj ŝanĝoj dependas de la disvolviĝo de DIO restas ne solvita. Ĉi tie, ni nutris ratojn altan (HFD) aŭ malaltan (LFD) grasan dieton dum 2 aŭ 6-semajnoj. Sekve al dieta ekspozicio, ratoj estis anestezitaj per uretano kaj striatal DAT-funkcio estis taksita elektre stimulante la dopaminajn ĉelajn korpojn en la ventra tegmentala areo (VTA) kaj registrante rezultajn ŝanĝojn en dopamina koncentriĝo en la ventra striatumo uzante rapidan skanan voltammetrion. Ni ankaŭ kvantigis la efikon de HFD sur DAT-membranon asociitan en striaj ĉelaj frakcioj de aparta grupo de ratoj post eksponiĝo al la sama dieta protokolo. Notinde, neniu el niaj kuracaj grupoj malsamis en korpa pezo. Ni trovis deficiton en la procento de dopamina reakiro en HFD-ratoj relative al LFD-ratoj post 6 sed ne 2-semajnoj da dieta ekspozicio. Plie, la kresko de elvokita dopamino post farmakologia defio de kokaino estis signife malpliigita en HFD rilate al LFD-ratoj. Okcidenta blot-analizo malkaŝis, ke ne ekzistas efiko de dieto sur tuta DAT-proteino. Tamen, 6-semajnoj da HFD-ekspozicio reduktis signife la izoformo 50 kDa DAT en sinaptosomal-asociita frakcio de membrano, sed ne en frakcio asociita kun reciklado de endosomoj. Niaj datumoj provizas pliajn evidentaĵojn por ŝanĝoj de induktitaj dietoj en reptato de dopamino sendepende de ŝanĝoj en DAT-produktado kaj pruvas, ke tiaj ŝanĝoj povas manifestiĝi sen la disvolviĝo de DIO. 

Citaĵo: Konuso JJ, Chartoff EH, Potter DN, Ebner SR, Roitman MF (2013) Prolonged High Fat Diet Reduktas Dopaminan Retropluon sen Altering DAT-Gene-Esprimo. PLOS ONE 8 (3): e58251. doi: 10.1371 / journal.pone.0058251

redaktanto: Sidney Arthur Simon, Duke University Medical Center, Usono

Ricevita: Oktobro 26, 2012; Akceptita: Februaro 5, 2013; Eldonita: Marto 13, 2013

Kopirajto: © 2013 Cone et al. Ĉi tio estas malferma-alira artikolo distribuita laŭ la kondiĉoj de la Atribua Permesilo de Krea Komunaĵo, kiu permesas senrestriktan uzon, distribuadon kaj reproduktadon en iu ajn mediumo, krom se la originala aŭtoro kaj fonto estas kredititaj.

Financado: La priskribita projekto estis subtenata de subvencioj de Naciaj Institutoj de Sano (NIH) DA025634 (MFR) kaj T32-MH067631 de la Programo pri Trejnado pri Biomedicina Neŭroscienco (JJC). Plia subteno estis disponigita de la Nacia Centro por Esploro-Rimedoj kaj la Nacia Centro por Antaŭenigi Tradukajn Sciencojn, NIH, per subvencio UL1RR029877 (JJC) kaj de la Ĉikaga Biomedika Konsorcio kun subteno de la Searle Funds ĉe La Ĉikaga Komunuma Fido (JJC). La enhavo estas respondeco nur de la aŭtoroj kaj ne nepre reprezentas la oficialajn vidpunktojn de la NIH aŭ de la Ĉikaga Biomedika Konsorcio. La financistoj ne havis rolon en studo-projektado, kolektado de datumoj kaj analizo, decido publikigi, aŭ preparado de la manuskripto.

Konkurantaj interesoj: La aŭtoroj deklaris, ke ne ekzistas konkurencantaj interesoj.

Enkonduko

La superpezaj kaj obesaj reprezentas ĉiam pli grandan procenton de Usono kaj la tutmonda populacio [1], [2]. Dum estas multaj vojoj al la obezeco, eble unu el la plej grandaj minacoj al sana korpa pezo estas la prevalenco kaj konsumo de tre plaĉaj, dense kaloriaj manĝaĵoj. [3]. Efektive, la energia denseco (kcal / g) de manĝaĵo potence kontribuas al troa pezo kaj obezeco en plenkreskuloj [4], [5]. Manĝeblaj manĝaĵoj elvokas liberigon de dopamino en la striato de homoj kaj de nehomaj bestoj [6], [7], [8], [9] kaj subjektivaj rangigoj de graseco en manĝaĵo estas pozitive korelaciitaj kun la forto de neŭralaj respondoj en la ventra striato [10]. Tiel, dopamino kaj striato ŝajnas kontribui al preferoj pri energiaj densaj manĝaĵoj. Lastatempe, estis montrite ke diferencoj en dieto povas kaŭzi samtempajn ŝanĝojn en striaj cirkvitoj kaj manĝ-direktita konduto [11]. Tamen, eble malpli aprezita estas la kreskanta evidenteco, ke diferencoj en englutitaj manĝaĵoj, precipe koncerne grason, povas reagi kaj aliigi striatan dopaminan signaladon.

Striatala dopamina signalado estas reguligita per pluraj faktoroj inkluzive de dopamina produktado per la enzimo tirosina hidroksilase, antaŭ- kaj postsinaptaj dopaminaj riceviloj kaj presinaptaj dopaminaj transportiloj (DAToj), kiuj ĉiuj estis implicitaj en la obezeco [12], [13]. Alteraĵoj en DAT-nombro aŭ funkcio povas ŝanĝi la sferon de influo de liberigita dopamino kaj sekve stria funkcio [14], [15]. La insulino, liberigita en respondo al ingestita manĝaĵo, estis montrita influi DAT-funkcion [16], [17]. Tiel, la DAT estas unu el la probablaj kandidatoj por la efikoj de dieto.

Lastatempe, korelacioj inter obezeco kaj DAT-havebleco same kiel diet-induktitaj ŝanĝoj de DAT-funkcio estis esploritaj. Indekso de korpa maso (IMC) estas negative korelaciita kun DAT-havebleco en la homa striato [18]. DAT-ligado, kaj tial havebleco, estas reduktita en musoj kun alta grasa dieto (HFD) [19]. La obesidad induktita de HFD (DIO) estas asociita kun reduktita imposto de reapero de dopamina per la DAT en ratoj [20]. Prenitaj kune, ĉi tiuj studoj sugestas, ke obezeco establita de HFD-konsumo povas potence influi kritikajn presinaptajn reguligilojn de dopamina signalado - precipe la DAT. Tamen, la tempo-kurso de diet-induktitaj ŝanĝoj en dopamina signalado kaj ĉu la evoluo de DIO necesas por ke manifestoj ŝanĝiĝu restas nekonata. Ni taksis DAT-funkcion elvokante dopamin-liberigon en la ventrala striatumo kaj kvantigante ĝian indicon de reakiro en ratoj uzante rapidan ciklan voltammetrion. Por determini ĉu malpliiĝis dopamina reapero estis kaŭzita de malpliigita DAT-gena esprimo, ni mezuris DAT-mRNA en la ventrala tegmentala areo kaj substantia nigra uzante realtempan qRT-PCR. Aldone, ni uzis biokemian frakcian proceduron kaj analizon de Western blot por taksi striatal DAT-nivelojn en krudaj sinaptosomaj kaj endosomaj membranoj. Ratoj havis aŭ 2 aŭ 6 semajnojn da alta aŭ malalta grasa dieto, sed ĉiuj mezuradoj estis faritaj sen manko de DIO. Niaj rezultoj sugestas, ke plilongigita konsumado de HFD, sendepende de DIO, malpliigas la imposton de dopamina reakiro en la ventra striato sen malpliigado de DAT-esprimo.

Materialoj kaj metodoj

Etika Komento

Ĉi tiu studo estis farita strikte kun la rekomendoj en la Gvidilo por Prizorgo kaj Uzo de Laborantaj Bestoj de la Naciaj Institutoj pri Sano. La protokolo estis aprobita de la Komitato pri Zorgado pri Bestoj ĉe la Universitato de Ilinojso, Ĉikago. Ĉiu kirurgio estis farita sub uretana anestezo, kaj ĉiuj klopodoj estis minimumigitaj por suferi.

temoj

Normaj viraj Sprague-Dawley-ratoj (n = 67), proksimume 2-jaraj kaj pezaj 225-275-g al la alveno estis uzataj. Bestoj estis individue loĝataj en plastaj kaĝoj (26.5 × 50 × 20 cm) en temperaturo- (22 ° C) kaj humideco- (30%) kontrolita medio sur 12∶12 h lumo: malhela ciklo (lumoj en 07∶00) h). Ratoj alklimigitaj al la instalaĵo dum unu semajno kun ad libitum aliro al norma laboratorio chow kaj akvo.

Manĝaĵa konsumado kaj Mezkvalitaj Mezuroj

Post aklimado, ratoj estis pesitaj kaj hazarde atribuitaj al 1 de 4-grupoj, kiuj estis kontraŭbalancitaj por komenca korpa pezo. Du grupoj estis konservitaj sur malalta grasa dieto (LFD; Research Diets, Nov-Brunsviko, NJ; D12450B; 10% kilokalorioj el grasoj (3.85 kcal / g)). La aliaj 2-grupoj estis konservitaj sur HFD (Esploraj dietoj; D12492; 60%-kilokalorioj el graso (5.24 kcal / g)). Por ĉiu dieto, ratoj estis konservitaj dum 2 aŭ 6 semajnoj (semajnoj). Tiel, la 4-grupoj estis: LFD-2 semo (n = 18), HFD-2 semo (n = 16), LFD-6 semajno (n = 16) kaj HFD-6 semo (n = 17). Ĉiuj grupoj havis ad libitum aliro al akvo. Mezuroj pri manĝaĵa kaj korpa pezo estis faritaj trifoje / semajne kaj datumoj estas raportitaj aparte por ratoj submetantaj voltammetrikajn registradojn aŭ DAT-proteinon / mesaĝan analizon.

Kirurgiaj Proceduroj kaj Dopaminaj Mezuroj

Post dieta ekspozicio, subaro de ratoj, kiuj ne diferencis laŭ korpa pezo, estis preparita por voltametriaj registradoj (LFD-2 wk (n = 8), HFD-2 wk (n = 6), LFD-6 wk (n = 6) , kaj HFD-6 wk (n = 7)) sub uretano (1.5 g / kg) anestezo [kiel en 9,21]. Gvidkanulo (Bioanalizaj Sistemoj, West Lafayette, IL) estis poziciigita super la ventra striato (1.3 mm antaŭa, 1.5 mm laterala de bregmo), klorita arĝenta drato (Ag / AgCl) referenca elektrodo estis enplantita en la kontraŭlateran kortekson kaj ambaŭ estis fiksita al la kranio per rustorezistaŝtalaj ŝraŭboj kaj dentala cemento. Mikromanipulilo enhavanta karbonfibran elektrodon (CFE) estis enigita en la gvidan kanulon kaj la elektrodo malleviĝis en la ventran striaton. La CFE kaj referenca elektrodo estis konektitaj al scenejo kaj la potencialo de la CFE estis skanita de −0.4 ĝis +1.3 V (kontraŭ Ag / AgCl) kaj reen (400 V / s; 10 Hz). Dupolusa stimula elektrodo (Plastoj Unu, Roanoke, VA) tiam iom post iom malleviĝis en la ventran tegmentan areon / substantia nigra pars compacta (VTA / SNpc; 5.2 mm malantaŭa, 1.0 mm laterala kaj komence 7.0 mm ventra de bregmo) ​​en 0.2 mm pliigoj . Ĉe ĉiu pliigo, trajno de nunaj pulsoj (60 pulsoj, 4 ms per pulso, 60 Hz, 400 µA) estis liverita. Kiam la stimula elektrodo estas poziciigita en la VTA / SNpc kaj la CFE estas en la striato, stimulo fidinde elvokas liberigon de dopamino - ĉerpita el voltametriaj datumoj per ĉefa komponanta analizo. [9], [22]; kaj konvertita al koncentriĝo post ĉiu CFE estas kalibrita en flua injekto-sistemo post ĉiu eksperimento [23]. La pozicio de la stimula elektrodo estis optimumigita por maksimuma liberigo. La CFE tiam rajtis ekvilibrigi por 10 min antaŭ komenci la eksperimenton. La liberigo de dopamina estis elvokita per elektra stimulado de la VTA / SNpc (samaj parametroj kiel supre), kaj la rezultaj ŝanĝoj en dopamina koncentriĝo estis kalkulitaj de −5 s al 10 s relative al stimulo. Tuj post stimuliĝo, ratoj estis injektitaj kun kokainklorido solvita en 0.9% salo (10 mg / kg ip) kaj, 10 min poste, la stimulo ripetiĝis. Aplikitaj tensioj, akiro de datumoj kaj analizo estis faritaj per programoj skribitaj en LabVIEW (Nacia Instrumentoj, Austin, TX, Usono) [22].

Rekaptado de dopamino

Dopaptiĝo de dopamino estis modeligita uzante programon de Demon-Voltammetria Analizo (24; Universitato Wake Forest, Winston-Salem NC). Ĉi tie ni raportas la konstantan kadukan taŭmon kiel nian mezuron de la indico de dopamina reakiro. Tau devenas de eksponenta kurba taŭgeco, kiu ampleksas la plimulton de la dopamina malkaŝa kurbo kaj tre korelacias (r = .9899) kun Km, la ŝajna afineco de dopamino por la DAT [24]. Por determini la efikon de kokaino sur maksimuma dopamina koncentriĝo ni komparis valorojn akiritajn antaŭ kaj post administrado (% ŝanĝo).

Histologio

Post ĉiu registrado, neoksidebla ŝtala elektrodo (AM Systems #571500, Sequim, WA) malaltiĝis ĝis la sama profundo kiel CFE kaj lezo (10 µA, 4 s) estis farita por marki la registran lokon. Cerboj estis forigitaj kaj konservitaj en 10% formalino. Luma mikroskopio estis uzata por identigi la lezonan lokon sur koronaj sekcioj (50 µm) tra la striato. Ĉiuj registradoj raportitaj ĉi tie estis faritaj en la ventrala striatumo [25].

Subcelular Fractionation de Striatal Tissue

Ratoj (LFD-2 semo, HFD-2 semo, LFD-6 semo, kaj HFD-6 semo; n = 10 / grupo; neniu diferenco en korpa pezo) estis mortigitaj per decapitado. Biokemia frakcio estis farita uzante la protokolon priskribitan en [26], kun etaj modifoj. La cerbo estis rapide forigita, frostita en izopentano kaj tranĉita sur krizostato (HM505E, Microm, Walldorf, Germanio, −20 ° C) ĝis atingi la striatumon. Bilatela 1-mm3 pugnoj tra la ventrala striato (averaĝa peza histo: 15.2 mg) estis homogenigitaj por 20 s en 0.8 ml glacia malvarma TEVP (10 mM Tris-bazo, 5 mM NaF, 1 mM Na3VO4, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, pH 7.4) + bufro sukerosa 320 mM. 100 µl alkvico de totala homogeno (H) estis konservita. La resto de H estis centrifugita je 800 × g por 10 min ĉe 4 ° C. La buleto (P1, kernoj kaj grandaj romboj) estis resendita en bufron 0.2 ml TEVP kaj konservita. La supernatante (S1) estis forigita kaj metita en puran tubon sur glacion. S1 centrifugis ĉe 9200 × g por 15 min ĉe 4 ° C por generi pelton (P2, krudajn sinaptosomajn membranojn) kaj supernatantan (S2). P2 estis enŝovita unufoje en bufo de sakrosa TEVP + 35.6 mM kaj tiam resumigita en 0.25 ml da sukeroza bufo de TEVP + 35.6 mM, vortikita milde por 3 s kaj hipo-osmotike lisita konservante la specimenon sur glacio por 30 min. Supernatant (S2) estis kolektita kaj ŝiris al 165,000 × g por 2 h por generi pelton (P3, malpezaj membranoj, reciklante endosomojn), kiu estis resuspendigita en TEVP (0.1 ml) kaj ŝparita. Ĉiuj specimenoj estis konservitaj je −80 ° C ĝis elektroforezo de ĝelaj poliacrilamidoj.

Ĝelektroforezo kaj Okcidenta Blotado

Proteina enhavo estis difinita per la Bio-Rad DC Protein Assay kit (Heraklo, CA), kaj la koncentriĝo de ĉiu specimeno estis ĝustigita al 0.3 mg / ml proteino. NuPAGE LDS (litia dodecilsulfato) specimeno bufro (Invitrogen, Carlsbad, CA) kaj 50 mM ditiotreitolo estis aldonitaj al ĉiu specimeno antaŭ hejtado je 70 ° C dum 10 min. Por ŝarĝi ekvivalentajn kvantojn de proteino por ĉiu frakcio, 3 µg de ĉiu specimeno estis ŝarĝitaj en NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris-ĝeloj (Invitrogen) por apartigo per ĝela elektroforezo. Proteinoj poste estis transdonitaj al polivinilidena fluorida membrano (PVDF) (PerkinElmer Life Sciences, Boston, MA). Nespecifaj liglokoj estis blokitaj dum 2 horoj ĉe ĉambra temperaturo en blokado de bufro (5% sengrasa seka lakto en PBS kaj 0.02% Tween 20 [PBS-T]). Makulegoj tiam estis kovitaj en primara antikorpo (1∶3000 muso unuklona kontraŭ-NR2B [numero 05-920, Millipore], 1∶5000 kuniklo kontraŭ-DAT [numero AB2231, Millipore], kaj 1∶1000 muso monoklona kontraŭ-transferrina ricevilo ( TfR) [# 13-6800, Invitrogen]. Makuloj estis tranĉitaj en 3 partojn: altajn (> 97 kDa), mezajn (46-97 kDa), kaj malaltajn (<46 kDa) pezojn kaj ĉiu parto sondita per antikorpo, kiu rekonis proteino ene de tiu pezintervalo. Ŝajnaj molekulaj pezoj por la antikorpoj uzataj estas: NR2B, 180 kDa; DAT, 75, 64, kaj 50 kDa; TrfR, 95 kDa. Post esplorado de mezaj pezaj gamoj makuloj por DAT, antikorpoj estis senvestigitaj per inkubacio. kun nudiga bufro (62.5 mM Tris, 2% SDS, 100 mM-β-merkaptoetanolo, pH 6.8) dum 15 minutoj je 50 ° C. Poste makuloj estis reblokitaj kaj sonditaj per kontraŭ-TfR. SeeBlue Plus 2 (Invitrogen) antaŭ- makulitaj normoj estis uzataj por takso de molekula pezo.

Proteinaj imunoblotoj estis analizitaj uzante Carestream Molecular Imaging Program 5.0. Neta intenseco (la sumo de la pikseloj ene de la bando de intereso malpli la sumo de la fonaj pikseloj) estis determinita por ĉiu bando. Por permesi komparojn inter blots, datumoj estis normaligitaj al la LFD-kontroloj ĉe 2 kaj 6 wks. Datumoj estas esprimitaj kiel la meza fald-indukto kompare al LFD ± SEM.

Kvanta Realtempa Reverse-Transkriptaza-Ĉena Reago (qRT-PCR)

Post kolekto de striaj punĉoj por okcidenta blot-analizo, frostigitaj cerboj estis korone sekciitaj sur la mikrotomo ĝis atingi la VTA / SN. Bilatela 1-mm3 pugnoj de VTA kaj SN-histo (meza histo-pezo = 15.0 mg) estis faritaj kaj RNA estis ĉerpita uzante PureLink RNA Mini-Kit (Invitrogen). RNA kvalito kaj kvanto estis taksitaj uzante RNA 6000 Nano Chip (Agilent, Santa Clara, CA) sur Agilent Bioanalyzer 2100. RNA-nombro de integreco (RIN) superis 7 por ĉiuj specimenoj, indikante altan kvaliton. Unu mikrogramo de tuta RNA estis uzata por sintezi cDNA uzante iScript cDNA Synthesis Kit (BioRad) en ThermoHybaid iCycler (Thermo Scientific). Primers specifaj por DAT (Slc6a3; Antaŭenprimaĵo: GGAAGCTGGTCAGCCCCTGCTT, Reverse primer: GAATTGGCGCACCTCCCCTCTG), β-actin (Nba; Forward primer: AGGGAAATCGTGCGTGACAT; Reverse primer: AAGA); : GCTCCTGTGCACACCATTTTCCC) genoj (nombroj de albanko NM_012694, NM_031144, kaj NM_001004198) estis desegnitaj uzante NCBI Primer-BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/) kaj aĉetita de Integritaj DNA-Teknologioj (Coralville, Iowa). Analiza kurbiga analizo kaj poliacrilamida ĝel-elektroforezo konfirmis la specifecon de la primeroj. La amplikonoj DAT, β-actin kaj Tbp estas 266, 182, kaj 136 bazaj paroj en longo, respektive.

Q-PCR-ilaro (iQ SybrGreen Supermix, BioRad) estis uzita. La reago efektiviĝis sur MyiQ Single Color Real-Time PCR Detection System (BioRad) en volumo de 20 µl, kun 2 µL de 3 µM ​​antaŭen kaj reverso kaj 4 µL cDNA-specimeno diluita 1∶10. PCR-biciklokondiĉoj estis 95 ° C por 5 min; 40-cikloj ĉe 94 ° C por 15 s, 60 ° por 15 s, 72 ° C por 15 s. Datenoj estis kolektitaj je legita temperaturo de 84 ° C por 15-s bazitaj sur la temperaturo de fandado de amplikono. Normaj diluaj kurboj estis generitaj por ĉiu primara aro per serio diluanta (1.00, 0.2, 0.04, kaj 0.008-fojojn) majstra cDNA-stoko formanta egalan miksaĵon de cDNA de ĉiuj traktaj grupoj. La ŝtipo10 de la diluvaj valoroj komplotiĝis kontraŭ la sojlaj ciklokvaloj por la normaj kurboj. MyiQ Optical System Software (BioRad) estis uzata por analizi la datumojn. Specimenoj enhavantaj neniun cDNA-ŝablonon kaj specimenojn de cDNA-reagoj enhavantaj neniun inversan transkriptase estis aranĝitaj kiel kontroloj por poluado kaj amplifado de genoma DNA respektive. Raportitaj valoroj estis normaligitaj al la mezaj valoroj de la internaj normoj ß-actin kaj Tbp por ĉiu specimeno. Datumoj estas esprimitaj kiel mezaj relativaj niveloj de DAT / internaj normoj mRNA ± SEM.

Statistikaj Analizo

DAT-esprimo dinamike ŝanĝiĝas dum la vivciklo en ambaŭ homoj [27] kaj ratoj [28], [29]. Aldone, la dopamina kaj kondutisma respondo al kokaino ankaŭ ŝanĝiĝas dum junaj ratoj maturiĝas [30]. Tiel, mezuradoj de DAT povus ko-varii kun aĝo kaj malpermesi signifajn komparojn inter 2 wk kaj 6 wk-grupoj. Tial, grupaj rimedoj por konsumado de manĝaĵoj, korpa pezo, maksimuma dopamina koncentriĝo, taŭ,% ŝanĝo, kaj relativa gena esprimo estis komparataj aparte por 2 kaj 6 wk-grupoj uzante la malsimplan t-teston de Student. Por okcidentaj blotaj analizoj, grupaj diferencoj en normaligita DAT-bandaĉa intenseco estis komparataj aparte por 2 kaj 6 wk-grupoj uzantaj duflankajn ripetajn mezurojn ANOVA (dietXfraction). Ĉiuj statistikaj analizoj estis faritaj en Graph Pad 5 (Prism Inc.).

rezultoj

HFD Antaŭenigas Pliigitan Grasan Konsumon

Antaŭ la komenco de dieta ekspozicio ne estis diferencoj en komenca korpa pezo en 2 semajno (LFD: 275.22 +/− 4.1 g; HFD: 280.87 +/− 4.8 g; p = 0.37), aŭ 6 semajnoj (LFD: 287.31 +/− 4.9 g; HFD: 289.44 +/− 5.1 g; 6 semajnoj p = 0.97) grupoj. Malgraŭ konsumado de dietoj kun draste malsama komponaĵo, ni trovis neniujn diferencojn en korpa pezo inter dietaj grupoj post 2 aŭ 6 semajnoj (Fig. 1a – b; ambaŭ ns). Ankaŭ ne estis diferenco en la totalaj kcaloj konsumitaj inter grupoj sekvantaj ambaŭ 2 kaj 6-semajnojn de dieta ekspozicio (Fig. 1c – d; ns). Tamen HFD-ratoj konsumis signife pli multajn kcalojn el graso (Fig. 1e – f; 2 wks: t (32) = 25.59; 6 wks: t (31) = 27.54; p<0.0001 por ambaŭ dietaj daŭroj).

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 1. Mezuraj manĝaĵoj kaj korpa pezo.

Ne estis diferencoj inter HFD kaj LFD en fina korpa pezo (a – b) aŭ entute kilokalorioj konsumitaj (ĉ – d) post 2 aŭ 6 semajnoj da dieta ekspozicio. (e – f) HFD-ratoj konsumis signife pli da kilokalorioj el graso ol LFD-ratoj en ambaŭ 2-semajnaj kaj 6-semajnaj kondiĉoj (***)p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g001

Prolongigita HFD Reduktas la Ritmon de DA-Rekupero

Voltammetrikaj registradoj estis faritaj en la ventrala striatumo (figuro 2). figuro 3 montras reprezentantajn elektrajn elvokitajn ŝanĝojn en dopamina koncentriĝo akiritaj de ratoj sekvante 6-semajnojn da dieto. Ĉe baseline, la grando de elvokita dopamino ne diferencis inter dietaj grupoj kaj trans dietaj daŭroj (Fig. 4a – b, ambaŭ ns). Tamen, inspektado de unuopaj ekzemploj sugestis, ke la indico de kadukiĝo post maksimuma dopamina koncentriĝo malsamis inter dietaj grupoj post 6-semajnoj de dieta ekspozicio (figuro 3 a – b por ekzemploj). La indico de kadukiĝo ŝuldiĝas ĉefe al dopamina forigo per la DAT [31], kiun ni modelis kiel ununura fazo eksponenta por determini tauon. Ne estis diferencoj inter dietaj grupoj post 2-semajnoj de dieta ekspozicio (Fig. 4c). Tamen, post 6-semajnoj de dieta ekspozicio, tau estis signife pli granda en ratoj de HFD-6-semaj relative al LFD-6-semaj (Fig. 4d; t (11) = 2.668; p<0.05). Tiel, 6 semajnoj de HFD reduktas la rapidon de dopamina malplenigo en la ventra striato kompare kun bestoj, kiuj konsumis LFD.

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 2. Histologia konfirmo de registraj retejoj por reaplika analizo.

Registradoj por LFD-nutritaj ratoj estas koditaj de grizaj trianguloj kaj por HFD-ratoj laŭ nigraj rondoj. Nombroj indikas distancon en mm antaŭa al Bregma. Figuro adaptita de Paxinos kaj Watson 2006.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g002

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 3. Elektra stimulo de la VTA / SNc elvokas fazan spikon en dopamina koncentriĝo.

Reprezentaj ekzemploj de datumoj akiritaj post 6-semajnoj da dieta ekspozicio. a) Fona-subtraha kolora intrigo montras aktualajn ŝanĝojn ĉe malsamaj potencialoj de la elektrodo antaŭ (−5 al 0 s relative al ekesto) kaj post (0.1 al 10 s relative al ekesto) elektra stimulo (STIM) de la VTA / SNc. Tempo estas la abscisa, la elektrodo potenciala estas la ordigita, kaj aktualaj ŝanĝoj estas koditaj en falsa koloro. Dopamina [identigita per ĝia oksidigo (+ 0.6 V; verda) kaj redukto (−0.2 V; bluaj) ecoj] transitive pliiĝis en respondo al la stimulo en ĉi tiu LFD-6 sema rato. b) Sama kiel en a), krom de rato HFD-6. c) Dopamina koncentriĝo kiel funkcio de tempo estas ĉerpita el la kolora intrigo en a) kaj taŭ estas identigita per kurba taŭgeco. Du ruĝaj punktoj markas la pinton kaj la dopaminan koncentriĝon tiutempe kiam tau estas atingita. Tau estas indikita dekstre. d) Sama kiel en c) sed datumoj ĉerpas de b).

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g003

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 4. Ses semajnoj da alta grasa dieto reduktas la imposton de dopamina reakiro kaj mildigas la dopaminan respondon al kokaino.

Averaĝa maksimuma dopamina koncentriĝo elvokita per VTA / SNpc-stimulo sekvante ĉu 2 (a) aŭ 6 semajnoj (b) de dieta ekspozicio antaŭ injekto de kokaino. ĉ – d) Meza Tau sekvanta 2 (c) wks aŭ 6 wks (d) de dieta ekspozicio. Tau estis signife pli granda por ratoj de HFD-6-semoj relative al LFD-6-semaj ratoj (*p e – f) Procenta ŝanĝo en maksimuma elvokita dopamina koncentriĝo post kokaina injekto por 2 (e) kaj 6 (f) semajnoj da dieta ekspozicio. Procenta ŝanĝo estis signife pli malgranda en HFD-6 semajno relative al LFD-6-semaj ratoj (**p

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g004

Prolongigita HFD Malplibonigas la DA-Respondon al Kokaino

Por plia sondi por diet-induktitaj ŝanĝoj en DAT, ni injektis ratojn kun la DAT-blokanta kokaino. Pinta dopamina koncentriĝo post elektra stimulo estas kaŭzita de dopamina liberigo, sed ankaŭ estas limigita per samtempa forigo de dopamino per la DAT [21]. Ni karakterizis la efikon de kokaino sur transdono de dopamino kalkulante la ŝanĝon en la grando de elvokita dopamino rilate al antaŭ-drogaj valoroj (% ŝanĝo). Du semajnoj de HFD ne influis% ŝanĝon rilate al LFD (Fig. 4e; ns). Tamen, sekvante 6-semajnojn kun dieta ekspozicio,% ŝanĝo estis signife senbrida en HFD rilate al LFD (Fig. 4f; t (10) = 4.014; p<0.01). Niaj rezultoj sugestas, ke 6, sed ne 2 semajnoj, de HFD-ekspozicio reduktas la dopaminan respondon al kokaino.

Prolongigita Ekspozicio HFD Reduktas DAT-Proteinan Esprimo en Sinaptosomaj Membranoj

Por determini, ĉu efikoj de plilongigita HFD ŝuldiĝis al ŝanĝoj en DAT-nombro, DAT-proteinaj niveloj estis kvantigitaj en totalaj histoj-homogenaj (frakcio H), sinaptosomaj membranoj (P2-frakcio) kaj intracelaj reciklaj endosomoj (frakcio P3). DAT estas an N-glinkita glicoproteino kun ŝajna molekula pezo de inter 50 kaj 80 kDa pro kreskantaj niveloj de glicosilado dum la proteino maturiĝas. [32]. Frakciigado estis konfirmita per riĉigita esprimo de la NR2B-subunuo de la NMDA-ricevilo en sinaptosomala membrana frakcio kaj de la transferrin-ricevilo en la endosoma frakcio (ekzemple blot vidu Fig. 5b). Ni ne trovis diferencojn en tuta DAT-proteino post 2 kaj 6-semajnoj de dieta ekspozicio (datumoj ne montritaj). Por testi por frakci-specifaj diferencoj en DAT-proteino, ni uzis duflankajn ripetajn mezurojn ANOVA (dietXfraction). Konsentite kun la voltammetriaj eksperimentoj, 2-semajnoj de dieta ekspozicio estis nesufiĉa por ŝanĝi nivelojn de iuj ajn el la DAT-izoformoj en aŭ P2 aŭ P3-frakcioj (Figo. 5. c, e, g; ĉiuj ns). Tamen, post 6-semajnoj de dieta ekspozicio, ekzistis grava dietaXfrakcia interagado (F(1,18) = 8.361, p<0.01); Fig. 5d) por la izoformo 50 kD de la DAT. Tiel, plilongigita HFD signife reduktis la izoformon 50 kD de la DAT en la frakcio P2 kaj kaŭzis tendencon al pliiĝo en la P3-frakcio. Ni trovis neniun efikon de dieto aŭ frakcio sur nek 64 kD (Fig. 5f; ns) aŭ la 70 kD (Fig. 5h; ns) DAT-izoformoj.

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 5. Konsumo de alta grasa dieto malpliigas membran asocian DAT-proteinon en la ventra striatumo.

a) Reprezenta bildo montranta la (2) 1 × 1 mm histo-punktojn prenitajn de la ventrala striato kombinitaj por DAT-proteina analizo. VStr = Ventra Striatum; DStr = Dorsal Striatum; cc = corpus callosum; ac = antaŭa komisaro. b) Reprezentaj okcidentaj difektoj de la datumoj prezentitaj en c-h. L = LFD; H = HFD; TfR = transferrin-ricevilo; NR2B = NR2B-subunuo de NMDA-ricevilo. c) Ne estis diferencoj en 50 kD DAT-proteino por aŭ P2 aŭ P3-frakcioj post 2-semajnoj de dieta ekspozicio. d) 50 kD-DAT-proteino signife reduktiĝas en la P2 (* = p<.05), sed ne P3-frakcio de ventra striata histo en HFD-6 wk rilate al LFD-6 wk ratoj. Ne estis diferencoj en proteino DAT 64 kD sekvante ĉu 2 (e) aŭ 6 semajnoj (f) de dieta ekspozicio. Ne estis diferencoj en 70 kD DAT-proteino sekvante nek 2 (g) aŭ 6 semajnoj (h) de dieta ekspozicio.

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g005

Por determini ĉu malpliiĝis niveloj de DAT-proteino en la frakcio P2 ŝuldiĝis, parte, al redukto de DAT-transskribo, VTA / SNc DAT-mRNA-niveloj estis mezuritaj en la samaj ratoj kiel supre (Fig. 6 ekzemple). Ni observis neniujn diferencojn inter dietaj grupoj en midRrain DAT mRNA post aŭ 2 aŭ 6-semajnoj kun dieta ekspozicio (Fig. 6b – c; ambaŭ ns). Tiel, diferencoj en DAT-proteinaj niveloj ene de la ventrala striatumo estas verŝajne ne pro deficitoj en DAT-produktado.

bildeton

malŝarĝo:

PowerPoint diapozitivoj

pli granda bildo

originala bildo

Figuro 6. Alta grasa dieta konsumo ne ŝanĝas DAT-mRNA-nivelojn. a)

Reprezenta bildo montranta punktojn de histo 1 × 1 mm prenitaj de la VTA / SN kaj kombinitaj por analizo de DAT-ARNm. cp = cerba penduncle; pc = posta komisaro; MM = meza mamula kerno. Estis neniuj diferencoj en relativaj DAT-mRNA-niveloj post ambaŭ 2-semajnoj (b) aŭ 6-semajnoj da dieta ekspozicio (c).

http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0058251.g006

diskuto

Prolongigita HFD-konsumo povas konduki al DIO kaj plastikeco ene de la centra nerva sistemo. Neŭronoj de dopamino kaj striatalaj dopaminaj receptoroj ŝajnas esti unu aro de CNS-celoj, kiuj estas tuŝitaj de HFD kaj ĉe obesaj individuoj [11], [13], [33]. Ĉi tie ni raportas, ke HFD reduktis la imposton de dopamina reakiro en la ventrala striatumo kaj ĉi tiu efiko dependis de la daŭro de ekspozicio. Grave, la efiko de HFD sur DAT-funkcio okazis en la foresto de DIO. Dum ni ne rekte mezuris markilojn de korpa adiposeco en ĉi tiu studo, bestoj estas tradicie klasifikitaj kiel DIO aŭ rezistemaj al dietoj bazitaj nur sur korpa pezo post eksponiĝo al HFD [34]. Prolongigita HFD signife mildigis la kapablon de kokaino, kiu interbatalas la DAT, potencigi la grandon de dopamina liberigo. Ni kvantigis DAT-proteinajn nivelojn en la ventrala striatumo uzante Western blot-analizon - distingante inter DAT lokalizitaj ene de subcelulaj frakcioj riĉigitaj ĉu por la plasmembrano aŭ por recikligi endosomojn. Ni trovis signifan redukton de nematura izoformo de la DAT asociita kun la plasmembrano. Tiel, plilongigita HFD ŝajnas malpliigi la imposton de reptampo de dopamino tra la DAT probable per interfero kun DAT-trafiko aŭ eble maturiĝo sed ne per malpliigado de DAT-gena esprimo aŭ DAT-mRNA-stabileco. Plie, periodo inter du kaj ses semajnoj da eksponiĝo al HFD ŝajnas esti la plej frua konsilpunkto por dieto-induktita plastikeco koncerne la DAT.

Obezeco estas korelaciita kun multoblaj aspektoj de striatala dopamina signalado, inkluzive de DAT-havebleco en ambaŭ homoj [18] kaj musoj [19]. Tamen nur antaŭ nelonge oni pruvis, ke la disvolviĝo de DIO ŝanĝas la indicon de reptampo de dopamina ĉe ratoj [20]. Dum ĉi tiu studo pruvis difektitan reptaminon de dopamino post ekzogena aplikita dopamino post nur 4-semajnoj da HFD, la bestoj, kiuj estis konservitaj sur HFD, estis elektitaj surbaze de komenca pezo-kresko kaj tiel povis reprezenti unikan loĝantaron. Konsentite kun ĉi tiu vido, HFD-bestoj daŭre manĝis pli da kalorioj kaj gajnas pli da pezo kompare al LFD-kontroloj. Alia lastatempa studo raportis malplifortigitan dopaminan rekaptadon post 12 semajnoj de HFD en ekster-breditaj ratoj. [35]. Tamen, estis signifaj diferencoj en korpa pezo inter la bestoj manĝitaj HFD kontraŭ norma laboreja chow-dieto kiam oni faris la rikaptajn mezuradojn. Tial restis neklare, ĉu mankoj en dopamina reakiro aperas kiel rekta rezulto de aŭ antaŭa disvolviĝo de DIO. Kontraste kun ĉi tiuj freŝaj raportoj, ni trovis neniujn diferencojn en korpa pezo aŭ totala kcal konsumo inter niaj dietaj grupoj kiam realigaj mezuradoj estis faritaj. Ke ni trovis diferencojn en dopamina reakiro post 6, sed ne 2, semajnoj de HFD sugestas, ke dietaj ŝanĝoj de dopamina reakiro estas respondo al kronikaj, sed ne akraj, ŝanĝoj en dieta kunmetaĵo. Aldone, niaj rezultoj sugestas, ke anstataŭ esti obezeco, ŝanĝoj induktitaj de dieto en DAT povus kontribui al la disvolviĝo de la malsano. Estontaj studoj bezonos pritrakti ĉu bestaj loĝantaroj malsame susceptibles al DIO [34] havas antaŭekzistantajn diferencojn en DAT-esprimo / funkcio aŭ estas malsame susceptibles al ŝanĝoj de DAT-induktitaj de dieto.

Laŭ nia scio, ĉi tiu estas la unua studo, kiu pruvas, ke HFD reduktas la dopaminan respondon al kokaino. Konsiderante la rolon de dopamino en rekompenco de drogoj, niaj rezultoj konformas al antaŭa laboro, kiu pruvas, ke ratoj nutris HFD dum proksimume 6-semajnoj pli malrapide akiras kokainan memadministradon ol bestoj kontrolitaj de dieto. [36]. Grave, ĉi tiu efiko ankaŭ sendependiĝis de DIO-disvolviĝo. Plie, ratoj selekte breditaj por susceptibilidad al DIO montras reduktitan preferon de kokaino, sugestante ke la rekompencaj propraĵoj de kokaino estas malakrigitaj en ĉi tiuj bestoj. [37]. La malpliigita respondo al kokaino, kiun ni observis ĉe ratoj de HFD-6, povis esti pro malpliigita striatal DAT-havebleco. Tamen, kokaino ankaŭ pliigas dopaminan signaladon per ne-DAT-dependaj mekanismoj. Specife, HFD povus difekti kokain-induktan mobilizadon de rezervaj dopaminaj veziketoj [38]. Kokaino ankaŭ mildigas GABA-transdonon al dopaminaj neŭronoj ene de la VTA [39] kaj induktas oscilojn en la pafo de dopaminaj ĉelaj korpoj [40]. Ajna aŭ ĉiuj ĉi tiuj procezoj povus esti ankaŭ tuŝitaj de HFD. Estonta esplorado bezonos pritrakti la mekanismojn sub kiuj HFD modifas la bonvolajn aspektojn de kokaino kaj / aŭ la potencialon por drogaj neŭraj adaptoj de drogoj. [18]. Konsumado de HFD mildigas ambaŭ la konduton [41] kaj dopamina respondo [20], [42] al amfetamino, kiu ankaŭ enmiksiĝas en la DAT. Grave, ratoj, kies konsumado de HFD estis kalorie kongrua al tiu de ratoj, kiuj nutras kontrolan dieton, ne disvolvas DIO, sed tamen malsukcesas krei amfetaminan lokan preferon [41]. Kune kun la prezentitaj datumoj, ŝajnas, ke konsumado de HFD malakceptas la respondon al psikostimuliloj. Ĉiuj drogoj pri misuzo influas la dopaminan sistemon, kaj oni konsideras ke drog-induktita plibonigo de dopamina signalado estas kritika por la disvolviĝo de toksomanio. [43]. Tiel, la reduktita respondo al kokaino en HFD-ratoj konformas al raportoj, ke obesaj homoj havas signife pli malaltan vivan riskon de disvolvi malsanan misuzon de substancoj. [44]. Estonta laboro bezonos pritrakti, ĉu la subjektiva taksado de kokainaj rekompencoj malsamas en obesaj homoj kompare kun normalaj pezaj kontroloj.

Nia okcidenta blot-analizo sugestas, ke plilongigita konsumado de HFD ne influas totalan striitan DAT-proteinon, sed anstataŭe reduktas la integriĝon de la neglikosilata 50 kDa DAT-izoformo en sinaptosomajn membranojn. Dum DAT-glicosilado plibonigas la ritmon de dopamina transporto kaj pliigas membran surfacan stabilecon [45], [46], [47], ne-glukozilata DAT de homoj [45], [46] same kiel ratoj [47] facile transportas dopaminon. Aldone, imunolabiladaj eksperimentoj malkaŝas, ke niveloj de neglikosilata DAT estas pli altaj en la ventro kompare al dorsal striatum en simioj kaj homoj. [47]. Prenitaj kune, ĉi tiuj studoj sugestas, ke la malpliiĝintaj membranaj niveloj de 50 kDa DAT povus kontribui al la deficita rekapto, kiun ni observis en ratoj 6 wk HFD. Niaj datumoj estas konformaj al antaŭa studo montranta HFD-konsumadon reduktas DAT-haveblecon en la ventra striatumo de musoj [19]. Ĉi tiu studo tamen ne mezuris DAT-lokalizon en malsamaj intracelulaj kupeoj. Aldone, niaj trovoj estas konformaj al studo montranta reduktojn en ĉela surfaco DAT en la striato de DIO-ratoj [20]. Ĉi tiu studo ankaŭ raportis, ke totalaj DAT-proteinaj niveloj ne estis tuŝitaj de dieto en la DIO-modelo. Ni vastigas ĉi tiun trovon por montri, ke tuta DAT-proteino ankaŭ ne efikas per HFD en ekster-breditaj ratoj. Tial, plilongigita konsumado de HFD ne ŝanĝas DAT-esprimon, sed povas interrompi DAT-trafikon aŭ maturiĝon.

La manko de diferencoj en VR / SNpc DAT-mRNA-niveloj post aŭ 2 aŭ 6-semajnoj de HFD-ekspozicio plue subtenas la nocion, ke entute DAT-niveloj ne estis tuŝitaj de niaj dietaj manipuladoj. Ĉi tiu rezulto kontrastas kun antaŭa raporto montranta reduktitan DAT-mRNA en la muso VTA post 17-semajnoj da HFD-konsumo. [12]. Tamen en ĉi tiu studo DAT-mRNA-niveloj estis mezuritaj post kiam la dietaj grupoj malsamis en korpa pezo dum 12-semajnoj. Tiel, iliaj rezultoj probable reprezentas malfruajn etapajn adaptojn al DIO. En resumo, niaj datumoj provizas fortajn evidentecojn, ke ekspozicio al HFD kondukas al funkciaj ŝanĝoj en striatala dopamina reakiro per malpliiĝo de membrano-asociita DATs sen ŝanĝo de totala DAT-esprimo. Grave, ni raportas, ke diet-induktitaj interrompoj en la DAT povas okazi antaŭ la ekapero de DIO, sugestante ke ĉi tiuj ŝanĝoj povus kontribui al la disvolviĝo de obesidad.

Niaj datumoj aldonas al kreskanta literaturo implikanta dieton en la regulado de dopamina funkcio, kaj provizas pliajn pruvojn, ke dietaj induktitaj ŝanĝoj en DAT-esprimo kondukas al funkcie signifaj ŝanĝoj en dopamina signalado. Induktitaj ŝanĝoj de dieto en la dinamiko de striatala dopamina signalado per la DAT verŝajne havas konsekvencojn por nutra konduto. Rilataj nutraĵoj elvokas fazajn pliiĝojn de stria dopamino [9], [48], [49], kiu probable plifortigas kaj plifortigas manĝ-direktitajn agojn [50]. Ĉi tie ni montras, ke 6-semajnoj da konsumado de HFD plilongigas la daŭron de fazoza dopamina liberigo per malpliiĝo de membranoj asociitaj DAToj en regiono de la striatumo, kie dopamina funkcio estas esenca por manĝaĵa konsumado. [51]. Dependaj de dietaj ŝanĝoj en DAT povus antaŭenigi nutraĵ-mekanismon, per kiu plilongigitaj dopaminaj signaloj elvokitaj de nutraĵaj stimuloj pliigas aktivadon de D1-receptoroj de striataj dopaminaj malaltaj afinecoj, kiuj estas kritikaj por proksimaj kondutoj. [52], [53], [54]. Kun la paso de la tempo, plilongigita altiĝo de striatala dopamino povus antaŭenigi adaptojn, kiel malreguligo de dopaminaj D2-riceviloj (D2R), kio pruviĝis en kaj homaj kaj ronĝaj modeloj de obezeco. [11], [33]. Nia studo sugestas, ke la disvolviĝo de la obezeco ne necesas por ŝanĝi la rekaptadon de dopamino. Tiel, diet-rilataj malkreskoj en membrana DAT povus antaŭi kaj kontribui al la apero de D2R-malreguligo, obezeco, kaj deviga manĝanta konduto, kiu disvolviĝas dum la konsumo de HFD. [11].

Dankojn

Ni deziras danki Drs. Jamie D. Roitman kaj James E. McCutcheon por helpaj komentoj pri pli fruaj versioj de la manuskripto. La enhavo de ĉi tiu artikolo respondas nur al la aŭtoroj kaj ne nepre reprezentas la oficialajn vidpunktojn de la NIH aŭ de la Ĉikaga Biomedika Konsorcio.

Aŭtoro Kontribuoj

Konceptis kaj desegnis la eksperimentojn: JJC EHC MFR. Faris la eksperimentojn: JJC DNP SRE. Analizis la datumojn: JJC EHC SRE MFR. Verkis la paperon: JJC EHC MFR.

Referencoj

  1. 1 Flegala KM, Carroll MD, Kit BK, Ogden CL (2012) Antaŭeco de Obezeco kaj Tendencoj en la Distribuo de Korpa Masa Indekso Inter Usonaj Plenkreskuloj, 1999 – 2010. JAMA 307: 491 – 497.
  2. 2 Ogden CL, Carroll MD, Curtin LR, McDowell MA, Tabak CJ, et al. (2006) Kvaloro de sobrepeso kaj obezeco en Usono, 1999-2004. JAMA 295: 1549 – 1555.
  3. Vidi Artikolon
  4. PubMed / NCBI
  5. Google Scholar
  6. 3 Drewnowski A, Almiron-Roig E (2010) Homaj Perceptoj kaj Preferoj por Gravaj Riĉaj Manĝaĵoj. En: Montmayeur JP, le Coutre J, redaktistoj. Detekto de grasoj: Gusto, Teksturo, kaj Afektaj Efektoj, Ĉapitro 11. Boca Raton, FL: CRC Gazetaro.
  7. Vidi Artikolon
  8. PubMed / NCBI
  9. Google Scholar
  10. Vidi Artikolon
  11. PubMed / NCBI
  12. Google Scholar
  13. Vidi Artikolon
  14. PubMed / NCBI
  15. Google Scholar
  16. Vidi Artikolon
  17. PubMed / NCBI
  18. Google Scholar
  19. Vidi Artikolon
  20. PubMed / NCBI
  21. Google Scholar
  22. Vidi Artikolon
  23. PubMed / NCBI
  24. Google Scholar
  25. Vidi Artikolon
  26. PubMed / NCBI
  27. Google Scholar
  28. Vidi Artikolon
  29. PubMed / NCBI
  30. Google Scholar
  31. Vidi Artikolon
  32. PubMed / NCBI
  33. Google Scholar
  34. Vidi Artikolon
  35. PubMed / NCBI
  36. Google Scholar
  37. Vidi Artikolon
  38. PubMed / NCBI
  39. Google Scholar
  40. Vidi Artikolon
  41. PubMed / NCBI
  42. Google Scholar
  43. Vidi Artikolon
  44. PubMed / NCBI
  45. Google Scholar
  46. Vidi Artikolon
  47. PubMed / NCBI
  48. Google Scholar
  49. Vidi Artikolon
  50. PubMed / NCBI
  51. Google Scholar
  52. Vidi Artikolon
  53. PubMed / NCBI
  54. Google Scholar
  55. Vidi Artikolon
  56. PubMed / NCBI
  57. Google Scholar
  58. Vidi Artikolon
  59. PubMed / NCBI
  60. Google Scholar
  61. Vidi Artikolon
  62. PubMed / NCBI
  63. Google Scholar
  64. Vidi Artikolon
  65. PubMed / NCBI
  66. Google Scholar
  67. Vidi Artikolon
  68. PubMed / NCBI
  69. Google Scholar
  70. 4. Rolls BJ (2009) La rilato inter dieta energia denseco kaj energia konsumado. Fiziologio & Konduto 97: 609-15.
  71. 5 Ledikwe JH, Blanck HM, Kettel Khan L, Serdula MK, Seymour JD, et al. (2006) Dieta energia denseco estas asociita kun energia konsumado kaj pezstatuso en usonaj plenkreskuloj. Amerika Revuo pri Klinika Nutrado 83: 1362 – 8.
  72. Vidi Artikolon
  73. PubMed / NCBI
  74. Google Scholar
  75. Vidi Artikolon
  76. PubMed / NCBI
  77. Google Scholar
  78. Vidi Artikolon
  79. PubMed / NCBI
  80. Google Scholar
  81. Vidi Artikolon
  82. PubMed / NCBI
  83. Google Scholar
  84. Vidi Artikolon
  85. PubMed / NCBI
  86. Google Scholar
  87. Vidi Artikolon
  88. PubMed / NCBI
  89. Google Scholar
  90. Vidi Artikolon
  91. PubMed / NCBI
  92. Google Scholar
  93. Vidi Artikolon
  94. PubMed / NCBI
  95. Google Scholar
  96. Vidi Artikolon
  97. PubMed / NCBI
  98. Google Scholar
  99. Vidi Artikolon
  100. PubMed / NCBI
  101. Google Scholar
  102. Vidi Artikolon
  103. PubMed / NCBI
  104. Google Scholar
  105. Vidi Artikolon
  106. PubMed / NCBI
  107. Google Scholar
  108. Vidi Artikolon
  109. PubMed / NCBI
  110. Google Scholar
  111. Vidi Artikolon
  112. PubMed / NCBI
  113. Google Scholar
  114. Vidi Artikolon
  115. PubMed / NCBI
  116. Google Scholar
  117. Vidi Artikolon
  118. PubMed / NCBI
  119. Google Scholar
  120. Vidi Artikolon
  121. PubMed / NCBI
  122. Google Scholar
  123. Vidi Artikolon
  124. PubMed / NCBI
  125. Google Scholar
  126. Vidi Artikolon
  127. PubMed / NCBI
  128. Google Scholar
  129. Vidi Artikolon
  130. PubMed / NCBI
  131. Google Scholar
  132. Vidi Artikolon
  133. PubMed / NCBI
  134. Google Scholar
  135. Vidi Artikolon
  136. PubMed / NCBI
  137. Google Scholar
  138. Vidi Artikolon
  139. PubMed / NCBI
  140. Google Scholar
  141. Vidi Artikolon
  142. PubMed / NCBI
  143. Google Scholar
  144. Vidi Artikolon
  145. PubMed / NCBI
  146. Google Scholar
  147. Vidi Artikolon
  148. PubMed / NCBI
  149. Google Scholar
  150. Vidi Artikolon
  151. PubMed / NCBI
  152. Google Scholar
  153. Vidi Artikolon
  154. PubMed / NCBI
  155. Google Scholar
  156. 6 Malgranda DM, Jones-Gotman M, Dagher A (2003) Nutrita-induktita dopamina liberigo en dorsa striatumo korelacias kun manĝaj agrablaj taksoj en sanaj homaj volontuloj. NeuroImage 19: 1709 – 1715.
  157. 7 Bassero V, Di Chiara G (1999) Diferenca respondigebleco de dopamina transdono al manĝaĵ-stimuloj en nukleaj akcentaj kukaĵoj / kernaj kupeoj. Neŭroscienco 89: 637 – 41.
  158. 8 Roitman MF, Wheeler RA, Wightman RM, Carelli RM (2008) Realtempaj kemiaj respondoj en la kerno kutimas diferencigi rekompencajn kaj aversajn stimulojn. Naturo-Neŭroscienco 11: 1376 – 7.
  159. 9 Bruna HD, McCutcheon JE, Cone JJ, Ragozzino ME, Roitman MF (2011) Primara manĝaĵa rekompenco kaj rekompenco-prognozaj stimuloj elvokas diversajn mastrojn de fazo dopamina signalado tra la striatumo. La Eŭropa Journalurnalo de Neŭroscienco 34: 1997 – 2006.
  160. 10 Grabenhorst F, Rolls ET, Parris BA, d 'Souza AA (2010) Kiel la cerbo reprezentas la rekompencan valoron de graso en la buŝo. Cereba Cortex 20: 1082 – 91.
  161. 11 Johnson PM, Kenny PJ (2010) Dopamine D2-receptoroj en toksomaniul-rekompenca misfunkcio kaj deviga manĝado ĉe obesaj ratoj. Naturo-Neŭroscienco 13: 635 – 41.
  162. 12 Vucetic Z, Carlin JL, Totoki K, Reyes TM (2012) Epigenetika malreguligo de la dopamina sistemo en diet-induktita obezeco. Revuo pri neŭkemio 120: 891 – 84.
  163. 13 Stice E, Spoor S, Bohon C, Small DM (2008) Rilato inter obezeco kaj senkonscia striata respondo al manĝaĵo estas moderita per TaqIA A1-alelo. Scienco 322: 449 – 452.
  164. 14 Cragg SJ, Rice ME (2004) Dancante preter la DAT ĉe DA sinapso. Tendencoj en Neŭroscienco 27: 270 – 7.
  165. 15 Dreyer JK, Herrik KF, Berg RW, Hounsgaard JD (2010) Influo de fazo kaj tona dopamina liberigo sur receptoro-aktivigo. The Journal of Neuroscience 30: 14273 – 83.
  166. 16 Figlewicz DP, Szot P, Chavez M, Woods SC, Veith RC (1994) Intraventricular-insulino pliigas dopamine-transportan mRNA en rato VTA / substantia nigra. Cerba Esploro 644: 331 – 4.
  167. 17 Mebel DM, Wong JC, Dong YJ, Borgland SL (2012) Insulino en la ventrala tegmentala areo reduktas hedonan manĝadon kaj subpremas dopaminan koncentriĝon per pliigita reakcepto. La Eŭropa Journalurnalo de Neŭroscienco 36: 2336 – 46.
  168. 18 Chen PS, Yang YK, Yeh TL, Lee IH, Yao WJ, et al. (2008) Korelacio inter korpa masindekso kaj striatala dopamina transportilo havebla en sanaj volontuloj - SPECT-studo. NeuroImage 40: 275 – 9.
  169. 19 South T, Huang XF (2008) Alt-grasa dieta ekspozicio pliigas dopaminan D2-receptoron kaj malpliiĝas dopamina transporta ricevilo de liganta denseco en la kerno de akcentoj kaj kavaj putamenoj de musoj. Neŭrokemia esplorado 33: 598 – 605.
  170. 20 Speed ​​N, Saunders C, Davis AR, Owens WA, Matthies HJG, et al. (2011) Difektita striatala Akt signalado perturbas dopaminan homeostazon kaj pliigas nutradon. PloS unu 6: e25169.
  171. 21 Roitman MF, Wescott S, Cone JJ, McLane MP, Wolfe HR (2010) MSI-1436 reduktas akran manĝaĵon sen influado de dopamina transporta agado. Farmakologia Biokemio kaj Konduto 97: 138 – 43.
  172. 22 Heien MLAV, Johnson MA, Wightman RM (2004) Resolvanta neurotransmisilojn detektitajn per rapid-cikla voltammetrio. Analiza kemio 76: 5697 – 704.
  173. 23 Sinkala E, McCutcheon JE, Schuck MJ, Schmidt E, Roitman MF, et al. (2012) Elektroda kalibrado kun mikrofluida fluo-ĉelo por rapid-skana cikla voltammetrio. Laborado sur peceto 12: 2403 – 08.
  174. 24 Yorgason JT, España RA, Jones SR (2011) Demon-voltmetimetrio kaj analiza programaro: analizo de kokain-induktitaj ŝanĝoj en dopamina signalado per multoblaj kinetikaj mezuroj. Revuo pri neŭrosciencaj metodoj 202: 158 – 64.
  175. 25 Paxinos G, kaj Franklin KBJ (2004) La rato cerbo en stereotaksaj koordinatoj. San-Diego, CA: Akademia Gazetaro.
  176. 26 Hallett PJ, Collins TL, Standaert DG, Dunah AW (2008) Biokemia frakcio de cerba histo por studoj pri ricevo de distribuado kaj trafiko. Aktualaj protokoloj en neŭroscienco / redakcia estraro, Jacqueline N. Crawley ... [kaj aliaj] Ĉapitro 1: Unueco 1.16.
  177. 27 Meng SZ, Ozawa Y, Itoh M, Takashima S (1999) Evoluaj kaj aĝaj rilataj ŝanĝoj en dopamina transportilo, kaj dopaminaj D1 kaj D2-riceviloj en homaj bazaj ganglioj. Cerba Esploro 843: 136 – 144.
  178. 28 Moll GH, Mehnert C, Wicker M, Bock N, Rothenberger A, et al. (2000) Aĝoj-rilataj ŝanĝoj en la densecoj de presinaptaj monaminaminoj en malsamaj regionoj de la rato-cerbo de frua junula vivo ĝis malfrua plenkreskeco. Disvolva Cerbo-Esploro 119: 251 – 257.
  179. 29 Kruco-Muros I, Afonso-Oramas D, Abreu P, Perez-Delgado MM, Rodriguez M, et al. (2009) Maljuniĝantaj efikoj sur la transporto de dopamina esprimo kaj kompensaj mekanismoj. Neurobiologio de Aging 30: 973 – 986.
  180. 30 Badaniĉ KA, Adler KJ, Kirstein CL (2006) Adoleskantoj diferencas de plenkreskuloj en kokina kondiĉita loko prefero kaj kokain-induktita dopamino en la nukleo accumbens septi. Eŭropa Revuo por Farmakologio 550: 95 – 106.
  181. 31 Jones SR, Garris PA, Kilts CD, Wightman RM (1995) Komparo de dopamina kaptiĝo en la bazolateral amigdaloida kerno, kaŭdato-putameno, kaj kerno de la rato. Revuo pri neŭkemio 64: 2581 – 9.
  182. 32 Rao A, Simmons D, Sorkin A (2011) Diferenca subcelular-distribuo de endosomaj kupeoj kaj la dopamina transportilo en dopaminergiaj neŭronoj. Molekula kaj Ĉela Neŭroscienco 46: 148 – 58.
  183. 33 Wang GJ, Volkow ND, Thanos PK, Fowler JS (2009) Bildigo de cerbaj dopaminaj vojoj: implicoj por kompreno de obezeco. Urnalo de toksomaniulo 3: 8 – 18.
  184. 34 Levin BE, Dunn-Meynell AA, Balkan B, Keesey RE (1997) Selektema bredado por obtuz-induktita dieto kaj rezisto en ratoj Sprague-Dawley. Amerika Revuo pri Fiziologio 273: R725 – 730.
  185. 35 Morris JK, Bomhoff GL, Gorres BK, Davis VA, Kim J, et al. (2011) La insulina rezisto malhelpas nigrostriatan dopaminan funkcion. Eksperimenta neŭrologio 231: 171 – 80.
  186. 36 Wellman PJ, Nation JR, Davis KW (2007) Malsukceso de akiro de kokain-memadministrado en ratoj konservitaj sur alta grasa dieto. Farmakologio, biokemio kaj konduto 88: 89 – 93.
  187. 37. Thanos PK, Kim R, Cho J, Michaelides M, Anderson BJ, kaj aliaj. (2010) Obezecrezistaj S5B-ratoj montris pli grandan kokainon kondiĉitan lokan preferon ol la obezemaj OM-ratoj. Fiziologio kaj konduto 101: 713-8.
  188. 38 Venton BJ, Seipel AT, Phillips PEM, Wetsel WC, Gitler D, et al. (2006) Kokaino pliigas dopamin-liberigon per mobilizado de sinapsina dependa rezerva naĝejo. The Journal of Neuroscience 26: 4901 – 04.
  189. 39 Steffenson SC, Taylor SR, Horton ML, Barber EN, Lyte LT (2008) Kokaino malinstigas dopaminajn neŭronojn en la ventrala tegmenala areo per uz-dependaj blokado de GABA-neŭronaj tensiaj sentemaj kanaloj. Eŭropa Journalurnalo de Neŭroscienco 28: 2028 – 2040.
  190. 40 Psikostimulantoj Shi WX, Pun CL, Zhou Y (2004) induktas malalt-frekvencajn oscilojn en la pafo-agado de dopaminaj neŭronoj. Neuropsikofarmakologio 29: 2160 – 2167.
  191. 41 Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Lipton JW, et al. (2008) Elmontro al levitaj niveloj de dieta graso mildigas psikostimulan rekompencon kaj mezolimban dopaminan turniĝon en la rato. Konduta Neŭroscienco 122: 1257 – 63.
  192. 42 Geiger BM, Haburcak M, Avena NM, Moyer MC, Hoebel BG, et al. (2009) Difektoj de mezolimbic dopamina neŭrotransmisio en rata dieta obezeco. Neŭroscienco 159: 1193 – 9.
  193. 43 Hyman SE, Malenka RC, Nestler EJ (2006) Neŭtralaj Mekanismoj de toksomanio: La Rolo de Rekompensa Rilata Lernado kaj Memoro. Toksomanio 29: 565 – 598.
  194. 44 Simon GE, Von Korff M, Saunders K, Miglioretti DL, Crane PK, et al. (2006) Asocio inter obezeco kaj psikiatriaj malordoj en la usona plenkreska loĝantaro. Arkivoj de Ĝenerala Psikiatrio 63: 824 – 30.
  195. 45 Torres GE, Carneiro A, Seamans K, Fiorentini C, Sweeney A, et al. (2003) Oligomerigo kaj trafiko de la transporto de homaj dopaminoj. The Journal of Biological Chemistry 278: 2731 – 2739.
  196. 46 Li LB, Chen N, Ramamoorthy S, Chi L, Cui XN, et al. (2004) La rolo de N-glicosilado en funkcio kaj surfaca trafiko de la transportanto de homa dopamino. The Journal of Biological Chemistry 279: 21012 – 21020.
  197. 47 Afonso-Oramas D, Cruz-Muros I, de la Rosa DA, Abreu P, Giraldez T, et al. (2009) Dopamina transporta glicosilado korelacias kun la vundebleco de dubonaj dopaminergiaj ĉeloj en parkinsona malsano. Neurobiologio de Malsano 36: 494 – 508.
  198. 48 Roitman MF, Stuber GD, Phillips PEM, Wightman RM, Carelli RM (2004) Dopamine funkcias kiel subsekunda modulatoro de serĉado de nutraĵoj. The Journal of Neuroscience 24: 1265 – 71.
  199. 49 McCutcheon JE, Beeler JA, Roitman MF (2012) Sukroza-antaŭdira kvereloj elvokas pli grandan fazan dopamin-liberigon ol sakarina-antaŭdiraj kvereloj. Sinapso 66: 346 – 51.
  200. 50 Flagel SB, Clark JJ, Robinson TE, Mayo L, Czuj A, et al. (2011) Elektebla rolo por dopamino en stimulado-rekompenco-lernado. Naturo 469: p53 – 7d.
  201. 51 MSc Szczypka, Mandel RJ, Donahue BA, Snyder RO, Leff SE, et al. (1999) Viral-liverado de genoj selektive restarigas manĝadon kaj malhelpas letalecon de dopamina-manka musoj. Neŭra 22: 167 – 78.
  202. 52 Di Ciano P, Cardinal RN, Cowell RA, Little SJ, Everitt BJ (2001) Diferenca implikiĝo de NMDA, AMPA / kainato kaj dopamina riceviloj en la kerno akcenta kerno en akiro kaj agado de pavloviana alproksimiĝa konduto. Journal of Neuroscience 21: 9471 – 9477.
  203. 53 Kravitz AV, Freeze BS, Parker PRL, Kay K, Thwin MT, et al. (2010) Regularo de parkinsonianaj motoraj kondutoj per optogenetika kontrolo de bazaj ganglioj. Naturo 466: 622 – 6.
  204. 54 Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012) Distingitaj roloj por rektaj kaj nerektaj vojaj striaj neŭronoj en plifortigo. Naturo-Neŭroscienco 15: 816 – 818.