Antagonisto de ghrelin-receptoro (GHS-R1A) mildigas la rekompencajn proprietojn de morfino kaj pliigas opioidajn peptidajn nivelojn en rekompencaj areoj en musoj (2015)

Akra same kiel kronika ekspozicio de toksomaniuloj influas profunde la mezolimban dopaminan sistemon, grava ŝlosila cirkvito de la cerbaj rekompencaj sistemoj (Nestler, 2005). Ĉi tiuj efikoj estis proponitaj por substreki, almenaŭ parte, disvolviĝon de drogmanio (Saĝo, 2004). Drogodependeco kaŭzas ampleksan gamon de malutilaj efikoj al la individuo, kaj ankaŭ la socio kaj novaj farmacologiaj intervenoj, traktantaj ĉi tiun gravan publikan sanproblemon, estas garantiitaj (Koob kaj Le Moal, 2001). Klarigante la signalajn sistemojn mediaciantajn la kapablon de toksomaniuloj aktivigi la mezolimban dopaminan sistemon, unikaj traktadaj strategioj por malsanaj uzoj de substanco povas esti identigitaj.

Esploroj montris, ke oftaj neŭrobiologiaj mekanismoj reguligas la konsumadon kaj rekompencon induktitan de manĝaĵoj kaj toksomaniuloj (Morganstern et al., 2011), proponante, ke la rolo de la manĝaĵ-reguligaj gut-cerbaj peptidoj kiel ekzemple grelino inkluzivas rekompencon. Komence oni montris, ke ghrelin kaŭzas liberigon de kreska hormono (Kojima et al., 1999) kaj induktas adiposecon en ratoj (Tschop et al., 2000). Ĝis nun estas sciate, ke ghrelino pliigas manĝaĵon, malsaton kaj ankaŭ stimulas apetiton tra hipotalamaj cirkvitoj (por recenzo vidu Egecioglu et al. (2011)). Aldone al la hipotalamo, riceviloj de grelin (GHS-R1A) esprimiĝas en rekompencaj areoj kiel la amigdalo, striato, prealfronta korto, ventra tegmenta areo (VTA) kaj hipokampo (por recenzo vidu Engel kaj Jerlhag (2014)) implicante tion la fiziologia rolo de grelino etendiĝas preter energia reguligo de homoeostazo. Efektive, la oreksigena peptida grelino montriĝis aktiviganto de la mesolimbia dopamina sistemo kaj ankaŭ reguliganto de rekompenco, instigo kaj konsumado de alkoholo, nikotino, amfetamino kaj kokaino ĉe musoj (por recenzo vidu Engel kaj Jerlhag (2014)).

Opioidoj, kiel aliaj toksomaniuloj, aktivigas la mezolimban dopaminan sistemon kaŭzante akumulan dopaminan liberigon tra aktivigo de µ- kaj / aŭ δ-opioidaj riceviloj en la kerno accumbens (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) kaj en la VTA, supozeble per malpliigado de la GABA -inhibicio de dopaminaj neŭronoj (Johnson kaj North, 1992). Plue, amasoj de bal-opioidaj riceviloj reguligas la agadon de mesolimbia dopamina sistemo (Chefer et al., 2005, Spanagel kaj aliaj, 1992). Ripeta ekspozicio al opioidoj produktas adaptajn ŝanĝojn de pluraj neurotransmisiloj, inkluzive de opioidaj peptidoj, en rekompencaj lokoj, kiuj kontribuas al la disvolviĝo de toksomanio (De Vries kaj Shippenberg, 2002). Ĉe ratoj farmakologia forigo de la GHS-R1A mildigas akumulan dopamin-liberigon de morfino same kiel stereotipaj kondutoj (Sustkova-Fiserova et al., 2014). La celo de la unua parto de la aktuala serio de eksperimentoj estis esplori la akran efikon de antagonisto GHS-R1A, JMV2959, pri la kapablo de morfino kaŭzi lokomotan stimuladon, liberigon de dopamina kaj kondiĉita loka prefero en musoj. La celo de la dua parto de ĉi tiu studo estis taksi la efikon de ripetita traktado kun JMV2959 aŭ ghrelin sur niveloj de opioidaj peptidoj (Met-enkephalin-Arg)⁶Phe⁷ (MEAP), dinorfino B (DynB) kaj Leu-enkephalin-Arg⁶ (LeuArg)) en rekompencaj rilataj areoj inkluzive de la amigdala, striatum, prefrontal-kortekso, VTA kaj hipokampo.

Plenkreskaj post-pubertaj masklaj NMRI-musoj (8-12 semajnoj aĝaj kaj 25-40 g korpa pezo; Karlo-Rivero, Sulzfeld, Germanio) estis uzataj. Mallonge, ĉiuj musoj estis grupigitaj kaj tenataj ĉe 12 / 12 h lumo / malhela ciklo (lumoj je la sepa matene). Provizita akvo kaj manĝaĵo (Normala koko; Harlan Teklad, Norfolk, Anglujo) estis provizitaj ad libitum, krom dum la eksperimentaj aranĝoj. Novaj musoj estis uzataj por ĉiu unuopa konduta testo same kiel por la opioida peptida analizo. La eksperimentoj estis aprobitaj de la Sveda Etika Komitato pri Animalesplorado en Gotenburgo. Ĉiuj klopodoj estis minimumigitaj por suferado de bestoj kaj malpliigo de la uzataj bestoj. Ĉiuj bestoj rajtis aklimati almenaŭ unu semajnon antaŭ la komenco de la eksperimentoj.

Morfina hidroklorido (Apoteksbolaget Sahlgrenska Hospital; Gotenburgo, Svedio) estis dissolvita en veturilo (0.9% natria klorida solvo) kaj oni administris ip je dozo de 20 mg / kg 10 min antaŭ la komenco de la eksperimento. Ĉi tiu dozo estis elektita ĉar pli malalta dozo (10 mg / kg, ip) ne kaŭzis lokomotan stimuladon ĉe niaj musoj (datumoj ne montritaj). La elektita dozo (6 mg / kg, ip) de JMV2959 (sintezita ĉe la Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), UMR5247, CNRS, Montpellier 1 kaj 2, Francio), antagonisto GHS-R1A estis determinita antaŭe kaj havas neniu efiko al lokomotora agado, akciza dopamina liberigo kaj kondiĉita loko prefero en musoj (Jerlhag et al., 2009). JMV2959 dissolviĝis en veturilo (solvo de 0.9% natria klorido) kaj ĉiam estis administrita dudek minutojn antaŭ ekspozicio al morfino aŭ dekapigo por analizo de opioidaj peptidaj niveloj. La elektita dozo de JMV2959 ne influis la malglatan konduton de la musoj en iu eksperimento. Por la kondutaj provoj JMV2959 estis administrita akre, ĉar niaj antaŭvidaj studoj montras, ke ununura injekto de JMV2959 atenuas rekompencon de drogoj (por revizio vidu Engel kaj Jerlhag (2014)). JMV2959 estis administrita subkronike dum kvin sekvaj tagoj por la opioida peptida analizo por pliigi la eblecon detekti fortikan efikon. Krome per ripetaj injektoj vi evitas la eblan konfuzan efikon de akra injekto-streĉado sur peptidoj. Acilata rato ghrelin (Bionuklea; Bromma, Svedio) estis diluita en 0.9% natria klorido kaj la elektita dozo de ghrelino (0.33 mg / kg, ip) estis antaŭe montrita kaŭzanta rekompencon en musoj (Jerlhag, 2008). Ekvilibra dezajno estis uzata por ĉiuj drogaj defioj.

Antaŭaj studoj montris, ke morfino kaŭzas lokomotan stimuladon en ronĝuloj (Wise and Bozarth, 1987). Lokomotora agado estis registrita en ok sonorilaj, ventumitaj kaj malpezaj lokomotoraj skatoloj (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, Svedio). Kvin post kvin vicoj de fotilaj traboj, ĉe la etaĝa nivelo de la skatolo, kreante fotokelekton permesis komputilan sistemon registri la agadon de la musoj. Lokomotora agado estis difinita kiel la amasigita nombro de novaj fotokellonoj interrompitaj dum 60-min periodo. En ĉiuj eksperimentoj, la musoj rajtis kutimiĝi al la lokomotora agado-horo unu horon antaŭ la drogaj defioj. Ne estis diferencoj inter kutimado en iu el la traktaj grupoj (datumoj ne montritaj).

En la unua serio de eksperimentoj oni esploris la efikojn de JMV2959 (6 mg / kg, ip) sur induktita morfino (20 mg / kg, ip) lokomotora stimulo. JMV2959 administris 20 min antaŭ morfino kaj la agadregistrado komenciĝis dek minutojn post la lasta injekto. Ĉiu muso ricevis unu traktadon-kombinaĵon (veturilo / veturilo, JMV2959 / veturilo, morfino / veturilo aŭ JMV2959 / morfino; n= 8 per kurac-kombinaĵo) kaj estis submetita nur al unu eksperimenta provo.

Por taksi la efikojn de JMV2959 sur la rekompencaj efikoj de morfino en novaj musoj, kondiĉitaj lokaj preferotestoj estis faritaj en musoj kiel antaŭe priskribitaj (Jerlhag, 2008). Mallonge, du-ĉambra CPP-aparato, kun 45-lx-lumigado kaj apartaj vidaj kaj taktikaj klaboj estis uzata. Unu kupeo estis difinita per nigraj kaj blankaj strioj kaj per malhele lamenigita planko dum la alia havis blankan pentritan lignan plankon kaj murojn el ligna teksturo. La procedo konsistis el antaŭkondiĉado (tago 1), kondiĉado (tagoj 2 – 5), kaj postkondiĉado (tago 6). Ĉe antaŭkondiĉo, musoj estis injektitaj ip per veturilo kaj estis metitaj en la ĉambron kun libera aliro al ambaŭ kupeoj dum 20 min por determini la komencan lokon (aŭ flankan) preferon. Kondiĉado (20 min per sesio) estis farata per biasa proceduro, en kiu morfino (20 mg / kg) estis parigita kun la plej preferata kupeo kaj veturilo kun la preferata kupeo. Ĉiuj musoj ricevis unu injekton de morfino same kiel de veturilo ĉiutage kaj la injektoj estis ŝanĝitaj inter mateno kaj posttagmezo laŭ bilanco. Ĉe postkondiĉado de la musoj (n= 16) estis injektitaj kun JMV2959 (6 mg / kg, ip) aŭ egala volumo de veturila solvo kaj 20 min poste lokitaj sur la mezlinio inter la du kupeoj kun senpaga aliro al ambaŭ kupeoj por 20 min (kreante la sekvajn kuracajn grupojn; Morph-Veh kaj Morph-JMV2959).

Kondiĉa loko prefero estis kalkulita kiel la diferenco en% de la tuta tempo pasigita en la drog-parigita (te. malplej preferita) kupeo dum la postkondiĉa kaj antaŭkondiĉa sesio.

Konsiderante ke JMV2959 atenuas la induktitan-lokomotan stimuladon de morfino kaj kondiĉas lokan preferon en musoj, la efiko de JMV2959 (6 mg / kg, ip) sur induktita morfino (20 mg / kg, ip) akumulan dopamin-liberigon estis esplorita per en vivo mikrodialysis en libere movantaj musoj. Por mezuradoj de eksterĉelaj dopaminaj niveloj, musoj estis enplantitaj unuflanke kun sonda mikrodiálisis poziciigita en la kerno accumbens. Tial, la musoj estis anestezitaj per isoflurano (Isofluran Baxter; Univentor 400 Anesthesia Unit, Univentor Ldt., Zejtun, Malto), metitaj en stereotipan kadron (David Kopf Instruments; Tujunga, CA, Usono) kaj konservitaj sur hejtilo por malebligi. hipotermio. Xylocain-adrenalino (5 μg / ml; Pfizer Inic; Nov-Jorko, Usono) estis uzata kiel loka anesteziko kaj karprofeno (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gotenburgo, Svedio) estis uzata por malpezigi eventualan doloron. La krania osto estis elmontrita kaj oni truis unu truon por la sondilo kaj unu por la ankranta ŝraŭbo. La sondilo estis hazarde alternita al la maldekstra aŭ dekstra flanko de la cerbo. La koordinatoj de 1.5 mm antaŭaj al la bregma, ± 0.7 flankaj al la mezlinio kaj 4.7 mm sub la surfaco de la cerba surfaco estis uzataj por la kerno akcentaj (Franklin kaj Paxinos, 1997). La eksponita pinto de la membrana dializo (20,000 kDa fortranĉis kun od / id de 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, Svedio) de la sondilo estis 1 mm. Ĉiuj sondoj estis kirurgie enplantitaj du tagojn antaŭ la eksperimento. Post kirurgio la musoj estis konservitaj en individuaj kaĝoj ĝis la testo tago (Macrolon III).

En la testo tago la sondilo estis konektita al microperfuza pumpilo (U-864 Syringe Pump; AgnThós AB) kaj perfuzita per Ringer-solvo kun rapideco de 1.5 μl / min. Post unu horo de kutimiĝo al la mikrodialysis aranĝo, perfuzaj specimenoj estis kolektitaj ĉiun 20-min. La nivelo de dopamina nivelo estis difinita kiel la mezumo de tri sinsekvaj specimenoj antaŭ la unua drogo / veturila defio, kaj la kresko de akuma dopamino estis kalkulita kiel la procenta kresko de la baslinio. Post la bazaj specimenoj (−40 min ĝis 0 min), musoj estis injektitaj kun JMV2959 aŭ veturilo (je 0 min), kiu estis sekvita de morfino aŭ veturila injekto (je 20 min). Post ĉi tiuj administraj drogoj pliaj ok 20-min-specimenoj estis kolektitaj. Kolektive la jenaj kuracaj grupoj (n= 8 en ĉiu grupo) estis kreitaj: vehicle-vehicle (Vehicle-Veh), vehicle-morphine (Veh – Morph), JMV2959-vehicle (JMV2959-Veh) kaj JMV2959-morfino (JMV2959-Morph).

La niveloj de dopamino en la dializoj estis determinitaj per HPLC kun elektrokemia detekto. Bombo (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, Svedio), ion-interŝanĝa kolumno (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, Svedio) kaj detektilo (Antec Decade; Antec Leyden; Zoeterwoude , Nederlando) ekipita kun fluo-ĉelo VT-03 (Antec Leyden) estis uzataj. La movebla fazo (pH 5.6), konsistanta el sulfona acido 10 mM, cítrica acido 200 mM, natria citrato 200 mM, 10% EDTA, 30% MeOH, estis filtrita al vakuo per 0.2 μm membrana filtrilo (GH Polypro; PALL Gelman Laboratory; Lund, Svedio). La movebla fazo estis liverita je fluo de 0.2 ml / min pasanta degaseron (Kovalent AB), kaj la analito estis oksidita je + 0.4 V.

Post kiam la mikrodijalaj eksperimentoj estis finitaj, la musoj decapitis, kaj sondoj perfuziĝis kun pontamina ĉielo blua 6BX por faciligi la lokalizadon de sondoj. La cerboj estis muntitaj sur vibroslica aparato (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, Britujo) kaj tranĉitaj en 50 μm-sekcioj. La loko de la sondilo estis determinita per malpura observado per malpeza mikroskopo. La ĝusta pozicio de la sondilo estis kontrolita (Franklin kaj Paxinos, 1997) kaj nur musoj kun ĝustaj lokigoj estis uzataj en la statistika analizo.

La efikoj de JMV2959-traktado sur la niveloj de MEAP, DynB kaj LeuArg en rekompencaj rilataj areoj estis esploritaj. Musoj estis injektitaj per aŭ JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) aŭ egala volumo de veturilo (ip, n= 8) dum kvin sekvaj tagoj. 20 min post la lasta injekto la musoj estis oferitaj kaj la cerbo de ĉi tiuj musoj estis kolektita. Apartaj musoj estis injektitaj per aŭ grenlinio (0.33 mg / kg, ip, n= 8) aŭ egala volumo de veturilo (ip, n= 8) dum kvin sekvaj tagoj. Kvin minutojn post la lasta injekto la musoj estis oferitaj kaj la cerbo de ĉi tiuj musoj estis kolektita. La amigdala, striatum, prefrontal-kortekso, VTA kaj hipokampo rapide disiĝis kaj tuj surmetis sekan glacion kaj poste stokis je −80 ° C ĝis plia prilaborado.

La homogenigaj kaj peptidaj ĉerpaj proceduroj sekvis norman proceduron, antaŭe priskribitan detale (Nylander et al., 1997). Mallonge, varma (95 ° C) aceta acido (1 M) estis aldonita al la frostigitaj specimenoj. La specimenoj estis varmigitaj en akvotubo (95 ° C) dum 5 min, malvarmetigitaj sur glacio kaj tiam homogenigitaj per Branson-Sonifilo (Danbury, CT, Usono). La homogenato estis varmigita al 95 ° C dum 5 min kaj malvarmigita sur glacio antaŭ centrifugado por 15 min ĉe 4 ° C kaj 12,074 ×g en centralo Beckman GS-15R (Fullerton, CA, Usono). La eltiraĵoj estis plue purigitaj laŭ antaŭe priskribita proceduro (Nylander et al., 1997). Du frakcioj estis kolektitaj: frakcio III (Leu-Arg kaj MEAP) kaj frakcio V (DynB). La specimenoj estis sekigitaj en malplena centrifugilo (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA Usono) kaj konservitaj en la frostujo (−20 ° C) ĝis peptida analizo.

La imunoreaktivaj (ir) niveloj de DynB, LeuArg kaj MEAP estis analizitaj kun bone establitaj radioinmunoensendoj kaj la protokoloj estis priskribitaj detale aliloke (Nylander et al., 1997). En la provo de DynB, kaprina kontraŭrabena IgG (GARGG; Bachem, Bubendorf, Svislando) estis uzata por disigi liberan kaj antikorpan ligitan peptidon. La antiserumo Dyn (113 +) estis uzata en fina diluo de 1: 600000. La inter-reaktiveco kun granda Dyn estis 100% kaj kun DynB (1-29) 1%. Neniu kruca reaktivo kun aliaj opioidaj peptidoj estis observita. En la LeuArg kaj MEAP-provoj, karbo-suspendo estis uzata por disigi liberan kaj antikorp-ligitan peptidon. Por la antiserumo LeuArg (91: 6D +, fina diluvo 1: 60000), kruca reaktiveco estis malpli ol 0.01% por Leu-enkephalin kaj MEAP, 0.02% por DynB, 0.04% por DynA, kaj 0.08% por alfa-neoendorfina. La antiseruma MEAP 90: 3D (II) estis uzata en fina diluo de 1: 160 000. Krureaktiveco kun Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg⁶, Met-enkephalin-Arg⁶Gly⁷Leu⁸, Leu-enkephalin kaj Leu-enkephalin-Arg⁶ estis <0.1%

Entuta ĉefa efiko de kuracado estis trovita sur lokomotora agado en musoj post sistema administrado de morfino (20 mg / kg) kaj JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 por Veh-Veh, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph kaj n= 7 por Veh-Morph). Kiel montrite en figuro 1A, posthoc-analizo malkaŝis, ke antaŭtraktado kun ununura injekto de JMV2959 (P<0.001) signife mildigis la lokomotoran stimulon induktitan de morfino (P<0.01 Veh – Veh vs Veturilo-Morfo) La elektita dozo de JMV2959 havis neniun efikon sur lokomotora agado kompare kun veturila traktado (P> 0.05). Ne estis diferenco en respondo de lokomotora agado en musoj traktataj de veturiloj kaj musoj traktitaj de JMV2959-morhpino (P> 0.05).

  

figuro 1

La antagonisto GHS-R1A JMV2959 mildigas lokomotan stimuladon de morfino, liberigas akumulan dopaminon kaj kondiĉas lokan preferon en musoj. (A) Lokomotora stimulo induktita de morfino (20 mg / kg ip) estis mildigita per ununura injekto de JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7 – 8 en ĉiu grupo; **P<0.01, ***P<0.001 unudirekta ANOVA sekvita de post-hoc testo de Bonferroni). (B) La morfino-induktita (20 mg / kg ip) preferata kondiĉo (CPP) mildiĝis per akra sola injekto de JMV2959 (6 mg / kg ip) ĉe musoj (n= 8 en ĉiu grupo, *P<0.05, neparigita t-testo). (C) Unue ni montris signifan efikon de morfino (20 mg / kg ip) por pliigi liberigon de dopamino kompare kun veturila traktado (tempa intervalo 40-180 min (P<0.001), Veh – Veh vs Veturilo-Morfo) Kiel montrite en (C) antaŭ-traktado kun JMV2959 (6 mg / kg ip), ĝi mildigis la induktitan morfinon de dopamina liberigo kompare kun veturila antaŭ-traktado je tempodaŭro 40-100 kaj 140-180 min (^##P<0.01, ^###P <0.001, JMV2959-Morph kompare kun Veh-Morph-kuracado). La elektita dozo de JMV2959 havis neniun signifan efikon al akumula dopamina liberigo kompare kun veturila traktado en ajna tempo (P> 0.05, Veh – Veh vs JMV2959-Veturo). JMV2959 reduktis, sed ne tute blokis, la morfino induktita akuma dopamina liberigo je intertempo 60-140 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph kompare kun Veh-Morph-kuracado). Sagoj reprezentas tempopunktojn de injekto de JMV2959, veturilo kaj morfino. Datumoj analizitaj per Dudirekta ANOVA sekvita de post-hoc testo de Bonferroni (n= 8 en ĉiu grupo). Veh – veh (Square), Veh – Morph (rhomb), JMV2959-Veh (Triangle), JMV2959-Morph (cirklo). Ĉiuj valoroj reprezentas meznombron ± SEM.

Rigardu Grandan Bildon | Rigardi Hi-Res bildon | Elŝutu PowerPoint Slide

La preferita loko de morfino (20 mg / kg) (Morph-Veh) reduktita signife estis akuta ununura injekto de JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) en la postkondiĉiga tago (P= 0.025, n= 8 en ĉiu grupo; figuro 1B).

Akumulaj mikrodijalaj mezuradoj de dopamino en musoj malkaŝis ĝeneralan ĉefan efikon de kuracado (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), tempo F(11,308) = 7.05, P<0.0001) kaj traktado × tempo-interago (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (figuro 1C; n= 8 en ĉiu grupo). Morfino pliigis akumulan dopaminon rilate al veturila traktado je intertempo 40 – 180 min (P<0.001). Kiel montrite en figuro 1C ĉi tiu efiko reduktiĝis per antaŭ-traktado kun JMV2959 je intertempo 40-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) kaj 160-180 min (P<0.001). JMV2959 reduktis, sed ne tute blokis, morfino induktis akumulan dopaminan liberigon, ĉar estis diferenco inter veturila traktado kaj JMV2959-morfina traktado ĉe tempa intervalo 60-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) kaj 160 min (P<0.05). La elektita dozo de JMV2959 havis neniun signifan efikon al akumula dopamina liberigo kompare kun veturila traktado en ajna tempo (P> 0.05).

La nuna studo plue subtenas la hipotezon, ke la fiziologia rolo de la oksigenika peptido inkluzivas rekompencan reguladon. Efektive, ni montris, ke periferia administrado de antagonisto de GHS-R1A mildigas la kapablon de morfino kaŭzi lokomotan stimuladon, pliigi dopaminajn nivelojn en NAc kaj indukti kondiĉan lokan preferon en musoj. Ni ankaŭ trovis ke subkronika JMV2959, sed ne ghrelin, kuracado pliigis la ir-nivelojn de MEP en la VTA, DynB en hipokampo kaj LeuArg en striatum, provizante la unuajn evidentecojn, ke la kapablo de ghrelin-signalado por reguligi plifortigon povas impliki opioidajn peptidojn. .

La datumoj prezentitaj ĉi tie montras, ke GHS-R1A-antagonismo efikas sur la kapablo de morfino aktivigi la mezolimban dopaminan sistemon ĉe musoj. Laŭ la rezultoj montras, ke JMV2959 blokas la kapablon de morfino pliigi la eksterĉelajn nivelojn de akumulita dopamino kaj kaŭzi stereotipan konduton ĉe ratoj (Sustkova-Fiserova et al., 2014). Subtene, centra administrado de grelino pliigas la rompopunkton, sed ne la nombron de aktivaj levilaj gazetaroj, en la progresa plifortiga plifortigo en ratoj memadministrantaj heroinon, (Maric et al., 2012). La aserto, ke signalado de grelino subestas drogan dependecon, estas plue subtenata de la rezultoj montrante, ke JMV2959 reduktas la konsumadon kaj ankaŭ la motivon konsumi alkoholon ĉe ratoj kaj ke amfetamino, kokaino kaj nikotino induktita rekompenco estas blokita de la GHS-R1A-antagonismo ĉe ronĝuloj ( por recenzo vidu Engel kaj Jerlhag (2014)) kaj ke polimorfismoj en grelinaj genoj rilatas al la ingestaĵo de alkoholo, fumado kaj amfetamino (por recenzo vidu Engel kaj Jerlhag (2014)).

La aktualaj trovoj kun pliigitaj niveloj de opioidaj peptidoj en la striatum, VTA kaj hipokampo post subkronika JMV2959-kuracado sugestas la unuan fojon interagoj inter opioidaj peptidoj kaj ghrelin-signalado. La endogenaj opioidoj estas implikitaj en rekompencaj efikoj, ne nur induktitaj de opioidoj sed ankaŭ aliaj drogoj de misuzo kaj naturaj rekompencoj, kaj en adaptaj procezoj viditaj post ripetaj drogaj ekspozicioj (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000). Efektive la agado de la mezolimbia dopamina sistemo estas reguligita per endogenaj opioidoj ambaŭ al la nivelo de la VTA kaj de la NAc (Hirose et al., 2005, Spanagel et al., 1992) kaj la agoj estis montritaj aŭ rektaj aŭ nerektaj. per modulado de aliaj dissendiloj (Charbogne et al., 2014).

Ni trovis ĉi tie ke subkronika JMV2959-kuracado pliigis la nivelojn de MEAP en la VTA. MEAP estas derivita ekskluzive de proenkephalin kaj estis uzata kiel markilo de proenkephalin-peptidoj, kiuj ĉefe aktivigas δ-opioidajn ricevilojn. Ni hipotezas, ke la pliigitaj niveloj de endogena MEAP en la VTA sekvanta JMV2959-kuracadon eble malhelpas la kapablon de morfino malpliigi la GABA-inhibicion de neŭo-mezaminaj dopaminaj neŭronoj (Johnson kaj North, 1992), kio povus kontribui al la reduktitaj efikoj de morfino viditaj poste. JMV2959. Apogite GHS-R1A situas sur GABAergic-interneuronoj en la VTA (Abizaid et al., 2006). Plie, antaŭaj studoj montris, ke intra-VTA infuzaĵo de JMV2959, tra nekonataj mekanismoj, mildigas ghrelin-induktitan rekompencon (Jerlhag et al., 2011) same kiel ghrelin-mediaciitan sukerzan konsumon en ronĝuloj (Skibicka et al., 2011), sugestas, ke ventralaj tegmentaj GHS-R1A gravas por rekompenca regulado. Helpe de tia disputo estas la trovoj montrantaj, ke aliaj malsatoj reguligantaj peptidojn, kiel galanino kaj oreksino, mediacias la rekompencajn propraĵojn de morfino tra lokaj mekanismoj ene de la VTA (Narita et al., 2006, Richardson kaj Aston-Jones, 2012).

En la striatum, ni trovis, ke subkronika JMV2959 pliigis la ir-nivelojn de LeuArg, sugestante, ke la kapablo de JMV2959 atenti kondiĉitan lokon preferitan de morfino, liberigon de dopamino kaj lokomotora stimulo dependas, almenaŭ parte, de plibonigita akumulilo δ- agado de receptoroj de opioidoj. Pliigitaj LeuArg-niveloj povas rezulti de pliigita enzimata konvertiĝo de dinorfinaj peptidoj al enkephalinoj aŭ de plibonigita Dyn-liberigo en la NAc kiel respondo al pliigita dopamino, sekvita de degenero en LeuArg. Tamen antaŭaj studoj montris, ke la agado de la mezolimbia dopamina sistemo estas reguligita tra κ-opioidaj riceviloj en la NAc (Spanagel et al., 1992) kaj endogenaj κ-opioidaj riceviloj provizas tonikan inhibicion de mezoakumba dopamina neŭrotransmisio kaj mildigas kokainon induktitan liberigon de dopamino en NAc (Chefer et al., 2005), ni ne faris montru, ke JMV2959 ŝanĝas la ir DynB-nivelojn en la striatumo. Tial, pliaj studoj estas garantiataj sur prodynorfin-peptidoj por elucidi la interagojn inter GHS-R1A-antagonismo kaj dinorfinoj.

En la aktuala studo ni ankaŭ montris, ke JMV2959-kuracado pliigas signife la nivelojn de hipokampo DynB. Ghrelin pliigas memorigan solidigon same kiel dendritan spine-formadon, generas longtempan potencon kaj induktas memorigan faciligon tra hipokampo GHS-R1A en ronĝuloj (Carlini et al., 2010, Diano et al., 2006). Plie, GHS-R1A frapaj musoj montras plibonigitan spacan memoron en la Morris-akvo-labirilo-testo kaj interrompis kuntekstan memoron en la timo-kondiĉanta paradigmo kompare kun sovaĝaj tipaj musoj (Albarran-Zeckler et al., 2012). Dynorphin-peptidoj, inkluzive de DynB, estas abundaj en hipokampo kaj ili mildigas longtempan potencon (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993) same kiel malhelpas spacan lernadon ĉe ratoj (Sandin et al., 1998). Ni do hipotezas, ke la antagonisto GHR-R1A eble mildigos memoron pri rekompenco per malhelpado de hipokampa longtempa potenco tra aktivigo de DynB. Kolektive, ĉi tiuj datumoj provizas novajn eblajn mekanismojn per kiuj JMV2959 tra opioidaj peptidoj povas ŝanĝi plifortigon. Tamen, opioidaj riceviloj estas vaste distribuitaj en la cerbo, sugestante ke aliaj areoj, ne inkluzivitaj en la aktuala studo, eble partoprenos en rekompenco de reguligita morfino de GHS-R1A. Ekzemple, nutraĵa konsumado de ghrelin kaj ankaŭ premo de levilo por sukerozo estas reduktita per centra aŭ intra-hipotalama administrado de antagonisto de κ-opioidaj receptoroj (Romero-Pico et al., 2013). Tamen la rolo de opioidaj peptidoj en aliaj areoj bezonas esti ellasitaj en venontaj studoj.

La endogenaj μ-receptoroj ligandoj, endomorfinoj kaj beta-endorfina, ne estis analizitaj ĉi tie, do ni ne povas forĵeti eblan efikon de JMV2959 sur ĉi tiuj peptidoj. Efektive, la rekompencaj ecoj de morfino implikas μ-opioidajn ricevilojn en la VTA same kiel NAc (Hirose et al., 2005, Johnson kaj North, 1992, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999). Tamen, antagonisto de μ-riceviloj ne mildigas konsumon de induktitaj de ghrelin (Naleid et al., 2005) nek lokomotora stimulo de ghrelin-induktado kaj akcelo de dopamina liberigo (Jerlhag et al., 2011), implicante ke la kapablo de GHSR- Antagonisto de 1A por reguligi plifortigon ne inkluzivas µ-receptorojn. Aliflanke, JMV2959 influis opioidajn peptidojn derivitajn de proenkephalino kaj prodinorfino montrante, ke ili eble estas implikitaj en la efikoj induktitaj de antagonistoj de GHSR-1A.

Dum antaŭaj studoj montris, ke sistema administrado de ghrelin kaŭzas rekompencon (Jerlhag, 2008) same kiel plibonigas la rekompencajn propraĵojn de toksomaniaj drogoj (por revizio vidu Engel kaj Jerlhag (2014)), ni ĉi tie montras, ke subkronika kuracado kun ghrelin ne ŝanĝis. la ir-histaj niveloj de opioidoj-peptidoj en iu el la studitaj rekompenc-rilataj areoj. Sistema administrado de ghrelin agas esprimo c-fos en hipotalamo-regionoj, sed ne en mezolimbaj kaj hipokampaj areoj (Pirnik et al., 2011) kaj la ligado de fluorecentre markita ghrelin estas limigita al manĝaj reguligaj neŭronoj de la hipotalamo (Schaeffer et al., 2013 ). Kombinita kun la trovoj montrantaj ke ghrelin, esceptita de spuroj de hipotalamo, ne povas esti detektita en pli profundaj cerbaj areoj post periferia administrado de ghrelin (Furness et al., 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009 ), levas la eblon, ke sistema grenlinio aktivigas la rekompencan sistemon tra nerektaj mekanismoj sendepende de endogenaj opioidoj. Apogite, liberigo de grenlin-akirita dopamina liberigo postulas supren-oksigenan hipotalaman signaladon (Cone et al., 2014), periferia administrado de ghrelin ne ŝanĝas konsumon de alkoholo en musoj (Lyons et al., 2008) kaj ke neŭtraligado de periferia ghrelin ne atenas alkoholon. -difektita rekompenco en musoj aŭ alkoholaĵo en ratoj (Jerlhag et al., en gazetaro). La ebleco, ke subkronika administrado de ghrelin pliigas la ir-nivelajn nivelojn de opioids-peptidoj, devas konsideri, tamen tio devas esti pristudita detale en venontaj studoj.

La kapablo de toksomaniuloj kaŭzi stimulon, liberigi dopaminon kaj indukti kondiĉon de loko preferita estas intime asociita kun la plifortigaj ecoj de toksomaniuloj kaj ĉi tiuj parametroj konsideratas konsistigi parton de la toksomania procezo (Saĝa, 2004). Konsiderante, ke ni ĉi tie trovis, ke JMV2959 mildigas ĉi tiujn rekompencajn parametrojn ĉe musoj, ni hipotezas, ke GHS-R1A eble ludos gravan rolon en toksomaniaj procezoj, kaj ke endogenaj opioidoj okupiĝas pri ĉi tiuj procezoj. Kolektive ĉi tiuj datumoj indikas, ke GHS-R1A-antagonistoj estu elparolataj kiel kuracado de drogodependeco.

JE kaj EJ estas subtenataj de subvencioj de la Sveda Esplora Konsilio (subvencio n. 2011-4646, 2009-2782 kaj 2011-4819), la sveda cerba fondaĵo, LUA / ALF (Grant n-ro 148251) de la Universitato Sahlgrenska Hospitalo, Alkoholo esplora konsilio pri la sveda monopolo de la sveda alkoholo kaj la fundamentoj de Adlerbertska, Fredrik kaj Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten kaj Ragnar Söderberg, Wilhelm kaj Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut kaj Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke Wiberg , la Sveda Societo pri Medicino, Sveda Societo por Medicina Esploro kaj Gotenburgo-Psikiatria Esplora Fundamento. Konsilio pri Esploro pri Alkoholo de la Sveda Monopola Alvela Alkoholo kaj la Sveda Esplora Konsilio (K2012-61X-22090-01-3) subtenis IN. La financaj fontoj havis neniun rolon en la studo-projektado, en la kolekto, analizo kaj interpretado de la datumoj, en la redaktado de la raporto kaj en la decido publikigi la datumojn.