Detección de alteraciones moleculares en neuronas que expresan Fos activadas por metanfetamina de un solo cuerpo estriado de la rata utilizando clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) (2013)

La metanfetamina y otras drogas activan una pequeña proporción de todas las neuronas en el cerebro. Anteriormente, desarrollamos un método basado en la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para caracterizar las alteraciones moleculares inducidas selectivamente en las neuronas activadas que expresan el marcador de actividad neural Fos. Sin embargo, este método requiere agrupar muestras de muchas ratas. Ahora describimos un método modificado basado en FACS para caracterizar las alteraciones moleculares en las neuronas del estriado dorsal que expresan Fos de una sola rata utilizando una estrategia de preamplificación multiplex.

La inmunohistoquímica Fos y NeuN (un marcador neuronal) indican que 5-6% de las neuronas del cuerpo estriado dorsal se activaron 90 min después de las inyecciones agudas de metanfetamina (5 mg / kg, ip), mientras que menos del 0.5% de las neuronas se activaron mediante inyecciones de solución salina.

Utilizamos FACS para separar las neuronas marcadas con NeuN en neuronas positivas para Fos y negativas para Fos y evaluamos la expresión del ARNm usando RT-qPCR de tan solo cinco neuronas positivas para Fos. La metanfetamina indujo incrementos en 3-20 de los genes tempranos inmediatos, homer-2, c-fos, fosB y sus isoformas (ΔfosB y una nueva isoforma ΔfosB-2) en neuronas Fos-positivas pero no Fos-negativas. La inducción inmediata del ARNm del gen inicial fue 10 veces más baja o ausente cuando se evaluó en muestras no clasificadas de homogeneizados de cuerpo estriado dorsal único. Nuestro método modificado hace posible estudiar alteraciones moleculares únicas en neuronas activadas por fármacos o señales asociadas a fármacos en modelos complejos de adicción.

La metanfetamina y otras drogas activan una pequeña proporción de todas las neuronas en el cerebro. Aquí presentamos un método mejorado para caracterizar las alteraciones moleculares inducidas selectivamente en las neuronas activadas que expresan el marcador de actividad neuronal Fos. Utilizamos FACS junto con la preamplificación por PCR dirigida para evaluar la expresión génica inducida por metanfetamina aguda de tan pocas como las neuronas que expresan FOS de 5 de un solo estriado dorsal de rata. La metanfetamina indujo incrementos en 3-20 de los genes tempranos inmediatos (IEG) en las neuronas Fos-positivas pero no en las de Fos-negativas. La preamplificación dirigida por PCR hace posible estudiar alteraciones moleculares únicas en neuronas activadas por fármacos o señales asociadas a fármacos en modelos complejos de adicción.

Publicado en 2013. Este artículo es un trabajo del Gobierno de los Estados Unidos y se encuentra en el dominio público en los Estados Unidos.