Dopamiinergiliste neuronite endogeenne opioidide poolt indutseeritud neuroplastsus ventral tegmentaalses piirkonnas mõjutab loomulikku ja opiaadi tasu (2014)

kommentaar: . DeltaFosB uuringud me tsiteerime kõiki keskendunud tuum on accumbens (auhinnakeskus) ja leidis, et seks rändab üsna palju samu ajumehhanisme nagu met ja kokaiin. Sama uurija maamärkide uuringust (Loodus- ja narkootikumide auhindade seadus ühiste närviplastilisuse mehhanismide kohta koos ΔFosB-ga võtme vahendajana (2013)):

Seega looduslik ja ravimipreemia ei koondu mitte ainult samal närviteel, vaid ka samadel molekulaarsetel vahendajatel ja tõenäoliselt Nucleus Accumbensi samadel neuronitel, et mõjutada mõlema tüüpi hüvede stiimulit ja soovimist

Võta ära: met, kokaiin ja sugu teevad kõik samad närvirakud tasu saamise keskuses (nucleus accumbens), olenemata sellest, mida nad võivad teha mujal ajus. See lammutas tavapärase räägipunkti, et looduslikud hüved ja ravimid erinevad mehhanismide ja mõjude poolest.

Selles uues uuringus uuriti, mida sugu teeb VTA-ga. VTA-st saavad alguse dopamiini tootvad närvirakud - ja need hargnevad tuum accumbensi, frontaalse korteksi ja mandelkeha külge. Põhimõtteliselt on VTA enamiku meie dopamiini allikas (allikas). Vaadake neid kahte preemiaringi pilti: Pic1, Pic2

Teadlased leidsid, et sugu (haripunkt) põhjustab VTA rakkude keha ajutiselt (meestel). Rakukehad ja nende dendriidid moodustavad aju halli aine. Just see on heroiinisõltuvus VTA-ga (mitte ühekordne heroiini kasutamine, vaid krooniline heroiini kasutamine). Pange tähele, et see sama VTA rakkude kahanemine esineb inimese heroiinisõltlastel.

Sugu põhjustatud rakkude kokkutõmbumine kestab vähemalt 7 päeva. Sugu põhjustatud muutused olid 30i päeva jooksul normaliseerunud, kuid teadlased hindasid ainult päevi 1, 7 ja 30.

Heroiinisõltuvuses olevate rakukehade kokkutõmbumine põhjustab madalamat dopamiini tuumas - või mida me nimetame desensibiliseerimine. Teadlased manustasid rottidele morfiini, et hinnata nende reaktsiooni (pärast seksi), kuid midagi ei juhtunud. Tavaliselt meeldib rottidele morfiin palju, kuid siin nad ajutiselt desensibiliseeriti. Lühidalt öeldes ei olnud ejakulatsioonijärgsete rottide preemiaskeem heroiini madalale tasemele reageeriv. Teadlased arvasid, et "normaalse" roti reaktsiooni tekitamiseks on vaja suuremaid annuseid.

Kokkuvõtteks - Seks (ajutiselt) teeb VTA-s täpselt sama, mis heroiinisõltuvus: dopamiini tootvate närvirakkude kehade kahanemine. See toob kaasa madalama dopamiini tasukeskuses ja vähem reageerimise narkootikumidele - ja roti aju taastumiseks kulub vähemalt 7 päeva.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Kannud KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Coolen LM5.

Abstraktne

Looduslik tasu ja kuritarvitamise ravimid lähenevad mesolimbilisele rajale ja aktiveerivad tuuma accumbens'i närvi plastilisuse ühise mehhanismi. Krooniline opiaatide ekspositsioon indutseerib vatsakeha (VTA) dopamiinergiliste neuronite plastilisust, mis reguleerib morfiini tasu taluvust.

Siin testime hüpoteese, et endogeensete opioidide paaritumise indutseeritud vabanemine VTA-s põhjustab VTA dopamiinirakkude morfoloogilisi muutusi isastel rottidel, mis omakorda reguleerivad kogemuste poolt põhjustatud seksuaalse käitumise tugevdamise pikaajalist ekspressiooni.

Esiteks vähenes seksuaalne kogemus VTA dopamiini soma suurust 1 ja 7 päeva, kuid mitte 30 päeva pärast viimast paaritumist.. See toime blokeeriti naloksooniga enne iga paaritumist; seega sõltus VTA dopamiini rakkude plastilisus endogeensete opioidide toimest.

VTA plastilisus seostati omakorda muutunud opiaadi tasuga, kuna seksuaalselt kogenud isased ei moodustanud konditsioneeritud koha eelistust 0.5 mg / kg morfiini jaoks.

Seejärel määrati kindlaks, kas endogeenne opioidide toime vahendab seksuaalset tasu ja mälu isasrottidel, keda raviti naloksooniga paaritumise ajal, kas süsteemselt või VTA-s. Naloksoon ei takistanud kogemuste esilekutsumist, mis hõlbustas seksuaalset käitumist korduvate paaritamisetappide või konditsioneeritud kohtade eelistamise pärast paaritamisel. Siiski vähendas naloksoonravi kogemuste poolt põhjustatud seksuaalse käitumise ja neuraalse aktivatsiooni soodustamise pikemaajalist ekspressiooni mesolimbilistes piirkondades, mis on tingitud paaritumisega seotud konditsioneeritud vihjeid.

Üheskoos näitavad need andmed, et endogeensed opioidid tekitavad paaritumise ajal neuronaalset plastiilsust VTA dopamiini neuronites, mis tunduvad morfiini tasu ja pikaajalise mälu seisukohalt kriitilise tähtsusega loomuliku tasu eest.

 

Sissejuhatus

Looduslikku tasu käitumist vahendab mesokortikolimbiline süsteem (Meisel ja Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young jt, 2011; Blum et al., 2012). Kuritarvitamise ravimid põhjustavad selles süsteemis närvisüsteemi muutusi, mis omakorda aitavad kaasa ainete kuritarvitamise arengule ja väljendumisele (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Me leidsime eelnevalt, et kogemus loodusliku tasu käitumisega, st seksuaalne kogemus isastel rottidel, põhjustab ka närvilisust plastilises tuumas (NAc), sealhulgas suurenenud dendriitrakkudes (Pitchers et al., 2010a) ja deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Omakorda see sugu põhjustatud plastilisus on kriitilise tähtsusega seksuaalse kogemuse tagajärgedele järgneval paaritumisel, mis väljendub seksuaalse käitumise algatamise ja täitmise hõlbustamises (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Veelgi enam, seksuaalne kogemus muudab psühhostimulantide reageerimisvõimet, sealhulgas liikumisaktiivsuse sensibiliseerimist ja suuremat tasu (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc on dopamiinergiliste neuronite üheks allavoolu sihtmärgiks ventral tegmentaalses piirkonnas (VTA). VTA dopamiini neuronid aktiveeritakse paaritumise ajal ja pärast kokkupuudet konditsioneeritud vihjetega, mis ennustavad seksuaalset tasu (Balfour jt, 2004; Frohmader et al., 2010a) endogeense opioidpeptiidi (EOP) kaudu, mis seondub μ-opioidiretseptoritega (MOR; Matthews ja saksa keel, 1984; Johnson ja North, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour jt, 2004). Seega põhjustab seksuaalkäitumist prognoositav konditsioneeritud vihjeid EOP ja VTA dopamiinirakkude aktiveerimise vabanemist, mis soodustab seksuaalset motivatsiooni (Mitchell ja Stewart, 1990; van Furth jt, 1995; van Furth ja van Ree, 1996) ja dopamiini vabanemine NAc-s (Fiorino et al., 1997).

Korduv kokkupuude eksogeensete opiaatidega põhjustab VTA-s morfoloogilisi muutusi (Mazei-Robison jt, 2011; Mazei-Robison ja Nestler, 2012) VTA dopamiini neuronite vähenenud soma suurus (Sklair-Tavron jt, 1996; Spiga jt, 2003; Chu et al., 2007; Russo jt, 2007; Mazei-Robison jt, 2011), neurofilamentvalkude vähenenud sisaldus (Beitner-Johnson jt, 1992), dopamiinirakkude suurenenud erutuvus ning vähenenud aksoplasmaatiline transport ja dopamiini väljund NAc-le (Beitner-Johnson jt, 1992; Mazei-Robison jt, 2011). Need VTA dopamiini neuronite muutused põhjustavad morfiini tasuvust ja on mööduvad, kuna nad hajuvad ühe kuu jooksul pärast ravimi abstinensust (Russo jt, 2007). Praegu on ebaselge, kas VTA dopamiini neuronite plastilisus on ainulaadne opiaatide toimele või kui neid toodetakse ka EOP vabanemisega loodusliku rahuldava käitumise käigus.

Siin testime hüpoteesi, et loomulik tasu kogemus põhjustab opiaatide põhjustatud neuroplastikat ja seega opiaatid lähenevad plastilisuse mehhanismile, mis on kriitilise tähtsusega loomuliku tasu käitumise ja mälu tasustamise jaoks. Me kontrollime, kas seksuaalne kogemus isastel rottidel vähendab VTA dopamiini neuronite soma suurust, kasutades protsessi, mis sõltub VOP-st EOP-st. Lisaks uurime, kas EOP-ga indutseeritud muutused VTA dopamiini neuronites on seotud loomuliku rahuldava käitumise tugevdamisega ja stiimulite omastamisega looduslike hüvedega seotud märkidele, põhjustades samal ajal morfiini tasu suhtes rist-tolerantsust.

Materjalid ja meetodid

Loomad

Täiskasvanud isased Sprague-Dawley rotid (200-225 g) saadi Charles River'ilt ja paigutati kõigis katsetes paaridena kunstlikult valgustatud ruumides 12 h valguse / pimeduse tsükliga (tuled välja 10: 00 AM, välja arvatud morfiinitaluvuse katse puhul) , tuled kustuvad 5is: 00 PM). Toit ja vesi olid kättesaadavad ad libitum välja arvatud käitumiskatsete ajal. Stimulus-emased olid munasarjadeks ja implanteeriti subkutaanselt 5% 17-β-östradioolbensoaadi SILASTIC kapslitega (1.98 mm siseläbimõõt, 0.5 cm pikkus, Dow-Corning). Progesterooni süstimine (subkutaanne, 500 μg seesamiõli 0.1 ml-s) manustati 3 – 6 h enne seksuaalse vastuvõtlikkuse indutseerimist. Kõik protseduurid kiideti heaks Lääne-Ontario Ülikooli ja Michigani Ülikooli loomade hoolduskomiteede poolt ning vastavad Kanada loomade hooldamise nõukogule ja riiklikele tervishoiuinstituutidele, mis hõlmasid selgroogseid loomi.

VTA dopamiini soma suuruse muutumise aeg

Igapäevane paaritumine.

Et uurida dopamiini neuronite suuruse muutuste aja kulgu VTA-s, tapeti seksuaalselt kogenud ja naiivsed loomad 1i, 7i või 31 d-ga (n = 5 – 8 rühma kohta) pärast viimast paaritumist (kogenud) või käitlemist (naiivne). Seksuaalselt kogenud rühmi sobitati seksuaalkäitumise jaoks lõpliku paaritumisperioodi ajal, samuti viie istungi jooksul toimunud ejakulatsioonide koguarvu (iga rühma 5 keskmine) ja ei erinenud seksuaalse käitumise parameetrites.

Paaritusseansid.

Seksuaalselt naiivsetel meestel määrati kumbki kahest katsetingimustest: seksuaalselt naiivne või seksuaalselt kogenud. Seksuaalselt kogenud loomadel lubati viis korda järjestikustel päevadel võtta vastu vastuvõtvaid naisi ristkülikukujulistes katsepuurides (60 × 45 × 50 cm) kuni ejakulatsiooni näitamiseni või kuni 1 h (olenevalt sellest, kumb on varasem). Puurid puhastati põhjalikult 70% etanoolilahusega ja värske voodipesu lisati paaritumise vahel. Seksuaalset käitumist tehti pimedas faasis (2 – 6 h pärast pimeduse algust). Ainult loomi, kes ejakuleerusid vähemalt neljast viiest paaritumisistungist, peeti seksuaalseks kogemuseks ja kaasati katsetesse. Täheldati kõiki paaritusi ja registreeriti seksuaalne käitumine. Monteerimiste arv (M) intromission (IM), mount latency (ML; aeg alates naissoost esmakordsel paigaldamisel), intromission latency (IL; aeg alates naissoost esmakordsel intromissionist) ja ejakulatsiooni latentsus (EL; esmakordsest sisenemisest kuni ejakulatsioonini).Agmo, 1997). Naivsed loomad paigutati 1 h puhtasse katsekarketti samaaegselt samas ruumis paarituvate seksuaalselt kogenud meestega, nii et nad olid kokku puutunud kaugete naiste lõhnadega ja sarnaste häirete ja keskkonna uudsuse tasemega kui kogenud meestel.

Immunofluorestsentsmärgistus.

Loomad tuimastati sügavalt naatriumpentobarbitaaliga (270 mg / kg, ip) ja perfuseeriti intrakardiaalselt 50 ml 0.9% soolalahusega, millele järgnes 500 ml 4% paraformaldehüüdi 0.1 m naatriumfosfaatpuhvris (PB). Ajusid eemaldati ja fikseeriti 1 h toatemperatuuril (RT) samas fiksaatoris ning seejärel kasteti 20 m PB-sse 0.01% sahharoosi ja 0.1% naatriumasiidi, et hoida neid 4 ° C juures. Koronaalseid sektsioone lõigati 35 μm juures külmutamismikroomil (H400R, Microm) ja koguti neli paralleelset seeriat krüoprotektandi lahuses (30% sahharoos, 30% etüleenglükool 0.1 m PB-s), seejärel säilitati 20 ° C juures. Kõik inkubatsioonid viidi läbi RT-s, õrnalt segades ja rohkesti loputades 0.1 m PBS, pH 7.35, inkubatsioonide vahel. Sektsioonid eksponeeriti 1% H-ga2O2 10 min endogeensete peroksidaaside hävitamiseks, seejärel blokeeriti 1 h inkubeerimislahuses (PBS +: PBS, mis sisaldas 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) ja 0.1% veise seerumi albumiini (Jackson Immuno Research Laboratories). Järgmisena inkubeeriti sektsioone öö läbi toatemperatuuril hiire türosiini hüdroksülaasi (TH) -antikehas (1: 20 000; Millipore). Pärast primaarse antikeha inkubeerimist inkubeeriti sektsioone AlexaFluor 555-konjugeeritud kitse hiirevastases antikehas (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) 30 min. Lõpuks pesti lõigud 0.1 m PB-ga, paigaldati Superfrost Plus klaasplaatidele, kuivatati ja kaeti gelvatooliga, mis sisaldas pleegitusvastast ainet 1,4-diasabitsüklo (2,2) oktaani (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Andmete analüüs: neuronite suurus.

THV-immunoreaktiivsete (IR) neuronite pildid VTA-s võeti 40 × suurendusega kolmel rostraalsel ja kaudaalsel tasemel (Balfour jt, 2004). Erinevate tasemete rakkude vahel ei täheldatud erinevusi. TH-IR neuronite soma suurust analüüsiti ImageJ (National Health Institute) abil. Keskmine pindala, perimeeter ja ringlus mõõdeti nii, nagu on kirjeldatud Sklair-Tavron jt. (1996). Analüüsiti keskmiselt 25-rakke looma kohta (kombineeritud kõik 3 VTA tasemed) ja lisati ainult selgelt nähtava tuumaga rakud. Iga looma puhul arvutati keskmine pindala, perimeeter ja ringlus. Statistiliseks analüüsiks kasutati kahesuunalist ANOVA-d [tegurid: seksuaalne kogemus (sugu kogemus või sugu naiivne) ja aeg (1, 7 või 31 d)], millele järgnes post hoc võrdlused, kasutades Holm-Sidaki meetodit 0.05-i olulisuse tasemega.

VTA mitte-dopamiini muutused

Kaks korda nädalas paaritumine.

Et kontrollida, kas TH-IR neuroni soma suuruse vähendamiseks on päevase paaritumise ajal vaja seksuaalset kogemust, analüüsiti viie kahe nädala jooksul paaritumise ajal paaritatud loomade VTA dopamiini neuroneid. Paaritumise sessioonid olid ülalkirjeldatud, kuid 2.5i nädalate jooksul. Ajusid koguti 7 d pärast viimast paaritumist või käitlemist.

Immunoperoksidaasi märgistamine.

Peale selle testiti, kas immunoperoksidaasi ja kromogeeni tuvastamisega tundlike värvimistehnikate kasutamine võimaldaks ka TH-IR-soma suuruse muutuste visualiseerimist. Perfusiooni ja koe töötlemine oli eespool kirjeldatud käitumine. Pärast ravi 1% H-ga2O2 ja PBS +, inkubeeriti sektsioone öö läbi toatemperatuuril hiire polüklonaalses türosiinhüdroksülaasi (TH) -antikehas (1: 20 000; Millipore). Pärast primaarse antikeha inkubeerimist inkubeeriti sektsioone biotiiniga konjugeeritud kitse anti-küüliku IgG-ga (1 h, 1: 500 PBS +; Vector Laboratories), avidiin-biotiini-mädarõika peroksidaasiga (1 h, ABC eliit; 1: 1 000 PBS-s) Vector Laboratories) ja 3,3'-diaminobensidiin tetrahüdrokloriid (10 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich), mida on suurendatud nikkelsulfaadiga (0.02% 0.1 m PB) vesinikperoksiidiga (0.015%). Sektsioonid pesti põhjalikult 0.1 m PB-s, et lõpetada reaktsioon ja paigaldati kodeeritud Superfrost pluss klaasiklaasidele (Fisher), milles oli 0.3% želatiin ddH-s.2O. Pärast dehüdratatsiooni kaeti kõik slaidid DPX-i kinnitusainega (dibutüülftalaadi ksüleen; Sigma-Aldrich).

Andmete analüüs: neuronite suurus.

TH-IR-rakkude pindala, perimeetri ja ringikujulisust analüüsiti vastavalt ülalpool kirjeldatule. Lisaks analüüsiti samades lõikudes, mida kasutati VTA TH-IR rakkude jaoks, TH-IR-rakke põhjenduses nigra (SN). Lõpuks, pärast VTA ja SN TH-IR rakkude analüüsi, lõikasid lõigud kontrarezreesiga, kasutades kresüülvioletti, ja mitte-TH-IR rakke analüüsiti samade meetoditega, nagu ülalpool kirjeldatud. Erinevusi naiivsete ja kogenud rühmade vahel võrreldi kahepoolsete õpilaste abil t testid 0.05i olulisuse tasemega.

Naloksooni mõju kogemuse indutseeritud dopamiini soma suuruse vähendamisele

Et teha kindlaks, kas MOR-id mängisid rolli seksuaalse kogemuse põhjustatud muutustes dopamiini neuronite suuruses, blokeeriti MOR seksuaalse käitumise ajal. Pooled loomad said seksuaalset kogemust, teine ​​pool aga jäi seksuaalselt naiivseks. Seksuaalselt kogenud loomadel lasti 5i järjestikustel päevadel paarituda. Seksuaalselt kogenud ja naiivsetes rühmades raviti loomi mitteselektiivse MOR antagonisti naloksooniga (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, lahustati 0.9% soolalahuses) või soolalahusega 30 min enne naise (kogenud) või enne ravi alustamist (naiivne); luues seeläbi neli eksperimentaalset rühma: seksuaalselt naiivne soolalahus (Naive Sal), seksuaalselt naiivne naloksoon (Naive NLX), seksuaalselt kogenud soolalahus (Exp Sal) ja seksuaalselt kogenud naloksoon (Exp NLX; n = 5 – 8 rühma kohta). Naloksooniravi ei avaldanud statistiliselt olulist mõju seksuaalse käitumise parameetritele, ükskõik millisele 5 d-le ja naloksooni- ja soolalahusega ravitud rühmad olid seksuaalses kogemuses identsed. Kõik loomad surmati intrakardiaalse perfusiooni teel 7 d pärast viimast paaritumist. Sekundeerimine, immunohistokeemia ja andmete analüüs (kahesuunaline ANOVA; tegurid: seksuaalne kogemus ja ravimite ravi) dopamiini soma suurusele viidi läbi, nagu eespool kirjeldatud.

Morfiini konditsioneeritud kohtade eelistus

Eksperimentaalne disain.

Varem Russo et al. (2007) näitas, et krooniline morfiin indutseerib morfiini tasu suhtes tolerantsust. Kuna seksuaalne kogemus ja krooniline morfiin põhjustavad VTA-s sarnast dopamiin neuronite soma suuruse vähenemist, testiti sugu poolt põhjustatud morfoloogiliste muutuste funktsionaalset tähtsust morfiini tasu suhtes. Seksuaalselt kogenud ja naiivsed loomad jagati kuueks erinevaks katserühmaks (n = 9 – 13 rühma kohta), mis põhineb seksuaalsel käitumisel (seksuaalselt naiivne või kogenud) ja morfiiniannus (0.5, 5.0 või 10.0 mg / kg, ip) ja testiti morfiini poolt indutseeritud konditsioneeritud kohtade eelistust (CPP).

Morfiin-CPP.

Konditsioneerimine toimus 1 d pärast viimast paaritumist ja grupid sobitati seksuaalse jõudluse jaoks viimase paaritumise ajal. Kasutatud CPP paradigma koosnes eelest, konditsioneerimispäevadest ja järeltestimisest ning aparaat põhines Tenk et al. (2009). Lühidalt, CPP aparaat (MED Associates) koosnes kolmest erinevast kambrist. Iga seansi vahel puhastati seadet põhjalikult 70% etanoolilahusega, et minimeerida haisvaid lõhnu. Individuaalsete eelistuste kindlakstegemiseks viidi läbi eelanalüüs, mille käigus anti loomadele 15 minuti jooksul tasuta juurdepääs kogu aparaadile. Rühmana ei näidanud loomad konkreetse kambri suhtes olulist eelistust, kuid kõigil loomadel oli esialgne eelistus kerge. Rotid, kes eelkatsete ajal eelistasid ühte kambrit olulist eelistust (igas kambris veedetud aja erinevus> 200 s; <5% loomadest), jäeti uuringust välja. Konditsioneerimise ajal ühendati ravim kas algselt eelistatud või eelistatumata kambriga, kasutades erapooletut paradigmat (Tzschentke, 2007) ja loomad piirdusid 30 min. Loomi süstiti hommikul soolalahusega (ip) (9: 00 AM kuni 12: 00 PM) ja piirdus soolalahuse paariga kambriga (kontroll). Pärastlõunal (1: 00-4: 00 PM) süstiti loomadele morfiini (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg või 10.0 mg / kg; morfiinsulfaati, mis oli lahustatud 0.9% soolalahuses, Johnson Matthey) ja suletud morfiiniga seotud kambrisse. Loomadele viidi läbi kaks konditsioneerimispäeva. Järgmisel päeval (3 d pärast viimast paaritumispäeva) viidi läbi test, mis oli protestiliselt identne eelestiga. Statistilise analüüsi jaoks võrreldi pärast morfiini-paarikambris testimise järel veedetud aega soola-paariga kambris seksuaalselt naiivsete või kogenud meeste katsejärgse katse ajal iga annuse kasutamisel paari t test. p <0.05 peeti statistiliselt oluliseks. Täiendavad seksuaalselt naiivsete ja kogenud loomade kontrollrühmad said negatiivse kontrollina soolalahust nii paaris kui ka paarimata kambris. Kummagi rühma puhul ei tuvastatud kodade vahel veedetud aja erinevusi.

Süsteemse naloksooni mõju kogemuste põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamisele

Eksperimentaalne disain.

Seksuaalne kogemus toob kaasa seksuaalse käitumise hõlbustamise vähemalt 1i kuu jooksul (Pitchers et al., 2012). Et analüüsida MOR-i blokeerimise mõju seksuaalse käitumise soodustamisele kogemustes, said seksuaalselt kogenud loomad kas viis järjestikust paaritumistsüklit kas naloksooni või soolalahust (n = Iga 12), nagu eespool kirjeldatud. Üks nädal pärast viimast paaritumist, viidi läbi viimane paaritumine, mille jooksul lasti kõigil loomadel paarida kuni ühe ejakulatsiooni või kuni 1 h. Naloksooni või soolalahuse manustamist ei kasutatud enne paaritumist viimasel katsepäeval. Võrreldi paaritumise parameetreid, et teha kindlaks, kas naloksoon mõjutas mõlemat sugupoole kogemust soodustavat paaritumist (päev 1 vs 5) või selle hõlbustamise säilitamist (5-päev vs test), kasutades kahesuunalist ANOVA-d [tegurid: ravi (soolalahus versus naloksoon) ) ja päeva (päev 1, päev 5 või test)] ja Holm-Sidaki meetod post hoc võrdlused. Kõigi statistiliste katsete puhul \ t p <0.05 peeti statistiliselt oluliseks.

Täiendavad kontrollkatsed

Süsteemne naloksoon katsepäeval.

Et näidata, et muutunud seksuaalkäitumine lõpliku paaritamise testipäeval ei olnud tingitud naloksooni puudumisest, manustasime naloksooni või soolalahust lõpliku paaritumise päeval loomadele, kes said seksuaalse kogemuse saamise ajal naloksooniga paaristatud paari. Konkreetselt said kõik loomad naloksooni süstimise (10 mg / kg, sc) 30 min enne paaritumist ühele ejakulatsioonile 5i järjestikuste päevade jooksul. Uuringu päeval 7 d sai ligikaudu pooled loomadest naloksooni süstimise (10 mg / kg, \ t n = 7) või soolalahus (n = 6) 30 min enne vastuvõtva naise manustamist. Seksuaalset käitumist täheldati ja registreeriti. Võrreldi paaritumise parameetreid, et teha kindlaks, kas naloksoon mõjutas mõlemat sugupoole kogemust soodustavat paaritumist (päev 1 vs 5) või selle hõlbustamise säilitamist (5-päev vs test), kasutades kahesuunalist ANOVA-d [tegurid: ravi (soolalahus versus naloksoon) ) ja päev (päev 1, päev 5 või test)] ja Holm-Sidaki meetod post hoc võrdlused. Kõigi statistiliste katsete puhul \ t p <5% loeti statistiliselt oluliseks.

Naloksooni mõjud lihtsustatud seksuaalkäitumise lühiajalisele ekspressioonile.

Naloksooni (10 mg / kg, sc) ravi mõju paaritumise ajal testiti järgneva seksuaalkäitumise ajal viimase paaritumise testipäeva jooksul, mis viidi läbi ainult 1 d pärast viimast paaritumist (soolalahus, n = 5; naloksoon, n =

Süsteemne naloksooni eeltöötlus.

Et kindlaks teha, kas naloksooni korduv ravi põhjustab ainuüksi seksuaalse käitumise kahjustamist 7 d pärast viimast ravi, said seksuaalselt naiivsed loomad viis päeva naloksooni (10 mg / kg, sc) või soolalahuse järjestikuste päevade jooksul enne paaritamist 7 d pärast lõplikku naloksooni. või soolalahuse süstimine. Sellel viimasel katsepäeval ei saanud loomad süstimist. Seksuaalset käitumist täheldati ja registreeriti eespool kirjeldatud viisil. Paarituse parameetreid võrreldi rühmade vahel, kasutades paralleelseid t testid. Kõigi statistiliste katsete puhul \ t p <5% loeti statistiliselt oluliseks.

Süsteemne naloksoon ja sooline tasu.

Üks võimalus naloksooni kergendava mõju avaldamiseks hõlbustatud seksuaalkäitumise säilitamisel on see, et naloksoon blokeerib seksuaalkäitumise rahuldust pakkuvat mõju. Selle võimaluse testimiseks viidi CPP paradigma seksuaalse käitumise suhtes vahetult pärast naloksooni või soolalahuse süstimist meestel, kellel polnud eelnevat seksuaalset kogemust. CPP protseduur oli sarnane ülalkirjeldatud morfiin-CPP-ga kirjeldusele, hõlmates eeltesti, konditsioneerimispäevi ja testijärgset.

Seksuaalkäitumine seostati algselt mittesoodatud kambriga. Vastupidisel viisil sai iga loom naloksooni süstimise (n = 12) või soolalahus (n = 11) 30 min enne vastuvõtva naise ligipääsu saamist. Paaritumise keskmine kestus oli ∼13 min. Üks minut pärast ejakulatsiooni asetati loom 30 min-i paarikambrisse. Teisel konditsioneerimispäeval said loomad kas naloksooni või soolalahuse (olenevalt sellest, kumb neist saadi enne paaritumist) ja paigutati 30-i miniatuurimata kambrisse. Järgmisena viidi läbi test, mis oli identne pretestiga. Kambrite eelistuste kindlaksmääramiseks võrreldi paarikambris eellase ja katsejärgse aja jooksul kulunud aega. Statistilise analüüsi jaoks on seotud t teste kasutati eelistuste ja erinevuste hindamiseks ning paari kambris oleva aja võrdluseks testimise ja testimise järel, et teha kindlaks, kas seksuaalse käitumise jaoks moodustati märkimisväärne CPP. p <0.05 peeti oluliseks.

VTA-sisene naloksooni mõju kogemuste põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamisele

Eksperimentaalne disain.

Et teha kindlaks, kas EOP-toiming konkreetselt VTA-s oli vastutav seksuaalse kogemuse põhjustatud muutuste mõju eest seksuaalsele käitumisele, läbisid loomad viie päeva jooksul paaristamisperioodil lokaalse infusiooni naloksooni või soolalahusega. Käitumise paradigma oli sarnane süsteemse naloksooni eksperimendiga. Seksuaalselt kogenud loomadel lasti 5i järjestikusel päeval paarituda kuni ühe ejakulatsiooni või kuni 1 h-ni. Viisteist minutit enne vastuvõtliku naise sissetoomist said isased rotid kas naloksooni kahepoolseid infusioone (10 μg / μl ühe poole kohta; 0.5 μl maht; lahustati 0.9% soolalahuses) või soolalahust (0.5 μl poolkera kohta). Kahepoolsed mikroinjektsioonid manustati 0.5 μl / min voolukiirusel 1 min intervalliga, millele järgnes täiendav 1 min koos süstekanüüli paigutamisega difusiooni jaoks. Seejärel asendati süstimiskanüül mannekeeniga ja tolmukork. Üks nädal pärast paaritumise viimast päeva (testipäev) olid kõik loomad veel ühel ajal ejakulatsiooniks naloksooni või soolalahuse infusiooni teel. Joonis 3A kirjeldab eksperimentaalset disaini. Andmete analüüs viidi läbi nii, nagu on kirjeldatud süsteemses naloksooni katses.

Cannulation operatsioon.

Isased rotid tuimastati intraperitoneaalse süstimisega (0.1 ml / kg) ketamiiniga (0.87 mg / ml) ja ksülasiiniga (0.13 mg / ml) ning paigutati stereotaksilisse aparaati (Kopf Instruments). Kahepoolsed 21-gabariidijuhikanüülid (Plastics One) langetati väikeste puuraugude kaudu kolju ajusse VTA suunas -4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML bregmast ja −7.8 mm DV alates kolju ülaosast vastavalt Paxinos ja Watson (2013). Kannu kinnitati hambakrüüliga, mis kinnitas kolju kolme külge. Loomadele anti 2-nädala taastumisperiood ja neid töödeldi igapäevaselt käitumiskatsete käigus kasutatavate käitlemis- ja süstimismeetodite harjumiseks.

Cannula paigutuse kontroll.

Kanüülide paigutamist uuriti TH-immunovärvimise abil, et kinnitada VTA täpset sihtimist. Analüüsid hõlmasid ainult nõuetekohase paigutusega loomi (grupi lõplikud suurused: kogenud soolalahus) n = 8; kogenud naloksooni n = 6). Kolme täiendava looma, kes said VTA-sse suunatud VAL-i siseseid naloksooni süstid, rühmitati kokku „vastamata” süstegrupis. Vastamata rühma analüüsiti eraldi anatoomiliste kontrollidena ja Mann-Whitney U testi kasutati, et võrrelda käitumist viimasel katsepäeval koos naloksooni ja soolalahusega ravitud kogenud meestega.

Paarimisega seotud kontekstuaalne kii-indutseeritud pERK ekspressioon

Eksperimentaalne disain.

On näidatud, et kokkupuude puuriga, kus isased omandasid paaritumise kogemuse, põhjustavad VTA ja neuronaalse aktiivsuse MTA aktivatsiooni VTA-s ja NAc-s (Balfour jt, 2004). Seega on paarituskeskkond seksuaalse tasu ennustavaks tingimuseks. Praeguses uuringus testiti, kas seksuaalse kogemuse ajal MOR-i aktiveerimine on vajalik järgneva konditsioneeritud kihi indutseeritud närvi aktiveerimiseks. Naloksooni või soolalahust manustati süsteemselt (ip) 30 min enne paaritumisrežiimi asetamist ja vastuvõtva naise sissetoomist paaritamiseks (kogenud) või enne kontrolli manipuleerimist, mis seisnes paigutamises käitlemiskastis ilma naise esitlemata (neutraalne keskkond, naiivne). Seega loodi neli eksperimentaalset rühma: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal ​​ja Exp NLX. Üks nädal pärast paaritumist, pooled igas rühmas olevast loomast olid kokku puutunud puurimispuudega (Exp mehed: sooga seotud konditsioneeritud vihjeid) või puuri käsitsemisega (naiivsed mehed: mittesobivad / neutraalsed vihjed), samas kui teine ​​pool ei olnud avatud mis tahes märke ja jäi selle asemel kodus puuridesse (pERK ekspressiooni baasjoone määramiseks). See eksperimentaalne paradigma tootis 8 gruppe: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4, välja arvatud Naive NLX-No Cue, n = 3). Loomad perfundeeriti 10 – 15 min pärast ravimi kokkupuudet. Kontrollloomad eemaldati oma kodus puuridest ja perfundeeriti samaaegselt.

Immunohistokeemia.

Sekundeerimine ja immunohistokeemia viidi läbi nagu eespool kirjeldatud. Siin kasutasime p42i ja p44 MAP kinaaside ERK1 ja ERK2 (pERK; 1: 4 000; raku signaalimise tehnoloogia) vastu küüliku polüklonaalset antikeha. Primaarset antikeha on kirjanduses ulatuslikult iseloomustatud (Roux ja Blenis, 2004; Murphy ja Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Veelgi enam, primaarse antikeha ärajätmine takistas kogu roti ajukoe immunoreaktiivsuse ja Western blot analüüsi, mis näitas kahte sobivat molekulmassi.

Andmete analüüs.

pERK-immunoreaktiivsed (-IR) rakud loendati mitmetes aju piirkondades, kasutades kaamera lucida joonistustoru, mis oli kinnitatud Leica DMRD mikroskoop: NAc [südamik (C) ja kest (S); 400 × 600 μm; mediaalne prefrontaalne ajukoor; mPFC; anterior cingulate'i ala (ACA); prelimbiline koor (PL); infralimbiline koort (IL); 600 × 800 μm iga], caudate – putamen (CP; 800 × 800 μm) ja basolateraalne amygdala (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour jt, 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Aju piirkonna kohta loendati kaks sektsiooni ja seejärel arvutati rakkude arv standardsetes analüüsivaldkondades rakkude arvu kohta mm kohta2. Kahe loenduse keskmine arvutati looma kohta rühma vahendite arvutamiseks. Rühmade keskmisi väärtusi seksuaalselt kogenud või naiivsetes rühmades võrreldi kahesuunalise ANOVA-ga [tegurid: uimastiravi (NLX või Sal) ja cue (cue või no cue)], millele järgnes post hoc võrdlusi Holm – Sidaki või Mann-Whitney summaarsete katsete abil, kui see on asjakohane, tähendusliku tasemega p <0.05. Seksuaalselt kogenud loomade NAc-kestas täheldati tugevat suundumust tegurite olulisuse suunas ja seega viidi paaripõhised võrdlused läbi ainult soolalahuse (Sal-No Cue) ja soolalahuse (Sal + Cue) rühmade võrdlemiseks.

Pildid

Digitaalsed pildid salvestati CCD-kaameraga (Macrofire, Optronics), mis on ühendatud a-ga Leica mikroskoop (DM5000B), millel on fikseeritud kaamera seaded. Pildid imporditi Adobe Photoshop 9.0 tarkvarasse. Pildid ei muutunud mingil viisil, välja arvatud heleduse ja kontrasti reguleerimine.

Tulemused

Seks kogemus põhjustatud muutused VTA dopamiinirakkudes

Seksuaalne kogemus vähendas VTA dopamiini soma suurust (Joon. 1A – C). Seksuaalne kogemus vähendas oluliselt VTA TH-IR rakkude soma pindala ja perimeetrit (ala: F(1,31) = 23.068, p <0.001; ümbermõõt, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Samuti oli aja peamine oluline mõju (piirkond: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimeeter, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) ja kogemuste ja aja märkimisväärne koostoime (ala: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimeeter, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Paralleelsed võrdlused näitasid, et TH-IR-rakkude pindala ja perimeeter vähenesid oluliselt seksuaalselt kogenud loomade seksuaalse käitumise viimasel päeval 1 ja 7 d-ga võrreldes seksuaalselt naiivsete kontrollidega [Joon. 1B, ala: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 d); C, perimeeter: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 p)]. Seksuaalkäitumise mõju hajus, kui sellele järgnes preemiast hoidumise periood, kui TH-IR neuronite soma suurus taastus pärast viimast paaritamisseanssi 31 päeva algtasemele (Joon. 1B, ala: p = 0.798; C, perimeeter: p = 0.785). Sekskogemuse põhjustatud muudatusi ei tuvastatud ringkirjas üheski ajapunktis (Joon. 1D). VTA dopamiini soma suuruse vähendamine ei olnud sõltuv päevast paaritumisistungist, kuna paarikogemus viie kahe nädala jooksul paaritumise ajal andis ka vähendatud VTA dopamiini soma suuruse (Joon. 2A,B, E – H, ala: p = 0.004; perimeeter: p <0.001). Seevastu suguelamus ei mõjutanud TH-IR soma suurustJoon. 2C, I – J, ala: p = 0.13; perimeeter: p = 0.16) ega muutunud soma suurus lähedal asuvates VTA mitte-TH-IR neuronites (Joon. 2D, E – H, ala: p = 0.46; perimeeter: p =

Joonis 1. 

Joonis 1. 

VTA dopamiini neuronite endogeensed opioid-indutseeritud soma suuruse muutused. A, VTA dopamiini neuronite esindavad kujutised seksuaalselt naiivsetelt ja kogenud loomadelt, näidates soma suurust 7 d pärast viimast paaritumist. Skaala riba, 5 μm. Kvantitatiivsed andmed, mis näitavad, et seksuaalne kogemus (Exp, black bars) põhjustas olulist vähenemist piirkonnas (B; μm2) ja perimeetri (C; μm) VTA dopamiinirakkude 1 d (Naive, Exp; n = 6) ja 7 d (Naive, n = 5; Exp, n = 6), kuid mitte 31 d (Naive, n = 6; Exp, n = 8) pärast viimast paaritumist, võrreldes seksuaalselt naiivsete kontrollidega (naiivsed, valged ribad). Kogutud meestel vähendati pindala 84% -ni võrreldes naiivsete kontrollidega 1-i või 7-i puhul. Kogutud rühmades vähenes perimeeter 91.6 ja 90%, võrreldes 1 ja 7 d resp. Ringlussusele ei olnud mingit mõju (D). See dopamiinirakkude plastiilsus piirkonnas (\ tE) ja perimeetri (F) takistas naloksoon (NLX, n = 8), kuid mitte soolalahust (Sal, n = 7) ravi paaritumise ajal, 7 d pärast viimast paaritumist, võrreldes seksuaalselt naiivsete kontrollidega (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Andmed on keskmised ± SEM; * näitab olulist erinevust sama päeva seksuaalselt naiivsete kontrollidega võrreldes (B, C) või võrreldes soolalahusega töödeldud seksuaalselt naiivsete kontrollidega ja naloksooniga ravitud \ tE, F).

Joonis 2. 

Joonis 2. 

Seksuaalne kogemus ei vähendanud soma suurust nigra dopamiini neuronite või VTA nondopamiini neuronites. VTA TH-IR neuroni soma piirkondA; μm2) ja perimeetri (B; μm) seksuaalselt naiivsetel (valge) ja kogenud (mustadel) loomadel, kes said kogemusi paar korda nädalas, mitte järjestikuste päevade jooksul. Substantia nigra TH-IR soma piirkondC) ja VTA mitte-TH-IR soma ala (D) seksuaalselt naiivsetel (valge) ja kogenud (mustadel) loomadel. Andmed on keskmised ± SEM; * tähistab olulist erinevust seksuaalselt naiivsete kontrollidega. Esindavad kujutised, mis näitavad seksuaalselt naiivsete VTA-s sisalduvaid TH-IR (pruun) neuroneid (E) ja kogenud (F) mehed. G, H, Suurem suurendus pilt neuronist, mida näitab nool E ja F vastavalt. Nissliga värvitud neuronid on nendes piltides sinised. Esindavad kujutised, mis näitavad seksuaalselt naiivsete TH-IR-neuronite esinemist SN-is (I) ja kogenud (J) mehed. Kaalud: E-J, 20 μm.

VTA dopamiini neuronite seksuaalse kogemuse indutseeritud soma suuruse vähenemine sõltub opioidiretseptori aktiveerimisest

Seksuaalsest kogemusest tingitud VTA dopamiini neuronite suuruse vähenemist blokeeris mitteselektiivne MOR antagonist naloksoon, mida manustati enne iga paaritumist. Naloksoonravi enne paaritumisperioode avaldas olulist mõju piirkonnale (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) ja suunatakse olulisele mõjule perimeetrile (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Piirkonna jaoks leiti märkimisväärne koostoime kogemuste ja naloksooni ravi vahel.F(1,22) = 5.578, p = 0.027) ja perimeeter (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Paralleelsed võrdlused näitasid, et seksuaalne kogemus soolalahusega töödeldud loomadel vähenes pärast viimast paaritumisperioodi oluliselt VTA dopamiini neuronite 7 d pindala ja perimeetrit võrreldes soolalahusega töödeldud seksuaalselt naiivsete meestega (Joon. 1E, ala: p = 0.018; F, perimeeter: p = 0.007). Seevastu seksuaalselt kogenud naloksooniga ravitud loomad ei erinenud naloksooniga ravitud naiivsetest meestest (Joon. 1E, ala: p = 0.483; F, perimeeter: p = 0.330). Lisaks vähenes kogenud soolaloomade soma suurus võrreldes kogenud naloksooni loomadega oluliselt.Joon. 1E, ala: p = 0.002; F, perimeeter: p = 0.002). See naloksooni toime oli spetsiifiline seksuaalse kogemuse suhtes, kuna naloksoonravi üksi ei mõjutanud TH-IR raku suurust seksuaalselt naiivsetel naloksooniga ravitud meestel võrreldes soolalahusega ravitud kontrollidega (Joon. 1E,F). Lisaks sellele ei olnud naloksooni mõju kogemuste indutseeritud soma suuruse vähendamisele tingitud naloksooni mõjust seksuaalsele käitumisele, kuna paarituskäitumine ei erinenud märkimisväärselt naloksooni ja soolalahusega ravitud meestel, välja arvatud pikem aeg paaritumise alustamiseks pärast ejakulatsiooni (pärast ejakulatsiooni intervalli) naloksooniga ravitud meestel esimese ja viienda paaritumise ajal (p = 0.03 ja p = 0.004). Mõlema viie paaritumise ajal kopeeriti nii soolalahusega kui ka naloksooniga töödeldud isased ejakulatsiooniga.

Seksuaalse kogemuse põhjustatud morfiinitasu tolerants

Seksuaalse kogemuse mõju VTA dopamiini soma suurusele EOP toimel VTA-s on sarnane eksogeensete opiaatide puhul (Sklair-Tavron jt, 1996; Russo jt, 2007). Seetõttu testiti, kas loodusliku tasu poolt indutseeritud VTA dopamiinirakkude plastilisus mõjutab opiaadi morfiini tasu. Tõepoolest, seksuaalne kogemus põhjustas morfiini tasuvust, mis sarnaneb krooniliste opiaatide mõjule (Russo jt, 2007). Seksuaalselt kogenud mehed ei suutnud välja töötada CPP-d 0.5 mg / kg morfiini annuse kohta; arvestades, et seksuaalselt naiivsed isased moodustasid selle annuse jaoks CPP-d, nagu näidati pärast morfiini-paariga kambris suuremat aega võrreldes soolalahuse paariga kambriga pärast testimist (Joon. 3; p = 0.039). Nii seksuaalselt naiivsed kui ka kogenud rühmad kasutasid morfiinipaariga kambris oluliselt suuremat aega kui soolalahusega paaris kambris, kus olid suuremad morfiini annused: 5.0 mg / kg (Joon. 3; Naiivne: p = 0.029; Exp: p 0.012) ja 10.0 mg / kg (Joon. 3; Naiivne: p <0.001; Kõlblik kuni: p =

Joonis 3. 

Joonis 3. 

Seksuaalse kogemuse mõju morfiini tasule. Soolase (Sal) või morfiinipaariga (Mor; 0.5, 5 või 10 mg / kg kehakaalu kohta) veedetud ajad seksuaalselt naiivsetes testides (Naive, n = 10 – 13) või kogenud ( n = 9 – 13) isased. Andmed on esitatud kui keskmine ± SEM; * tähistab olulist erinevust Sal-paari kambriga samades loomades. NS, Ei ole oluline.

Seks kogemuse põhjustatud paaritumise käitumise soodustamine sõltub opioidiretseptori aktiveerimisest

Siiani saadud tulemused näitavad, et 5i igapäevaste lühikeste paaritumisperioodide ajal VTA-s toimuv EOP põhjustab VTA dopamiini neuronite plastilisust, mis on sarnane kroonilise morfiini või heroiini iseseisva manustamisega (Russo jt, 2007; Mazei-Robison jt, 2011). Me oletasime, et VTA dopamiini soma suuruse vähendamine on kriitilise tähtsusega tasuõppimiseks ja eriti seksuaalkogemuse poolt põhjustatud seksuaalkäitumise hõlbustamiseks seoses motivatsiooni ja jõudlusega. Seda hüpoteesi testiti, blokeerides MOR-i naloksooni kasutamisel paaritumise ajal ja uurides mõju seksuaalse käitumise soodustamisele viie igapäevase paaritumise ajal. Andmed on esitatud Joonis 4 ainult esimese ja viienda paaritamisperioodi jaoks, sest need on andmed, mis kõige paremini illustreerivad kogemuse põhjustatud paaritumise käitumise hõlbustamist. Lisaks testitakse naloksoonravi pikemaajalist mõju paaritumisperioodide ajal kogemuste poolt põhjustatud paaritumise hõlbustamise säilitamisele, viimane paaritustesti 1 nädal hiljem. Joonis 4A näitab eksperimentaalset disaini. Paaritumisperioodil oli oluline seksuaalkäitumise kõigi parameetrite mõju (mount latency: F(2,55) = 11.286, p <0.001; intromissiooni latentsus: F(2,55) = 8.767, p <0.001; ejakulatsiooni latentsus: F(2,55) = 10.368, p <0.001) ja naloksoonravi latentsustel (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) ja intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Paralleelsed võrdlused näitasid, et naloksoonravi mõjutas seksuaalset käitumist esimese paaritumise ajal, sest naloksooni loomadel oli esimesele kinnitusele oluliselt pikem latentsus (p = 0.002) ja intromission (p = 0.002) võrreldes füsioloogilise lahuse kontrollidega esimesel paaripäeval. See naloksooni toime algsele seksuaalsele käitumisele vähenes seksuaalse kogemuse tõttu ja seda ei täheldatud ühegi järgneva paaritumise ajal (Tabel 1). Lisaks ei takistanud naloksooni manustamine enne iga viie paaritumisperioodi algust seksuaalse käitumisega seksuaalse käitumise esmast hõlbustamist. Kooskõlas seksuaalse kogemuse tugevneva mõjuga näitasid soolalahusega töödeldud isased latentsuse vähenemist (Joon. 4B; p = 0.032) intromission (Joon. 4C; p = 0.033) ja ejakulatsioon (Joon. 4D; p <0.001) viienda paaritumisseansi ajal võrreldes esimese paaritumisseansiga, mis näitas seksuaalkäitumise hõlbustamist. Sarnaselt oli naloksooniga ravitud meestel paigaldamiseks latentsus oluliselt lühem (Joon. 4B; p <0.001), intromissioon (Joon. 4C; p <0.001) ja ejakulatsioon (Joon. 4D; p = 0.017) viiendal päeval võrreldes esimese päevaga. Lisaks ei erinenud naloksooniga töödeldud isased viie paaritumisperioodi jooksul ühestki latentsusest soolalahuse kontrollist.

Joonis 4. 

Joonis 4. 

Endogeensed opioidid mängivad olulist rolli seksuaalse käitumise kogemuste tekitamisel. A, Eksperimentaalne disain. B-DSoolase käitumisega meestel seksuaalse käitumise parameetrid (Sal, valged ribad, n = 11) või naloksoon (NLX; mustad ribad, n = 12) koos süsteemse manustamisega. Näidatud andmed on paigaldamise latentsus (B; sekundit), intromission (C; sekundit) ja ejakulatsioon (D; sekundites) 1 ja 5 päevadel viis järjestikust paaritumispäeva. Lisaks kuvatakse andmed lõpliku paaritamise testi jaoks, 7 d pärast viiendat paaritumist. Andmed on esitatud kui keskmine ± SEM; + näitab olulist erinevust 1i ja 5-i päevade vahel ravi jooksul; * näitab olulist erinevust testipäeva ja päeva 5 vahel ravi jooksul; # tähistab olulist erinevust naloksooni ja füsioloogilise lahuse rühmade vahel päevas.

Vaata seda tabelit: 

Tabel 1. 

Naloksooni manustamine enne suurenenud latentsuse ühendamist paigaldamiseks ja sissetungimiseks ainult paaritumise esimesel päeval

Seevastu naloksoonravi seksuaalse kogemuse seansi ajal katkestas kogemuste põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamise viimasel paaritumise päeval. Katsepäev viidi läbi 7 d pärast lõplikku paaritumist seansi puudumisel. Soolalahusega ravitud isasloomadel oli oodatav kogemuste põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamine. Täpsemalt ei olnud viie paaritumise ja lõpliku testipäeva vahel paigaldamise, sissetungimise ja ejakulatsiooni latentsus erinev.Joon. 4B – D). Kui naloksooniga töödeldud isastel oli täheldatud latentsuse märkimisväärset suurenemist, \ tJoon. 4B; p = 0.033), intromission (Joon. 4C; p = 0.036) ja ejakulatsioon (Joon. 4D; p = 0.049) testipäeval võrreldes viienda paaritumisega. Samuti leiti, et naloksooni loomad olid katsepäeval tunduvalt aeglasemad kui soolalahusega töödeldud isased, kui neid näidati pikematel latentsusajatel (Joon. 4B; p = 0.017) ja intromission (Joon. 4C; p = 0.043). Seega blokeeris naloksoonravi kogemusi põhjustanud seksuaalse käitumise soodustamise, kuid mitte esialgse arengu. Need tulemused näitavad EOP-indutseeritud VTA dopamiini neuronite plastilisuse kriitilist rolli loodusliku tasu käitumise tugevdamise pikaajalisel väljendamisel.

Tehti mitmeid täiendavaid kontrollkatseid, et teha kindlaks, et opioidiretseptori blokaadi mõju seksuaalse käitumise pikaajalise tugevdamise kadumisele oli sõltumatu naloksooni manustamise puudumisest viimasel paaritumise testipäeval (Joon. 5A,B), olid spetsiifilised pikaajalise, kuid mitte lühiajalise paaritumise hõlbustamise kaotuse \ tJoon. 5E,F) ei ole põhjustatud ainult päevase naloksooniga kokkupuute \ tJoon. 5C,D) ja neid ei põhjustanud seksuaalse tasu kaotamine naloksooniga ravitud meestel (\ tJoon. 5G,H). Esiteks, et näidata, et lõpliku paaritumise testi muutunud seksuaalkäitumine ei olnud tingitud naloksooni puudumisest, manustati naloksooni või soolalahust lõpliku paaritamise päeval loomadele, kes said seksuaalkogemuse ajal naloksooniga paaritumise (Joon. 5A). Paaripäeval oli oluline peamine mõju latentsuse tekkimisele (Joon. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) ja intromission (Tabel 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Paaripäeval ei olnud peamist mõju latentsusele ejakulatsioonile (Tabel 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Nagu ülalpool kirjeldatud, ei mõjutanud naloksooni ravi paaritumise ajal seksuaalse käitumise hõlbustamist viie esimese seksuaalse kogemuse ajal. Mõlemad rühmad (soolalahuse ja naloksooniga töödeldud rühmad, mis määrati lõpliku paaritumise ajal saadud raviga, mõlemad said naloksooni paaritumise ajal) näitasid, et 5i päeval oli 1iga võrreldes soodsam seksuaalkäitumine ja näidati oluliselt lühemat latentsust esimese kinnitusega (Joon. 5B; soolalahus: p = 0.033; naloksoon: p = 0.014) ja intromission (Tabel 2; soolalahus: p = 0.034; naloksoon: p = 0.026). Loomadel, kes said viimasel paaritamise testipäeval kas naloksooni või soolalahust, oli pikem latentsus (Joon. 5B; soolalahus: p = 0.018; naloksoon: p = 0.029) ja intromission (Tabel 2; soolalahus: p = 0.019; naloksoon: p = 0.020) võrreldes viienda päevaga paaritumise kogemusest. Seetõttu ei mõjutanud naloksooni või soolalahuse manustamine vahetult enne paaritumist katsepäeval naloksoonravi mõju seksuaalse kogemuse istungitel ja pikaajalise seksuaalse käitumise hõlbustamise nõrgenemine oli identne loomadega, kes ei saanud mingit süstimist viimasel paaritamise testipäeval (Joon. 4).

Joonis 5. 

Joonis 5. 

Endogeensed opioidid on olulised kogemuste poolt põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamise pikaajalises väljenduses. A, Eksperimentaalne katse NLX-ravi mõju testipäeval. BPaigaldage latentsus 1i ja 5i päevadel viie järjestikuse päeva paaritumise ja lõpliku paaritumise päeva (test) järel pärast soolalahuse (hall) või naloksooni (must) süstimist. Andmed on keskmised ± SEM. * näitab olulist erinevust 1 ja 5 päeva vahel ravi jooksul. # näitab olulist erinevust testipäeva ja päeva 5 vahel ravi jooksul. CEksperimentaalne eksperiment, et testida ainult naloksooni eeltöötluse mõju ilma seksuaalse kogemuseta paaritumise käitumisele. D, Viige latentsus lõpliku paaritamise katsepäeval, 7 päeva pärast 5i päeva kas soolalahuse või naloksooni süstimist paaritumise puudumisel. Andmed on keskmised ± SEM. EEksperimentaalne eksperiment, et kontrollida, kas naloksooniravi mõjutas seksuaalselt kogenud loomade seksuaalse käitumise lühiajalist kuvamist. FViie järjestikuse paari ja viimase paaritumise päeva, 1 päeva pärast 5 päeva 1 ja 5 päeva lõpus 1-i ja 5-i latentsus soolalahuse (hall) või naloksooni (must) süstimise korral. Andmed on keskmised ± SEM. * näitab olulist erinevust XNUMX ja XNUMX päeva vahel ravi jooksul. GEksperimentaalne eksperiment, et kontrollida, kas naloksoonravi blokeeris seksuaalse käitumise rahuldavat mõju. H, Paari paarikambris (sekundites) veedetud aeg (valge) ja katsejärgne (must) loomadel, kes said enne paaritumist naloksooni või soolalahust. Andmed on keskmised ± SEM; * tähistab olulist erinevust võrreldes preestiga.

Vaata seda tabelit: 

Tabel 2. 

Näidatud andmed on latentsus intromisatsiooni ja ejakulatsiooni suhtes (sekundid) kontrollikatsetest, et teha kindlaks, et MOR-blokaadi mõju seksuaalse käitumise pikaajalise tugevdamise kadumisele oli sõltumatu naloksooni manustamise puudumisest viimasel paaritumise testipäeval

Et teha kindlaks, kas ravi naloksooniga oli seksuaalse kogemusega seotud ja ei kordunud naloksooniga per se, mis põhjustas seksuaalse käitumise kahjustamist 7 d pärast viimast ravi, said seksuaalselt naiivsed loomad enne lõplikku paaritustesti 7 kas viis naloksooni või soolalahuse süstimist. d hiljem (Joon. 5C). Soolase ja naloksooni eeltöödeldud rühmade vahel ei täheldatud ühtegi parameetri olulist erinevust (Joon. 5D; mount latency; intromission latency: soolalahus 139.7 ± 40.3 vs naloksoon 121.83 ± 42.55; ejakulatsiooni latentsus: soolalahus 887.9 ± 70.0 vs naloksoon 1050.8 ± 327.31). Need tulemused näitavad, et ainult naloksoon ei ole piisav hilisema seksuaalse käitumise muutmiseks, mis on sarnane ainult naloksooni mõju puudumisele VTA dopamiini neuronite plastilisusele.

Me oletame, et naloksoonravi seksuaalse kogemuse omandamise ajal häirib seksuaalse käitumise põhjustatud seksuaalse käitumise soodustamise pikaajalist väljendumist. Edasiseks testimiseks testiti naloksoonravi mõju paaritumise ajal järgneva seksuaalkäitumise ajal lõpliku paaritamise testi ajal, mis viidi läbi ainult 1 d pärast viimast paaritumist (eksperimentaalne disain; Joon. 5E). Paaripäeval oli mägipiirkonnas märkimisväärne peamine mõju (Joon. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) ja intromissiooni latentsused (Tabel 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Päeva olulist peamist mõju ejakulatsiooni latentsusele ei olnud (Tabel 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Sarnaselt ülalkirjeldatule näitasid kõik mehed (hoolimata füsioloogilisest või naloksoonravist) seksuaalse käitumise hõlbustamist viie seksuaalkogemusperioodi ajal, mida tähistati märgatavalt lühemate latentsustega (Joon. 5F; soolalahus: p = 0.002; naloksoon: p = 0.018) ja intromission (Tabel 2; soolalahus: p = 0.006; naloksoon: p = 0.009) päeval 5 võrreldes 1-i päevaga. Sarnaselt demonstreeriti testipäeval võrreldavat seksuaalset käitumist võrreldes 1-i päevaga, mida tähistati märkimisväärselt lühemate latentsusajaga.Joon. 5F; soolalahus: p = 0.001; naloksoon: p = 0.020) ja intromission (Tabel 2; soolalahus: p = 0.004; naloksoon: p = 0.009). Veelgi olulisem on, et naloksoonravi paaritumise ajal ei mõjutanud oluliselt suguürituse poolt põhjustatud seksuaalkäitumise hõlbustamist, kui testiti 1 d pärast seksuaalset kogemust, sõltumata naloksoonravist selles viimases paaritamispäeval.

Lõpuks testisime võimalust, et naloksooni nõrgendav mõju hõlbustatud seksuaalkäitumise pikaajalisele avaldumisele on tingitud naloksooni blokeerivast mõjust seksuaalkäitumise rahuldust pakkuvatele omadustele. Vahetult enne paaritumist manustatud naloksoon ei muutnud aga paaritumisel CPP-d (Joon. 5G), mis näitab, et ravi naloksooniga ei muutnud seksuaalset tasu. Nii soolalahusega kui ka naloksooniga ravitud rühmad moodustasid seksuaalkäitumise jaoks olulise CPP, mida näitab märgatavalt suurenenud seksuaalvahekorras viibimise aeg (Joon. 5H; soolalahus: p = 0.038; naloksoon: p = 0.002) katsejärgse katse ajal võrreldes eellaga. Seetõttu ei avalda naloksoon seksuaalkäitumisega seotud tasu blokeerides soodsat seksuaalse käitumise säilitamist.

Seksuaalse käitumise hõlbustamine sõltub ETA tegevusest VTA-s

Et kinnitada, et EOP tegutseb VTA-s konkreetselt, et kutsuda esile seksuaalse käitumise pikaajaline hõlbustamine, Joonis 3A korrati pigem intra-VTA naloksooni infusioonidega kui süsteemsete süstidega. Tulemused olid identsed ülalkirjeldatud süsteemse manustamisega. Paaripäeval oli oluline mõju seksuaalse käitumise kõikidele parameetritele (Joon. 6A, mount latency: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, intromission latency: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, ejakulatsiooni latentsus: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) ja VTA-sisene naloksooni ravi latentsuse korralF(1,33) = 7.345, p = 0.011) ja intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA naloksoon ei takistanud 5-i ajal paaritumise ajal esmakordselt saadud seksuaalkäitumise hõlbustamist, kuna naloksooniga ravitud meestel oli vähenenud latentsus (Joon. 6A; p = 0.001), intromission (Joon. 6B; p <0.001) ja ejakulatsioon (Joon. 6C; p = 0.001) päeval 5 võrreldes 1-i päevaga. Naloksooniga töödeldud isased ei erinenud ühelgi latentsuse viies päeval soolalahusega töödeldud meestest. Intra-VTA naloksoonravi, nagu süsteemne manustamine, põhjustas oluliselt suurenenud monoteraapia (Joon. 6A; p <0.001) ja intromissiooni latentsused (Joon. 6B; p <0.001) esimesel paarituspäeval võrreldes soolalahusega ravitud isastega, mida järgnevatel paaritumisseanssidel ei täheldatud (mille käigus naloksooniga ja soolalahusega töödeldud isased ei erinenud). Üks ootamatu tähelepanek oli see, et selles katses ei näidanud füsioloogilise lahusega ravitud mehed statistiliselt olulist hõlbustust monteerimise või intromissiooni latentsuse hõlbustamisel (nagu näidati kõigis ülalkirjeldatud katsetes) ja viiendal päeval lühenes ainult ejakulatsiooni latentsus esimese päevaga (soolalahus: p =

Joonis 6. 

Joonis 6. 

VTA-s olevad endogeensed opioidid vahendavad seksuaalse käitumise ja selle pikaajalise hoolduse kogemust põhjustatud soodustusi. Soolalises käitluses olevate meeste seksuaalse käitumise parameetrid (Sal, valged tulbad, n = 8) või NLX (mustad ribad, n = 6) koos VTA-ga. Näidatud andmed on paigaldamise latentsus (A), intromission (B) ja ejakulatsioon (C) päeval 1 ja 5 viis järjestikust paaritumispäeva. Lisaks on andmed 7-i lõpp-paari testimispäeva kohta 5i kohta soolalahuse või naloksooni süstimise puudumisel. Andmed on keskmised ± SEM; + näitab olulist erinevust 1i ja 5-i päevade vahel ravi jooksul; * näitab olulist erinevust testipäeva ja päeva 5 vahel ravi jooksul; # tähistab olulist erinevust naloksooni ja Sal rühmade vahel päevas. Skeemilised joonised koronaalsetest VTA-sektsioonidest (H, -4.60; I, -5.00; J, -5.25, bregma), mis näitavad kõigi loomade VTA süstekohad katses 5 (soolalahus, valge; naloksoon, must; vastamata, hall); Swansoni aju kaartide malli jooniste kasutamineSwanson, 2004). Kanepid olid kahepoolsed, kuid süstekohad on esitluse lihtsustamiseks esindatud ühepoolselt. fr, Fasciculus retroflexus; ML, Medial lemniscus; SN, materia nigra.

Intra-VTA naxolone-ravi takistas seksuaalselt kogenud meestel täheldatud seksuaalkäitumise säilimist, sarnaselt süsteemse naloksooni toimega. Täpsemalt, viimasel katsepäeval oli naloksooniga töödeldud meestel pikem latentsus (Joon. 6A; p = 0.011), intromission (Joon. 6B; p = 0.010) ja ejakulatsioon (Joon. 6C; p = 0.015) võrreldes nende viienda paaritumisega ja võrreldi soolalahusega töödeldud meestega viimasel testipäeval (Joon. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Seevastu soolalahusega töödeldud loomad ei erinenud latentsusastmega, et ühendada ja siseneda paaritumise viimase testi päeva ja päeva vahel. Need mõjud olid spetsiifilised naloksooni kohaletoimetamisele VTA-le, kuna lähikonnas kanüülimiskohtadega mehed, kuid mitte VTA-d (Joon. 6D; n = 3) näitas pikaajalist seksuaalkäitumise hõlbustamist, mis on sarnane soolalahusega töödeldud kontrollidega (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 ja oluliselt erinev võrreldes VTA-s sisalduvate naloksooni loomadega viimasel paaritamise päeval (ML, IL: p = 0.029; EL: p =

EOP-toiming on vajalik sooga seotud konditsioneeritud cue-indutseeritud närvi aktiveerimiseks

Seniste tulemuste põhjal oletasime, et EOP aktiveerimine VTA-s paaritumise kogemuse ja sellele järgneva VTA dopamiini soma suuruse vähendamise seisukohalt on kriitilise tähtsusega stimuleeriva omandiõiguse omistamisel vastastikku seotud stiimulitele ja seega ka seksuaalse käitumise hõlbustamisele. Selle hüpoteesi testimiseks uuriti opioidiretseptorite blokeerimise mõju neuraalsele aktiivsusele, mida indutseeris seksuaalse tasu ennustav konditsionaalne kontekstuaalne vihje (sugupõhised kontekstuaalsed vihjed). Seksuaalselt naiivsed loomad olid samuti keskkonnakaitsega kokkupuutunud, kuid need ei olnud seotud eelmise paaritumisega, seega olid nad neutraalsed. Lõpuks määrati pERK algtasemed seksuaalselt kogenud ja naiivsetes kontrollgruppides, mis jäid kodus puuridesse ja ei olnud avatud ühelegi vihjele (-No Cue). Varasemate järelduste kinnitamine ja laiendamine (Balfour jt, 2004), eelmise sugupoolega seotud kontekstuaalsete vihjete kokkupuude suurendab oluliselt pERK ekspressiooni seksuaalselt kogenud meestel NAc-s (Joon. 7) ja mPFC (Joon. 8A – C), kuid ei põhjustanud BLA-s neuronaalset aktivatsiooni (Joon. 8D) või CPu (andmeid pole näidatud). Kiirekiirguse kokkupuute peamised mõjud olid NAc südamikus (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038) ja PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041) ja naloksoonravi NAc südamikus (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002) ja PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). NAc südamikus toimus märkimisväärne koostoime (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014) ja IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Esiteks suurendas paaritumisega seotud Cue-ekspositsioon pERK-d soolalahusega töödeldud loomadel (Exp Sal ​​+ Cue) võrreldes kontrollidega, mis ei olnud avatud ükskõik millistele märkidele ja võetud kodukastis (Exp Sal-No Cue) NAc südamikus (Joon. 7A; p <0.001) ja mPFC allpiirkonnad ACA (Joon. 8A; p = 0.001), PL (Joon. 8B; p = 0.003) ja IL (Joon. 8C; p = 0.029). Seevastu soolalahusega töödeldud seksuaalselt naiivsetel loomadel ei tekitanud kontekstuaalsete vihjete kokkupuude, mis ei olnud seotud seksuaalse tasuga, pERK-i indutseerimist üheski aju piirkonnas (Naive Sal + Cue võrreldes naiivse Sal-No Cue'ga; Joonised fig. 7, 8), mis näitab, et pERK-i esilekutsumine on spetsiifiline seksuaalse kogemusega seotud märkide eksponeerimiseks. Peale selle ei muutnud ainuüksi seksuaalne kogemus algset pERK ekspressiooni üheski aju piirkonnas, kuna ei olnud erinevusi gruppide vahel, mis olid võetud kodupuuridest, olgu need siis seksuaalselt naiivsed või kogemused, ja mida raviti soolalahusega või naloksooniga.

Joonis 7. 

Joonis 7. 

Soolaga seotud konditsioneeritud vihjete poolt indutseeritud närvi aktiveerimiseks on vajalik endogeenne opioidide toime. PERK-IR-rakkude arv millimeetrites2 akumulaarse tuuma tuumas (A) ja kest (B) seksuaalselt naiivsetel (valge) ja kogenud (Exp; black) loomadel, keda oli eelnevalt ravitud süsteemse NLX-i või soolalahusega (Sal) paaritumise ajal (Exp-isased) või käitlusseanssidel (Naive-isased). Grupid olid avatud kontekstuaalsetele vihjetele (Cue), mis olid paaritamisega seotud vihjeid Exp-isastel ja neutraalsetel märkidel naiivsetes loomades või võetud kodus puurides (No Cue; Cue-märgise puudumise tõttu). Andmed on esitatud kui keskmine ± SEM; * tähistab märkimisväärset erinevust soolalahusega eelnevalt töödeldud kontrollidega (Naive Sal-No Cue ja Exp Sal-No Cue); # tähistab olulist erinevust Sal-ga töödeldud Cue-eksponeeritud Exp grupiga (Exp Sal ​​+ Cue). PERK-IR-rakkude tüüpilised kujutised mm kohta2 seksuaalselt kogenud meessoost SA-sse (C, D) või NLX (E, F), mis võeti kas koduservast (No Cue, C, E), või kokkupuutega seotud kontekstuaalsete märkide (Cue; D, F). N = 4 iga rühm, välja arvatud Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, Anterior commissure. Skaala riba, 100 μm.

Joonis 8. 

Joonis 8. 

Naloksooni mõju paaritumise kihi poolt indutseeritud pERK ekspressioonile teistes VTA sihtpiirkondades. PERK-IR-rakkude arv millimeetrites2 seksuaalselt naiivsetel (valgetel) ja kogenud (Exp; black) loomadel, keda oli eelnevalt töödeldud süsteemse NLX-i või soolalahusega (Sal) paaritumissessioonide ajal ja nad olid avatud kontekstuaalsetele vihjetele (Cue) või kodus puurile (ilma vihjeid) ACA-s (A), PL (B), IL (C) ja BLA (D). Andmed on keskmised ± SEM; * tähistab märkimisväärset erinevust soolalahusega eelnevalt töödeldud kontrollidega (Naive Sal-No Cue ja Exp Sal-No Cue); # näitab olulist erinevust võrreldes Sal-ga töödeldud cue-eksponeeritud seksuaalselt naiivsete kontrollidega (Naive Sal + Cue).

Meie hüpoteesi toetuseks nõrgendas naloksoonravi seksuaalse kogemuse ajal märkimisväärselt pERK induktsiooni sugupõhiste konditsioneeritud vihjete poolt. pERK ekspressioon nendes naloksooniga ravitud kiiluga eksponeeritud meestel (Exp NLX + Cue) ei erinenud algsest pERK ekspressioonist ükskõik millises kodupuuridest võetud naissoost naiivsetes või kogenud kontrollrühmades (Naive Sal-No Cue või Naive NLX- No Cue). Veelgi enam, pERK ekspressioon naloksooniga ravitud katsel eksponeeritud meestel (Exp NLX + Cue) oli oluliselt madalam kui soolalahusega töödeldud katseloomadel (Exp Sal ​​+ Cue) NAc südamikus (Joon. 7A; p = 0.002) ja mPFC alampiirkonnad (Joon. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p =

NAc-kesta puhul ei andnud kahesuunaline ANOVA-analüüs statistiliselt olulist mõju teguritele, mis olid seotud kokkupuute ja naloksooniga. Kuid paarisarvuline võrdlus näitas, et sue ekspositsioon ei indutseerinud pERK-d soolalahusega ravitud seksuaalselt kogenud rühmas (Exp SAL + Cue) võrreldes mitte-keele eksponeeritud saliiniga naiivse kontrollrühmaga (Joon. 7B; Naive SAL-No Cue: p =

Arutelu

Käesolev uuring näitab, et seksuaalkäitumise ajal VTA-s toimuv EOP, loomulik tasu käitumine, põhjustas VTA dopamiinirakkude soma suuruse tugeva, kuid mööduva vähenemise. Soma suuruse vähenemist ei täheldatud VTA mitte-dopamiini neuronites ega dopamiini neuronites lähedal asuvas materia nigras, mis viitab sellele, et see muutus oli spetsiifiline VTA dopamiini rakkudele. See VTA dopamiini plastilisus tundub sarnane kroonilise opiaadiga kokkupuute indutseerimisega (Sklair-Tavron jt, 1996; Russo jt, 2007; Mazei-Robison jt, 2011) ja põhjustas sarnast tolerantsust eksogeense opiaadi (morfiini) tasu suhtes. Näitasime, et VTA dopamiini plastiilsus on kriitiline pikaajalise (säilitamise), kuid mitte lühiajalise (arengu), seksuaalse käitumise tugevdamise ja auhinnaga seotud kii-indutseeritud närvi aktiivsuse (pERK) jaoks VTA sihtpiirkondades: NAc ja mPFC. Need tulemused näitavad VTA dopamiini plastilisuse rolli loodusliku tasu ennustavate märkide või premeerimismälu stimuleeriva tähtsuse pikaajalises väljenduses.

On hästi dokumenteeritud, et seksuaalne kogemus viib hilisema seksuaalse käitumise hõlbustamiseni, kaasa arvatud paaritumise ja suurema jõudluse alguseni jõudmine (Balfour jt, 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). See seksuaalse käitumise soodustamine või tugevdamine säilib vähemalt 28 d pärast paaritumist (Pitchers et al., 2012). Lisaks on näidatud, et suguüritus ja suguhüvitist ennustavad konditsioneeritud näpunäited põhjustavad MOR-i internaliseerumist VTA-s ja indutseerivad neuronaalset aktiveerimist kogu mesolimbilise süsteemi kaudu, kaasa arvatud VTA (dopamiin ja nondopamiini neuronid), NAc, PFC ja BLA (Balfour jt, 2004, 2006). On hästi teada, et VTA dopamiini neuronid mängivad olulist rolli tasustamisega seotud stiimulite stimuleeriva tähtsuse õppimisel ja omistamisel (Berridge ja Robinson, 1998; Berridge et al., 2009; Flagel et al., 2011) ja on olulised tasu ennustamiseks (Schultz, 2010). Praegused leiud laiendavad meie praeguseid teadmisi, näidates, et tasu-indutseeritud VTA neuroplastsus on nende funktsioonide jaoks kriitiline ja sõltub MOR-i aktiveerimisest EOP poolt VTA-s. Praegu ei ole teada, milline EOP on MOR-i ligand, mis toimib VTA-s meessoost seksuaalse käitumise ajal. Kuigi nii β-endorfiin kui ka enkefaliin on seotud toiduainete tugevdajate motivatsiooniga (Hayward et al., 2002), see jääb meeste seksuaalse käitumise jaoks kindlaks. Oleme eelnevalt näidanud, et β-endorfiini neuronid ei aktiveeru paaritumise ajal ega ka POMC mRNA suurenemist; seega viitab sellele, et β-endorfiin ei pruugi paarimise ajal VTA-s olla kriitiline EOP;Davis et al., 2007). See VTA dopamiini plastiilsus oli oluline neuroloogilise aktiivsuse jaoks mPFC-s, NAc-s ja VTA-s pärast seksuaalse tasu ennustavate keskkonnamõjude eksponeerimist. Veelgi enam, VTA dopamiini plastilisus oli kriitiline seksuaalse käitumise suurenenud initsiatsiooni ja toime pikaajalise ekspressiooni seisukohast. Samas ei olnud seksuaalsest kogemusest tingitud VTA neuroplastilisust vaja hedooniliseks reageerimiseks, sest sugupoolne tasu (määratud CPP poolt) ja lühiajaline seksuaalse motivatsiooni ja sooritusvõime soodustamine (seksuaalkogemuse ajal või 1 d hiljem) jäi puutumatuks vaatamata MOR-i blokeerimisele paaritumise ajal (Mehrara ja Baum, 1990). Selle asemel näitavad andmed, et VTA dopamiini neuroplastilisus vahendab pikemat perioodi (7 d pärast viimast seksuaalset kogemust; Pitchers et al., 2012) soo tasu väljendamise väljendus ja kõrgendatud motiveeritud vastused paaritumistele (Miller ja Baum, 1987; Berridge ja Robinson, 1998).

Seksuaalselt kogenud loomad näitasid morfiinitasu suhtes risti taluvust, mis sarnaneb hiirte jooksva ratta toimele, teine ​​loomulik rahuldav käitumine, naloksoonravi blokeeritud toime (Lett et al., 2001, 2002) ja on määratud sõltuma VTA dopamiini rakkude plastilisusest (praegused leiud). Sarnaselt looduslikele hüvedele põhjustab korduv kokkupuude morfiini või heroiini opiaatidega VTA dopamiini soma suuruse mööduvat vähenemist (Sklair-Tavron jt, 1996; Spiga jt, 2003; Russo jt, 2007; Mazei-Robison jt, 2011). Lisaks põhjustab opiaatide kokkupuude lühikese keeluajaga tasu taluvust, mis on tingitud suurematest ravimite annustest, mis on vajalikud tasuühenduste loomiseksShippenberg et al., 1987; Russo jt, 2007) ja põhjustab iseenesest manustatavate loomade narkootikumide tarbimise \ tAhmed et al., 2000; Walker jt, 2003). Seega toimivad EOP ja opiaatid ühiste närvisubstraatide suhtes, et esile kutsuda ennetähtaegselt ära tasu taluvus, mis võib peegeldada kompenseerivat homeostaatilist mehhanismi korduva kokkupuute stimuleerimiseks (Koob ja Le Moal, 2005). Seevastu pikaajalise opiaadi ravimi abstinensuse ajal on tolerants vastupidine tundlikkusele ravimi kasulike omaduste suhtes (Harris ja Aston-Jones, 2003; Aston-Jones ja Harris, 2004; Harris ja Gewirtz, 2004). Huvitaval kombel on leitud, et seksuaalne kogemus, millele järgneb 7-28 d suguühtluse periood, põhjustab psühhostimulantide tasu eest risttundlikkust (Pitchers et al., 2010a), mis sõltub paaritumist põhjustatud deltaFosB ekspressioonist ja dopamiini retseptori 1 aktiveerimisest NAc-s (Pitchers et al., 2013). Seega põhjustab seksuaalse tasu kogemus samaaegset opiaadi tasu taluvust ja psühhostimulantide tasu sensibiliseerimist, kuigi morfiini tasu taluvuse pikem suguabstineerimisperiood on veel testimata. Oleme veendunud, et need vastupidised mõjud narkootikumide tasule võivad olla vahendatud erinevate neuruplastilisuse vormide poolt mesolimbilise süsteemi erinevates piirkondades: VTA EOP toime ja dopamiini plastilisus vahendavad opiaadi tasu taluvust (praegune uuring), samas kui NAc deltaFosB ekspressioon kontrollib psühhostimulantide sensibiliseerimist (Pitchers et al., 2013). Mõlemad sündmused võivad kaasa aidata uimastite tarbimise suurenemisele (Ahmed ja Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker jt, 2003).

Molekulaarsed mehhanismid, mille abil EOP mõjutab VTA dopamiini neuroneid loodusliku tasu käitumise ajal, ei ole teada. IRS2-Akt-mTORC2 rada on korduva morfiini põhjustatud VTA vähenenud soma suuruse peamine vahendaja (Jaworski et al., 2005; Russo jt, 2007; Mazei-Robison jt, 2011). Korduvaid morfiini manustamise indutseeritud muutusi dopamiini neuronite suuruses VTA-s saab ära hoida ajusisese neurotroofse teguri (BDNF; Sklair-Tavron ja Nestler, 1995). BDNF aktiveerib selle tee TrkB signaalimise kaudu (Russo jt, 2007), retseptori kinaas, millel on kõrge afiinsus BDNF-i suhtes ja osa IRS2-Akt-\ tSerooogia ja Gall, 1993; Numan ja Seroogy, 1999) ja ekspresseeritud dopamiini ja GABA neuronite puhul VTA-s. IRS2-Akt rada erinevate komponentide allapoole reguleerimine, kasutades viirusvektori geeniülekande tehnoloogiat, jäljendab kroonilise opiaadi ekspositsiooni mõju. Peale selle saab opiaadi kokkupuute mõju päästa selle signalisatsiooniraja taastamisega (Russo jt, 2007) ja mTORC2i komponendi üleekspressioon takistab morfiini poolt indutseeritud VTA dopamiini soma vähenemist (Mazei-Robison jt, 2011). Seetõttu näitab varasem töö, milles uuriti krooniliste opiaatide toimet VTA dopamiini soma suurusele, et IRS2-Akt-mTOR raja morfiini poolt indutseeritud vähenemine on selle toime jaoks piisav ja vajalik (Mazei-Robison ja Nestler, 2012). Seega on ahvatlev spekuleerida, et seksuaalse kogemuse mõju VTA dopamiini neuroplastilisusele vahendab sarnaselt BDNF ja IRS2-Akt-mTORC2 rada.

Kokkuvõttes näitas käesolev uuring, et VTA neuroplastilisus on põhjustatud kogemusest, mis on loomulikult rahuldav, eriti korduva meessoost seksuaalse käitumise tõttu. Täpsemalt, EOP toimib VTA-s, et vähendada dopamiini soma suurust, mis on oletatavasti seotud suurenenud neuraalse erutatavusega ja vähem dopamiini väljundiga, mille tulemuseks on hüpodopamiinergiline süsteem, ning muudab mesolimbilise süsteemi, mis reageerib seksuaalse tasu ennustavaid vihjeid. Lisaks on VTA neuroplastilisus kriitilise tähtsusega motiveeriva motivatsiooni ja mälu eest, kuid mitte seksuaalse käitumise hedoonilise mõju eest. Lõpuks mõjutab loodusliku tasu käitumise põhjustatud VTA neuroplastilisus, millele järgneb lühike palgakõne kestus, opiaadi tasu ja võib seega mõjutada haavatavust narkomaania arengu suhtes.

Allmärkused

  • Saadud jaanuar 12, 2014.
  • Läbivaatamine sai mai 17, 2014.
  • Aktsepteeritud mai 20, 2014.

  • Seda uuringut toetasid Kanada Tervishoiuuuringute Instituudi toetused LMC-le ja Loodusteaduste ja inseneriuuringute nõukogule KKP-le

  • Autorid ei deklareeri konkureerivaid finantshuve.

  • Kirjavahetus peaks olema adresseeritud dr Lique M. Coolenile, Mississippi ülikooli meditsiinikeskusele, füsioloogia ja biofüüsika osakonnale, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [meiliga kaitstud]

viited

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Meesroti seksuaalne käitumine. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203 - 209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Üleminek mõõduka kuni ülemäärase ravimi tarbimisest: muutus hedoonilises kontrollpunktis. teadus 282: 298 - 300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Pikaajaline kokaiini enese manustamise punkti suurenemine pärast rottidel eskalatsiooni. Psühhofarmakoloogia 146: 303 - 312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Heroiini võtmise motivatsiooni püsiv suurenemine rottidel, kellel on esinenud ravimi eskalatsiooni. Neuropsychopharmacology 22: 413 - 421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Neurobioloogilised tõendid hedonilise allostaasi kohta, mis on seotud kokaiinitarbimise suurenemisega. Nat Neurosci 5: 625 - 626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Kokaiini eneseanalüüsi esilekutsumine ei sõltu muutunud kokaiinist põhjustatud tuumade dumbamiini tasemest. J Neurochem 86: 102 - 113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Aju substraadid pikendatud ravimi võtmise ajal suurenenud ravimite otsimiseks. Neurofarmakoloogia 47: 167 - 179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Coolen LM

    (2004) Seksuaalne käitumine ja sugudega seotud keskkonnakaardid aktiveerivad isasrottidel mesolimbilise süsteemi. Neuropsychopharmacology 29: 718 - 730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Coolen LM

    (2006) Efferentide potentsiaalne panus mediaalse prefrontaalsest ajukoorest kuni neuraalse aktiveerumiseni, mis järgneb seksuaalsele käitumisele isasrottidel. Neuroscience 137: 1259 - 1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Neurofilamentvalgud ja mesolimbiline dopamiinsüsteem: kroonilise morfiini ja kroonilise kokaiini ühine regulatsioon roti ventral tegmentalis piirkonnas. J Neurosci 12: 2165 - 2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Milline on dopamiini roll tasu eest: hedooniline mõju, tasu õppimine või stiimulid? Brain Res Brain Res Rev 28: 309 - 369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Hüvitise komponentide eristamine: „meeldiv“, „soovimine” ja õppimine. Curr Opin Pharmacol 9: 65 - 73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Kuld M

    (2012) Sugu, ravimid ja rock 'n' roll: hüpoteesimine tavalisele mesolimbilisele aktiveerimisele kui tasu geeni polümorfismide funktsioon. J Psühhoaktiivsed ravimid 44: 38 - 55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Perifeersed elektrilised stimulatsioonid muutsid kroonilise morfiiniga ravitud rottidel rakkude suuruse vähenemise ja BDNF-i taseme suurenemise ventraalses tegmentaalses piirkonnas. Brain Res 1182: 90 - 98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Coolen LM

    (2007) POMC neuronite aktiveerimine üldise erutumise ajal, kuid mitte seksuaalne käitumine isastel rottidel. Behav Neurosci 121: 1012 - 1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Dünaamilised muutused tuuma accumbensis dopamiini väljavoolu ajal Coolidge'i toimel isastel rottidel. J Neurosci 17: 4849 - 4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA
    8. Clinton SM
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Dopamiini valikuline roll stiimul-tasu õppimisel. loodus 469: 53 - 57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Coolen LM

    (2010a) Lõbustusviiside segamine: uimastite mõju kohta seksuaalkäitumisele inimeste ja loomade mudelites. Horm Behav 58: 149 - 162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. Tark RA,
    4. Lehman MN,
    5. Coolen LM

    (2010b) Metamfetamiin toimib neuronite subpopulatsioonidel, mis reguleerivad meessoost rottide seksuaalset käitumist. Neuroscience 166: 771 - 784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Ägeda morfiinist väljumise ajal tekkinud üllatus on opiaadi ärajätmise ja ärevuse mudel. Psühhofarmakoloogia 171: 140 - 147.

  21. ↵
    1. Harris GC
    2. Aston-Jones G

    (2003) Muutunud motivatsioon ja õpetus opiaadi ärajätmise järel: tõendid tasu töötlemise pikaajalise düsreguleerimise kohta. Neuropsychopharmacology 28: 865 - 871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. Madal MJ

    (2002) Selektiivne tasu puudus hiirtel, kellel puudub beeta-endorfiin ja enkefaliin. J Neurosci 22: 8251 - 8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Bocarsly ME,
    4. Rada P

    (2009) Looduslik sõltuvus: käitumis- ja ahelamudel, mis põhineb suhkru sõltuvusel rottidel. J Addict Med 3: 33 - 41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Sõltuvuse neuroloogilised mehhanismid: tasu-alase õppe ja mälu roll. Annu Rev Neurosci 29: 565 - 598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) retseptori blokaad eesmise ventraalse tegmentaalses piirkonnas suurendab dopamiini ekstratsellulaarset taset rottide tuumas. J Neurochem 69: 137 - 143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S
    3. Seeburgi DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Dendriitide arboriseerimise kontroll fosfoinositiid-3'-kinaasi-Akt-imetajate sihtmärgiga rapamütsiini rajal. J Neurosci 25: 11300 - 11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW
    2. Põhja-RA

    (1992) Opioidid ergutavad dopamiini neuroneid kohalike interneuronide hüperpolarisatsiooniga. J Neurosci 12: 483 - 488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Somatodendriitilise dopamiini vabanemise regulatsioon ventralises tegmentaalses piirkonnas opioidide ja GABA abil: in vivo mikrodialüüsi uuring. J Neurosci 12: 2623 - 2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Tasulise neurotsirkulatsiooni plastsus ja narkomaania “pimedas pooles”. Nat Neurosci 8: 1442 - 1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Parem paigalduskandja immunofluorestsentsmikroskoopia jaoks. Am J Clin Pathol 69: 647 - 648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT

    (2001) Naloksoon nõrgestab rottidel töötava ratta poolt tingitud konditsioneeritud kohtade eelistust. Physiol Behav 72: 355 - 358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Grant VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Eelnev kogemus rattajooksust põhjustab morfiini rahuldava toime ristkindluse. Pharmacol Biochem Behav 72: 101 - 105.

  33. ↵
    1. Matthews RT
    2. Saksa DC

    (1984) Elektrofüsioloogilised tõendid rottide ventraalse tegmentaala dopamiini neuronite ergutamiseks morfiini abil. Neuroscience 11: 617 - 625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Koo JW
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. JER JER,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) mTOR signaalimise ja neuronaalse aktiivsuse roll morfiini poolt indutseeritud kohandustes ventral tegmental dopamiini neuronites. Neuron 72: 977 - 990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS
    2. Nestler EJ

    (2012) Opiaadi poolt indutseeritud ventraalse tegmentaala ja lookus coeruleuse katehhoolamiini neuronite molekulaarne ja rakuline plastilisus. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Naloksoon katkestab isasrottide ekspressiooni, kuid ei omandanud konditsioneeritud koha eelistuse reaktsiooni õrnale naisele. Psühhofarmakoloogia 101: 118 - 125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Seksuaalne kogemus naiste närilistel: rakulised mehhanismid ja funktsionaalsed tagajärjed. Brain Res 1126: 56 - 65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Naloksoon inhibeerib isastes rottides paaritumist ja konditsioneeritud kohtade eelistamist isastel rottidel varsti pärast kastreerimist. Pharmacol Biochem Behav 26: 781 - 789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Seksuaalse käitumise hõlbustamine isastel rottidel, kes on seotud opiaatide VTA-sisene süstimine. Pharmacol Biochem Behav 35: 643 - 650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) MAPK signaali spetsiifilisus: õige koht õigel ajal. Trends Biochem Sci 31: 268 - 275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Narkomaania transkriptsioonimehhanismid. Clin Psychopharmacol Neurosci 10: 136 - 143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Roti aju stereotaksilistes koordinaatides (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Coolen LM

    (2010a) Neuroplastsus mesolimbisüsteemis, mis on indutseeritud looduslikust tasust ja sellest tulenevast tasustamise abstinensist. Biol Psychiatry 67: 872 - 879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2010b) DeltaFosB tuuma accumbensis on oluline seksuaalse tasu tugevdamise seisukohalt. Geenid Brain Behav 9: 831 - 840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Coolen LM

    (2012) Looduslik tasu kogemus muudab AMPA ja NMDA retseptori jaotumist ja funktsiooni tuuma accumbensis. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Coolen LM

    (2013) Looduslikud ja narkootikumide hüved toimivad ühiste närviplastilisuse mehhanismide puhul, kui DeltaFosB on oluline vahendaja. J Neurosci 33: 3434 - 3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK ja p38 MAPK-aktiveeritud proteiinkinaasid: erinevate bioloogiliste funktsioonidega proteiinkinaaside perekond. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320 - 344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanose CA
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Rental NE,
    9. Wiley MD
    10. Self DW
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) IRS2-Akt rada keskmise aju dopamiini neuronites reguleerib käitumuslikke ja rakulisi vastuseid opiaatidele. Nat Neurosci 10: 93 - 99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Dopamiini neuronite mitu funktsiooni. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. Serooogia KB,
    2. Gall CM

    (1993) Neurotrofiinide ekspressioon keskmise aju dopamiinergiliste neuronite poolt. Exp Neurol 124: 119 - 128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Opioidide motiveerivad omadused: tõendid selle kohta, et delta-retseptorite aktiveerimine vahendab tugevdusprotsesse. Brain Res 436: 234 - 239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Nestler EJ

    (1995) Morfiini ja neurotrofiinide, NT-3i, NT-4i ja BDNF-i vastandlikud toimed lookuses coeruleus neuronitele in vitro. Brain Res 702: 117 - 125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Krooniline morfiin indutseerib nähtavaid muutusi mesolimbiliste dopamiini neuronite morfoloogias. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202 - 11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Morfiini ärajätmise indutseeritud kõrvalekalded VTA-s: konfokaalne laserskaneerimismikroskoopia. Eur J Neurosci 17: 605 - 612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Aju kaardid: roti aju struktuur (Academic, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Coolen LM

    (2009) Seksuaalne tasu isastel rottidel: seksuaalkogemuse mõju ejakulatsiooni ja sisejulgeolekuga seotud konditsioneeritud kohtade eelistustele. Horm Behav 55: 93 - 97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Tasu mõõtmine konditsioneeritud kohapreferentsi (CPP) paradigmaga: viimase kümnendi uuendus. Addict Biol 12: 227 - 462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Seksuaalne motivatsioon: endogeensete opioidide kaasamine ventral tegmentalisse. Brain Res 729: 20 - 28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Meessoost seksuaalse käitumise reguleerimine: aju opioidide ja dopamiini kaasamine. Brain Res Brain Res Rev 21: 162 - 184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Krooniline opioidide ekspositsioon põhjustab rottidel suurenenud heroiinisisalduse. Pharmacol Biochem Behav 75: 349 - 354.

  • ↵
    1. Young KA,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Paari sidumise neurobioloogia: arusaamad sotsiaalselt monogamaalsest närilisest. Eesmine Neuroendokrinool 32: 53 - 69.

    •