Looduslik tasustamiskogemus muudab AMPA ja NMDA retseptori jaotumist ja funktsiooni tuuma accumbensis (2012)

PLoS One. 2012, 7 (4): e34700. doi: 10.1371 / journal.pone.0034700. Epub 2012 Apr 18.

Kannid KK, Schmid S, Di Sebastiano AR, Wang X, Laviolette SR, Lehman MN, Coolen LM.

allikas

Anatoomia ja rakubioloogia osakonnad, Schulichi meditsiini- ja hambaarstikool, Lääne-Ontario ülikool, London, Ontario, Kanada.

Abstraktne

Loomulik tasu ja kuritarvitamise ravimid lähenevad mesolimbilisele süsteemile, mis vahendab motivatsiooni ja tasu käitumist. Narkootikumid kutsuvad selles süsteemis esile neuraalseid kohanemisi, sealhulgas transkriptsioonilisi, morfoloogilisi ja sünaptilisi muutusi, mis aitavad kaasa uimastitega seotud mälestuste ja sõltuvuse kujunemisele ja väljendumisele. Varem on teatatud, et isaste rottide seksuaalne kogemus, loomulik tasukäitumine, kutsub esile sarnase neuroplastilisuse mesolimbilises süsteemis ning mõjutab loomulikku tasu ja ravimitega seotud käitumist.

Käesolevas uuringus tehti kindlaks, kas seksuaalne kogemus põhjustab pikaajalisi muutusi paaritumises või ionotroopse glutamaadi retseptori kaubitsemises või funktsioonis nucleus accumbensis (NAc) pärast kolme erinevat tasu abstinentsiperioodi: 3 päev, 1 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi..

Isased Sprague Dawley rotid paaritusid 5 järjestikust päeva (seksuaalne kogemus) või jäid kontrollina toimimiseks seksuaalselt naiivseks. Seksuaalselt kogenud isased näitasid igal ajahetkel paaritumise alustamise ja sooritamise hõlbustamist. Järgmiseks intratsellulaarne ja membraanipinna ekspressioon N-metüül-D-aspartaat (NMDA: NR1 subühik) Ja α-amino-3-hüdroksü-5-metüülisoksasool-4-propionaadi (AMPA: GluA1, GluA2 subühikud) retseptorid NAc-s määrati bis(sulfosuktsiinimidüül)suberaadi (BS(3)) valgu ristsidumise testiga, millele järgnes Western blot analüüs.

NR1 ekspressioon suurenes 1-päevase abstinentsi korral nii pinnal kui ka rakusiseselt, kuid vähenes pinnal 1-nädalase abstinentsi korral. GluA2 suurenes intratsellulaarselt 1 nädala pärast ja suurenes pinnal pärast 1-kuulist abstinentsi. Lõpuks määrati terve raku plaastriklambri elektrofüsioloogilised salvestused sünaptiliste voolude AMPA/NMDA suhe NAc kesta neuronites pärast kortikaalsete aferentide stimuleerimist seksuaalselt kogenud meestel pärast kõiki tasulise karskuse perioode.

Need andmed näitavad koos, et seksuaalne kogemus põhjustab pikaajaline muutus glutamaadi retseptori ekspressioonis ja toimimises NAc-s. Kuigi see sugupoolte kogemus põhjustatud neuroplastilisus ei ole identne, on see sarnane psühhostimulantide sarnasusele, mis viitab ühistele mehhanismidele loodusliku ja narkootikumide tasustamise tugevdamiseks.

Sissejuhatus

Mesolimbiline süsteem koosneb omavahel ühendatud ajupiirkondadest, sealhulgas ventraalne tegmentaalne piirkond, mediaalne prefrontaalne ajukoor (mPFC) ja nucleus accumbens (NAc) [1]. Need ajupiirkonnad koos vahendavad loomulikult rahuldust pakkuvat käitumist, sealhulgas toitmist [2], [3], [4], [5], joomine [6], ema käitumine [7], sotsiaalne side [8], [9] ja seksuaalkäituminer [10], [11], [12], [13], [14]. Käitumisuuringud on näidanud, et isaste rottide seksuaalkäitumine on rahuldust pakkuv ja tugevdav, kuna isasrotid eelistavad kopulatsiooniks tingimusi. [15], [16], [17], arendada T-labürintides kiiremaid jooksukiirusi [18], sirge käega lennurada [19] või tõkketõusu [20]ja täitma operatiivseid ülesandeid, et pääseda ligi seksuaalselt vastuvõtlikele emastele [21], [22]. Enamgi veel, seksuaalne kogemus soodustab järgnevat seksuaalkäitumist, sealhulgas suurendab seksuaalset motivatsiooni ja sooritust [23]ja mõjutab paaritumise tingimusliku koha-eelistuse väljendust [15]. Need käitumuslikud muutused viitavad loomuliku tasuga seotud õppimise ja mälu esinemisele, mida oletatakse olevat vahendatud paaritumiskäitumise kogemusest tingitud muutustest mesolimbilises süsteemis. [11].

Selle hüpoteesi toetuseks oleme varem näidanud, et seksuaalne kogemus põhjustas deltafosB ülesreguleerimise NAc-s, mis omakorda oli kriitilise tähtsusega seksuaalkogemuse järgse seksuaalkäitumise algatamise ja sooritamise hõlbustamiseks. [23].

Lisaks põhjustas seksuaalne kogemus dendriitide arboriseerumise ja selgroogude arvu suurenemist NAc-s [11]. Sarnaseid muutusi transkriptsioonis ja morfoloogias kutsuvad esile psühhostimulandid [24], [25], [26]. Seksuaalne kogemus on näidanud, et see muudab tundlikkust kuritarvitavate ravimite suhtes, sealhulgas sensibiliseerimist psühhostimulantidest põhjustatud lokomotoorse aktiivsuse suhtes (ristsensibiliseerimine) ja psühhostimulantide suurenenud tasu. [10], [11], [27]. On tõestatud, et ärajätu- või abstinentsiperiood pärast ravimiga kokkupuudet on kriitilise tähtsusega, et suurendada iha ravimi järele, mida nimetatakse iha inkubatsiooniks. [28]. Samuti on seksuaalkogemusele järgnev paaritumisest loobumise periood kriitiline seksuaalkogemusest tingitud psühhostimulandi tasu suurendamiseks ning dendriitide hargnemise ja selgroogude suurenemiseks NAc-s. [11]. Seetõttu põhjustavad seksuaalsed kogemused ja sellele järgnev sellest loomulikust tasust hoidumine mesolimbilises süsteemis pikaajalisi muutusi, mis on sarnased psühhostimulantide poolt esile kutsutud muutustega ja mõjutavad käitumuslikke reaktsioone nii loomulikule kui ka uimastitasule.

On teatatud, et psühhostimulandid kutsuvad esile arvukalt täiendavaid muutusi NAc-s, millest mitmed sõltuvad ravimist loobumise perioodist. Need muutused hõlmavad muutusi glutamaadi retseptori kaubitsemises ja funktsioonis [29], [30]. Korduv kokaiin järgneb pikk abstinentsiperiood (3–7 nädalat), põhjustab tõusu α-amino-3-hüdroksü-5-metüülisoksasool-4-propionaadi (AMPA) retseptori alaühikute ja N-metüül-D-aspartaadi ekspressioonis (NMDA) retseptori subühikud, samas kui pärast a lühike karskusperiood (1 päev).

Veelgi enam, AMPA ja NMDA retseptorite erinevaid alaühikuid mõjutab ravimiga kokkupuude ja sellele järgnevad abstinentsiperioodid erinevalt, kuna GluA2-puudulike AMPAR-ide pinnaekspressioon on pärast pikaajalist abstinentsiperioodi (5–7 nädalat) ülesreguleeritud. [31], [32]. PFC annab NAc-le peamise glutamatergilise sisendi [33] ja elektrofüsioloogilised uuringud on näidanud, et korduv kokaiin põhjustab AMPA/NMDA suhte muutusi PFC-le reageerivates NAc-kesta neuronites ja muutusi NAc-neuronite sisemises erutuvuses, mis võivad sõltuda ravimist loobumise perioodist ja NAc alampiirkonnast. [34], [35], [36], [37], [38], [39], [40], [41]. Selline ravimite poolt indutseeritud neuraalne plastilisus aitab kaasa muutustele psühhostimulantide käitumuslikus sensibiliseerimises [42], [43], [44], [45] ja uimastite otsimine [31], [46], [47].

Praegu pole teada, kas glutamaadi retseptori kaubitsemise ja funktsiooni sarnased kohandused tekivad pärast loomulikku tasu ja sellele järgnevat loomulikust tasust hoidumist. Seetõttu oli käesoleva uuringu eesmärk testida hüpoteesi, et seksuaalne kogemus põhjustab muutusi AMPA- või NMDA-retseptorite kaubitsemises NAc-s ja muutusi PFC-le reageerivate NAc-kesta neuronite sünaptilises tugevuses. Lisaks määrati need meetmed kindlaks kolmel erineval ajal pärast viimast paaritusseanssi, et uurida loomulikust tasust hoidumise perioodi (3 nädal või 1 kuu pärast lõplikku paaritumist) mõju NAc plastilisusele võrreldes karskuseta perioodiga (1 päev pärast lõplikku paaritumist).

Tulemused

1. katse: seksi hõlbustamine

Katse 1 eesmärk oli määrata ajaline kulg seksuaalse käitumise hõlbustamiseks pärast seksuaalset kogemust. Varem on seksuaalkäitumise hõlbustamist tuvastatud kuni 1 nädal pärast viimast paaritusseanssi [23], kuid seda ei ole varem uuritud, kas seksikogemusest tingitud seksuaalkäitumise hõlbustamine säilib ka pärast pikaajalist karskusperioodi. Siin testiti kahte isaste rottide rühma seksuaalkäitumise hõlbustamise pikaajalise väljenduse suhtes, kas 1 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi. Esiteks näitasid mõlemad rühmad seksuaalkäitumise hõlbustamist viie igapäevase paaritusseansi ajal, mida näitasid oluliselt lühemad latentsusajad. (Joonis 1A; 1 nädal, lk=0.028; 1 kuu, lk=0.019), tutvustus (Joonis 1B; 1 kuu, lk=0.016; trend 1 nädal, lk=0.078) ja ejakulatsioon (Joonis 1C; 1 nädal, lk=0.016; 1 kuu, lk=0.008) 5. päeval võrreldes seksuaalkogemuse 1. päevaga. Lisaks seksuaalkäitumise hõlbustamine säilis nii 1 nädal kui ka 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi, kuna paaritumisparameetrite latentsusajad olid testipäeval (1 nädal või 1 kuu pärast 5. seksuaalkogemuse päeva) lühemad kui 1. paarituspäeval (Joonis 1A: paigaldamise latentsusaeg, 1 kuu, lk=0.016; Joonis 1B: sissejuhatuse latentsus, 1 kuu, lk=0.046; Joonis 1C: ejakulatsiooni latentsus, 1 nädal, lk=0.016; 1 kuu, lk=0.008) ning 5. paarituspäeva ja testimispäeva vahel ei esinenud olulisi erinevusi mis tahes käitumisparameetrite puhul (välja arvatud monteerimislatentsus 1 kuu pärast; p=0.016). Seega säilis kogemustest tingitud seksuaalkäitumise hõlbustamine 1-kuulise paaritumisest loobumise perioodi jooksul.

Soodustatud seksuaalkäitumise pikaajaline säilitamine.

Katse 2: ionotroopse glutamaadi retseptori subühiku ümberjaotumine/ekspressioon

Eksperimendi 2 eesmärk oli määrata ionotroopse glutamaadi retseptori subühikute ekspressioon seksuaalselt kogenud ja naiivsetel isasloomadel pärast erinevaid paaritumiskarskusperioode. AMPAR ja NMDAR subühiku pind ja rakusisesed kogumid kvantifitseeriti, kasutades membraani mitteläbilaskvat ristsiduvat reagenti (BS³), mis modifitseeris selektiivselt pinnal ekspresseeritud valku, võimaldades SDS-PAGE ja Western Blot analüüsi abil eristada modifitseerimata intratsellulaarsetest valkudest. Tüüpilised blotid, mis illustreerivad pinda (kõrge MW, >250 kDa) ja rakusiseseid ribasid, on esitatud Joonis 2M.

Glutamaadi retseptori subühiku ekspressioon ja jaotumine NAc-s.

Üks päev pärast seksuaalset kogemust suurenes NR1 subühiku ekspressioon pinnases (S), rakusisenes (I) ja kogusummas (S+I) oluliselt (S, Joonis 2A, lk=0.025; mina, Joonis 2D, lk=0.035; S+I, Joonis 2J, lk=0.023) seksuaalselt kogenud loomadel võrreldes seksuaalselt naiivsete kontrollidega (Joonis 2N). Nädal pärast viimast paaritumist vähenes oluliselt NR1 pinna ja intratsellulaarse suhte ekspressioon (S/I suhe; Joonis 2G; lk=0.024) ilma oluliste muutusteta pinna- või intratsellulaarses ekspressioonis, võrreldes seksuaalselt naiivsete loomadega. GluA2 ekspressioon suurenes märkimisväärselt üks nädal pärast viimast paaritumist rakusiseses ja koguekspressioonis, ilma pinnaekspressiooni muutusteta (I, Joonis 2E, lk=0.026; S+I, Joonis 2K, lk=0.014) seksuaalselt kogenud loomadel võrreldes naiivsete loomadega (Joonis 2O). Arvestades, et üks kuu pärast viimast paaritumist suurenes GluA2 S/I suhe märkimisväärselt (Joonis 2H; lk=0.046), millega kaasneb statistiline trend pinnaekspressiooni suurenemise suunas (Joonis 2B; lk=0.055) seksuaalselt kogenud loomadel võrreldes naiivsete kontrollidega. GluA1 muutusi ei tuvastatud 1 päeva või 1 nädala jooksul pärast viimast paaritumist. 1 kuu pärast näis GluA1 pinna ja S/I suhte ekspressioon olevat suurenenud seksuaalselt kogenud loomadel võrreldes naiivsete kontrollidega, ehkki tuvastati ainult statistilised suundumused (S, Joonis 2C, lk=0.098; S/I, Joonis 2I, lk=0.083). Seega kokkuvõttes tuvastati algselt 1-päevase abstinentsi korral NR1 suurenenud ekspressioon, millele järgnes GluA2 rakusisene ekspressioon pärast 1-nädalast abstinentsi ning GluA2 ja GluA1 suurenenud ekspressioon pinnal pärast 1-kuulist abstinentsi (viimane ainult statistilise trendina).

3. katse: elektrofüsioloogia

Katse 3 eesmärk oli kindlaks teha, kas seksuaalne kogemus muudab sünaptilist tugevust PFC-le reageerivates NAc kesta neuronites. Sünaptilised voolud registreeriti seksuaalselt kogenud ja naiivsete meeste NAc-kesta keskmistes ogalistes neuronites pärast eeldatavasti PFC-st pärinevate kiudude stimuleerimist. AMPA/NMDA suhe vähenes seksuaalselt kogenud loomadel 1 päevaga oluliselt (lk=0.005), 1 nädal (lk=0.016) ja 1 kuu (lk=0.005) pärast viimast paaritusseanssi võrreldes seksuaalselt naiivse kontrollrühmaga (Joonis 3A, B, C). Et teha kindlaks, kas presünaptilise saatja vabanemise tõenäosus on muutunud, uuriti paaris-impulsi suhet. Saatja vabanemise hõlbustamise ulatus, mis tekkis vastusena paaris-impulssstimulatsioonile, ei erinenud seksuaalselt kogenud ja naiivsete loomade vahel ühelgi ajaintervallil (Joonis 3D).

AMPA/NMDA suhe seksuaalselt kogenud ja naiivsetele isastele 1 päev, 1 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritus- või käitlemisseanssi.

Arutelu

Käesolev uuring näitas, et seksuaalne kogemus põhjustab muutusi ionotroopse glutamaadi retseptori jaotuses ja funktsioonis isaste rottide NAc-s ning et mõned neist muutustest varieerusid sõltuvalt seksuaalkäitumisest hoidumise perioodi pikkusest. Võrreldes seksuaalselt naiivsete meestega, näitasid seksuaalselt kogenud isased lühiajalist NR1 subühiku ekspressiooni suurenemist nii pinna- kui ka intratsellulaarsete retseptorite kogumite suurenemise tõttu. GluA2 ekspressioon suurenes intratsellulaarselt ja pinnal pärast 1-nädalast ja 1-kuulist tasulist abstinentsi. Lõpuks ei muutunud GluA1 ekspressioon kunagi oluliselt. Lisaks oli seksuaalselt kogenud loomadel kohene ja pikaajaline AMPA/NMDA suhe vähenenud PFC-le reageerivatest NAc kesta neuronitest võrreldes naiivsete kontrollidega. Meie tulemused näitavad, et glutamaadi retseptori kaubitsemine sõltub seksuaalkäitumisest hoidumise perioodi pikkusest, samas kui sünaptilise tugevuse muutused sünapsides, mille moodustavad prefrontaalsed kortikaalsed aferendid NAc kestale, ei sõltu. Need peamised leiud on sarnased korduva kokaiini järgsete teadetega AMPAR subühiku pinnaekspressiooni suurenemise osas pärast pikka ravimist loobumist ja AMPA / NMDA suhte kohest vähenemist, kuid erinevad lühiajalise NMDAR subühiku ekspressiooni ja AMPA / NMDA suhte püsiva vähenemise osas.

Seksuaalne käitumine on väga rahuldust pakkuv ja tugevdav. Seega, kui isane rott omandab seksuaalkogemust, ilmutab ta suurenenud seksuaalset motivatsiooni ja jõudlust, mida näitavad lühemad latentsusajad paaritumise alustamiseks ja ejakulatsiooni kuvamiseks ning suurenenud kopulatsioonitõhusus. [10], [23]. Siin kinnitati, et see seksuaalkäitumise hõlbustamine ilmnes 1 nädal pärast paaritumist ja tehti kindlaks, et hõlbustatud seksuaalkäitumine säilis kuni 1-kuulise paaritumisest loobumise ajal. Seksikogemusest põhjustatud seksuaalkäitumise hõlbustamise ajaline profiil vastab meie eelmisele uuringule, mis näitas risttundlikkust amfetamiini lokomotoorset indutseerivat toimet, kui seda testiti samadel paaritumiskarskusperioodidel. [11]. Varasemad uuringud on seostanud NAc-d hõlbustatud seksuaalkäitumise säilitamise vahendajana. Nii NAc tuuma- kui ka kesta neuronid aktiveeritakse paaritumise või paaritumisega seotud näpunäidete teel [48]ning seksuaalse kogemuse tulemusena suureneb dendriitide hargnemine ja ogad NAc südamikus ja kestas nädal pärast paaritumist [11]. Lisaks nõrgendab transkriptsioonifaktori deltaFosB aktiivsuse vähendamine NAc-s viirusvektori poolt vahendatud geeniülekande kaudu kogemustest tingitud seksuaalkäitumise hõlbustamist. [23], [49]. TNeed leiud viitavad sellele, et NAc on spetsiifiliselt seotud seksuaalkäitumise tugevdamisega ja on potentsiaalselt kriitiline seksuaalkogemuse ristsensibiliseerivate ravimite mõjude jaoks. [23].

Käesolev uuring näitas, et seksuaalne kogemus põhjustas muutusi AMPAR-i sünteesis ja/või inimkaubanduses, mis sõltusid seksist loobumise perioodi pikkusest. Esiteks ilmnes GluA2 ekspressiooni intratsellulaarse ekspressiooni suurenemine 1 nädala pärast, mis võib viidata suurenenud GluA2 retseptori sünteesile ja/või endotsütoosile. Seejärel tuvastati 2 kuu pärast viimast paaritumist suurenenud GluA1 pinna / rakusisene suhe (peamiselt pinna suurenemise tõttu), mis viitab retseptorite ümberjaotumisele raku pinnale. Kokaiiniga kokkupuutumise järgsed muutused AMPAR-kaubanduses sõltusid ka uimastitest loobumise perioodi pikkusest [50]. Üldiselt tõusevad rakupinna ja sünaptosomaalse GluA1 ja GluA2/3 tasemed pärast nädalat kokaiinist hoidumist ja püsivad kõrgel tasemel kuni 3 nädalat pärast viimast kokaiinisüsti. [51], [52], [53], [54], [55]. Pärast pikemat ravimist abstinentsi perioodi (5 nädalat) püsis GluA1 pinna ekspressioon kõrgendatud ja GluA2 pinna/rakusisese suhe vähenes veidi ning seetõttu reguleeriti GluA2-puuduvaid AMPAR-e üles. [31], [56]. GluA2-puudulike retseptorite suurenenud ekspressioon pinnal tuvastati pärast pikaajalist loobumist (5–7 nädalat) pika juurdepääsuga kokaiini isemanustamisest, kuid mitte pärast pikaajalist loobumist mittekontingentsest kokaiinist. [32]. Veelgi enam, GluA2-puuduliku AMPAR-i blokaad takistas ravimite otsimist [31], [57]. AMPA retseptoritega kaubitsemise muutused pärast seksuaalset kogemust ja abstinentsust erinevad veidi kokaiini põhjustatud muutustest. Seoses suurenenud GluA1 pinnaekspressiooniga näitavad praegused andmed GluA1 retseptorite mõõdukat suurenemist membraani pinnal, mis ei saavutanud statistilist olulisust 1 kuu pärast seksikogemust, ning viitab seega sellele, et GluA1 pinna ekspressioon võib nõuda pikemat abstinentsiperioodi edasiseks ülesreguleerimiseks, sarnaselt kokaiini põhjustatud muutustele pärast 5-nädalast abstinentsi. [31]. Lisaks erinevad praegused andmed GluA2 osas, mis vähenes veidi pärast 5 või enam nädalat ilma kokaiinita, samas kui seksuaalkogemus ja 1 kuu abstinents suurendasid GluA2 pinna ekspressiooni. Me oletame, et AMPA retseptori ülesreguleerimine NAc-s võib olla kriitiline seksuaalkogemuse pikaajalise mõju jaoks järgnevale tasu käitumisele ja suurenenud amfetamiini tasule [11] pärast käesolevas uuringus testitud pikaajalisi karskusperioode. Seevastu muutused AMPA retseptori ekspressioonis või inimkaubanduses ei ole seksuaalse kogemuse lühiajalise mõju jaoks tasu käitumisele kriitilised. Selle toetuseks on arvukad aruanded näidanud, et muutunud AMPAR-i ülekanne ei ole vajalik ravimite poolt põhjustatud käitumusliku sensibiliseerimiseks psühhostimulantide suhtes (ülevaatamiseks [30]). Sensibiliseerimist ja ristsensibiliseerimist on täheldatud pärast 1-päevast tasulist karskust ilma AMPAR-i ülesreguleerimise muutusteta [11], [53]. Lisaks on näidatud käitumuslikku sensibiliseerimist korduval kokkupuutel psühhostimulandi amfetamiiniga, mida ei ole seostatud AMPAR-i ülekande muutustega. [50], [53], [58].

NMDAR-ide rolli on käitumise sensibiliseerimise ja retseptoritega kaubitsemise osas palju vähem uuritud kui AMPAR-ide rolli. Mitteselektiivne NMDAR antagonist (MK-801) takistas kokaiini või amfetamiiniga lokomotoorse sensibiliseerimise teket, kuid ei suutnud blokeerida selle sensibiliseerimise ekspressiooni [59], [60]. NMDAR-i rolli seksuaalkäitumises on minimaalselt uuritud MK-801 süsteemse või intramediaalse preoptilise piirkonna manustamise kaudu, mis kahjustas naiivsetel ja kogenud isasrottidel seksuaalkäitumist. [61], [62], [63]. NMDAR vahendab ka muid looduslikke hüvesid, kuna NMDAR antagonistid vähendasid paavianide toidutarbimist [64] ja suurenenud toiduisu rottidel [65]. NMDAR ekspressiooni NAc-s muudab kokaiini ekspositsioon ja pikemad (3 nädalat), kuid mitte lühikesed (1 päev) abstinentsiperioodid korduvast kokaiinist suurendasid NMDAR subühikute (NR1, NR2A, NR2B) ekspressiooni. [55], [60]. Praegused tulemused näitavad, et seksuaalne kogemus põhjustas NR1 koguekspressiooni suurenemise 1 päeva pärast nii pinna- kui ka intratsellulaarsete retseptorite kogumite suurenenud taseme tõttu, lisaks vähenenud pinna / intratsellulaarne suhe pärast 1-nädalast abstinentsiperioodi. Seega oletame, et NMDAR-i ülekande esialgne suurenemine võib olla kriitiline seksuaalkogemuse lühiajalise mõju jaoks järgnevale tasu käitumisele.

Veelgi enam, NR1 subühiku lühiajaline suurenemine pärast seksuaalset kogemust võib viidata seksikogemusest põhjustatud vaikse sünapsi moodustumisele. Huang et al [66] näitas, et korduv kokaiin tekitas NAc kestas vaikseid sünapse, milles oli võtmetähtsusega uue NMDAR-i sünaptiline värbamine. Vaiksed glutamatergilised sünapsid väljendavad funktsionaalseid NMDAR-vahendatud voolusid AMPAR-i vahendatud voolude puudumisel [67], [68], [69]. On näidatud, et varasem kokkupuude kokaiiniga võib tekitada vaikseid sünapse kogu ajus ja et need äsja loodud sünapsid on substraadiks järgnevateks kogemusteks. [66], [70]. NMDAR koosnevad vähemalt ühest NR1 subühikust kombinatsioonis ühe või mitme NR2 subühikuga (A–D). NR1 on vajalik funktsionaalsete kanalite moodustamiseks; seega võivad muutused NR1 ekspressioonis anda indeksi funktsionaalsete NMDA retseptorite arvu muutustele. Korduv kokaiin juhib NR1 ja NR2B-d sisaldavate NMDAR-ide sisestamist ja tekitab NAc kestas vaikseid sünapse. Need NR2B-d sisaldavad vaiksed sünapsid inhibeeriti kokaiini manustamise ajal, mis nõrgendas järgnevat lokomotoorset sensibiliseerimist kokaiiniga [71]. Vaiksete sünapside arv vähenes pärast mitut päeva kestnud kokaiinist abstinentsi, samas kui lokomotoorne sensibiliseerimine püsis, mis viitab sellele, et enneaegsed sünapsid võivad osaleda uute plastiliste ahelate moodustumisel, mida saab muuta (potentsiaalselt premeeritud abstinentsi abil), et neid püsivaid käitumisi vahendada. Seega oletame, et NR1 koguekspressiooni ülesreguleerimine vahetult pärast seksuaalset kogemust võib olla tingitud NMDAR-i arvu suurenemisest äsja moodustunud vaiksetes sünapsides. Lisaks võib seksuaalkogemus, millele järgneb pikaajaline abstinents, põhjustada vaiksete sünapside vähenemist, mis selgitab nii NR1 pinna/rakusisese suhte vähenemist kui ka AMPAR-i subühikute suurenemist pikemate abstinentsiperioodidega, kuna sünapsid on vaigistamata.

Praegused leiud, et seksuaalsed kogemused ja tasulised abstinentsiperioodid põhjustasid muutusi glutamaadi retseptorite kaubitsemises ja ekspressioonis, viitasid sünaptilise tugevuse muutustele NAc-i ergastavate sünapside korral. Seetõttu elektrofüsioloogia protseduur, mis põhineb Thomase ja kaastöötajate varasemal uuringul [72] kasutati glutamaadi retseptori funktsiooni uurimiseks NAc kesta neuronites pärast samu abstinentsiperioode, mille tulemuseks on sensibiliseeritud sugu ja ravimikäitumine ning glutamaadi retseptori ümberjaotumine. Sarnaselt varasematele uuringutele pärast kokaiiniga kokkupuudet määrati plastilisus NAc kesta sünapsides, mis reageerisid PFC sisendile. PFC on väljakujunenud, et mängida võtmerolli kompulsiivses käitumises ja uimastite kuritarvitamises [73], [74]. Samuti on PFC kriitiline kompulsiivse seksuaalkäitumise arendamiseks või väljendamiseks, kuna PFC kahjustused põhjustavad isastel rottidel seksuaalkäitumise ebakohanemist. [75]. Praegused andmed näitasid, et seksuaalne kogemus põhjustas kohese ja pikaajalise AMPA / NMDA suhte languse PFC-le reageerivates NAc kesta neuronites.

Varem oletati, et peamine erinevus loomuliku ja ravimitasu vahel on see, et AMPA/NMDA suhte muutused pärast loomulikku tasu on ajutised ja hajuvad aja jooksul, samas kui ravimitest põhjustatud muutused püsivad. [76]. See hüpotees põhines leidudel, et kokaiin, kuid mitte toit ega sahharoos kutsus esile pikaajalise AMPA/NMDA suhte suurenemise VT-s.A [76]. Seevastu näitab käesolev uuring, et seksuaalne kogemus põhjustas NAc-s tõepoolest AMPA / NMDA suhte pikaajalise muutuse.

Kuid soost põhjustatud NAc kesta plastilisus erineb kokaiiniga kokkupuute järgsest plastilisusest, mis on näidanud, et see on seotud AMPAR-i vahendatud erutuvuse kahesuunalise muutusega.. Pärast kokkupuudet kokaiiniga ja ühepäevast uimastist loobumist vähenes AMPA/NMDA suhe [72] ja laskevõime langus [34] leiti sarnaselt seksuaalkogemuse lühiajaliste mõjude tulemustega. Kuid pärast 14-päevast kokaiinist hoidumise perioodi on NAc kesta neuronitel AMPA / NMDA suhe suurenenud, mis viitab sellele, et kokaiinist hoidumine suurendas NAc sünaptilist tugevust [54]. HSeetõttu põhjustab kokaiiniga kokkupuude kahesuunalise muutuse sünaptilises plastilisuses koos AMPA-vahendatud reaktsioonide vähenemisega vahetult pärast ravimiga kokkupuudet, kuid suurendab AMPAR-vahendatud erutatavust pikaajalise ravimist loobumisega. Seevastu pikaajaline seksuaalsest kogemusest hoidumine põhjustas AMPAR-vahendatud erutuvuse vähenemist NAc-koores, kuigi nendel karskusperioodidel täheldatakse lokomotoorse aktiivsuse ja amfetamiiniga seotud tasu sensibiliseerimist. [11]. Kuid teised aruanded on näidanud membraani sisemise erutuvuse vähenemist nii südamikus kui ka kestas lühikese ja pika abstinentsiperioodi jooksul pärast kokaiiniga kokkupuudet [35], [36], [37], [38], [39], [40], [41], mis näitab kahesuunalise muutuse puudumist, mis sarnaneb seksuaalkogemuse mõjuga. Veelgi enam, praegused tulemused näitavad, et seksuaalne kogemus ei põhjusta muutusi presünaptilise glutamaadi vabanemise tõenäosuses, kuna paarispulsside suhte osas pole rühmade vahel erinevusi. Kalivas ja tema kolleegid on näidanud, et korduv kokaiin kutsub esile muutusi rakuväliste mittesünaptiliste glutamaadikogumite vahendajates NAc-s, kas selliseid muutusi esineb seksuaalse kogemusega, tuleb veel kindlaks teha (ülevaatamiseks [77]).

On tõenäoline, et glutamatergilised sisendid NAc-sse muudest ajupiirkondadest peale PFC mängivad funktsionaalset rolli seksuaalse kogemuse mõjus järgnevale tasu käitumisele.. TNAc saab glutamatergilist sisendit basolateraalsest mandelkehast (BLA) ja hipokampuse ventraalsest subikulumist [78]. BLA mängib rolli loomulikus tasu otsivas käitumises [79], [80], on kriitilise tähtsusega keskkonna stiimulite ja seksuaalse tasu seostamisel [81] ja instrumentaalsele käitumisele paaritumise algatamiseks [82]. Seetõttu on ahvatlev oletada, et seksikogemusest tingitud muutused sünaptilises tugevuses ka BLA-le reageerivates sünapsides.

Vähenenud AMPA / NMDA suhe PFC sünapsides NAc kestas on kooskõlas NR1 suurenenud ekspressiooniga vahetult pärast seksuaalset kogemust, kuid ei ole kooskõlas suurenenud GluA2 ja GluA1 pärast pikaajalist abstinentsiperioodi. Üks seletus on see, et retseptoritega kaubitsemine toimus sünapsides, mis said glutamatergilist sisendit, mis tuleneb teistest ajupiirkondadest peale PFC. Samuti välistab NAc-südamiku lisamine valguproovidesse lisaks NAc-kestale võimaluse teha täpseid korrelatsioone valgu ekspressiooni ja sünaptilise tugevuse andmete vahel. Sellegipoolest näitavad praegused leiud selgelt, et loomulik tasu käitumine ja sellele järgnev tasudest hoidumine põhjustavad NAc-s sünaptilist plastilisust, millel on sarnasused ja erinevused psühhostimulantide poolt esile kutsutud omadest.

IKokkuvõtteks võib öelda, et seksuaalkogemus ja sellele järgnenud tasudest hoidumine isastel rottidel põhjustas kohest ja pikaajalist seksuaalkäitumise hõlbustamist, mis on sarnane seksuaalkogemuse mõjule sensibiliseerimisele amfetami lokomotoorsete mõjude suhtes.ne [11], ja seda seostati AMPA / NMDA suhete kohese ja pikaajalise vähenemisega NAc kesta sünapsides. Lisaks põhjustas seksuaalne kogemus NMDAR kiire ülesreguleerimise ja AMPAR aeglaselt areneva ümberjaotumise NAc neuronite pinnale. Seega, sarnaselt psühhostimulantide mõjule, võib loomulik tasu käitumine põhjustada pikaajalisi muutusi glutamaadi retseptori ekspressioonis, kaubitsemises ja erutuvuses. aga, põhjustas pikaajaline seksuaalsest kogemusest hoidumine, erinevalt kokaiini võtmisest, AMPA / NMDA suhte püsiva vähenemise NAc kestas. Pakuti välja mitmeid kontrollitavaid hüpoteese selle lahknevuse võimalike aluseks olevate tegurite kohta, sealhulgas BLA-le reageerivate sünapside muutused pärast loomulikku tasu kogemust. Need andmed näitavad taas kord nii sarnasusi kui ka erinevusi loodusliku ja ravimitasu kokkupuute pikaajaliste tagajärgede vahel ning võivad aidata paremini mõista, kuidas ravimid võivad sellel loomulikul tasustamisviisil toimida.

Meetodid

Eetika avaldus

Kõik protseduurid kiitis heaks Lääne-Ontario ülikooli loomade hooldamise ja kasutamise komitee ning need vastasid Kanada loomade hooldamise nõukogu juhistele, mis hõlmavad selgroogseid loomi uurimistöös.

Loomad

Täiskasvanud isased Sprague Dawley rotid (katsed 1 ja 2:10–12 nädalat; katsed 3, 8–10 nädalat katsete alguse ajal) saadi Charles River Laboratoriesist (Senneville, QC, Kanada). Samasoolised loomad peeti paaris pleksiklaasist puurides tunneltoruga reguleeritava temperatuuriga ruumis, mida hoiti 12/12-tunnisel hele-pimeduse tsüklil, kus oli olemas toit ja vesi. ad libitum välja arvatud käitumistestide ajal. Stimuleerivad emased (210–220 grammi) said paaritusseanssideks pärast kahepoolset munasarjade eemaldamist nahaaluse implantaadi, mis sisaldas 5% östradioolbensoaati ja 95% kolesterooli. Seksuaalne vastuvõtlikkus kutsuti esile 500 µg progesterooni manustamisega 0.1 ml seesamiõlis ligikaudu 4 tundi enne testimist.

Seksuaalne kogemus

Kõik isasrotid olid enne katsete algust seksuaalselt naiivsed. Paaritumisseansid toimusid varajases pimedas faasis (2–6 tundi pärast pimeda perioodi algust) hämaras punases valguses. Iga paaritusseansi ajal lasti isastel rottidel kopuleerida ejakulatsioonini või kuni 1 tunnini ning registreeriti seksuaalkäitumise parameetrid, sealhulgas: tõusu latentsus (ML; aeg emase looma sissetoomisest kuni esimese tõusuni), introktsiooni latentsus (IL; aeg emaslooma sissetoomisest kuni esimese tõusuni koos vaginaalse penetratsiooniga) ja ejakulatsiooni latentsus (EL; aeg esimesest ejakulatsioonist kuni ejakulatsioonini) [83]. Seksuaalselt naiivseid kontrolle käsitleti, neid hoiti paarituvate loomadega samades ruumides ja seega puutusid nad kokku samasuguse müra, üldise häirimise ja innaga emaste kaugete lõhnadega, kuid neil ei lubatud vastuvõtlike emasloomadega suhelda ega paarituda.

1. katse: seksi hõlbustamine

Sprague Dawley isasrotid paaritusid oma kodupuurides 5 järjestikust igapäevast paaritusseanssi. Loomad jagati kahte katserühma ja nende seksuaalkäitumist testiti kas 2 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi (testipäev; n=7 rühma kohta). Grupid sobitati seksuaalkäitumise parameetrite järgi ja seksuaalse kogemuse saamise ajal ei tuvastatud rühmade vahel olulisi erinevusi seksuaalkäitumise mõõtmisel.

Andmete analüüs

Rühmasiseselt võrreldi seksuaalkogemuse 1. ja 5. päeva, et määrata kindlaks seksuaalkäitumise hõlbustamine seksuaalkogemusega, päeva 1 ja testipäeva vahel ning 5. päeva ja testipäeva vahel (kas 1 nädal või 1 kuu pärast 5. päeva) tõusu, sissejuhatuse ja ejakulatsiooni latentsusaega, kasutades Wilcoxin Signed Rank testi olulisuse tasemega 5%.

Katse 2: ionotroopse glutamaadi retseptori subühiku ümberjaotumine/ekspressioon

Ionotroopsete retseptorite ümberjaotumise uurimiseks kasutati 1. katsega sarnast paradigmat. Seksuaalselt naiivsed isased Sprague Dawley rotid jaotati seksuaalselt kogenud ja naiivseteks rühmadeks. Seksuaalselt kogenud rühmade puhul saadi seksuaalkogemus 5 järjestikuse igapäevase paaritusseansi kaudu (nagu ülalpool kirjeldatud). Seksuaalselt kogenud isasloomad jagati seejärel kudede kogumiseks kas 3 päev, 1 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi kolme eksperimentaalsesse rühma (vastavalt seksuaalkäitumise parameetritele). Seksuaalselt naiivsete kontrollide ajud (käideldud ülalkirjeldatud viisil) koguti pärast viimast käitlemist samadel ajahetkedel. Rühmadesse kuulusid: seksuaalselt kogenud (AMPAR: 1D, n=9; 1W, n=12; 1M, n=12; NMDAR: 1D, n=9, 1W või 1M, n=6) või seksuaalselt naiivne (AMPAR: 1D, n=9; 1W, n=12; 1M, n=12; NMDAR: 1D, n=9, 1W või 1M, n=6).

Pinna retseptori ristsidumine

Loomad surmati naatriumpentobarbitaaliga (270 mg/kg; ip), millele järgnes dekapitatsioon. Pärast dekapitatsiooni eemaldati iga aju kiiresti ja asetati kohe jääkülma soolalahusesse. Kahepoolne NAc lõigati lahti, kasutades roti ajumaatriksit (ASI Instruments, Warren, MI, USA) ja skalpelli tera vastavalt Paxinos & Watsoni (1998) määratletud NAc piiridele. Järgmisena tükeldati NAc kude 400 × 400 µm kuubikuteks, kasutades McIlwaini koehakkurit (Vibratome, St. Louis, MO, USA). AMPA ja NMDA retseptori subühikute ristsidumise metoodika põhines Boudreau & Wolfil [53]. Vahetult pärast tükeldamist viidi ajukude kiiresti üle Eppendorfi tuubi, mis sisaldas 1 ml jääkülma aCSF-i, millele oli lisatud valgu ristsiduvat reagenti bis(sulfosuktsiinimidüül)suberaat (BS).³2 mM; Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) ja inkubeeriti 30 minutit jalas 4 °C juures. BS³ ei läbi rakumembraane, võimaldades selektiivselt ristsiduda pinnal ekspresseeritud valke sulfiidsidemetega, moodustades seega suure molekulmassiga agregaate, samas kui rakusisesed valgud jäävad modifitseerimata. See reaktsioon võimaldab naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesi (SDS-PAGE) ja Western blot analüüsi abil MW alusel eristada pinna- ja intratsellulaarseid valgukogumeid. Ristsidumise reaktsioon peatati 100 ui 1 M glütsiini lisamisega 10 minutiks temperatuuril 4 °C. Kude sadestati tsentrifuugimisega kiirusel 14 000 p/min 2 minutit temperatuuril 4 °C ja supernatant visati ära. Pelletid resuspendeeriti 400 µl jääkülmas lüüsipuhvris [25 mM Hepes (pH 7.4), 500 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF, 20 mM NaF, 0.1% Roinist 40, proteaasi P0.1 %) (kokteil P-1 %). Diagnostics GmbH, Mannheim, Saksamaa) ja 5 × fosfataasi inhibiitorite kokteil (Phosstop, Roche Diagnostics GmbH)]. Proove töödeldi 14 sekundit ultraheliga, et kudesid lõhkuda, seejärel tsentrifuugiti kiirusel 000 2 p/min 4 minutit temperatuuril 30 °C ja asetati kohe tagasi jääplokki. Supernatant kanti üle uude Eppendorfi katsutisse, millest 80 µl proovi pandi jääle ja ülejäänud supernatanti säilitati Western Blot analüüsi jaoks temperatuuril –1000 °C. Iga proovi jaoks määrati ristseotud lüsaatide valgukontsentratsioon, kasutades BCA testi (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA) ja spektrofotomeetrit NanoDrop ND-XNUMX (ThermoFisher Scientific Inc., Waltham, MA).

Western blot analüüs

Valguproovid (20 µg) laaditi ja elektroforeesiti 4–15% gradiendiga Tris-HCl geelidele (Bio-Rad Laboratories Ltd., Mississauga, Ontario, Kanada), kasutades Mini Trans-Blot Cell süsteemi (Bio-Rad Laboratories Ltd.) ja Tris-Glycine m25M Tris-192M Tris-Glycine [m-0.1 Glütsiin, 8.3% SDS (pH 20)]. Precision Plus valk All Blue standardeid (Bio-Rad Laboratories Ltd.) kasutati molekulmassi markeritena. Pärast eraldamist kanti valgud üle Millipore Immobilon-FL polüvinülideendifluoriidmembraanidele (PVDF; Millipore, Billerica, MA, USA), kasutades immunoblotimiseks Trans-Blot Cell wet Blotting süsteemi (Bio-Rad Laboratories Ltd.). Valgu ülekanne viidi läbi ülekandepuhvris (0.037% metanool ja 25% SDS Tris-glütsiinis [192 mM Tris, 8.3 mM glütsiin (pH 82)] 1 V juures XNUMX tund toatemperatuuril (RT). Kõiki proove töödeldi vähemalt kahes eksemplaris, tasakaalustatud rühmade ja geelide vahel.

Järgmisena inkubeeriti membraane 2 [suhe] 3 Odyssey blokeerimispuhvri (LI-COR Biosciences, Lincoln, NE) ja Tris-puhverdatud soolalahuse (TBS; 50 mM Tris ja 150 mM NaCl (pH 8.0)) lahust 1 tund loksutamisalusel toatemperatuuril. Seejärel inkubeeriti membraane individuaalselt 16 tundi loksutil temperatuuril 4 °C kas küüliku polüklonaalse anti-GluA1-ga (∼ 106 kDa; 1 [suhe] 1K; Millipore, kat. nr AB1504) ja GluA2 (∼ 100 kDa; 1 [suhe] 4K; Millipore, kat. nr AB1768) või hiire monoklonaalne anti-NR1 (∼ 130 kDa; 1 [suhe] 2K; Upstate (Millipore), Cat # 05-432). Neid primaarseid antikehi on varem kasutatud ja valideeritud [84], [85], ja tekitas ühe sobiva molekulmassiga riba, mida takistas antikeha eelabsorptsioon peptiidiga, kui seda kasutati ristseotud koel. Kõik antikehad lahjendati 2-ga [suhe] 3 ui Odyssey blokeerimispuhvri segu TBS-T-ga (TBS + 0.05% Tween-20 (pH 8.0). Pärast kolme 10-minutilist pesu TBS-T-s inkubeeriti membraane sekundaarsetes antikehades, mis olid lahjendatud 2-ga. [suhe] 3 Odyssey blokeerimispuhvri ja TBS-T segu 1 tund toatemperatuuril. Sekundaarsed antikehad hõlmasid Alexa-680 konjugeeritud kitse küülikuvastast antikeha (1 [suhe] 5K; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) või IR Dye800 CW-konjugeeritud kitse hiirevastane toime (1 [suhe] 10K; LI-COR Biosciences). Fluorestseeruv immunoreaktiivsus visualiseeriti ja pildid jäädvustati Odyssey 2.1 skanneriga (LI-COR Biosciences).

Kvantifitseerimine ja statistilised analüüsid

Iga valguproovi jaoks määrati Odyssey tarkvara abil iga riba fluorestsentsi intensiivsuse tasemed (kõrge MW, >250 kDa pinnaekspressiooni jaoks ja ribad ülalnimetatud spetsiifilise MW juures intratsellulaarse ekspressiooni jaoks) ja iga looma kohta arvutati keskmised. Pinna (S), intratsellulaarse (I), suhte (S/I, retseptori subühiku jaotuse mõõt) ja kogu (S+I, kogu retseptori subühiku ekspressiooni mõõt) ribatiheduse väärtused normaliseeriti vastavate seksuaalselt naiivsete kontrollrühmade keskmiste väärtustega. Iga proovi (erinevatesse geelidesse laaditud) korduste vahel fluorestsentsi intensiivsuses erinevusi ei olnud, mis kinnitab valguproovide laadimise varieeruvuse puudumist. Kõiki Western Bloti andmeid analüüsiti seksuaalselt kogenud ja seksuaalselt naiivsete kontrollide vahel samal ajahetkel, kasutades paarituid t-teste olulisuse tasemega 0.05

3. katse: elektrofüsioloogia

Eksperimentide 1 ja 2 puhul kasutati sama katseplaani, mida kirjeldati ülalpool. Seksuaalselt kogenud isasloomad jagati 3 katserühma, mis sobitati seksuaalkäitumise järgi ning kudede kogumise aja põhjal 1 päev, 1 nädal või 1 kuu pärast viimast paaritusseanssi (1 päev, n).=7; 1 nädal, n=9; 1 kuu, n=10). Nende nooremate isaste rottide seksuaalkäitumine ei erinenud katsetes 1 ja 2 vanemate isaste rottide seksuaalsest käitumisest. Rotid anesteseeriti naatriumpentobarbitaaliga (270 mg/kg; ip), millele järgnes transkardiaalne perfusioon jääkülma hapnikuga (95% O)₂, 5% CO₂) valmistamislahus, mis sisaldab [250 mM sahharoosi, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH₂PO₄4 mM MgCl₂0.1 mM CaCl₂, 26 mM NaHCO₃, 10 mM glükoosi, 3 mM müoinositooli, 2 mM naatriumpüruvaati ja 0.5 mM askorbaati]. Aju lõigati välja ja pandi jääkülma hapnikuga rikastatud ettevalmistuslahusesse. Igalt loomalt saadi vibratoomi abil 400 µm paksused sagitaalsed ajulõigud (Microm, Walldorf, Saksamaa). Kokku 4 viilu aju kohta viidi hoidekambrisse, kus oli kunstlik tserebrospinaalvedelik (aCSF) [125 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH₂PO₄1.3 mM MgCl₂2.5 mM CaCl₂, 26.2 mM NaHCO₃ ja 10 mM glükoosi], kuumutati 32 °C-ni 30 minutit ja lasti seejärel toatemperatuurini taastuda vähemalt 1 tund, enne kui üks viil salvestuskambrisse asetati. See kamber liideti hapnikuga rikastatud aCSF-ga temperatuuril 22 °C. Seksuaalkäitumise parameetrite osas ei olnud rühmade vahel erinevusi. Ajud koguti seksuaalselt naiivsetelt kontrollidelt igal kolmel ajahetkel pärast lõplikku käitlemist (n=igaüks 3–4).

Shell neuroneid uuriti mediaalsetes NAc viiludes, mis ei sisaldanud dorsaalset juttkeha [72]. Roostevabast terasest bipolaarsed mikroelektroodid asetati prelimbilisele ajukoore-NAc piirile salvestuselektroodi külge rostraalselt, et stimuleerida kortikaalseid aferentseid kiude presünaptiliselt. Elutähtsad keskmised ogalised neuronid tuvastati visuaalselt nende soma suuruse (umbes 30–35 µM läbimõõduga) ja suhteliselt negatiivse puhkemembraani potentsiaali –75 kuni –85 mV järgi. Salvestusteks kasutati Axopatch 200A võimendit ja diskreetimissagedust 20 kHz (Digidata 1340), 10 kHz madalpääsfiltriga. Katseprotokollide ja analüüsi jaoks kasutati PClamp 9.0. Aferente stimuleeriti paaritud impulssidega (50 ms ISI) sagedusel 0.1, 80 Hz ja neuroneid, kasutades bipolaarset kontsentrilist volframelektroodi. Rakud kinnitati pingega –40 mV ja depolariseeriti enne sünaptilist stimulatsiooni 500 ms väärtuseni +40 mV, et leevendada NMDA voolude magneesiumiplokki. AMPA/NMDA suhted määrati EPSC-de keskmisena +5 mV juures NMDAR antagonisti AP50 puudumisel või juuresolekul (30 uM; terve raku voolud 30x kontroll ja 5x AP5 juuresolekul). NMDA vastus arvutati AP80 salvestuste lahutamisel kontrollist. AMPAR EPSC tipp jagati NMDAR EPSC piigiga, et saada AMPA/NMDA suhe. Paarimpulsi suhete määramiseks tehti mõõtmised -30 mV juures presünaptilise stimulatsiooniga (XNUMX ×).

Andmete analüüs

Seksuaalselt naiivsete kontrollide andmed ühendati üheks kontrollrühmaks (n=10 neuronit 10 loomast), kuna kontrollide ajapunktide vahel statistilisi erinevusi ei tuvastatud. Seksuaalselt kogenud rühmad (1 päev, n=7; 1 nädal, n=9; 1 kuu, n=10 neuronit; tavaliselt üks neuron looma kohta) võrreldi seksuaalselt naiivse kontrollrühmaga, kasutades ühesuunalist ANOVA-d (tegurid: ajavahemik), millele järgnes Fisheri LSD. post hoc võrdlused olulisuse tasemega 5%.

Tunnustused

Täname dr Marina E. Wolfi ja Mike Milovanovicit Rosalind Franklini meditsiini- ja teadusülikoolist nende tehniliste nõuannete eest.

Allmärkused

Konkureerivad huvid: Autorid on teatanud, et ei ole konkureerivaid huve.

Rahastamine: Kanada terviseuuringute instituudid LMC-le ja ARD-le ning loodusteaduste ja tehnikauuringute nõukogu LMC-le ja KKP-le. Rahastajatel ei olnud mingit rolli uuringu kavandamisel, andmete kogumisel ja analüüsimisel, avaldamisotsuse tegemisel ega käsikirja ettevalmistamisel.

Tehtud tööd

1. Morgane PJ, Galler JR, Mokler DJ. Limbilise eesaju / limbilise keskaju süsteemide ja võrgustike ülevaade. Prog Neurobiol. 2005;75: 143-160. [PubMed]

2. Avena NM, Bocarsly ME, Rada P, Kim A, Hoebel BG. Pärast sahharoosilahuse igapäevast manustamist põhjustab toidu puudumine ärevust ja dopamiini / atsetüülkoliini tasakaalustamatust. Physiol Behav. 2008;94: 309-315. [PubMed]

3. Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Suhkru- ja rasvavabastusel on märkimisväärsed erinevused sõltuvust tekitavas käitumises. J Nutr. 2009;139: 623-628. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

4. Avena NM. Liigsöömine: neurokeemilised teadmised loommudelitelt. Söömishäire. 2009;17: 89-92. [PubMed]

5. Vucetic Z, Reyes TM. Toidu tarbimist ja tasu kontrolliv tsentraalne dopamiinergiline skeem: mõju rasvumise reguleerimisele. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2010;2: 577-593. [PubMed]

6. Yoshida M, Yokoo H, Mizoguchi K, Kawahara H, Tsuda A jt. Söömine ja joomine põhjustavad suurenenud dopamiini vabanemist nucleus accumbensis ja ventraalses tegmentaalses piirkonnas rottidel: mõõtmine in vivo mikrodialüüsiga. Neurosci Lett. 1992;139: 73-76. [PubMed]

7. Numan M. Motivatsioonisüsteemid ja ema käitumise närviskeem rottidel. Dev Psychobiol. 2007;49: 12-21. [PubMed]

8. Noored LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Sotsiaalse sidumise rakumehhanismid. Horm Behav. 2001;40: 133-138. [PubMed]

9. Noor LJ, Wang Z. Paari sidumise neurobioloogia. Nat Neurosci. 2004;7: 1048-1054. [PubMed]

10. Frohmader KS, Kannud KK, Balfour ME, Coolen LM. Mõnuainete segamine: ülevaade uimastite mõjust seksuaalkäitumisele inimestel ja loomamudelitel. Horm Behav. 2010;58: 149-162. [PubMed]

11. Kannud KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L jt. Neuroplastilisus mesolimbilises süsteemis, mis on põhjustatud loomulikust tasust ja sellele järgnenud tasudest hoidumisest. Biol Psychiatry. 2010;67: 872-879. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

12. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S jt. DeltaFosB mõju tuuma accumbensis loomulikule tasuga seotud käitumisele. J Neurosci. 2008;28: 10272-10277. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

13. Bradley KC, Boulware MB, Jiang H, Doerge RW, Meisel RL jt. Muutused geeniekspressioonis nucleus accumbens ja striatumis pärast seksuaalset kogemust. Geenid Brain Behav. 2005;4: 31-44. [PubMed]

14. Bradley KC, Meisel RL. C-Fose seksuaalse käitumise indutseerimine tuuma accumbensis ja amfetamiini poolt stimuleeritud lokomotoorne aktiivsus on seniste seksuaalsete kogemuste tõttu tundlik emaste Süüria hamstrite puhul. J Neurosci. 2001;21: 2123-2130. [PubMed]

15. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Seksuaalne tasu isastel rottidel: seksuaalse kogemuse mõju ejakulatsiooni ja intromissionidega seotud konditsioneeritud kohtade eelistustele. Horm Behav. 2009;55: 93-97. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

16. Agmo A, Berenfeld R. Emaskulatsiooni tugevdamine isasrottidel: opioidide ja dopamiini roll. Behav Neurosci. 1990;104: 177-182. [PubMed]

17. Agmo A, Gomez M. Seksuaalne tugevdamine on blokeeritud naloksooni infusiooniga mediaalsesse preoptilisse piirkonda. Behav Neurosci. 1993;107: 812-818. [PubMed]

18. Kagan J. Mittetäieliku ja täieliku seksuaalkäitumise diferentseeritud tasu väärtus. J Comp Physiol Psychol. 1955;48: 59-64. [PubMed]

19. Lopez HH, Ettenberg A. Seksuaalselt tingitud stiimulid: motiveeriva mõju nõrgenemine dopamiini retseptori antagonismi ajal. Pharmacol Biochem Behav. 2002;72: 65-72. [PubMed]

20. Sheffield FD, Wulff JJ, Backer R. Kopulatsiooni tasu väärtus ilma sugutungi vähenemiseta. J Comp Physiol Psychol. 1951;44: 3-8. [PubMed]

21. Everitt BJ, Fray P, Kostarczyk E, Taylor S, Stacey P. Uuringud mehaanilise käitumise kohta seksuaalse tugevdamisega isastel rottidel (Rattus norvegicus): I. Juhtimine lühikeste visuaalsete stiimulite abil, mis on seotud vastuvõtva naissoost. J Comp Psychol. 1987;101: 395-406. [PubMed]

22. Everitt BJ, Stacey P. Uuringud mehaanilise käitumise kohta seksuaalse tugevdamisega isastel rottidel (Rattus norvegicus): II. Preoptilise piirkonna kahjustuste, kastreerimise ja testosterooni mõju. J Comp Psychol. 1987;101: 407-419. [PubMed]

23. Kannud KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ jt. DeltaFosB tuumas accumbens on seksuaalse tasu mõju tugevdamiseks kriitiline. Geenid Brain Behav. 2010;9: 831-840. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

24. Dietz DM, Dietz KC, Nestler EJ, Russo SJ. Psühhostimulantide poolt indutseeritud struktuurse plastilisuse molekulaarsed mehhanismid. Farmakopsiatria. 2009;42(Suppl 1): S69 – 78. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

25. McClung CA, Nestler EJ. Geeniekspressiooni ja kokaiini tasu reguleerimine CREB ja DeltaFosB poolt. Nat Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]

26. Robinson TE, Kolb B. Struktuurne plastiilsus, mis on seotud kuritarvitamisega seotud ravimitega. Neurofarmakoloogia. 2004;47(Suppl 1): 33-46. [PubMed]

27. Frohmader KS, Lehman MN, Laviolette SR, Coolen LM. Samaaegne kokkupuude metamfetamiiniga ja seksuaalkäitumine suurendab hilisemat ravimitasu ja põhjustab isastel rottidel kompulsiivset seksuaalkäitumist. J Neurosci. 2011;31: 16473-16482. [PubMed]

28. Grimm JW, Hope BT, Wise RA, Shaham Y. Neuroadaptatsioon. Kokaiini iha inkubeerimine pärast eemaldamist. Loodus. 2001;412: 141-142. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

29. Thomas MJ, Kalivas PW, Shaham Y. Neuroplastsus mesolimbilise dopamiini süsteemi ja kokaiini sõltuvuse osas. Br J Pharmacol. 2008;154: 327-342. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

30. Hunt MINA. Kokaiinist põhjustatud neuroadaptatsioonide Bermuda kolmnurk. Trends Neurosci. 2010;33: 391-398. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

31. Conrad KL, Tseng KY, Uejima JL, Reimers JM, Heng LJ jt. Accumbensi moodustumine GluR2-puudulike AMPA retseptorite moodustumine vahendab kokaiiniisu inkubeerimist. Loodus. 2008;454: 118-121. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

32. McCutcheon JE, Wang X, Tseng KY, Wolf ME, Marinelli M. Nucleus accumbensi sünapsides esinevad kaltsiumi läbilaskvad AMPA retseptorid pärast pikaajalist loobumist kokaiini isemanustamisest, kuid mitte eksperimenteerija manustatud kokaiinist. J Neurosci. 2011;31: 5737-5743. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

33. McGeorge AJ, Faull RL. Projektsiooni korraldamine ajukoorest juttkehasse rotil. Neuroteadus. 1989;29: 503-537. [PubMed]

34. Kourrich S, Thomas MJ. Sarnased neuronid, vastandlikud kohandused: psühhostimulantide kogemus muudab erinevalt accumbensi tuuma ja kesta tulistamisomadusi. J Neurosci. 2009;29: 12275-12283. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

35. Ishikawa M, Mu P, Moyer JT, Wolf JA, Quock RM jt. Homöostaatiline sünapsist juhitav membraani plastilisus tuuma accumbensi neuronites. J Neurosci. 2009;29: 5820-5831. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

36. Moussawi K, Pacchioni A, Moran M, Olive MF, Gass JT jt. N-atsetüültsüsteiin muudab kokaiinist põhjustatud metaplastilisuse. Nat Neurosci. 2009;12: 182-189. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

37. Mu P, Moyer JT, Ishikawa M, Zhang Y, Panksepp J jt. Kokaiiniga kokkupuude reguleerib dünaamiliselt tuuma accumbensi neuronite sisemist membraani erutuvust. J Neurosci. 2010;30: 3689-3699. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

38. Zhang XF, Cooper DC, White FJ. Korduv kokaiiniravi vähendab täisraku kaltsiumivoolu roti nucleus accumbensi neuronites. J Pharmacol Exp Ther. 2002;301: 1119-1125. [PubMed]

39. Zhang XF, Hu XT, Valge FJ. Kogu rakkude plastilisus kokaiini ärajätmisel: naatriumvoolude vähenemine tuumaklundi neuronites. J Neurosci. 1998;18: 488-498. [PubMed]

40. Hu XT, Basu S, valge FJ. Korduv kokaiini manustamine pärsib HVA-Ca2 + potentsiaali ja suurendab K + -kanalite aktiivsust roti tuuma accumbens neuronites. J Neurofüsiol. 2004;92: 1597-1607. [PubMed]

41. Hu XT, Ford K, valge FJ. Korduv kokaiini manustamine vähendab kaltsineuriini (PP2B), kuid suurendab naatriumivoolude DARPP-32 modulatsiooni roti nucleus accumbens neuronites. Neuropsychopharmacology. 2005;30: 916-926. [PubMed]

42. Wolf ME. Ergastavate aminohapete roll psühhomotoorsete stimulantide käitumise sensibiliseerimisel. Prog Neurobiol. 1998;54: 679-720. [PubMed]

43. Vanderschuren LJ, Kalivas PW. Dopamiinergilise ja glutamatergilise ülekande muutused käitumusliku sensibiliseerimise esilekutsumisel ja ekspressioonil: prekliiniliste uuringute kriitiline ülevaade. Psühhofarmakoloogia (Berl) 2000;151: 99-120. [PubMed]

44. Wolf ME, Ferrario CR. AMPA retseptori plastiilsus tuuma accumbensis pärast korduvat kokkupuudet kokaiiniga. Neurosci Biobehav Rev. 2010;35: 185-211. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

45. Pierce RC, Bell K, Duffy P, Kalivas PW. Korduv kokaiin suurendab ärritava aminohappe ülekandumist tuuma accumbensis ainult rottidel, kellel on tekkinud käitumuslik sensibiliseerimine. J Neurosci. 1996;16: 1550-1560. [PubMed]

46. Suto N, Tanabe LM, Austin JD, Creekmore E, Pham CT jt. Varasem kokkupuude psühhostimulantidega soodustab nucleus accumbens AMPA kokaiini otsimise taastamist. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 2149-2159. [PubMed]

47. Cornish JL, Kalivas PW. Glutamaadi ülekanne tuumas accumbens vahendab kokaiinisõltuvuse retsidiivi. J Neurosci. 2000;20: RC89. [PubMed]

48. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksuaalne käitumine ja sugudega seotud keskkonnaalased vihjed aktiveerivad isasrottidel mesolimbilise süsteemi. Neuropsychopharmacology. 2004;29: 718-730. [PubMed]

49. Vialou V, Robison AJ, Laplant QC, Covington HE, 3., Dietz DM jt. DeltaFosB aju tasu ahelates vahendab vastupidavust stressile ja antidepressantidele. Nat Neurosci. 2010;13: 745-752. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

50. Ferrario CR, Li X, Wang X, Reimers JM, Uejima JL jt. Glutamaadi retseptori ümberjaotumise roll lokomotoorses sensibiliseerimises kokaiini suhtes. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 818-833. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

51. Boudreau AC, Ferrario CR, Glucksman MJ, Wolf ME. Signaali andmise raja kohandused ja uudsed proteiinkinaasi A substraadid, mis on seotud käitumusliku sensibiliseerimisega kokaiinile. J Neurochem. 2009;110: 363-377. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

52. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M, Wolf ME. Rakupinna AMPA retseptorid suurenevad rottide tuumas accumbensis kokaiini ärajätmise ajal, kuid pärast kokaiiniprobleemi sisestamist, mis on seotud mitogeeni aktiveeritud proteiinkinaaside aktiveerumisega. J Neurosci. 2007;27: 10621-10635. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

53. Boudreau AC, Wolf ME. Kokaiiniga seotud käitumuslik sensibiliseerimine on seotud suurenenud AMPA retseptori pinna ekspressiooniga tuuma accumbensis. J Neurosci. 2005;25: 9144-9151. [PubMed]

54. Kourrich S, Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ. Kokaiini kogemus kontrollib kahesuunalist sünaptilist plastiilsust tuuma accumbensis. J Neurosci. 2007;27: 7921-7928. [PubMed]

55. Ghasemzadeh MB, Mueller C, Vasudevan P. Käitumuslik sensibiliseerimine kokaiini suhtes on seotud suurenenud glutamaadi retseptori kaubitsemisega postsünaptilisse tihedusse pärast pikendatud ärajätuperioodi. Neuroteadus. 2009;159: 414-426. [PubMed]

56. Mameli M, Halbout B, Creton C, Engblom D, Parkitna JR jt. Kokaiinist põhjustatud sünaptiline plastilisus: püsivus VTA-s käivitab NAc-s kohandused. Nat Neurosci. 2009;12: 1036-1041. [PubMed]

57. Kuulsad KR, Kumaresan V, Sadri-Vakili G, Schmidt HD, Mierke DF jt. GluR2-d sisaldavate AMPA retseptorite fosforüülimisest sõltuv kaubitsemine tuuma accumbensis mängib kokaiini otsimise taastamisel kriitilist rolli. J Neurosci. 2008;28: 11061-11070. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

58. Bachtell RK, Self DW. Uuenenud kokaiiniga kokkupuude põhjustab mööduvaid muutusi nucleus accumbens AMPA retseptori vahendatud käitumises. J Neurosci. 2008;28: 12808-12814. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

59. Karler R, Calder LD, Chaudhry IA, Turkanis SA. Kokaiini ja amfetamiini "vastupidise taluvuse" blokeerimine MK-801 poolt. Life Sci. 1989;45: 599-606. [PubMed]

60. Schumann J, Yaka R. Pikaajaline loobumine korduvast mittekontingentsest kokaiiniga kokkupuutest suurendab NMDA retseptori ekspressiooni ja ERK aktiivsust tuuma accumbensis. J Neurosci. 2009;29: 6955-6963. [PubMed]

61. Powell WS, Dominguez JM, Hull EM. NMDA antagonist kahjustab rottidel kopulatsiooni ja kogemusest tingitud isaste seksuaalkäitumise paranemist. Behav Neurosci. 2003;117: 69-75. [PubMed]

62. Fleming AS, Kucera C. Seksuaalset kogemust blokeerivad nii valgusünteesi inhibiitor tsükloheksimiid kui ka mittekonkureeriv NMDA antagonist MK-801. Behav Neural Biol. 1991;56: 319-328. [PubMed]

63. Dominguez JM, Balfour ME, Lee HS, Brown JL, Davis BA jt. Paaritumine aktiveerib NMDA retseptoreid isaste rottide mediaalses preoptilises piirkonnas. Behav Neurosci. 2007;121: 1023-1031. [PubMed]

64. Bisaga A, Padilla M, Garawi F, Sullivan MA, Haney M. Alternatiivse tugevdaja mõju ja isu sigarettide suitsetamise valikule laboris. Hum Psychopharmacol. 2007;22: 41-47. [PubMed]

65. Yonghui L, Xigeng Z, Yunjing B, Xiaoyan Y, Nan S. MK-801 vastandlikud mõjud toidu ja morfiiniga indutseeritud konditsioneeritud koha eelistuse ekspressioonile rottidel. J Psychopharmacol. 2006;20: 40-46. [PubMed]

66. Huang YH, Lin Y, Mu P, Lee BR, Brown TE jt. In vivo kokaiinikogemus tekitab vaiksed sünapsid. Neuron. 2009;63: 40-47. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

67. Liao D, Zhang X, O'Brien R, Ehlers MD, Huganir RL. Morfoloogiliste postsünaptiliste vaiksete sünapside reguleerimine hipokampuse neuronite arenemisel. Nat Neurosci. 1999;2: 37-43. [PubMed]

68. Pickard L, Noel J, Henley JM, Collingridge GL, Molnar E. Arengumuutused sünaptilises AMPA ja NMDA retseptori jaotuses ja AMPA retseptori subühiku koostises elavates hipokampuse neuronites. J Neurosci. 2000;20: 7922-7931. [PubMed]

69. Groc L, Gustafsson B, Hanse E. AMPA signaalimine tekkivates glutamatergilistes sünapsides: seal ja mitte seal! Trends Neurosci. 2006;29: 132-139. [PubMed]

70. Marie H, Morishita W, Yu X, Calakos N, Malenka RC. Vaiksete sünapside tekitamine CaMKIV ja CREB ägeda in vivo ekspressiooni teel. Neuron. 2005;45: 741-752. [PubMed]

71. Brown TE, Lee BR, Mu P, Ferguson D, Dietz D jt. Vaikne sünapsipõhine mehhanism kokaiinist põhjustatud lokomotoorseks sensibiliseerimiseks. J Neurosci. 2011;31: 8163-8174. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

72. Thomas MJ, Beurrier C, Bonci A, Malenka RC. Pikaajaline depressioon tuumasõlmedes: käitumusliku sensibiliseerimise neurokorrelatsioon kokaiiniga. Nat Neurosci. 2001;4: 1217-1223. [PubMed]

73. Feil J, Sheppard D, Fitzgerald PB, Yucel M, Lubman DI jt. Sõltuvus, kompulsiivne uimastiotsing ja frontostriataalsete mehhanismide roll inhibeeriva kontrolli reguleerimisel. Neurosci Biobehav Rev. 2010;35: 248-275. [PubMed]

74. Goldstein RZ, Volkow ND. Prefrontaalse koore düsfunktsioon sõltuvuses: neuropiltimise tulemused ja kliinilised tagajärjed. Nat Rev Neurosci. 2011;12: 652-669. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

75. Davis JF, Loos M, Di Sebastiano AR, Brown JL, Lehman MN jt. Mediaalse prefrontaalse ajukoore kahjustused põhjustavad isastel rottidel halvasti kohanevat seksuaalkäitumist. Biol Psychiatry. 2010;67: 1199-1204. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

76. Chen BT, Bowers MS, Martin M, Hopf FW, Guillory AM jt. Kokaiin, kuid mitte loomulik tasu isemanustamine ega passiivne kokaiini infusioon, tekitab VTA-s püsivat LTP-d. Neuron. 2008;59: 288-297. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

77. Kalivas PW. Glutamaadi homöostaasi hüpotees sõltuvusest. Nat Rev Neurosci. 2009;10: 561-572. [PubMed]

78. Belujon P, Grace AA. Hipokampus, amügdala ja stress: vastastikku toimivad süsteemid, mis mõjutavad vastuvõtlikkust sõltuvusele. Ann NY ACAD Sci. 2011;1216: 114-121. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

79. Ishikawa A, Ambroggi F, Nicola SM, Fields HL. Amügdala ja mediaalse prefrontaalse ajukoore panus stiimulite reageerimisse. Neuroteadus. 2008;155: 573-584. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

80. Stuber GD, Sparta DR, Stamatakis AM, van Leeuwen WA, Hardjoprajitno JE jt. Ergutav ülekanne mandelkehast nucleus accumbens'i hõlbustab tasu otsimist. Loodus. 2011;475: 377-380. [PubMed]

81. van Furth WR, Wolterink G, van Ree JM. Meheliku seksuaalkäitumise reguleerimine: aju opioidide ja dopamiini kaasamine. Brain Res Brain Res Rev. 1995;21: 162-184. [PubMed]

82. Everitt BJ, Cador M, Robbins TW. Amygdala ja ventraalse juttkeha vahelised koostoimed stiimuli ja tasu seostes: uuringud, mis kasutavad seksuaalse tugevdamise teise järgu ajakava. Neuroteadus. 1989;30: 63-75. [PubMed]

83. Agmo A. Mees roti seksuaalne käitumine. Brain Res Brain Res Protoc. 1997;1: 203-209. [PubMed]

84. Nelson CL, Milovanovic M, Wetter JB, Ford KA, Wolf ME. Amfetamiini käitumuslikule sensibiliseerimisele ei kaasne muutusi glutamaadi retseptori pinna ekspressioonis roti tuumas accumbensis. J Neurochem. 2009;109: 35-51. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]

85. Gao C, Wolf ME. Dopamiini retseptorid reguleerivad NMDA retseptori pinna ekspressiooni prefrontaalsetes ajukoore neuronites. J Neurochem. 2008;106: 2489-2501. [PMC tasuta artikkel] [PubMed]