Metamfetamiiniga aktiveeritud Fos-ekspresseerivate neuronite molekulaarsete muutuste tuvastamine ühest roti dorsaalsest striatumist, kasutades fluorestsents-aktiveeritud rakkude sorteerimist (FACS) (2013)

Metamfetamiin ja teised ravimid aktiveerivad väikese osa kõigist aju neuronitest. Oleme eelnevalt välja töötanud fluorestsents-aktiveeritud rakkude sorteerimise (FACS) meetodi, et iseloomustada molekulaarseid muutusi, mis on indutseeritud selektiivselt aktiveeritud neuronites, mis ekspresseerivad neuronaalse aktiivsuse markerit Fos. Kuid see meetod nõuab paljude rottide proovide ühendamist. Nüüd kirjeldame modifitseeritud FACS-põhist meetodit, et iseloomustada molekulaarseid muutusi ühe roti Fos-ekspresseerivate dorsaalsete striaalsete neuronite puhul, kasutades multipleksset eel amplifikatsiooni strateegiat.

Fos ja NeuN (neuronaalne marker) immunohistokeemia näitavad, et 5-6% dorsaalse striatumi neuronitest aktiveeriti 90 min pärast akuutset metamfetamiini süstimist (5 mg / kg, ip), samas kui vähem kui 0.5% neuronitest aktiveeriti füsioloogilise lahusega.

Me kasutasime FACS-i NeuN-märgistatud neuronite eraldamiseks Fos-positiivseteks ja Fos-negatiivseteks neuroniteks ning hinnati mRNA ekspressiooni RT-qPCR abil nii vähe kui viis Fos-positiivset neuroni. Metamfetamiini poolt esilekutsutud 3-20-kordne varajaste geenide, homer-2, c-fos, fosB ja selle isovormide suurenemine (AfosB ja uus isovorm ΔfosB-2) Fos-positiivsetes, kuid mitte Fos-negatiivsetes neuronites. Vahetu varajase geeni mRNA induktsioon oli 10-i korda madalam või puudus, kui seda hinnati ühekordse dorsaalse striatumi homogenaadi sortimata proovides. Meie modifitseeritud meetod võimaldab uurida ainulaadseid molekulaarseid muutusi neuronites, mis on aktiveeritud ravimite või ravimiga seotud märkide abil keerukates sõltuvusmudelites.

Metamfetamiin ja teised ravimid aktiveerivad väikese osa kõigist aju neuronitest. Me kirjeldame siin täiustatud meetodit molekulaarsete muutuste iseloomustamiseks, mis on indutseeritud selektiivselt aktiveeritud neuronites, mis ekspresseerivad neuronaalse aktiivsuse markerit Fos. Ägeda metamfetamiini poolt indutseeritud geeniekspressiooni hindamiseks kasutati FACS-i koos sihipärase PCR-i eel-amplifikatsiooniga nii vähestest 5 Fos-i ekspresseerivatest neuronitest ühest roti dorsaalsest striatumist. Metamfetamiin indutseeris Fos-positiivsetes, kuid mitte Fos-negatiivsetes neuronites 3-20-i korda vahetu varajase geeni (IEG) suurenemist. Suunatud PCR-i eel-amplifikatsioon võimaldab teostada uimastite poolt aktiveeritud neuronite unikaalsete molekulaarsete muutuste uurimist keerukates sõltuvusmudelites.

Avaldatud 2013. See artikkel on USA valitsuse töö ja on USA-s üldkasutatav.