J Neurochem 2014 Jan؛ 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Aug 21.
لی لی QR1, روبیو FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, هو X, شاه یام, امید BT.
چکیده
متامفتامین و سایر داروها بخش کوچکی از همه نورونهای مغز را فعال می کنند. ما قبلا یک روش مبتنی بر دسته بندی سلول های فعال فلورسنسی فعال (FACS) را برای مشخص ساختن تغییرات مولکولی که به صورت انتخابی در نورون های فعال فعال شده اند نشان می دهند که نشانگر فعال عصبی Fos را نشان می دهند. با این حال، این روش نیاز به جمع آوری نمونه از بسیاری از موش ها دارد. در حال حاضر یک روش مبتنی بر FACS اصلاح شده برای توصیف تغییرات مولکولی در نورونهای استریاتای پشتی FOS از یک موش صحرایی با استفاده از استراتژی قبل از تقویت چندتایی.
ایمونو هیستوشیمی فوز و NeuN (نشانگر عصبی) نشان می دهد که 5-6٪ از نورونهای استریاتومی پشتی 90 دقیقه بعد از تزریق حاد متامفتامین (5 mg / kg، ip) فعال می شود و کمتر از 0.5٪ از نورون ها با تزریق سالین فعال می شود.
ما از FACS برای جدا کردن نورونهای NeuN-Neon به عصب های Fos-positive و Fos-negative استفاده کردیم و بیان Expression mRNA با استفاده از RT-qPCR از پنج عدد نانو فس مثبت. متامفتامین باعث افزایش سرعت 3-20 در برابر ژنهای سریع، قوس، هومر-2، c-fos، fosB و ایزوفرمهای آن (ΔfosB و یک ایزوفرم جدید ΔfosB-2) در نورونهای Fos-positive، اما نه Fos-negative. القاء سریع mRNA ژن اولیه در مقایسه با نمونه های غیر ارگانیک از هموگلوبات یک ردیف تک پشتی، کمتر از 10 است. روش اصلاح شده ما این امکان را برای مطالعه تغییرات مولکولی منحصر به فرد در نورونهای فعال شده توسط داروها یا نشانه های وابسته به دارو در مدل های اعتیاد پیچیده ایجاد می کند.
متامفتامین و سایر داروها بخش کوچکی از همه نورونهای مغز را فعال می کنند. ما در اینجا یک روش بهبود یافته برای مشخص کردن تغییرات مولکولی بوسیله انتخابی در نورونهای فعال که نشانگر فاکتور فعال عصبی را نشان می دهند، گزارش می کنیم. ما از FACS همراه با پيشسازي هدفمند PCR براي ارزيابي بيان ژن ناشي از حاد متامفتامين از تعدادي از نورونهاي بيان کننده 5 فوز از يک روده پشتي ريشه اي استفاده کرديم. متامفتامین باعث افزایش شدید 3-20 برابر ژنهای سریع اولیه (IEGs) در نورونهای Fos-positive، اما نه Fos-negative. قبل از تکمیل PCR هدفمند، مطالعه تغییرات مولکولی منحصر به فرد در نورون فعال شده توسط داروها یا نشانه های مرتبط با مواد مخدر در مدل های اعتیاد پیچیده امکان پذیر است.
انتشار 2013 این مقاله یک کار دولتی ایالات متحده است و در ایالات متحده آمریکا مالکیت عمومی دارد.
;