Synapse. 2008 May;62(5):358-69.
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ.
Lähde
Psykiatrian laitos, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, Texas 75390-9070, USA.
Abstrakti
Transkriptiotekijä DeltaFosB kerääntyy ja pysyy aivoissa vastauksena krooniseen stimulaatioon. Tämä kerääntyminen kroonisen altistumisen jälkeen huumeiden väärinkäytön jälkeen on osoitettu aikaisemmin Western blot -tekniikalla kaikkein dramaattisimmin striataleilla, mukaan lukien selkästriatum (caudate / putamen) ja ydin accumbens. Esillä olevassa tutkimuksessa käytimme immunohistokemiaa määritelläksemme suuremmalla anatomisella tarkkuudella DeltaFosB: n induktiota jyrsijän aivoissa kroonisen lääkehoidon jälkeen. Laajennimme myös aiempaa kokaiinia, morfiinia ja nikotiinia koskevaa tutkimusta kahteen ylimääräiseen väärinkäyttöön, etanoliin ja delta (9) -tetrahydrokannabinoliin (Delta (9) -THC, vaikuttava aine marihuanaan). Näytämme tässä, että krooninen, mutta ei akuutti, jokaisen neljän väärinkäytön, kokaiinin, morfiinin, etanolin ja delta (9) -THC: n antaminen indusoi voimakkaasti DeltaFosB: n ytimessä, vaikka eri malleja ytimen ja kuoren alialueilla tämän ytimen havaittiin erilaisille lääkkeille. Lääkkeet poikkesivat myös DeltaFosB-induktion asteesta selkästriatumissa. Lisäksi kaikki neljä lääkettä indusoivat DeltaFosB: n eturauhaskuoressa, ja suurimmat vaikutukset havaittiin kokaiinilla ja etanolilla, ja kaikki lääkkeet aiheuttivat DeltaFosB: n vähäisessä määrin amygdalassa. Lisäksi kaikki lääkkeet indusoivat DeltaFosB: n hippokampuksessa, ja etanolia lukuun ottamatta suurin osa tästä induktiosta nähtiin hammaslääkärissä. Alhaisemmat DeltaFosB-induktiotasot näkyivät muilla aivojen alueilla vastauksena tiettyyn lääkehoitoon. Nämä havainnot antavat lisää todisteita siitä, että DeltaFosB: n induktio ytimessä accumbens on tavallisesti kaikkien väärinkäytösten huumausaineiden yleinen toiminta ja että jokainen lääke indusoi DeltaFosB: n aivoissa.
JOHDANTO
Akuutti kokaiinialtistus aiheuttaa transkriptiotekijöiden c-Fosin ja FosB: n ohimenevän induktion striatti-alueilla (Graybiel et ai., 1990; Hope et ai., 1992; Young et ai., 1991), kun taas krooninen altistuminen lääkkeen tuloksille AFosB: n stabiloitujen isoformien, fosB-geenin lyhennetyn splice-variantin, kertymisessä (Hiroi et ai., 1997; Hope et ai., 1994; Moratalla et ai., 1996; Nye et ai., 1995). Kun indusoiminen, FosB pysyy näillä alueilla useita viikkoja proteiinin epätavallisen stabiilin vuoksi. Tuoreemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että ΔFosB: n vakautta välittää täysimittaisen FosB: n ja kaikkien muiden Fos-perheen proteiinien (Carle et ai., 2007) C-terminaaleissa olevien degronidomeenien puuttuminen ja ΔFosB: n fosforylaatio sen N -terminus (Ulery et ai., 2006). Sitä vastoin krooninen lääkeaineen antaminen ei muuta fosB-premRNA: n liittämistä ΔFosB-mRNA: han eikä mRNA: n stabiilisuutta (Alibhai et ai., 2007), mikä lisäksi osoittaa, että AFosB-proteiinin kertyminen on vallitseva mekanismi.
Kasvava näyttö osoittaa, että ΔFosB-induktio striataleilla, erityisesti ventral striatumilla tai ydintekijöillä, on tärkeä riippuvuuden näkökohtien välittämisessä. AFosB: n yliekspressio näillä indusoitavien bittigeenisten hiirien alueilla tai viruksen välittämällä geeninsiirrolla lisää eläimen herkkyyttä kokaiinin ja morfiinin liikkuvuutta aktivoiville ja palkitseville vaikutuksille, kun taas ΔFosB: n dominoivan negatiivisen antagonistin ilmentyminen (nimeltään Δc- Junilla on vastakkaiset vaikutukset (Kelz et ai., 1999; McClung ja Nestler, 2003; Peakman et ai., 2003; Zachariou et ai., 2006). FosB: n yliekspressio on myös osoittanut lisäävän kokaiinin kannustavaa motivaatiota (Colby et ai., 2003). Lisäksi kokaiini indusoi edullisesti FosB: tä nuorilla eläimillä, mikä voi edistää niiden lisääntynyttä haavoittuvuutta riippuvuudelle (Ehrlich et ai., 2002).
Näistä todisteista huolimatta tärkeitä kysymyksiä on edelleen. Vaikka useiden muiden väärinkäyttölääkkeiden, mukaan lukien amfetamiini, metamfetamiini, morfiini, nikotiini ja fensiklidiini, krooninen anto on raportoitu indusoivan AFosB: tä striatan alueilla (Atkins et ai., 1999; Ehrlich et ai., 2002; McDaid et ai. 2006b, Muller ja Unterwald, 2005, Nye et ai., 1995, Nye ja Nestler, 1996, Pich et ai., 1997, Zachariou et ai., 2006), on vähän tai ei lainkaan tietoa etanolin ja A9-tetrahydrokannabinolin vaikutuksista (Δ9-THC, vaikuttava aine marihuanaan). Kaksi aikaisempaa tutkimusta osoitti, että FosB: n kaltainen immunoreaktiivisuus indusoidaan hippokampuksessa ja eräissä muissa aivojen alueilla etanolin poiston aikana, mutta on edelleen epävarmaa, onko tämä immunoreaktiivisuus AFosB tai täyspitkä FosB (Bachtell et ai., 1999; Beckmann et ai., 1997; ). Etanolin ja (Δ9-THC: n tutkiminen ovat erityisen tärkeitä, koska nämä ovat kaksi laajimmin käytettyä huumeiden väärinkäyttöä Yhdysvalloissa tänään (SAMHSA, 2005), mutta vaikka väärinkäytön stimuloivat tai opiaatit ovat osoittaneet indusoivan ΔFosB: a tiettyjä muita eristettyjä aivojen alueita, jotka ytimen accumbensin ja dorsaalisen striatumin lisäksi sisältävät prefrontaalisen aivokuoren, amygdalan, ventral pallidumin, ventral tegmentaalisen alueen ja hippokampuksen (Liu et ai., 2007; McDaid et ai., 2006a, 2006b; Nye et ai., 1995, Perrotti et ai., 2005), ei ole tapahtunut systemaattista kartoitusta AFosB-induktiosta aivoissa vastauksena krooniseen lääkeaineen altistumiseen.
Tämän tutkimuksen tavoitteena oli käyttää immunohistokemiallisia menetelmiä ΔFosB: n induktion kartoittamiseksi aivoissa neljän prototyyppisen huumeiden pitkäaikaisen antamisen jälkeen: kokaiini, morfiini, etanoli ja Δ9-THC.
MATERIAALIT JA MENETELMÄT
Eläimet
Kaikki kokeet suoritettiin käyttäen urospuolisia Sprague Dawley -rottia (Charles River, Kingston, 250-275 g). Eläimiä pidettiin kaksi häkkiä kohti ja ne taputettiin eläinhuoneen olosuhteisiin viikon ajan ennen kokeiden aloittamista. Heillä oli vapaa pääsy ruokaan ja veteen. Kokeilut suoritettiin protokollien avulla, jotka on tarkastellut instituutioiden eläinten hoito- ja käyttövaliokunta Texasin lounais-lääketieteellisen keskuksen Dallasissa.
Lääkehoidot
Krooninen kokaiini
Rotat (n = 6 per ryhmä) saivat kahdesti päivässä kokaiinihydrokloridin injektioita (15 mg / kg ip; National Institute for Drug Abuse, Bethesda, MD), jotka oli liuotettu 0.9% suolaliuokseen 14-päiviksi. Kontrollirotiinit (n = 6 per ryhmä) saivat ip-injektioita 0.9-% suolaliuosta samalla kroonisella menetelmällä. Kaikki injektiot annettiin eläinten kotihäkkeihin. Tämän hoito-ohjelman on osoitettu tuottavan kestäviä käyttäytymis- ja biokemiallisia mukautuksia (katso Hope et ai., 1994).
Kokaiinin itsehoito
Eläimet (n = 6 per ryhmä) koulutettiin painamaan vipua 45 mg sakkaroosipelletille. Tämän koulutuksen jälkeen eläimille syötettiin ad libitum ja implantoitiin kirurgisesti pentobarbitaalianestesiassa kroonisen jugulaarisen katetrin (Silastic tubing, Green Rubber, Woburn, MA) kanssa, kuten edellä on kuvattu (Sutton et ai., 2000). Katetri lähti ihon alle poistumaan selästä 22-mittarin kanyylin (Plastics One, Roanoke, VA) läpi, joka oli upotettu kranioplastiseen sementtiin ja kiinnitetty Marlex-kirurgiseen verkkoon (Bard, Cranston, RI). Itsehoito suoritettiin operanttikokeissa (Med Associates, St. Alban, VT), jotka olivat asiayhteydessä erillään eläimen kotikehästä ja sijaitsevat toisessa huoneessa. Kukin kammio suljettiin äänenvaimennuskammioon, joka oli varustettu infuusiopumppuyksiköllä, joka koostui Razel-mallin A pumpusta (Stamford, CT) ja 10 ml -lasiruiskusta, joka on liitetty nesteen kääntöön (Instech, Plymouth Meeting, PA) teflonputkella . Tygon-letku liittää kääntölaitteen eläimen katetrikokoonpanoon ja se oli suljettu metallijousella. Kukin operantikammio sisälsi kaksi vipua (4 × 2 cm2, jotka sijaitsevat 2 cm: n päässä lattiasta). Itse annostelun aikana yksi aktiivisen vipun 20 g -vivun painallus antoi iv-infuusion kokaiiniin (0.5 mg / kg / 0.1 ml infuusio) 5-infuusiojakson aikana. Infuusiota seurasi 10: n aikakatkaisu, jonka aikana talon valo sammutettiin ja vastaaminen ei aiheuttanut ohjelmoituja seurauksia. Talon valon valaistus merkitsi aikakatkaisun päättymistä. Ei-aktiivinen vipu ei painanut vipua. Eläimet itse käyttivät kokaiinia 14: n päivittäisissä 4-h -testissä (6 päivää / viikko) pimeän syklin aikana; keskimääräinen päivittäinen saanti oli ~ 50 mg / kg. Ryhmä yoktoituneita eläimiä käsiteltiin identtisesti vain, kun he saivat kokaiini-infuusioita, kun heidän itsensä antavat vasta-aineet saivat lääkettä. Ryhmällä suolaliuosta kontrolloivilla eläimillä annettiin vetää painallusta suolaliuoksiin. Tämän hoito-ohjelman on osoitettu tuottavan kestäviä käyttäytymis- ja biokemiallisia mukautuksia (katso Sutton et ai., 2000).
Krooninen morfiini
Morfiinipellettejä (joista kukin sisälsi 75 mg morfiiniemästä; National Institute for Drug Abuse) istutettiin sc kerran päivässä 5-päiviksi (n = 6). Kontrollirotilla suoritettiin häiriöleikkaus 5-peräkkäisille päiville (n = 6). Tämän hoito-ohjelman on osoitettu tuottavan vahvoja käyttäytymis- ja biokemiallisia mukautuksia (ks. Nye ja Nestler, 1996).
Δ9-THC
9-THC liuotettiin 1: 1: 18-liuokseen, jossa oli etanolia, emulsiota ja suolaliuosta. Hiiriä injektoitiin ihonalaisesti kahdesti päivässä 9-THC: n tai vehikkelin kanssa 15-päivinä. A9-THC: n alkuannos oli 10 mg / kg ja annos kaksinkertaistettiin joka kolmas päivä lopulliseen 160 mg / kg -annokseen. Käytimme hiiriä A9-THC: lle, koska tämän hoito-ohjelman on osoitettu tuottavan vankka käyttäytymis- ja biokemiallisia mukautuksia tähän lajiin (Sim-Selley ja Martin, 2002).
etanoli
Etanolia (95% -varastosta; Aaper, Shelbyville, KY) annettiin ravitsemuksellisesti täydellisen nestemäisen ruokavalion avulla. Tässä standardisessa ruokavalion etanolimenetelmässä 7-annoksen [paino / tilavuus (paino / tilavuus)] antaminen laktalbumiini / dekstroosipohjaiseen ruokavalioon 17-päiville, jolloin rotat kuluttavat yleensä etanolia 8 – 12 g / kg / päivä ja saavuttaa veren etanolipitoisuudet jopa 200 mg / dl: iin asti (Criswell ja Breese, 1993; Frye et ai., 1981; Knapp et ai., 1998). Ruokavalio oli ravitsemuksellisesti täydellinen (vitamiinien, kivennäisaineiden ja muiden ravintoaineiden pitoisuudet, jotka saatiin ICN: n tutkimusruokavaliot ja jotka olivat kaloreita tasapainossa (dekstroosin kanssa) etanolilla käsitellyillä rotilla ja kontrollirotilla. ruokavalion määrä, joka vastaa etanolin ruokavaliota saaneiden rottien keskimääräistä saantia edellisenä päivänä, molemmat ryhmät saivat painon nopeasti etanolialtistusjakson aikana (ei esitetty) Tämä hoito-ohjelma on osoittanut tuottavan vankka käyttäytymis- ja biokemiallisia mukautuksia (ks. Knapp et ai., 1998).
immunohistokemia
Kahdeksantoista-24 h viimeisen käsittelyn jälkeen eläimet nukutettiin syvästi kloorihydraatilla (Sigma, St. Louis, MO) ja perfusoitiin intrakardiaalisesti 200 ml: lla 10 mM -fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) ja sen jälkeen 400 ml 4% paraformaldehydiä PBS. Aivot poistettiin ja säilytettiin yön yli 4% paraformaldehydissä 4 ° C: ssa. Seuraavana aamuna aivot siirrettiin 20% glyseroliin 0.1 M PBS -liuoksessa kryosuojausta varten. Koronaaliset leikkeet (40 µm) leikattiin pakastavaan mikrotomiin (Leica, Bannockburn, IL) ja käsiteltiin sitten immunohistokemialle. FosB- ja FosB-immunoreaktiivisuudet havaittiin käyttäen kahta erilaista kanin polyklonaalista antiseerumia. Yksi antiseerumi, joka on nostettu FosB C-terminaalia vastaan, joka ei ole AFosB: ssä (aa 317-334), tunnistaa täyspitkän FosB: n, mutta ei AFosB: tä (Perrotti et ai., 2004). Toinen antiseerumi, "pan-FosB" -vasta-aine, nostettiin FosB: n sisäistä aluetta vastaan ja tunnistaa sekä FosB: n että AFosB: n (sc − 48; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA).
FosB: n kaltainen värjäys paljastui käyttämällä avidiini-biotiini-peroksidaasikompleksimenetelmää. Tätä menettelyä varten aivojen leikkauksia käsiteltiin ensin 0.3% H2O2: lla endogeenisten peroksidaasien tuhoamiseksi ja inkuboitiin sitten 1 h: lle 0.3% Triton X-100 ja 3% normaalissa vuohen seerumissa epäspesifisen leimauksen minimoimiseksi. Kudososia inkuboitiin sitten yön yli huoneenlämpötilassa 1% normaalissa vuohen seerumissa, 0.3% Triton X-100 ja pan-FosB-vasta-aineessa (1: 5000). Kappaleet pestiin, asetettiin 1.5 h: lle 1: ssa: biotinyloitua vuohen antirabbit-immunoglobuliinin (DakoCytomation, Carpinteria, CA) 200-laimennos, pestiin ja sijoitettiin 1.5 h: lle 1: avidiini-biotiinikompleksin 200-laimennus Elite-pakkauksesta (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Peroksidaasiaktiivisuus visualisoitiin reaktiolla diaminobentsidiinin (Vector Laboratories) kanssa. Koodattuja dioja käytettiin FosB-immunoreaktiivisten solujen lukumäärän laskemiseen. Koodia ei rikottu, ennen kuin yksittäisen kokeen analyysi oli valmis.
Kun FosB: n kaltainen immunoreaktiivisuus havaittiin, suoritettiin kaksoisfluoresenssimerkintä FosB-spesifisellä (C-terminaalinen; 1: 500) vasta-aineella ja pan-FosB-vasta-aineella (sc − 48; 1: 200) sen määrittämiseksi, onko indusoitu proteiini todellakin ΔFosB. Käytettiin julkaistua protokollaa (Perrotti et ai., 2005). Proteiinit visualisoitiin käyttämällä CY2- ja CY3-fluoroforilla leimattuja sekundäärisiä vasta-aineita (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA). Proteiinin ilmentymisen lokalisointi suoritettiin konfokaalimikroskoopilla (Axiovert 100; LSM 510, jossa oli META-emissioaallonpituudet 488, 543 ja 633; Zeiss, Thornwood, NY). Tässä esitetyt kuvat otettiin talteen tähän järjestelmään ja edustavat 1-um: n paksuista osaa Z-tason läpi.
Tilastollinen analyysi
AFosB + -solujen merkittävä induktio arvioitiin käyttämällä t-testejä tai yksisuuntaisia ANOVA: ita, joita seurasi Newman-Keuls-testi post hoc -analyysinä. Kaikki analyysit korjattiin useita vertailuja varten. Tiedot ilmaistaan keskiarvona ± SEM. Tilastolliseksi merkitsevyydeksi määriteltiin P <0.05.
TULOKSET
ΔFosB: n indusointi aivoissa
Voit verrata suoraan AFosB-induktion kuvioita aivoissa vasteena erilaisille väärinkäytösten huumeille, ja annoimme neljä prototyyppistä lääkettä, kokaiinia, morfiinia, etanolia ja Δ9-THC: tä, ja tutkittiin ΔFosB-ekspressiota 18 – 24 h viimeisen lääkeaineen altistuksen jälkeen . Käytimme tavanomaisia lääkehoitoja, joita kirjallisuudessa on osoitettu tuottamaan kroonisen lääkeaineen altistumisen käyttäytymis- ja biokemiallisia seurauksia (ks. Materiaalit ja menetelmät). ΔFosB: n tasot kvantifioitiin immunohistokemialla, keskitytään keskipitkän ja etu- aivojen alueisiin, jotka osallistuivat huumeiden palkitsemiseen ja riippuvuuteen. Tämä FosB-induktion hieno kartoitus suoritettiin pan-FosB-vasta-aineella, joka tunnistaa sekä FosB: n että täyspitkän FosB: n. Tiedämme kuitenkin, että kaikki havaittu immunoreaktiivisuus kullekin lääkkeelle johtuu pelkästään AFosB: stä, koska täysimittaista FosB: tä varten selektiivinen vasta-aine (katso kohta Materiaali ja menetelmät) ei havainnut positiivisia soluja. Lisäksi kaikki pan-FosB-vasta-aineen havaitsema immunoreaktiivisuus menetettiin fosB-knockout-hiirissä, mikä vahvistaa tämän vasta-aineen spesifisyyden fosB-geenituotteisiin verrattuna muihin Fos-perheen proteiineihin. Nämä kontrollit on esitetty kokaiinille kuviossa 1, mutta niitä havaittiin myös kaikissa muissa lääkkeissä (ei esitetty). Nämä havainnot eivät ole yllättäviä, koska tässä tutkimuksessa käytetyssä 18 – 24 h -ajankohdassa odotetaan, että viimeisimmän lääkeaineen antaman indusoiman täysimittaisen FosB: n odotetaan hajottavan, jolloin stabiilempi AFosB on ainoa fosB-geeni jäljellä oleva tuote (katso Chen et ai., 1995; Hope et ai., 1994).
Kuvio 1
Fluoresenssi-immunohistokemian kaksoismerkintä käyttämällä anti-FosB (pan-FosB, Santa-Cruz) tai anti-FosB (C-terminaali) vasta-ainetta akuutilla tai kroonisella kokaiinilla hoidettujen eläinten ytimen ja kontrollirotan kautta. Pan-FosB-vasta-ainevärjäykset (lisää…)
Yhteenveto tämän tutkimuksen kokonaistuloksista on esitetty taulukossa I. Jokaisen neljästä lääkkeestä havaittiin merkittävästi indusoivan AFosB: tä aivoissa, vaikka niillä on osittain erilaiset induktiomallit kullekin lääkkeelle.
Taulukko I
AFosB: n indusointi aivoissa huumeiden avulla
ΔFosB: n indusointi striatan alueilla
Kaikkein dramaattisin ΔFosB: n induktio nähtiin accumbens-ytimessä ja selkästriatumissa (caudate / putamen), jossa kaikki neljä lääkettä indusoivat proteiinin (kuva 2 - kuva 4). Tämä näkyy kvantitatiivisesti kuviossa 5. AFosB: n induktio nähtiin sekä ydin- että kuoriosatoalueilla ydinvoimalan akumenaateissa, ja suurin osa induktiosta nähtiin ytimessä useimmille lääkkeille. FosB: n voimakas induktio havaittiin myös useimmissa lääkkeissä selkästriatumissa. Poikkeuksena oli N9-THC, joka ei merkittävästi indusoinut ΔFosB: tä ytimen accumbens-kuoressa tai selkästriatumissa vahvoista suuntauksista huolimatta (ks. Kuva 4; taulukko I). Mielenkiintoista on, että etanoli tuotti suurimman AFosB: n induktion ytimen accumbens -ydämessä verrattuna muihin hoitoihin.
Kuvio 2
AFosB: n indusointi rotan ytimessä kasvaa kontrollirotassa (A) tai kroonisen etanolikäsittelyn (B), morfiinin (C) tai kokaiinin (D) jälkeen. FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla käyttäen pan-FosB-vasta-ainetta. (lisää…)
Kuvio 4
AFosB: n indusointi hiiren aivoissa kroonisen A9-THC-hoidon jälkeen. FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla käyttämällä pan-FosB-vasta-ainetta verrokkieläimissä (A, C, E) ja kroonisissa A9-THC (B, D, F) -eläimissä. Huomaa (lisää…)
Kuvio 5
AFosB-induktion kvantifiointi striataalialueilla kroonisen morfiini-, A9-THC-, etanoli- ja kokaiinihoidon jälkeen. Pylväskaaviot osoittavat ΔFosB + -solujen keskimääräisen määrän vertailueläimissä ja eläimissä, joille on tehty krooninen morfiini (lisää…)
ΔFosB: n induktio tahdissa suhteessa pakotettuun lääkeaineen altistumiseen
Ottaen huomioon FosB: n dramaattisen indusoinnin striatan alueilla, olimme kiinnostuneita selvittämään, onko lääkkeen kyky indusoida proteiini näillä alueilla vaihteli tahdistusfunktion ja pakotetun lääkeaineen altistuksen funktiona. Tämän kysymyksen käsittelemiseksi tutkittiin joukkoa rottia, jotka itse käyttivät kokaiinia 14-päivinä, ja verrattiin ΔFosB-induktiota näihin eläimiin niihin, jotka saivat kokaiinia ja jotka saivat vain suolaliuosta. Kuten kuviossa 6 on esitetty, itse antama kokaiini indusoi voimakkaasti AFosB: n ytimessä (sekä ytimen että kuoren alialueissa) ja selkästriatumissa, joilla oli vastaava induktiotaso, jota havaittiin itse annostellun lääkkeen suhteen. Näissä kahdessa eläinryhmässä havaittu ΔFosB-induktion laajuus oli suurempi kuin kokaiinin ip-injektioilla (ks. Kuvio 5) nähnyt, mikä johtui oletettavasti kokaiinin paljon suuremmista määristä itsehoitokokeessa (päivittäiset annokset: 50 mg / kg iv vs. 30 mg / kg ip).
Kuvio 6
ΔFosB-induktion kvantifiointi striataalialueilla kroonisen kokaiinin itseannostelun jälkeen. Pylväsdiagrammit osoittavat ΔFosB + -solujen keskimääräisen määrän vertailueläimissä ja kokaiinihoidon kohteena olevissa eläimissä ytimessä ja (lisää…)
ΔFosB: n induktio muissa aivojen alueilla
Striataalikompleksin lisäksi väärinkäyttölääkkeiden krooninen anto aiheutti AFosB: n useilla muilla aivojen alueilla (katso taulukko I). Meidän on korostettava, että taulukossa I esitetyt tiedot ovat puolikvantitatiivisia eivätkä ne tarkoita ΔFosB-induktion tarkkaa kvantifiointia, kuten suoritettiin striataalialueille (kuviot 5 ja 6). Siitä huolimatta olemme varmoja ΔFosB-induktiosta näillä ei-striataalisilla alueilla: ΔFosB on käytännössä havaitsematon näillä alueilla perusolosuhteissa siten, että ΔFosB: n johdonmukainen havaitseminen kroonisen lääkealtistuksen jälkeen on tilastollisesti merkittävä (P <0.05 x 2).
Kaikkien lääkkeiden voimakas induktio havaittiin prefrontaalisessa kuoressa, morfiini ja etanoli näyttivät tuottavan voimakkaimmat vaikutukset useimmissa kerroksissa (kuva 4 ja kuvio 7). Kaikki neljä lääkettä aiheuttivat myös alhaisia ΔFosB-induktiotasoja striaterminaalin (BNST) sängyn ytimessä, etupuolen commissure (IPAC): n posteriorisen raajan interstitiaalisessa ytimessä ja koko amygdala-kompleksissa (kuva 8). Havaittiin myös erityisiä tiettyihin lääkkeisiin kohdistuvia vaikutuksia. Kokaiini ja etanoli, mutta eivät morfiini tai Δ9-THC, näyttivät indusoivan alhaisia ΔFosB-tasoja lateraalisen väliseinän kohdalla, eikä välikerroksessa havaittu induktiota. Kaikki lääkkeet indusoivat AFosB: tä hippokampuksessa ja etanolia lukuun ottamatta suurin osa tästä induktiosta oli nähtävissä dentate gyrusissa (taulukko I ja kuvio 9). Sitä vastoin etanoli aiheutti hyvin vähän ΔFosB: tä dentate gyrusissa ja sen vuoksi indusoi korkean tason proteiinia CA3-CA1-alikentissä. Kokaiini, morfiini ja etanoli, mutta ei Δ9-THC, aiheuttivat ΔFosB: n alhaisia induktiotasoja periaqueductal-harmaassa, kun taas vain kokaiini indusoi ΔFosB: tä ventral tegmental -alueella, eikä induktiota havaittu sub-stantia-nigrassa (ks. Taulukko I ).
Kuvio 7
ΔFosB: n indusointi vertailurotan (A) prefrontaalisessa aivokuoressa tai kroonisen etanolikäsittelyn (B), morfiinin (C) tai kokaiinin (D) jälkeen. FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla käyttäen pan-FosB-vasta-ainetta. Merkinnät (lisää…)
Kuvio 8
ΔFosB: n indusointi vertailurotan (A) amygdalan tyvisivusuunnassa ja keskimmäisessä mediaalisessa ytimessä tai rotilla, joille on annettu kroonista etanolia (B), morfiinia (C) tai kokaiinia (D). FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla (lisää…)
Kuvio 9
ΔFosB: n indusointi kontrollirotan (A) hippokampuksessa tai rotilla, joille on annettu kroonista etanolia (B), morfiinia (C) tai kokaiinia (D). FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla käyttäen pan-FosB-vasta-ainetta. Merkinnät (lisää…)
KESKUSTELU
Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että useiden väärinkäyttölääkkeiden, kuten kokaiinin, amfetamiinin, metamfetamiinin, morfiinin, nikotiinin ja fentsiklidiinin, pitkäaikainen antaminen indusoi transkriptiotekijän ΔFosB: n ytimessä ja dorsaalisessa striatumissa (katso johdanto-osaa viitteitä varten; tarkasteltu julkaisussa McClung et ai., 2004; Nestler et ai., 2001). AFosB: n indusointi striatan alueilla on havaittu myös luonnollisten palkkioiden, kuten pyöräilykäyttäytymisen, kroonisen käytön jälkeen (Werme et ai., 2002). Lisäksi on esitetty useita raportteja AFosB: n induktion pienemmistä tasoista tietyissä muissa aivojen alueilla, mukaan lukien prefrontaalinen aivokuoret, amygdala, ventral pallidum, ventral tegmental -alue ja hippokampus (Liu et ai., 2007; McDaid et ai., 2006a, 2006b; Nye et ai., 1996; Perrotti et ai., 2005), vasteena joillekin näistä huumeiden väärinkäytöksistä, ei kuitenkaan ole koskaan ollut järjestelmällistä kartoitusta AFosB: n lääkeaineen induktiosta aivoissa. Lisäksi useimpien väärinkäytösten huumausaineiden tutkimuksesta huolimatta kahta eniten väärinkäytettyä ainetta, etanolia ja Δ9-THC: tä, ei ole tähän mennessä tutkittu niiden kyvystä indusoida ΔFosB: tä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli suorittaa AFosB: n alustava kartoitus aivoissa vasteena neljän väärinkäytön prototyyppisen lääkkeen krooniseen antamiseen: kokaiini, morfiini, etanoli ja Δ9-THC.
Tutkimuksemme tärkeimmät havainnot ovat, että etanoli ja Δ9-THC, kuten kaikki muutkin väärinkäytön lääkkeet, aiheuttavat suuria ΔFosB-tasoja laajalti striant-kompleksissa. Nämä tulokset vahvistavat edelleen FosB-induktion näillä alueilla yleisenä, kroonisena sopeutumisena käytännössä kaikkiin väärinkäytön lääkkeisiin (McClung et ai., 2004). Induktiokuvio striatsikompleksissa vaihteli jonkin verran eri lääkkeistä. Kaikki voimakkaasti indusoitu ΔFosB ytimessä ytimessä, kun taas kaikki lääkkeet, lukuun ottamatta A9-THC-indusoitua ΔFosB: tä ytimen accumbens-kuoressa ja dorsaalisessa striatumissa, ja X9-THC: llä oli vahvoja suuntauksia tuottaa samanlaisia vaikutuksia jälkimmäiset alueet. Ytimen ydin ja kuori ovat tärkeitä aivojen palkitsemisalueita, joiden on osoitettu olevan huumeiden väärinkäytön palkitsevien toimien kriittisiä välittäjiä. Samoin selkästriatum on liittynyt lääkkeen kulutuksen kompulsiiviseen tai tavanomaiseen luonteeseen (Vanderschuren et ai., 2005). Itse asiassa AFosB: n induktio näillä alueilla on osoitettu lisäävän palkitsevaa vastetta kokaiinille ja morfiinille ja lisäävät vastauksia myös luonnollisiin palkkioihin, kuten pyöräilykäyttäytymiseen ja ruoanottoon (Colby et ai., 2003; Kelz et al., 1999, Olausson et ai., 2006, Peakman et ai., 2003, Werme et ai., 2003, Zachariou et ai., 2006). Lisätyötä tarvitaan sen määrittämiseksi, johtaako ΔFosB-induktio näillä alueilla samankaltaisia toiminnallisia mukautuksia yksilön herkkyyteen muiden huumeiden väärinkäytön palkitseviin vaikutuksiin.
ΔFosB: n indusointi striatan alueilla ei ole lääkkeen tahdotusta. Niinpä osoitimme, että kokaiinin antaminen itsestään aiheutti saman asteen ΔFosB: n ytimessä ja dorsaalisessa striatumissa, kun niitä havaittiin samankaltaisia, yoked-injektioita saaneilla eläimillä. Nämä tulokset osoittavat, että AFosB: n indusointi striatumissa edustaa väärinkäytösten lääkkeiden farmakologista vaikutusta riippumatta eläimen kontrollista lääkeaineen altistumisesta. Hämmästyttävässä kontrastissa osoitimme äskettäin, että kokaiinin antaminen itsestään aiheuttaa useita kertoja suurempia AFosB: n tasoja orbitofrontalisessa kuoressa verrattuna kokeneen kokeen antamiseen (Winstanley et ai., 2007). Tämä vaikutus oli spesifinen orbitofrontaliselle aivokuorelle, koska ekvivalenttiset AFosB-induktiotasot havaittiin prefrontal-kuoressa näissä kahdessa hoito-olosuhteessa. Näin ollen vaikka ΔFosB-induktio ei liity lääkeaineen saannin tahdistuneeseen kontrolliin striatan alueilla, vaikuttaa siltä, että tällaiset motivaatiotekijät vaikuttavat tiettyihin korkeampiin kortikaalisiin keskuksiin.
Esitämme myös puolikvantitatiivisia tietoja, joiden mukaan kaikki neljä väärinkäytöstä aiheuttavaa lääkettä aiheuttavat ΔFosB: a useissa aivojen alueilla striatikompleksin ulkopuolella, vaikka yleensä pienemmässä määrin. Näihin muihin aivojen alueisiin kuului prefrontaalinen kuori, amygdala, IPAC, BNST ja hippokampus. ΔFosB: n induktio prefrontaalisessa aivokuoressa ja hippokampuksessa voi liittyä joidenkin huumeiden vaikutuksiin kognitiiviseen suorituskykyyn, vaikkakin tätä on vielä tutkittava suoraan. Amygdala, IPAC ja BNST ovat kaikki osallistuneet yksilön vasteiden säätämiseen aversiivisille ärsykkeille. Tämä herättää mahdollisuuden, että ΔFosB-induktio näillä alueilla huumeiden väärinkäytön kroonisen annon jälkeen välittää emotionaalisen käyttäytymisen lääkeaineen säätelyä, joka ylittää palkkion. On mielenkiintoista tutkia näitä mahdollisuuksia tulevissa tutkimuksissa.
Neljä huumeiden väärinkäyttöä, joita tutkittiin tässä yhteydessä, tuotti myös joitakin lääkekohtaisia vaikutuksia. Kokaiini indusoi AFosB: n ainutlaatuisesti ventral tegmental -alueella, kuten aiemmin ilmoitettiin (Perrotti et ai., 2005). Samoin kokaiini ja etanoli indusoivat yksiselitteisesti alhaisia ΔFosB-tasoja sivusuunnassa. A9-THC oli ainutlaatuinen vähemmän dramaattisille vaikutuksille AFosB: n induktiolle verrattuna muihin väärinkäytön lääkkeisiin ydin accumbens -kuoressa ja selkästriatumissa, kuten aiemmin mainittiin. A9-THC oli myös ainutlaatuinen siinä, että krooninen altistuminen tälle lääkkeelle, toisin kuin kaikki muut, ei indusoinut alhaisia AFosB-tasoja periaqueductal-harmaassa. Kun otetaan huomioon hippokampuksen ja väliseinän merkitys kognitiivisessa toiminnassa, ja näiden alueiden rooli sekä periaqueductal harmaa säätelemällä eläimen vasteita stressaaviin tilanteisiin, alue- ja lääkekohtainen ΔFosB: n induktio näillä alueilla voisi välittää tärkeitä näkökohtia huumeiden vaikutus aivoihin.
Yhteenvetona voidaan todeta, että ΔFosB-induktiota aivojen aivojen palkitsemisalueilla on osoitettu laajalti yhteisenä kroonisena sopeutumisena huumeisiin. Olemme laajentaneet tätä ajatusta osoittamalla, että kaksi ylimääräistä ja laajalti väärinkäytettyä lääkettä, etanoli ja Δ9-THC, myös indusoivat ΔFosB: a näissä aivojen alueilla. Tunnistamme myös useita muita aivojen alueita, jotka liittyvät kognitiivisiin toimintoihin ja stressivasteisiin, jotka osoittavat vaihtelevia AFosB-induktiotasoja vastauksena krooniseen lääkeaineen altistumiseen. Jotkin näistä vastauksista, kuten ΔFosB: n indusointi striatan alueilla, ovat yleisiä kaikissa tässä tutkituissa väärinkäytöksissä, kun taas vasteet muilla aivojen alueilla ovat lääkkeitä tarkempia. Nämä havainnot ohjaavat nyt tulevia tutkimuksia karakterisoimaan ΔFosB-induktion roolia näissä muissa aivojen alueilla. Ne auttavat myös määrittelemään ΔFosB: n antagonistien potentiaalista hyötyä huumausaineiden väärinkäytön oireyhtymien yhteisenä hoitona.
Kuvio 3
ΔFosB: n indusointi rotan putkimaassa kontrollirotassa (A) tai kroonisen etanolikäsittelyn (B), morfiinin (C) tai kokaiinin (D) jälkeen. FosB: n kaltaisen immunoreaktiivisuuden tasot analysoitiin immunohistokemialla käyttäen pan-FosB-vasta-ainetta. (lisää…)
Kiitokset
Sopimusapurahoittaja: Kansallinen huumeiden väärinkäytön laitos.
REFERENSSIT
1. Alibhai IN, vihreä TA, Nestler EJ. FosB: n ja ΔfosB-mRNA: n ilmentymisen säätely: In vivo ja in vitro -tutkimukset. Brain Res. 2007, 11: 4322-4333.
2. Atkins JB, Atkins J, Carlezon WA, Chlan J, Nye HE, Nestler EJ. AFosB: n spesifinen induktio alueelle tyypillisten ja epätyypillisten antipsykoottisten lääkkeiden toistuvalla antamisella. Synapsi. 1999, 33: 118-128. [PubMed]
3. Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. Alkoholin juominen tuottaa aivojen alueen selektiivisiä muutoksia indusoituvien transkriptiotekijöiden ilmentymisessä. Brain Res. 1999, 847: 157-165. [PubMed]
4. Beckmann AM, Matsumoto I, Wilce PA. AP-1- ja Egr-DNA-sitoutumisaktiivisuudet lisääntyvät rotan aivoissa etanolin poiston aikana. J Neurochem. 1997, 69: 306-314. [PubMed]
5. Carle TL, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Proteasomeista riippuvaiset ja riippumattomat mekanismit FosB: n epävakaudelle: FosB-degronidomeenien tunnistaminen ja vaikutukset ΔFosB-stabiilisuuteen. Eur J Neurosci. 2007, 25: 3009-3019. [PubMed]
6. Chen JS, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. AFosB- ja FosB-kaltaisten proteiinien säätäminen sähköiskun (ECS) ja kokaiinihoidon avulla. Mol Pharmacol. 1995, 48: 880-889. [PubMed]
7. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. ΔFosB lisää kokaiinin kannustimia. J Neurosci. 2003, 23: 2488-2493. [PubMed]
8. Criswell HE, Breese GR. Samankaltaiset vaikutukset etanolilla ja flumatseniililla, kun hankitaan shuttle-box-vältysvaste kroonisen etanolikäsittelyn aikana. Br J Pharmacol. 1993, 110: 753-760. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
9. Ehrlich ME, Sommer J, Canas E, Unterwald EM. Periadolescent-hiirillä on parannettu ΔFosB-ylösregulaatio vasteena kokaiinille ja amfetamiinille. J Neurosci. 2002, 22: 9155-9159. [PubMed]
10. Frye GD, Chapin RE, Vogel RA, Mailman RB, Kilts CD, Mueller RA, Breese GR. Akuutin ja kroonisen 1,3-butaanidiolin hoidon vaikutukset keskushermostoon: vertailu etanoliin. J. Pharmacol Exp Ther. 1981, 216: 306-314. [PubMed]
11. Graybiel AM, Moratalla R, Robertson HA. Amfetamiini ja kokaiini indusoivat c-fos-geenin lääke-spesifistä aktivaatiota striatumin strio-osa-matriisiosastoissa ja limbisissä alaryhmissä. Proc Natl Acad Sci USA. 1990, 87: 6912-6916. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
12. Hiroi N, Brown J, Haile C, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ. FosB-mutanttihiiret: Fosiin liittyvien proteiinien kroonisen kokaiinin induktion menetys ja kohonnut herkkyys kokaiinin psykomotorisille ja palkitseville vaikutuksille. Proc Natl Acad Sci USA. 1997, 94: 10397-10402. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
13. Hope BT, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Kroonisen kokaiinin säätely välittömästä varhaisesta geenien ilmentymisestä ja AP-1: n sitoutumisesta rotan ytimessä. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5764 – 5768. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
14. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Pitkäkestoisen AP-1-kompleksin induktio, joka koostuu muuttuneista Fos-kaltaisista proteiineista aivoissa kroonisen kokaiinin ja muiden kroonisten hoitojen avulla. Neuroni. 1994, 13: 1235-1244. [PubMed]
15. Kelz MB, Chen JS, Carlezon WA, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch R, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ . Transkriptiotekijän AFosB ekspressio aivoissa kontrolloi herkkyyttä kokaiinille. Nature. 1999, 401: 272-276. [PubMed]
16. Knapp DJ, Duncan GE, Crews FT, Breese GR. Fos-kaltaisten proteiinien induktio ja ultraäänisoitto etanolin vetäytymisen aikana: todisteita peruuttamisen aiheuttamasta ahdistuksesta. Alkoholi Clin Exp Res. 1998, 22: 481-493. [PubMed]
17. Liu HF, Zhou WH, Zhu HQ, Lai MJ, Chen WS. M (5) -muskariinireseptorin antisense-oligonukleotidin mikroinjektio VTA: han inhiboi FosB: n ilmentymistä NAc: ssä ja heroiinin herkistettyjen rottien hippokampuksessa. Neurosci Bull. 2007, 23: 1-8. [PubMed]
18. McClung CA, Nestler EJ. Geenien ilmentymisen ja kokaiinipalkinnon säätäminen CREB ja ΔFosB. Nat Neurosci. 2003, 6: 1208-1215. [PubMed]
19. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. ΔFosB: Molekyylikytkin aivojen pitkäaikaiseen sopeutumiseen. Mol Brain Res. 2004, 132: 146-154. [PubMed]
20. McDaid J, Dallimore JE, Mackie AR, Napier TC. Muutokset accumbal- ja pallidisissa pCREB: ssä ja AFosB: ssä morfiiniherkistetyissä rotissa: korrelaatio reseptorista aiheutuneisiin elektrofysiologisiin toimenpiteisiin ventral pallidumissa. Neuropsychopharmacology. 2006a; 31: 1212-1226. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
21. McDaid J, Graham MP, Napier TC. Metamfetamiinin aiheuttama herkistyminen muuttaa pCREB: tä ja Δ-FosB: tä eri tavalla nisäkäs aivojen limbiseen piiriin. Mol Pharmacol. 2006b; 70: 2064-2074. [PubMed]
22. Moratalla R, Elibol R, Vallejo M, Graybiel AM. Verkkotason muutokset indusoituvien Fos-Jun-proteiinien ilmentymisessä striatumissa kroonisen kokaiinikäsittelyn aikana. Neuroni. 1996, 17: 147-156. [PubMed]
23. Muller DL, Unterwald EM. D1-dopamiinireseptorit moduloivat AFosB-induktiota rotan striatumissa ajoittaisen morfiinin antamisen jälkeen. J. Pharmacol Exp Ther. 2005, 314: 148-154. [PubMed]
24. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. ΔFosB: Pitkäaikainen molekyylikytkin riippuvuutta varten. Proc Natl Acad Sci USA. 2001, 98: 11042-11046. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
25. Nye HE, Nestler EJ. Kroonisten Fosiin liittyvien antigeenien induktio rotan aivoissa kroonisen morfiinin antamisen avulla. Mol Pharmacol. 1996, 49: 636-645. [PubMed]
26. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiset tutkimukset kroonisen Fra: n (Fosiin liittyvän antigeenin) induktion kokaiinin säätelystä striatumissa ja ydintekijöissä. J. Pharmacol Exp Ther. 1995, 275: 1671-1680. [PubMed]
27. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve R, Nestler EJ, Taylor FR. ΔFosB ytimen ytimessä säätää ruoan vahvistamaa instrumentaalikäyttäytymistä ja motivaatiota. J Neurosci. 2006, 26: 9196-9204. [PubMed]
28. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, c-Junin dominoivan negatiivisen mutantin aivojen alueen spesifinen ilmentyminen siirtogeenisissä hiirissä vähentää herkkyyttä kokaiinille. Brain Res. 2003, 970: 73-86. [PubMed]
29. Perrotti LI, Hadeishi Y, Barrot M, Duman RS, Nestler EJ. ΔFosB: n indusointi palkkioihin liittyvissä aivorakenteissa kroonisen stressin jälkeen. J Neurosci. 2004, 24: 10594-10602. [PubMed]
30. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace D, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. AFosB kerääntyvät GABAergiseen solupopulaatioon ventral tegmentaalisen alueen takaosassa psykostimulanttikäsittelyn jälkeen. Eur J Neurosci. 2005, 21: 2817-2824. [PubMed]
31. Pich EM, Pagliusi SR, Tessari M, Talabot-Ayer D, Hooft van Huijsduijnen R, Chiamulera C. Nikotiinin ja kokaiinin riippuvuutta aiheuttavien ominaisuuksien yhteiset hermosubstraatit. Science. 1997, 275: 83-86. [PubMed]
32. SAMHSA. O. o. A. Tutkimukset, Alkoholi- ja huumetietojen kansallinen selvityskeskus. Rockville, MD: NSDUH-sarja H-28; 2005. 2004in kansallisen huumeidenkäytön ja terveystutkimuksen tulokset: kansalliset havainnot.
33. Sim-Selley LJ, Martin BR. R- (+) - [2,3-dihydro-5-metyyli-3 - [(morfolinyyli) metyyli] pyrrolo [1,2, 3-de] -1,4-b-entsoksatsinyyli] - (1-naftalenyyli) metanoni-mesylaatin vaikutus kroonisen antamisen vaikutukseen (WIN55,212-2) tai delta (9) -tetrahydrokannabinoli kannabinoidireseptorin sopeutumiseen hiirissä. J. Pharmacol Exp Ther. 2002, 303: 36-44. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
34. Sutton MA, Karanian DA, Self DW. Tekijät, jotka määräävät taipumusta kokaiinin etsimiseen käyttäytymistä raskauden aikana. Neuropsychopharmacology. 2000, 22: 626-641. [PubMed]
35. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. FosB-stabiilisuuden säätäminen fosforylaatiolla. J Neurosci. 2006, 26: 5131-5142. [PubMed]
36. Vanderschuren LJ, Di Ciano P, Everitt BJ. Dorsal striatumin osallistuminen kokeen kontrolloimaan kokaiinin etsimiseen. J Neurosci. 2005, 25: 8665-8670. [PubMed]
37. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thorén P, Nestler EJ, Brené S. ΔFosB säätelee pyörän toimintaa. J Neurosci. 2002, 22: 8133-8138. [PubMed]
38. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DEH, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone FJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. ΔFosB-induktio orbitofrontalisessa kuoressa välittää toleranssia kokaiinin aiheuttamaan kognitiiviseen toimintahäiriöön. J Neurosci. 2007, 27: 10497-10507. [PubMed]
39. Nuori ST, Porrino LJ, Iadarola MJ. Kokaiini indusoi striatan c-fos-immunoreaktiivisia proteiineja dopaminergisten D1-reseptorien kautta. Proc Natl Acad Sci USA. 1991, 88: 1291-1295. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
40. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ. ΔFosB: ΔFosB: n olennainen rooli morfiinitoiminnassa olevissa ytimissä. Nat Neurosci. 2006, 9: 205-211. [PubMed]