Détection d'altérations moléculaires dans les neurones exprimant Fos activés par la méthamphétamine à partir d'un striatum dorsal chez le rat unique, à l'aide du tri cellulaire activé par fluorescence (XS) (2013)

J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 Aug 21.

Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y, Espoir BT.

Abstrait

La méthamphétamine et d'autres médicaments activent une petite proportion de tous les neurones du cerveau. Nous avons précédemment développé une méthode basée sur le tri de cellules activées par fluorescence (FACS) pour caractériser les altérations moléculaires induites sélectivement dans les neurones activés qui expriment le marqueur d'activité neurale Fos. Cependant, cette méthode nécessite la mise en commun des échantillons de nombreux rats. Nous décrivons maintenant une méthode modifiée basée sur FACS pour caractériser les altérations moléculaires des neurones striataux dorsaux exprimant Fos chez un seul rat à l'aide d'une stratégie de pré-amplification multiplex.

L’immunohistochimie de Fos et NeuN (un marqueur neuronal) indique que 5% 6% des neurones du striatum dorsal ont été activés X min après des injections aiguës de méthamphétamine (90 mg / kg, ip) alors que moins de 5% ont été activés par des injections salines.

Nous avons utilisé FACS pour séparer les neurones marqués avec NeuN en neurones Fos-positifs et Fos-négatifs et avons évalué l'expression de l'ARNm à l'aide de RT-qPCR à partir de cinq neurones aussi positifs que Fos. La multiplication par 3-20 multipliée par le biais de la méthamphétamine des gènes précoces immédiats: homer-2, c-fos, fosB et ses isoformes (ΔfosB et une nouvelle isoforme ΔfosB-2) dans les neurones Fos-positifs mais pas Fos-négatifs. L'induction précoce immédiate de l'ARNm de gènes était 10 fois plus faible ou absente lorsqu'elle a été évaluée dans des échantillons non triés provenant d'homogénats d'un striatum dorsal unique. Notre méthode modifiée permet d'étudier des altérations moléculaires uniques dans les neurones activés par des médicaments ou des signaux associés aux médicaments dans des modèles de toxicomanie complexes.

La méthamphétamine et d'autres médicaments activent une petite proportion de tous les neurones du cerveau. Nous rapportons ici une méthode améliorée pour caractériser les altérations moléculaires induites sélectivement dans les neurones activés qui expriment le marqueur d'activité neurale Fos. Nous avons utilisé FACS avec une pré-amplification PCR ciblée pour évaluer l'expression génique aiguë induite par la méthamphétamine à partir d'aussi peu que des neurones exprimant 5 Fos d'un striatum dorsal chez un seul rat. La méthamphétamine a induit une multiplication par 3-20 des gènes précoces immédiats (IEG) dans les neurones Fos-positifs mais non-Fos-négatifs. La pré-amplification par PCR ciblée permet d'étudier des altérations moléculaires uniques dans des neurones activés par des médicaments ou des signaux associés à des médicaments dans des modèles de toxicomanie complexes.

Publié 2013. Cet article est une œuvre du gouvernement des États-Unis et est dans le domaine public aux États-Unis.