J Neurosci. 2006 May 10;26(19):5131-42.
Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ.
Boarne
Department of Psychiatry, Center for Basic Neuroscience, The University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, Texas 75390-9070, USA.
Abstract
De transkriptyffaktor DeltaFosB (ek wol FosB2 of FosB koarte) is in wichtige mediator fan 'e lange termyske plastikaasje dy't yn it hert feroarsake wurdt troch chronike eksposysje nei ferskate soarten psychoaktive stimuli, ynklusief drugs fan misbrûk, stress en elektroanvulsive krêften . In ûnderskate funksje fan DeltaFosB is dat, as ien kear yndividueel, it yn it harsens bestean bliuwt foar relatyf lange tiden fan 'e tiid yn it ûntbrekken fan fierdere stimulearring. De meganismen dy't dizze skynber stabiliteit binne, binne lykwols ûnbekend bleaun. Hjir litte wy sjen dat DeltaFosB in relatyf stabile transkriptyffaktor is, mei in heale leeftyd fan likernôch 10 h yn selskultuer. Fierder litte wy sjen dat DeltaFosB in phosphoprotein yn it harsens is en dat phosphorylaasje fan in tige konservearre serine residue (Ser27) yn DeltaFosB beskermet it fan proteasomale degradaasje. Wy biede ferskate rigels fan bewiis foar oan te lizzen dat dizze phosphorylaasje mediatisearre wurdt troch kasesin kinase 2. Dizze befinings foarmje de earste bewiis dat DeltaFosB phosphorylat is en toant dat it phosphorylaasje bydrage oan har stabiliteit, dy't yn 'e kearn fan' e mooglikheid is om langstige oanpassingen yn 't brain te mediatorjen.
Ynlieding
De transkripsjefaktor Î "FosB, ek wol FosB2 of FosB oanjûn, is in C terminus-truncated splice fariant fan 'e direkte earmgen fosb (Dobrazanski et al., 1991; Nakabeppu en Nathans, 1991; Yen et al., 1991). As fosb hat FosB in DNA-bindende basisdomein en in leucine-reitsje, wêrby't it dimerisearret mei Junproteinen om aktinator-protein-1 (AP-1) transkriptfaktorkomplexen te foarmjen, dy't de ekspresje fan in protte genen regelje (Morgan en Curran, 1995; Rylski en Kaczmarek, 2004). Nettsjinsteande diel fan 'e transaktivaasjedomein fûn yn' e C terminus fan FosB, Î "FosB funksjonearret as sawol in potinte transkrystaal aktivator en repressor yn kultuerele sellen en yn it harsens (Dobrazanski et al., 1991; Nakabeppu en Nathans, 1991; Chen et al., 1997; McClung en Nestler, 2003; Kumar et al., 2005).
ΔFosB wurdt nei hege nivo's op in regio-spesifike manier yn 't brein nei kronyk, mar net acute, eksposysje nei in ferskaat oan psychoaktive stimulaasjes, ynklusyf stress, beskate lesions, antipsychoatyske en antydekrante medisinen, drugs fan misbrûk, en natuerlike belangen (Hope et al., 1994b; Hiroi en Graybiel, 1996; Moratalla et al., 1996; Bing et al., 1997; Mandelzys et al., 1997; Kelz et al., 1999; Werme et al., 2002; Andersson et al., 2003; Colby et al., 2003; Peakman et al., 2003; Perrotti et al., 2004; Zachariou et al., 2006). De yndeksje fan Î "FosB hat direkte oanbean oan de funksjonele effekten fan ferskate fan dizze stimulâns op it harsens. De persistinsje fan Î "FosB sels yn 'e ôfwêzigens fan in ekstra stimulearring ûnderskiedt it fan alle oare Fos famylje-transkripteursfaktoaren, dy't rapper yn aksje op akute stimulaasjegroepen feroarsaakje, weromfalle nei basaalnivo binnen in pear oeren en allinich de desensibilisaasje nei chronike stimulaasje sjen litte (Hope et al., 1992; Daunais et al., 1993; Persiko et al., 1993; Hiroi en Graybiel, 1996; Perrotti et al., 2004). Dit makket Î "FosB in oantreklik kandidaat om medisine te wêzen fan 'e lang duorjende feroaringen yn' e gene ekspresje dy't ûnderstypje fan de stabile neuronale oanpassingen dy't troch guon chronike stimuli feroarsake binne.
Om't de langere oanwêzichheid fan Î "FosB foarkomt yn 'e ûntjouwing fan fierdere yndeksearring fan har mRNA (Chen et al., 1995), hawwe wy spekulearre dat, yn tsjinstelling ta folsleine FosB en alle oare Fos famyljewapen, dy't yntinsintich ynstabyl binne, Î "FosB kin in ûnôfhinklik stabile transkriptyffaktor wêze (Hope et al., 1994b; Chen et al., 1997; Nestler et al., 2001; McClung et al., 2004). Boppedat die immunoblotting fan analyse fan akute- fersus chronike-stimulearre harsenswisseling suggerearre dat Î "FosB skodt yn skynt Mr (molekulêre massa) fan â € š33 kDa yn 'e acute tastân om â € ~35â € "37 kDa by in chronike behanneling (Hope et al., 1994a; Chen et al., 1995). Om't der gjin bewiis foar it bestean fan oanfoljende mRNA's dy't foar dizze ferskate isoformen kodearje kinne, hawwe wy fierder spekulearre dat Î "FosB posttranslaasje feroaret en dat miskien dit bydrage oan har ungewoane stabiliteit. Oant no ta hawwe lykwols gjin biogemyske analyses fan 'e ôfdieling of posttranslatale feroarings fan' e "FosB" rapportearre. It doel fan 'e hjoeddeiske stúdzje wie om te befestigjen oft Î "FosB in phosphoprotein is en oft phosphorylaasje in rol spilet yn' e stabiliteit.
Foarige seksjeFolgjende seksje
Materialen en metoades
Sûchdieren en DNA-konstruksjes.
PC12-sellen (Clontech, Mountainview, CA) waarden kulturearre yn hege glukose DMEM, dy't l-glutamin (L-Gln) befettet en oanfolle mei 5% fetale bovine-serum (FBS), 10% hynder serum (beide fan Invitrogen, Carlsbad, CA) , 100 U / ml penicilline, en 100 μg / ml streptomycin (beide fan Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). HeLa-sellen (American Type Culture Collection, Manassas, VA) waarden kulturearre yn heul-glukose DMEM dy't L-Gln hawwe en oanfolle mei 10% FBS, penicilline en streptomycin. Sawol cellgeneilen waarden behannele by 37 ° C yn in fiifde 5% CO2 atmosfear.
Foar de transiente transfections mei DNA waarden PC12 of HeLa-sellen op sân-platen platen (mei kollagen I foar PC12-sellen plakt) sa om 90-% 100% de oare deis te berikken en waarden doe transfizearre troch Lipofectamine 2000 (Invitrogen) . Yn guon eksperiminten (sjoch Figs. 1⇓⇓⇓⇓⇓-7), Î "FosB waard transientearich yn PC12-sellen ekspresearre troch ynfeksje mei rekombinante herpes-simplex-virus (HSV).
Î "FosB en FosB cDNA's waarden fan ús eigen pTetop-konstruksjes (Chen et al., 1997), en subklonearre yn in pcDNA3.1 fektor (Invitrogen). Dizze pcDNA3.1-Î "FosB / FosB-konstruksjes waarden brûkt foar ekspresje yn sûchdieren en as in sjabloan foar site-direkte mutagenes. Rekombinant HSV-Î "FosB waard sa't as earder beskreaun is (Neve et al., 1997), en de tarieding hie in titer fan â,1 Ã- 108 pfu / ml.
Pulse-jaget eksperiminten.
Ungefear 24 h nei ynfeksje / transfeksjonearring waarden sellen (PC12 of HeLa) yn seiswelle platen twa oant trije kear wosken mei 2 ml PBS en ynkubearde op 37 ° C foar â € œ1 h yn 2 ml Cys / Met-freem DMEM ( Invitrogen) oanfold mei 5% dialysjoneel FBS (Hyclone, Logan, UT) om intrazellulêre poolen fan Met en Cys te ûntfangen. Oan 'e ein fan dizze â € œstjeroenâ € perioade waarden drugs (as sellen te behannele wurde) tafoege, en sellen waarden markearre (puls) mei 12â € "25 μCi of 35S Protein Labeling Mix (PerkinElmer, Wellesley, MA) foar â € œ1 h by 37 ° C om alle nij synthesized protten te markearjen. De radiolabel waard dêrnei fuortslein troch de sellen twa oant trialen te pinnen mei 2 ml PBS, en de 35S-labelde proteins waarden folge (josels) troch it ferfangen fan it medium mei â € œkoldâ € (netradioaktyf) medium te kompensearjen mei 5% FBS en it opnimmen fan de sellen op ferskate tiidpunten. Cell-behanneling waarden yn 'e jacht hâlden. Alle sifers fan dizze eksperiminten sjogge ferlykbere begjinpunten fan 'e ûnderskate proteins om fergelikingskens te fergrutsjen fan harren draachflappen.
Dieren en chronike elektroonvulsive besparring.
Adult Sprague Dawley manlike ratten (200 - 300 g, Charles River Laboratories, Kingston, RI) wurde ien kear tagelyk behannele mei elektroanvulsive krêften (ECS) foar 7- 9 d. ECS waard as earder beskreaun dien (Hope et al., 1994a) brûke in an Ugo Basile (Comerio VA, Itaalje) ECS-ienheid mei de folgjende ynstellings: frekwinsje, 100-pulses / s; puls mei, 0.5 ms; skokduering, 1.0 s; en aktueel, 75 mA. Sham-beheardieren waarden parallele behannele troch it tapassen fan de ear-clipelektroden sûnder elke elektryske stream.
32 P metabolike kaartsje.
Foar it oankundigjen fan harsensplaten waarden ratten dekapitearre, de harsens wurde snel fersnite, en 300 μm foarkommende kortikaat waarden mei in DSK-mikrosljochter (Ted Pella, Redding, CA) fekke. De sliepers waarden ynstutsen yn plastic platen yn 2 ml phosphate-defiende artifisearre CSF (ACSF) en bewarre yn 30 ° C ûnder konstant genêzend bubbling mei in O2/ CO2 gemiksel (Hemmings et al., 1989). De slienen (twa slices per tube) waarden mei 1.3 mCi foar 8-10 h yn 'e oanwêzich of ôfwêzigens fan okadaïsoer (100 ng / ml) markearre. Oan 'e ein fan dizze ynkubaasje waarden de sliepen op syn minst trije kear slaen mei kjeld fan ACSF en dêrnei homogenisearre troch sonication yn 250 μl fan kâld radioimmunoprecipitation test (RIPA) buffer [PBS, pH 7.4, 150 mm NaCl, 1% (v / v ) Igepal, 0.5% (w / v) Natrium deoxycholate, 0.1% (w / v) SDS, 1 mm EDTA] befettet foardat it brûken mei SDS oant 0.6%, protease-inhibitor-cocktail foar sûchdieren (brûkt yn 5 μl / ml; Sigma-Aldrich), phosphatase ynhibitor cocktails I en II (brûkt yn 1: 100; Sigma-Aldrich), 1 mm PMSF, en 2% glycerol. Homogenaten waarden doe kocht foar 15 min en lêzen troch sintrifugaasje by 15,000 × g foar 15 min. Proteinkonzentasje yn de resultate supernatanten waard beoardiele mei de BCA-protivassay (Pierce, Holmdel, NJ).
Foar de 32P-labeling fan kulturearre sellen, ~ 24 h nei ynfeksje / transfeksje, sellen waarden twa oant trije kear wosken mei phosphatefrije medium en yndrukt yn dit medium foar ~1 h. Nei dizze hongersperioade, 0.2-0.3 mCi fan 32PH3PO4 (PerkinElmer) waarden oan elk goed tafoege, en sellen waarden markearre foar 4-12 h ôfhinklik fan it soarte eksperiment (sjoch figuren 1-7 foar spesifikaasjes). Selielen waarden dus trije kear wosk mei PBS en lysearre op iis foar 15 min mei 50 μl fan oanfolle RIPA-buffer. Lysates waarden sammele troch it skreppen en wurde 10 kear troch in 25 ga-needle omgongen om DNA te sând, te keatsen foar 10 min en sintrifugearre op 15,000 rpm foar 15-30 min by 4 ° C. De lêzere lysaten (supernatanten) waarden oerbrocht nei in nije rûch en in BCA-protytest (Pierce) waard útfierd. Alle sifers fan dizze eksperiminten sjogge ferlykbere bedraggen fan totaal wildtyp (WT) en S27A ΔFosB-proteins om fergeliking fan harren relative phosphorylationnivo te optimearjen.
Chemicals en selskultuer behannelingen.
Okadaïsäure (OA; Sigma-Aldrich) waard yn ethanol oplost en brûkt yn in lêste konsintraasje fan 100 ng / ml. 5,6-Dichloro-1-β-d-ribofuranosyl-benzimidazol (DRB; Biomol, Plymouth Treffen, PA) waard opdield yn dimethylsulfoxide (DMSO; Sigma-Aldrich) en brûkt yn sellekultuer oan in definitive konsintraasje fan 50 μm. Spermine (Sigma-Aldrich) waard oplost yn wetter en brûkt yn in lêste konsintraasje fan 200 μm. Calphostin-C (Biomol) waard oplost yn DMSO en brûkt yn 0.2 μm, wylst phormol 12-myristate 13-acetat (PMA; Promega, Madison, WI) yn DMSO oplost en brûkt waard yn 0.1 μm. Myristoylated-autocamtide-2-ferbûn yntiidbere peptide (m-AIP; Biomol) waard oplost yn wetter en brûkt yn in definitive konsintraasje fan 1 en 10 μm. De breedspektrum-proteine kinase-ynhibitoren H-7 en H-8 (Biomol) waarden oplost yn wetter en brûkt by in final konsintraasje fan 150 en 200 μm respektivelik. MG132 (Calbiochem, San Diego, CA) en Epoxomicin (Peptides International, Louisville, KY) waarden beide yn DMSO oplost en brûkt by in lêste konsintraasje fan 12.5 en 7.5 μm. Yn alle eksperiminten waard DMSO (fyts) tafoege oan sellen as nedich om in konstante bedrach fan DMSO oer behannelingen te behâlden. Foar 32P-labeling eksperiminten waarden de medisinen fuortendaliks foardien foar it label en bewarre foar de oerbleaune fan de etiketperioade. Foar puls-eksperiminten waarden medisinen oanbean oan 'e tiid fan Cys / Met "honger," troch de etiketperioade te hâlden en dêrnei yn' e jasmiddel te foarkommen. De proteasome-ynhibitoren waarden alle 3-4 h yn 'e eftergrûn ferparte om de fluggens fan dizze peptiden te kompensearjen.
ΔFosB-immunoprecipitation, immunoblotting, en autoradiografy.
Foar immunoprecipitationen waarden lysates waarden ferwiderje 1: 5 mei plain RIPA om de SDS-konsintraasje nei 0.1% te bringen foardat jo mei immunoprecipitation (IP) trochgean. Om gjin nspeksifisearjende ferbining te beheinen, waarden de lysaten earst lilk makke troch immunoprecipitearjen mei netimmune IgG en proteïne G-Sepharose (Sigma-Aldrich) om op syn minst 4 h. ΔFosB waard doe immunoprecipitearre fan de lêzere lysaten mei in goatysk polyklonale antykodym dy't in ynterne epitop erkend yn beide FosB en ΔFosB (SC-48G, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) oan 0.5-1 μg IgG per 10 μg fan lysatyprotein (50-300 μg fan folslein protein) yn in totaal volume fan 0.5 ml. IP's waarden op 4 ° C ferdwûnen op in rotator foar at least 8 h en doe waard 15 μl fan proteïne G-Sepharose tafoege en IP's waarden mingde foar at least in oare 4 h. IP's wiene pelletearje troch spinnen by 3000 × g foar 3-5 min by 4 ° C, trije kear wast mei 0.5 ml kâlde platte RIPA en twa kear mei kâlde PBS mei 0.1% Tween 20. IPs waarden doe resuspendearre yn 0.5 ml kâlder PBS, oerbrocht, pellet yn in nije rûch, en immunoprecipitearre protten waarden doe eluulearre troch de tafoeging fan 15-25 μl fan 2 × Reduzearjen fan Laemmli-protein-sample-buffer. Dit IP-protokol levere yn 'e spesifike en effektive ôftindiging fan praktysk allegear fan' e ΔFosB yn 'e lysat. De immunoprecipitearre proteins waarden ûnderdiel fan SDS-PAGE troch de hiele IP te laden op in 12.5% Tris-HCl Criterion-Gel (Bio-Rad, Hercules, CA) en dêrnei oerbrocht nei PVDF of nitrocellulose. Nei ôfrin wie de membra luchtdroege en 32P- en 35S-radiomeleare proteïne waarden troch autoradiografy brûkt troch de autoradiografyske film Kodak (Rochester, NY), en troch phosphorimaging mei in Storm (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) PhosphorImager. Totaal (unphosphorylatisearre en phosphorylatearre) ΔFosB yn cell-lysaten of brain homogenaten waard ûntdutsen troch immunoblotting fan of it immunoprecipitearre protein (mei deselde membraan te brûken om de 32P-markearre proteïn), of fan lykweardige mjitten fan lysat / homogenate-protein ûndersteld SDS-PAGE en oerbrocht nei PVDF of nitrocellulose. De membra waard earst blokkearre troch it ynkubaten mei 1% (w / v) netfat droechmole (Bio-Rad) yn PBS te kompensearjen mei 0.1% (v / v) Tween 20 (Sigma) foar 1 h by 25 ° C. De membrane waard doe oerweldig by 4 ° C immunoblotted mei ús eigen antibody anti-FosB polyklonale antykodynprodukte dy't ûntnommen wurde tsjin amino-acids 1-16 fan FosB / ΔFosB (brûkt by 1: 10,000). Nei primêre ynkubaasje waarden membranes fjouwer kear wûn foar 5 min mei blokkearjen fan puffer, en doe ynkubearde op 25 ° C foar ~1 h mei in geit anti-kanon IgG konjugearre oan hynder peroxidase (brûkt by 1: 5000 by it blokkearjen fan puffer, fanôf Vector Laboratories, Burlingame, CA). Membranes waarden dan trije kear wûn foar 10 min mei blokkearjen fan puffer en ien kear foar 5 min mei PBS. Totaal ΔFosB-proteinbands waarden visualisearre op Kodak MR-film troch ferbettere chemiluminescence (Pierce) en / of troch fekking fan fluoreszinsje mei de ECL-Plus-reagenzjes (Amersham Biosciences) en de Storm PhosphorImager.
Overexpresje en reiniging fan rekombinante ΔFosB fan ynsekten-sellen.
ΔFosB waard eksperimintearre yn Sf9 ynsekten-sellen as in N terminus hexa-His-tagged protein (N-His (6) ΔFosB) mei it Bac-to-Bac baculovirus ekspressteksysteem (Invitrogen) en neffens de ynstruksjes fan de fabrikant. Koartsein wie de ΔFosB cDNA (residuys 2-237) foarôfgeand oan de affiniteit N-terminal tag MGHHHHHHAG waard subklonearre yn 'e pFASTBacTM1 fektor, dy't brûkt waard om rekombinante baculovirus te generearjen. Sf9-sellen waarden ynskreaun mei rekombinant-virus, en N-His (6) ΔFosB waard út ferskate chromatografyske stappen út cell-lysaten gien, ûnder oaren affiniteitskromatografy mei in nickelkolom (Qiagen, Valencia, CA), anionenaasje mei in mono-Q-kolom (Amersham Biosciences), en grutte útsluting mei in gel-filtration kolom (Amersham Biosciences).
In vitro fosforaasjeûndersiken.
In vitro De phosphorylation-reaksjes foar de tiidkursus en stoichiometry-analyse waarden útfierd yn in fermogen fan 30 μl mei substrat fan 10 μm (N-His (6) ΔFosB of in positive kontrôle-substrat), 250 μm ATP, en 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, de buffer dy't troch de kinase-fabrikant levere wurdt, en ien fan 'e folgjende kinasen: CK2 (20 ng / μl; Upstate, Charlottesville, VA), CaMKII (10 ng / μl; Upstate), PKC (1.6 ng / μl; Calbiochem) of p70S6K (2.5 mU / μl; Upstate). Tiidûntwikkelingen waarden útfierd troch it fuortsterkjen fan 5 μl-aliquots út 'e reaksje-oplossing by de oantsjutte tiidpunten en it tafoegjen fan in globaal volume fan 4 × Reduzearjen fan Laemmli-protein-sample-buffer. Michaelis-Menten kinetyske parameter foar de CK2-reaksje wurde bepaald ûnder empirysk definiearre lineêre fêste betingsten. Dizze reaksjes waarden foar 15 min ynfierd yn in fermogen fan 10 μl mei 2 ng / μl-enzyme, 250 μm ATP, 1 μCi / μl [γ-32P] ATP, en N-His (6) ΔFosB-konsintraasjes rint fan 2.5-30 μm. Alle reaksjes waarden fûn by 30 ° C yn in wetterbad. Nei SDS-PAGE en fêsting fan it gel mei Bio-Safe Coomassie (Bio-Rad), waard it gel droech, en 32P-phosphate incorporation waard beoardiele troch phosphorimaging analyse (sjoch hjirûnder, Data kwantifikaasje, berekkeningen en statistiken).
Twa-dimensionale phosphopeptide kaart en phosphoamino acid analyze.
Beide fan dizze analyze wiene dien as beskreaun troch Ploegh en Dunn (2000). Koartsein, droege giele fragminten 32P-markearre ΔFosB (of út in vitro reaksjes of fan immunoprecipitaten fan metabolike markearre sellen), waarden útset, rehydratisearre, wosken en ûndersteld mei tryptyske digestion. De supernatant mei de tryptyske digestionprodukten waard lyophilisearre en de lyophilate woskere meardere kearen en resuspendearre yn 10 μl fan elektrophoresispuffer, pH 1.9. Sample (3 μl) waard op in cellulose-dûns-lagen-chromatografy (TLC) plaat (Analtech, Newark, DE) bepaald en yn ien dimens troch elektrophoresis skieden en de oare dimens troch opsteande TLC. De resultaten phosphopeptidekaarten waarden visualisearre troch autoradiografy en phosphorimaging. Foar phosphoamino-sûrre analyse wurde 2 μl fan de tryptyske digests dy't yn elektrophoresis-puffer resuspende waarden troch de HCl-hydrolysis yn 105 ° C fûn foar 25 min yn 3 m HCl ûnder in N2 atmosfear. De reaksje waard stoppe troch in seisfâldige ferwidering yn wetter, en de miks wie lyofilisearre. It Lyophilat waard resuspendearre yn 5 μl fan elektrophoresis-buffer, pH 1.9, en spotted op in cellulose TLC plaat tegearre mei phospho-Ser, -Thr, en -Tyr standerts. Elektrophoresis waard oer ien helte fan 'e lingte fan' e TLC-plaat útfierd mei elektrophoresis-puffer, pH 1.9, en dan waard de plaat oerbrocht yn 'e pH 3.5-puffer, en elektrophoresis waard foltôge. De phosphoamino-sûkelestanden waarden visualisearre troch spuiten fan TLC-plaat mei in 1% (v / v) ninhydrin-oplossing yn acetone, en de 32P-markearre amino-sûzele samples waarden visualisearre troch sawol autoradiografy as phosphorimaging.
SiRNA-induzearre CK2α klokken.
Wy brûkten in RNA ynterferinsje metoade om selektearjend it nivo fan CK2 (Di Maira et al., 2005). PC12-sellen waarden op 'e kollagen I-platte sânplaten platen om ~70-80% befetsje te kinnen de oare deis, doe't se transiente transfizearre waarden mei 20 nm (definitive konsintraasje) fan beide nontargeting siRNA of siRNA rjochte nei de mRNA fan' e katalytika α-subunit fan Rat CK2, mei help fan 5 μl fan de transfektagint SilentFectin (Bio-Rad) en folgje de ynstruksjes fan de fabrikant. Ungefear 24 h letter waarden sellen transiente transfizearre mei ΔFosB plasmid, lykas hjirboppe neamd. Ungefear 24 h letter (~48 h nei siRNA transfeksje), waarden sellen as 32P metabolike labeling of puls-jager-analyze lykas hjirboppe beskreaun. De neikommende fjouwer CK2α siRNAs waarden brûkt mei fergelykbere resultaten: 5'P-UCAAUCA-GACAUUAUGCGUU3 ', 5'P-UAGUCAUAUAAAUCUUCCGUU3', 5'P-AAAUCCCUG ACAUCAUAUUUU3 '(Dharmacon, Lafayette, CO). As negative kontrôle hawwe wy gebrûk makke Silencer negative kontrôle #3 siRNA fan Ambion (Austin, TX). De omfang fan CK2 klokken waard kontrolearre troch immunoblotting mei in anti-CK2 polyklonale antykodysteem (katalogus # 06-873 fan Upstate) oerlange by in 1: 1000 ferwidering. β-Tubulin waard brûkt as ladenkontrôle en waard besocht mei in monoklonale antykodysteem (katalogus # 05-661 fan Upstate) oer in 1: 20,000 ferwidering.
Side-rjochte mutagenes.
Mutaasje fan Ser27 nei Ala of oan Asp waard makke mei it brûken fan in Quick Change Site-Directed Mutagenese-kit (Stratagene, La Jolla, CA) en folget de ynstruksjes fan de fabrikant. Om de Ser27-mutaasjes yn 'e mûs ΔFosB-proteïne te fieren, waarden de neikommende mutagenes-primers brûkt. Ser27 nei Ala: (reverse primer) 5'GCCGAAGGAGTCCACCGAAGCCAGGTACTGAGACTCGGCGGAGGG3 '. Ser27 nei Asp (foargeande primer) 5'CCCTCCGCCGAGTCTCAGTACCTGGATTCGGTGGACTCCTTCGGC3 '. De mutearre bases binne fett, en it Ser27 codon is kursivearre.
Bioinformatics.
Potensjele fosforaasjeplakken en kanaasen foar ΔFosB waarden socht troch it yntsjinjen fan 'e mûsproteinewiziging nei spesjale databases wêrûnder ProSite (http://www.expasy.org/prosite/), PredictProtein (Rost et al., 2004), en NetPhosK (Blom et al., 2004).
Data kwantifikaasje, berekkeningen en statistiken.
De protte oanwêzige protte yn 'e PVDF of nitrocellulose membrane waard kwantifisearre mei in Storm PhosphorImager en de begeliedende ImageQuant software (Amersham Biosciences / Molecular Dynamics). Yn 'e seltsekultuer en harsensplassen binne phosphorylationstúdzjes, de wearden foar de 32P-markearre proteïne waarden doe ferdield troch de wearden foar totale ΔFosB, en útdrukt as in ferhâlding. Yn de in vitro phosphorylation stúdzjes, it bedrach fan 32P-markearre ΔFosB per mole fan ΔFosB (stoichiometry) waard berekkene as dit earder beskreaun waard (Sahin et al., 2004). Alle mjittingen waarden binnen it lineariteit fan it ynstrumint brûkt. Kinetyske parameter waarden berekkene mei it Michaelis-Menten-model, wêrby't V = Vmax[S] / ([S]+KM) en Vmax = k2[Etotaal]. It heale libben (t1/2) fan ΔFosB en FosB wurde ôfkamen fan 'e puls-chase plots (mei de netlineare regression dy't de gegevenspunten befestigje) en oerienkomme mei de tiid wêryn it bedrach fan it oerbliuwende protein is 50% fan' e orizjinele. Yn alle sifers binne de resultaten sjen litten fan minstens 2 oant trije unôfhinklike eksperiminten. Yn alle grafiken binne de gegevens gegevens gemiddeld ± SEMs (3 ≤ n ≤16). De statistyske betsjutting fan ferskillen waard beoardiele mei in ûnferwachts t test, korrizjearre foar ferskate fergeliking, en de asterisks oanjaan p ≤ 0.05.
Foarige seksjeFolgjende seksje
results
ΔFosB is in ûnôfhinklik stabile transkriptiefaktiver
Hoewol wy earder spekulearre hawwe dat ΔFosB in relatyf stabile transkripsjefaktor is (Nestler et al., 2001), in direkte analyse fan it wikselprofyl fan it eauwen is net tyd dien. Om dizze fraach te rjochtsjen, hawwe wy eksperiminten útfierd mei PC12-sellen, dy't wiidweidich brûkt waarden as in neuron-like seline-line, wêrtroch ΔFosB transienteard útfierd waard troch ynfeksje mei in rekombinante herpes simplex-virus (HSV-ΔFosB). Nije synthesizeare protten waarden metabolysk mei etiketten markearre 35S-Met / Cys, en it degradaasjekuster fan 35S-markearre ΔFosB (35S-ΔFosB) waard kontrolearre troch immunoprecipitearing it fan cell-lysaten, dy 't op ferskate puntenpunten nei it fuortheljen fan' e radiofilmearre amino-acids binne. Analyse fan 'e immunoprecipitaten troch SDS-PAGE en autoradiografy die bliken dat it healleef fan ΔFosB yn PC12-sellen ~10 h (Fig. 1). Dizze fynsten sjogge dat it healleaze libben fan ΔFosB heger is as dy fan de measte ynfoedbere transkripteursfaktoren (sjoch diskusje), mei folsleine FosB, wêrfan de helte fan 'e selskultuer rapportearre is ~90 min (Dobrazanski et al., 1991; Carle et al. 2004). Dêrnjonken is it fêst te hâlden dat de degradaasje fan ΔFosB gjin eksponentiell ferfalsking foar in earste grad pas is, mar it is biphasik, begjinnend mei in slimmer degradaasjefar. Dit liedt it bestean fan mear as ien ΔFosB-soarten en / of mear as ien degradaasjepaad.
Grutte ferzje:
Figure 1.
ΔFosB is in ûnôfhinklik stabile transkriptiefaktiver. It heale libben fan ΔFosB is ~10 h yn sel kultuer. ΔFosB waard ekspresearre yn PC12-sellen troch either ynfeksje mei HSV-ΔFosB of transient transfektioasje mei ΔFosB-hanthavene plasmid, en sellen waarden ûnderdiel fan puls-jagen eksperiminten lykas beskreaun yn Materialen en Methoden. Ekjildige resultaten waarden ûntfongen, ûnôfhinklik fan de metoade dy't brûkt waard foar overexpressen ΔFosB. It figuer lit de tiidskursus (en fertsjinwurdigjend autoradiogram) fan 'e degradaasje fan ΔFosB sjen. De gegevens dy't skreaun binne binne de gemiddelde ± SEM fan op syn minst 15 persoanlike gegevenspunten dy't op syn minst fiif ûnôfhinklike eksperiminten krije. Foar fergeliking is it rapportearre half-life fan folsleine FosB oanjûn.
ΔFosB is in phosphoproteine yn brain
Wy hawwe hypotezeisearre dat posttranslatale modifikaasje fan ΔFosB bydrage kinne oan har skynbere stabiliteit. Om't phosphorylaasje oanwêzich is om de aktiviteit fan transkripsjefaktoren op in soad wizen modulearje, ynklusyf har stabiliteit (foar besjen, sjoch Desterro et al., 2000; Whitmarsh en Davis, 2000), ûndersocht oft ΔFosB in phosphoproteine is. Hjirtroch waard ΔFosB ekspresje yn rat rat mei yntellekt chronische ECS, in behanneling bekend om hege nivo's fan ΔFosB, benammen yn fronton cortex (Hope et al., 1994a). Ien dei nei de lêste ECS-behanneling, as ΔFosB-nivo's heech bliuwe, waarden dûnte frontale kortikaatskippen opsteld en metabolysk kaartsje mei 32P-orthophosphate. In parallele set fan slits waard net radiomeleare, en dizze waarden brûkt om folsleine ΔFosB-nivo te fêstigjen. Nei immunoprecipitation mei in spesifyk anti-FosB / ΔFosB-antykoade en skieding fan de immunoprecipitearre proteins troch SDS-PAGE, phosphorylatearre 32P-markearre ΔFosB waard ûntdutsen troch autoradiografy, wylst de totale ΔFosB ûntdutsen waard troch immunoblotting. Dizze analyze die bliken dat ΔFosB phosphorylat yn it harsens is, as bewiisd troch in spesifyk 32P-markearre band fan ~35 kDa oanwêzich yn 'e chronisch behannele brain-samples, mar is feastlik net te bekenjen yn' e skambehearskingen (Fig. 2A). Dit is konsekwint mei it feit dat, yn it ûntbrekken fan chronische stimulaasje, basale nivo's fan ΔFosB tige leech binne. De spesifike eigenskip fan 'e immunoprecipitation-reaktie is yllustrearre troch it ûntbrekken fan sinjaal yn' e nonimmune IgG-presidint.
Grutte ferzje:
Figure 2.
ΔFosB is in phosphoproteine yn brain. A, ΔFosB is phosphorylatisearre yn it brain. Endogenous ΔFosB waard yn rat rat te indulearre troch chronische ECS-behanneling as beskreaun yn Materialen en metoaden. Foaral kortyske skippen waarden metabolysk mei etiketten markearre 32PH3PO4 foar ferskate oeren. Nei homogenisearring fan 'e slizen waard ΔFosB immunoprecipitearre en phosphorylatearre ΔFosB (32P-ΔFosB) waard ûntdutsen troch autoradiografy (toppaniel). Totaal ΔFosB yn netradioaktive immunoprecipitaten waard ûntdutsen troch immunoblotting (bottom pan). As negatyf kontrôles binne it immunoprecipitate fan in skam behannele bist en nonimmune IgG werjûn. B, Kandidaten-phosphorylation-sites en kinasys mei oerienkommende prediksoarten foar de mûs ΔFosB-proteinsonyf waarden krigen troch bioinformatyske analyze. De kandidaatstellingen mei de hegere predikaasje-punten wurde markearre yn 'e eignersneed en binne yn' e tabel opnommen. De DNA-binde (basis) domein en leucine-zipper binne fett yn 'e proteinside. C, D, ΔFosB phosphorylaasje wurdt ferhege troch de Ser / Thr-phosphatase ynhibitor OA. C, 32P-ΔFosB-nivo's yn immunoprecipitaten fan frontale kortike skippen mei de opnij (Ctr) of oanwêzichheid fan 100 ng / ml OA (grafyk en toppaniel) waarden troch autoradiografy erkend. De ûnderste paniel befettet totale ΔFosB fûn yn immunoprecipitaten fan un labelele skieden troch immunoblotting. D, PC12-sellen waarden befeilige mei HSV-ΔFosB of HSV-LacZ (fektor) en metabolysk kaartsje mei 32PH3PO4 yn 'e ôfwêzigens (Ctr) of oanwêzigens fan 100 ng / ml OA. 32P-ΔFosB-nivo's yn immunoprecipitaten waarden ûntdutsen troch autoradiografy (grafyk, toppaniel). De ûnderste paniel befettet totale ΔFosB te finen yn sel lysates troch immunoblotting.
As earste stap nei it útlizzen fan hokker kinase (s) en side (s) yn 'e ΔFosB phosphorylaasje belutsen binne, hawwe wy de amino-sûzere sesje ûnderwerpen foar ferskate bioinformatyske analyzes. Dit die bliken dat ΔFosB gjin Tyr-phosphorylation-kandidaatplakken befettet, befettet in oantal Ser / Thr kinase-konsensus-sites, wêrûnder trije CaMKII-siden, trije CK2-websides en twa PKC-sites mei hege phosphorylaasje-predikaasje (Fig. 2B). As, as presidearre troch bioinformatika, wurdt ΔFosB allinnich op Ser- of-Thr-residenzen phosphorylatisearre, dan moat syn phosphorylaasje signifikant moduleare wurde troch de aktiviteit fan Ser / Thr phosphatasen. Om dizze hypoteze te hifkjen, kamen wy foar frontale kortyske slieken mei 32P-ortofosfat yn 'e oanwêzich of ôfwêzichheid fan OA, in Ser / Thr-protein-phosphatase-ynhibitor. Lykas yn 't oanjûn Figure 2C, OA feroarsake in grut (~2.5-fold) yn 32P-ΔFosB. It feroarsake ek in lyts groei fan totale ΔFosB-nivo's, dy't konsekwint is mei eardere rapporten dy't ferbân meitsje mei de karzinogenyske effekten fan OA om syn ferskillende direkte genêzen ynklusyf Fos-proteins (Miller et al., 1998; Choe et al., 2004). It net-resultaat is in signifikante folsleine ferheging (~ 60%) yn phosphorylated ΔFosB-nivo's.
Wy hawwe doe ûndersocht oft, yn PC12-sellen, dy't mear behearre binne foar eksperiminteel manipulaasje, hat ΔFosB in phosphorylaasje-patroan sjen litten dy't ferlykber is yn it brain. Wy produsearren ΔFosB yn PC12-sellen fia ynfeksje mei HSV-ΔFosB en metabolysk mei de sellen mei 32P-ortofosfat yn 'e oanwêzich of ôfwêzigens fan OA. De súksesfere ekspresjonearring en immunoprecipitation fan it proteïn fan HSV-ΔFosB-ynfekteare sellen is te sjen troch de oanwêzich sawol yn 'e immunoblêd (Fig. 2D, bottom panel) en de autoradiograaf (toppaniel) fan in band ~35 kDa, dy't net fûn binne yn de fektor-ynfeksearre sellen. As beoardielde yn it brain, feroarsake OA in lyts groei fan totale ΔFosB-nivoen, mar in folle heger (likernôch twa) groei yn 32P-ΔFosB, sadat in signifikante (~50%) net ferhege wurde yn 'e ΔFosB-phosphorylaasje. Fierder is konsekwint mei de bioinformatyske foarskattingen, behanneling fan PC12-sellen mei in Tyr-phosphatase-ynhibitor net in grutte feroarings yn 32P-ΔFosB-nivo (data net werjûn). Mei-inoar ferklearre dizze befinings dat ΔFosB phosphorylat is op Ser en / of thr-residenzen yn it harsens en yn PC12-sellen en befêstige dat lêste wêze soe om in goed cell-kultuersysteem te wêzen dêr't de phosphorylaasje en degradaasjeprofilen fan ΔFosB fierder ûndersocht wurde.
CK2 mar net PKC of CaMKII phosphorylaten ΔFosB in vitro
As hjirboppe beskreaun hat, hat de analyze fan 'e ΔFosB-amino-sûzere-senseur in hege predikaasje foar CK2, PKC, en CaMKII-phosphorylation sites. Om te bepalen hokker fan dizze kinasen kin phosphorylate ΔFosB, hawwe wy in searje útfierd in vitro Phosphorylation-reakties mei púnere kinasen en gereinige rekombinante ΔFosB. Lykas yn 't oanjûn Figure 3A, fan 'e trije kandidaten kinasen, allinich CK2 phosphorylated ΔFosB op in wichtige manier. Dêrnjonken waarden ferskate oare kinasees testen (bgl. GSK3 en p70S6K), mar miskien miskien te fereare phosphorylate ΔFosB (data net werjûn). Oanfoljende karakterisearring fan 'e CK2-reaksje troch de tiidkursanalyze die bliken dat dizze kinase de ynboaring fan ~0.5 mol fan phosphate per mole fan ΔFosB (Fig. 3B). It feit dat CK2 phosphorylate ΔFosB kin in vitro nei in heule stoichiometry (~ 50%) is suggestive fan in fysiologysk relevante reaksje. Dêrnei studearre wy de kinetik fan dizze reaksje troch ynkubatearjen fan CK2 yn 'e oanwêzigens fan tanimmende mjittingen fan gereinigte ΔFosB, en wy bepale dat CK2 phosphorylaten ΔFosB mei in Vmax fan 5.8 pmol · min-1 Μg-1 fan it enzyme, a KM fan 18.4 μm, en a kkat fan 0.2 / s (Fig. 3C). De wearden dy 't foar dizze kinetyske parameter krigen, stypje fierder it fysiologyske relevânsje fan dizze reaksje. Bygelyks de KM fan CK2 foar DARPP32, ien fan syn bekendste substraten, is 3.4 μm, en de kkat is ~0.3 / s (Girault et al., 1989); de KM foar ATP reitsje fan ~10-40 μm (Cochet et al., 1983; Silva-Neto et al., 2002), en dat foar kaartsje reart fan ~10-50 μm (Meggio et al., 1977; Pyerin et al., 1987). Mei-elkoar jouwe dizze gegevens oan dat ΔFosB in bona fide substrat foar CK2 is in vitro.
Grutte ferzje:
Figure 3.
CK2 mar net PKC of CaMKII phosphorylaten ΔFosB in vitro. De autoradiograaf (toppaneel) lit it phosphorylatearre produkt sjen, en de Coomassie-finteldeleg (bottom panele) lit de totale ΔFosB oanwize yn 'e reaksje. A, Goarre rekombinante ΔFosB waard ûndersteld in vitro Phosphorylaasje troch ferskillende kandidaasjes (trije dêrfan binne te sjen). B, Tiidskurs en stôchyometyske analyzes oanjaan dat CK2 phosphorylate ΔFosB in vitro mei in stoichiometry fan ~50%. C, Kinetyske analyze fan 'e CK2-reaksje offere dat ΔFosB in bona fide is in vitro substrate. De linearisaasje fan 'e reaksje is yn in dûbel-rezjyp (bottom), mar de kinetyske paragrafen waarden ôflaat fan' e Michaelis-Menten-krom (top).
CK2 modulearret de phosphorylaasje en stabiliteit fan ΔFosB yn intakte sellen
Om de fysiologyske relevânsje fan 'e CK2-mediisearre phosphorylaasje fan ΔFosB te beoardielje, hawwe wy fereaske ferpartearre phosphopeptide-kaarting mei in vitro phosphorylat en PC12-cell-phosphorylatearre ΔFosB. Nei SDS-PAGE en gel eluksje fan 32P-ΔFosB (fan 't de in vitro reaksjes of fan 'e immunoprecipitate fan 32P-markearre sellen) waard it protte fergroeid mei Trypsin, en de resultaten phosphopeptiden waarden ûnderdrukt mei twa-dimensjele ôfskieding. Dizze analyse die bliken dat it haad phosphopeptide fan 'e CK2 reaksysteem mei ien fan twa grutte phosphopeptides fan ΔFosB phosphorylearre yn PC12-sellen (Fig. 4A), wylst de phosphopeptides dy't ûntstiene út de PKC of CaMKII (data net werjûn) reagearje net. Der waard in twadde ΔFosB-phosphopeptide oanwêzich yn 'e kaart fan PC12-sellen, mar fanwege de ûnfermogen fan ien fan' e kinasen hawwe wy ûndersocht om in ferlykbere phosphopeptid te generearjen in vitro, wite wy no net hoe't dit twadde phosphopeptide in phosphorylaasje-site hat, oars as it oare phosphopeptide of as it in ûnderskate tryptyske peptide is dat itselde phosphorylation-site hat.
Grutte ferzje:
Figure 4.
CK2 modulearret de phosphorylaasje en stabiliteit fan ΔFosB yn intakte sellen. A, CK2 mar net PKC liket it phosphorylate ΔFosB yn sellen. Twa dimensjeare phosphopeptidekaarten fan ΔFosB wurde phosphorylatearre troch CK2 of PKC in vitro of troch intakte PC12-sellen. De pylken sjen litte de gearkomste fan it CK2-phosphorylatearre peptide mar net de PKC-phosphorylatine mei ien fan de ΔFosB-phosphopeptides dy't út PC12-sellen binne. B, ΔFosB-phosphorylaasje yn PC12-sellen wurdt ferhege troch behannelingen fan sellen mei de potente CK2-aktivator spermine (SP) en fermindere troch behanneling mei de CK2-ynhibitor DRB. Yn tsjinstelling, ΔFosB-phosphorylaasje yn PC12-sellen waard net beynfloede troch behanneling mei in PKC-aktivator (PMA) of de PKC-spesifike ynhibitor calphostin-C (Calph). In represintative autoradiogram (toppaniel) en immunoblot (ûnderpaneel) wurde werjûn. C-F, Effekt fan CK2-aktiviteit op ΔFosB stabiliteit. De sifers sjen litte de tiidskursus (en fertsjinwurdigjend autoradiogram) fan 'e degradaasje fan' e FosB. PC12-sellen dy't transienteard ekspresjonearden ΔFosB waarden ûnderwurpen oan puls-jacht-eksperiminten dy't útfierden yn 'e ôfwêzigens of oanwêzigens fan' e CK2-ynhibitor DRB (C), de CK2-aktivator spermine (D), of it breedspektrum kinase-ynhibitor H-8 (E), dy't brûkt waard om te kontrolearjen foar de nûnspeptyske effekten fan DRB. F, Eftergrûn fan 'e katalytyske subunit fan CK2 op' e ΔFosB-stabiliteit. PC12-sellen waarden transfizearre mei sawol in nontargeting siRNA (Ctr) of siRNA-tarieding fan rat CK2α en 24 h letter transfizearre mei in ΔFosB plasmid. It toppanel befettet immunoblots fan folsleine-cell-lysaten dy't it effekt fan 'e CK2 siRNA op CK2- en ΔFosB-proteinivoivo sjen. De oerienkommende immunoblêd foar β-tubulin wurdt as in laden kontrôle oanjûn.
Om de fysiologyske relevânsje fan CK2 fierder as in ΔFosB kinasee te behanneljen, behannelje wy ΔFosB-ekspressive PC12-sellen mei twa medisinen dy't de CK2-aktiviteit modulearje. Lykas yn 't oanjûn Figure 4B, ΔFosB phosphorylaasje waard ferfallen troch behanneling fan PC12-sellen mei de cell-permeable CK2 ynhibitor DRB (Meggio et al., 1990; Szyszka et al., 1995), en ferhege troch behanneling mei de polyamine spermine, bekend as in potinte CK2 activator (Cochet en Chambaz, 1983; Meggio et al., 1983). Yn tsjinstelling mei de behanneling fan PC12-sellen mei de PKC-ynhibitor calphostin-C (Kobayashi et al., 1989; Tamaoki et al., 1990) of de PKC-aktivator PMA (Schmidt en Hecker, 1975; Behand al., 1989) hat gjin gefolch fan feroarings yn 'e ΔFosB-phosphorylaasje. Yn it gefal fan PMA ferheegje de lege (en net wichtige) yn 32P-ΔFosB kin rekkene wurde troch in fergrutting fan totale ΔFosB-nivo's dy't feroarsake binne troch dizze drug; In fact is it rapportearre dat phorbol-esters útdrukking fan ferskate famyljewapens Fos, lykas FosB (Yoza et al., 1992; Suh et al., 2004). Fierder is de behanneling fan sellen mei de spesifike sellepermableare CaMKII-ynhibitor m-AIP (Ishida en Fujisawa, 1995; Stevens et al., 1999) hat ek gjin resultaat fermindere ΔFosB phosphorylaasje (data net werjûn). Mei - inoar binne dizze resultaten konsistint mei ús in vitro fyntsjes en oanjaan dat yn intakte sellen ΔFosB wierskynlik phosphorylat is troch CK2 mar net PKC of CaMKII. It feit dat CK2-ynhibysje net folslein foarkomt ΔFosB-phosphorylaasje jout oan it bestean fan oanfoljende phosphorylaasje-sites yn it protein.
Wy folgje njonkenlytsen oft CK2 in rol spilet yn 'e oandiel fan ΔFosB en dêrtroch yn har stabiliteit. Hjirtroch hawwe wy eksperiminten eksperiminten brûkt mei ΔFosB-ekspresjonearjende PC12-sellen dy't behannele binne mei de CK2-ynhibitor of de CK2 activator dy't yn 'e phosphorylationstúdzje brûkt wurdt. Lykas yn 't oanjûn Figure 4C, behanneling fan sellen mei de CK2-ynhibitor DRB hie in wichtige ynfloed op de folsleine turnover fan ΔFosB, bewiisd troch de feroaring yn 'e foarm fan syn degradaasjeskurve, fan bifasyk nei in krom dy't tichter by dy fan in eksponentiell ferfal is. Oarsom feroarsake de oanwêzigens fan 'e CK2-aktivator spermine in signifikant fermindering fan de degradaasjegrad fan ΔFosB, dy't liede ta de accumulation fan it eagje yn' e earste oeren fan 'e syd (Fig. 4D).
As it gefal is mei in protte kinaseaktivatoren en inhibitoren, spermine en DRB kinne metabolike effekten bûten de modulaasje fan CK2-aktiviteit hawwe. Yn 't feit is de DRB ynsteld om de transkriptiefakt IIH (TFIIH) -associearre kinase te behâlden (Yankulov et al., 1995), dat in ynhibysje fan de RNA-polymerase II-middelse transkripsje. Om't dizze effekt fan 'e stabiliteit fan ΔFosB tink efkes beynfloede koe, analysearren wy it effekt fan de breed spectra kinase-ynhibitor H-8 (Hidaka en Kobayashi, 1992) op ΔFosB-omslach by in konsintraasje (200 μm) bekind om TFIIH-associated kinase te behâlden, mar net CK2 (Yankulov et al., 1995). Lykas yn 't oanjûn Figure 4E, behanneling mei H-8 hat gjin ynfloed op de wikseling fan ΔFosB. Fergelykbere resultaten waarden te krijen mei H-7, in oare breedspektrum kinase ynhibitor, brûkt yn in konsintraasje dy't de TFIIH-assosearre kinase ynmage, mar net CK2 (gegevens net werjûn). Dizze gegevens stypje fierder de ynterpretaasje dat de fermindering fan 'e stabiliteit fan' e ΔFosB-stabiliteit fan 'e DRB meastal tawiisd wurdt oan ynhibering fan CK2.
Om de funksje fan CK2 yn 'e ΔFosB-útwurking fierder te fêstlizzen, ûndersocht de gefolgen fan CK2 troch siRNA te klopjen. Wy hawwe dizze eksperiminten útfierd troch PC12-sellen te meitsjen dy't earst transfizearre waarden mei kontrôle (nontargeting) siRNA of in siRNA dy't de mRNA fan 'e katalytyske subunit fan rat CK2 (CK2α) en 24 h letter transfizearre mei ΔFosB. Lykas yn 't oanjûn Figure 4F, transfeksje mei de CK2α siRNA effisjint en spesifike klokken CK2α proteinivo's sûnder ynfloed op ΔFosB nivo's (toppanel). Pulse-jager analysearre dat it klokken fan CK2 resultaat yn in signifikante groei fan 'e ΔFosB-toetsingskrêft as bewiisd troch de flugger degradaasje fan it eau. It feit dat de CK2-aktiviteit (of troch DRB-behanneling of siRNA) ynhierd wurdt, ferheget de oerstreaming fan ΔFosB en resultaat yn it ferdwinen fan 'e slow-component fan' e biphasic-krom, wylst CK2-aktivearring de stadige faze fan 'e krom ferbetteret, it idee dat CK2 in rol spilet yn it regeljen fan ΔFosB-stabiliteit.
CK2 phosphorylaten ΔFosB op Ser27
Om de side (s) te identifisearjen op ΔFosB phosphorylatearre troch CK2, hawwe wy fosfor-amino-soaren analyse fan rekombinant ΔFosB fosforalisearre troch CK2 in vitro en fan ΔFosB phosphorylatisearre yn PC12-sellen. Dizze eksperiminten jouwe dat, yn beide gefallen, de iennige phospho-amino-siro dat fosfor-Ser (Fig. 5A). Dizze fûns, yn 'e mande mei de stoichiometry, krige foar de CK2 in vitro phosphorylation reaction (~ 50%) (Fig. 3B) en de oanwêzigens fan mar ien dúdlik plak op de CK2 phosphopeptide kaart (Fig. 4A), suggerearret dat CK2 phosphorylaasje fan ΔFosB wierskynlik beheind is oan in single serineresid. Dizze konklúzje is konsekwint mei de phosphorylation-konsensus-site-analyse (Fig. 2B), dy't allinich ien kandidaat produsearre, dat is Ser27, foar CK2. Taxonomyske analyze wûnen dat Ser27 heech konservearre is troch evolúsje ûnder famyljeleden fan Fos (Fig. 5B), suggerearret dat it in wichtige fysiologyske funksje drage kin.
Grutte ferzje:
Figure 5.
CK2 phosphorylaten ΔFosB op Ser27. A, Phosphoamino-acid-analyze fan CK2-phosphorylated (in vitro) en PC12-cell-phosphorylatearre ΔFosB toane dat yn beide gefallen de grutte residueel phosphorylat is serine. B, Cross-species-analyse fan FosB / ΔFosB-amino-sûzere-siken hat in heule behâld fan Ser27 ûnder Fos-famyljeleden út 'e minske nei zebrafish (tsjuster hichte). De acidere residuïte op posysje + 3, dy't foar de konseptestrjitte fan 'e CK2 ferplicht is, is net bewarre (licht hichte). C, HeLa-sellen waarden transienteard transfizearre mei either wildtype ΔFosB (WT) of ΔFosB, dy't in puntmutaasje hawwe om Ser27 te ferfangen mei Ala (S27A). Keallen waarden metabolysk mei etiketten markearre 32PH3PO4 en behannele mei fyts of mei spermine (SP) om CK2 te aktivearjen. In represintative autoradiogram (toppanel) en immunoblot (ûnderpaneel) fan 'e befeilige ΔFosB-immunoprecipitaten wurde sjen litten. It immunoprecipitate fan mock-transfizearre sellen (fektor) is te sjen.
Om te bepalen hokker Ser27 phosphorylat is yn ΔFosB, hawwe wy dizze residueel ferwiderje nei Ala en analysearren de gefolgen oer de phosphorylationstatus fan it eau. Hjirfoar hawwe wy HeLa-sellen brûkt (dy't mei hegere effisjinsje transfizearre wurde kinne) om transiente útdrukkingen fan WT of S27A-mutanten ΔFosB. Ungefear 24 h nei transfeksje waarden de sellen metabolysk mei labels makke 32P-ortofosfat, en hiele-cell-lysaten waarden taret. Nei folgjende immunoprecipitation en SDS-PAGE, 32P-ΔFosB waard ûntdutsen troch autoradiografy en totale ΔFosB troch immunoblotting. Lykas yn 't oanjûn Figure 5C (bottom panel), ΔFosB waard net fûn yn 'e fektor transfizearre sellen, wylst sellen transfizearre waarden mei WT of S27A mutanten ΔFosB mei sukses útdrukt it eau. Wy fûnen dat de S27A mutaasje feroarsake in signifikante (~30%) reduksje yn 32P-ΔFosB-nivo (Fig. 5C, toppaniel en grafyk), wat oanjout dat yn libbene sellen ΔFosB phosphorylat is op Ser27. Yn 'e ynstân om fest te meitsjen as yn sellen Ser27 yndie in protte phosphorylat is troch CK2, fergelike wy de kapasiteits fan' e CK2 activator spermine om de phosphorylaasje fan WT en S27A ΔFosB te modulearjen. As wy earder yn PC12-sellen te sjen binne (Fig. 4B), behanneling fan HeLa-sellen mei spermyn is sterk ferhege phosphorylaasje fan it WT-protein. It feit dat dizze effekt folle minder waard troch de mutation S27A (Fig. 5C) stipet de ynterpretaasje dy't Ser27 yn ΔFosB is in fysiologyske substrat foar CK2.
Phosphorylaasje fan Ser27 regelet stabiliteit fan ΔFosB
Nei't jo festigje dat de stabiliteit fan ΔFosB fergrutte wurdt as CK2 ynhiemt en fersterke wurdt as CK2 aktyf is (Fig. 4), en dat CK2 phosphorylaten ΔFosB op Ser27 (Fig. 5), hawwe wy foarsjoen dat foarkommen fan 'e phosphorylaasje fan dizze side de protein te destabilisearjen. Pulse-jacht-eksperiminten dy't mei HeLa-sellen fierd binne eksperiminteel útdrukkende as WT of S27A mutint ΔFosB, dúdlik dat de S27A-mutaasje resultaat yn in signifikante groei fan de fergrutting fan ΔFosB, en in gearhingjende ôfnimming fan it heale libben fan it protein (Fig. 6A). Wy hawwe doe ûndersocht oft dizze regelmaatmechanisme ek komt yn 'e mear neuron-like PC12 cell line. Dizze eksperiminten litte sjen dat, lykas wy yn HeLa-sellen beoardiele hawwe, de S27A-puntmutaasje feroarsaakje yn 'e PC12-sellen (fan ~11 nei ~4 h) in dramatyske ôfnimming fan' e heale libbenFig. 6B). It feit dat dizze destabilisaasje likegoed is dat feroarsake troch CK2-ynhibysje of klokken (Fig. 4) jout fierdere stipe foar it idee dat CK2-ferwidere phosphorylaasje fan Ser27 regelet de stabiliteit fan ΔFosB. Ekstra bewiis foar de regulatoaryske rol fan Ser27 phosphorylaasje op ΔFosB protein-ôfhanneling waard krigen troch in phosphomimetische Ser27 nei Asp mutaasje (S27D). De mutaasje fan 'e S27D wurdt as phosphomimetyk beskôge, om't it in grutte negatyf belesting (carboxyl) groep yn' e amino acid 27 plakt en dêrtroch dielt de phosphorylaasje fan Ser27. Lykas yn 't oanjûn Figure 6C, de S27D mutaasje feroarsake de tsjinoerstelde effekt fan 'e mutaasje S27A en soarge dat in protte sterker stabiger is as it WT-protein. Lykwols nei it effekt dat nei CK2 aktivearring (Fig. 4D), de S27D-mutaasje lei yn 'e accumulation en sa ferhege ΔFosB-nivo's yn' e earste oeren fan 'e syd.
Grutte ferzje:
Figure 6.
Phosphorylaasje fan Ser27 regelet de stabiliteit fan ΔFosB. A, C, Pulse-sykresisynstallaasje dy't it effekt fan Ser27 phosphorylaasje oanbelanget oer de wikseling fan ΔFosB. It degradearjende profyl en de heule libben fan 'e wyldtype ΔFosB (WT), de Ser27 oant Ala mutant (S27A), en de phosphomimetische Ser27 nei Asp mutant (S27D) wurde oanjûn. Dezelfde fynsten waarden yn HeLa-sellen te krijen (A) en PC12-sellen (B, C).
Ser27-phosphorylaasje stabilisearret ΔFosB troch it foarkommen fan syn proteasomale degradaasje
Om it begrip te meitsjen fan it meganisaasje dêr't de phosphorylaasje fan Ser27 stabilisearret ΔFosB, ûndersocht wy de mooglikheid fan de proteasome-ynhibitoren MG132 (Palombella et al., 1994; Tsubuki et al., 1996) en epoxomicin (Hanada et al., 1992; Kim et al., 1999) om de degradaasjegrad fan WT- en S27A-mutanten ΔFosB te modulearjen. Pulse-jagen eksperiminten waarden útfierd mei PC12-sellen dy't befeilige waarden mei in rekombinante HSV dy't wiidweidige WT of S27A ΔFosB ekspresje en behannele mei DMSO of ien fan 'e beide proteasome-ynhibitoren. Dizze eksperiminten litte sjen dat alhoewol't de degradaasjekrate fan it WT-protein relatyf ûnsichtich is foar de oanwêzigens fan ien fan 'e beide proteasome-ynhibitoren (Fig. 7A), dat fan 'e S27A mutint is gefoelich foar dizze drugs (Fig. 7B). Dit soarget dat de S27A-mutint yn tsjinstelling fan it WT-proteïne in doel is fan beskerming fan beskerming. De behanneling fan sellen mei elk MG132 of epoxomicin hat it effekt fan 'e S27A-mutaasje op' e degradaasjegrad fan 'e ΔFosB folslein feroare, troch in fergrutting fan' e heale leeftiid fan 'e S27A mutint fan ~4 nei ~9 h foar MG132 en nei ~ 12 h foar epoxomicin (Fig. 7B). Mei-elkoar sjogge dizze befinings dat phosphorylaasje fan ΔFosB op Ser27 it protein beskermje fan beskerming fan proteasomale en is dêrom essensjele foar har ungewoane stabiliteit.
Grutte ferzje:
Figure 7.
Phosphorylaasje fan Ser27 stabilisearret ΔFosB troch it foarkommen fan syn proteasomale degradaasje. A, B, Pulsase-analyze mei HSV-infizearre PC12-sellen dy't it degradearjenprofyl sjen litte en de heule libben fan wildtype ΔFosB (A) of S27A ΔFosB (B) yn 'e ûntbining of oanwêzichheid fan ien fan twa proteasome-ynhibitoren [MG132 en epoxomicin (Epoxo)]. Notysje fan it feit dat gjin medisyn in wichtige ynfloed hat op 'e ferkeap fan wyldtype ΔFosB, wylst behanneling fan sellen mei ien of protasomme-inhibitor yn' e stabilisearring fan S27A ΔFosB. C, In model foar de rol fan Ser27 phosphorylaasje yn 'e kapasiteit fan ΔFosB om medisinete langstme plastykens te mediatorjen. Eartiids wurdt in part fan ΔFosB stabilisearre yn 't brain troch de CK2-mediisearre phosphorylaasje fan S27. Dêrtroch is de akkumulaasje resultaat, dy't op 'e ein resultaat is ta langstige feroaringen yn' e gene ekspresje. Dizze stabile feroaringen yn 'e gene ekspresje drage oan stabile gedrachsferoaringen. Oarsom is de dephosphorylaasje fan S27 troch de Ser / Thr-phosphatasen PP1 en / of PP2A resultaat foar destabilisaasje fan it protein en syn ferwurking troch de proteasomale masines.
Foarige seksjeFolgjende seksje
Diskusje
Yn 'e hjoeddeiske stúdzje sjogge wy dat ΔFosB in heale leeftyd fan ~10 h yn' e sel kultuer hat, dat it stabelytseret yn ferliking mei folsleine lingte FosB en de measte oare ynfoegbere transkripteursfaktoren, wêrfan de heale libbens yn 'e sel kultuer sa koart wêze kinne as in pear minuten en selden oer 3 h (Hann en Eisenman, 1984; Dobrazanski et al., 1991; Roberts en Whitelaw, 1999; Ferrara et al., 2003; Hirata et al., 2004). Dêrnjonken fine wy dat ΔFosB phosphorylat yn it harsens is en dat syn phosphorylaasje gefoelich is foar de PP1 / PP2A ynhibitor okadaïsoar. Us selskultuerstúdzjes bewize dat de stabiliteit fan ΔFosB is modulearre troch CK2, mei hegere CK2-aktiviteit it stabilisearjen stabilisearjen. Uteinlik sjogge ús befiningen dat CK2 phosphorylates ΔFosB op in tige konservearre N terminus serine (S27) en bewize dat de phosphorylaasje fan S27 beskermt ΔFosB fan protasomale degradaasje. Wy geane dêrom in model út wêrby't phosphorylaasje fan ΔFosB op S27 troch CK2 in kritysk reglemintêre meganisme fan oerstreaming fan ΔFosB (Fig. 7C). Soksoarte phosphorylation-middeleaze stabilisaasje fan ΔFosB is funksjonele wichtich, om't ferhege nivo's fan ΔFosB yn 'e measte hânregio's sjen litten binne direkt regelje fan ferskate neuronale genen yn vivo en omtroch potensjele gedrachseffekten te ekspresjonearjen yn diermodellen fan ferskate neuropsychiatrische struorren (sjoch Ynlieding).
Hoewol de phosphorylaasje in flugge en reversibel manier is foar it regeljen fan de transkrystaalaktiviteit fan beskate transkripteursoarten, lykas CREB (cAMP-antwurd-elemint ferbinende protein) (Bohmann, 1990), it modulearjen fan de degradaasje fan transkriptive faktoaren jout in noch makliker (minder maklik reversibel) foarm fan regeling (Desterro et al., 2000). Transkriptive faktoaren dêr't syn funksjonele aktiviteiten regele wurde op it nivo fan har degradaasje binne ûnder oare NFκB (Desterro et al., 2000), c-Myc (Sears et al., 1999) en c-Fos (Ferrara et al., 2003), ûnder oaren. Yn in soad gefallen is phosphorylaasje in kaairegulator fan 'e stabiliteit fan in transkriptyffaktor, lykas is foar c-Fos (Okazaki en Sagata, 1995; Tsurumi et al., 1995), Fos-related antigen-1 (Fra-1) (Vial en Marshall, 2003), Fra-2 (Manabe et al., 2001), c-jun (Fuchs et al., 1996), JunB (Fuchs et al., 1997), ATF2 (Fuchs et al., 2000), en p53 (Buschmann et al., 2001). Us stúdzjes taheakje dêrnei ΔFosB oan dizze list fan transkriptive faktoaren dy't har funksjonele aktiviteiten regele troch syn phosphorylated-dependent stabiliteit.
CK2 is in ubiquitous en konstitutyf aktive Ser / Thr-kinase dy't oant no ta 300 beweide substraten hat identifisearre en is belutsen by meardere biologyske prosessen, ynklusief seldea en survival (Litchfield, 2003; Unger et al., 2004), stimulêre stress responsyen (Yanagawa et al., 1997; Kato et al., 2003), en DNA reparaasje en chromatine remodeling (Barz et al., 2003; Krohn et al., 2003). Mear as ien tredde fan de putative substraten fan CK2 binne protesten belutsen by de regeling fan geneeleksje (Meggio en Pinna, 2003). Yn 't feit hat CK2 in promininte kearn kinaseas (Krek et al., 1992) (foar resinsje, sjoch Yu et al., 2001) en ynteraksje mei de bZIP-domeinen fan ferskate transkripteursfaktoren (Yamaguchi et al., 1998). CK2-mediisearre phosphorylaasje is ek te sjen om de degradaasje te modulearjen (of elk te fergrutsjen of ferminderjen) fan protte proteins, ynklusyf IkB (Schwarz et al., 1996), PTEN (Torres en Pulido, 2001), lens ferbxin (Yin et al., 2000), chromatine-assoziend protein HMG1 (Wisniewski et al., 1999), en ferskate transkriptive faktoaren lykas HMGB (Stemmer et al., 2002), Myf-5 (Winter et al., 1997) en c-Myc (Channavajhala en Seldin, 2002). CK2 is meast reich yn harsens (Alcazar et al., 1988; Girault et al., 1990), en har aktiviteit is yngrepen yn in protte aspekten fan hurde funksje, wêrûnder neuronale oerwinning (Boehning et al., 2003), differinsjaasje (Nuthall et al., 2004), ion-kanaalfunksje (Jones en Yakel, 2003; Bildl et al., 2004), en lange termyn potensiaasje en neuronale plastikaasje (Diaz-Nido et al., 1992; Lieberman en Mody, 1999; Reikhardt et al., 2003).
Nettsjinsteande dit groeiende bewiis foar de rol fan CK2 yn 'e regeling fan neuronale funksje, is wat net bekend oer wat har aktiviteiten kontrôget. CK2 wurdt as konstitutyf aktyf, mei regeling fan har fermogen foar spesifike substraten fan phosphorylat te berikken meast oer feroaringen yn 'e ynterraelekuleare pleatsing (bgl. Cytosol vs nucleus) (Ahmed en Tawfic, 1994; Yu et al., 1999). Dizze ynformaasje soarget in wichtige fraach oer wat sinjalen binne nedich om 'e accumulaasje fan' e fosb yn 't bloed te sykjen nei chronike stimulearring (Fig. 7C). Ien fereaske is werhelle aktivaasje fan 'e fosB Gen en yndeksearring fan ΔFosB mRNA (Chen et al., 1995). Us gegevens jouwe oan dat CK2-phosphorylaasje fan ΔFosB kritysk is foar har stabiliteit, dy't suggerearret dat in twadde sinjaal nedich wêze kin foar de lange termyn effekten fan ΔFosB op gene ekspresje, nammentlik in sinjaal dat stimulearret de phosphorylaasje fan protein troch CK2. Dit kin de aktivearring fan CK2 by guon ûnbekende meganisme of syn transkaasje oan 'e kearn belutsen wurde. Alternatyf kin CK2-phosphorylaasje fan ΔFosB konstitutive wêze, sadat as ΔFosB-protein oerset wurdt yn reaksje op elke stimulus, wurdt in part fan it fosforalisearre en stabilisearre, sadat mei repetitive stimulaasje it heule nivo yn bekrêftige neuronen sammele.
Undersyks sjen dat CK2 en S27 wierskynlik net de ienige kinase-en-site-ferantwurdlikens binne foar ΔFosB-phosphorylaasje, omdat gjin ynhibysje fan CK2 noch de S27A mutaasje hielendal foarkomme koe ΔFosB phosphorylaasje. Troch deselde token is it feit dat de S27A mutaasje resultaat yn in 30% Reduksje fan phospho-ΔFosB stelt dat S27 in wichtige phosphorylaasje-site is op it eau. Wy binne, lykwols, ûndersyk nei oare putative kinasen en phosphorylationplakken op ΔFosB. Uteinlik sil it ek wichtich wêze om de phosphorylaasje fan S27 en elke oare phosphorylation-sites yn ΔFosB yn brain yn vivo nei ferskate soarten chronike stimulearring, bygelyks fia it gebrûk fan massespektrometry of phosphospeptyske antykladen.
As hjirboppe neamd wurdt, is S27 yn ΔFosB yn 'e evolúsje heech konservearre en ûnder oare Fos famyljewapens. It konsensus-site foar CK2 is lykwols net: sa as yn Figure 5B, allinich de FosB / ΔFosB (en de Zebrafish xenolog), mar net c-Fos of Fra-2, besykje in sertifikaat op + 3, in wichtige determinant fan CK2 phosphorylaasje (Marin et al., 1986; Meggio et al., 1994). Sa kin it fermelding fan CK2 phosphorylaasje op S27 kinne wêze wêrom't oare Fos-famyljeproteins net as stabile binne as ΔFosB. Dit ferklearret lykwols net wêrom't folsleine FosB, dy't itselde CK2 konsensus-side as ΔFosB hat, net lykwols stabilisearre. Wy witte net oft de folsleine lingte FosB wurdt troch CK2 phosphorylatearre op dizze konservearre residueel. De iennige rapporten fan FosB (Skinner et al., 1997) en c-Fos (Okazaki en Sagata, 1995; Chen et al., 1996) phosphorylaasje beskriuwe sites yn 'e C-terminaltriem fan dizze proteins, dy't net ferdwine yn ΔFosB. De potinsjele phosphorylaasje fan folsleine FosB en oare famyljewapen fan Fos troch CK2 freget direkte ûndersyk. Wol, ek as se phosphorylat binne, binne de oare Fos-famyljeproteinen bekend om motiven op har C termini te befetsje dy't de protten foar snelle degradaasje doeljePapavassiliou et al., 1992; Jariel-Encontre et al., 1997; Acquaviva et al., 2002). It is bygelyks beweard dat in streek fan ~21-residuen presintearret yn 'e C-terminus fan alle famyljewapen fan Fos, mar fennôge yn ΔFosB, docht as destabilisearjende domein foar c-Fos (Acquaviva et al., 2001). Wy fûnen dat hoewol dizze sesje lykwols destabilisearret folsleine FosB (Carle et al., 2004), it ûntbrekken fan dit domein yn ΔFosB net folslein rekken foar syn stabilisaasje. De kombinaasje fan it ûntbrekken fan dit C terminalus domein en Ser27 phosphorylaasje liket folslein te rekkenjen foar it ûngefear fiiffâldich ferskil yn 'e stabiliteit tusken ΔFosB en FosB.
Hoewol de degradaasje fan famyljewapen fan Fos is komplekse en net folslein begrepen, liket de beskerming fan proteasomal de wichtichste paden te wêzen (Salvat et al., 1999; Acquaviva et al., 2002; Ferrara et al., 2003). Data prisearje hjir, wêryn proteasomale ynhibitoren de teory fan ΔFosB-degradaasje net signifikant feroarje, stelle dat, oars as oare famyljewapen fan Fos, de ΔFosB it 26S-proteasom ûntkomme, en dat spielt in sintrale rol yn har stabilisearring. Wy geane dêrom in skema oan, wêrby't de fersterke stabiliteit fan ΔFosB oanbelanget is oan de kombinaasje fan twa haadfaktoaren: (1) de ôfwêzigens fan in C-terminal destabilisearjende domein en (2) de phosphorylaasje fan S27 troch CK2.
Gearfetsjend jout de hjoeddeistige stúdzje meganyske ynsjoch oer wêrom't ΔFosB, in produkt fan 'e direkte begjingen fosB, is, yn tsjinstelling ta alle oare famyljeleden fan Fos, in relatyf lange libbene eagje. Hoewol oare famyljewapen fan Fos wurde tawiisd om mediïnteare rapporteare, mar oergeunstige stimulus-transkripte-keppeling (Morgan en Curran, 1995), de relative stabiliteit fan ΔFosB befettet dêrby de fermogen om medisinen fan langereandere transkriptionale feroaringen dy't troch chronike stimulearje feroarsaakje. Dit stipet de opfetting dat ΔFosB funksjonearret as in stipe molekulêre skeakel yn it harsens, stadichoan konvertearje akute reaksjes op chronike oanpassingen. Identifikaasje fan Ser27 phosphorylaasje as sintraal meganisme foar de stabiliteit fan ΔFosB iepenet nije avenues foar de ûntwikkeling fan middels om de funksje fan ΔFosB te regelearjen en dêrmei de lange termyn effekten op neurologyske en gedrachske plastykiteit modulearje.
Foarige seksjeFolgjende seksje
Fuotnoten
- Opkomst novimber 21, 2005.
- Revyzje ûntfong febrewaris 21, 2006.
- Akseptearre april 2, 2006.
- Dit wurk waard stipe troch in Nasjonale Alliânsje foar ûndersyk nei Schizophrenia en Depresje Young Investigator Award oan PGU, in National Institute for Drug Abuse (NIDA) nasjonaal ûndersykspriis foar PGU, en stipet fan it National Institute of Mental Health en NIDA oan EJN We tankje Dr. James Bibb foar syn help mei de in vitro phosphorylation-assays, Dr. Ming-Hu Han foar syn help mei de tarieding fan sineesk te sizzen foar metabolike labeling en Dr. Rachael Neve foar har help mei de ferpakking fan de rekombinante HSV's.
- G. Rudenko's hjoeddeiske adres: Life Sciences Institute en Department of Pharmacology, Universiteit fan Michigan, 210 Washtenaw Avenue # 3163A, Ann Arbor, MI 48109-2216.
- Korrespondinsje moat rjochte wurde oan Eric J. Nestler, 5323 Harry Hines Boulevard, Dallas, TX 75390-9070. E-post: [e-post beskerme]
Referinsjes
Acquaviva C, Brockly F, Ferrara P, Bossis G, Salvat C, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2001) Identifikaasje fan in C-terminal tripeptide motyf dy't belutsen is by de kontrôle fan in rapidproteasomale degradaasje fan c-Fos proto-oncoprotein by de faze-transition G (0). oncogene 20:7563-7572.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Acquaviva C, Bossis G, Ferrara P, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2002) Multiple degradaasjepaden foar famyljewapen fan Fos. Ann NY Acad Sci 973:426-434.
Ahmed K, Tawfic S (1994) Mechanisme fan intrazellulêre regeling fan proteine kinase CK2: rol fan stimulus-mediisearre subnuklear feriening. Mol Mol Biol Res 40:539-545.
Alcazar A, Martinus E, Lopez-Fando J, Salinas M (1988) In ferbettere wizigingsproseduere en eigenskippen fan kazin kinase II út it brain. Neurochem Res 13:829-836.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Andersson M, Westin JE, Cenci MA (2003) Tiidperioade fan striatal DeltaFosB-like ymmunearaktiviteit en prodynorphin mRNA nivo nei ôfrin fan 'e kwantyske dopaminomimetyske behanneling. Eur J Neurosci 17:661-666.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Barz T, Ackermann K, Dubois G, Eils R, Pyerin W (2003) Genome-wide ekspresje-skermen jouwe in globale rol foar Protein kinase CK2 yn chromatine remodeling. J Cell Sci 116:1563-1577.
Oer I, Schmidt R, Hecker E (1989) Twa isozymes fan PKC fûn yn HL-60-sellen sjen in ferskil yn aktivaasje troch de phorbol-ester TPA. FEBS Lett 249:264-266.
Bildl W, Strassmaier T, Thurm H, Andersen J, Eble S, Oliver D, Knipper M, Mann M, Schulte U, Adelman JP, Fakler B (2004) Proteine kinase CK2 is gearstallearre mei lytse conductance Ca (2 +) - aktive K + -kanalen en regelet kanaal troch. Neuron 43:847-858.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Bing G, Wang W, Qi Q, Feng Z, Hudson P, Jin L, Zhang W, Bing R, Hong JS (1997) Long-term ekspresje fan Fos-related antigen en transiente ekspresje fan delta FosB dy't ferbûn binne mei oanfallen yn 'e rat hippocampus en striatum. J Neurochem 68:272-279.
Blom N, Sicheritz-Ponten T, Gupta R, Gammeltoft S, Brunak S (2004) Prediksje fan post-oersettingsglykosylaasje en phosphorylaasje fan protinen út 'e amino acid-sesje. Proteomics 4:1633-1649.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Boehning D, Moon C, Sharma S, Hurt KJ, Hester LD, Ronnett GV, Shugar D, Snyder SH (2003) Carbon monoxide neurotransmission aktivearre troch CK2 phosphorylaasje fan heme oxygenase-2. Neuron 40:129-137.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Bohmann D (1990) Transkriptyffaktor phosphorylaasje: in keppeling tusken sinjaerdransduksje en regeling fan geneeleksje. Cancer Cells 2:337-344.
Buschmann T, Potapova O, Bar-Shira A, Ivanov VN, Fuchs SY, Henderson S, Fried VA, Minamoto T, Alarcon-Vargas D, Pincus MR, Gaarde WA, Holbrook NJ, Shiloh Y, Ronai Z (2001) Jun NH2-terminal Kinase phosphorylaasje fan p53 op Thr-81 is wichtich foar p53-stabilisearring en transkrystaalaktiviteiten as antwurd op stress. Mol Cell Biol 21:2743-2754.
Carle TL, Ulery PG, Nestler EJ (2004) Ofwêzigens fan in bewarre C-terminal domein fan 'e Fos-famylje draacht by oan' e unike stabiliteit fan deltaFosB. Soc Neurosci Abstr 30: 692.2.
Channavajhala P, Seldin DC (2002) Functional interaction of protein kinase CK2 and c-Myc in lymphomagenesis. oncogene 21:5280-5288.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ (1995) Regulaasje fan delta FosB en FosB-eagele eauwen troch elektro-fûlike besmetting en koalyske behannelingen. Mol Pharmacol 48:880-889.
Chen J, Kelz MB, Hope BT, Nakabeppu Y, Nestler EJ (1997) Chronische Fos-oanienjende antigenen: stabile farianten fan ΔFosB dy't yn it hert feroarsaakje troch chronike behannelingen. J Neurosci 17:4933-4941.
Chen RH, Juo PC, Curran T, Blenis J (1996) Phosphorylaasje fan c-Fos by de C-terminus ferbetteret syn feroarjende aktiviteit. oncogene 12:1493-1502.
Choe ES, Parelkar NK, Kim JY, Cho Hw, Kang HS, Mao L, Wang JQ (2004) De proteinfosfatase 1 / 2A-ynhibitor okadaïsoid ferheget KRB en Elk-1 phosphorylaasje en c-fos ekspresje yn 'e rat striatum yn vivo. J Neurochem 89:383-390.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Cochet C, Chambaz EM (1983) Polyamine-mediïnte proteine phosphorylaasjes: in mooglike doel foar intrazellulêre polyamine-aksje. Mol Cell-Endokrinol 30:247-266.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Cochet C, Feige JJ, Chambaz EM (1983) Katalytyske en molekulêre eigenskippen fan in tige gelykte g-kastin kinase G fan bovine lunggewicht. Biochim Biophys Acta 743:1-12.
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW (2003) Striatal-cell-soarten spesifike overexpresje fan DeltaFosB stimulearret stimulearring foar kokaïne. J Neurosci 23:2488-2493.
Daunais JB, Roberts DC, McGinty JF (1993) Cocaine self-administraasje ferheft preprodynorphin, mar net c-fos, mRNA yn rat striatum. NeuroReport 4:543-546.
Desterro JM, Rodriguez MS, Hay RT (2000) Bestjoeren fan transkripsjefoksen troch earbewerging. Cell Mol Life Sci 57:1207-1219.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Diaz-Nido J, Armas-Portela R, Avila J (1992) Fergrutsjen fan cytoplasmyske kasesin kinase II-aktiviteiten begjint neurite-opbou nei DNA-synteze-ynhibysje yn NIA-103 neuroblastoma-sellen. J Neurochem 58:1820-1828.
Di Maira G, Salvi M, Arrigoni G, Marin O, Sarno S, Brustolon F, Pinna LA, Ruzzene M (2005) Proteine kinase CK2 phosphorylaten en upregulates Akt / PKB. Cell Death Different 12:668-677.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Dobrazanski P, Noguchi T, Kovary K, Rizzo CA, Lazo PS, Bravo R (1991) Beide produkten fan it fosB-gen, FosB en syn koarte foarm, FosB / SF, binne transkrystaal aktiveurs yn fibroblasts. Mol Cell Biol 11:5470-5478.
Ferrara P, Andermarcher E, Bossis G, Acquaviva C, Brockly F, Jariel-Encontre I, Piechaczyk M (2003) De strukturele determinanten dy't ferantwurdzje foar c-Fos-protrynproteasomale degradaasje ferskille neffens de betingsten fan 'e útdrukking. oncogene 22:1461-1474.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Fuchs SY, Dolan L, Davis RJ, Ronai Z (1996) Phosphorylation-ôfhinklike doelstellings fan c-jun ubiquitinaasje troch Jun N-kinase. oncogene 13:1531-1535.
Fuchs SY, Xie B, Adler V, Fried VA, Davis RJ, Ronai Z (1997) c-jun NH2-terminal kinasen target de ubiquitinaasje fan har oanbelangjende transkriptive faktoaren. J Biol Chem 272:32163-32168.
Fuchs SY, Tappin I, Ronai Z (2000) Stabiliteit fan 'e ATF2 transkriptiefaktuer wurdt regele troch phosphorylaasje en dephosphorylaasje. J Biol Chem 275:12560-12564.
Girault JA, Hemmings HC Jr, Williams KR, Nairn AC, Greengard P (1989) Phosphorylaasje fan DARPP-32, in dopamine- en campregulearre phosphoprotein, troch kasesin kinase II. J Biol Chem 264:21748-21759.
Girault JA, Hemmings HC Jr, Zorn SH, Gustafson EL, Greengard P (1990) Charakterisaasje yn it sûchdieren fan in DARPP-32 serine kinase identike oan casein kinase II. J Neurochem 55:1772-1783.
Hanada M, Sugawara K, Kaneta K, Toda S, Nishiyama Y, Tomita K, Yamamoto H, Konishi M, Oki T (1992) Epoxomicin, in nije antitumoragint fan mikrobiaal komôf. J Antibiot (Tokio) 45:1746-1752.
Hann SR, Eisenman RN (1984) Proteinen kodearre troch de minsk c-myc oncogene: ferskillende ekspresje yn neoplastyske sellen. Mol Cell Biol 4:2486-2497.
Hemmings HC Jr, Girault JA, Williams KR, LoPresti MB, Greengard P (1989) ARPP-21, in szyklik AMP-regulearre phosphoprotein (hear = 21,000), ferrike yn dopamine-ynternervearre harsensregio's. Amino-sûchse sesje fan 'e side is phosphorylatearre troch fysyske AMP yn intakte sellen en kinetyske stúdzjes fan har phosphorylaasje yn vitro. J Biol Chem 264:7726-7733.
Hidaka H, Kobayashi R (1992) Pharmacology fan proteina kinase ynhibitoren. Annu Rev Pharmacol Toxicol 32:377-397.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Hirata H, Bessho Y, Kokubu H, Masamizu Y, Yamada S, Lewis J, Kageyama R (2004) Instabiliteit fan Hes7-protte is krúsjale foar de somitegmentearring klok. Nat Genet 36:750-754.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Hiroi N, Graybiel, AM (1996) Atypyske en typyske neuroleptyske behannelingen stimulearje ûnderskate programma's fan transkripsjefaktuer útdrukking yn 'e striatum. J Comp Neurol 374:70-83.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ (1992) Regulaasje fan direkte eartiidske gene ekspresje en AP-1 ferbine yn 'e rat-kearn accumbens troch chronike kokaïne. Proc Natl Acad Sci Feriene Steaten 89:5764-5768.
Hope BT, Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ (1994a) Kronyske elektroonvulsive befestiging (ECS) behannelje resultaat yn ekspresje fan in lang duorrend AP-1 kompleks yn harsens mei feroare komposysje en skaaimerken. J Neurosci 14:4318-4328.
Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Sels DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ (1994b) Ynduksje fan in lang duorrend AP-1-kompleks bestiet út feroare Fos-like protten yn it harsens troch chronike kokaïne en oare chronike behannelingen. Neuron 13:1235-1244.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Ishida A, Fujisawa H (1995) Stabilisaasje fan kalmodulin-ôfhinklike proteine kinase II fia de autoinhibitêre domein. J Biol Chem 270:2163-2170.
Jariel-Encontre I, Salvat C, Steff AM, Pariat M, Acquaviva C, Furstoss O, Piechaczyk M (1997) Komplekse meganismen foar c-fos en c-jun degradaasje. Mol Biol Rep 24:51-56.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Jones S, Yakel JL (2003) Casein kinase ii (protein kinase ck2) regulearret serotonin 5-ht (3) receptor-kanaalfunksje yn ng108-15-sellen. Neuroscience 119:629-634.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Kato T Jr, Delhase M, Hoffmann A, Karin M (2003) CK2 is in C-terminal IkappaB kinase ferantwurdlik foar NF-kappaB aktivaasje yn 'e UV-reaksje. Mol Cell 12:829-839.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ (1999) Ekspresje fan 'e transkriptyffaktor deltaFosB yn it hert kontrolearret sensibiliteit foar kokaïne. Natuer 401:272-276.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Kim KB, Myung J, Sin N, Crews CM (1999) Proteasome-ynhibysje troch de natuerlike produkten epoxomicin en dihydroeponemycin: ynsichten yn spesifike en potensjaasje. Bioorg Med Chem Lett 9:3335-3340.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Kobayashi E, Nakano H, Morimoto M, Tamaoki T (1989) Calphostin C (UCN-1028C), in roman mikrobiaal ferbûn, is in heul potensjele en spesifike ynhibitor fan proteine kinase C. Biochem Biophys Res Commun 159:548-553.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Krek W, Maridor G, Nigg EA (1992) Casein kinase II is in oerwichtich nukleêre enzyme. J Cell Biol 116:43-55.
Krohn NM, Stemmer C, Fojan P, Grimm R, Grasser KD (2003) Protein kinase CK2 phosphorylatet de hege mobiliteit groep domeinsprotein SSRP1, wêrtroch de erkenning fan UV-skansearre DNA is. J Biol Chem 278:12710-12715.
Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DEH, Truong HT, Russo SJ, LaPlant Q, Whistler K, Neve RL, Self DW, Nestler EJ (2005) Chromodyn remodeling is in kaaimechanisme dy't ûnderdiel fan kokaïne-induzearre plastykstien yn striatum is. Neuron 48:303-314.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Lieberman DN, Mody I (1999) Casein kinase-II regelet de NMDA-kanaalfunksje yn hippocampale neurons. Nat Neurosci 2:125-132.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Litchfield DW (2003) Protein kinase CK2: struktuer, regeljouwing en rol yn selleele besluten fan libben en dea. Biochem J 369:1-15.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Manabe T, Kuramoto N, Nakamichi N, Aramachi K, Baba K, Hirai T, Yoneyama M, Yoneda Y (2001) Degradaasje fan c-Fos-protein, ekspresje troch N-methyl-d-aspartyske soar yn kearnfraksjes fan murine hippocampus. Brain Res 905:34-43.
Mandelzys A, Gruda MA, Bravo R, Morgan JI (1997) It ûntbrekken fan in persoanlik ferheven 37 kDa fos-feriene antigen en AP-1-lykas DNA-bindende aktiviteit yn 'e harsens fan Kainic acid-behannele fosB null mice. J Neurosci 17:5407-5415.
Marin O, Meggio F, Marchiori F, Borin G, Pinna LA (1986) Spesifikaasjes fan kasein kinase-2 (TS) fan rat-liver-cytosol. In stúdzje mei model peptide substraten. Eur J Biochem 160:239-244.
McClung CA, Nestler EJ (2003) Bestjoeren fan geneel ekspresje en kokaïnebelied troch CREB en DeltaFosB. Nat Neurosci 6:1208-1215.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ (2004) DeltaFosB: in molekulêre skeakel foar lange-oanpassing yn it harsens. Brain Res Mol Brain Res 132:146-154.
Meggio F, Pinna, LA (2003) Ien-tûzen-ien-ien substrat fan proteine kinase CK2? FASEB J 17:349-368.
Meggio F, Donella-Deana A, Pinna LA, Moret V (1977) Fosforylaasje fan kaseinfraksjes troch ratlever 'phosvitin kinase.' FEBS Lett 75:192-196.
Meggio F, Brunati AM, Pinna, LA (1983) Autophosphorylaasje fan type 2 kasesin kinase TS op sawol syn alpha- en beta-subuniten. Einfloed fan ferskate effektors. FEBS Lett 160:203-208.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Meggio F, Shugar D, Pinna LA (1990) Ribofuranosyl-benzimidazole-derivaten as ynhibitoren fan kasein kinase-2 en kasein kinase-1. Eur J Biochem 187:89-94.
Meggio F, Marin O, Pinna, LA (1994) Substratsseksenheid fan proteine kinase CK2. Mol Mol Biol Res 40:401-409.
Miller C, Zhang M, Hy Y, Zhao J, Pelletier JP, Martel-Pelletier J, Di Battista JA (1998) Transkrysjonele ynduksje fan cyclooxygenase-2-gen troch okadaic acid-inhibysje fan phosphatase-aktiviteit yn minsklike chondrocytes: co-stimulaasje fan AP-1 en CRE-nukleare ferbinende proteins. J Cell Biochem 69:392-413.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Moratalla R, Elibol B, Vallejo M, Graybiel, AM (1996) Netwurknivo feroaret yn ekspresje fan ynfoedige Fos-Jun-protesten yn 'e striatum by chronike koalynbehandeling en werombringen. Neuron 17:147-156.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Morgan JI, Curran T (1995) Goed begjin-genen: tsien jier op. Trends Neurosci 18:66-67.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Nakabeppu Y, Nathans D (1991) In natuerlik optredende ferkearde foarm fan FosB, dy't de Fos / Jun-transkrystaal aktiviteit yngiet. Sel 64:751-759.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Nestler EJ, Barrot M, Sels DW (2001) Delta FosB: in duorsume molekulêre skeakel foar ferslaving. Proc Natl Acad Sci Feriene Steaten 98:11042-11046.
Neve RL, Howe JR, Hong S, Kalb RG (1997) Yntroduksje fan de glutamate receptor subunit 1 yn motorneuronen yn vitro en yn vivo mei in rekombinante herpes-simplex-virus. Neuroscience 79:435-447.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Nuthall HN, Joachim K, Stifani S. (2004) Phosphorylaasje fan serine 239 fan Groucho / TLE1 troch proteine kinase CK2 is wichtich foar ynhibysje fan neuronale differinsjaasje. Mol Cell Biol 24:8395-8407.
Okazaki K, Sagata N (1995) De Mos / MAP kinase-poarte stabilisearret c-Fos troch phosphorylaasje en fersterket syn feroarjende aktiviteit yn NIH 3T3-sellen. EMBO J 14:5048-5059.
Palombella VJ, Rando OJ, Goldberg AL, Maniatis T (1994) De ubiquitin-proteasome-paad is ferplichte foar it ferwurkjen fan it prefekrêftprotein NF-kappa B1 en de aktivearring fan NF-kappa B. Sel 78:773-785.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Papavassiliou AG, Treier M, Chavrier C, Bohmann D (1992) Targeted degradaasje fan c-Fos, mar net v-Fos, troch in phosphorylation-ôfhinklik sinjaal op c-jun. Wittenskip 258:1941-1944.
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E (2003) Induzibele regionale spesifike ekspresje fan in dominante negative mutint fan c-jun yn transgene muzen fermindere de sensibiliteit foar kokaïne. Brain Res 970:73-86.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ (2004) Ynduksje fan DeltaFosB yn belesting-ferbûne brainstrukturen nei chronike stress. J Neurosci 24:10594-10602.
Persico AM, Schindler CW, O'Hara BF, Brannock MT, Uhl GR (1993) Brain transcription factor expression: effekten fan akute en chronike amfetamine en ynjeksje stress. Brain Res Mol Brain Res 20:91-100.
Ploegh HL, Dunn BM (2000) Post-oersettingswiziging: phosphorylaasje en phosphatasen. Yn: hjoeddeistige protokollen yn earmwittenskip (Dunn BM, ed.) Pp. 13.01-13.02. New York: Wiley en Soannen.
Pyerin W, Burow E, Michaely K, Kubler D, Kinzel V (1987) Katalytyske en molekulêre eigenskippen fan heulereifere phosvitin / kasein kinase-type II fan minsklike epitheliale sellen yn kultuer (HeLa) en relaasje mei ecto-proteine kinase. Biol Chem Hoppe Seyler 368:215-227.
Reikhardt BA, Kulikova OG, Borisova GY, Aleksandrova IY, Sapronov NS (2003) Status of the "protein kinase CK2-HMG14" system in age-related amnesia in rat. Neurosci Behav Physiol 33:799-804.
Roberts BJ, Whitelaw ML (1999) Degradaasje fan de basis helix-loop-helix / Per-ARNT-Sim homology-domein dioxin-receptor fia de ubiquitin / proteasome-paad. J Biol Chem 274:36351-36356.
Rost B, Yachdav G, Liu J (2004) De PredictProtein-tsjinner. Nucleic Acids Res 32:W321-W326.
Rylski M, Kaczmarek L (2004) Ap-1 docht yn 't harsels. Front Biosci 9:8-23.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Sahin B, Kansy JW, Nairn AC, Spychala J, Ealick SE, Fienberg AA, Greene RW, Bibb JA (2004) Molekulêre karakterisearring fan rekombinante maus adenosine kinase en evaluaasje as doel foar proefine phosphorylaasje. Eur J Biochem 271:3547-3555.
Salvat C, Aquaviva C, Jariel-Encontre I, Ferrara P, Pariat M, Steff AM, Carillo S, Piechaczyk M (1999) Binne der ferskate proteolytyske paadwizen dy't befoardere wurde oan c-Fos, c-Jun en p53-proteine-degradaasje yn vivo? Mol Biol Rep 26:45-51.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Schmidt R, Hecker E (1975) Autoxidaasje fan phorbolters ûnder normale opslach betingsten. Cancer Res 35:1375-1377.
Schwarz EM, Van Antwerp D, Verma IM (1996) Konstitúsjonele phosphorylaasje fan IkappaBalpha troch kasesin kinase II komt foardielich by serine 293: ferplichting foar degradaasje fan frije IkappaBalpha. Mol Cell Biol 16:3554-3559.
Sears R, Leone G, DeGregori J, Nevins JR (1999) Ras ferbettert Myc-proteinstabiliteit. Mol Cell 3:169-179.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Silva-Neto MA, Fialho E, Paes MC, Oliveira PL, Masuda H (2002) Fysyk nukleotide-ûnôfhinklike phosphorylaasje fan vitelline troch kasesin kinase II fan 'e Rhodnius prolixus oocytes. Ynsect Biochem Mol Biol 32:847-857.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Skinner M, Qu S, Moore C, Wisdom R (1997) Transkrystale aktivearring en transformation troch FosB-protein freget fosforaasje fan it karboxyl-terminal-aktivearringomhe. Mol Cell Biol 17:2372-2380.
Stemmer C, Schwander A, Bauw G, Fojan P, Grasser KD (2002) Protein kinase CK2 differinsjaal phosphorylate mais chromosomale hege mobiliteit groep B (HMGB) proteins modulearje har stabiliteit en DNA ynteraksjes. J Biol Chem 277:1092-1098.
Stevens I, Derua R, Rondelez E, Waelkens E, Merlevede W, Goris J (1999) Identifikaasje fan cyk, in fysyk B2 kinase, as in roman kalzium / kalmodulin-ôfhinklike proteine kinase II en har rol yn 'e Xenopus laevis oocyte maturation. Exp Cell Cell Res 252:303-318.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Suh HW, Choi SS, Lee JK, Lee HK, Han EJ, Lee J (2004) Regulearring fan c-fos en c-jun-gen ekspression troch lipopolysaccharide en cytokines yn primêre kultuerte astrocytes: effekt fan PKA en PKC-paden. Arch Pharm Res 27:396-401.
Szyszka R, Boguszewska A, Grankowski N, Ballesta JP (1995) Differentiell phosphorylaasje fan ribosomale siedende proteins fan heale sel mei twa endogenous proteine kinasen: casein kinase-2 en 60S kinase. Acta Biochim Pol 42:357-362.
Tamaoki T, Takahashi I, Kobayashi E, Nakano H, Akinaga S, Suzuki K (1990) Calphostin (UCN1028) en calphostine relatearre kombinaasjes, in nije klasse fan spesifike en potensjele ynhibitoren fan proteine kinase C. Adv Second Messenger Phosphoprotein Res 24:497-501.
Torres J, Pulido R (2001) De tumor-suppressor PTEN is phosphorylatearre troch de proteine kinase CK2 op syn C terminus. Implikaasjes foar PTENstabiliteit foar proteasome- mediarde degradaasje. J Biol Chem 276:993-998.
Tsubuki S, Saito Y, Tomioka M, Ito H, Kawashima S (1996) Differentiale ynhibysje fan kalpain en proteasomeaktiviteiten troch peptidyl aldehydes fan di-leucine en tri-leucine. J Biochem (Tokio) 119:572-576.
Tsurumi C, Ishida N, Tamura T, Kakizuka A, Nishida E, Okumura E, Kishimoto T, Inagaki M, Okazaki K, Sagata N (1995) De degradaasje fan c-Fos troch it 26S-proteasom wurdt befoardere troch c-jun en ferskate proteine kinasen. Mol Cell Biol 15:5682-5687.
Unger GM, Davis AT, Slaton JW, Ahmed K (2004) Protein kinase CK2 as regulator fan selber tafel: gefolgen foar kanker-therapy. Curr Cancer Drug Targets 4:77-84.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Vial E, Marshall CJ (2003) Ferhege ERK-MAP kinase-aktiviteit beskermet de FOS-famyljelid FRA-1 tsjin proteasomale degradaasje yn kolonkarzinoma-sellen. J Cell Sci 116:4957-4963.
Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S (2002) ΔFosB regulearret fytse. J Neurosci 22:8133-8138.
Whitmarsh AJ, Davis RJ (2000) Bestjoeren fan transkripsjefaktorfunksje troch phosphorylaasje. Cell Mol Life Sci 57:1172-1183.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Winter B, Kautzner I, Issinger OG, Arnold HH (1997) Twa putative protein kinase CK2 phosphorylation sites binne wichtich foar Myf-5-aktiviteit. Biol Chem 378:1445-1456.
Wisniewski JR, Szewczuk Z, Petry I, Schwanbeck R, Renner U (1999) Konstitúsjonele phosphorylaasje fan 'e siedende swakken fan' e hegere mobiliteit groep 1-protten troch kaasine kinase II fergruttet har konfiguraasje, stabiliteit en DNA-ferbinende spesifyk. J Biol Chem 274:20116-20122.
Yamaguchi Y, Wada T, Suzuki F, Takagi T, Hasegawa J, Handa H (1998) Casein kinase II interakt mei de bZIP-domeinen fan ferskate transkripteursfaktoaren. Nucleic Acids Res 26:3854-3861.
Yanagawa T, Yuki K, Yoshida H, Bannai S, Ishii T (1997) Phosphorylaasje fan strangprotein A170 troch kaasine kinase II-like aktiviteit yn macrophages. Biochem Biophys Res Commun 241:157-163.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Yankulov K, Yamashita K, Roy R, Egly JM, Bentley DL (1995) De transkrystale elongaasje-ynhibitor 5,6-dichloro-1-beta-d-ribofuranosylbenzimidazole ynhibiet transkriptiefakt IIH-assosjearre proteine kinase. J Biol Chem 270:23922-23925.
Yen J, Wisdom RM, Tratner I, Verma IM (1991) In alternative sluzde foarm fan FosB is in negative regulator fan transkrystaal aktivearring en transformation troch Fos-proteins. Proc Natl Acad Sci Feriene Steaten 88:5077-5081.
Yin X, Jedrzejewski PT, Jiang JX (2000) Casein kinase II phosphorylate lins ferbining 45.6 en is belutsen by syn degradaasje. J Biol Chem 275:6850-6856.
Yoza BK, Brooks JW, Mizel SB (1992) Ynduksje fan AP-1-transkriptoarmfaktorkomponenten by T-cell-aktivearring troch interleukin 1 en phorbol-esters. Cell Wachtwurde ferskillend 3:677-684.
Yu S, Wang H, Davis A, Ahmed K (2001) Folgen fan CK2 sinjalearje nei de kearnmatrix. Mol Cell Biochem 227:67-71.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Yu S, Davis AT, Guo C, Groen JE, Ahmed K (1999) Differinsjele tarieding fan proefine kinase CK2 nei de kearnmatrix op in transiente overexpresje fan har subuniten. J Cell Biochem 74:127-134.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ (2006) ΔFosB: in essensjele rol foar ΔFosB yn 'e kearn accumbens yn morfine aksje. Nat Neurosci 9:205-211.
CrossRefliteratuerdatabases MEDLINE
Artikelen dy't dit artikel befetsje
- Behaviorale en strukturele reaksjes op Chronike kokaine Oanfreegje in Feedforward Loop Involving {Delta} FosB en Kalzium / Calmodulin-ôfhinklike Protease Kinase II yn de Nucleus Accumbens Shell Journal of Neuroscience, 6 maart 2013, 33(10):4295-4307
- Striatal Overexpression fan {Delta} FosB ferbrûkt chronike Levodopa-yndirekte ûnwettige bewegingen Journal of Neuroscience, 26 mei 2010, 30(21):7335-7343
- Abstract
- Folsleine tekst
- Folsleine tekst (PDF)
- Abstract
- Folsleine tekst
- Folsleine tekst (PDF)
- Abstract
- Folsleine tekst
- Folsleine tekst (PDF)
- Abstract
- Folsleine tekst
- Folsleine tekst (PDF)
- Transkretaalmeganismen fan ferslaving: rol fan {Delta} FosB Philosophyske transaksjes fan 'e Royal Society B: Biologyske Wittenskippen, 12 oktober 2008, 363(1507):3245-3255
- Fermindere kwetsberens foar it wersteljen fan methamphetamine-sykje gedrach yn glialzelline-ôflaatjende neurotropyske fakty mutantmis De FASEB-journal, 1 july 2007, 21(9):1994-2004
- De Activator Protein-1-transkriptfaktor yn eare-epithelium kuerzenerzjy Molecular Cancer Research, 1 febrewaris 2007, 5(2):109-120
;