Bidh DeltaFosB a 'riaghladh gnìomhachd adhartachaidh Cck gu neo-dhìreach (2010)

Brain Res. 2010 Cèitean 6; 1329: 10 - 20.

Air fhoillseachadh air-loidhne 2010 Màrt 11. doi:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

Iain F. Enwright, III,1 Megan Wald,1 Madison Paddock,1 Ealasaid Hoffman,1 Raonaid Arey,2 Scott Edwards,2 Sade Spencer,2 Eric J. Nestler,3 agus Colleen A. McClung2, *

Fiosrachadh ùghdarraichte ► Fiosrachadh mu chòraichean agus ceadachd ►

Gheibhear an dreach deasaichte deireannach den artaigil seo den artaigil aig Brain Res

Faic artaigilean eile ann am PMC Dh'ainmich an artaigil foillsichte.

Rach gu:

Abstract

Tha e coltach gu bheil cuid de na h-atharrachaidhean bith-cheimiceach, structarail agus giùlain cudromach a tha air an adhbhrachadh le bhith a ’nochdadh cronail air drogaichean mì-ghnàthachaidh air am meadhanachadh leis a’ bhàillidh tras-sgrìobhaidh fìor sheasmhach ΔFosB. Tha obair roimhe air sealltainn gu bheil overexpression ΔFosB ann an luchagan airson seachdainean 2 a ’leantainn gu àrdachadh ann an abairt grunn ghinean ann an striatum, agus tha a’ mhòr-chuid dhiubh nas ìsle an dèidh seachdainean 8 de abairt ΔFosB. Gu h-inntinneach, chaidh àireamh mhòr de na ginean sin a lughdachadh ann an luchagan a ’toirt cus cuideam air a’ bhàillidh tras-sgrìobhaidh CREB. Cha robh e soilleir bhon sgrùdadh seo, ge-tà, a bheil ΔFosB geàrr-ùine a ’riaghladh nan ginean sin tro CREB. An seo tha sinn a ’faighinn a-mach gu bheil seachdainean 2 de overexpression ΔFosB a’ meudachadh abairt CREB ann an striatum, buaidh a tha a ’sgaoileadh le seachdainean 8. Tha an inntrigeadh tràth co-cheangailte ri barrachd ceangail CREB ri luchd-brosnachaidh gine targaid sònraichte san roinn eanchainn seo. Gu iongnadh, aon ghine a bha fo amharas targaid CREB stèidhichte air aithisgean roimhe, cholecystokinin (Cck), cha robh e fo smachd CREB ann an striatum. Gus tuilleadh sgrùdaidh a dhèanamh air riaghladh Cck às deidh overexpression ΔFosB, dhearbh sinn gu bheil overexpression ΔFosB geàrr-ùine ag àrdachadh an dà chuid Cck gnìomhachd adhartachaidh agus abairt gine. Bidh e cuideachd a ’meudachadh gnìomhachd ceangail aig làrach ceangailteach CREB ceangailteach (CRE) anns an Cck neach-adhartachaidh. Ach, ged a tha feum air làrach CRE airson faireachdainn basal àbhaisteach de Cck, chan eil feum air airson inntrigeadh ΔFosB de Cck. Air an toirt còmhla, tha na toraidhean sin a ’nochdadh, ged a tha inntrigeadh geàrr-ùine ΔFosB ag àrdachadh faireachdainn agus gnìomhachd CREB aig luchd-brosnachaidh gine sònraichte, chan e seo an aon dòigh anns a bheil ginean air an riaghladh fo na cumhaichean sin.

Keywords: niuclas accumbens, tar-sgrìobhadh, cuir-ris

Rach gu:

RO-RÀDH

Tha foillseachadh cronail air drogaichean mì-ghnàthachaidh ag adhbhrachadh atharrachaidhean bith-cheimiceach agus structarail ann an grunn roinnean eanchainn. Thathas den bheachd gu bheil na h-atharrachaidhean sin a ’toirt a-steach atharrachaidhean ann am pròifilean abairt gine anns an t-siostam mesolimbic. Tha an siostam seo air a dhèanamh suas de neurons dopaminergic a bhios a ’pròiseachadh bhon sgìre teasach ventral (VTA) anns a’ mheanbh-chuileag gu neurons spìosrach meadhanach anns na nucleus accumbens (NAc) (ventiat striatum) a bharrachd air grunn roinnean eanchainn eile. Thathas a ’moladh atharrachaidhean ann an gnìomhachd dà fhactar tar-sgrìobhaidh, pròtain ceangail eileamaid freagairt cAMP (CREB) agus ΔFosB (pròtain teaghlaich Fos), gus mòran de na h-atharrachaidhean bith-cheimiceach, structarail agus giùlain a tha air am faicinn le bhith a’ nochdadh cronail air drogaichean mì-ghnàthachaidh ( ath-sgrùdadh le Nestler, 2005).

Tha CREB na fhactar tar-sgrìobhaidh air a chuir an cèill gu h-iomlan a tha na bhall den teaghlach CREB / ATF. Bidh homodimers CREB a ’ceangal ri atharrachaidhean ann an sreath CRE (co-aontachd: TGACGTCA) a lorgar ann an luchd-adhartachaidh mòran de ghinean. Faodar fosphorylation de CREB (sa mhòr-chuid aig serine 133, ged a chaidh làraich eile a chomharrachadh) a bhrosnachadh le grunn easan a ’toirt a-steach an fheadhainn sìos an abhainn de gabhadairean dopamine (Cole et al., 1995). Nuair a thèid fosphorylation aig serine 133, bidh CREB a ’fastadh a’ phròtain ceangail CREB co-ghnìomhach (CBP) no pròtanan co-cheangailte a tha a ’leantainn gu barrachd faireachdainn gine (ath-sgrùdadh le Johannessen et al., 2004). Bidh foillseachadh cronail air drogaichean droch-dhìol codlaid no psychostimulant a ’toirt àrdachadh neo-ghluasadach ann an gnìomhachd CREB anns na nucleus accumbens (Barrot et al., 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), atharrachadh a thathar a ’smaoineachadh a lughdaicheas feartan buannachdail nan drogaichean sin agus a chuireas ri staid tòcail àicheil tarraing a-mach dhrogaichean (Nestler, 2005).

LThathas den bheachd gu bheil atharrachaidhean onger-maireannach do dhrogaichean mì-ghnàthachaidh air am meadhanachadh gu ìre le ΔFosB, tionndadh splice gu math seasmhach de FosB (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Nestler, 2008). Bidh buill teaghlaich Fos a ’lùghdachadh le buill de theaghlach Jun gus iom-fhillte pròtain activator 1 (AP-1) a chruthachadh. Bidh iom-fhillteachd tar-sgrìobhaidh AP-1 a ’ceangal ri atharrachaidhean den eileamaid freagairt AP-1 (co-aontachd: TGACTCA) gus tar-sgrìobhadh a riaghladh (ath-sgrùdadh le Chinenov agus Kerppola, 2001). Fhad ‘s a tha fìor dhroch bhuaidh air drogaichean mì-ghnàthachaidh a’ leantainn gu inntrigeadh geàrr-ùine (uair) de bhuill teaghlaich Fos (a bharrachd air barrachd gnìomhachd CREB), bidh barrachd dhrogaichean a ’nochdadh a’ leantainn gu cruinneachadh an FFBB a tha gu math seasmhach (Hope et al., 1994; Perrotti et al., 2008), a tha an abairt a ’leantainn airson seachdainean.

Tha luchagan dà-transgenic gu h-oideachail a ’toirt cus cuideam an dàrna cuid ΔFosB no CREB anns an striatum inbheach a’ taisbeanadh mòran de na phenotypes bith-cheimiceach agus giùlain a chithear ann am beathaichean a tha air am faicinn a-rithist gu psychostimulants no drogaichean mì-ghnàthachaidh eile. A.chomharraich nalysis de dh ’atharrachaidhean abairt gine anns na beathaichean transgenic sin grunn ghinean a chaidh an riaghladh le geàrr-ùine (seachdainean 2) overexpression de ΔFosB, atharrachaidhean co-cheangailte ri lùghdachadh concomitant ann an duais dhrogaichean. Bha na h-atharrachaidhean ann an abairt gine agus freagairt giùlain le ΔFosB geàrr-ùine gu math coltach ris an fheadhainn a chithear ann am beathaichean a ’toirt cus cuideam air CREB airson seachdainean 2 no 8 (McClung agus Nestler, 2003). An coimeas ri sin, lùghdaich overexpression fad-ùine (seachdainean 8) de ΔFosB faireachdainn mòran de na h-aon ghinean sin agus lean iad gu àrdachadh ann an duais dhrogaichean (Kelz et al., 1999; McClung agus Nestler, 2003).

Is e aon ghine a chaidh a chomharrachadh anns na sgrùdaidhean sin cholecystokinin (Cck), neuropeptide air a thoirt gu buil ann an grunn roinnean eanchainn, a ’toirt a-steach an striatum (Hokfelt et al., 1980). Faodaidh CCK tar-chur dopaminergic atharrachadh (Vaccarino, 1992), an sàs ann an duais agus daingneachadh dhrogaichean (Josselyn et al., 1996; Josselyn et al., 1997; Hamilton, et al., 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002), agus air a thoirt a-steach don striatum le cocaine cronach (Ding agus Mocchetti, 1992). A bharrachd air an Cck Thathas air sealltainn gu bheil neach-adhartachaidh a ’freagairt air gach cuid ionadan CREB agus AP-1 (Haun agus Dixon, 1990; Deaval, et al., 2000; Hansen, 2001). Leis gu bheil mòran de na ginean (nam measg Cck) a sheall barrachd faireachdainn às deidh an dà chuid CREB agus abairt geàrr-ùine ΔFosB aithnichte no fo amharas gineachan targaid CREB (McClung agus Nestler, 2003), bha sinn airson faighinn a-mach a bheil abairt geàrr-ùine ΔFosB a ’leantainn gu riaghladh nan ginean sin (le fòcas air Cck) tro riaghladh CREB no tro dhòighean riaghlaidh nas iom-fhillte.

Rach gu:

TORAIDHEAN

Bidh overexpression ΔFosB gu neo-ghluasadach ag àrdachadh ìrean CREB

Chleachd sinn blotadh an Iar gus sgrùdadh a dhèanamh air a bheil overexpression ΔFosB ag àrdachadh ìrean pròtain CREB ann an striatum luchainn. Airson an sgrùdadh seo, chleachd sinn luchagan dà-transgenic (loidhne 11A) a tha a ’giùlan an dà chuid transgene NSE-tTA agus transgene TetOp-ΔFosB. Às aonais doxycycline, tha na luchagan sin a ’nochdadh àrdachadh làidir ann an abairt ΔFosB anns na neurons dearbhach dynorphin ann an striatum (Kelz et al., 1999). Chaidh mòran aithris a dhèanamh air an dòigh seo air overexpressing ΔFosB agus tha e a ’ceadachadh cus-tharraing sònraichte sgìre, a tha co-chosmhail ris an inntrigeadh ΔFosB a chithear ann am beathaichean a tha fosgailte do chocaine cronail (Hope et al., 1994; Kelz et al., 1999). Fhuair sinn a-mach, ann an luchagan 11A overexpressing ΔFosB, chaidh ìrean pròtain CREB àrdachadh gu mòr às deidh seachdainean faireachdainn 2 agus thill na h-ìrean sin chun bhun-loidhne às deidh seachdainean faireachdainn 8 (Figear 1A, n = 8). Gus faighinn a-mach an gabhadh na h-atharrachaidhean ann an ìrean CREB le overexpression geàrr-ùine ΔFosB ath-riochdachadh ann an siostam eile, rinn sinn cus thairis air ΔFosB ann an ceallan PC12 agus lorg sinn gun do dh ’àrdaich ìrean CREB gu mòr (p <0.05) an coimeas ri smachdan (Figear 1B, n = 4). Tha na toraidhean sin a ’sealltainn gu bheil abairt geàrr-ùine ΔFosB ag àrdachadh ìrean pròtain CREB.

Figear 1

Figear 1

Bidh ìrean CREB a ’meudachadh le overexpression ΔFosB. Mion-sgrùdadh blot an iar air lysates bho (A) lucha striata bho lucha 11A far dox airson seachdainean 2 no 8 no (B) Ceallan PC12 a ’toirt cus thairis air ΔFosB. Dàta a-steach A air an sealltainn mar atharrachadh sa cheud ann an off dox an coimeas ...

Bidh an dà chuid ΔFosB agus CREB a ’ceangal ri luchd-adhartachaidh genes targaid sònraichte san striatum às deidh overexpression geàrr-ùine ΔFosB geàrr-ùine

Chleachd sinn measaidhean ChIP (immunoprecipitation chromatin) de stuth teannachaidh striatal gus faighinn a-mach an robh ceangaltas ΔFosB no CREB a ’tachairt aig luchd-brosnachaidh gine targaid sònraichte agus an deach an ceangal seo a mheudachadh às deidh overexpression geàrr-ùine ΔFosB. Rinn sinn mion-sgrùdadh air ceangaltas aig an BDNF agus Cck luchd-adhartachaidh, seach gu bheil an dà ghine air a riaghladh gu mòr às deidh overexpression geàrr-ùine ΔFosB, overexpression CREB, no làimhseachadh cocaine cronach (McClung agus Nestler, 2003). Rinn sinn mion-sgrùdadh cuideachd air ceangal aig an CDK5 neach-adhartachaidh, seach gu bheil e na thargaid dhìreach aithnichte de ΔFosB (Chen et al., 2000; Bibb et al., 2001; Kumar et al., 2005). Mu dheireadh, thomhais sinn ceangaltach aig an prodynorphin neach-adhartachaidh, oir tha sgrùdaidhean roimhe air faighinn a-mach gum faod e a bhith air a cheangal leis an dà chuid ΔFosB agus CREB fo chumhachan eadar-dhealaichte (Andersson et al., 2001; Zachariou et al., 2006).

Chaidh mion-sgrùdadh ChIP a dhèanamh air striata bho lucha 11A overexpressing ΔFosB airson seachdainean 2 a ’cleachdadh antibodies a tha ag aithneachadh CREB no ΔFosB. Fo chumhachan àbhaisteach, lorg sinn gu bheil ΔFosB a ’ceangal ris an CDK5 agus prodynorphin luchd-adhartachaidh, ged nach eil ceangal ceangailteach ri lorg aig an BDNF or Cck luchd-adhartachaidh (Clàr 1). A bharrachd air an sin, mheudaich overexpression ΔFosB ceangal ΔFosB aig an CDK5 neach-adhartachaidh, ach chan ann aig an prodynorphin neach-adhartachaidh. An uairsin thomhais sinn CREB ceangailteach aig na luchd-adhartachaidh sin agus lorg sinn gu bheil CREB a ’ceangal ris an CDK5, BDNF agus prodynorphin luchd-adhartachaidh, ach chan ann chun na Cck neach-adhartachaidh, ann an striatum àbhaisteach, agus gu bheil overexpression ΔFosB airson seachdainean 2 a ’meudachadh ceangal CREB aig an BDNF agus prodynorphin luchd-adhartachaidh, ach chan e an CDK5 neach-adhartachaidh. Air an toirt còmhla, tha na toraidhean sin a ’sealltainn gum faod ΔFosB agus CREB an dà chuid a cheangal ri luchd-brosnachaidh gine sònraichte leithid prodynorphin agus CDK5, ge-tà, tha ceangal CREB gu sònraichte ri luchd-adhartachaidh eile leithid BDNF. A bharrachd air an sin, tha overexpression ΔFosB a ’leantainn gu àrdachadh ann an ceangaltas ΔFosB aig luchd-adhartachaidh sònraichte, mar a bhiodh dùil, ach cuideachd ri ceangal CREB ri luchd-adhartachaidh sònraichte, co-chòrdail ris an inntrigeadh CREB ΔFosB-meadhanaichte a chaidh fhaicinn aig an àm seo.

Clàr 1

Clàr 1

A ’ceangal phròtainean riaghlaidh putative ri diofar luchd-adhartachaidh ann an luchagan a’ toirt cus cuideam air ΔFosB airson dà sheachdain.

Tha obair roimhe air sealltainn gu bheil atharrachaidhean ann an abairt gine a tha air an adhbhrachadh le overexpression ΔFosB fad-ùine co-cheangailte ri atharrachaidhean chromatin, gu sònraichte, acetylation de histone H3, aig luchd-brosnachaidh gine sònraichte (Kumar et al., 2005). Gus faighinn a-mach am faodadh seo cunntas a thoirt air atharrachaidhean ann an abairt gine air overexpression ΔFosB geàrr-ùine, thomhais sinn ceangal de histone acetylated H3 (atharrachadh histone co-cheangailte ri cromatin gnìomhach tar-sgrìobhaidh), no histone methylated H3 (Lys9, atharrachadh histone co-cheangailte ri tar-sgrìobhadh. chromatin neo-ghnìomhach). Fhuair sinn a-mach nach do rinn cus cuideam de ΔFosB airson seachdainean 2 atharrachaidhean sam bith ann an ceangal H3 acetylated aig gin de na luchd-brosnachaidh gine a chaidh a sgrùdadh (Clàr 1). Fhuair sinn a-mach lùghdachadh mòr ann an ceangal histone methylated H3 aig an prodynorphin neach-adhartachaidh, ach gun cheangal sam bith aig an Cck neach-adhartachaidh agus gun atharrachadh sam bith ann an ceangal aig an CDK5 agus BDNF luchd-adhartachaidh, a ’moladh nach e dòigh coitcheann a tha seo leis am bi ΔFosB, sa gheàrr-ùine, a’ riaghladh abairt gine. Chuir e iongnadh agus ùidh oirnn nach do lorg sinn eadar-dhealachaidhean sam bith anns na measaidhean ChIP againn a dh ’fhaodadh a bhith mar thoradh air an àrdachadh ann an Cck abairt mRNA anns na luchagan 11A às deidh seachdainean 2 de abairt ΔFosB agus cho-dhùin iad sgrùdadh a dhèanamh air an dòigh-obrach seo tuilleadh.

Bidh geàrr-ùineΔFosB a ’meudachadh Cck faireachdainn ann an ioma-shiostaman

Lorg caractar microarray de luchainn 11A dà-transgenic overexpressing ΔFosB anns an striatum gu bheil Cck bidh ìrean faireachdainn ag àrdachadh às deidh seachdainean 2 de overexpression agus an uairsin a ’lughdachadh mean air mhean le amannan nas fhaide de abairt ΔFosB (Figear 2A, n = 3). Dhearbh sinn a ’bhuaidh seo airson Cck a ’cleachdadh PCR fìor-ùine air buidheann fa leth de bheathaichean aig seachdainean 2 agus 8 agus lorg iad toraidhean aig an dà phuing ùine a bhith coltach ris an anailis microarray (cha deach dàta a shealltainn).

Figear 2

Figear 2

Bidh overexpression geàrr-ùine de ΔFosB a ’meudachadh Cck abairt gine. (A) Cck abairt mRNA ann an striatum às deidh overexpression ΔFosB ann an luchagan 11A airson seachdainean 1, 2, 4, no 8. Chaidh mion-sgrùdadh microarray a dhèanamh air sampaill striatal agus Cck ìrean ...

Gus tuilleadh sgrùdadh a dhèanamh air comas ΔFosB airson riaghladh Cck abairt, chleachd sinn ceallan PC12 a chaidh an gluasad thairis le a Cckneach-aithris -luciferase plasmid agus an dàrna cuid plasmid abairt ΔFosB no an aon ìre de pCDNA. Mar thoradh air an dà latha (n = 5-9) agus trì (n = 11-13) de overexpression ΔFosB thàinig àrdachadh mòr ann an Cck-luciferase abairt. A bharrachd air an sin, dh ’adhbhraich trì latha de overexpression ΔFosB mòran a bharrachd Cckinntrigeadh -luciferase an taca ri dà latha de overexpression (Figear 2B). Cha do bhrosnaich overexpression de ΔFosB abairt de thogail luciferase gun bhrosnachadh (cha deach dàta a shealltainn). Cha robh lùghdachadh ann an suidheachadh sam bith Cck-luciferase gnìomhachd follaiseach. Tha na toraidhean sin a ’sealltainn gu bheil abairt geàrr-ùine ΔFosB a’ meudachadh gnìomhachd an Cck neach-adhartachaidh, agus a ’fàgail gun fhreagairt an dòigh anns am bi overexpression ΔFosB fad-ùine a’ cuir thairis Cck a ’taisbeanadh.

Bidh overexpression ΔFosB a ’meudachadh ceangal aig làrach ceangailteach CREB ceangailteach anns an Cck sanasachd

Lorg na mion-sgrùdaidhean againn sin Cck tha faireachdainn air a mheudachadh an dèidh abairt geàrr-ùine ΔFosB, ge-tà, lorg ar measaidhean ChIP nach eil CREB no ΔFosB a ’ceangal ris an Cck neach-adhartachaidh. Gus faighinn a-mach a bheil atharrachaidhean sam bith ann an ceangal pròtain aig an Cck neach-adhartachaidh a ’leantainn overexpression ΔFosB, chleachd sinn measaidhean gluasad gluasad electrophoretic (EMSA) le probe anns a bheil an làrach coltach ri CRE a tha an làthair taobh a-staigh an Cck neach-adhartachaidh. A ’cleachdadh earrannan niùclasach bho striata de lucha 11A a’ toirt cus thairis air ΔFosB airson seachdainean 2, lorg sinn àrdachadh ann an ceangal ris an làrach CRE putative anns an Cck neach-adhartachaidh (Figear 3 A, C., n = 4). Gu inntinneach, tha luchagan 11A a ’toirt cus thairis air ΔFosB airson seachdainean 8, a tha a’ sealltainn lùghdachadh ann an Cck abairt, cuideachd a ’sealltainn barrachd ceangailteach aig an làrach seo (Figear 3B, C., n = 4). Mar choimeas, rinn sinn sgrùdadh air ceangal ri làrach CRE co-aontachd ann an luchagan overexpressing ΔFosB airson seachdainean 2 agus lorg sinn ceangal làidir CRE ann an earrannan striatal, ach cha robh àrdachadh ann an ceangaltas às deidh inntrigeadh ΔFosB (Figear 3F, n = 4). Mar sin, a dh ’aindeoin àrdachadh ΔFosB air a bhrosnachadh le ìrean iomlan CREB a chithear aig an àm seo, tha na toraidhean sin a rèir ar measaidhean ChIP a tha a’ faighinn a-mach gu bheil barrachd ceangailteach CREB aig luchd-adhartachaidh a ’leantainn overexpression ΔFosB sònraichte do ghinean sònraichte a-mhàin agus chan eil e na iongantas cruinneil . Gus faighinn a-mach a bheil CREB ceangailte ris an Cck neach-adhartachaidh anns an anailis EMSA againn, rinn sinn measaidhean mòr-thogalach le antibody sònraichte CREB. Ann an aonta leis na measaidhean ChIP againn, cha do lorg sinn ceangal sam bith de CREB gu a Cck probe anns a bheil làrach adhartach CRE ann am measaidhean EMSA, fhad ‘s a bha CREB gu mòr a’ ceangal agus a ’toirt thairis làrach co-aontachd CRE (Figear 3D, E., n = 4). A ’ghnìomhachd ceangail DNA aig an Cck cha tug neach-brosnachaidh buaidh air antibody gu ΔFosB (dàta nach deach a shealltainn), fo chumhachan a chaidh a shealltainn ann an grunn sgrùdaidhean ro-làimh gus casg a chuir air ΔFosB ceangailteach gu làraich AP-1 bona fide (Hope et al., 1994a, 1994b; Chen et al., 1995, Hiroi et al., 1998). Rinn sinn cuideachd measaidhean ChIP air striata de bheathaichean 11A às deidh seachdainean 8 de abairt ΔFosB agus fhathast cha do lorg sinn ceangal sam bith de CREB no ΔFosB aig an Cck neach-adhartachaidh (cha deach dàta a shealltainn). Mar sin, tha abairt ΔFosB a ’leantainn gu àrdachadh ann an ceangal pròtain aig an Cck neach-adhartachaidh às deidh gach seachdain faireachdainn 2 agus 8; ge-tà, chan eil fios air cò na factaran sin.

Figear 3

Figear 3

Ceangal pròtain aig an Cck neach-adhartachaidh. (A, B) Assay gluasad gluasad electrophoretic a ’cleachdadh an Cck Làrach coltach ri CRE le clò striatal bho bheathaichean a ’dol thairis air ΔFosB airson seachdainean 2 (A) no seachdainean 8 (B). Ann an (A), farpais le cus farpaiseach gun bhile ...

An làrach adhartach CRE anns an Cck chan eil an neach-adhartachaidh an urra ri barrachd gnìomhachd brosnachaidh

Bho lorg sinn àrdachadh ann an ceangal pròtain le bhith a ’cleachdadh criomag den Cck neach-adhartachaidh, anns a bheil an làrach adhartach CRE, a ’leantainn overexpression ΔFosB, bha sinn airson faighinn a-mach a bheil feum air an làrach seo airson àrdachadh Cck abairt a ’leantainn overexpression ΔFosB. Gus an comas seo a dhearbhadh, chuir sinn thairis ceallan PC12 le a Cck-luciferase plasmid anns a bheil an làrach iomlan coltach ri CRE no fear le mùthadh air an làrach a chuireadh às do eadar-obrachadh sam bith le CREB. Gu h-inntinneach, lùghdaich mùthadh na làraich coltach ri CRE basal Cck gnìomhachd adhartachaidh le 32% (Figear 4A, n = 9), ach cha tug e buaidh air an Cck inntrigeadh neach-adhartachaidh le ΔFosB overexpression (Figear 4B, n = 11-13). Tha seo a ’moladh, ged a tha an Cck feumaidh an neach-adhartachaidh làrach coltach ri CRE neo-iomlan airson làn ghnìomhachd basal, chan fheum an gnìomhachd adhartachaidh nas motha air a bhrosnachadh le overexpression ΔFosB an t-sreath coltach ri CRE.

Figear 4

Figear 4

Tha Cck-like chan eil feum air làrach CRE Cck inntrigeadh le ΔFosB. (A) Cckchaidh gnìomhachd -luciferase a thomhas 2 làithean às deidh an tar-chuir leis an dàrna cuid àbhaisteach Cck-luciferase no fear anns an deach làrach coltach ri CRE a mhùchadh. * p <0.05 (B) Cck-luciferase ...

Bidh cFos a ’ceangal ris an Cck sanasachd

Tha sgrùdaidhean roimhe air faighinn a-mach sin cFos bidh mRNA a ’meudachadh le abairt ΔFosB geàrr-ùine, ge-tà, às deidh abairt ΔFosB fada, tha comas làimhseachadh cocaine gus cFos a bhrosnachadh ann an striatum air a lughdachadh (McClung agus Nestler, 2003; Renthal et al., 2008). Mar sin, is dòcha gu bheil e comasach gu bheil cFos a ’cur ris an àrdachadh ann an Cck abairt às deidh abairt geàrr-ùine ΔFosB. Rinn sinn measaidhean ChIP le antibody sònraichte airson cFos agus thomhais sinn cFos ceangailteach aig an Cck neach-adhartachaidh le agus às aonais abairt geàrr-ùine ΔFosB. Fhad ‘s a fhuair sinn a-mach gu bheil cFos a’ ceangal ris an Cck neach-adhartachaidh, cha do mheudaich an ceangal seo gu mòr às deidh overexpression ΔFosB (Figear 5, n = 5). Tha seo a ’moladh, leis gu bheil cFos a’ ceangal an Cck neach-adhartachaidh, is dòcha gun cuir e ri riaghladh coitcheann Cck faireachdainn, ach tha e coltach nach eil e an sàs ann an riaghladh an Cck neach-adhartachaidh le ΔFosB.

Figear 5

Figear 5

Bidh cFos a ’ceangal ris an Cck neach-adhartachaidh. Chaidh measaidhean immunoprecipitation chromatin a dhèanamh le antibody sònraichte airson cFos a ’cleachdadh clò striatal bho luchagan overexpressing ΔFosB an dàrna cuid air dox, no às deidh seachdainean 2 de thoirt air falbh dox. Bha mion-sgrùdadh PCR fìor-ùine ...

Rach gu:

SGEULACHDAN

Tha an sgrùdadh seo a ’dearbhadh agus a’ leudachadh air toraidhean a rinneadh roimhe a ’sealltainn gu bheil ΔFosB a’ riaghladh abairt gine anns an striatum agus gheibh sinn a-mach gu bheil e a ’dèanamh sin tro ioma-uidheamachd às deidh abairt geàrr-ùine. Bidh sinn a ’sealltainn, às deidh seachdainean 2 de overexpression, gu bheil ΔFosB a’ ceangal gu dìreach ris an luchd-adhartachaidh ann an cuid de ghinean a ’leantainn gu atharrachaidhean ann an abairt (ie CDK5). A bharrachd air an sin, bidh e a ’meudachadh ìrean pròtain CREB, buaidh a chithear ann an ceallan cultair a bharrachd air ann an striatum, a’ leantainn gu barrachd ceangailteach CREB aig luchd-brosnachaidh gine eile (ie dynorphin agus BDNF). Ann an sgrùdadh roimhe, lorg sinn gu bheil cus-ùine geàrr-ùine de ΔFosB ann an striatum a ’leantainn gu mòran de na h-aon atharrachaidhean abairt gine a lorgar nuair a thèid cus cuideam a chuir air CREB, agus a’ leantainn gu freagairtean giùlain coltach ri chèile ann an ceumannan roghainn cocaine (McClung agus Nestler, 2003). Mar sin, tha an lorg a th ’ann an-dràsta gu bheil ΔFosB a’ leantainn gu inntrigeadh de CREB, a bharrachd air ceangal CREB ri luchd-brosnachaidh gine sònraichte, a ’cuideachadh le bhith a’ mìneachadh carson a chaidh uimhir de na h-atharrachaidhean abairt gine a cho-roinn leis an dà fhactar tar-sgrìobhaidh seo.

Tha inntrigeadh CREB le ΔFosB inntinneach, oir chaidh a dhearbhadh gu bheil drogaichean mì-ghnàthachaidh a ’brosnachadh atharrachaidhean ann an ìrean CREB serine 133-phosphorylated (Mattson et al., 2005) agus àrdaich tar-sgrìobhadh CRE-mediated (Barrot et al., 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), gun a bhith ag atharrachadh ìrean iomlan de CREB. Tha e comasach gum faodadh atharrachaidhean ann an ìrean CREB a bhith neo-ghluasadach, agus, mar sin, air an call gu furasta ann an sgrùdaidhean eile. Anns na làmhan againn, tha sinn air àrdachadh a tha air adhbhrachadh le cocaine ann an CREB mRNA ann an deuchainnean sònraichte, ge-tà, tha a ’bhuaidh seo caochlaideach (amharc neo-fhoillsichte). Leis gu bheil an dà chuid luchagan transgenic 11A agus ceallan PC-12 a ’nochdadh inntrigeadh CREB às deidh overexpression geàrr-ùine ΔFosB, tha seo a’ moladh gu bheil CREB gu dearbh air a bhrosnachadh le ΔFosB (no targaid de ΔFosB), a ’toirt seachad dòigh eile fhathast gus atharrachaidhean a tha air an adhbhrachadh le drogaichean ann an gine a mhìneachadh. faireachdainn.

Gu iongnadh, lorg sinn nach eil CREB no ΔFosB a ’ceangal ris an Cck neach-adhartachaidh eadhon ged Cck tha abairt air a riaghladh gu soilleir às deidh abairt geàrr-ùine ΔFosB. Tha cck na neuropeptide pailt air a chuir an cèill anns an dà chuid an VTA agus NAc (Hokfelt et al., 1980) agus tha e coltach gu bheil e an sàs ann am freagairtean giùlain do dhrogaichean mì-ghnàthachaidh (Josselyn et al., 1996; Josselyn et al., 1997; Hamilton, et al., 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002). Ann am measaidhean cultar cealla, tha an Cck tha an neach-adhartachaidh air a bhith air a chomharrachadh gu mòr agus air a dhearbhadh gu bheil e a ’freagairt air buill teaghlaich CREB agus AP-1 (ath-sgrùdadh le Hansen, 2001). Haun agus Dixon (1990) sheall e gum faod iom-fhillte AP-1 ceangal ris an Cck Làrach coltach ri CRE ann vitro, agus chaidh a shealltainn nas fhaide air adhart, a ’cleachdadh cheallan neuroblastoma SK-N-MC, gun do lughdaich làrach coltach ri CRE freagairt luchd-brosnachaidh gu cFos / cJun overexpressed (Rourke et al., 1999). Gu dearbh, tha sinn cuideachd a ’faighinn àrdachadh Cck gnìomhachd brosnachaidh (Figear 2) agus ceangaltach aig no timcheall air an eileamaid coltach ri CRE (Figear 3) air overexpression de ΔFosB, ball eile den teaghlach AP-1, ach chan eil sinn a ’faighinn ceangal dìreach de ΔFosB ris an Cck sanasachd ann am vivo or ann vitro, eadhon air a overexpression.

Tha mòran obrach air àite a nochdadh do CREB ann an riaghladh Cck gnìomhachd adhartachaidh. Tha an Cck Tha làrach coltach ri CRE air a ghleidheadh ​​thairis air cnàmhan-droma (Hansen, 2001) agus, ann an cuid de mheasaidhean cultar cealla, tha an dà chuid CREB agus AP-1 a ’ceangal ris an làrach seo agus tha iad riatanach airson Cck gnìomhachd brosnachaidh (Haun agus Dixon, 1990; Deaval, et al., 2000; Hansen, 2001). A bharrachd air an sin, tha grunn luchd-iomairt aithnichte de Cck Chaidh sealltainn gu bheil faireachdainn (a ’toirt a-steach bFGF, PACAP, peptones, agus depolarization) ag obair tro CREB (Hansen, et al., 1999; Deavall, et al, 2000; Bernard, et al., 2001; Gevrey, et al., 2002; Hansen, et al., 2004). Tha ar Ccktha dàta gine neach-aithris -luciferase a ’toirt taic do dhreuchd riatanach airson an làrach coltach ri CRE ann an riaghladh Cck gnìomhachd brosnachaidh, seach gu bheil mùthadh na làraich seo a ’lughdachadh basal Cck gnìomhachd adhartachaidh agus Ccktha abairt -luciferase air a bhrosnachadh le VP16-CREB, cruth gnìomhach gnìomhach de CREB, air a chall nuair a thèid an làrach seo a mhùchadh (amharc neo-fhoillsichte). Mar sin, chuir e iongnadh oirnn faighinn a-mach nach eil coltas gu bheil CREB a ’ceangal ris an Cck neach-adhartachaidh ann an earrannan striatal an dàrna cuid aig bun-loidhne no air overexpression geàrr-ùine ΔFosB nuair a thèid ìrean CREB àrdachadh. Tha seo ag argamaid gu bheil ìrean CREB per se chan iad an aon fhactar ann a bhith a ’dearbhadh na tha de cheangal air an làrach seo, agus tha seo a’ faighinn taic bho obair chàich (Cha-Molstad, et al., 2004). Bho luchd-adhartachaidh genes targaid CREB eile, a chaidh ainmeachadh roimhe, leithid BDNF agus prodynorphin, an do cheangail CREB, tha sinn misneachail nar co-dhùnadh nach eil CREB ceangaltach ris an Cck neach-adhartachaidh ann an earrannan niùclasach striatal. A bharrachd air an sin, inntrigeadh Cckcha robh gnìomhachd -luciferase le ΔFosB an urra ris an làrach coltach ri CRE, a ’moladh nach eil ΔFosB a’ riaghladh Cck abairt le bhith a ’riaghladh ceangal dìreach CREB ris an Cck neach-adhartachaidh.

Ar neo-chomas lorg CREB ag eadar-obrachadh leis an Cck neach-adhartachaidh a ’faighinn taic bho Renthal et al. (2009), a chleachd dòigh-obrach ChIP-chip gus sùil a thoirt air atharrachaidhean cruinneil ann am fosphorylated CREB (pCREB) agus ΔFosB ceangailteach ann an striatum às deidh nochdadh cocaine cronail. Anns na deuchainnean sin, chaidh iom-fhillteachd DNA-protein a dhìon le antibodies ΔFosB no pCREB agus chaidh an DNA a chaidh a sgaoileadh, às deidh a lipéadú, a ghluasad gu microarray neach-adhartachaidh. Ged a chaidh mòran de ghinean targaid CREB a chomharrachadh roimhe seo leis an dòigh-obrach seo (me, BDNF, prodynorphin), Cck cha deach aithneachadh. A bharrachd air an sin, chaidh a dhearbhadh gu bheil ceangal CREB ri làrach co-aontachd CRE ag atharrachadh gu mòr eadar loidhnichean cealla cultair (Cha-Molstad, et al., 2004). A h-uile sgrùdadh roimhe a lorg CREB ag eadar-obrachadh leis an Cck chaidh neach-adhartachaidh a dhèanamh ann an cultar cealla (chan e eanchainn às an tàinig na sampallan EMSA agus ChIP againn) agus chleachd iad measaidhean gluasaid gel gus sgrùdadh a dhèanamh air eadar-obrachadh pròtain-DNA. Ged as urrainn do EMSA measadh a dhèanamh air comas bàillidh a cheangal ri sreath DNA, tha measaidhean ChIP a ’toirt sealladh ùr air na h-eadar-obrachaidhean sin ann am vivo. A bharrachd air an sin, tha mòran den dàta a tha a ’nochdadh an dàrna cuid inntrigeadh de Cck gnìomh brosnachaidh no CREB ceangailteach ris an Cck chaidh neach-adhartachaidh fhaighinn bho cheallan a bha air am brosnachadh le factaran mar peptones (Bernard et al., 2001), depolarization (Hansen, et al., 2004), no measgachadh de ghnìomhaichean casg-rabhaidh soidhne intracellular a ’toirt a-steach cAMP agus ERK (Hansen et al., 1999). Anns na deuchainnean againn, b ’e an aon“ bhrosnachadh ”a chaidh a chleachdadh cus cuideam air ΔFosB, a tha gu leòr airson a bhrosnachadh Cck faireachdainn. Air an toirt còmhla, tha seo a ’moladh gum bi comas CREB a’ ceangal ri (agus is dòcha a ’riaghladh) an Cck tha an neach-adhartachaidh gu mòr an urra ri seòrsa cealla agus gnìomhachd slighean comharrachaidh sònraichte. A bharrachd air an sin, tha an Cck Chan eil eileamaid brosnachaidh coltach ri CRE (co-dhiù ann an ceallan PC12 neo-aithnichte agus ann an striatum na luchaige) na thargaid dhìreach an dàrna cuid CREB no ΔFosB. Gu inntinneach, tha riaghladh na FosB tha faireachdainn le CREB cuideachd sònraichte air seòrsa cealla agus an seòrsa brosnachaidh. Sgrùdadh le Andersson et al. lorg gu robh in-stealladh CREB antisense oligonucleotides a-steach do striatum na luchaige gu ìre a ’cur bacadh air inntrigeadh FosB às deidh rianachd cocaine (Andersson et al., 2001). Ach, lorg iad cuideachd gu robh comas L-Dopa a ’brosnachadh FosB cha robh buaidh air làthaireachd ann an striatum 6-OHDA-lesioned le làthaireachd CREB antisense oligonucleotides.

Leis gu bheil coltas gu bheil CREB agus ΔFosB a ’riaghladh gu neo-dhìreach an Cck chaidh neach-adhartachaidh, agus atharrachaidhean ann an structar chromatin a chlàradh mar fhreagairt do dhiofar bhrosnachaidhean a bhrosnaicheas ΔFosB (Tsankova et al., 2004; Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008), rinn sinn reusanachadh gum faodadh ΔFosB gnìomhachd an neach-adhartachaidh atharrachadh gu neo-dhìreach le bhith ag atharrachadh structar chromatin. Ach, ann an luchagan overexpressing ΔFosB airson seachdainean 2, cha robh atharrachadh sam bith ann an acetylation histone H3 aig an Cck neach-adhartachaidh (Clàr 1). Tha seo a ’faighinn taic bho dhàta ChIP-chip de Renthal et al. (2009), a dh ’innis nach robh atharrachadh sam bith ann an acetylated H3 ceangailteach aig an Cck neach-adhartachaidh ann an luchagan a tha fosgailte do chocaine. Bho chaidh an Cck tha neach-adhartachaidh gnìomhach anns an striatum, cha robhar a ’sùileachadh no a’ faicinn ceangaltas histone methylated H3. Gu h-inntinneach, chan fhaca sinn atharrachadh sam bith mar thoradh air overexpression ΔFosB ann an ceangal H3 acetylated aig an BDNF neach-adhartachaidh (a sheall barrachd ceangailteach CREB) no aig an CDK5 agus prodynorphin luchd-adhartachaidh (a sheall barrachd ceangailteach ΔFosB). Leis gu bheil grunn atharrachaidhean histone co-cheangailte ri atharrachaidhean ann an gnìomhachd brosnachaidh (ath-sgrùdadh le Rando agus Chang, 2009), tha coltas ann gu bheil atharrachaidhean cromatin eile ann a tha a ’ceangal ri inntrigeadh nan ginean sin. Is dòcha nach atharraich aon atharrachadh chromatin, ged a tha e ro-innse gu tric air ìre gnìomhachd brosnachaidh, nuair a thèid gine sònraichte a ghnìomhachadh. Ann an obair san àm ri teachd, bhiodh e inntinneach sùil a thoirt air atharrachaidhean eile a dh ’fhaodadh a bhith ann an structar chromatin timcheall air an Cck neach-adhartachaidh a ’leantainn overexpression ΔFosB. Gu inntinneach, cocaine cronail (is dòcha via Thathas air sealltainn gu bheil inntrigeadh ΔFosB) a ’brosnachadh faireachdainn de sirtuin 1 agus 2, deacetylases histone clas III a tha coltach gu bheil iad ag atharrachadh eòlas-inntinn neuronal, soidhneadh ERK, agus freagairtean giùlain do chocaine (Renthal et al., 2009). Bhiodh inntrigeadh de deacetylase histone comasach air riaghladh àireamh mhòr de ghinean a riaghladh aig an aon àm via atharrachaidhean cruinneil ann an structar chromatin.

Aon tagraiche comasach an sàs ann Cck bha riaghladh às deidh overexpression ΔFosB na cFos ball teaghlaich AP-1. Tha cur an cèill cFos air a riaghladh le CREB (Sheng et al., 1990; Impey et al., 2004), agus cFos overexpression (co-chòrdail ri overexpression den chom-pàirtiche ceangailteach cJun) ag àrdachadh Cck gnìomhachd brosnachaidh (Rourke et al., 1999). Mar sin, dh ’fhaodadh ìrean CREB nas motha mar thoradh air overexpression geàrr-ùine ΔFosB àrdachadh ìrean cFos agus leantainn gu barrachd ceangail ris an Cck Làrach coltach ri CRE. cfos Tha mRNA air a bhrosnachadh ann an luchagan às deidh dà sheachdain de overexpression ΔFosB (McClung agus Nestler, 2003) agus lughdaich e ann an luchagan a bha fosgailte do chocaine cronail no overexpression ΔFosB fad-ùine (Renthal et al., 2008). An seo gheibh sinn a-mach gu bheil cFos a ’ceangal gu dìreach ris an Cck neach-adhartachaidh ann an clò striatal, ge-tà, chan eil overexpression ΔFosB ag àrdachadh gu mòr ceangaltach. Tha seo a ’moladh ged a dh’ fhaodadh cFos a bhith an sàs ann a bhith a ’riaghladh Cck abairt san fharsaingeachd, chan eil coltas ann gu bheil atharrachadh ann an ceangal cFos leis fhèin mar an dòigh anns a bheil ΔFosB a ’riaghladh Cck faireachdainn. Tha e comasach, ge-tà, gum faodadh ΔFosB brosnachadh an dàrna cuid, atharrachaidhean iar-eadar-theangachadh ann an cFos (me atharrachadh fosphorylation) no brosnachadh com-pàirtiche ceangailteach (leithid cJun) no pròtain co-ghnìomhaiche. Ach, leis gu bheil an làrach neo-iomlan coltach ri CRE (a chaidh a shealltainn roimhe seo mar làrach ceangail airson ionadan AP-1, faic Haun agus Dixon, 1990) chan eil feum air airson an àrdachadh Cck gnìomhachd brosnachaidh air fhaicinn le overexpression ΔFosB (mar a chaidh a mheasadh anns na deuchainnean gine neach-aithris againn), tha e na adhbhar gu bheil factaran tar-ghnìomhach eile air an riaghladh le ΔFosB.

Tha Cck Tha criomag adhartachaidh a chaidh a chleachdadh anns na deuchainnean gine neach-aithris luciferase againn a ’toirt a-steach làrach ceangailteach Sp1 glèidhte agus bogsa-E (ath-sgrùdaichte le Hansen, 2002). Gu sònraichte, thathas air sealltainn gu bheil sreathan E-bogsa a ’ceangal grunn fhactaran tar-sgrìobhaidh (ath-sgrùdadh le Forrest agus McNamara, 2004). A ’cleachdadh cheallan PC12, chunnaic sinn gu bheil mùthadh den bhogsa-E a’ lùghdachadh Cck gnìomhachd an neach-adhartachaidh, ach chan eil e ag atharrachadh freagairt an neach-adhartachaidh gu ΔFosB (cha deach dàta a shealltainn). Gu inntinneach, a Cckchan eil gnìomhachd basal so-fhaicsinneach aig neach-aithris -luciferase anns a bheil mùthaidhean an dà chuid air làrach CRE agus E-box agus tha e neo-fhreagarrach ri overexpression ΔFosB (amharc neo-fhoillsichte). Meadhanaiche eile a dh ’fhaodadh a bhith ann an gnìomh ΔFosB air an Cck Is e ATFan a th ’ann an luchd-brosnachaidh, agus tha fios gu bheil cuid de dh’ fhoirmichean air am brosnachadh ann an striatum le bhith a ’nochdadh psychostimulant cronach (Green et al., 2008). Ach, cha do lorg sinn fianais sam bith airson inntrigeadh ΔFosB de na ATFan sin (cha deach dàta a shealltainn), agus cha bhiodh dùil gum biodh ATFan a ’ceangal ris an làrach coltach ri CRE air an Cck neach-adhartachaidh.

Is e aon caveat den sgrùdadh seo gu bheil sinn a ’cleachdadh siostam dà-transgenic gus overexpress ΔFosB agus mar sin feumaidh aon a bhith glèidhteach ann a bhith a’ tarraing co-shìntean eadar am paradigm seo agus rianachd cocaine cronach. Ach, tha na luchagan transgenic 11A a ’toirt cothrom sònraichte sùil a thoirt air buaidhean sònraichte ΔFosB anns an striatum, seach gu bheil overexpression cuingealaichte ris an roinn eanchainn seo (Chen et al., 1998), fhad ‘s a tha rianachd cocaine a’ toirt air adhart atharrachaidhean ann am measgachadh farsaing de roinnean eanchainn eile a dh ’fhaodadh an uairsin buaidh neo-dhìreach a thoirt air an striatum. A bharrachd air an sin, tha grunn sgrùdaidhean air phenotypes giùlan agus moileciuil coltach a chlàradh anns na luchagan 11A an coimeas ri beathaichean neo-transgenic a chaidh an làimhseachadh le cocaine cronach (Kelz et al., 1999; McClung agus Nestler, 2003; Renthal et al., 2009). A thuilleadh air sin, Bibb et al. (2001) air aithris ìrean co-ionann de striatal Cdk5 mRNA agus inntrigeadh pròtain san aon strain 11A an taca ri sgudal sgudail, neo-transgenic, air a làimhseachadh le cocaine, a bharrachd air atharrachaidhean coltach ri chèile ann an targaidean CDK5, p35 agus DARPP-32.

Gu crìch, tha sinn a ’faighinn a-mach gu bheil abairt geàrr-ùine ΔFosB a’ leantainn gu inntrigeadh genes anns an striatum tro ioma-uidheamachd. Tha iad sin a ’toirt a-steach ceangal brosnachaidh dìreach, inntrigeadh pròtain agus gnìomhachd CREB, atharrachadh chromatin, a bharrachd air slighean nach deach a dhearbhadh fhathast.

Rach gu:

MODHAN-OBRACH

Animals

Chaidh beathaichean fireann dà-transgenic 11A (NSE-tTA x TetOP-ΔFosB) a chleachdadh san sgrùdadh seo agus tha iad air an comharrachadh ann an Kelz et al., 1999. Gu overexpress ΔFosB, chaidh luchagan a thoirt a-mach à doxycycline eadar seachdainean 3 agus 6, agus chaidh luchagan smachd a chumail air doxycycline. Bha na luchagan uile air an cumail ann am buidhnean agus air an cumail suas air cearcall solais / dorcha 12: 12, solais air adhart aig 7 am agus solais dheth aig 7 f, le ad lib ruigsinneachd gu biadh is uisge. Bha a h-uile deuchainn luchag a rèir protocalan a chaidh aontachadh le comataidh cùram is cleachdadh bheathaichean Ionad Meidigeach Southwestern Oilthigh Texas ann an Dallas.

Neach-aithris agus plasmids faireachdainn

An fiadhaich (WT) Cck chaidh neach-aithris adhartachaidh-luciferase ullachadh le bhith a ’cuir a-steach criomag timcheall air 200 bp PCR a-steach don vectar pGL3-luc (Promega). Chaidh a ’chriomag seo fhaighinn bho DNA genomic luch (primers: 5‘ TATCCTCATTCACTGGGACGC 3 ’shuas an abhainn, agus 5‘ TACCTTTGGATGGGGAAATCG 3 ’sìos an abhainn) agus an toiseach air a chuir a-steach do pGEM-T Easy vector (Promega, #A1360). Chaidh a ’chriomag adhartachaidh an uairsin a dhùnadh a-steach do làraich enzyme cuibhreachaidh Kpn1 / Xho1 de pGL3-luc.

Gus mùthadh puing CRE a chruthachadh anns an Cck neach-adhartachaidh, primer mutagenic air a stiùireadh an aghaidh làrach a chaidh aithris roimhe seo coltach ri CRE (ciall primer: 5’CGTGTCCTGCTGGACTGAGCTCGCACTGGGTAAACA 3 ’, antisense primer: 5’CTGTTTACCCAGTGCGCGCTGAGTCCAGCAGGACACG 3’) air a chleachdadh ann an cothlamadh. . Bidh seo ag atharrachadh an làrach coltach ri CRE (ACTGCGTCAGC) gu ACTGAGCTCC. Chaidh a h-uile plasmids neach-aithris a dhearbhadh le sreath DNA. Tha an plasmid abairt ΔFosB a ’toirt a-steach sreath làn ΔFosB a chaidh a chuir a-steach don làrach clònadh iomadach de pCDNA 3.1 agus chaidh a mhìneachadh roimhe seo (Ulery agus Nestler, 2007).

Cultar cealla agus tar-chuiridhean DNA

Chaidh ceallan Rat pheochromocytoma (PC12) a chumail ann am F-12 meadhanach Eagle atharraichte Dulbecco, le taic le serum each 10%, serum bòcain fetal 5%, agus 1% penicillin / streptomycin aig 37 ° C agus 5% CO2. Chaidh na ceallan a thar-chuir le electroporation a ’cleachdadh electroporator BTX 360 (350V, 0 ohms, agus 850 μF) ann an saline bufair fosfáit 800 μL Dulbecco ann an cuvettes beàrn 4 mm le 10 μg den neach-aithris agus 5 μg den abairt togail. Chaidh plasmid vector falamh (pCDNA) a chleachdadh gus meudan iomlan de DNA a dhèanamh àbhaisteach. Às deidh an tar-chuir, chaidh na ceallan fhàs air soithichean 35 mm còmhdaichte le collagen airson na h-ùine ainmichte.

Measaidhean Luciferase

Dà no trì latha às deidh an tar-chuir, chaidh ceallan a nighe 3 tursan ann an saline bufair fosfáit Dulbecco, lysed (a ’cleachdadh glycylglycine 25 mM, 15 mM MgSO4, 4 mM EGTA, 1% Triton X-100, pH 7.8, 1 mM DTT), air a chruinneachadh, agus air a ghlanadh tro centrifugation. Chaidh 30 μL de lysate a chur còmhla ri bufair assay luciferase 140 μL (25 mM glycylglycine, 15 mM MgSO4, 4 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 1 mM potasium fosfáit, 1 mM coenzyme A, pH 7.8). Chaidh gnìomhachd luminescence a thomhas a ’cleachdadh leughadair fluoresce microplate FLx-800 às deidh in-stealladh fèin-ghluasadach de luciferin 40 μL 1 mM gach tobar. Chaidh gnìomhachd Luciferase a dhèanamh àbhaisteach gu susbaint pròtain iomlan mar a chaidh a dhearbhadh le assay pròtain BioRad.

Assay gluasad gluasad electrophoretic

Earrannan niùclasach bho sliseagan dà-thaobhach de striatum bho luchainn 11A dà-transgenic (sin far an tèid an cumail suas air no far doxycycline airson seachdainean 2 no 8) (McClung agus Nestler, 2003) ullachadh a rèir Huang agus Walters (1996). 32Chaidh probes oligonucleotide le dà shreath le P-ullachadh le bhith a ’cleachdadh protocol siostam Promega Gel Shift Assay (#E3300) agus chaidh probes a ghlanadh le bhith a’ cleachdadh Colbhan Spin Quick Roche. Bha na sreathan dearbhaidh co-aontachd CRE agus AP-1 bho Promega (#E328A agus E320B, fa leth) agus an Cck Bha sreathan CRE (mothachadh Cck-CRE: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; antisense Cck-CRE: CCCAGTGCTGACGCAGTCCAGAGCTCGCTAGCTTT).

Chaidh ath-bheachdan ceangail agus electrophoresis a dhèanamh a ’cleachdadh atharrachaidhean air modh-obrach siostam Promega Gel Shift Assay (#E3300). Chaidh 50,000 CPM de probe leubail a chur còmhla ri earrann niùclasach striatal 10 μg. Chaidh DNA no antibodies farpaiseach fuar a chur ris mus deach na probes radiolabeled a thoirt a-steach. Airson deuchainnean supershift, chaidh 2 μg de antibody CREB (Bith-theicneòlas Upstate # 06-083) a chleachdadh. Chaidh ath-bhualadh a dhèanamh air electrophoresed air gels polyacrylamide 4%, air an tiormachadh, agus air am faicinn ann am film (a ’cleachdadh sgrìoban dian airson 1 uair gu làithean 2).

Immunoblotting

Airson ceallan PC12, chaidh plaidean 35 mm de cheallan tar-chuir a nighe ann an saline bufair fosfáit Dulbecco fuar agus chaidh lysates ullachadh ann am bufair lysis RIPA fuar deigh (50 mM Tris pH 7.4, 5 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% deoxycholate, 1 % Triton X-100, 0.1% sodium dodecyl sulfate) anns a bheil luchd-dìon protease. Às deidh sonication, glanadh, agus assay protein Bradford, bha lysates làn denatured agus chaidh 50 μg de gach sampall a electrophoresed air gels polyacrylamide 10% SDS. Chaidh proteinichean a ghluasad gu membran PVDF, air am bacadh airson 1 uair ann am bainne tioram neo-geir 3% ann an saline bufair Tris anns a bheil 0.1% Tween-20 (bainne TBS-T), agus air a dhearbhadh thar oidhche aig 4 ° C le antibodies bun-sgoile (CREB- Bith-theicneòlas Upstate # 06-083, air a chleachdadh aig 1: 1,000; GAPDH- Sigma # G8795, air a chleachdadh aig 1: 80,000) caolaichte ann am bainne TBS-T. Às deidh grunn nigheadaireachd ann an TBS-T, chaidh blots a dhearbhadh airson uair a thìde aig teòthachd an t-seòmair a ’cleachdadh antibodies àrd-sgoile alcalin phosphatase-conjugated (Sigma) caolaichte 1: 5,000 ann am bainne TBS-T. Às deidh grunn nigheadaireachd ann an saline bufair Tris, chaidh an ath-bhualadh dath a dhèanamh a rèir stiùireadh BioRad (# 170-6432). Chaidh pilearan a thiormachadh thar oidhche, a sganadh air sganair le leabaidh chòmhnard agus densitometry air a chluich a ’cleachdadh ImageJ (faic gu h-ìosal).

Airson earrannan striatal, chaidh measaidhean blot an Iar a dhèanamh mar a chaidh fhoillseachadh roimhe (Hope et al., 1994). Chaidh feansa a thoirt air falbh bho luchainn a chaidh a dhì-chomasachadh, a chur air deigh agus a roinn air matrix eanchainn aig tighead 1 mm. Chaidh pungan fìne a ghabhail agus an reodhadh aig -80 ° C gus an deach an cleachdadh. Chaidh fighe a fhuaimneachadh air deigh ann am bufair atharraichte stèidhichte air inneal-glanaidh anns a bheil an dà chuid luchd-dìon phosphatase agus protease (Roche, Sigma). Às deidh sonication, chaidh sampaill a dhì-ghalarachadh ann an uisge goileach agus centrifuged aig 15,000xg airson mionaidean 15; chaidh supernatant a chruinneachadh agus a phròiseasadh; an uairsin chaidh meudan pròtain a thomhas le bhith a ’cleachdadh assay Bradford (Bio-Rad). Chaidh sampaill a ruith air gel 10% acrylamide / bisacrylamide, air a ghluasad gu ball PVDF, air a bhacadh ann am bainne 5% agus air a bhrosnachadh le antibodies bun-sgoile (Anti-CREB, Upstate, Lake Placid, NY). Chaidh blots am fradharc às deidh sin a ’cleachdadh siostam chemiluminescence (Pierce). Chaidh a h-uile sampall a dhèanamh àbhaisteach gu GAPDH (Fitzgerald, Concord, MA). Chaidh cuirmean àbhaisteach a ruith gus dèanamh cinnteach gu bheil sinn ann an raon sreathach an assay.

Mion-sgrùdadh densitometry

Airson immunoblots PC12, chaidh mion-sgrùdadh densitometry a dhèanamh a ’cleachdadh ImageJ le calibration slat-slat. Chaidh comharra cùil cuibheasach a thoirt air falbh bho gach tomhas agus chaidh an co-mheas de chomharradh CREB gu GAPDH a thomhas airson gach sampall. Airson immunoblots striatal agus mion-sgrùdadh EMSA, chaidh Scion Image 1.62c a chleachdadh le toirt air falbh sa chùl.

Cnàimh-droma (CIP)

Chaidh measaidhean ChIP a dhèanamh a rèir modhan Tsankova et al. (2004) agus Kumar et al. (2005). Ann an ùine ghoirid, chaidh sampaill striatal dà-thaobhach bho luchagan 11A a chaidh a chumail air no far doxycycline a cheangal ri 1% formaldehyde agus chaidh crosslinking a chuir às le glycine (dùmhlachd deireannach de 0.125 M). Bha na sampallan sin bho sliseagan eanchainn iomlan air an toirt aig ìre an niuclas accumbens leis an cortex air a thoirt air falbh. Chaidh Chromatin a rùsgadh gu timcheall air criomagan 0.2 gu 1 kb tro sonication, air a ghlanadh le grìogagan Protein G (Thermo Scientific # 22852), agus chaidh sampaill cuir a-steach reòta aig -80 ° C. Chaidh eadar 60 agus 100 μg de chromatin a chleachdadh airson gach sileadh. Chaidh 5-10 μg de gach antibody bun-sgoile a chleachdadh (CREB: Bith-theicneòlas Upstate # 06-863, ΔFosB: Bith-theicneòlas Santa Cruz # SC-48x, acetylated H3: Bith-theicneòlas Upstate # 06-599, methylated H3 (LYS9): Teicneòlas Comharradh Cell, cFos: Bith-theicneòlas Santa Cruz # SC-7202x). Chaidh co-fhilltean antibody-chromatin a dhìon le grìogagan Protein G a bharrachd a rèir stiùireadh an t-saothrachaidh (Thermo Scientific # 22852). Às deidh a bhith a ’dol thairis air ais air sampaill de chur-a-steach agus sampaill toirmisgte, chaidh gach sampall a thoirt do PCR cainneachdail (qPCR). Chaidh cleachdadh nan antibodies sin uile airson ChIP a dhearbhadh gu mòr (Tsankova et al., 2004; Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2009).

Chaidh ìrean de cheangal pròtain aig gach neach-adhartachaidh gine a dhearbhadh le bhith a ’tomhas na bha de DNA co-cheangailte le qPCR (Biosystems Applied (ABI) Prism 7700, Foster City, CA). Chaidh cuir a-steach no DNA iomlan (nonimmunoprecipitated) agus DNA immunoprecipitated a mheudachadh ann an trì uiread an làthair SYBR Green (Biosystems Applied, CA). Chaidh luachan Ct bho gach sampall fhaighinn a ’cleachdadh bathar-bog Sequence Detector 1.1. Chaidh tomhas coimeasach de DNA teamplaid a dhèanamh a ’cleachdadh an dòigh ΔΔCt (Tsankova et al., 2004). Primers air an cleachdadh: neach-adhartachaidh BDNF 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; Neach-adhartachaidh AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; Neach-adhartachaidh cck GTGCCCCGCTCTTGTTATTA: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG Neach-adhartachaidh Prodynorphin: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

Mion-sgrùdadh staitistigeil

Tha a h-uile dàta air a thaisbeanadh mar dhòigh ± mearachd àbhaisteach den mheadhan. Chaidh eadar-dhealachadh staitistigeil a dhearbhadh le deuchainn-deuchainn dà-earball nan oileanach (p <0.05). Nuair a chaidh iomadh coimeas a dhèanamh, chaidh luachan-p atharrachadh le bhith a ’cleachdadh ceartachadh Bonferroni.

Rach gu:

Buidheachas

Bu mhath leinn taing a thoirt do Will Renthal agus Arvind Kumar airson còmhraidhean feumail. Bu mhath leinn cuideachd taing a thoirt dha NIDA airson na deuchainnean seo a mhaoineachadh.

Rach gu:

Footnotes

Àicheadh ​​an fhoillsichear: Seo faidhle PDF de làmh-sgrìobhainn neo-aithnichte a chaidh a chlò-bhualadh. Mar sheirbheis do ar luchd-cleachdaidh tha sinn a ’toirt seachad an tionndadh tràth seo den làmh-sgrìobhainn. Thèid an làmh-sgrìobhainn a chopaigeadh, a chuir an clò agus ath-sgrùdadh air an dearbhadh a thig às mus tèid fhoillseachadh anns an riochd mu dheireadh aige. Thoir fa-near gum faodar mearachdan a lorg rè a ’phròiseas riochdachaidh a dh’ fhaodadh buaidh a thoirt air an t-susbaint, agus air na h-àicheadh ​​laghail a dh ’fheumas co-cheangailte ris an iris.

Teirmean seòrsachaidh:

Earrann: #1 Bith-eòlas Ceallach agus Molecular de shiostaman Nervous

Rach gu:

iomraidhean

  1. Andersson M, Konradi C, Cenci MA. Tha feum air pròtain ceangail-freagairt freagairt cAMP airson abairt gine a tha an urra ri dopamine anns an t-striatum neo-iomlan ach nach eil dopamine. J Neurosci. 2001; 21: 9930 - 43. [Sgaoileadh]
  2. Barrot M, Olivier JD, Perrotti LI, DiLeone RJ, Berton O, Eisch AJ, Impey S, Storm DR, Neve RL, Yin JC, Zachariou V, Nestler EJ. Bidh gnìomhachd CREB anns an t-slige niuclas accumbens a ’cumail smachd air gatadh de fhreagairtean giùlain do bhrosnachaidhean tòcail. Proc Natl Acad Sci US A. 2002; 99: 11435 - 40. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  3. Beinfeld MC, Connolly KJ, Pierce RC. Bidh làimhseachadh cocaine a ’meudachadh cholecystokinin extracellular (CCK) anns an t-slige niuclas accumbens de radain a tha nan dùisg, a’ gluasad gu saor, buaidh a tha air àrdachadh ann am radain a tha air an giùlan gu cocaine. J Neurochem. 2002; 81: 1021 - 7. [Sgaoileadh]
  4. Bernard C, Sutter A, Vinson C, Ratineau C, Chayvialle J, Cordier-Bussat M. Bidh peptones a ’brosnachadh tar-sgrìobhadh gine cholecystokinin intestinal tro fhactaran ceangailteach freagairt freagairt monophosphate adenosine cearcallach. Endocrinology. 2001; 142: 721 - 9. [Sgaoileadh]
  5. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Comhairle Ouimet, AC Inbhir Nàrann, Nestler EJ, Greengard P. Tha buaidh dìth-craoibhe airson cocain air an riaghladh leis a ’pròifil neuronal Cdk5. Nàdar. 2001; 410: 376 – 80. [Sgaoileadh]
  6. Cha-Molstad H, Keller DM, Yochum GS, Impey S, Goodman RH. Ceangal seòrsa cealla sònraichte den fhactar tar-sgrìobhaidh CREB ris an eileamaid freagairt cAMP. Proc Natl Acad Sci US A. 2004; 101: 13572 - 7. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  7. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Riaghladh pròtanan delta FosB agus coltach ri FosB le bhith a ’glacadh electroconvulsive agus làimhseachadh cocaine. Mol Pharmacol. 1995; 48: 880 - 9. [Sgaoileadh]
  8. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, PE Shockett, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Ainmhidhean tar-ghnèitheach le in-làthair, riochdachadh gine cuimsichte san eanchainn. Mol Pharmacol. 1998; 54: 495 – 503. [Sgaoileadh]
  9. Chen J, Zhang Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, Nestler EJ. Inntrigeadh de kinase 5 a tha an urra ri cyclin anns an hippocampus le glacaidhean electroconvulsive cronach: dreuchd ΔFosB. J Neurosci. 2000; 20: 8965 - 71. [Sgaoileadh]
  10. Chinenov Y, Kerppola TK. Coinneachadh dlùth de iomadh seòrsa: Eadar-obrachaidhean Fos-Jun a bhios a ’tomhas sònrachas riaghlaidh tar-sgrìobhaidh. Oncogene. 2001; 20: 2438 - 52. [Sgaoileadh]
  11. Cole RL, Konradi C, Douglass J, Hyman SE. Atharrachadh neuronal gu amphetamine agus dopamine: uidheamachdan moileciuil de riaghladh gine prodynorphin ann an rat striatum. Neuron. 1995; 14: 813 - 23. [Sgaoileadh]
  12. Deavall DG, Raychowdhury R, ​​Dockray GJ, Dimaline R. Smachd air tar-sgrìobhadh gine CCK le PACAP ann an ceallan STC-1. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2000; 279: G605 - 12. [Sgaoileadh]
  13. Ding XZ, Mocchetti I. Riaghladh dopaminergic de shusbaint mRNA cholecystokinin ann an rat striatum. Brain Res Mol Brain Res. 1992; 12: 77 - 83. [Sgaoileadh]
  14. Forrest S, McNamara C. Id teaghlach de fhactaran tar-sgrìobhaidh agus cruthachadh lesion vascùrach. Thromb Vasc Biol Arterioscler. 2004; 24: 2014 - 20. [Sgaoileadh]
  15. Gevrey JC, Cordier-Bussat M, Némoz-Gaillard E, Chayvialle JA, Abello J. Co-riatanas kinases pròtain AMP- agus pròtain a tha an urra ri calcium airson gnìomhachadh tar-sgrìobhaidh de ghine cholecystokinin le hydrolysates pròtain. J Biol Chem. 2002; 277: 22407 - 13. [Sgaoileadh]
  16. TA uaine, Alibhai IN, Unterberg S, Neve RL, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ. Inntrigeadh de fhactaran tar-sgrìobhaidh gnìomhach (ATFs) ATF2, ATF3, agus ATF4 anns na nucleus accumbens agus an riaghladh aca air giùlan tòcail. J Neurosci. 2008; 28: 2025 - 32. [Sgaoileadh]
  17. Hamilton ME, Redondo JL, Freeman AS. Thar-shruth de dopamine agus cholecystokinin ann an radan nucleus accumbens mar fhreagairt air rianachd dhrogaichean acrach. Synapse. 2000; 38: 238 - 42. [Sgaoileadh]
  18. Hansen TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. Protein kinase-activated kinase agus protein kinase Tha slighean comharran a ’brosnachadh tar-sgrìobhadh cholecystokinin tro bhith a’ gnìomhachadh pròtain ceangailteach adenosine 3 ′, freagairt 5’-monophosphate. Mol Endocrinol. 1999; 13: 466–75. [Sgaoileadh]
  19. Hansen TV, Nielsen FC. Riaghladh tar-sgrìobhadh gine cholecystokinin neuronal. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 2001; 234: 61 - 7. [Sgaoileadh]
  20. Hansen TV. Tar-sgrìobhadh gine cholecystokinin: eileamaidean brosnachaidh, factaran tar-sgrìobhaidh agus slighean comharran. Peptides. 2001; 22: 1201 - 11. [Sgaoileadh]
  21. Hansen TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. Bidh KCl agus forskolin a ’riaghladh abairt gine cholecystokinin gu co-òrdanaichte tro bhith a’ co-òrdanachadh gnìomhachd CREB agus an co-ghnìomhaiche CBP. J Neurochem. 2004; 89: 15 - 23. [Sgaoileadh]
  22. Haun RS, Dixon JE. Tha leasaichear tar-sgrìobhaidh riatanach airson a bhith a ’cur an cèill gine rat cholecystokinin a’ toirt a-steach sreath a tha co-ionann ris an eileamaid -296 den ghine c-fos daonna. J Biol Chem. 1990; 265: 15455 - 63. [Sgaoileadh]
  23. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Dreuchd riatanach a ’ghine fosB ann an gnìomhan moileciuil, ceallach agus giùlan de ghlacaidhean electroconvulsive cronach. J Neurosci 1998. 1998; 18: 6952 - 62. [Sgaoileadh]
  24. Hokfelt T, Rehfeld JF, Skirboll L, Ivemark B, Goldstein M, Markey K. Fianais airson co-sheasmhachd dopamine agus CCK ann an neuronaichean meso-limbic. Nàdar. 1980; 285: 476 - 8. [Sgaoileadh]
  25. An dòchas BT, Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ. Bidh làimhseachadh grèim electroconvulsive cronach (ECS) a ’leantainn gu bhith a’ cur an cèill iom-fhillte AP-1 a mhaireas fada ann an eanchainn le atharrachadh ann an dèanamh agus feartan. J Neurosci. 1994; 14: 4318 - 28. [Sgaoileadh]
  26. Dòchas BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Inntrigeadh do chruinneachadh AP-1 fad-ùine a tha air a dhèanamh suas de phròtainean altraim a tha atharraichte ann an eanchainn le cocaine ainnealach agus leigheasan cronach eile. Neuron. 1994; 13: 1235 – 44. [Sgaoileadh]
  27. Huang KX, Walters JR. Riaghladh dopaminergic de fhactar tar-sgrìobhaidh AP-1 gnìomhachd ceangailteach DNA ann an rat striatum. Neo-eòlas. 1996; 75: 757 - 75. [Sgaoileadh]
  28. Impey S, McCorkle SR, Cha-Molstad H, Dwyer JM, Yochum GS, Boss JM, McWeeney S, Dunn JJ, Mandel G, Goodman RH. A ’mìneachadh regulon CREB: sgrùdadh air feadh genome de roinnean riaghlaidh factaran tar-sgrìobhaidh. Cell. 2004; 119: 1041 - 54. [Sgaoileadh]
  29. Johannessen M, Delghandi BP, Moens U. Dè a tha a ’tionndadh CREB air? Comharra cealla. 2004; 16: 1211 - 27. [Sgaoileadh]
  30. Josselyn SA, Vaccarino FJ. A ’dol an aghaidh buaidhean antagonists CCK (A) agus CCK (B) air leasachadh gnìomhachd cumhaichte ann am radain. Giùlan Pharmacol. 1996; 7: 505 - 512. [Sgaoileadh]
  31. Josselyn SA, De Cristofaro A, Vaccarino FJ. Fianais airson com-pàirt gabhadair CCK (A) ann a bhith a ’faighinn gnìomhachd cumhaichte air a thoirt gu buil le cocaine ann am radain. Brain Res. 1997; 763: 93 - 102. [Sgaoileadh]
  32. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr., Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR , Nestler EJ. Bidh foillseachadh den fhactar tar-sgrìobhaidh deltaFosB san eanchainn a ’cumail smachd air cugallachd ri cocaine. Nàdar. 1999; 401: 272 - 6. [Sgaoileadh]
  33. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Tha ath-dhealbhadh chromatin na phrìomh dhòigh air plastachd a tha air a bhrosnachadh le cocaine ann an striatum. Neuron. 2005; 48: 303 - 14. [Sgaoileadh]
  34. Mattson BJ, Bossert JM, Simmons DE, Nozaki N, Nagarkar D, Kreuter JD, Hope BT. Tha fosphorylation CREB air a bhrosnachadh le cocaine ann an niuclas accumbens de radain le mothachadh cocaine air a chomasachadh le gnìomhachd nas fheàrr de kinase extracellular co-cheangailte ri comharra, ach chan e protein kinase A. J Neurochem. 2005; 95: 1481 - 94. [Sgaoileadh]
  35. McClung CA, Nestler EJ. Riaghladh air riochdachadh gine agus duais cocaine le CREB agus DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208 – 15. [Sgaoileadh]
  36. McClung CA, Ulery PG, LI Perrotti, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: gluasad moileciuil airson atharrachadh ùine-fhada san eanchainn. Res Brain Res Brain Res. 2004; 132: 146 – 54. [Sgaoileadh]
  37. Nestler EJ, Kelz MB, Chen JS. ΔFosB: Eadar-mheadhanair moileciuil de plasticity neural agus giùlan fad-ùine. Brain Res. 1999; 835: 10 - 17. [Sgaoileadh]
  38. Nestler EJ. A bheil slighe mhoilecular cumanta airson tràilleachd? Nat Neurosci. 2005; 8: 1445 – 9. [Sgaoileadh]
  39. Nestler EJ. Innealan tar-sgrìobhaidh de chur-ris: dreuchd DeltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245 - 55. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  40. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, DJ Knapp, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Pàtranan eadar-dhealaichte air inntrigeadh DeltaFosB san eanchainn le drogaichean de dhroch-dhìol. Sinapse. 2008; 62: 358 – 69. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  41. Rando OJ, Chang HY. Seallaidhean air feadh genome de structar chromatin. Annu Rev Biochem. 2009; 78: 245 - 71. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  42. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd., Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Bidh Delta FosB a ’dèanamh eadar-theangachadh air desensitization epigenetic den ghine c-fos às deidh nochdadh amphetamine cronach. J Neurosci. 2008; 28: 7344 - 9. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  43. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou, S K, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Tha anailis air feadh an t-saoghail air riaghladh chromatin le cocaine a ’nochdadh dreuchd airson sirtuins. Neuron. 2009; 62: 335 – 48. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  44. Rotzinger S, Bush DE, Vaccarino FJ. Mion-atharrachadh cholecystokinin air gnìomh dopamine mesolimbic: riaghladh giùlan brosnachail. Toxicol Pharmacol. 2002; 91: 404 - 13. [Sgaoileadh]
  45. Rourke IJ, Hansen TV, Nerlov C, Rehfeld JF, Nielsen FC. Co-obrachadh àicheil eadar bogsa freagairteach E-box agus cAMP / TPA freagairteach anns an neach-adhartachaidh gine cholecystokinin. FEBS Lett. 1999; 448: 15 - 8. [Sgaoileadh]
  46. Shaw-Lutchman TZ, Barrot M, Wallace T, Gilden L, Zachariou V, Impey S, Duman RS, Storm D, Nestler EJ. Mapadh roinneil agus ceallach de ath-sgrìobhadh CRE-meadhanaichte rè tarraing morphine naltrexone-precipitated. J Neurosci. 2002; 22: 3663 - 3672. [Sgaoileadh]
  47. Shaw-Lutchman TZ, Impey S, Storm D, Nestler EJ. Riaghladh tar-sgrìobhadh CRE-meadhanaichte ann an eanchainn luch le amphetamine. Synapse. 2003; 48: 10 - 7. [Sgaoileadh]
  48. Sheng M, McFadden G, Greenberg ME. Ìsleachadh membrane agus calcium ag adhbhrachadh tar-sgrìobhadh c-fos tro phosphorylation de fhactar tar-sgrìobhaidh CREB. Neuron. 1990; 4: 571 - 82. [Sgaoileadh]
  49. Tsankova NM, Kumar A, Nestler EJ. Mion-atharrachaidhean histone aig roinnean brosnachaidh gine ann an rat hippocampus às deidh glacaidhean electroconvulsive acute agus cronach. J Neurosci. 2004; 24: 5603 - 10. [Sgaoileadh]
  50. Ulery PG, Nestler EJ. Riaghladh gnìomh tar-sgrìobhaidh DeltaFosB le Ser27 phosphorylation. Eur J Neurosci. 2007; 25: 224 – 30. [Sgaoileadh]
  51. Vaccarino FJ. Eadar-obrachadh nucleus accumbens dopamine-CCK ann an duais psychostimulant agus giùlan co-cheangailte. Biobehav Neurosci An t-Urr. 1992; 18: 207 - 14. [Sgaoileadh]
  52. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy BP, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ. ΔFosB: Dreuchd riatanach airson ΔFosB anns na nucleus accumbens ann an gnìomh morphine. Neurosci nàdur. 2006; 9: 205 - 11. [Sgaoileadh]