PLoS One. 2013 Samhain 25; 8 (11): e81245. doi: 10.1371 / journal.pone.0081245.
Nishijima T., Kawakami M., Kita I..
Stòr
Obair-lann de Eòlas-inntinn Giùlan, Sgoil Cheumnach Saidheansan Slàinte Daonna, Oilthigh Metropolitan Tokyo, Tokyo, Iapan.
Abstract
Bidh eacarsaich corporra a ’leasachadh grunn thaobhan de dhreuchd hippocampal. A rèir a ’bheachd gu bheil gnìomhachd neuronal deatamach ann a bhith a’ brosnachadh gnìomhan neuronal, tha litreachas a bh ’ann roimhe air sealltainn gu cunbhalach gu bheil gluasadan eacarsaich a’ dùsgadh gnìomhachd neuronal anns an hippocampus. Bidh brosnachaidhean gnìomhach ath-aithris a ’leantainn gu cruinneachadh den fhactar tar-sgrìobhaidh ΔFosB, a bhios a’ meadhanachadh plastachd neural fad-ùine.
Anns an sgrùdadh seo, rinn sinn deuchainn air a ’bheachd gu bheil ruith cuibhle saor-thoileach fad-ùine ag adhbharachadh abairt ΔFosB anns an hippocampus, agus rinn sinn sgrùdadh air buaidhean sgìreil sam bith a dh’ fhaodadh a bhith taobh a-staigh na fo-raointean hippocampal air an axis dorso-ventral. Bha luchagan fireann C57BL / 6 a ’fuireach le no às aonais cuibhle ruith airson seachdainean 4. Mheudaich cuibhle fad-ùine àrdachadh mòr air immunoreactivity FosB / ΔFosB anns a h-uile sgìre hippocampal air a thomhas (ie, ann an fo-raointean DG, CA1, agus CA3 an dà chuid an hippocampus droma agus ventral). Dhearbh na toraidhean nach eil ruith cuibhle a ’brosnachadh abairt sònraichte sgìreil de immunoreactivity FosB / ΔFosB anns an cortex, a’ moladh nach eil an àrdachadh èideadh ann am FosB / ΔFosB taobh a-staigh an hippocampus mar thoradh neo-shònraichte air ruith. Chomharraich dàta blot an iar gu robh barrachd immunoreactivity hippocampal FosB / ΔFosB gu mòr mar thoradh air barrachd ΔFosB. Tha na co-dhùnaidhean sin a ’moladh gu bheil eacarsaich corporra fad-ùine na bhrosnachadh làidir airson inntrigeadh ΔFosB air feadh an hippocampus gu lèir, a bhiodh a’ mìneachadh carson a dh ’fhaodadh eacarsaich piseach a thoirt air gnìomhan dorsal agus ventral hippocampus-eisimeil. Gu h-inntinneach, lorg sinn gu robh ceangal adhartach eadar abairt FosB / ΔFosB anns an DG leis an àireamh de neurons doublecortin-immunoreactive (ie, neo-aithghearr).
Ged a tha na dòighean anns am bi ΔFosB a ’meadhanachadh neurogenesis a tha air a bhrosnachadh le eacarsaich fhathast mì-chinnteach, tha an dàta seo a’ ciallachadh gu bheil neurogenesis air a bhrosnachadh le eacarsaich co-dhiù an urra ri gnìomhachd. Air an toirt còmhla, tha na toraidhean làithreach againn a ’moladh gu bheil ΔFosB na thargaid mholacileach ùr a tha an sàs ann a bhith a’ riaghladh plastachd hippocampal air a bhrosnachadh le eacarsaich.
Ro-ràdh
Tha eacarsaich a ’toirt buannachdan eadar-mheasgte air taobhan molecol, structarail agus gnìomhach den hippocampus ann an creimich [1,2], cuid dhiubh a ’faighinn taic bho sgrùdaidhean daonna [3,4]. Ach, chan eilear a ’tuigsinn gu leòr na h-innleachdan a tha mar bhunait ris na h-atharrachaidhean a tha air an adhbhrachadh le eacarsaich ann am plastachd hippocampal. Tha litreachas roimhe air sealltainn gu cunbhalach gu bheil eacarsaich a ’nochdadh gnìomhachd neuronal hippocampal ann an creimich. Tha sgrùdaidhean immunohistochemical a ’cleachdadh c-Fos, comharra de ghnìomhachadh neuronal thar-ghluasadach, air dearbhadh gu robh an dà chuid ruith èiginneach agus saor-thoileach a’ meudachadh faireachdainn c-Fos ann an gyrus an fhiaclan (DG), CA1, agus CA3 fo-raointean an hippocampus creimich [5-7]. A bharrachd air an sin, tha sgrùdadh roimhe a ’cleachdadh laser-Doppler flowmetry (LDF) air sealltainn gu robh ruith treadmill tlàth a’ meudachadh sruth fala cerebral roinneil (rCBF), comharradh eile de ghnìomhachadh neuronal, ann am fo-thalamh CA1 ann an radan [8]. Tha sgrùdaidhean immunohistochemical a ’comasachadh mion-sgrùdaidhean sònraichte sgìreil às deidh eacarsaich a stad, fhad‘ s a tha LDF a ’comasachadh sgrùdadh fìor-ùine air rCBF ann an sgìre ionadail rè eacarsaich. A dh ’aindeoin na buannachdan agus na cuingealachaidhean a tha aig gach sgrùdadh, sheall na sgrùdaidhean sin mar an ceudna buaidh de bhuillean eacarsaich air gnìomhachd neuronal hippocampal. Tha na toraidhean sin a ’moladh dòigh far am bi eacarsaich cunbhalach fad-ùine a’ brosnachadh plastachd hippocampal le bhith a ’piobrachadh gnìomhachd neuronal a-rithist [9].
Tha am bàillidh tar-sgrìobhaidh ΔFosB, isoform splice truncated de FosB làn-fhaid, air a thoirt a-steach le diofar sheòrsaichean brosnachaidh a-rithist ann an roinnean eanchainn sònraichte, far am bi e a ’cruinneachadh mean air mhean air sgàth a sheasmhachd gun samhail (leth-beatha de sheachdainean) [10-12]. Tha buidheann fianais a tha a ’sìor fhàs a’ sealltainn gu bheil ìrean nas àirde de ΔFosB a ’toirt buaidh air plastachd neural is giùlain fad-ùine co-cheangailte ri brosnachaidhean sònraichte [11,13]. Mar eisimpleir, bidh rianachd cronail de dhrogaichean mì-ghnàthachaidh leithid cocaine agus morphine mar as trice a ’meudachadh abairt ΔFosB anns na nucleus accumbens, a’ riochdachadh aon de na h-innealan molecular a tha mar bhunait air barrachd cugallachd ris na drogaichean sin [11,14,15]. S.gu h-annasach ri brosnachaidhean duais eile, a ’toirt a-steach daithead làn geir agus eòlas gnèitheasach [16,17], lmheudaich ruith cuibhle saor-thoileach teirm-ùine cuideachd immunoreactivity FosB / ΔFosB ann an nucleus accumbens, a ’moladh gu bheil ruith saor-thoileach mar dhuais nàdurrach airson creimich [18,19]. Ach, cho fad ‘s as aithne dhuinn, cha do rinn litreachas sam bith sgrùdadh a bheil a bhith a’ nochdadh eacarsaich corporra a-rithist ag adhbhrachadh abairt ΔFosB anns an hippocampus. Leis gu bheil eacarsaich a ’piobrachadh gnìomhachd neuronal anns an hippocampus, smaoinich sinn gum biodh ruith cuibhle saor-thoileach fad-ùine cuideachd a’ brosnachadh faireachdainn ΔFosB anns an hippocampus. Ged a tha na dearbh dhòighean anns am bi ΔFosB a ’riaghladh plastachd hippocampal fhathast mì-chinnteach, tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil luchainn a tha gann de altram gine a ’sealltainn neurogenesis hippocampal le milleadh agus barrachd giùlan coltach ri trom-inntinn [20,21]. Mindeed, tha fios gu bheil eacarsaich a ’neartachadh neurogenesis agus gu bheil feartan antidepressant aige [22-25]. Mif tha ar beachd-smuain ceart, bhiodh ΔFosB na thargaid mholacileach ùr a dh ’fhaodadh a bhith a’ toirt buaidh air plastachd hippocampal air a bhrosnachadh le eacarsaich.
Tha caisead anatomical agus gnìomhach aig an hippocampus air an axis fhada (dorso-ventral) aige [26]. Tha prìomh phàirt aig an hippocampus droma ann an ionnsachadh spàsail agus cuimhne [27,28], ach tha an hippocampus ventral gu mòr an sàs ann a bhith a ’riaghladh giùlan tòcail [29,30]. A bharrachd air an sin, tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil brosnachaidhean fiseòlasach a ’toirt air adhart diofar phàtranan de mhìneachadh c-Fos anns na roinnean droma agus ventral den hippocampus [31-33]. Leis gu bheil eacarsaich a ’leasachadh an dà chuid dorsal [34-37] agus gnìomhan a tha an urra ri hippocampus ventral [24,25,38], tha e cudromach sgrùdadh a dhèanamh air co-dhiù a tha ruith saor-thoileach fad-ùine ag adhbhrachadh faireachdainn sgìreil de ΔFosB anns an hippocampus.
B ’e prìomh bheachd-bheachd an sgrùdaidh seo gum biodh ruith cuibhle saor-thoileach fad-ùine a’ brosnachadh faireachdainn ΔFosB ann an hippocampus na luchaige. Chaidh an beachd-bharail seo a sgrùdadh le FosB / ΔFosB immunohistochemistry anns na fo-raointean droma agus hippocampal ventral, DG, CA1, agus CA3, le cuideam a bharrachd air a bhith a ’comharrachadh inntrigeadh sgìre-sònraichte. Chaidh toraidhean a dhearbhadh le blotadh an iar, a chaidh a chleachdadh gus isoform de altram toraidhean gine air an toirt a-steach don hippocampus. Rinn sinn sgrùdadh cuideachd air an cortex airson inntrigeadh FosB / ΔFosB sgìre-shònraichte gus faighinn a-mach am faodadh eacarsaich fad-ùine neo-shònraichte àrdachadh ann an immunoreactivity FosB / ΔFosB san eanchainn. Mu dheireadh, chaidh an ceangal co-dhàimh eadar abairt FosB / ΔFosB agus neurogenesis a sgrùdadh mar a ’chiad cheum ann a bhith a’ sireadh buaidh gnìomh inntrigeadh ΔFosB a tha air a bhrosnachadh le eacarsaich ann a bhith a ’riaghladh plastachd hippocampal.
Stuthan agus Dòighean-obrach
1: Aithris mu bheathaichean is bheusachd
Chaidh fichead luchag fireann C57BL / 6 (8 seachdainean a dh'aois) a cheannach bho neach-briodaidh malairteach (SLC, Shizuoka, Iapan). Chaidh deich luchagan a chleachdadh airson Experiment 1, agus na deich eile airson Experiment 2. Bha luchagan a ’fuireach ann an suidheachaidhean fo smachd teothachd (22 - 24 ° C) agus solas (cearcall aotrom / dorcha 12 / 12-h, solas air aig 0500), agus chaidh biadh is uisge a thoirt dhaibh ad libitum. Chaidh a h-uile modh deuchainneach aontachadh le Comataidh Beusachd Deuchainneach Bheathaichean Oilthigh Metropolitan Tokyo.
Anns gach deuchainn, nuair a ràinig iad, chaidh luchagan a thoirt seachad air thuaiream do bhuidheann smachd (Smachd, n = 5) no buidheann ruith (Runner, n = 5). Tron chiad seachdain, bha na luchagan uile air an cumail ann an cèidsichean plastaig àbhaisteach ann am buidhnean (luchagan / cèidse 5) airson acclimatization tùsail. An uairsin, chaidh luchagan ruitheadair a ghluasad a-steach do chèidse le cuibhle ruith (ENV-046, Med Associate Inc., Georgia, VT, USA). Leis gu bheil fios gu bheil iomallachd sòisealta a ’cuir às do neurogenesis a tha air a bhrosnachadh le eacarsaich anns an hippocampus [39], Chaidh luchagan ruitheadair a chumail mar bhuidheann (luchagan / cèidse 5) airson seachdainean 4 a bharrachd. Chaidh an àireamh de chuibhlichean cuibhle a chlàradh gach madainn agus chaidh cuideam bodhaig (g) a thomhas gach seachdain.
2: Deuchainn 1. Sgrùdadh immunohistochemical air abairt FosB / ΔFosB agus neurogenesis hippocampal
2.1: Perfusion agus giollachd clò
A ’mhadainn (0900 - 1100) às deidh an latha mu dheireadh den ùine ruith, chaidh na luchagan anesthetized gu domhainn le sodium pentobarbital agus air an toirt thairis le saline fuar. Chaidh an eanchainn a thoirt air falbh gu sgiobalta agus an dèidh a shuidheachadh ann am paraformaldehyde 4% ann an saline bufair fosfáit 0.1 M (PBS, pH 7.4) thar oidhche. Bha an eanchainn an uairsin air a chrioptachadh ann an 30% sucrose ann am PBS agus reòta gus an deach tuilleadh giollachd a dhèanamh. Chaidh earrannan eanchainn coronal (40 μm) de leth-chruinne fhaighinn le bhith a ’cleachdadh microtome reòta agus air an cruinneachadh ann am PBS le 0.01% sodium azide.
2.2: Immunohistochemistry
Chaidh sreath aon-às-sia de earrannan a thaghadh air thuaiream airson dìonachd FosB / ΔFosB. Chaidh sreath faisg air làimh a chleachdadh airson labeling doublecortin (DCX), comharra de neurons neamhainneach a chaidh a dhearbhadh airson neurogenesis a mheasadh [40,41]. Às deidh gnìomhachd peroxidase endogenous a chuir às le 1% H.2O2 ann am PBS, chaidh earrannan a bha a ’seòladh gu saor a chuir air adhart le fuasgladh bacaidh anns an robh 10% serum each àbhaisteach ann am PBS airson 2 h. Às deidh rinses ann am PBS, chaidh earrannan a thoirt a-steach le antibody polyclonal pan-FosB coineanach (1: 1000, sc-48, Bith-theicneòlas Santa Cruz, Dallas, TX, na SA) air an lagachadh ann am PBS le 0.5% Triton X-100 agus 0.5% BSA (PBST -BSA) airson 24 h aig 4 ° C. Chaidh sreath eile de dh ’earrannan a bhrosnachadh le antibody polyclonal gobhar anti-DCX (1: 500, sc-8066, Santa Cruz) ann am PBST-BSA airson 48 h aig 4 ° C. Chaidh na h-earrannan a thoirt a-steach tuilleadh le antibody àrd-sgoile biotinylated iomchaidh (IgG an-aghaidh coineanach, 1: 1000, AP182B; IgG an-aghaidh gobhar, 1: 1000, AP180B, an dà chuid antibodies bho EMD Millipore, Billerica, MA, USA) ann am PBST-BSA airson 2 h aig teòthachd an t-seòmair. Chaidh na h-earrannan an uairsin a làimhseachadh le iom-fhillte avidin-biotin-peroxidase (Vectastain ABC peroxidase kit, Vector Laboratories Inc, Burlingame, CA, na SA) airson 90 min a ’leantainn stiùireadh an neach-dèanamh. Chaidh na antigens fhaicinn mu dheireadh le 0.02% 3,3-diaminobenzidine (DAB) ann an 0.1 M Tris-HCl (pH 7.6) anns a bheil 0.01% H2O2. Airson dìonachd FosB / ΔFosB, chaidh an ath-bhualadh a dhèanamh nas dian le nicil ammonium sulfate. Airson staining DCX, chaidh nuclei cealla a chuir an aghaidh staining Nissl. Chaidh earrannan a chuir suas air sleamhnagan le còmhdach gelatin agus chaidh còmhdaichean a chuir orra.
2.3: Meudachadh immunoreactivity FosB / ΔFosB a ’cleachdadh stairsneach ìomhaighean
Chaidh an antibody pan-FosB a chaidh a chleachdadh san sgrùdadh seo a thogail an aghaidh sgìre a-staigh a chaidh a cho-roinn le sgìre FosB agus ΔFosB N-terminal, gus nach urrainn leth-bhreith a dhèanamh eadar an dà isoform. Mar sin, chaidh na structaran dìonachd a mhìneachadh mar niuclasan FosB / ΔFosB immunoreactive (FosB / ΔFosB-ir). Airson tomhas dall neo-phàirteach, chaidh sleamhnagan a chòdachadh ron sgrùdadh. Atlas eanchainn na luchaige [42] air a chleachdadh gus suidheachadh nan roinnean inntinneach a leanas (ROI) a chomharrachadh: còmhdach cealla granule (GCL) de DG (earrannan 3), còmhdach cealla pioramaideach de CA1 (earrannan 3) agus CA3 (earrannan 2 - 3) anns an hippocampus droma (dùinte gu -2.2 mm bhon bregma); DG (earrannan 2), CA1 (earrannan 2), agus CA3 (earrannan 2) anns an hippocampus ventral (dùinte gu -3.4 mm bhon bregma) (Figear 4, clì). Anns na h-earrannan caudal tha an dà chuid dorsal agus ventral den hippocampus, ach chaidh a ’chuibhreann ventral a chuimseachadh. Anns na DG, chaidh lannan suprapyramidal (DGsp) agus infrapyramidal (DGip) a sgrùdadh air leth. Cortex motair (earrannan 2 - 3, dùinte gu -0.6 mm bhon bregma), cortex baraille somatosensory (earrannan 2 - 3, dùinte gu -0.6 mm bhon bregma), cortex lèirsinneach (earrannan 3, dùinte gu -2.9 mm bhon Chaidh mion-sgrùdadh a dhèanamh cuideachd air bregma), cortex auditory (earrannan 3, dùinte gu -2.9 mm bhon bregma), agus bulb olfactory (earrannan 3, dùinte gu + 4.3 mm bhon bregma) (Figear 6, clì).
Chaidh ìomhaighean didseatach (2070 × 1548 pixel) de gach ROI a thogail a ’cleachdadh miocroscop optigeach (BX-51, Olympus, Tokyo, Iapan) le camara CCD (DP-73, Olympus) agus bathar-bog ìomhaighean (cellSens, Olympus). b ’e meudachadh lionsa amas 10 × airson ROI hippocampal agus 4 × airson ROI cortical. Gus a bhith a ’comharrachadh immunoreactivity FosB / ΔFosB meadhanach-gu-làidir (Figear 1D - G.), a ’cleachdadh grunn earrannan ro-làimh, chaidh an dà chuid suidheachadh togail ìomhaighean (dian solais, meud stad achaidh, ùine nochdaidh, agus cothromachadh geal) agus ìrean stairsnich airson gach aon de na pàirtean RGB airson ROI hippocampal agus cortical. Chaidh an anailis a leanas a dhèanamh an uairsin fo na cumhaichean as fheàrr (1). Chaidh ROI a thaghadh le poileagan le cumadh neo-riaghailteach (Figear 1A, B) (2). Chaidh stairsneach a dhèanamh air an ìomhaigh, a thionndaidh na niuclasan FosB / ΔFosB-ir gu dath dearg (Figear 1C-G) (3). Chaidh an% ROI an uairsin a thomhas gu fèin-ghluasadach mar a leanas:% ROI = (sgìre air a thionndadh (ann an dearg) / sgìre ROI iomlan) × 100.
Gus an anailis stairsneach ìomhaigh seo a dhearbhadh, chaidh roinnean 20 a thaghadh air thuaiream bho dhiofar raointean eanchainn le diofar mheudan sgìre. A bharrachd air an tomhas stairsneach ìomhaigh, chaidh an àireamh de niuclasan FosB / ΔFosB-ir taobh a-staigh nan roinnean taghte a chunntadh le làimh agus chaidh dùmhlachd niuclasan FosB / ΔFosB-ir fhaighinn le bhith a ’roinneadh an àireamh de niuclasan FosB / ΔFosB-ir leis an tomhas. sgìre (mm2).
2.4: Meudachadh neurons neòil DCX-ir ann an gyrus an fhiaclan
Bha na neurons neòghlan DCX-ir ann an luchaichean DG de Runner pailt agus a ’dol thairis air, ga dhèanamh duilich a bhith a’ cunntadh gu mionaideach an àireamh air leth de soma DCX-ir a ’cleachdadh miocroscop optigeach. Ach, ann an sgrùdadh roimhe, sheall mion-sgrùdadh Sholl airson measadh morphologach gu bheil dendrite singilte aig gach neuron DCX-ir, gu cuibheasach, nuair a thèid a thomhas taobh a-staigh 40 μm den soma [43]. Mar sin, chaidh an anailis tùsail a leanas a leasachadh gus comas a thoirt do thomhas sgìreil de neurons DCX-ir.
- (1) Chaidh ìomhaigh den GCL a ro-mheasadh air taisbeanadh coimpiutair a ’cleachdadh bathar-bog ìomhaighean agus lionsa amas 40 × (2). Air an ìomhaigh beò, chaidh pìos loidhne (150 ± 0.1 μm) a tharraing air feadh meadhan an GCL (Figear 2) (3). Ag atharrachadh an doimhneachd fòcas, chaidh an àireamh de thursan a bha an loidhne loidhne a ’dol tarsainn DCX-ir dendrites a chunntadh (4). Bha na ROIan (DGsp dorsal, dDGsp; dorsal DGip, dDGip; ventral DGsp, vDGsp; ventral DGip, vDGip) a ’freagairt ris na roinnean far an deach mion-sgrùdadh FosB / ΔFosB a sgrùdadh (5). Anns a h-uile ROI, chaidh earrannan loidhne 2 - 3 a tharraing gach roinn agus chaidh an àireamh de chroisean-tarsainn a dhèanamh cuibheasach thairis air earrannan 2 - 3 gach luchag. Leis gu bheil tiugh an GCL timcheall air 60 - 80 μm, bu chòir gum biodh an àireamh de chroisean-tarsainn a ’nochdadh an àireamh de neurons DCX-ir taobh a-staigh na sgìre cuibhrichte a chaidh a sgrùdadh.
3. Deuchainn 2. Comharrachadh an isoform FosB / ΔFosB air a bhrosnachadh le ruith cuibhle
3.1: Perfusion agus giollachd clò
Chaidh cohort a bharrachd de luchainn a làimhseachadh mar gu h-àrd ann an Deuchainn 1. Às deidh seachdainean 4 de eadar-theachd ruith, chaidh na luchagan a thoirt thairis le saline fuar fo anesthesia domhainn. Chaidh an hippocampus a sgaoileadh gu sgiobalta agus a reodhadh le nitrogen leaghte, agus a stòradh aig -80 ° C. Chaidh hippocampi gach luchag a cho-sheòrsachadh ann am bufair RIPA (150 mM NaCl, 25 mM Tris-HCl pH 7.6, 1% NP-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS, #8990, Thermo Scientific, IL, USA) anns a bheil protease luchd-dìon (cOmplete Mini, Roche, Manheim, A ’Ghearmailt). Chaidh na lysates a centrifug airson 15 min aig 5000 rpm aig 4 ° C agus chaidh uachdarain a chruinneachadh. Chaidh co-chruinneachaidhean protein a thomhas le pasgan BCA Protein Assay (#23227, Thermo Scientific, IL, USA).
3.2: blotadh an iar
Chaidh meudan co-ionann de phròtain (30 μg / lane) a electrophoresed air gel polyacrylamide 10%, an uairsin air a ghluasad gu ball PVDF (Immun-Blot, 0.2 μm, Bio-Rad, MD, USA). Chaidh casg a chuir air ceangal nonspecific le bhith a ’ro-bhualadh an membran airson 1 h ann an TBST (0.5 M NaCl, 20 mM Tris-HCl pH 7.5, 0.1% Tween-20) anns a bheil 3% BSA. Chaidh an membran a thoirt a-steach leis an antibody pan-FosB (1: 1000) a chaidh a chleachdadh gu h-àrd airson immunohistochemistry, a sgaoileadh ann an TBST anns a bheil 3% BSA. Às deidh a bhith a ’nighe le TBST, chaidh an membran a thoirt a-steach le antibody IgG an-aghaidh coineanach HRP (1: 5000 ann an TBST, NA934, GE Healthcare, Siorrachd Buckingham, RA) airson 1 h aig teòthachd an t-seòmair. Às deidh nigheadaireachd le TBST, chaidh còmhlain pròtain fhaicinn le bhith a ’toirt a-steach Ceimigeachd Leasaichte (Western Lightning Plus-ECL, PerkinElmer, MA, na SA) agus chaidh an glacadh le bhith a’ cleachdadh Ìomhaigh Quant LAS 4000 mini (GE Healthcare, Siorrachd Buckingham, RA). Chaidh an membran an uairsin ath-sgeadachadh le antibody anti-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (#2275, 1: 5000 ann an TBS-T, Trevigen, MD, USA) mar smachd luchdachaidh. Chaidh an dùmhlachd optigeach de na bannan pròtain a thomhas le bhith a ’cleachdadh Image-J agus air a dhèanamh àbhaisteach gu ìre GAPDH.
4: Mion-sgrùdadh staitistigeil
Chaidh atharrachaidhean ann an cuideam corp na luchaige a sgrùdadh le ceumannan dà-shligheach ANOVA (buidheann × ùine). Chaidh deuchainn-t gun ullachadh a chleachdadh gus eadar-dhealachaidhean staitistigeil eadar buidhnean a dhearbhadh (Control vs. Runner). Chaidh mion-sgrùdadh co-dhàimh Pearson a chleachdadh gus mion-sgrùdadh immunoreactivity FosB / ΔFosB a dhearbhadh (cunntadh làimhe vs stairsneach ìomhaigh), agus gus sgrùdadh a dhèanamh air a ’cheangal eadar ìre faireachdainn FosB / ΔFosB agus an àireamh de chroisean DCX anns an DG. Chaidh dàta a thaisbeanadh mar mheadhan ± SEM. Chaidh an stairsneach airson brìgh staitistigeil a shuidheachadh aig P <0.05.
toraidhean
1: Cuideam bodhaig agus astar ruith ann an Deuchainnean 1 agus 2
Tha atharrachaidhean ann an cuideam bodhaig an dà chuid luchainn Smachd agus Ruitheadair ann an Deuchainnean 1 agus 2 air an toirt còmhla agus air an sealltainn ann an Figear 3. Chomharraich ANOVA dà-shligheach dà-thaobh eadar-obrachadh cudromach (buidheann × ùine, F(4, 72) = 13.6, P <0.001) agus prìomh bhuaidh na buidhne F(1, 18) = 6.07, P <0.05), a ’nochdadh cuideam bodhaig gu math nas ìsle ann an luchagan Runner. Tha an astar ruith airson gach cèidse air a shealltainn ann an Clàr 1. Ged nach robh cinnt dè an astar ruith a bh ’aig gach luchag leis gu robh na luchagan a’ fuireach còmhla, dhearbh amharc cunbhalach gu robh na luchagan gu tric a ’dèanamh ruith cuibhle. Bha na luchagan Runner ann an Experiment 2 a ’ruith nas fhaide na an fheadhainn ann an Experiment 1, ach bha an astar ruith cuibheasach (m / latha / cèidse) cunbhalach tro gach deuchainn.
2: Dligheachadh tomhas immunoreactivity FosB / ΔFosB a ’cleachdadh stairsneach ìomhaigh
Bha co-dhàimh chudromach eadar sgìre FosB / ΔFosB-ir a fhuaireadh le stairsneach ìomhaighean agus dùmhlachd niuclasan FosB / ΔFosB-ir a fhuaireadh le cunntadh làimhe (r = 0.941, P <00001, Figear 4).
3: Immunoreactivity FosB / ΔFosB anns an hippocampus
Chaidh ìomhaighean riochdachail de bhanachdach FosB / ΔFosB a nochdadh anns na fo-raointean droma agus hippocampal ventral air an sealltainn ann an Figear 5. Anns a h-uile ROI a chaidh a sgrùdadh, immunoreactivity FosB / ΔFosB ann an luchagan Runner (Figear 5, deas) gu càileachdail nas àirde na sin ann an luchagan Smachd (Figear 5, meadhan). Ann an luchagan ruitheadair, sheall mion-sgrùdadh cainneachdail àrdachadh mòr ann an sgìre FosB / ΔFosB-ir anns an dà chuid dorsal (DGsp: P <0.01; DGip: P <0.01; CA1: P <0.05; CA3: P <0.05) agus na fo-raointean hippocampal ventral (DGsp: P <0.01; DGip: P <0.05; CA1: P <0.05; CA3: P <0.05; Figear 6).
4: Immunoreactivity FosB / ΔFosB anns an cortex
Tha ìomhaighean riochdachail de immunostaining FosB / ΔFosB anns na ROI cortical air an sealltainn ann an Figear 7. Nochd mion-sgrùdadh cainneachdail atharrachaidhean a bha an urra ri sgìre ann an immunoreactivity FosB / ΔFosB le ruith fad-ùine (Figear 8). Ann an luchagan Runner, bha an sgìre FosB / ΔFosB-ir gu math nas àirde anns an cortex motair (P <0.05) agus an cortex baraille somatosensory (P <0.05), ach chan ann anns an cortex lèirsinneach (P = 0.662) no am bulb olfactory (P = 0.523). Anns an cortex auditory, bha sgìre FosB / ΔFosB-ir buailteach a dh ’ionnsaigh àrdachadh ann an luchagan Runner (P = 0.105).
5: Neurogenesis
Tha ìomhaighean riochdachail de dìonachd DCX air an sealltainn ann an Figear 9. Anns an hippocampus dorsal, immunoreactivity DCX ann an luchagan Runner (Figear 9, deas) gu càileachdail nas àirde an coimeas ri luchagan Smachd (Figear 9, clì). An coimeas ris an hippocampus dorsal, bha immunoreactivity DCX anns an hippocampus ventral nas laige an dà chuid ann an luchagan Smachd agus Runner. Ann an luchagan Runner, bha an àireamh de chroisean-rèile gu math nas àirde anns an dDGsp (P <0.01) agus dDGip (P <0.01; Figear 10). Anns an hippocampus ventral, bha an àireamh de chroisean-tarsainn ann an luchagan Runner buailteach a dhol am meud, ach cha robh eadar-dhealachaidhean mòra eadar buidhnean (vDGsp, P = 0.101; vDGip, P = 0.257; Figear 10).
6: Co-dhàimh eadar abairt FosB / ΔFosB agus neurogenesis
Chaidh mion-sgrùdadh co-dhàimh a dhèanamh eadar sgìre FosB / ΔFosB-ir agus an àireamh de chroisean-tarsainn DCX (Figear 11). Leis gu bheil gach seata dàta (me, DGsp dorsal ann an luchagan Smachd) a ’toirt a-steach dìreach paidhrichean 5, chaidh an anailis a dhèanamh an toiseach leis a h-uile paidhir 40. Gu h-inntinneach, bha co-dhàimh mòr eadar sgìre FosB / ΔFosB-ir agus an àireamh de chroisean-tarsainn DCX (r = 0.885, P <0.0001). A bharrachd air an sin, chaidh co-dhàimh cudromach a chomharrachadh cuideachd nuair a chaidh an dorsal DG (r = 0.762, P <0.05) agus an DG ventral (r = 0.816, P Chaidh <0.01) a sgrùdadh air leth.
7: Comharrachadh an isoform FosB / ΔFosB air a bhrosnachadh le ruith fad-ùine
Mu dheireadh, gus isoform na altram toraidhean gine a chaidh a thoirt a-steach don hippocampus mar fhreagairt air ruith fad-ùine, chaidh an hippocampi bho bhuidheann a bharrachd de luchainn a thoirt fo bhlotadh an iar le bhith a ’cleachdadh an aon antibody pan-FosB. Iomadh bannan de 35 - 37 kDa, a ’riochdachadh isofoirmean atharraichte de ΔFosB [44], air an àrdachadh gu mòr ann an luchagan Runner an aghaidh Smachd (Figear 12, P <0.01). Air an làimh eile, cha robh an isoform FosB 48 kDa air a dhearbhadh anns gach buidheann. Tha còmhlan eile a tha gu ìre mhòr ri fhaicinn os cionn 25 kDa dualtach a ’riochdachadh an isoform Δ2ΔFosB (27 kDa). Bha dà chòmhlan eile ann, aig os cionn 50 kDa agus 37 kDa, a bha dualtach mar thoradh air ceangal neo-shònraichte. Nuair a chaidh an tomhas, cha deach eadar-dhealachadh sam bith a lorg anns na bannan neo-ΔFosB sin eadar buidhnean (cha deach dàta a shealltainn).
Deasbaireachd
Ann an geàrr-chunntas, rinn an sgrùdadh seo mion-sgrùdadh immunohistochemical an-toiseach gus sgrùdadh a dhèanamh air 1) a bheil ruith cuibhle saor-thoileach fad-ùine ag adhbhrachadh abairt FosB / ΔFosB anns an hippocampus; agus 2) a bheil freagairt sgìreil sònraichte air a axis dorso-ventral.
Thug ceithir seachdainean de ruith cuibhle saor-thoileach àrdachadh mòr ann an immunoreactivity FosB / ΔFosB anns a h-uile sgìre hippocampal a chaidh a sgrùdadh (ie, fo-raointean DG, CA1, agus CA3 an dà chuid dorsal agus ventral den hippocampus). Dhearbh sinn gur e an isoform 35 - 37kDa ΔFosB am prìomh fhear altram toradh gine a ’cruinneachadh mar fhreagairt air ruith fad-ùine. Tha na toraidhean sin gu soilleir a ’toirt taic don bheachd gu bheil eacarsaich cunbhalach fad-ùine na bhrosnachadh làidir airson inntrigeadh ΔFosB air feadh an hippocampus, agus gum faodadh an inntrigeadh a bhith na inneal moileciuil ùr-nodha leis am bi eacarsaich a’ toirt buaidh air diofar sheòrsaichean de dhleastanasan a tha an urra ri dorsal agus / no ventral hippocampus.
1: Dligheachadh agus crìochan air tomhas immunoreactivity FosB / ΔFosB a ’cleachdadh stairsneach ìomhaigh
Chaidh gabhail ri innleachd stairsneach ìomhaigh, air a chleachdadh gu farsaing ann an sgrùdaidhean immunoocheochemical airson a bhith a ’cunntadh àireamh nan ceallan targaid agus airson a bhith a’ luachadh morf-eòlas cealla, anns an sgrùdadh seo airson tomhas sgìre-sònraichte de immunoreactivity FosB / ΔFosB [15,45,46]. Chaidh co-dhàimh chudromach eadar na h-ìrean de immunoreactivity FosB / ΔFosB a thomhas le stairsneach ìomhaighean agus a rèir cunntadh làimhe (Figear 4). Ach, leis gun do chuir dùmhlachd agus tar-tharraing casg air a bhith a ’cunntadh an àireamh de niuclasan FosB / ΔFosB-ir ann an sgìrean a tha gu math dùmhail, chan eil an co-dhàimh a tha air a dhearbhadh a’ ciallachadh ach cruinneas an dòigh stairsnich ìomhaigh nuair a tha na raointean FosB / ΔFosB-ir a ’riochdachadh <~ 40% den ROI iomlan sgìre. Mar sin, feumar mìneachadh faiceallach airson sgìrean FosB / ΔFosB-ir> 40% den sgìre ROI iomlan.
Gu sònraichte, ann an luchagan DG of Runner (Figear 4), Chaidh abairt FosB / ΔFosB a thoirt a-steach gu mòr le ruith cuibhle agus chaidh a ’mhòr-chuid de na niuclasan FosB / ΔFosB-ir thairis. Anns na raointean sin, tha barrachd inntrigidh de abairt FosB / ΔFosB a ’leantainn gu fo-mheasadh nas motha air an ìre faireachdainn, ge bith dè an dòigh tomhais a thathar a’ cleachdadh (stairsneach ìomhaigh no cunntadh làimhe). Ach, a dh ’aindeoin cunnart ro-mheas, tha e cudromach toirt fa-near gun do sheall an sgrùdadh làithreach àrdachadh mòr ann an sgìre FosB / ΔFosB-ir ann an luchagan DG de Runner. Tha seo a ’moladh nach bi na crìochan modh-obrach a’ toirt buaidh air na fhuair sinn a-mach. An àite sin, tha an ro-mheasadh a dh’fhaodadh a bhith ann a ’meudachadh earbsachd an lorg gu robh ruith fad-ùine ag àrdachadh immunoreactivity FosB / ΔFosB anns an hippocampus.
2: Inntrigeadh Èideadh de ΔFosB taobh a-staigh an hippocampus le bhith a ’ruith san fhad-ùine
Tha caiseadan anatomical agus obrachail aig an hippocampus air an axis fhada aige [26], mar sin airson an sgrùdadh làithreach chaidh immunoreactivity FosB / ΔFosB anns na roinnean droma agus ventral den hippocampus a sgrùdadh air leth. Sheall an dàta gun robh ruith fad-ùine ag àrdachadh èideadh FosB / ΔFosB anns a h-uile ROI hippocampal air a thomhas. Dh ’fhaodadh an inntrigeadh èideadh seo de immunoreactivity FosB / ΔFosB a bhith air adhbhrachadh gu sònraichte le atharrachaidhean metabolach siostamach co-cheangailte ri ruith fad-ùine. Ach, tha e cudromach toirt fa-near gu robh àrdachaidhean sònraichte sgìreil de immunoreactivity FosB / ΔFosB anns an cortex. Tha an toradh seo a ’faighinn taic bho cho-dhùnaidhean o chionn ghoirid a’ sealltainn gun do dh ’fhàs cnap mòr de mhuileann-treabhaidh a’ ruith sruth fala cerebral roinneil anns an hippocampus, ach chan ann anns a ’bholg olfactory [8]. A bharrachd air an sin, tha Rhodes et al. Sheall (2003) nach robh làithean 7 de chuibhle saor-thoileach a ’ruith abairt c-Fos brosnaichte anns an DG agus CA2 / 3 den hippocampus (cha deach CA1 a thomhas) agus anns an cortex mothachaidh, ach chan ann anns an cortex lèirsinneach [47]. Air an toirt còmhla, tha na sgrùdaidhean sin a ’moladh nach eil inntrigeadh èideadh de abairt FosB / ΔFosB anns an hippocampus mar thoradh neo-shònraichte air ruith fad-ùine. Gu inntinneach, tha Hawley et al. air aithris o chionn ghoirid gu robh cuideam neo-fhaicsinneach cronail ag àrdachadh abairt FosB / ΔFosB anns an dorsal, ach chan ann anns an ventral, DG den rat hippocampus [48]. Le tuilleadh sgrùdaidh, bheir na pàtranan sònraichte de inntrigeadh FosB / ΔFosB leithid an fheadhainn a thig bho eacarsaich no cuideam seachad seallaidhean leantainneach air buaidhean brosnachaidh-eisimeil air an hippocampus.
Tha fios gu bheil am prìomh antibody pan-FosB a chaidh a chleachdadh san sgrùdadh seo ag aithneachadh a h-uile isoform de phròtainean FosB. Às deidh mion-sgrùdadh blotadh an iar, lorg sinn gur e na h-aon isofoirmean a dh ’fhàs anns an hippocampus às deidh ruith fad-ùine na isofoirmean atharraichte ΔFosB (35 - 37 kDa), na h-aon isofoirmean seasmhach am measg pròtainean teaghlaich Fos [11]. Tha an lorg seo a rèir obair a rinneadh roimhe le bhith a ’cleachdadh antibody pan-Fos gus dearbhadh gur e 35 - 37 kDa ΔFosB am pròtain teaghlaich Fos as motha a th’ air a bhrosnachadh sa cortex aghaidh le cuideam broilleach [44]. Mar sin, tha an àrdachadh ann an immunoreactivity hippocampal FosB / ΔFosB air a bhrosnachadh an seo le ruith fad-ùine a ’nochdadh ìre ΔFosB.
Chan eil fios air mòran mu bhuaidhean eacarsaich sònraichte air roinnean air taobhan molecular agus structarail den hippocampus. Ach, tha grunn sgrùdaidhean giùlan a ’nochdadh comas mòr airson leasachaidhean a tha air an adhbhrachadh le eacarsaich ann an gnìomhan droma agus hippocampal ventral. Thathar air sealltainn gu bheil eacarsaich a ’leasachadh ionnsachadh spàsail agus cuimhne [34-38] agus giollachd spàsail agus co-theacsail gu mòr an urra ris an hippocampus droma [27,28]. An coimeas ri sin, tha fios gu bheil eacarsaich cuideachd a ’toirt buaidh air togalaichean anxiolytic agus antidepressant [24,25,38] agus tha na freagairtean tòcail sin air an riaghladh sa mhòr-chuid leis an hippocampus ventral [29,30]. Tha an inntrigeadh èideadh de ΔFosB le ruith fad-ùine a chithear san sgrùdadh seo a ’moladh gun do thachair cuid de dh’ atharrachaidhean neuroplastic air feadh an hippocampus gu lèir. Mhìnicheadh seo carson a dh ’fhaodadh eacarsaich buaidh a thoirt air gach cuid gnìomhan droma-droma agus hippocampus a tha an urra.
3: Mion-sgrùdadh sgìreil air neurogenesis air a bhrosnachadh le eacarsaich
Tha sgaradh gnìomh de neurogenesis eadar an dorsal agus hippocampus ventral air a bhith a ’faighinn barrachd is barrachd aire [49]. Anns an sgrùdadh seo, a ’gabhail brath air feartan morphologach neurons neamhainneach DCX-ir [43], chunnt sinn an àireamh de bhrisidhean eadar dendrites DCX-ir agus pìos loidhne air a tharraing air feadh meadhan an GCL. Cha tug an tomhas seo seachad an àireamh iomlan de neurons DCX-ir anns an DG, ach leig e le tomhas sònraichte sgìreil a bha riatanach airson mion-sgrùdadh co-dhàimh a dhèanamh le dàta abairt FosB / ΔFosB (faic gu h-ìosal). Às deidh ruith san fhad-ùine, mheudaich an àireamh de neurons DCX-ir gu mòr anns an dorsal, ach chan e an ventral, DG. Tha seo a ’moladh gum faodadh eacarsaich brosnachadh neurogenesis nas inntinniche anns an dorsal an coimeas ris a’ chuibhreann ventral den DG. Ach, tha sgrùdaidhean roimhe air aithris air toraidhean connspaideach anns an robh cuibhle a ’ruith barrachd neurogenesis anns an dà chuid DG dorsal agus ventral [50,51]. Anns an sgrùdadh làithreach, bha an àireamh de chroisean-tarsainn DCX-ir anns an DG ventral buailteach a bhith a ’dol am meud le bhith a’ ruith, ged a dh ’fhaodadh gum biodh am meud sampall beag (lucha 5 gach buidheann) air comas eadar-dhealachadh cudromach staitistigeach a lorg eadar buidhnean. Mar sin, tha e coltach gu bheil e ro-ùine a bhith a ’riaghladh a-mach gum faod ruith cuibhle saor-thoileach neurogenesis hippocampal ventral a bhrosnachadh. Tha feum air tuilleadh sgrùdaidhean mionaideach gus tuigse fhaighinn air sònrachas sgìreil neurogenesis air a bhrosnachadh le eacarsaich a thaobh a phròiseas multistep (iomadachadh cealla, eadar-dhealachadh, imrich, agus mairsinn).
4: Buadhan gnìomh inntrigidh ΔFosB air a bhrosnachadh le eacarsaich airson a bhith a ’riaghladh plastachd hippocampal
Mu dheireadh, mar a ’chiad cheum ann a bhith ag aithneachadh na buaidhean gnìomh a th’ aig inntrigeadh ΔFosB air a bhrosnachadh le eacarsaich anns an hippocampus, rinn sinn sgrùdadh air a ’cheangal eadar immunoreactivity FosB / ΔFosB ri slighean DCX-ir anns an dà chuid DG dorsal agus ventral agus lorg sinn co-dhàimh adhartach, adhartach eadar an dà chaochladair. Ged a tha na dearbh dhòighean anns am bi ΔFosB a ’riaghladh neurogenesis air a bhrosnachadh le eacarsaich fhathast mì-chinnteach, sheall sgrùdadh o chionn ghoirid sin altram-null luchainn, aig nach eil FosB, ΔFosB, agus Δ2ΔFosB (a h-uile càil) altram toraidhean), easbhaidhean air an taisbeanadh ann an neurogenesis hippocampal basal, a ’toirt a-steach lughdachadh nas lugha de cheallan progenitor neuronal, barrachd imrich ectopic de neurons ùr-bhreith, agus structaran DG neo-àbhaisteach [20]. Ach, cha deach na h-atharrachaidhean sin a choimhead altram(d / d) luchagan, aig nach eil FosB, ach chan eil ΔFosB / Δ2ΔFosB. Gu inntinneach, ann an altram-null luchagan, abairt cuid de ghinean co-cheangailte ri neurogenesis, a ’toirt a-steach Vgf (Factar fàis neoni VGF inducible) agus Gal Chaidh (Galanin prepropeptide) a lughdachadh [20]. Leis gu bheil VGF agus GAL nam moileciuilean dìomhair, tha aon mholadh a tha a ’gealltainn a’ meas gum faod neurons a tha a ’cur an cèill ΔFosB riaghladh neurogenesis tro ghnìomhachd autocrine / paracrine [20].
A bharrachd air an sin, bu chòir a thoirt fa-near gu bheil an roinn far a bheil ΔFosB air a bhrosnachadh le bhith a ’ruith thairis gu spàsail leis an roinn far a bheil gnìomhachd neurogenic àrd. Tha an lorg seo a ’moladh gu bheil neurogenesis a tha air a bhrosnachadh le eacarsaich aig an ìre as lugha an urra ri gnìomhachd. Tha gnìomhachd neuronal deatamach ann a bhith a ’cumail suas agus a’ leasachadh gnìomh an t-siostam nearbhach [9], tro uidheamachdan a ’toirt a-steach cur an cèill agus leigeil ma sgaoil factar neurotrophic a thig bho eanchainn (BDNF) [52,53], gabhail ri factar fàis serum-coltach ri insulin-1 (IGF-1) tron chnap-starra fuil-eanchainn [54,55], toirt thairis apoptosis [56], agus riaghladh motility mitochondrial [57]. Mar sin, tha an sgrùdadh a tha ann an-dràsta a ’moladh gun do bhrosnaich eacarsaich fad-ùine gnìomhachd neuronal a-rithist, a tha follaiseach anns an abairt ΔFosB a tha a’ sìor fhàs, a tha a ’cur ri bhith a’ neartachadh plastachd hippocampal, is dòcha tro na ioma-uidheamachd sin a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd.
Cha do rinn an sgrùdadh làithreach measadh ach air neurogenesis a bha air a bhrosnachadh le eacarsaich agus an ceangal a bh ’aige ri abairt FosB / ΔFosB anns an DG. Ach, chaidh immunoreactivity FosB / ΔFosB a thoirt a-steach cuideachd ann an fo-raointean CA1 agus CA3. Ged a tha feum air tuilleadh sgrùdaidhean gus barrachd tuigse fhaighinn air na dreuchdan gnìomh a th ’aig faireachdainn ΔFosB air a bhrosnachadh le eacarsaich taobh a-staigh nan raointean sin, tha litreachas roimhe a’ toirt cothrom gealltanach. Guan et al. Sheall (2011) gu robh giorrachadh sònraichte den kinase 5 a bha an urra ri cyclin (Cdk5) ann an neurons pioramaideach CA1 no CA3 a ’lagachadh daingneachadh cuimhne no toirt air ais, fa leth [58]. Gu inntinneach, is e an Cdk5 an targaid sìos an abhainn de ΔFosB [59] agus tha e an sàs ann a bhith a ’riaghladh plastachd synaptic [60]. Mar sin, dh ’fhaodadh abairt ΔFosB a tha air a bhrosnachadh le eacarsaich a bhith an sàs ann a bhith a’ riaghladh plastachd synaptic tro ghnìomhachadh Cdk5 anns na fo-raointean CA1 agus CA3.
Co-dhùnadh
Ged a bha fios gu robh brùthadh eacarsaich trom a ’brosnachadh abairtean de phròtainean gine tràth sa hippocampus, tha an sgrùdadh a tha ann an-dràsta a’ toirt seachad a ’chiad fhianais gu bheil eacarsaich cunbhalach fad-ùine ag adhbhrachadh gu mòr abairt ΔFosB anns an hippocampus gu lèir. Ththa inntrigeadh èideadh de ΔFosB a ’toirt taic don tuigse làithreach gu bheil eacarsaich na eadar-theachd neo-chungaidh-leigheis èifeachdach a tha comasach air iomadh gnìomh hippocampal a leasachadh. Còmhla ris a ’cho-dhàimh chudromach eadar abairt FosB / ΔFosB agus neurogenesis, tha an dàta seo brosnachail agus a’ nochdadh gu bheil feum air tuilleadh sgrùdaidhean a ’mìneachadh àite ΔFosB ann a bhith a’ meadhanachadh buaidh eacarsaich air gnìomh hippocampal, a ’toirt a-steach neurogenesis.
Aithris Maoineachaidh
iomraidhean