Tha PSMC5, a tha na h-Inbhe Pròstanach 19S, a ’riaghladh Cocaine Action anns an Nucleus Accumbens (2015).

PLoS One. 2015 Cèitean 11; 10 (5): e0126710. doi: 10.1371 / journal.pone.0126710. eCollection 2015.

Ohnishi YH1, Ohnishi YN2, Nakamura T.3, Ohno M.4, Ceanadach PJ5, Yasuyuki O.6, Nishi A.7, Neve R8, Tsuzuki T.4, Nestler EJ5.

Abstract

Tha ΔFosB na fhactar tar-sgrìobhaidh seasmhach a bhios a ’cruinneachadh anns na nucleus accumbens (NAc), prìomh phàirt de chuairteachadh duais an eanchainn, mar fhreagairt air foillseachadh cronail air cocaine no drogaichean eile de dhroch dhìol. Ged a tha fios gu bheil ΔFosB a ’heterodimerize le ball den teaghlach Jun gus iom-fhillteachd bàillidh tar-sgrìobhaidh gnìomhach a chruthachadh, gu ruige seo cha deach sgrùdadh fosgailte a dhèanamh air com-pàirtichean ceangailteach eile airson ΔFosB san eanchainn. An seo, le bhith a ’cleachdadh measaidhean dà-hybrid beirm, bidh sinn a’ comharrachadh PSMC5 - ris an canar SUG1 cuideachd, fo-thalamh anns a bheil ATPase den 19S proteasomal complex - mar nobhail ag eadar-obrachadh pròtain le ΔFosB. Bidh sinn a ’dearbhadh eadar-obrachaidhean mar sin eadar ΔFosB endogenous agus PSMC5 anns an NAc agus a’ dearbhadh gu bheil an dà phròtain cuideachd a ’dèanamh iom-fhillte le pròtanan riaghlaidh chromatin eile a tha co-cheangailte ri gnìomhachadh gine. Bidh sinn a ’dol air adhart gus sealltainn gu bheil cocaine cronail a’ meudachadh ìrean niùclasach, ach chan e cytoplasmic, de PSMC5 anns an NAc agus gu bheil cus cuideam de PSMC5 anns an roinn eanchainn seo a ’brosnachadh freagairtean locomotor gu cocaine. Còmhla, tha na co-dhùnaidhean sin a ’toirt cunntas air uidheamachd ùr-nodha a tha a’ cur ri gnìomhan ΔFosB agus, airson a ’chiad uair, a’ toirt buaidh air PSMC5 ann am plastachd moileciuil agus giùlain a tha air adhbhrachadh le cocaine.

Luaidh: Ohnishi YH, Ohnishi YN, Nakamura T, Ohno M, Kennedy PJ, Yasuyuki O, et al. (2015) Bidh PSMC5, ATPase Proteasomal 19S, a ’riaghladh gnìomh cocaine anns na Nucleus Accumbens. PLoS AON 10 (5): e0126710. doi: 10.1371 / journal.pone.0126710

Deasaiche Acadaimigeach: Seumas Edgar McCutcheon, Oilthigh Leicester, AN RÌOGHACHD AONAICHTE

Fhuair thu: Dùbhlachd 10, 2014; Air a ghabhail: Giblean 7, 2015; Foillsichte: Mhà 11, 2015

Dlighe-sgrìobhaidh: © 2015 Ohnishi et al. Is e seo artaigil ruigsinneachd fosgailte air a chuairteachadh fo chumhachan an Ceadachas Togail Creative Commons, a tha a ’ceadachadh cleachdadh gun bhacadh, sgaoileadh, agus ath-riochdachadh ann am meadhan sam bith, fhad's a thèid creideas a thoirt don ùghdar agus an tùs tùsail

Ruigsinneachd dàta: Tha am fiosrachadh iomchaidh uile anns a ’phàipear.

Maoineachadh: Fhuair an obair seo taic bho thabhartasan bho Institiudan Nàiseanta Slàinte, an Institiud Nàiseanta air Mì-chleachdadh Dhrugaichean, agus bho Stèidheachd Ishibashi agus Comann Iapan airson adhartachadh saidheans (àireamhan KAKENHI: 24591735, 26290064, 25116010). Cha robh pàirt aig an luchd-maoineachaidh ann an dealbhadh sgrùdaidh, cruinneachadh is sgrùdadh dàta, co-dhùnadh foillseachadh, no ullachadh an làmh-sgrìobhainn.

Ùidhean farpaiseach: Tha na h-ùghdaran air innse nach eil com-pàirtean sam bith ann.

Ro-ràdh

ΔFosB, toradh truncated den FosB gine, a bhuineas don teaghlach Fos de fhactaran tar-sgrìobhaidh, a tha cuideachd a ’toirt a-steach c-Fos, FosB làn-fhaid, Fra-1, agus Fra-2. Tha ΔFosB, mar phròtainean Fos eile, a ’heterodimerizes le pròtain teaghlaich Jun - c-Jun, JunB, no JunD - gus iom-fhillteachd factar tar-sgrìobhaidh gnìomhach AP-1 (activator protein-1) a chruthachadh, a bhios ag adhbhrachadh no ag ath-aithris abairtean de ghinean targaid sònraichte. [1,2].

Thathar air sealltainn gu bheil pàirt cudromach aig ΔFosB ann an cuir ri drogaichean [2]. Gu h-annasach am measg pròtainean teaghlaich Fos, bidh e a ’cruinneachadh ann an niuclas accumbens (NAc) agus roinnean eanchainn eile co-cheangailte ri duais às deidh rianachd dhrogaichean a-rithist air sgàth an ìre àrd seasmhachd aige [3,4], a tha air a mheadhanachadh le dìth raointean degron C-terminal agus le fosphorylation le grunn phròtainean kinases [5-7]. Bha inntrigeadh mar sin de ΔFosB anns na meadhanan NAc a ’meudachadh freagairtean giùlain do dhrogaichean mì-ghnàthachaidh. Mar sin, bidh cus cuideam de ΔFosB anns an roinn eanchainn seo de bheathaichean inbheach, an dàrna cuid le bhith a ’cleachdadh vectaran viral no luchainn bitransgenic inducible, a’ meudachadh cugallachd beathach ri buaidhean locomotor-gnìomhach agus buannachdail cocaine agus codlaid a bharrachd air brosnachadh beathach gu fèin-rianachd cocaine [7-11]. Air an làimh eile, tha cus cuideam de phrìomh antagonists àicheil ΔFosB ag adhbhrachadh na phenotypes giùlan mu choinneamh [10-12].

Tha sinn agus feadhainn eile air dearbhadh roimhe seo, le bhith a ’cleachdadh measaidhean gluasaid gel, gur e JunD agus is dòcha pròtainean teaghlaich Jun eile na prìomh chom-pàirtichean ceangailteach de ΔFosB san eanchainn ann an vivo [13-15]. Ach, gu ruige seo, cha deach measadh fosgailte, neo-phàirteach a dhèanamh air com-pàirtichean ceangailteach ΔFosB san eanchainn. An seo, dh ’fheuch sinn ri com-pàirtichean ceangaltach nobhail a chomharrachadh airson ΔFosB le bhith a’ cleachdadh assay dà-hybrid beirm [16,17]. Nochd an dàta againn gu bheil PSMC5, ris an canar SUG1 cuideachd, na chom-pàirtiche làidir de ΔFosB an dà chuid in vitro agus anns an NAc in vivo, far a bheil e a ’tighinn còmhla ri ΔFosB mar phàirt de ionad gnìomhachaidh tar-chuir cocaine, anns a bheil CBP (pròtain ceangailteach CREB ) agus p300 - an dà chuid acetyltransferases histone (HATs) - a bharrachd air BRG1 (pròtain ath-dhealbhachaidh chromatin). Bidh sinn a ’dol air adhart gus sealltainn gu bheil foillseachadh cronail air cocaine ag atharrachadh ìrean niùclasach PSMC5, fo-thalamh anns a bheil ATPase den ionad proteasomal 19S, anns an NAc agus gu bheil PSMC5 an uair sin a’ cumail smachd air freagairtean giùlain do chocaine.

Stuth agus Dòighean

Sgrionadh dà-hybrid Yeast

Chaidh ceallan beirm MaV203 (Invitrogen Life Technologies) a cho-ghluasad le pDBLeu a ’draibheadh ​​diofar mhìrean den phròtain ΔFosB, agus chaidh leabharlann eanchainn luch a chuir fo-chòmhdach ann am pPC86 (Invitrogen Life Technologies). Chaidh ceallan cruth-atharraichte fhàs air SC-meadhanach le dìth leucine, tryptophan, agus histidine, agus anns an robh 10 mM de 3-aminotriazole. Bidh ceangal eadar criomagan FosB agus com-pàirtiche tagraiche ag adhbhrachadh trì gineachan neach-aithris (His3, Ura3, agus LacZ), agus tha an inntrigeadh a ’dèanamh cruth-atharraichean comasach air mairsinn fo na suidheachaidhean cultarach a thathas a’ cleachdadh. Chaidh clones adhartach ath-dhearbhadh le mìrean ùra pDBLeu-ΔFosB le measaidhean ath-atharrachaidh ann an ceallan MaV203.

Loidhnichean cealla

Chaidh ceallan neuroblastoma Luchag Neuro 2A (ATCC) a chumail anns a ’mheadhan riatanach as ìsle aig Eagle (EMEM) (ATCC), le taic bho serum bòcain fetal 10% (FBS) aig 37 ° C agus 5% CO2. Bha ceallan Rat 1A mar thiodhlac bho Yusaku Nakabeppu (Fukuoka, Iapan) [18] agus air a chumail suas ann am MEM Dulbecco (DMEM) (Teicneòlasan Beatha), le taic le 10% FBS aig 37 ° C agus 5% CO2. Chaidh tar-chuir cheallan le plasmid DNA a choileanadh le bhith a ’cleachdadh Effectene (Qiagen) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh.

Bidh PSMC5 agus ΔFosB a ’togail

Chaidh grunn chruthan mutant de PSMC5, gach tag FLAG aig an N-terminus aca, a chruthachadh airson an cleachdadh ann an deuchainnean gluasad gine immunoprecipitation no viral-mediated. Nam measg bha: PSMC5-K196M, fearann ​​PSMC5-Δcoiled-coil (PSMC5-ΔCC, le dìth amino-aigéid 27 - 68), PSMC5-NT (air a dhèanamh suas den chriomag N-terminal den phròtain, amino-aigéid 1 - 151), agus PSMC5 -CT (air a dhèanamh suas de chriomag C-terminal den phròtain, amino-aigéid 172) (faic Fig 1). Chleachd sinn cuideachd cruthan N-terminal MYC-tagged de wildtype ΔFosB a bharrachd air ΔFosB le mutation anns an raon leucine-zipper aige (mutation de amino-aigéid 182 gu 205 a tha aithnichte airson cuir às do heterodimerization le pròtainean teaghlaich Jun [6].

Dealbhag a 'ghlacaidh
Fig 1. Tha ΔFosB a ’ceangal ri PSMC5 in vitro.

 

A. Schematic de ΔFosB, ΔFosB-LZM anns a bheil fearann ​​leucine zipper air a mhùchadh gus cuir às do heterodimerization ΔFosB le pròtanan Jun, agus Δ2ΔFosB anns nach eil a ’chiad amino-aigéid 78 den N-terminus ΔFosB. B. Schematic de PSMC5, PSMC5-NT a tha a ’toirt a-steach a’ chiad amino-aigéid 151 de PSMC5, PSMC5-CT anns nach eil a ’chiad amino-aigéid 235 de PSMC5, agus PSMC5-ΔCC aig nach eil fearann ​​coiled-coil (amino-aigéid 28 - 68) . Tha fearann ​​AAA a ’freagairt ri motif, ATPases Co-cheangailte ri gnìomhan cealla eadar-mheasgte, an làthair ann am mòran ATPases. Chaidh C. 2.4 μg de pcDNA3.1-ΔFosB (sreathan 1 - 4) no ΔFosB-LZM (lann 5) a cho-ghluasad le 2.4 μg de PSMC5 tagged FLAG no diofar mutants cuir às do cheallan Neuro2a. Dà latha às deidh an tar-chuir, chaidh ceallan a lysed agus a bhith air an dìon le dìon-dìon le antibody anti-FLAG agus an uairsin blotadh an Iar le antibody anti-ΔFosB no anti-FLAG. Thoir fa-near gu bheil ΔFosB, ach chan e ΔFosB-LZM, a ’ceangal gu làidir ri PSMC5 no PSMC5-NT, ach chan e PSMC5-CT no PSMC5-ΔCC. Chaidh an dàta a chithear san fhigear ath-aithris trì-fhillte anns gach aon de thrì deuchainnean fa leth.

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g001

Animals

Chaidh luchagan fireann C11BL / 57J naoi-gu-seachdain (Saotharlann Jackson) a chleachdadh airson a h-uile deuchainn. Bha beathaichean a ’fuireach air cearcall dorcha-dorcha 6-h le ruigsinneachd air biadh is uisge ad libitum agus chaidh an cleachdadh 1 seachdain ron deuchainn. Chaidh dà riaghailt làimhseachaidh cocaine a chleachdadh. Gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean bith-cheimiceach cocaine, fhuair beathaichean dòsan làitheil de chocaine (7 mg / kg) no saline, agus chaidh am marbhadh le decapitation 20 hr às deidh an in-stealladh mu dheireadh. Is e protocol àbhaisteach a tha seo, a chaidh a dhearbhadh gu bhith a ’toirt a-mach mòran fhreagairtean moileciuil agus ceallach don druga [7]. Gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidh PSMC5 ann an nucleus accumbens air freagairtean giùlain do chocaine, chleachd sinn dòs fo-chùramach den druga (7.5 mg / kg; faic mothachadh locomotor gu h-ìosal) stèidhichte air a ’bheachd-bheachd gum biodh PSMC5, mar ΔFosB, ag àrdachadh cugallachd beathach gu cocaine [8]. Chaidh a h-uile deuchainn bheathaichean aontachadh leis a ’Chomataidh Institiùdail Cùram is Cleachdadh Bheathaichean aig Mount Sinai.

Immunoprecipitation agus blotting an Iar

Chaidh ceallan Neuro 2A a thar-chuir a-steach le cruthan wildtype no mutant de PSMC5. Dà latha às deidh an tar-chuir, chaidh ceallan a nighe ann am PBS, an còmhdach ann am bufair RIPA (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 0.25% sodium deoxycholate, 10 mM sodium butyrate, cocktail inhibitor protease) . Chaidh Lysates a sgaradh agus a bhrosnachadh le antibodies IgG nonimmune (Sigma) no anti-FLAG (Sigma) airson 3 hr aig 4 ° C. Chaidh immunoprecipitation a dhèanamh le grìogagan Protein G (Invitrogen) mar a chaidh a mhìneachadh [19]. Ann an ùine ghoirid, chaidh proteinichean immunoprecipitated a thoirt do SDS-PAGE agus air an sgrùdadh le blotadh an Iar a ’cleachdadh antibody anti-FosB / ΔFosB (Teicneòlas Comharradh Cell) stèidhichte air protocolaidhean foillsichte [7]. Airson measaidhean ceangail pròtain in vivo, chleachd sinn bloighean niùclasach fìor-ghlan bho NAc luchainn punch-dissected às deidh làimhseachadh cocaine cronach (20 mg / kg IP gach latha airson làithean 7, le luchagan air an cleachdadh 24 hr às deidh an in-stealladh mu dheireadh). Chaidh co-immunoprecipitation bho bhloighean niùclasach a dhèanamh a ’cleachdadh an inneal Co-IP Niùclasach Co-IP (Active Motif) a’ leantainn stiùireadh an neach-dèanamh. Chaidh na antibodies a leanas a chleachdadh: MYC no ß-actin, Teicneòlas Comharradh Cell (Danvers, MA), PSMC5 agus histone H3, Abcam (Cambridge, MA), CBP, p300 agus BRG1, Bith-theicneòlas Santa Cruz (Santa Cruz, CA), agus FLAG M2, Sigma.

Immunohistochemistry

Chaidh immunohistochemistry a dhèanamh a rèir modhan foillsichte [20]. Chaidh luchagan anesthetized agus perfused intracardially le 4% paraformaldehyde ann am PBS. Bha eanchainn air a chrioptachadh le 30% sucrose, agus an uairsin air a reothadh agus air a stòradh aig -80 ° C gus an deach a chleachdadh. Chaidh earrannan coronal (40 μm) a ghearradh air cryostat agus air an giullachd airson immunohistochemistry. Chaidh earrannan a bha a ’seòladh gu saor a thoirt a-steach ro-làimh ann am bufair bacaidh anns an robh 0.3% Triton agus 3% serum asail àbhaisteach. Chaidh ΔFosB a lorg le bhith a ’cleachdadh antibody polyclonal gobhar a chaidh a thogail an aghaidh cuibhreann N-terminal den phròtain (Bith-theicneòlas 1 / 1000 Santa Cruz). Chaidh PSMC5 a lorg le bhith a ’cleachdadh antibody polyclonal coineanach (1 / 100 Abcam, Cambridge, MA). Chaidh dealbhan a thogail le miocroscop confocal (meudachadh 60x; Zeiss).

Bodach nan einnsean

Fhuair a h-uile luchainn stealladh IP làitheil de shalainn airson làithean 3 gus an cuir iad cuideam air an stealladh. An ath latha, chaidh luchagan a thoirt a-steach IP le saline no dòs fo-chùramach de chocaine (7.5 mg / kg; faic fo Bheathaichean gu h-àrd) agus chaidh an cur sa bhad ann am bogsaichean locomotor ùr-nodha. Chaidh gnìomhachd locomotor nan luchagan a chlàradh a ’cleachdadh siostam photobeam mar bhriseadh giùlan gluasadach airson 30 min. Chaidh na leigheasan sin ath-aithris gach latha airson làithean 3.

Gluasad gine viral-mediated

Chleachd sinn modhan foillsichte farsaing airson gluasad gine viral-mediated [7,8,11,19]. Ann an ùine ghoirid, chaidh plasmids faireachdainn airson PSMC5 no airson grunn de na mutants aige (faic PSMC5 agus ΔFosB constructs gu h-àrd) a chuir a-steach don plasmid bicistronic p1005 (+) HSV a ’cur an cèill GFP fo smachd an neach-adhartachaidh CMV, agus PSMC5 no a mutants fo sin an Neach-adhartachaidh IE4 / 5. Fo anesthesia ketamine (100 mg / kg) / xylazine (10 mg / kg), chaidh luchagan a shuidheachadh ann an ionnstramaid stereotaxic beathach beag, agus bha an uachdar cranial fosgailte. Chaidh trithead ’s a trì snàthadan steallaire gasa a chleachdadh gus 0.5 μl de vectar HSV a thoirt a-steach gu dà-thaobhach a-steach don NAc aig ceàrn 10 ° (AP + 1.6; ML + 1.5; DV -4.4) aig ìre 0.1 μl / min. Bha cead aig beathaichean a bha a ’faighinn in-stealladh HSV faighinn air ais airson làithean 2 às deidh obair-lannsa mus deigheadh ​​deuchainn a dhèanamh.

staitistig

Chaidh ANOVAs agus deuchainnean-t oileanach a chleachdadh, air an ceartachadh airson ioma-choimeas, le cudrom air a shuidheachadh aig p <0.05.

toraidhean

PSMC5: com-pàirtiche ceangail nobhail de ΔFosB

Rinn sinn deuchainnean tòiseachaidh gus criomag iomchaidh de ΔFosB a chomharrachadh a bha mar bhiathadh ann an assay dà-hybrid beirm gun a bhith a ’dèanamh fèin-ghluasad air an t-siostam. Gnìomhachd gine neach-aithris brosnaichte Holo-ΔFosB leis fhèin, mar a rinn criomag amino-aigéad N-terminal 1 - 78 den phròtain. Ach, ΔFosB truncated N-terminal (Fig 1A), ris an canar Δ2ΔFosB, aig nach eil a ’chiad amino-aigéid 78 den phròtain, cha robh a’ bhuaidh seo aige. Mar sin, chleachd sinn Δ2ΔFosB mar phròtain a ’bhiathaidh.

Gus scrionadh airson com-pàirtichean ceangailteach a dh’fhaodadh a bhith ann, chleachd sinn leabharlann eanchainn luch air a fo-chòmhdach ann am pPC86. Chomharraich sinn tagraichean 11 airson com-pàirtichean ceangaltach. Ged a bha na pròtanan sin a ’toirt a-steach com-pàirtichean heterodimerization aithnichte ΔFosB, c-Jun agus JunD (Clàr 1), b ’e an tagraiche as cumanta gu ruige seo PSMC5. Ged a bha e na iongnadh, b ’e lorg inntinneach a bha seo, oir chaidh PSMC5 a shealltainn ann an aon aithisg o chionn bhliadhnaichean gus ceangal ri c-Fos in vitro [21]. Ach, chan eil aithisgean ro-làimh ann mu dhol an sàs PSMC5 ann an gnìomh cocaine. Ach a dh ’aindeoin sin, air sgàth neart a’ chomharra PSMC5 anns an assay dà-hybrid beirm, chuir sinn romhainn sgrùdadh a bharrachd a dhèanamh air eadar-obrachaidhean ΔFosB-PSMC5.

Dealbhag a 'ghlacaidh
Clàr 1. Toraidhean de scrionadh dà-hybrid Yeast le Δ2ΔFosB.

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.t001

An toiseach, gus dearbhadh a dhèanamh air an eadar-obrachadh corporra eadar ΔFosB agus PSMC5, rinn sinn deuchainnean co-immunoprecipitation in vitro. Fhuair sinn a-mach gu bheil PSMC5 le tag FLAG (Fig 1B), air a thar-chuir a-steach do cheallan Neuro 2A, air a tharraing sìos gu h-èifeachdach ΔFosB (Fig 1C). San dàrna àite, gus an roinn ann am PSMC5 a chomharrachadh a tha an urra ri a cheangal ri ΔFosB, ghineadh sinn grunn mutants PSMC5 tagged FLAG (Fig 1B) agus a-rithist an deuchainn co-immunoprecipitation. Chaidh ΔFosB a shlaodadh sìos gu h-èifeachdach leis na amino-aigéid N-terminal 151 de PSMC5 (PSMC5-NT), ach chan ann leis a ’chriomag amino-aigéad C-terminal 172 den phròtain (PSMC5-CT) (Fig 1C). Bha PSMC5 aig nach robh an àrainn coil coiled aige (PSMC5-ΔCC) cuideachd neo-èifeachdach ann a bhith a ’cuir às do ΔFosB. Tha na co-dhùnaidhean sin a ’sealltainn gu bheil PSMC5 a’ ceangal ΔFosB tron ​​fhearann ​​corail-coilear aige (amino-aigéid 27 - 68). A bharrachd air an sin, cha do chuir PSMC5 tagged FLAG bacadh air cruth mutant de ΔFosB le fearann ​​zipper leucine mutated (ΔFosB-LZM) (Fig 1C), a ’nochdadh gu bheil ΔFosB an dàrna cuid a’ ceangal PSMC5 tron ​​raon seo no, nas coltaiche, gu bheil feum air heterodimerization ΔFosB airson ceangal PSMC5.

Ceangal PSMC5-ΔFosB ann an NAc às deidh rianachd cocaine cronach

Stèidhichte air na co-dhùnaidhean sin ann an vitro, rinn sinn sgrùdadh a bheil ìrean PSMC5 anns an NAc air an atharrachadh mar fhreagairt air rianachd cocaine cronach. Fhuair sinn a-mach le bloigh subcellular agus blotadh an Iar gu bheil cocaine cronail a ’meudachadh ìrean niùclasach de PSMC5 anns an roinn eanchainn seo gun atharrachadh ann an ìrean cytoplasmic (Fig 2A). Cha deach a ’bhuaidh seo fhaicinn às deidh dòsan singilte de chocaine (cha deach dàta a shealltainn). An uairsin rinn sinn sgrùdadh air sgìreachadh PSMC5 agus ΔFosB ann an NAc le microscopy immunofluorescence confocal. Rinn sinn mion-sgrùdadh air luchagan 24 hr às deidh an dòs mu dheireadh de chocaine, puing ùine nuair is e ΔFosB an aon rud a lorgar FosB toradh gine (faic Nestler 2008). Lorg sinn immunoreactivity làidir PSMC5 anns an NAc, a ’toirt a-steach comharra làidir niùclasach. ~ 85% de nuclei ΔFosB + co-dhathte airson PSMC5 (Fig 2B). A bharrachd air an sin, rinn sinn deuchainnean co-immunoprecipitation air earrannan NAc agus lorg sinn, às deidh làimhseachadh cocaine cronach, gun deach ΔFosB a shlaodadh sìos gu h-èifeachdach le antibody anti-PSMC5 (Fig 2C). An coimeas ri sin, cha do rinn mion-sgrùdadh air NAc drogaichean-naïve (às deidh a bhith a ’faighinn grunn stealladh saline) lorg ΔFosB so-aithnichte (cha deach dàta a shealltainn). Tha an dàta seo co-chòrdail ris na co-dhùnaidhean againn ann an cultar cealla agus a ’dearbhadh gu bheil ΔFosB agus PSMC5 ag eadar-obrachadh anns an NAc in vivo.

Dealbhag a 'ghlacaidh
Fig 2. Riaghladh PSMC5 ann an lucha NAc.

 

A. Blotadh an iar de bhloighean niùclasach agus cytosolic de NAc de luchainn air an làimhseachadh gach latha le saline no cocaine (20 mg / kg) airson 7 latha, le beathaichean air an sgrùdadh 24 hr às deidh an in-stealladh mu dheireadh. Bidh cocaine a ’meudachadh ìrean niùclasach ach chan e cytosolic de PSMC5. Chaidh Histone H3 agus ß-actin, air nach tug cocaine buaidh, a chleachdadh mar smachdan luchdachaidh. Tha dàta a ’ciallachadh ± SEM (n = 8–10 / buidheann, * p <0.05). B. Chaidh co-ionadachadh PSMC5 endogenous (uaine) agus ΔFosB (gorm) ann an NAc de luchainn a chaidh a làimhseachadh gu cronail le cocaine mar ann an lysates niùclasach AC de luchag NAc às deidh làimhseachadh cocaine cronail a bhith air an dìon le dìon an aghaidh PSMC5 no IgG luch mar smachd , agus an uairsin blotadh an Iar le antibody anti-FosB / ΔFosB. Tha am figear a ’sealltainn eadar-obrachaidhean PSMC5-ΔFosB anns an NAc in vivo. Chaidh dàta ann am B agus C ath-aithris trì-fhillte anns gach aon de thrì deuchainnean fa leth.

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g002

Tha PSMC5 ag adhartachadh abairt ΔFosB in vitro

Leis gu bheil PSMC5 na bhall aithnichte den ionad proteasome, rinn sinn deuchainn a bheil e a ’riaghladh ìrean ΔFosB a’ cleachdadh ceallan Rat 1A. Cha robh cus buaidh aig PSMC5 overexpression air ìrean basal de ΔFosB, ach dh ’adhbhraich e àrdachadh beag ach cudromach de inntrigeadh ΔFosB air brosnachadh serum nan ceallan (Fig 3A). Chaidh gluasad coltach ri seo fhaicinn airson FosB làn-fhaid ach cha do choilean a ’bhuaidh brìgh staitistigeil. Air an làimh eile, cha tug toirt thairis faireachdainn PSMC5 endogenous ann an ceallan Rat 1A, air a choileanadh le bhith a ’cleachdadh siRNAs a tha ag amas air PSMC5, buaidh air ìrean basal ΔFosB ach chuir e bacadh làidir air inntrigeadh ΔFosB le brosnachadh serum (Fig 3B). Chaidh buaidhean co-ionann fhaicinn airson FosB làn-fhad. Tha an dàta seo a ’moladh nach eil PSMC5 a’ brosnachadh truailleadh proteasomal ΔFosB, mar a bhiodh dùil mar phrìomh fho-ionad den proteasome, ach an àite sin tha feum air airson an cruinneachadh as motha de FosB toraidhean gine ann an vitro, is dòcha tro bhith a ’bunailteachadh nam pròtainean.

Dealbhag a 'ghlacaidh
Fig 3. Riaghladh PSMC5 air abairt FosB / ΔFosB ann an ceallan Rat 1A.

 

Chaidh ceallan A. Rat 1A a thar-chuir le 4 μg de PSMC5 no smachd DNA. Cha robh buaidh sam bith aig overexpression PSMC5 air ìrean faireachdainn basal de phròtain FosB no ΔFosB mar a chaidh a dhearbhadh le blotadh an Iar, ach thug e a-mach àrdachadh beag ach cudromach ann an inntrigeadh ΔFosB le brosnachadh serum (F (2,21) = 9.75, p = 0.001). Chaidh ceallan Rat 1A a thar-chuir a-steach le 5 pmol de aon de dhà siRNA no RNA air an sgrìobadh (smachd). Bha an dà siRNA gu h-èifeachdach a ’lughdachadh ìrean pròtain PSMC5 an coimeas ri cumhaichean smachd (siRNA # 1, 23 ± 5% de smachd; siRNA # 2, 18 ± 6%; p <0.05; n = 4). Cha robh buaidh sam bith aig leagail PSMC5 air ìrean basal de FosB no ΔFosB ach dhaingnich e inntrigeadh an dà chuid FosB agus ΔFosB le brosnachadh serum (FosB: F (2,6) = 20.99, p = 0.002; ΔFosB: F (2,6) = 22.83 , p = 0.002).

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g003

Bidh cruth ΔFosB agus PSMC5 a ’dèanamh iom-fhillte le CBP, p300, agus BRG1 ann an NAc

Gus tuigse nas fheàrr fhaighinn air na h-uidheaman tar-sgrìobhaidh leis am faodadh PSMC5 buaidh a thoirt air gnìomh ΔFosB, rinn sinn sgrùdadh air com-pàirtichean ceangailteach a bharrachd airson an dà phròtain anns an NAc fo chumhachan làimhseachaidh cocaine. Tha aon aithisg ann gu bheil PSMC5 a ’ceangal ri CBP - a HAT - agus a’ meudachadh acetylation histone H3 aig an neach-adhartachaidh proximal MHC-II ann an ceallan HeLa [22]. A bharrachd air an sin, tha luchainn a tha easbhaidheach ann am CBP a ’taisbeanadh cugallachd giùlain nas ìsle do chocaine a bharrachd air acetylation histone lùghdaichte aig an FosB neach-adhartachaidh [23]. Rinn sinn deuchainn mar sin an gabhadh PSMC5 ceangal le ΔFosB mar phàirt de fhilltean anns a bheil CBP agus is dòcha gnìomhaichean tar-sgrìobhaidh eile.

Sheall sinn an toiseach gun robh ΔFosB gu h-èifeachdach a ’slaodadh sìos an dà chuid CBP agus p300, HAT co-cheangailte, ann an ceallan Neuro2A (Fig 4A). An coimeas ri sin, cha do nochd an cruth mutant leucine zipper de ΔFosB, mar a bhiodh dùil, a ’ghnìomhachd seo. San aon dòigh, tharraing PSMC5 gu h-èifeachdach sìos CBP agus p300 (Fig 4B). Gu h-inntinneach, chaidh a ’bhuaidh seo fhaicinn cuideachd airson PSMC5-ΔCC, nach do tharraing sìos ΔFosB, a’ nochdadh gu bheil PSMC5 ag eadar-obrachadh le CBP agus p300 tro raointean eile den phròtain agus gu neo-eisimeileach bho bhith ga cheangal ri ΔFosB.

Dealbhag a 'ghlacaidh
Fig 4. Bidh ΔFosB agus PSMC5 ag eadar-obrachadh le CBP, p300, agus BRG1 in vitro agus in vivo.

 

Chaidh ceallan A. Neuro2A a thar-chuir le 2.4 μg de ΔFosB no MYC-tagged ΔFosB-LZM. Chaidh earrannan cealla a immunoprecipitated le antibody anti-CBP no anti-p300, agus chaidh precipitates a blotadh an Iar leis an aon antibody no le antibody anti-MYC. Bidh an dà chuid CBP agus p300 ag eadar-obrachadh le ΔFosB agus tha eadar-obrachaidhean mar sin a ’feumachdainn zipper leucine neo-iomlan. Chaidh ceallan B. Neuro2A a thar-chuir le 2.4 μg de PSMC5 tagged FLAG no PSMC5-ΔCC le tag FLAG. Chaidh earrannan cealla a immunoprecipitated le antibody anti-CBP no anti-p300, agus chaidh precipitates a blotadh an Iar leis an aon antibody no le antibody anti-FLAG. Bidh an dà chuid CBP agus p300 ag eadar-obrachadh le PSMC5 agus chan fheum eadar-obrachaidhean mar sin fearann ​​CC. C. Chaidh lysates niùclasach de luchag NAc às deidh làimhseachadh cocaine cronail a thoirt do immunoprecipitation le antibody anti-CBP no anti-p300. Sheall blotadh an Iar às deidh sin de precipitates le antibody anti-FosB / ΔFosB eadar-obrachaidhean endogenous eadar ΔFosB agus CBP / p300. D. Chaidh Aliquots de na h-aon lysates niùclasach a thoirt a-steach do immunoprecipitation le antibody anti-BRG1 no anti-PSMC5, air a leantainn le blotadh an Iar de precipitates le antibody anti-FosB / ΔFosB no anti-BRG1. Tha na toraidhean a ’sealltainn eadar-obrachaidhean endogenous eadar ΔFosB agus BRG1, agus BRG1 agus PSMC5. E. Dealbh sgeamaigeach de ghnìomhachd gnìomhachaidh tar-sgrìobhaidh air a dhèanamh suas de ΔFosB: heterodimers JunD ag eadar-obrachadh le CBP / p300, BRG1, agus PSMC5.

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g004

Gus dearbhadh gu bheil na h-eadar-obrachaidhean sin cuideachd a ’tachairt ann an vivo, thug sinn rianachd cocaine gu cronail gus ìrean ΔFosB agus PSMC5 niùclasach a bhrosnachadh, an uairsin earrannan NAc immunoprecipitated le antibodies anti-CBP no anti-p300. A ’co-chòrdadh ris an dàta againn mu chultar cealla, chaidh dìon-dìon CBP no p300 a tharraing sìos gu h-èifeachdach ΔFosB (Fig 4C). Rinn sinn deuchainn an gabhadh BRG1, prìomh fho-ionad de ath-dhealbhadh cromatin SWI-SNF, cuideachd ceangal ri ΔFosB agus PSMC5, stèidhichte air na lorg sinn na bu tràithe gu bheil BRG1 air fhastadh gu cuid de ghinean targaid ΔFosB ann an co-bhonn ris an gnìomhachd aca ann an NAc às deidh cocaine cronail [24]. Fhuair sinn a-mach gun do tharraing immunoprecipitation de BRG1 ΔFosB ann an earrannan NAc, agus gun robh dìon-dìon de PSMC5 mar an ceudna coprecipitated endogenous BRG1 (Fig 4D). Air an toirt còmhla, tha na toraidhean sin a ’moladh gu bheil cruth ΔFosB-PSMC5 ann an NAc a tha cuideachd a’ toirt a-steach CBP / p300 agus BRG1 (Fig 4E).

Bidh overexpression PSMC5 a ’meudachadh freagairtean locomotor gu cocaine

Thug an ceangal follaiseach de PSMC5 le ΔFosB ann an NAc sinn gu bhith a ’sgrùdadh a bheil àrdachadh ìrean PSMC5 anns an roinn eanchainn seo a’ riaghladh freagairtean giùlain do chocaine. Chruthaich sinn vectar Herpes Simplex Virus (HSV) a bhios a ’dol thairis air an dàrna cuid wildtype PSMC5 no aon de na mutants aige agus a’ dearbhadh na bheactaran ann an NAc in vivo (Fig 5A). Tha faireachdainn viral-mediated de PSMC5 a ’nochdadh sa mhòr-chuid ann an neul na cealla (Fig 5B). Cha do sheall luchainn overexpressing seòrsa fiadhaich PSMC5 freagairtean atharraichte gu dòsan tùsail de chocaine, ach sheall iad barrachd gnìomhachd locomotor mar fhreagairt air dòsan cocaine a-rithist an coimeas ri luchagan smachd a chuir an cèill GFP. An coimeas ri sin, cha do nochd luchainn a bha a ’dol thairis air cruth mutant de PSMC5 aig nach eil an àrainn corail-coilear (PSMC5-ΔCC) a’ bhuaidh seo (Fig 5B). Gu h-inntinneach, tha overexpression de PSMC5-K196M, aig nach eil gnìomhachd ATPase den phròtain wildtype, cuideachd a ’neartachadh freagairtean locomotor cocaine.

Dealbhag a 'ghlacaidh
Fig 5. Tha overexpression PSMC5 ann an NAc a ’meudachadh freagairtean locomotor gu cocaine.

 

A. Taisbeanadh transgene riochdaire HSV-meadhanaichte ann an NAc medial. AC, coimisean roimhe. Tha fo-roinnean cridhe agus sligean NAc air an toirt fa-near san fhigear. B. Meudan nas àirde riochdachail (60x) de staining immunohistochemical de PSMC5 ann an neurons NAc às deidh in-stealladh HSV-PSMC5 a ’sealltainn gu bheil am pròtain gu ìre mhòr niùclasach mar a tha air a chomharrachadh le staining DAPI. Fhuair C. luchagan in-stealladh dà-thaobhach HSV a-steach do NAc agus an uairsin stealladh IP làitheil de dòsan fo-chùramach de chocaine (7.5 mg / kg). Tha freagairtean locomotor air an sealltainn mar fhreagairt air a ’chiad agus an tè mu dheireadh de 3 dòsan làitheil den druga. Tha overexpression de PSMC5 no PSMC5-K196M a ’meudachadh freagairtean locomotor gu cocaine a-rithist, buaidh nach fhaicear le PSMC5-ΔCC. Cha robh buaidh mhòr sam bith aig na transgenes air freagairtean locomotor gu dòsan tùsail cocaine. ANOVA F (3,125) = 4.163, * p <0.05 le deuchainn posthoc Dunnett.

doi: 10.1371 / journal.pone.0126710.g005

Deasbaireachd

Tha toraidhean an sgrùdaidh seo a ’nochdadh dòigh ùr leis am bi ΔFosB a’ meadhanachadh a ’bhuaidh a th’ aige air an eanchainn agus inneal ùr an sàs ann an gnìomh cocaine. Le bhith a ’cleachdadh dòigh-obrach neo-phàirteach, assay dà-hybrid beirm, chomharraich sinn PSMC5 mar chom-pàirtiche ceangail nobhail airson ΔFosB. Rinn sinn dearbhadh air an lorg seo an dà chuid ann an ceallan cultair in vitro agus anns an NAc in vivo le bhith a ’nochdadh ceangal làidir PSMC5-ΔFosB. Gu cudromach, tha ìrean niuclasach de PSMC5 air an toirt a-steach ann an NAc le rianachd cocaine cronach. Sheall sinn tuilleadh gu bheil ceangal PSMC5-ΔFosB a ’tachairt còmhla ri grunn phròtainean gnìomhachaidh tar-sgrìobhaidh eile, is e sin CBP agus p300 (dà HAT) agus BRG1 (prìomh phàirt de ath-dhealbhadh cromatin SWI-SNF). Còmhla, tha na co-dhùnaidhean againn a ’toirt taic don bheachd gu bheil PSMC5 mar phàirt den ionad gnìomhachaidh tar-sgrìobhaidh a tha air fhastadh gu co-dhiù cuid de ghinean ΔFosB-brosnaichte rè cùrsa de rianachd cocaine cronach (Fig 4E). Co-chòrdail ris a ’bheachd seo tha an lorg a bharrachd gu bheil overexpression de PSMC5 ann an NAc, mar an overexpression de ΔFosB fhèin, a’ brosnachadh freagairtean giùlain do chocaine. Bhiodh e inntinneach ann an sgrùdaidhean san àm ri teachd na beachdan in vivo sin a leantainn le caractaran eadar-obrachadh PSMC5-ΔFosB-HAT-BRG1 le bhith a ’cleachdadh measaidhean neach-aithris in vitro.

Tha com-pàirteachadh PSMC5 ann an gnìomh cocaine gu tur ùr. Air a chomharrachadh an toiseach mar bhall de theaghlach mòr de ATPases a tha a ’dèanamh suas am proteasome, chaidh PSMC5 a shealltainn thar nam bliadhnaichean gus eadar-obrachadh le grunn fhactaran tar-sgrìobhaidh, nam measg c-Fos, p53, gabhadairean hormona niùclasach, agus buill den cho-sgrìobhadh tar-sgrìobhaidh basal [25], ge-tà, is e glè bheag de sgrùdaidhean gnìomh a chaidh a dhèanamh thar nam bliadhnaichean [26]. Is e an gnìomh as fheàrr a stèidhich e gnìomhachd factaran tar-sgrìobhaidh MYC ann an ceallan cultair [27]. Tha buaidh PSMC5 ann an uidheaman tar-sgrìobhaidh air moladh àite a dh ’fhaodadh a bhith ann airson gnìomhachd ubiquitination-proteasomal ann an riaghladh tar-sgrìobhadh gine, ach tha com-pàirteachadh PSMC5 ann an riaghladh mar sin cha mhòr gun dearbhadh gu ruige seo [28,29].

Is e glè bheag de dh'fhiosrachadh mu dhreuchd PSMC5 san eanchainn. Sheall sgrùdadh na bu thràithe a bhith a ’nochdadh farsaing de PSMC5 mRNA air feadh eanchainn [30], ach tha gnìomhachd gnìomhachd air fuireach gun sgrùdadh. Tha na co-dhùnaidhean againn a-nis a ’brosnachadh tuilleadh sgrùdaidhean air a’ phròtain inntinneach seo gus tuigse nas fheàrr fhaighinn air a dhleastanas ann a bhith a ’riaghladh tar-sgrìobhadh gine agus an dàimh a th’ aige ri gnìomh ubiquitination-proteasomal san eanchainn. Tha ceangal PSMC5 ri ΔFosB air a mheadhanachadh le fearann ​​corail-coil PSMC5. A bharrachd air an sin, chan eil comas PSMC5 gus freagairtean locomotor gu cocaine adhartachadh, fhad ‘s a dh’ fheumas e an àrainn coil-coiled, a ’feumachdainn gnìomhachd ATPase a tha bunaiteach don phròtain. Tha na toraidhean sin a ’togail a’ chothruim, co-dhiù san t-siostam againn, gum faodadh prìomh ghnìomhachd PSMC5 a bhith air a mheadhanachadh tro bhith ga cheangal ri ΔFosB agus pròtanan riaghlaidh tar-sgrìobhaidh eile agus chan ann tro a ghnìomhachd co-cheangailte ri proteasomal per se. Tha feum air tuilleadh obrach gus seo a dhearbhadh gu dìreach agus cothroman eile. Tha am beachd-smuain gun do chuir cus-mheadhanachadh viral de PSMC5 barrachd fhreagairtean locomotor gu cocaine tro eadar-obrachaidhean le ΔFosB so-chreidsinneach, a dh ’aindeoin cleachdadh clàr làimhseachaidh cocaine latha 3, oir tha fios gu bheil ìrean luachmhor de ΔFosB a’ cruinneachadh ann an eanchainn taobh a-staigh na h-ùine seo [3].

Tha na co-dhùnaidhean a th ’ann an-dràsta a’ daingneachadh goireasachd a bhith a ’cleachdadh modhan deuchainneach neo-phàirteach, fosgailte ann a bhith a’ sgrùdadh bunait moileciuil riaghladh eanchainn. Bha a ’chiad aire againn air PSMC5 stèidhichte a-mhàin air a cheangal fhollaiseach ri ΔFosB ann an assay dà-hybrid beirm, ach tha e coltach gu bheil e na phàirt chudromach de dh’ atharrachaidhean tar-sgrìobhaidh a tha air am fastadh ann an NAc le rianachd cocaine a-rithist. Tha tuigse nas fheàrr air na h-innleachdan mionaideach leis am bi ìrean niuclasach PSMC5 air an toirt a-steach le cocaine agus, mar sin, leis am bi PSMC5 an uairsin a ’cur ri iom-fhillteachd gnìomhachaidh tar-sgrìobhaidh air a bhrosnachadh le cocaine mar fhòcas nan sgrùdaidhean gnàthach. Aig an aon àm, nochd ar assay dà-hybrid beirm grunn chom-pàirtichean ceangaltach a bharrachd de ΔFosB (Clàr 1) a tha cuideachd a-nis airidh air sgrùdadh dìreach ann am modalan cocaine. Còmhla, tha an obair seo a ’cur ri tuigse a tha a’ sìor fhàs mu na h-uidheaman moileciuil iom-fhillte tro bheil cocaine ag atharrachadh gnìomh NAc.

Acknowledgments

Fhuair an obair seo taic bho thabhartasan bhon Institiud Nàiseanta air Mì-chleachdadh Dhrugaichean, agus bho Stèidheachd Ishibashi agus Comann Iapan airson adhartachadh saidheans (àireamhan KAKENHI: 24591735, 26290064, 25116010).

Cuibhreannan Ùghdar

Chruthaich agus dhealbhaich na deuchainnean: YHO YNO EJN. Choilean e na deuchainnean: YHO YNO PJK RN. Mion-sgrùdadh air an dàta: YHO YNO EJN. Ath-bheachdan / stuthan / innealan sgrùdaidh co-cheangailte: TN MO OY AN RN TT. Sgrìobh am pàipear: YHO EJN.

iomraidhean

  1. 1. Morgan JI, Curran T (1995) Gineadan tràth-tràth: deich bliadhna air adhart. Gluasadan Neurosci 18: 66 - 67. pmid: 7537412 doi: 10.1016 / 0166-2236 (95) 80022-t
  2. 2. Nestler EJ (2008) Innealan tar-sgrìobhaidh de chur-ris: dreuchd deltaFosB. Philos Trans R Soc Lunnainn B Biol Sci 363: 3245 - 3255. doi: 10.1098 / rstb.2008.0067. pmid: 18640924
  3. Seall an artaigil
  4. PubMed / NCBI
  5. Google Scholar
  6. Seall an artaigil
  7. PubMed / NCBI
  8. Google Scholar
  9. Seall an artaigil
  10. PubMed / NCBI
  11. Google Scholar
  12. Seall an artaigil
  13. PubMed / NCBI
  14. Google Scholar
  15. Seall an artaigil
  16. PubMed / NCBI
  17. Google Scholar
  18. Seall an artaigil
  19. PubMed / NCBI
  20. Google Scholar
  21. Seall an artaigil
  22. PubMed / NCBI
  23. Google Scholar
  24. Seall an artaigil
  25. PubMed / NCBI
  26. Google Scholar
  27. Seall an artaigil
  28. PubMed / NCBI
  29. Google Scholar
  30. Seall an artaigil
  31. PubMed / NCBI
  32. Google Scholar
  33. Seall an artaigil
  34. PubMed / NCBI
  35. Google Scholar
  36. Seall an artaigil
  37. PubMed / NCBI
  38. Google Scholar
  39. Seall an artaigil
  40. PubMed / NCBI
  41. Google Scholar
  42. Seall an artaigil
  43. PubMed / NCBI
  44. Google Scholar
  45. Seall an artaigil
  46. PubMed / NCBI
  47. Google Scholar
  48. Seall an artaigil
  49. PubMed / NCBI
  50. Google Scholar
  51. Seall an artaigil
  52. PubMed / NCBI
  53. Google Scholar
  54. Seall an artaigil
  55. PubMed / NCBI
  56. Google Scholar
  57. Seall an artaigil
  58. PubMed / NCBI
  59. Google Scholar
  60. Seall an artaigil
  61. PubMed / NCBI
  62. Google Scholar
  63. Seall an artaigil
  64. PubMed / NCBI
  65. Google Scholar
  66. Seall an artaigil
  67. PubMed / NCBI
  68. Google Scholar
  69. Seall an artaigil
  70. PubMed / NCBI
  71. Google Scholar
  72. Seall an artaigil
  73. PubMed / NCBI
  74. Google Scholar
  75. Seall an artaigil
  76. PubMed / NCBI
  77. Google Scholar
  78. Seall an artaigil
  79. PubMed / NCBI
  80. Google Scholar
  81. Seall an artaigil
  82. PubMed / NCBI
  83. Google Scholar
  84. Seall an artaigil
  85. PubMed / NCBI
  86. Google Scholar
  87. Seall an artaigil
  88. PubMed / NCBI
  89. Google Scholar
  90. 3. An dòchas BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, et al. (1994) Inntrigeadh iom-fhillte AP-1 a mhaireas ùine mhòr air a dhèanamh suas de phròtainean atharraichte coltach ri Fos san eanchainn le cocaine cronail agus leigheasan cronail eile. Neuron 13: 1235 - 1244. pmid: 7946359 doi: 10.1016 / 0896-6273 (94) 90061-2
  91. 4. Hiroi N, Brown J, Haile C, Ye H, Greenberg ME, Nestler EJ (1997) Luchagan mutant FosB: call inntrigeadh cocaine cronail de phròtainean co-cheangailte ri Fos agus cugallachd nas àirde do psychomotor cocaine agus buaidhean buannachdail. Proc Natl Acad Sci USA 94: 10397–10402. pmid: 9294222 doi: 10.1073 / pnas.94.19.10397
  92. 5. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ (2006) Riaghladh seasmhachd ΔFosB le fosphorylation. J Neurosci 26: 5131 - 5142. pmid: 16687504 doi: 10.1523 / jneurosci.4970-05.2006
  93. 6. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, et al. (2007) Tha neo-làthaireachd fearann ​​degron glèidhte C-terminal a ’cur ri seasmhachd sònraichte ΔFosB. Eur J Neurosci 25: 3009 - 3019. pmid: 17561814
  94. 7. Robison AJ, Vialou V, Mazei-Robison M, Feng J, Kourrich S, Collins M, et al. (2013) Feumaidh freagairtean giùlain agus structarail do chocaine cronail lùb air adhart le ΔFosB agus CaMKII anns an t-slige niuclas accumbens. J Neurosci 33: 4295 - 4307 doi: 10.1523 / JNEUROSCI.5192-12.2013. pmid: 23467346
  95. 8. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, et al. (1999) Bidh cur an cèill am bàillidh tar-sgrìobhaidh ΔFosB san eanchainn a ’cumail smachd air cugallachd ri cocaine. Nàdar 401: 272 - 276. pmid: 10499584
  96. 9. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW (2003) ΔFosB ag adhartachadh brosnachadh airson cocaine. J Neurosci 23: 2488 - 2493. pmid: 12657709
  97. 10. McClung CA, Nestler EJ (2003) Riaghladh abairt gine agus duais cocaine le CREB agus DFosB. Nat Neurosci 11: 1208 - 1215. pmid: 14566342 doi: 10.1038 / nn1143
  98. 11. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy BP, Kelz MB, et al. (2006) ΔFosB: Dreuchd riatanach airson ΔFosB anns na nucleus accumbens ann an gnìomh morphine. Neurosci nàdur 9: 205 - 211. pmid: 16415864 doi: 10.1038 / nn1636
  99. 12. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, et al. (2003) Tha faireachdainn so-ruigsinneach, sgìre eanchainn de mutant àicheil ceannasach de c-Jun ann an luchagan transgenic a ’lughdachadh cugallachd ri cocaine. Brain Res 970: 73 - 86. pmid: 12706249 doi: 10.1016 / s0006-8993 (03) 02230-3
  100. 13. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, et al. (1995) Riaghladh pròtanan delta FosB agus coltach ri FosB le làimhseachadh electroconvulsive agus làimhseachadh cocaine. Mol Pharmacol 48: 880 - 889. pmid: 7476919
  101. 14. Hiroi N, Marek GJ, Brown J, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, et al. (1998) Dreuchd riatanach a ’ghine fosB ann an gnìomhan moileciuil, ceallach agus giùlan de ghlacaidhean electroconvulsive. J Neurosci 18: 6952 - 6962. pmid: 9712664
  102. 15. Tha Perez-Otano I, Mandelzys A, Morgan JI (1998) MPTP Parkinsonism an cois a bhith a ’nochdadh gu leantainneach de phròtain coltach ri D-FosB ann an slighean dopaminergic. Mol Brain Res 53: 41 - 52. pmid: 9473580 doi: 10.1016 / s0169-328x (97) 00269-6
  103. 16. Ma J, Ptashne M (1988) Ag atharrachadh inhibitor tar-sgrìobhaidh eukaryotic gu gnìomhaiche. Cell 55: 443 - 446. pmid: 3180218 doi: 10.1016 / 0092-8674 (88) 90030-x
  104. 17. Chien CT, Bartel PL, Sternglanz R, Fields S (1991) An siostam dà-hybrid: dòigh gus ginean a chomharrachadh agus clone airson pròtanan a tha ag eadar-obrachadh le pròtain inntinneach. Proc Natl Acad Sci USA 88: 9578 - 9582. pmid: 1946372 doi: 10.1073 / pnas.88.21.9578
  105. 18. Nakabeppu Y 1, Oda S, Sekiguchi M (1993) Gnìomhachadh leantainneach de cheallan quiescent Rat-1A le delta FosB. Mol Cell Biol 13: 4157 - 4166. pmid: 8321220
  106. 19. Scobie KN, Damez-Werno D, Sun H, Shao N, Gancarz A, Panganiban CH, et al. (2014) Dreuchd deatamach poly (ADP-ribosyl) ann an gnìomh cocaine. Proc Natl Acad Sci USA 111: 2005 - 2010. doi: 10.1073 / pnas.1319703111. pmid: 24449909
  107. 20. Perrotti LI, Breabadair RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, et al. (2008) Pàtranan sònraichte de inntrigeadh ΔFosB san eanchainn le drogaichean mì-ghnàthachaidh. Synapse 62: 358 - 369. doi: 10.1002 / syn.20500. pmid: 18293355
  108. 21. Wang WL, Chevray PM, Nathans D (1996) Sug1 Mamalan agus c-Fos anns a ’proteasome niùclasach 26S. Proc Natl Acad Sci USA 93: 8236 - 8240. pmid: 8710853 doi: 10.1073 / pnas.93.16.8236
  109. 22. Koues OI 1, Dudley RK, Truax AD, Gerhardt D, Bhat KP, McNeal S, et al. (2008) Riaghladh acetylation aig prìomh neach-adhartachaidh proximal clas II histocompatibility leis an 19S proteasomal ATPase Sug1. Mol Cell Biol 28: 5837 - 5850. doi: 10.1128 / MCB.00535-08. pmid: 18662994
  110. 23. Bidh pròtain ceangailteach Levine AA, Guan Z, Barco A, Xu S, Kandel ER, Schwartz JH (2005) CREB a ’cumail smachd air freagairt cocaine le bhith a’ acetylating histones aig an neach-adhartachaidh fosB ann an striatum na luchaige. Proc Natl Acad Sci USA 102: 19186 - 19191. pmid: 16380431 doi: 10.1073 / pnas.0509735102
  111. 24. Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DEH, Truong HT, et al. (2005) Tha ath-dhealbhadh chromatin na phrìomh dhòigh air plastachd a tha air a bhrosnachadh le cocaine ann an striatum. Neuron 48: 303 - 314. pmid: 16242410 doi: 10.1016 / j.neuron.2005.09.023
  112. 25. St-Arnaud R (1999) Dreuchdan dùbailte airson riaghladairean tar-sgrìobhaidh: uirsgeul no fìrinn. J Cell Biochem Suppl 32/33: 32–40. doi: 10.1002 / (sici) 1097-4644 (1999) 75: 32+ <32 :: aid-jcb5> 3.0.co; 2-x
  113. 26. Ferrell K, Wilkinson CRM, Dubiel W, Gordon C (2000) Eadar-obrachaidhean subunit riaghlaidh den proteasome 26S, duilgheadas iom-fhillte. Gluasadan Biochem Sci 25: 83 - 88. pmid: 10664589 doi: 10.1016 / s0968-0004 (99) 01529-7
  114. 27. von der Lehr N, Johansson S, Larson LG (2003) Buaidh an t-siostam ubiquitin / proteasome ann an tar-sgrìobhadh riaghlaichte le myc. Cearcall cealla 2 - 5: 403 - 407. doi: 10.4161 / cc.2.5.484
  115. 28. Geng FQ, Wenzel S, Tansey WP (2012) Ubiquitin agus proteasomes ann an tar-sgrìobhadh. Annu Rev Biochem 81: 177 - 201. doi: 10.1146 / annurev-biochem-052110-120012. pmid: 22404630
  116. 29. Collins GA, Tansey WP (2006) Am proteasome: inneal goireasach airson ath-sgrìobhadh? Curr Op Genet Dev 16: 197 - 202. pmid: 16503126
  117. 30. Sun DH, Swaffield JC, Johnston SA, Milligan CE, Zoeller RT, Schwartz LM (1997) Comharrachadh ball teaghlaich Sug1 CAD a tha air a ghleidheadh ​​gu phylogenetically a tha air a chuir an cèill gu eadar-dhealaichte ann an siostam nearbhach na luchaige. Dev Neurobiol 33: 877–890. doi: 10.1002 / (sici) 1097-4695 (199712) 33: 7 <877 :: aid-neu2> 3.0.co; 2-5