Giùlan drùidhteach a dh'adhbhraich a bhith a ’gintinn le optogenetach sgìre fàileadh ventral reusanta.

Proc Natl Acad Sci US A. Apr 29, 2014; 111 (17): 6455 - 6460.

Air fhoillseachadh air-loidhne Apr 15, 2014. doi:  10.1073 / pnas.1404323111

PMCID: PMC4036004

Neuroscience

Tha an artaigil seo air a bhith air ainmeachadh artaigilean eile ann am PMC.

Rach gu:

Feart

Bidh neurons dopamine (DA) anns an sgìre teasach ventral (VTA) a ’freagairt ri brosnachaidhean casgach mar as trice le bhith a’ sàrachadh thar-ghluasadach. Chan eil e soilleir a bheil an ath-bhualadh seo gu dìreach a ’brosnachadh freagairtean casgach ann a bhith a’ giùlan luchainn. Rinn sinn sgrùdadh air a ’cheist seo le bhith a’ cumail smachd optogenetically air neurons DA anns an VTA agus fhuair sinn a-mach gun robh freagairt neo-ghnìomhach agus ionnsachadh mar thoradh air neo-ghnìomhachadh neurons DA. Bhathar den bheachd gur e an niuclas accumbens (NAc), prìomh niuclasan toraidh VTA DA neurons, a bha an urra ris an fhreagairt seo, agus mar sin rinn sinn sgrùdadh air dè na slighean bunaiteach anns an NAc a bha deatamach don ghiùlan seo le bhith a ’cleachdadh leagail D1 no D2 receptor, agus fhuair e a-mach gu robh an t-slighe D2 sònraichte airson gabhadan deatamach airson a ’ghiùlan seo.

Abstract

Tha tar-chuir dopamine (DA) bhon sgìre teasach ventral (VTA) deatamach airson smachd a chumail air gach cuid giùlan buannachdail agus casgach. Tha sàmhchair gluasadach neurons DA mar aon de na freagairtean do bhrosnachaidhean casgach, ach tha a bhuilean agus na h-innleachdan neòil a thaobh freagairtean casgach agus ionnsachadh air fuireach gu ìre mhòr duilich. An seo, tha sinn ag aithris gu bheil neo-ghnìomhachd optogenetic de neurons VTA DA a ’lughdachadh ìrean DA gu sgiobalta agus a’ toirt suas ath-riaghladh air gnìomhachd neòil anns na nucleus accumbens (NAc) mar a chaidh a mheasadh le abairt Fos. T.Nuair a chaidh an losgadh optogenetic aige a losgadh DA neuron sa bhad, dhùisg e freagairtean dùbhlanach don t-seòmar dhorcha a b ’fheàrr leis roimhe agus lean e gu ionnsachadh ionnsaigheach a dh’ ionnsaigh an àite le suidheachadh optogenetically. Gu cudromach, chaidh cur às don aimhreit àite seo le bhith a ’leagail gabhadairean dopamine D2 ach chan ann le gabhadairean D1 anns an NAc. Mar sin bha sàrachadh neurons DA anns an VTA riatanach airson a bhith a ’brosnachadh freagairtean casgach agus ag ionnsachadh tro gabhadairean dopamine D2 anns an NAc.

Tha an siostam dopaminergic mesolimbic chan e a-mhàin a ’cluich pàirt chudromach ann an raon farsaing de bhrosnachadh agus ionnsachadh (1-3), ach tha a mhì-rian cuideachd air a bhith an sàs ann an fìor dhuilgheadasan neuropsychiatric mar a chithear ann an galar Pharkinson, sgitsophrenia, agus tràilleachd dhrogaichean. Bidh neurons dopamine (DA) anns an sgìre teasach ventral (VTA) a ’freagairt ri brosnachaidhean buannachdail le bhith a’ losgadh mean air mhean, agus tha prìomh obair an losgaidh seo air a theòiridh gus “mearachd ro-innse duais a chòdachadh,” an eadar-dhealachadh anns an luach eadar an duais a tha dùil agus an fìor dhuais (4). An coimeas ris an fhreagairt do bhrosnachaidhean buannachdail, tha na beachdan aca air brosnachadh brosnachail fada bho bhith homologous; ie, tha cuid de neurons DA air an cur an gnìomh mar fhreagairt do bhrosnachaidhean casgach, ach bidh a ’mhòr-chuid eile a’ dèiligeadh le bhith a ’cuir às do na losgadh aca (5-9). Gu dearbh, tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air nochdadh gu bheil gnìomhachd optogenetic de neurons GABAergic agus neo-ghnìomhachd mar thoradh air neurons DA a ’cuir stad air caitheamh duais agus a’ brosnachadh freagairt aimhreit (10, 11). Ach, tha e air a bhith gu ìre mhòr neo-chomasach a thaobh dè na h-uidheaman anns na cuairtean neòil a tha riatanach airson ionnsachadh ionnsaigheach fhaighinn às deidh neo-ghnìomhachadh neurons DA anns an VTA agus a thaobh mar a tha freagairtean giùlain air an riaghladh a dh ’ionnsaigh caitheamh duais agus a bhith a’ brosnachadh giùlan casgach.

Tha fianais cronail air nochdadh gu bheil an ionnsachadh brosnachail agus inntinneil mar fhreagairt do bhrosnachaidhean adhartach is àicheil gu ìre mhòr air a riaghladh leis na cuairtean neòil a ’toirt a-steach an ganglia basal (12), a gheibh mòran den ro-mheasadh dopaminergic bhon mheanbh-chuileag. Anns an striatum, tha dà chuairt neural bunaiteach air an dèanamh suas le neurons spìosrach meadhanach mòr (MSNs), gach fear a ’cur an cèill seòrsa sònraichte de gabhadair DA (13).

  • Is e aon chuairt an t-slighe dhìreach, a tha air a dhèanamh suas de na MSNn a tha a ’dol a-mach gu dìreach gu niuclasan toraidh an ganglia basal, substantia nigra pars reticulata (SNr), agus gu ìre mhòr a’ cur an cèill gabhadairean dopamine D1 (D1Rs).
  • Is e am fear eile an t-slighe neo-dhìreach, air a dhèanamh suas de na MSNn a bhios a ’pròiseachadh gu neo-dhìreach tron ​​globus pallidus chun SNr agus a’ cur an cèill gabhadairean dopamine D2 (D2Rs).

Bidh comharran DA bhon mheanbh-chuileag ag atharrachadh an dà shlighe co-shìnte seo ann an dòigh eadar-dhealaichte tro D1Rs agus D2Rs, agus tha còir aig a ’mhodaladh seo ionnsachadh brosnachail a dhèanamh comasach (3, 14).

  • A thaobh na brosnachaidhean buannachdail, thathas den bheachd gu bheil ìrean DA àrd-riaghlaichte le comharran duais a ’gnìomhachadh na D1Rs agus mar sin gu ìre mhòr a’ comasachadh an t-slighe dhìreach anns na nucleus accumbens (NAc).
  • Air an làimh eile, tha cur às do losgadh DA neuron mar fhreagairt do bhrosnachaidhean casgach a ’lughdachadh ìrean DA anns an NAc; agus tha còir aig an ath-bhualadh seo adhartachadh sònraichte a dhèanamh air sgaoileadh chomharran anns an t-slighe neo-dhìreach tro D2Rs gnìomhaichte.

Ged a tha sgrùdaidhean a ’cleachdadh na ro-innleachdan cungaidh-leigheis agus an dòigh bacaidh neurotransmission reversible (RNB) air taic a thoirt don dòigh riaghlaidh seo anns an NAc (15, 16), chan eil fios fhathast a bheil cur às do losgadh DA neuron gu leòr gus gnìomhachd an t-slighe neo-dhìreach a bhrosnachadh agus an giùlan seachnadh a bhrosnachadh. Anns an sgrùdadh làithreach seo, thug sinn aghaidh air a ’chùis seo le bhith a’ dèanamh gnìomh neo-ghnìomhach de neurons DA anns an VTA le bhith a ’làimhseachadh pròtain bogha-hyperpolarizing Arch (gu optogenetically) (17) agus sheall e gu soilleir gun do chuir cuir às do neurons DA anns an VTA ìrean DA anns an NAc às deidh sin agus gun tug e brosnachadh agus ionnsachadh dùbhlanach. A bharrachd air an sin, rinn sinn sgrùdadh air dòighean riaghlaidh an ath-bhualadh seo agus nochd sinn gu robh an ath-bhualadh casgach seo fo smachd sònraichte le D2Rs anns an NAc.

toraidhean

Gnìomhachadh Optogenetic de DA Neurons Blocks Roghainn Seòmar Dorcha.

Gus losgadh gu neo-ghnìomhach de DA neurons a chuir an gnìomh, chuir sinn a-steach còdachadh togail viral Cre-inducible adeno ceangailte ri Arch-eGFP [frèam leughaidh fosgailte inverted AAV-double-floxed (DIO) -Arch] (17) gu aon-thaobhach a-steach don VTA de luchagan tyrosine hydroxylase inbheach (TH) -Cre lucha (18) agus sgudal-sgudail seòrsa fiadhaich (WT) agus chuir iad snàithleach optigeach os cionn an VTA (Fig. S1 A agus C). Dà sheachdain às deidh obair-lannsa, chaidh Arch-eGFP a lorg gu cuingealaichte anns an VTA (Fig. S1B). Rinn sinn deuchainn air buaidh hyperpolarizing pròtain Arch le bhith a ’clàradh electrophysiologic agus thomhais sinn buaidh brosnachadh optigeach an VTA de luchainn TH-Cre a chaidh a stealladh le AAV-DIO-Arch. Nochd clàran electrophysiologic in vivo bhon VTA de luchainn TH-Cre anesthetized gu robh brosnachadh optigeach de neurons DA putative a ’cur bacadh air an losgadh (Fig. S2), a ’nochdadh gu robh an spreagadh optigeach a’ dèanamh hyperpolar gu leòr air comas membran cealla DA Arch-expressing agus mar sin a ’cur bacadh air an losgadh gun spionnadh.

Le bhith a ’cleachdadh na luchagan sin, rinn sinn sgrùdadh a-rithist an gabhadh neo-ghnìomhachd optigeach neurons DA anns an VTA a bhith na chomharradh casgach airson ionnsachadh giùlain. Tha luchainn a ’sealbhachadh gnè dhùthchasach as fheàrr leotha àrainneachd dhorcha (19). Dhealbhaich sinn uidheamachd giùlain anns am b ’urrainn do luchagan sgrùdadh a dhèanamh gu saor air an t-seòmar dorcha agus fosgladh àite soilleir (Fig. 1A). Às deidh àiteachadh, dh ’fhuirich na luchagan WT gu fàbharach san t-seòmar dhorcha an dàrna cuid le no às aonais brosnachadh optigeach anns an t-seòmar dorcha (Fig. S1D), a ’dèanamh cinnteach nach robh buaidh sam bith aig brosnachadh optigeach air an giùlan seòmar dorcha aca. Chlàraich sinn deuchainn giùlan bheathaichean gus deuchainn a dhèanamh air buaidh neo-ghnìomhachd optigeach neurons DA air an giùlan (Fig. S1E). Às deidh àiteachadh agus pretest, chaidh luchagan a shuidheachadh le bhith a ’brosnachadh na DA neurons anns an VTA nuair a dh’ fhuirich iad san t-seòmar dhorcha. Fiù ‘s anns a’ chiad 5 min de fhuarachadh, dh ’fhuirich na luchagan TH-Cre a-mach às an t-seòmar dorcha a b’ fheàrr leotha roimhe agus shoirbhich iad le bhith a ’seachnadh an t-seòmar dorcha air feadh an t-suidheachaidh (Fig. 1B). Cha do chuir na luchagan TH-Cre cùl ris an seachnadh an aghaidh an t-seòmair dhorcha ged nach d ’fhuair iad brosnachadh optigeach sam bith aig a’ phosttest (Fig. 1C). Tha an dàta seo a ’sealltainn gu robh hyperpolarization de neurons DA chan e a-mhàin a’ toirt a-steach giùlan casgach gluasadach ach bha e cuideachd na chomharradh airson ionnsachadh casgach an aghaidh an t-seòmair dhorcha agus tha iad cuideachd a ’sealltainn gun robh pàirt adhbharach aig neo-ghnìomhachadh neurons DA ann an giùlan casgach gluasadach agus ionnsachadh casgach fada.

Fig. 1.  

Bidh neo-ghnìomhachd optogenetic de DA neurons a ’blocadh roghainn seòmar dorcha de luchainn a tha gan giùlan fhèin gu saor. (A) Dealbh den uidheam a chaidh a chleachdadh ann an deuchainn roghainn seòmar dorcha. Bha cead aig luchagan gluasad gu saor timcheall an t-seòmair dhorcha agus àite soilleir. (B) Cùrsa ùine ...

Riaghladh sìos Optogenetic de ìrean DA anns an NAc.

Rinn sinn sgrùdadh a-rithist an do dh ’atharraich neo-ghnìomhachadh neurons DA anns an VTA dùmhlachd DA anns a’ phrìomh sgìre targaid aige, an NAc. Thomhais sinn ìrean DA anns an NAc le bholtammetry cearcallach luath-scan (FSCV) ann an luchagan TH-Cre anesthetized a chaidh a thoirt a-steach le AAV-DIO-Arch a-steach don VTA aca. Chaidh ìrean DA anns an NAc àrdachadh gu sgiobalta le brosnachadh dealain den VTA, agus chaidh an leigeil ma sgaoil DA a lughdachadh gu mòr le brosnachadh optigeach aig an aon àm den VTA (Fig. S3). Rinn sinn deuchainn an uairsin an gabhadh brosnachadh optigeach de VTA an ìre DA tonic anns an NAc a lughdachadh. Anns na h-aon shuidheachaidhean deuchainneach, chunnaic sinn gun deach an ìre DA anns an NAc a lùghdachadh gu neo-ghluasadach le 20 s de bhrosnachadh optigeach an VTA (Fig. 2), a tha co-chòrdail ris an ath-bhualadh FSCV a chaidh aithris an aghaidh brosnachaidhean casgach (20). Tha an dàta seo a ’sealltainn gun robh brosnachadh optigeach an VTA èifeachdach gu leòr gus na neurons VTA DA a ghnìomhachadh agus an ìre DA anns an NAc a lughdachadh rè an deuchainn giùlain.

Fig. 2.  

Tha neo-ghnìomhachd optigeach de neurons DA anns an VTA a ’lughdachadh ìre DA anns an NAc. (A) Freagairtean cuibheasach DA air brosnachadh optigeach anns an NAc mar a chaidh a thomhas le FSCV. Tha an loidhne uaine a ’comharrachadh fad an spreagadh optigeach (n = Lorgan 7 - 11). (B) Cuibheasach ...

Ùrachadh mu mhìneachadh gine Fos le neo-ghnìomhachadh optigeach DA Neurons anns an VTA.

Bha an t-atharrachadh giùlain a dh ’adhbhraich neo-ghnìomhachd cumhaichte de neurons DA anns an VTA a’ moladh gum biodh brosnachadh optigeach ag atharrachadh gnìomhachd neòil gu dìreach agus a ’leantainn gu gluasad coileanadh giùlain. Mar sin rinn sinn sgrùdadh a-rithist air na roinnean anns an deach gnìomhachd neural àrdachadh le neo-ghnìomhachd cumhaichte DA neurons le bhith a ’sgrùdadh abairt Fos, gine tràth sa bhad. Goirid às deidh an t-suidheachadh a dhèanamh anns an deuchainn seòmar dorcha, chaidh luchagan a ghiullachd gu sgiobalta gus faighinn a-mach dè an ìre de mhìneachadh Fos a bh ’ann le mion-sgrùdadh cainneachdail in situ (Fig. 3 agus Fig. S4). Sheall an NAc, an roinn a tha a ’faighinn mòran de ro-mheasaidhean dopaminergic bhon VTA, àrdachadh gu mòr ann an abairt Fos anns na luchagan TH-Cre (Fig. 3). Chaidh an ùrachadh seo a lorg cuideachd ann an taobh co-thaobhach de bhrosnachadh optigeach, a bha, a rèir coltais, air adhbhrachadh le ìre bheag de ghabhaltachd bhìoras a-steach don taobh sin. Ach, bha an ùrachadh suas mòran nas àirde aig an taobh ipsilateral na bha e aig taobh contralateral de bhrosnachadh optigeach, a ’moladh gun robh neo-ghnìomhachd optigeach de neurons DA a’ riaghladh gnìomhachd neural an NAc gu dìreach. Chaidh an abairt àrdachadh Fos a choimhead cuideachd ann an roinnean eanchainn eile a ’toirt a-steach an septum, roinnean periventricular den striatum, amygdala basolateral (BLA), agus hypothalamus lateral, ach chan ann anns an habenula lateral no cortex prefrontal medial (mPFC; Fig. S4). Tha na toraidhean sin a ’sealltainn nach robh na roinnean a bha air an cur an gnìomh le neo-ghnìomhachd optigeach de neurons DA air an cuingealachadh ris na roinnean targaid dhìreach de neurons VTA DA, ach an àite sin bha iad a’ toirt a-steach na roinnean a dh ’fhaodadh a bhith air an cur an gnìomh gu neo-dhìreach ann an dòigh a tha an urra ri cuairteachadh neural. Tha an amharc seo a ’moladh gun do chuir neo-ghnìomhachd optigeach de neurons DA atharrachadh air gnìomhachd neuronal air feadh na cuairte agus nach b’ urrainn dha a-mhàin ath-bhualadh gluasadach a bhrosnachadh ach cuideachd grunn ghnìomhan eanchainn eile a bhrosnachadh leithid iomagain, eagal, agus freagairtean cuideam (21).

Fig. 3.  

Cur an cèill co-cheangailte ri gnìomhachd de ghine Fos air a bhrosnachadh le neo-ghnìomhachd DA neuron optogenetic. (A-C) Dealbhan riochdachail airson abairt Fos (buidhe) anns an NAc. Chaidh dealbhan a thogail den taobh bhrosnaichte de luchag TH-Cre (A), de na neo-leasaichte ...

Tha Comharradh DA tro D2R deatamach airson a bhith a ’gluasad àite fo chumha Optogenetically Induced.

Tha a ’mhòr-chuid de chomharran dopaminergic bhon VTA air an gluasad gu na MSNn anns an NAc tro gabhadairean DA, D1R agus D2R. Tha D1R cha mhòr air a chuir an cèill anns an stuth P (air a chòdachadh le gine Tac1) -expressing MSNs, agus tha D2R air a chuir an cèill sa mhòr-chuid anns an enkephalin (air a chòdachadh le gine Penk) -expressing MSNs; tha gach seòrsa MSN a ’dèanamh suas na slighean dìreach agus neo-dhìreach, fa leth, anns an NAc (3). Leis gu bheil an dàimh airson DA mòran nas àirde airson an D2R (òrdugh nM) na airson an D1R (òrdugh µM) (22, 23), thathas den bheachd gu bheil lùghdachadh ann an ìrean DA a ’leantainn gu neo-ghnìomhachd G.i-coupled D2R ach gun buaidh mhòr sam bith a bhith aige air an D1R (3, 24), mar sin ag ùrachadh a ’ghnìomhachd neòil gu sònraichte anns an t-slighe neo-dhìreach. A bharrachd air an sin, chaidh gnìomhachd Fos a choimhead nas fhollaisiche ann an ceallan Penk- no Drd2 (D2R) -expressing na anns na ceallan Tac1- no Drd1a (D1R) -expressing (Fig. S5). Stèidhichte air na beachdan sin, smaoinich sinn gum faodadh pàirt mòr a bhith aig comharran DA tro D2R anns an t-suidheachadh dìonach a chaidh fhaicinn.

Gus an ro-bheachd seo a dhearbhadh, rinn sinn an deuchainn aversion àite le trì seòmraichean (CPA) (CPA) (Fig. S6). Dh ’ullaich sinn uidheamachd giùlain anns an robh dà sheòmar le suidheachaidhean cha mhòr an aon rud agus aon trannsa bheag. Thug an suidheachadh àrainneachd neo-phàirteach seo ann an deuchainn CPA cothrom dhuinn sgrùdadh a bharrachd a bheil neo-ghnìomhachd neurons VTA DA comasach air ath-bhualadh agus ionnsachadh dùbhlanach a bhrosnachadh, a bharrachd air a bhith a ’cur bacadh air roghainn an t-seòmair dhorcha. Nuair a bha cead aig beathaichean gluasad gu saor timcheall an uidheamachd gu lèir, dh ’fhuirich a’ mhòr-chuid dhiubh ann an dà sheòmar gun eadar-dhealachadh giùlain àbhaisteach sam bith. Chaidh an suidheachadh optigeach a dhèanamh an uairsin le bhith a ’càradh brosnachadh optigeach le aon seòmar stèidhichte. Fiù ‘s nuair a chaidh aon de na seòmraichean a chleachdadh airson an t-siostam fuarachaidh, bhiodh na luchagan TH-Cre a’ sìor chumail agus a ’seachnadh gu mòr a bhith a’ fuireach anns an t-seòmar le suidheachadh optigeach aig àm an t-suidheachaidh agus aig a ’phosttest (Fig. S6 B-E). Bha mion-sgrùdadh staitistigeil a ’dearbhadh lùghdachadh mòr ann an ùine fuireach nan luchagan TH-Cre anns an t-seòmar le suidheachadh optigeach aig a’ phosttest an coimeas ris an ùine fuirich airson na luchagan WT (Fig. S6F).

An uairsin dh ’fheuch sinn ri subtypes gabhadain DA a tha an sàs anns a’ ghiùlan casgach seo a shònrachadh le bhith a ’cuir às gu sònraichte gach aon de na gabhadairean DA anns an NAc (Fig. 4 agus Fig. S7). Dhealbh sinn agus dhearbh sinn vectaran lentiviral anns a bheil RNA hairpin goirid (shRNA) sònraichte airson gach gabhadair DA le faireachdainn bunasach de mCherry. Trì seachdainean às deidh an lentivirus a thoirt a-steach don NAc, chaidh faireachdainn làidir de mCherry a lorg gu h-ionadail anns an NAc (Fig. 4B). Chaidh an leagail èifeachdach de mhìneachadh mRNA de gach gabhadan a dhearbhadh le mion-sgrùdadh cainneachdail PCR fìor-ùine (Fig. S7A). Le bhith a ’tomhas ìrean pròtain tro blotadh an Iar nochd cuideachd gun do lùghdaich in-stealladh gach aon de na lentiviruses an toradh pròtain targaid aca gun a bhith a’ toirt buaidh air faireachdainn an subtype eile de gabhadair DA (Fig. 4C agus Fig. S7 B-G). Lùghdaich na lentiviruses shD1R- agus shD2R-expressing an ìre pròtain targaid aca gu 46.2 ± 1.1% agus 38.4 ± 4.9%, fa leth, an coimeas ris an ìre airson a ’bhìoras smachd (Fig. 4C). Dhearbh na toraidhean sin gu robh na bheactaran lentiviral a ’cur an cèill shRNA sònraichte airson D1R agus D2R gu roghnach agus a’ cuir às do na RNAan targaid aca agus a ’lughdachadh na bha de thoraidhean pròtain fa leth. Dhearbh sinn cuideachd nach deach an abairt bhìoras-mheadhanaichte de mCherry a lorg anns an VTA, ach a-mhàin comas a bhith ann gun tug an shRNA lentivirus-mediated buaidh dhìreach air an VTA.

Fig. 4.  

Tha soidhneadh DA tro D2R deatamach airson CPA a tha air a bhrosnachadh le optogenetically. (A) Dealbh a ’sealltainn an dòigh-obrach lannsa. Chaidh an lentivirus shRNA-encoding airson D1R no D2R a thoirt a-steach gu dà-thaobhach a-steach don NAc. Chaidh AAV-DIO-Arch a thoirt a-steach gu aon-thaobhach a-steach don ...

A ’cleachdadh na lentiviruses sin anns a bheil shRNA, rinn sinn deuchainn dè an seòrsa gabhadair DA a bha an urra ris a’ ghiùlan casgach a bha air adhbhrachadh le neo-ghnìomhachd optogenetic de neurons DA. Chuir sinn a-steach lentivirus anns a bheil shRNA no smachd lentivirus a-steach don NAc dà-thaobhach còmhla ri AAV-DIO-Arch a-steach don VTA chlì de na luchagan TH-Cre. Chaidh an snàithleach optigeach a chuir a-steach cuideachd os cionn an VTA (Fig. 4A). Nuair a chaidh an deuchainn CPA trì-sheòmar a dhèanamh aig trì seachdainean às deidh obair-lannsa, bha na luchagan TH-Cre a chaidh an stealladh lenti: shD1R-mCherry fhathast a ’nochdadh CPA follaiseach an aghaidh an t-seòmar brosnachaidh optigeach-càraideach an coimeas ris na luchagan TH-Cre a chaidh a stealladh leis an smachd lentivirus (lenti: mCherry). An coimeas ri sin, cha do nochd na luchagan TH-Cre a chaidh an stealladh lenti: shD2R-mCherry CPA follaiseach aig àm an t-suidheachaidh (Fig. 4D). Chaidh an easbhaidh ionnsachaidh sònraichte de na luchagan TH-Cre a chaidh a stealladh le lei: shD2R-mCherry a dhearbhadh a-rithist le mion-sgrùdadh air ionnsachadh casgach aig a ’phosttest (Fig. 4E). Tha na co-dhùnaidhean sin a ’sealltainn gun deach an giùlan casgach don àite a chaidh a shuidheachadh le neo-ghnìomhachd DA neuron a thoirt a-steach gu sònraichte tro D2R, agus chan ann tro D1R, anns an NAc.

Deasbaireachd

Anns an striatum, tha sgrùdaidhean air nochdadh gu bheil gnìomhachd an G.s-coupled D1R a ’comasachadh losgadh, ach gnìomhachadh an G.i-coupled D2R a ’leantainn gu èifeachdas losgadh air a chuir fodha (25). Aca ’cumail ri sònrachas abairt gabhadain DA, bidh losgadh mean air mhean de DA neurons gu ìre mhòr a’ gnìomhachadh an t-slighe dhìreach tro D1R, ach tha lùghdachadh thar-ghluasadach ann an losgadh DA neuron gu ìre mhòr a ’brosnachadh comas slighe neo-dhìreach tro D2R (3, 26). Stèidhichte air an dòigh riaghlaidh seo, chaidh a mholadh gum bi sàrachadh neurons DA mar fhreagairt do bhrosnachaidhean casgach air an giullachd sa mhòr-chuid tron ​​t-slighe neo-dhìreach agus a ’leantainn gu giùlan casgach (3). Tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air sealltainn gu bheil bacadh air sgaoileadh synaptic den t-slighe neo-dhìreach a ’cur bacadh air a bhith a’ faighinn giùlan casgach a thig bho clisgeadh dealain (15) agus gu bheil am milleadh seo air adhbhrachadh le casg air sgaoileadh chomharran D2R-meadhanaichte (16). Min a bharrachd, tha an ùrachadh optogenetic de D2R-expressing MSNs anns an t-slighe neo-dhìreach a ’toirt air falbh giùlan. (27). Ach, air sgàth gu bheil neurons DA a ’taisbeanadh an dà chuid losgadh neartaichte agus air a chumail fodha mar fhreagairt do bhrosnachaidhean casgach agus seach gu bheil fiosrachadh mothachaidh eile co-cheangailte ri clisgeadh air a phròiseasadh aig an aon àm san eanchainn, tha e fhathast ri bhith air a shoilleireachadh am b’ urrainn sàmhchair de neurons DA a bhith a ’brosnachadh freagairt agus ionnsachadh aversive gu dìreach, agus a bheil an ath-bhualadh seo air a riaghladh tro D2R-a ’cur an cèill MSNn anns an t-slighe neo-dhìreach.

Anns an sgrùdadh seo, chleachd sinn smachd optogenetic air losgadh DA neuron anns an dà dheuchainn giùlain: an deuchainn roghainn seòmar dorcha agus deuchainn CPA trì-seòmar. Sheall ar làimhseachadh optogenetic gun deach casg a chuir air losgadh DA neuron gu h-èifeachdach anns an VTA agus sìos-riaghladh ìrean DA anns an NAc. Cha do chuir an gnìomh neo-ghnìomhach optogenetic againn de losgadh DA neuron a-mhàin rè na h-ùine a dh ’fhuirich na beathaichean anns an t-seòmar fo chumhachan gu follaiseach ath-bhualadh dùbhlanach agus ionnsachadh, a’ sealltainn gun robh sàmhchair DA neo-ghluasadach ag adhbhrachadh giùlan seachnaidh fulangach. A bharrachd air an sin, tha an sgrùdadh seo air soilleireachadh gu bheil giollachd chomharran D2R-meadhanaichte na phrìomh dhearbhadh airson inntrigeadh an ath-bhualadh dùbhlanach agus ionnsachadh seo.

Ged a sheall an dàta againn nach robh buaidh sam bith aig D1R anns na deuchainnean giùlain gus an CPA a dhùsgadh, tha grunn sgrùdaidhean air clàradh gu bheil feum air losgadh mean air mhean de neurons DA airson freagairtean eagal agus ionnsachadh casgach (28, 29). Tha an eadar-dhealachadh seo mar thoradh air an t-suidheachadh deuchainneach; ie, bha an dòigh-obrach optogenic againn a ’dùnadh a-mach comasachd a bhith a’ soidhneadh tro neurons DA gnìomhaichte gus giùlan casgach a dhùsgadh, a ’nochdadh gu robh gnìomhachd DA neurons neo-ghnìomhach gu leòr airson giùlan casgach agus ionnsachadh a bhrosnachadh. Bhiodh obair agus giollachd chomharran an losgadh DA gnìomhaichte a chaidh a bhrosnachadh le brosnachaidhean casgach a ’cur gu mòr ri giùlan casgach bhon fheadhainn a chaidh a sgrùdadh an seo agus feumar a shoilleireachadh san àm ri teachd.

Bidh DA neurons cuideachd a ’pròiseict gu diofar roinnean eile a’ toirt a-steach am mPFC, amygdala, agus hippocampus. Chomharraich sgrùdadh o chionn ghoirid sin Tha gnìomhachd optogenetic de neurons habenula lateral a tha a ’stobadh a-mach gu neurons DA anns an VTA comasach air giùlan casgach a bhrosnachadh, agus tha na neurons DA sin gu ìre mhòr agus gu sònraichte ag amas air an mPFC (30), ged a bha an suidheachadh optogenetic aca eadar-dhealaichte bhon fhear san sgrùdadh làithreach againn, leis gu robh am brosnachadh optogenetic aca fada airson seisean fuarachaidh slàn. Thathas air aithris gu bheil an cur-a-steach dopaminergic don mPFC air a ghnìomhachadh chan ann a-mhàin le brosnachaidhean casgach ach cuideachd le cuideam leantainneach (31, 32), tha e comasach gum biodh an gnìomhachd leantainneach aca de neurons DA mPFC-projecting air am faicinn mar chomharran bho àrainneachd a tha gu math trom; agus, mar thoradh air fuarachadh teannachaidh a chruinneachadh, bhiodh na beathaichean a ’nochdadh giùlan casgach don t-seòmar le cumhachan. An coimeas ri sin, chuir sinn stad air losgadh air neurons DA a-mhàin fhad ‘s a bha na beathaichean a’ fuireach anns an t-seòmar le cumhachan. Sheall toraidhean ar deuchainnean giùlain le bhith a ’cleachdadh suidheachadh co-fhreagarrach ri tìm gum biodh cur-a-steach obann de chomharradh DA air fhaicinn mar chur-a-steach obann obann, a lean gu freagairt luath luath.

Bidh DA neurons cuideachd a ’pròiseict chun an amygdala, an roinn a tha gu ìre mhòr a’ cur ris an fhreagairt eagal. Gu dearbh, tha an soidhne DA chun an amygdala air a bhith an sàs ann am freagairt eagal agus faighinn cuimhne eagal (33, 34). Anns an sgrùdadh againn, chomharraich bileagan DA neurons anns an VTA seata de neurons DA a bha a ’stobadh a-mach chun BLA, ach bha ìre nan ro-mheasaidhean sin mòran na b’ ìsle na bha iad a ’teilgeadh chun NAc. Ged nach b ’urrainn dhuinn a bhith a’ dùnadh a-mach buaidh seòlta de chomharradh DA ro-mheasta amygdala air ar giùlan casgach a chaidh fhaicinn, bu chòir a ’phrìomh bhuaidh a th’ aig ar neo-ghnìomhachd optogenetic de neurons DA a bhith air an NAc, oir lùghdaich na deuchainnean againn le leagail sònraichte den D2R anns an NAc gu mòr. an giùlan casgach. Tha feum air sgrùdaidhean san àm ri teachd a tha a ’dèiligeadh ri comharran DA a tha sònraichte do thargaidean gus buaidh atharrachadh air feadh cuairteachadh neurons DA a mhìneachadh air na brosnachaidhean casgach agus an t-suidheachadh eagalach.

Stuthan agus Dòighean-obrach

Cuspairean.

Tyrosine hydroxylase :: luchagan bualadh IRES-Cre (TH-Cre) (EM: 00254) (18) fhaighinn bho Thasglann Eòrpach Luchag Luch. Chaidh a h-uile beathach deuchainneach a thar-chuir a-steach don t-srann C57BL / 6J airson còrr air ginealaichean 10. Chaidh luchagan a cheangal ri luchagan C57BL / 6J WT agus bha iad a ’fuireach ann an cearcall dorcha àbhaisteach 12-h / 12-h agus a’ faighinn biadh agus uisge ad libitum. Cre+ agus Cre- chaidh luchagan bho na h-aon litrichean (3 - 6 mo aois) a chleachdadh airson nan deuchainnean. Chaidh a h-uile deuchainn beathach aontachadh le comataidh bheathaichean Institiùd Bith-eòlas Osaka fo stiùireadh deuchainnean bheathaichean.

Deuchainnean giùlain.

Rè a h-uile deuchainn giùlan, bha luchagan ceangailte le snàithleach optigeach agus leig iad gluasad timcheall an uidheamachd gu lèir. Chaidh gluasad luchainn a sgrùdadh gus am b ’urrainn dhaibh gluasad timcheall gun chnapan-starra sam bith eadhon nuair a bha iad ceangailte le snàithleach optigeach air an ceann. Chaidh suidheachadh luchag a lorg le camara bhidio crochte os cionn an uidheamachd giùlain agus air a sgrùdadh le prògram a chaidh a dhèanamh gu sònraichte a ’cleachdadh bathar-bog Labview.

Deuchainn roghainn seòmar dorcha.

Bha an uidheamachd giùlain a chaidh a dhèanamh gu sònraichte air a chleachdadh san deuchainn air a dhèanamh suas de sheòmar dorcha (15 × 9.5 cm) agus àite fosgailte soilleir (15 × 11 cm). Bha ballachan, làr agus mullach anns an t-seòmar dorcha, a bha uile air an dath ann an dubh agus aig an robh slighe a-steach (4.5 cm de dh'fhaid) chun àite soilleir fosgailte. Bha an t-àite soilleir fosgailte air a chumadh mar ellipse agus bha làr clèithe meatailt agus ballachan soilleir gun mhullach. Ron deuchainn, bha na luchagan uile air an cleachdadh airson 10 min anns an inneal. Bha trì seiseanan san deuchainn: tràth anns an leth-latha den latha 1 (pretest: 5 min), bha cead aig luchagan an uidheamachd gu lèir a sgrùdadh. Bho dheireadh an latha 1 gu latha 4 (fionnarachadh: 35 min gu h-iomlan), fhuair luchagan brosnachadh optigeach nuair a dh ’fhuirich iad san t-seòmar dhorcha. Air latha 5, chaidh roghainn an t-seòmair dhorcha a dhearbhadh gun bhrosnachadh optigeach (posttest: 5 min; Fig. S1E).

Deuchainn CPA trì-seòmar.

Bha an t-inneal roghainn àite / CPA le trì seòmraichean sònraichte air a dhèanamh gu sònraichte air a dhèanamh suas de dhà sheòmar (10 × 17 cm) agus trannsa ceangail. Bha trì seiseanan san deuchainn. Latha 1 (pretest: 15 min): Bha cead aig luchagan an uidheamachd gu lèir a sgrùdadh gu saor. Chaidh luchagan a dh ’fhuirich 1.5 amannan nas fhaide ann an aon seòmar na anns an fhear eile a thoirmeasg bhon deuchainn. Làithean 2 agus 3 (fionnarachadh: 15 min gach): Fhuair luchagan brosnachadh optigeach nuair a dh ’fhuirich iad san t-seòmar le paidhir aotrom. Chaidh taghadh an t-seòmair aotrom a chothromachadh. Latha 4 (posttest: 15 min): Chaidh an deuchainn a dhèanamh fo na h-aon chumhachan ris a ’cho-fharpais (Fig. S6A).

Anns an t-seisean fuarachaidh, chaidh stad a chuir air a ’bhrosnachadh optigeach airson 30 s nuair a dh’ fhuirich na luchagan gu leantainneach thairis air 30 s san t-seòmar dhorcha no san t-seòmar le solas gus cus teasachadh a sheachnadh. Chaidh smachd a chumail air cumhachd laser a bhith timcheall air 5 mW aig bàrr an t-snàithleach optigeach anns a h-uile deuchainn giùlan.

Ann an Vivo Fast-Scan Cyclic Voltammetry.

Chaidh deuchainnean FSCV a dhèanamh le bhith a ’cleachdadh an dòigh a chaidh a mhìneachadh ann an sgrùdaidhean roimhe (35-37). Chaidh luchagan anesthetized le measgachadh ketamine / xylazine mar a chaidh a mhìneachadh ann an Stuthan agus Dòighean SI agus air a chur ann am frèam stereotaxic. Chaidh snàithleach optigeach a chleachdadh airson a bhith a ’brosnachadh Arch-expressing DA neurons faisg air an electrod brosnachail. Chaidh an optrode brosnachail a chuir an uairsin anns an VTA (bho bregma: anterior-posterior, −3.2 mm; lateral, 0.5 mm; agus dorsal-ventral, 3.5 mm) agus chaidh a leigeil sìos aig amannan 0.25-mm. Chaidh microelectrode carbon-fiber (300 µm de dh'fhaid) airson clàradh bholtammetric a thoirt a-steach don NAc (bho bregma: anterior-posterior, 1.0 mm; lateral, 1.0 mm; agus dorsal-ventral, 3.5 mm). Chaidh tomhasan bholtammetric a dhèanamh a h-uile 100 ms le bhith a ’cur cruth-tonn triantan (−0.4 V gu + 1.3 V gu −0.4 V an aghaidh Ag / AgCl, aig 400 V / s) ris a’ mhicrolectrode carbon-fiber. Chaidh potentiostat a dhèanamh gu sònraichte airson iomallachd cruth-tonn agus leudachadh gnàthach. Chaidh sgaoileadh DA a dhùsgadh le brosnachadh dealain de neurons DA le bhith a ’cleachdadh brosnachadh 24-pulse (100 µA, fad 5 ms, 30 Hz). Chaidh brosnachadh optigeach de neurons DA (532 nm, ∼5 mW cumhachd aig a ’mhullach fiber) a chuir an sàs airson 10 s a’ tòiseachadh 5 s mus do thòisich brosnachadh dealain. Chaidh microelectrodes carbon-fiber a calibachadh ann am fuasgladh le dùmhlachdan aithnichte de DA (0.2 µM, 0.5 µM, agus 1.0 µM). Chaidh a h-uile dàta voltammetry a sgrùdadh le prògraman a chaidh a dhèanamh gu sònraichte a ’cleachdadh bathar-bog Labview agus Matlab. Chaidh lughdachadh ann an ìrean DA le brosnachadh optigeach a rèiteachadh le mion-sgrùdadh prìomh phàirtean, le bhith a ’cleachdadh nan teamplan DA teamplaid a fhuaireadh bho bhrosnachaidhean VTA dealain gus comharran dopamine a sgaradh (35, 36).

Anailis Staitistigeil.

Chaidh mion-sgrùdadh staitistigeil a dhèanamh le bhith a ’cleachdadh GraphPad PRISM 5.0 (Bathar-bog GraphPad). Chaidh dàta a sgrùdadh le ceumannan a-rithist ANOVA (Figsichean. 1B, , 4D,4D, agus Fig. S6 D agus E) no ANOVA aon-shligheach (Figsichean. 1C, , 3D,3D, 4 C agus E, agus Figs. S4 K-M, S6F, agus S7A), agus chaidh mion-sgrùdaidhean post hoc a dhèanamh le bhith a ’cleachdadh deuchainn Bonferroni. Bha a h-uile comharra / colbh agus bàr a ’riochdachadh a’ chuibheasachd agus ± SEM, fa leth.

Thathas a ’toirt cunntas mionaideach air modhan deuchainneach eile a’ toirt a-steach ullachadh agus in-stealladh bhìoras, clàradh electrophysiologic, agus mion-sgrùdadh immunohistochemical agus mRNA Stuthan agus Dòighean SI.

Material a bharrachd

Fiosrachadh Taice:  

Acknowledgments

Tha sinn a ’toirt taing do E. Boyden airson an Arch construct, R. Matsui airson comhairle theicnigeach ann an cinneasachadh agus glanadh lentivirus, agus Y. Hayashi airson comhairle theicnigeach ann am prògramadh mion-sgrùdadh dàta. Fhuair an obair seo taic bho Thabhartasan Cuideachaidh Rannsachaidh 22220005 (gu SN), 23120011 (gu SY agus SN), 24700339 (gu TD), agus 25871080 (gu SY) bho Mhinistrealachd an Fhoghlaim, a ’Chultair, an Spòrs, an Saidheans agus Teicneòlas Iapan agus tabhartas bho Takeda Science Foundation (gu SN).

Footnotes

 

Chan eil na h-ùghdaran a 'nochdadh strì eadar com-pàirtean

Tha an artaigil seo a ’toirt seachad fiosrachadh taice air-loidhne aig www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1404323111/-/DCSupplemental.

iomraidhean

1. RA RA. Dopamine, ionnsachadh agus togradh. Nat Rev Neurosci. 2004; 5 (6): 483 – 494. [Sgaoileadh]
2. Schultz W. Bidh iomadh dopamine ag obair aig cùrsaichean eadar-dhealaichte. Annu Rev Neurosci. 2007; 30: 259 – 288. [Sgaoileadh]
3. Bromberg-Martin ES, Matsumoto M, Hikosaka O. Dopamine ann an smachd brosnachail: Duaisean, aversive, agus rabhadh. Neuron. 2010; 68 (5): 815 - 834. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
4. Schultz W, Dayan P, Montague PR. Fo-strat neural de ro-innse agus duais. Saidheans. 1997; 275 (5306): 1593 - 1599. [Sgaoileadh]
5. Schultz W, Romo R. Freagairtean neurons dopamine nigrostriatal gu brosnachadh somatosensory àrd-dian anns a ’mhuncaidh anesthetized. J Neurophysiol. 1987; 57 (1): 201 - 217. [Sgaoileadh]
6. MA Ungless, Magill PJ, Bolam JP. Bacadh aon-ghuthach de neurons dopamine anns an sgìre teasach ventral le brosnachaidhean aversive. Saidheans. 2004; 303 (5666): 2040 - 2042. [Sgaoileadh]
7. Brischoux F, Chakraborty S, Brierley DI, Ungless MA. Excitation mean air mhean de neurons dopamine ann an VTA ventral le brosnachaidhean gabhaltach. Proc Natl Acad Sci USA. 2009; 106 (12): 4894 - 4899. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
8. Matsumoto M, Hikosaka O. Tha dà sheòrsa de dopamine neuron gu sònraichte a ’toirt seachad comharran brosnachaidh adhartach is àicheil. Nàdar. 2009; 459 (7248): 837 - 841. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
9. Cohen JY, Haesler S, Vong L, Lowell BB, Uchida N. Comharran sònraichte Neuron airson duais agus peanas anns an sgìre teasach ventral. Nàdar. 2012; 482 (7383): 85 - 88. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
10. Tan KR, et al. Tha neurons GABA den dràibhidh VTA a ’suidheachadh aimhreit àite. Neuron. 2012; 73 (6): 1173 - 1183. [Sgaoileadh]
11. van Zessen R, Phillips JL, Budygin EA, Stuber GD. Tha gnìomhachadh neurons VTA GABA a ’cur dragh air caitheamh duais. Neuron. 2012; 73 (6): 1184 - 1194. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
12. Packard MG, Knowlton BJ. Gnìomhan ionnsachaidh agus cuimhne an ganglia basal. Annu Rev Neurosci. 2002; 25: 563 - 593. [Sgaoileadh]
13. Surmeier DJ, Song WJ, Yan Z. Cur an cèill co-òrdanaichte de gabhadairean dopamine ann an neurons spìosrach meadhanach neostriatal. J Neurosci. 1996; 16 (20): 6579 - 6591. [Sgaoileadh]
14. Surmeier DJ, Plotkin J, Shen W. Dopamine agus plastachd synaptic ann an cuairtean striatal dorsal a ’cumail smachd air taghadh gnìomh. Curr Opin Neurobiol. 2009; 19 (6): 621 - 628. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
15. Hikida T, Kimura K, Wada N, Funabiki K, Nakanishi S. Dreuchdan sònraichte sgaoileadh synaptic ann an slighean dìreach agus neo-dhìreach striatal gus duais agus giùlan casgach. Neuron. 2010; 66 (6): 896 - 907. [Sgaoileadh]
16. Hikida T, et al. Mion-atharrachadh slighe-sònraichte de niuclas accumbens mar dhuais agus giùlan casgach tro gabhadairean sgaoilidh roghnach. Proc Natl Acad Sci USA. 2013; 110 (1): 342 - 347. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
17. Chow BY, et al. Sàthadh neural optigeach àrd-choileanadh a tha cuimsichte gu ginteil le pumpaichean proton air a stiùireadh le solas. Nàdar. 2010; 463 (7277): 98 - 102. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
18. Lindeberg J, et al. Cur an cèill transgenic de Cre recombinase bhon locus tyrosine hydroxylase. Genesis. 2004; 40 (2): 67 - 73. [Sgaoileadh]
19. Bourin M, Hascoët M. Deuchainn bogsa aotrom / dorcha na luchaige. Eur J Pharmacol. 2003; 463 (1 - 3): 55 - 65. [Sgaoileadh]
20. Roitman MF, Wheeler RA, Wightman RM, Carelli RM. Bidh freagairtean ceimigeach fìor-ùine anns an niuclas accumbens ag eadar-dhealachadh brosnachaidhean buannachdail agus aversive. Nat Neurosci. 2008; 11 (12): 1376 - 1377. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
21. LeDoux JE. Cuairtean tòcail san eanchainn. Annu Rev Neurosci. 2000; 23: 155 - 184. [Sgaoileadh]
22. Gabhadairean Maeno H. Dopamine ann an niuclas caudate canine. Biochem Mol Cell. 1982; 43 (2): 65 - 80. [Sgaoileadh]
23. Richfield EK, Penney JB, Young AB. Coimeasan stàite anatomical agus dàimh eadar gabhadairean dopamine D1 agus D2 anns an t-siostam nearbhach meadhanach. Neo-eòlas. 1989; 30 (3): 767 - 777. [Sgaoileadh]
24. Hikosaka O. Innealan basal ganglia de ghluasad sùla le duais. Ann NY Acad Sci. 2007; 1104: 229 - 249. [Sgaoileadh]
25. Surmeier DJ, Ding J, Day M, Wang Z, Shen W. D1 agus D2 dopamine-receptor modaladh de chomharran glutamatergic striatal ann an neurons spìosrach meadhanach striatal. A ’gluasad Neurosci. 2007; 30 (5): 228 - 235. [Sgaoileadh]
26. Frank MJ. Mion-atharrachadh dopamine dinamach anns an ganglia basal: Cunntas neurocomputational de dh ’easbhaidhean inntinneil ann am Parkinsonism le cungaidh agus neo-leigheas. J Cogn Neurosci. 2005; 17 (1): 51 - 72. [Sgaoileadh]
27. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC. Dreuchdan sònraichte airson neurons striatal slighe dìreach agus neo-dhìreach ann an daingneachadh. Nat Neurosci. 2012; 15 (6): 816 - 818. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
28. Fadok JP, Dickerson TM, Palmiter RD. Tha dopamine riatanach airson fionnarachadh eagal a tha an urra ri cue. J Neurosci. 2009; 29 (36): 11089 - 11097. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
29. Zweifel LS, et al. Tha gnìomhachadh neurons dopamine deatamach airson suidheachadh dìonach agus casg iomagain san fharsaingeachd. Nat Neurosci. 2011; 14 (5): 620 - 626. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
30. Lammel S, et al. Smachd a-steach gu sònraichte air duais agus strì anns an raon teasach ventral. Nàdar. 2012; 491 (7423): 212 - 217. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
31. Mantz J, Thierry AM, Glowinski J. Buaidh pinch earball gabhaltach air ìre sgaoilidh neurons dopamine mesocortical agus mesolimbic: Gnìomhachadh roghnach den t-siostam mesocortical. Brain Res. 1989; 476 (2): 377 - 381. [Sgaoileadh]
32. Tidey JW, Miczek KA. Bidh cuideam call sòisealta gu roghnach ag atharrachadh sgaoileadh dopamine mesocorticolimbic: Sgrùdadh in vivo microdialysis. Brain Res. 1996; 721 (1 - 2): 140 - 149. [Sgaoileadh]
33. Slighean Pezze MA, Feldon J. Mesolimbic dopaminergic ann an suidheachadh eagal. Prog Neurobiol. 2004; 74 (5): 301 - 320. [Sgaoileadh]
34. de la Mora BP, Gallegos-Cari A, Arizmendi-García Y, Marcellino D, Fuxe K. Dleastanas innealan gabhadair dopamine ann am modaladh amygdaloid air eagal agus iomagain: Mion-sgrùdadh structarail agus gnìomh. Prog Neurobiol. 2010; 90 (2): 198 - 216. [Sgaoileadh]
35. Heien ML, Johnson MA, Wightman RM. A ’fuasgladh neurotransmitters air an lorg le voltammetry cearcallach luath-scan. Ceimigeal anal. 2004; 76 (19): 5697 - 5704. [Sgaoileadh]
36. Heien ML, et al. Tomhas fìor-ùine de chaochlaidhean dopamine às deidh cocaine san eanchainn de bhith a ’giùlan radain. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102 (29): 10023 - 10028. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
37. Natori S, et al. Sgaoileadh dopamine co-cheangailte ri duais subsecond ann an striatum dorsal na luchaige. Res Neurosci. 2009; 63 (4): 267 - 272. [Sgaoileadh]