Meadhanach Àrdachadh Meudachadh Saill Fèin-rianachd Sucrose ann an Rats Òga (2013)

Dianne P. Figlewicz,^1,2 Jennifer L. Jay,² Molly A. Acheson, Irwin J. Magrisso,⁴ Constance H. West,¹ Aryana Zavosh,² Stephen C. Benoit,³ agus Jon F. Davis³

Tha sinn air aithris roimhe seo gu bheil daithead meadhanach àrd geir a ’meudachadh togradh airson sucrose ann am radain inbheach. Anns an sgrùdadh seo, rinn sinn deuchainn air na buaidhean brosnachail, neurochemical, agus metabolic den daithead àrd geir ann am radain fhireann a ’gluasad tron ​​chaitheachas, rè seachdainean 5-8. Chunnaic sinn gun do mheudaich an daithead àrd geir freagairt brosnachail airson sucrose, a bha neo-eisimeileach an dàrna cuid bho atharrachaidhean metabolach no atharrachaidhean ann am metabolites catecholamine neurotransmitter anns na nucleus accumbens. Ach, chaidh ìrean AGRP mRNA anns an hypothalamus àrdachadh gu mòr. Sheall sinn gu bheil barrachd gnìomhachd de neurons AGRP co-cheangailte ri giùlan brosnachail, agus gun tug rianachd exogenous (an treas cerebroventricular) AGRP barrachd brosnachaidh airson sucrose. Tha na beachdan sin a ’moladh gum faodadh barrachd faireachdainn agus gnìomhachd AGRP anns an hypothalamus medial a bhith mar bhunait ris an fhreagairt nas motha airson sucrose air adhbhrachadh le eadar-theachd daithead àrd geir. Mu dheireadh, rinn sinn coimeas eadar brosnachadh airson sucrose ann am pubertal vs radain inbheach agus chunnaic sinn barrachd brosnachaidh airson sucrose anns na radain pubertal, a tha co-chòrdail ri aithisgean roimhe gu bheil barrachd roghainn aig beathaichean òga agus daoine airson blas milis, an coimeas ri inbhich. Còmhla, tha na sgrùdaidhean againn a ’moladh gu bheil pàirt làidir aig daithead cùil ann am brosnachadh airson blas milis ann am beathaichean òigearan.

Cuspairean

B ’e na cuspairean radain fireann Albino bho Simonsen (Gilroy, CA). Chaidh radain a chumail air chow (Laboratory Rodent Diet 5001, LabDiet) no daithead meadhanach àrd geir (31.8%; Research Diets Inc) ad libitum. Tha na diets air am maidseadh airson susbaint iomlan gualaisg (58% kcal vs 51% kcal airson geir ìosal vs geir àrd, fa leth). Tha siùcar an-asgaidh 6.23 gm% anns a ’chow geir ìosal agus tha 29 gm% sucrose anns an daithead àrd geir. Chaidh an cumail suas air cearcall dorcha 12: 12 h le solais air adhart aig 6 AM. Mura h-eilear ag innse a chaochladh, chaidh radain a thoirt a-steach aig 3 seachdainean a dh ’aois, às deidh dhaibh a dhol à bith sa bhad, agus bha iad air an cumail suas airson cliù gu 5 seachdainean a dh’ aois. Aig an aois seo, thòisich trèanadh agus deuchainn daithead agus / no giùlan. Tha protocolaidhean sònraichte air am mìneachadh gu mionaideach gu h-ìosal, agus air an geàrr-chunntas ann an Clàr 1. Leis gu bheil radain fhireann a ’dol tron ​​chaithreachas aig an 6^th-7^th seachdain a dh ’aois, chaidh àm nan sgrùdaidhean a dhealbhadh gus radain a sgrùdadh fhad‘ s a bha iad a ’dol thairis air an ìre leasachaidh seo. Bha a h-uile modh a chaidh a dhèanamh air na radain a ’leantainn stiùiridhean NIH airson cùram bheathaichean, agus chaidh an aontachadh le Fo-chomataidh Cùram is Cleachdadh Bheathaichean na Comataidh Rannsachaidh is Leasachaidh aig Siostam Cùram Slàinte Fuaim VA Puget.

  

Clàr 1

Pròtacalan deuchainneach

Fèin-rianachd sucrose

Pròtacal Coitcheann. Bha modhan stèidhichte air ar modh foillsichte ((Figlewicz et al., 2008; Figlewicz et al., 2006). Chaidh a h-uile modh trèanaidh is deuchainn a dhèanamh eadar 0700 agus 1200 hr. Bha an deuchainn a ’toirt a-steach ìrean 2-3: autoshaping agus trèanadh co-mheas stèidhichte (FR); lannsaireachd agus faighinn seachad air ann an co-thursan sònraichte (faic Clàr 1); agus trèanadh co-mheasan adhartach (PR) a ’cleachdadh algorithm PR Richardson agus Roberts (Richardson & Roberts, 1996). Feumaidh an algorithm PR 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, 575, XNUM, msaa) bidh luamhan a ’brùthadh airson liubhairt dhuaisean soirbheachail taobh a-staigh seisean, agus tha e na dheuchainn chruaidh airson brosnachadh agus duais (759). Chaidh radain a thrèanadh gus fèin-rianachd 999% sucrose (duais 999 ml) a lìbhrigeadh ann an gabhadan drop leacht. Bha dà luamhan anns na bogsaichean obrachaidh, fo smachd siostam Med Associates (Georgia, VT), ach cha do chuir ach aon luamhan (luamhan gnìomhach, a tharraing air ais) am pumpa infusion. Chaidh pàipearan-naidheachd air an luamhan eile (luamhan neo-ghnìomhach, pàipearachd) a chlàradh cuideachd. Chaidh am fuasgladh sucrose a lìbhrigeadh ann an gabhadan leaghaidh airson caitheamh beòil (Med Associates). Chaidh trèanadh tùsail a dhèanamh tro sheiseanan aon-h airson làithean 27 fo chlàr ath-neartachaidh leantainneach (FR5: chaidh gach preas luamhan a dhaingneachadh), leis an ìre as àirde de dhuaisean sucrose 0.5 air an lìbhrigeadh gach seisean. Thòisich gach seisean le cuir a-steach an luamhan gnìomhach agus soillseachadh sealladh-taighe geal a bha a ’fuireach airson an t-seisein gu lèir. Bha tòna 10-s (1 Hz, 50 dB os cionn a ’chùl) + solas (solas geal 5 W os cionn an luamhan gnìomhach) cue compound air leth an cois gach lìbhrigeadh duais, air a leantainn le ùine 2900-sec a-mach às deidh gach lìbhrigeadh sucrose. Chaidh trèanadh PR a dhèanamh airson 20 h / latha aig a ’char as àirde airson deich latha. Thàinig seiseanan làitheil gu crìch an dèidh 7.5 min gun phreas luamhan gnìomhach a ’freagairt, agus aig an àm sin chaidh solas an taighe a chuir dheth agus chaidh an luamhan gnìomhach a tharraing air ais.

Buaidh AGRP air fèin-rianachd sucrose

Leis gu robh na toraidhean againn a ’sealltainn àrdachadh ann an abairt AGRP mRNA ann am radain pubertal a’ biathadh an daithead àrd geir, bha sinn airson dearbhadh gum faodadh AGRP fèin-rianachd sucrose a mheudachadh. Chaidh seann radain 5-wk a bhiadhadh le chow a thoirt tro thrèanadh FR, an uairsin fhuair iad cannulas a-steach don treas ventricle cerebral (ICV). Às deidh seachdain de dh ’fhaighinn air ais, dearbhadh air àite le deuchainn freagairt òil angiotensin II (faic Figlewicz et al., [2006]), agus aon seisean de ath-thrèanadh FR, chaidh radain a thòiseachadh air paradigm fèin-rianachd PR. Às deidh Latha PR 1, chaidh radain a shònrachadh do aon de dhà bhuidheann mar sin a ’ciallachadh nach robh coileanadh PR Day 1 eadar-dhealaichte eadar an dà bhuidheann (carbad CSF fuadain, aCSF; no AGRP, 2 μl de 0.01 nmol). Fhuair iad in-stealladh aCSF (n = 8) no AGRP (n = 7) air làithean PR 2, 5, agus 8. Chaidh tomhas iomlan de bhiadh làitheil a thomhas aig àm trèanaidh PR.

Buaidh aois air fèin-rianachd sucrose

Rinn sinn coimeas eadar giùlan fèin-rianachd eadar radain pubertal agus inbhich òga, biadhadh chow no daithead geir 31.8%. Bha dà sheachdain aig radain a bhith a ’moladh an VAPSHCS vivarium (3 - 5wk no 8 - 10 wk). Fhuair iad an uairsin an daithead rè na h-ùine deuchainn / trèanaidh gu lèir (4 wk). Mar sin, mar a rinneadh sa chiad deuchainn, chaidh radain pubertal a sgrùdadh aig aois 5-8 wk. Chaidh inbhich òga a sgrùdadh aig aois 10-13 wk.

Co-dhùnadh cumadh bodhaig

Chaidh cothlamadh a ’chuirp a thomhas le bhith a’ cleachdadh speactroscopaidh meudachd magnetach (QMR [Nixon et al., 2010]) gus susbaint uisge bodhaig radain fa leth a dhearbhadh, às a bheil geir bodhaig càirdeach air a thomhas. Chaidh na beathaichean a chur ann an luchd-gleidhidh siolandair gun anesthetized, agus an uairsin tha na luchd-gleidhidh air an cuir a-steach don inneal QMR airson scan mionaid 2, a bhios a ’dèanamh tomhas trì-fhillte. Tha dàta air a shàbhaladh gu coimpiutair aonaichte (EchoMRI, Echo Medical Systems, Houston, TX) airson obrachadh a-mach sa bhad de dh ’uisge làn-bodhaig, geir, agus tomad lean.

Deuchainn fulangas glucose intravenous (IVGTT)

Chaidh IVGTTan mothachail a dhèanamh ann am radain le cannulas IV a chaidh an cuir an sàs gu teann, a chaidh an ceangal thar oidhche ron sgrùdadh, a ’cleachdadh modh-obrach stèidhichte air Frangioudakis, Gyte, Loxham, & Poucher (2008). Chaidh cannulas dà-thaobhach intravenous a chuir an sàs dà sheachdain ron sgrùdadh, a rèir ar modh-obrach stèidhichte (Figlewicz et al., 2009). Chaidh sampaill bun-loidhne a tharraing aig t-10 min (0.5 ml airson insulin agus glucose a dhearbhadh, aig a h-uile puing ùine) agus t0 min. Fhuair radain dòrtadh de 1 gm glucose / 2ml / kg thairis air diogan 15-20 agus an uairsin 0.5 ml de shalainn. Chaidh sampallan fala a thoirt aig 5, 15, 30, 60, 90, agus 120 min. Air sgàth catheter a phlugadh tron ​​phròiseas (mar sin, neo-chomas sampallan fala fhaighinn), is e na h-ìrean deireannach airson an dàta bun-loidhne / IVGTT a tha air an taisbeanadh 7-8 airson radain a tha air am biathadh le chow agus 8 airson radain a tha a ’biadhadh daithead geir 31.8% (Clàr 3). Chaidh insulin plasma a dhearbhadh le bhith a ’cleachdadh innealan RIA insulin Linco rat (# RI-13K agus SRI-13K, Linco) agus chaidh glucose plasma a dhearbhadh air Mion-sgrùdaire Glucose YSI). Chaidh farsaingeachd fon lùb (AUC) airson freagairt bhon bhun-loidhne a thomhas aig 5 min agus 120 min. Chaidh clàr-amais HOMA a thomhas mar fastadh (glucose [mM] × insulinm [U / L]) / 22.5 agus chaidh a thomhas a ’cleachdadh sampaill fasting terminal air an tomhas airson insulin agus glucose.

  

Clàr 3

Paramadairean metabolach¹

Fastadh paramadairean metabolach

Chaidh radain bho Experiment 1 a cheangal gu sgiobalta thar oidhche ro euthanasia, beagan làithean às deidh an IVGTT a chrìochnachadh. Chaidh radain a thoirt a-steach gu domhainn le inhaladh isoflurane agus gan cuir às. Chaidh brains a thoirt air falbh gu sgiobalta agus a reodhadh ann an leaghan nitrogen airson tomhas de mRNA peptide hypothalamic agus catecholamines niuclas accumbens. Chaidh plasma crìochnachaidh no serum a chleachdadh airson insulin luath, glucose, leptin, agus triglycerides a thomhas. Airson triglycerides, chaidh Point GP Triglyceride GPO Kit # T7531-400 (Fisher # 23-666-418) agus inbhean KIT # 7531-STD (Fisher # 23-666-422) a chleachdadh, agus chaidh 3 μl de serum a dhearbhadh ann an dùblachadh. Chaidh leptin plasma a thomhas le Kit RIA Millipore Linco # RL 83K.

Dòighean Catecholamine HPLC [Davis et al., 2008]

Chaidh radain a thoirt a-mach le anesthesia isoflurane, agus chaidh brains a thoirt air falbh gu luath, a reothadh agus a stòradh aig −80 ° C. Chaidh meanbh-punches dà-thaobhach de na nucleus accumbens (NAcc) a sgaradh bho gach beathach. Ged a chaidh cùram mòr a ghabhail gus truailleadh le roinnean eanchainn faisg air làimh a lughdachadh, air sgàth nàdar agus meud gach meanbh-punch cha do leig an dòigh-obrach againn eadar-dhealachadh a dhèanamh air fo-roinnean (ie cridhe NAcc vs slige) taobh a-staigh an NAcc. Airson mion-sgrùdadh cromatagrafaidheachd lionn àrd-choileanadh (HPLC), chaidh fuasgladh antioxidant (0.4 N perchlorate, 1.343 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) agus 0.526 mM sodium metabisulfite a chur ris na samples agus an uairsin homogenization a ’cleachdadh homogenizer clò ultrasonic (Biologics; Gainesville, VA ). Chaidh cuibhreann beag den homogenate clò a sgaoileadh ann an 2% sodium dodecyl sulfate (SDS) (w / v) airson dearbhadh pròtain (Kit Reagent Protein Pierce BCA; Rockford, IL). Chaidh an crochadh a bha air fhàgail a shnìomh aig 14,000 g airson 20 min ann an centrifuge fuarachaidh. Chaidh an t-àrd-neach a ghleidheadh ​​airson HPLC.

Chaidh samples a sgaradh air colbh Microsorb MV C-18 (5 Am, 4.6_250 mm, Varian; Walnut Creek, CA) agus chaidh an sgrùdadh aig an aon àm airson DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) agus searbhag homovanillic (HVA), a tha le chèile nan comharran de dh ’ìsleachadh dopamine, 5-HT agus 5-HIAA. Chaidh coimeasgaidhean a lorg le bhith a ’cleachdadh lorgaire sreath coulometric 12-channel (CoulArray 5200, ESA; Chelmsford, MA) ceangailte ri Siostam Lìbhrigidh Fuasglaidh Waters 2695 (Uisgeachan; Milford, MA) fo na cumhaichean a leanas: ìre sruth de 1 ml / min; comasan lorg de 50, 175, 350, 400 agus 525 mV, agus; comas sgrìobadh de 650 mV. Bha an ìre gluasadach a ’toirt a-steach fuasgladh 10% methanol ann an grùdaireachd H.₂O anns a bheil 21 g / l (0.1 M) searbhag citrach, 10.65g / l (0.075 M) Na2HPO4, 176 mg / l (0.8 M) aigéad heptanesulfonic agus 36 mg / l (0.097 mM) EDTA aig pH de 4.1. Chaidh sampaill neo-aithnichte a thomhas a rèir lùb àbhaisteach 6-point le R aig a ’char as lugha² de 0.97. Bha sampaill smachd càileachd air an cuir còmhla le gach ruith gus dèanamh cinnteach gu robh calibration HPLC.

Peptidean Orexigenic mRNA qPCR

Thomhais sinn faireachdainn de pheptidean hypothalamic a bhrosnaicheas biathadh agus a tha air a bhith an sàs ann an giùlan brosnachaidh agus duais (Figlewicz & Sipols, 2010): neuropeptide Y (NPY [ Hahn, Breininger, Baskin, & Schwartz, 1998; Jewett et al., 1995; Kelley, Nannini, Bratt, & Hodge, 2001]); peptide co-cheangailte ri agouti (AGRP [Aponte, Atasoy, & Sternson, 2011; Barnes, Argyropoulos, & Bray, 2010; Broberger et al., 1998; Hagan et al., 2000; Hahn, Breininger, Baskin, & Schwartz, 1998; Kaushik et al., 2011; Krashes et al., 2011; Rossi et al., 1998; Tracy et al., 2008]); agus orexin (Cason et al., 2010; Choi, Davis, Fitzgerald, & Benoit, 2010). Chaidh radain a thoirt a-mach le anesthesia isoflurane, agus chaidh brains a thoirt air falbh, a reothadh agus a stòradh aig −80 ° C gus an giollachd. Chaidh an hypothalamus medial agus lateral a mhicrodissected mar aon bhloca a ’cleachdadh plèana reòta AHP-1200CPV (Thermoelectric Cooling America, Chicago, Il) a chùm teòthachd cunbhalach de 12 ° C tron ​​phròiseas sgaradh. Chaidh RNA iomlan bho stuth microdissected a sgaradh le reagent Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA) agus air a ghlanadh le bhith a ’cleachdadh an RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh. Chaidh an RNA iomlan a làimhseachadh gus truailleadh DNA genomic sam bith a dh ’fhaodadh a thoirt air falbh a’ cleachdadh DNase an-asgaidh RNase (Promega, Madison, WI), agus chaidh a thomhas le bhith a ’cleachdadh speacthothotometer NanoVue (GE Healthcare, Cambridge, UK). Chaidh càileachd RNA a dhearbhadh le electrophoresis gel agarose àbhaisteach. Chaidh DNA co-phàirteach (cDNA) an uairsin ath-sgrìobhadh (RT) bho 1-2 μg de RNA iomlan le measgachadh de hexamers air thuaiream agus oligo DT priming a ’cleachdadh an Kit Synthesis iDNA cDNA (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA). Chaidh ath-bheachdan neo-retrotranscribed (no RT) ullachadh cuideachd bho gach sampall gus smachd fhaighinn airson truailleadh DNA genomic a dh’fhaodadh a bhith ann. Chaidh na smachdan cDNA agus no-RT a lagachadh, agus chaidh 5-10 ng de teamplaid cDNA bho gach sampall a chleachdadh gus abairt mRNA de ghinean taghte a thomhas le PCR cainneachdail fìor-ùine a ’cleachdadh Siostam Dearbhaidh PCR Fìor-ùine MyIQ (Bio-Rad, Hercules , CA). Chaidh tomhasan teann airson gach sampall a ruith air truinnsearan tobair àbhaisteach iCycler 96, còmhla ri smachdan teamplaid (NTC) gus lorg fhaighinn air tar-thruailleadh a dh’fhaodadh a bhith ann, ann an tomhasan ath-bhualadh 20 μl air a dhèanamh suas de 10 μl 2 × iQ Sybr Green Supermix (Bio- Rad, Hercules, CA), 2 μl de 0.2-0.5 μM gach primer, uisge 3 μl DEPC, agus 5 μl de theamplaid. Bha a h-uile ath-bhualadh qPCR a ’toirt a-steach sgrùdadh lùb leaghaidh gus dèanamh cinnteach à sònrachas comharra. Chaidh abairt reusanta airson gach gine de dh ’ùidh a thomhas le bhith air a tharraing a-mach gu lùb àbhaisteach a chaidh a ruith leotha fhèin air gach truinnsear agus a thàinig bho chaolaidhean sreathach de shampall cruinnichte de cDNA iomraidh, agus air a dhèanamh àbhaisteach gu abairt dàimheach de ghinean iomraidh (fosphoprotein searbhagach ribosomal 36B4 airson abairt gine ann an clò hypothalamic, agus pròtain ribosomal mitochondrial L32 airson a chur an cèill anns na nucleus accumbens). Chaidh na sreathan primer a leanas (IDT, San Diego, CA) a chleachdadh gus radan prepro-orexin, NPY, agus AGRP a mheudachadh: Prepro-orexin, Air adhart: 5’-TTCCTTCTACAAAGGTTCCCT-3 ′, 5’-GCAACAGTTCGTAGAGACGGCAG-3 ′; NPY: Air adhart, 5- TACTCCGCTCTGCGACACTACATC-3 ′; Reverse: 5’-CACATGGAAGGGTCTTCAAGCC-3 ′; AGRP, Air adhart: 5’-GCAGAAGGCAGAAGCTTTGGC-3 ′; Reverse: 5’-CCCAAGCAGGACTCGTGCAG-3 ′.

cFos Immunocytochemistry (ICC) agus Quantitation

Chaidh fluorescence ICC a chleachdadh gus buidhnean cealla neuronal Fos-positive agus AGRP-positive a chomharrachadh anns an hypothalamus medial, a rèir ar modh-obrach stèidhichte (Figlewicz et al., 2011). Air an latha mu dheireadh (Latha PR 10), chaidh radain a chuir anns na seòmraichean fèin-rianachd aca mar as àbhaist, airson 90 min. Dìreach às deidh an t-seisean 90 mionaid mu dheireadh sin, chaidh radain a thoirt a-steach gu domhainn le inhaladh isoflurane agus air an lìomhadh le 0.9% NaCl agus an uairsin fuasgladh fuar 4% paraformaldehyde. Bha an ùine airson anesthetic agus euthanasia stèidhichte air an raon-ama aithnichte de phrìomh mhìneachadh de phròtain cFos aig tachartas 90-120 post-post. Mar sin bhiodh an abairt cFos a ’nochdadh gnìomhachd an CNS aig toiseach a’ ghnìomh giùlain, seach a bhith mar thoradh air na beathaichean a bha a ’faighinn a’ ghnìomh. Chaidh brains a thoirt air falbh agus an suidheachadh an dèidh sin ann am paraformaldehyde grunn làithean, an uairsin air an cur ann an 20% sucrose-PBS, an uairsin fuasgladh 30% sucrose-PBS. Chaidh brains a roinn air cryostat (Leica CM 3050S cryostat) airson immunohistochemistry. Chleachd sinn ar modh-obrach stèidhichte gus tomhas a dhèanamh air pròtain cFos immunoreactive ann an earrannan eanchainn (Figlewicz et al., 2011). Chaidh earrannan crùnaidh làn-eanchainn 12 μm làn-eanchainn a nighe trì tursan ann an saline bufair fosfáit (PBS, OXOID, Hampshire, Sasainn). Chaidh earrannan a nighe airson 20 min le 100% ethanol / DI uisge (50%, v / v) agus an uairsin nighe PBS, an uairsin air a bhacadh airson uair 1 aig teòthachd an t-seòmair ann am PBS anns a bheil 5% gobhar àbhaisteach no serum asail. Chaidh earrannan an uair sin a nighe iomadh uair ann am PBS agus an toirt a-steach thar oidhche aig 4 ° C ann am fuasglaidhean antibody bun-sgoile air an dèanamh suas ann am PBS. Chaidh earrannan a nighe trì tursan ann am PBS agus an uairsin a chuir a-steach anns an dorchadas aig teòthachd an t-seòmair ann am fuasgladh antibody àrd-sgoile air a dhèanamh suas ann am PBS airson uair 1. Chaidh earrannan a nighe a-rithist ann am PBS, agus chaidh an cur suas agus an còmhdach ann am meadhan sreap cruaidh Vectashield (Vector; Burlingame, CA). Chaidh ìomhaighean didseatach de earrannan fhaighinn le bhith a ’cleachdadh miocroscop flùraiseach Nikon Eclipse E-800 ceangailte ri camara glacaidh didseatach Qimaging Retiga a’ cleachdadh bathar-bog NIS Elements (Nikon).

Stèidhichte air sgrùdaidhean PCR a ’sealltainn ìrean nas àirde de AGRP mRNA, chuir sinn fòcas air roinnean hypothalamic medial, gu sònraichte an niuclas ventromedial agus an niuclas arcuate (ARC)). Chaidh earrannan 12 μm aig a bheil maids Atlas a mheasadh airson abairt agus tomhas cFos ann an roinnean agus roinnean maidsichte, stèidhichte air atlas de Paxinos agus Watson [2005]. Airson tomhas (aig meud 40 ×), chaidh roinnean a bha coltach ri atlas a thaghadh. Chaidh bathar-bog NIS Elements (Nikon) a chleachdadh gus ìomhaigh den sgìre a bha thu ag iarraidh a ghlacadh. Chaidh àite a mhìneachadh airson cunntadh agus chaidh stairsneach airson cunntadh cealla adhartach a stèidheachadh. Chaidh an aon sgìre agus cùl-raon (stairsneach) a chleachdadh airson earrannan bho na buidhnean deuchainneach fa leth, agus chaidh cunntadh bathar-bog de cheallan adhartach (tomhas) a dhèanamh san aon seisean airson a h-uile buidheann deuchainneach, gus casg a chuir air atharrachaidhean eadar seisean ann an suidheachadh cùl-fhiosrachaidh. Airson mion-sgrùdadh staitistigeil, chaidh cunntasan a thoirt bho radan fa leth a-mhàin ma bha earrannan co-fhreagarrach no iomlan tro gach sgìre rim faighinn; cha deach dàta airson raon sònraichte a thoirt bho radan ma bha riochdachadh dà-thaobhach neo-iomlan airson na sgìre sin.

A bharrachd air tomhas cFos, chaidh immunohistochemistry cainneachdail leubail dùbailte airson cFos agus AGRP a dhèanamh. Leis nach robh sinn airson dragh a chuir air coileanadh giùlan nam beathaichean, cha deach an làimhseachadh ro làimh le colchicine gus an sealladh as fheàrr fhaighinn air AGRP. Mar sin is dòcha gun robhas a ’dèanamh dìmeas air fradharc air neurons AGRP-positive. Bha an dòigh staining dùbailte airson AGRP an coimeas ris an assay de cFos-immunoreactivity leis fhèin, ach a-mhàin gun deach earrannan a bhacadh airson uair a thìde aig teòthachd an t-seòmair ann an serum asail PBS-5%. An uairsin, chaidh measgachadh de antibodies bun-fos-Ab agus AGRP a chleachdadh airson aomadh thar oidhche aig 4 ° C; mar an ceudna bha an dà antibodies àrd-sgoile san aon fhuasgladh agus air an goirteachadh airson uair a-thìde anns an dorchadas aig teòthachd an t-seòmair. Chaidh measaidhean optimization tùsail a dhèanamh gus dearbhadh a dhèanamh air lagachadh iomchaidh de na antibodies bun-sgoile. B ’e na prìomh antibodies a chaidh a chleachdadh anti-cFos coineanach (1: 500) (sc-52) agus gobhar anti-AGRP (1: 100) (18634) (Bith-theicneòlas Santa Cruz, Inc., Santa Cruz, CA). B ’e antibodies àrd-sgoile a chaidh a chleachdadh anti-coineanach asal Cy3-conjugated (Jackson Immunoresearch; West Grove, PA), agus IgG an-aghaidh gobhar Alexa fluor 488 (Molecular Probes, Eugene, OR); chaidh gach antibodies àrd-sgoile a lagachadh aig 1: 500.

Anailisean staitistigeil

Tha dàta buidhne air a thaisbeanadh mar dhòigh ± mearachd àbhaisteach den mheadhan (SEM) anns an teacsa, Clàran, agus Figearan. Tha cudromachd air a mhìneachadh mar p ≤ 0.05. Thathas a ’dèanamh coimeas staitistigeil eadar buidhnean deuchainneach, mar a tha air a thaisbeanadh fo“ Toraidhean ”a’ cleachdadh an t-oileanach as fheàrr (me, daithead, aois, no coimeas làimhseachaidh). Tha 'gnàthachadh' dàta air a mhìneachadh mar a tha e air a chleachdadh.

Buaidh daithead meadhanach àrd geir air brosnachadh peri-pubertal airson sucrose

Bha radain a ’biathadh an daithead geir 31.8% rè wks 5-8, fhad‘ s a bha iad ann an seiseanan fèin-rianachd, bha brosnachadh gu math àrd aca airson sucrose, an coimeas ri radain a bhiadhadh le chow. Mar a chithear ann an Figear 1a, cha robh eadar-dhealachadh sam bith ann an coileanadh rè an trèanadh tùsail FR (preas luamhan gnìomhach cuibheasach FRDays 1-10, 38 ± 5 vs 39 ± 2 airson daithead geir chow vs 31.8%, fa leth). Ach, nuair a chaidh na radain a thionndadh chun obair PR nas cruaidhe, bha àrdachadh mòr anns an àireamh de phreasaichean luamhan gnìomhach, agus an àireamh de dhuaisean sucrose air an toirt, ach chan ann ann am fad seisean iomlan ((Figear 1b). Cha robh buaidh sam bith aig làimhseachadh daithead cronach air an àireamh de phreasaichean neo-ghnìomhach. Nuair a chaidh radain a bhiadhadh leis an daithead àrd geir rè wks 5-8 ach an dèidh sin thill iad gu daithead chow a chaidh a thoirt tro thrèanadh FR agus PR rè seachdainean 9-12, bha gluasad ann ach cha robh eadar-dhealachadh mòr ann am preasan luamhan gnìomhach. Mar sin, tha e coltach nach eil buaidh giùlain sam bith aig daithead meadhanach àrd geir a thèid a chaitheamh rè na h-ùine peri-pubertal. Tha geàrr-chunntas air dàta paramadair PR airson na h-àireamhan sin Clàr 2. Gus tòiseachadh a ’soilleireachadh uidheamachd (ean) cur ris an àrdachadh a tha air a bhrosnachadh le daithead ann am brosnachadh sucrose, rinn sinn grunn thomhasan metabolach agus CNS.

  

Figear 1

Tha freagairt brosnachail PR airson duaisean sucrose air a mheudachadh ann am radain peripubertal a ’biadhadh daithead geir 31.8% (n = 8). 1a. Thairis air na seiseanan FR, cha robh buaidh sam bith aig daithead, ach tha buaidh an daithead follaiseach nuair a thèid radain a thionndadh gu paradigm PR. 1b. Tha dàta ann ...

  

Clàr 2

Buaidh daithead làn geir Peri-Pubertal air Co-mheas Adhartach Coileanaidh airson Sucrose

Buaidh daithead meadhanach àrd geir air paramadairean metabolach

Dìreach às deidh co-dhùnadh deuchainn giùlan, chaidh co-dhèanamh geir corp a dhearbhadh air radain aig an robh eadar-theachd daithead agus paradigm giùlain rè wks 5-8. Fhuair radain an uairsin cannulas intravenous cronach airson deuchainnean fulangas glucose IV (mothachail) (IVGTTs). Às deidh sin, chaidh plasma fasting terminal agus serum fhaighinn airson ceumannan metabolach a bharrachd. Mar a chithear ann an Clàr 3, cha robh eadar-dhealachaidhean sam bith ann an dèanamh bodhaig, cuideam bodhaig, insulin luath no ceumannan glùcois, cugallachd insulin (àireamhachadh HOMA) no freagairtean don IVGTT, eadar na radain a bhiadhadh le daithead chow agus geir àrd. Cha robh tomhas leptin fastachd crìochnachaidh agus tomhasan triglyceride eadar-dhealaichte eadar an dà bhuidheann. Mar sin, ged a thug làimhseachadh an daithead buaidh mhòr air brosnachadh airson sucrose, tha e a ’nochdadh freagairt giùlain ann am radain le tòrr geir a tha ro reamhar.

Buaidh daithead meadhanach àrd geir air CNS homeostatic agus duais neurochemistry

A bharrachd air tomhasan metabolail deireannach, chaidh brains bhon bhuidheann a fhuair an dà chuid eadar-theachd daithead agus trèanadh giùlain rè seachdainean 5-8 a thomhas airson pròifilean amine niuclas accumbens (n ​​= 4 gach buidheann daithead) no ìrean mRNA de pheptidean orexigenic hypothalamic. Mar a chithear ann an Clàr 4, cha robh buaidh mhòr sam bith aig an daithead àrd geir air dopamine, norepinephrine, no metabolites serotonin anns na nucleus accumbens, làrach meadhanach de dhuais agus gnìomhachd brosnachail (Ikemoto & Panksepp, 1996; Kelley & Berridge, 2002) anns a bheil prìomh dhreuchd riaghlaidh aig gach aon de na siostaman neurotransmitter sin. Taobh a-staigh earrannan hypothalamic, chaidh ìrean mRNA de na peptides orexigenic, NPY, AGRP, agus orexin a thomhas. Chaidh gluasad làidir ach neo-chudromach airson barrachd AGRP anns na radain le geir a choimhead sa bhuidheann seo (n = 8 airson gach daithead); mar sin rinn sinn a-rithist am paradigm trèanadh daithead / giùlan ann an cohort a bharrachd agus thomhais sinn NPY, AGRP, agus orexin mRNA anns an hypothalamus. Anns na h-àireamhan còmhla, chunnaic sinn àrdachadh mòr (p <0.05) ann an AGRP mRNA ann am radain a ’biathadh an daithead àrd geir vs smachdan chow (Figear 2), ach gun atharrachadh mòr sam bith ann an abairt NPY no orexin. Gus measadh a dhèanamh air ceanglaichean a dh ’fhaodadh a bhith ann eadar abairt AGRP agus giùlan fèin-rianachd, thomhais sinn cFos agus neurons immunopositive AGFP anns an hypothalamus mediobasal. Chaidh buidhnean de radain a bhiadhadh an chow no daithead geir 31.8%; chaidh cuid a thoirt tron ​​phròtacal fèin-rianachd (seachdainean 5-8) agus chaidh cuid eile a làimhseachadh mar smachdan giùlain. Figear 3a a ’sealltainn eisimpleir de cho-ionadailachadh cFos agus AGRP ann an neuron arcuate niuclas. Mar a gheàrr-chunntas ann an Clàr 5, bha gnìomhachadh neurons AGRP (co-mhìneachadh de cFos-ICC agus AGRP-ICC taobh a-staigh nan aon cheallan) co-cheangailte ri gnìomhachd fèin-rianachd. Tha seo air a dhearbhadh ann an Figear 3b, far a bheil an àireamh de neurons gnìomhaichte (cFos-positive) air an sealltainn mar an cunntadh cealla neuronal, no mar cheudad de neurons AGRP-positive iomlan: tha gnìomhachd mòr de neurons AGRP anns na radain fèin-rianachd sucrose, vs na smachdan làimhseachaidh. , anns na buidhnean daithead còmhla. Sheall coimeas làimhseachaidh taobh a-staigh daithead airson an àireamh de neurons AGRP gnìomhaichte anns a ’bhuidheann fèin-rianachd vs smachdan làimhseachaidh gluasad nach do ràinig brìgh staitistigeil (chow, p = .078; daithead geir 31.8%, p = .073) . Gu cudromach, chan e a-mhàin gu bheil an dàta seo a ’ceangal gnìomhachadh neuronal AGRP le giùlan fèin-rianachd, ach air sgàth an t-àm airson tomhas cFos (90 mionaidean às deidh dha na radain a bhith air an cur anns na seòmraichean fèin-rianachd aca), tha abairt cFos a’ nochdadh gnìomhachd neurons AGRP ann an an dùil ri, no aig toiseach gnìomhachd fèin-rianachd. Bha gluasad neo-chudromach ann airson barrachd neurons iomlan AGRP-positive anns a ’bhuidheann fèin-rianachd (vs. smachdan làimhseachaidh, p = 0.16). Anns na radain sin, far an deach luamhan a bhrùthadh eadar na buidhnean daithead, chaidh an àireamh de neurons AGRP-positive a mhaidseadh cuideachd. Cha robh buaidh sam bith aig làimhseachadh an daithead leis fhèin air an àireamh de neurons AGRP-positive anns na radain smachd giùlain.

  

Figear 2

Buaidh daithead 31.8% geir air abairt mRNA peptide hypothalamic medial. Tha dàta air a dhèanamh àbhaisteach airson radain le tòrr geir (n = 17) an coimeas ri smachdan chow (n = 16). Tha AGRP mRNA air àrdachadh gu mòr (p <0.05).

  

Figear 3

Gnìomhachadh neurons AGRP aig toiseach fèin-rianachd sucrose. 3a. Co-ionadachadh cFos agus AGRP ann an neuron niuclas arcuate, meudachadh 60x. 3b. Àireamh de neurons gnìomhaichte (cFos-immunopositive) AGRP-immunopositive anns an hypothalamus mediobasal ...

  

Clàr 4

Nucleus Accumbens Amine Metabolites

  

Clàr 5

Gnìomhachadh Agrp Neuron: Làimhseachadh daithead agus giùlan

Buaidh rianachd AGRP air brosnachadh sucrose

Is e ar mìneachadh air an lorg seo gu bheil abairt AGRP anns na radain pubertal na phrìomh inneal a tha mar bhunait air fèin-rianachd leasaichte sucrose de na radain a tha air am biathadh le geir àrd. Gus dearbhadh airson èifeachdas AGRP gus brosnachadh airson sucrose a mheudachadh, chaidh AGRP a rianachd tron ​​treas ventricle gu radain peri-pubertal a bhiadhadh le chow rè a ’chuibhreann PR den phàtran giùlain. Bha an clàr dòs seo de AGRP fo-stairsneach airson a bhith a ’brosnachadh toirt a-steach chow thairis air an dà sheachdain de paradigm PR, ach lean e gu àrdachadh mòr ann an fèin-rianachd sucrose, mar a chithear ann an Figear 4. (Thoir fa-near gu bheil susbaint caloric de 0.1 kcal aig gach duais sucrose, mar sin tha an gnìomhachd fèin-rianachd sucrose a ’cur calaraidhean neonitheach ris an in-ghabhail làitheil iomlan.) Clàr 6 a ’sealltainn dàta paramadair fèin-rianachd thairis air paradigm PR 9-day, le AGRP no aCSF air a stealladh ICV air Làithean 2, 5, agus 8. Ann am radain air an làimhseachadh le AGRP, chaidh an àireamh de phreasaichean luamhan gnìomhach àrdachadh gu mòr thar Làithean PR 2-10 (p = 0.03), agus air làithean neo-in-stealladh (p = 0.048) le gluasad a dh ’ionnsaigh àrdachadh air an (cuibheasach) làithean stealladh. A bharrachd air an sin, chaidh an ùine stad (a tha a ’nochdadh na h-ùine iomlan a chaidh a chaitheamh an sàs anns a’ ghnìomh fèin-rianachd) a mheudachadh gu mòr air làithean neo-in-stealladh (p = 0.02) le gluasadan a dh ’ionnsaigh àrdachadh iomlan, agus air làithean stealladh. Chaidh an àireamh de dhuaisean sucrose a mheudachadh gu h-iomlan thar Làithean PR 2-10 (p = 0.03). Cha robh buaidh sam bith aig làimhseachadh AGRP air brùthadh luamhan neo-ghnìomhach, an coimeas ri smachdan air an làimhseachadh le ACSF, no eadar làithean stealladh agus neo-stealladh. Tha na toraidhean a ’toirt taic do mhìneachadh air buaidh sheasmhach AGRP gus fèin-rianachd sucrose a mheudachadh: bha radain a’ brùthadh barrachd air a ’luamhan duais, a’ faighinn barrachd dhuaisean sucrose, agus a ’caitheamh barrachd ùine an sàs sa ghnìomh.

  

Figear 4

Tha an treas AGRP ventricular (ICV) (0.01 nmol) a ’brosnachadh fèin-rianachd sucrose ann am paradigm PR, ach chan eil buaidh sam bith aige air toirt a-steach biadh làitheil thar ùine an sgrùdaidh (Làithean PR 2 - 10, le in-stealladh air Làithean 2, 5, agus 8) . Tha dàta AGRP (n = 9) air a chuir an cèill ...

  

Clàr 6

Buaidh ICV AGRP vs aCSF air Coileanadh Co-mheasan Adhartach airson Sucrose

Buaidh ìre beatha air roghainn agus brosnachadh airson sucrose

Anns an deuchainn mu dheireadh, rinn sinn measadh a bheil brosnachadh airson sucrose eadar-dhealaichte eadar pubertal agus radain inbheach. An toiseach, chaidh deuchainn roghainn sucrose a thoirt do sheann radain 5-agus 10-wk le roghainnean de fhuasglaidhean a ’dol bho 0 gu 20% sucrose, mus do thòisich iad air deuchainn agus trèanadh fèin-rianachd. Mar a chithear ann an Figear 5a, agus a rèir toraidhean a chaidh aithris anns an litreachas, bha e coltach gum b ’fheàrr leis na radain ro-pubertal fuasgladh nas binne na radain inbheach òga: bha a’ mhòr-chuid de radain ro-pubertal air an ìre as àirde de fhuasgladh sucrose 20%, ach bha na radain inbheach a ’nochdadh ìre as àirde. de 15% sucrose. Às deidh sin, chaidh an dà bhuidheann aois a roinn eadar rat chow agus daithead àrd geir rè an trèanadh agus an deuchainn fèin-rianachd. Bha àrdachadh beag ach cudromach gu staitistigeil anns an àireamh de phreasaichean luamhan gnìomhach leis na radain peri-pubertal vs inbheach (45 ± 3 vs. 37 ± 2, p = 0.05) cuibheasach thar nan seiseanan FR, gun eadar-dhealachadh sam bith anns an àireamh de duaisean sucrose no an àireamh de phreas air an luamhan neo-ghnìomhach. Mar a chithear ann an Figear 5b, bha buaidh iomlan fìor chudromach aig aois, thar nan seiseanan PR, le luamhan gnìomhach a bha a ’sìor fhàs a’ brùthadh airson na radain pubertal (n = 15) vs inbheach òg (n = 14) (2-way ANOVA, PRDay × aois; buaidh aois, p = 0.017, buaidh neo-eisimeileach PRDay, gun eadar-obrachadh cudromach). Bha gluasad ann airson buaidh nas motha a thaobh aois ann an staid daithead làn geir ach cha do choilean seo brìgh staitistigeil (p = .13). Clàr 7 a ’liostadh paramadairean giùlan PR: a bharrachd air preas luamhan gnìomhach, fhuair radain peri-pubertal mòran a bharrachd dhuaisean sucrose, agus sheall iad gluasad a dh’ ionnsaigh barrachd ùine stad. A bharrachd air an sin, bha na radain peri-pubertal air àrdachadh beag ach mòr ann am pàipearan-naidheachd air an luamhan neo-ghnìomhach (ie, neo-bhuannachdail), ged a bha an dà chuid luamhan peri-pubertal agus inbheach timcheall air 10% den àireamh de phreasaichean luamhan gnìomhach. Tha na co-dhùnaidhean sin a ’moladh gum b’ fheàrr le radain peri-pubertal agus gum bi iad a ’sireadh biadh le blas milis, agus dh’ fhaodadh a ’bhuaidh a bhith air a mheudachadh le cùl-fhiosrachadh de dhaithead àrd geir.

  

Figear 5

Tha radain òga air barrachd brosnachaidh fhaighinn airson duaisean sucrose an coimeas ri radain inbheach. 5a. Deuchainnean roghainn sucrose airson radain òganach (peri-pubertal, n = 15) agus inbheach òg (n = 14). Bha 30 min aig radain ri òl bhon raon dùmhlachd (0-20% sucrose). ...

  

Clàr 7

Buaidh aois air Coileanadh Co-mheasan Adhartach^a airson Sucrose

Fhuair an rannsachadh seo taic bho thabhartas NIH DK40963. Tha Dianne Figlewicz Lattemann na Àrd Neach-saidheans Dreuchd Rannsachaidh, Prògram Rannsachaidh Obair-lann Bith-mheidigeach, Siostam Cùram Slàinte Puget Sound Roinn Cùisean Seann Shaighdearan, Seattle, Washington. Fhuair Stephen Benoit taic bho NIH DK066223 agus Ethicon Endosurgery Inc. Tha na h-ùghdaran a ’toirt taing don Dr Tami Wolden-Hanson airson taic le tomhas cumadh bodhaig; An t-Ollamh Uilleam Banks agus Lucy Dillman airson taic leis na tomhasan triglyceride; agus Amalie Alver, agus Samantha Thomas-Nadler airson cuideachadh leis na sgrùdaidhean giùlain.

• Andersen SL, Teicher MH. Strus, amannan mothachail agus tachartasan maturational ann an trom-inntinn òigearan. Gluasadan ann an Neo-eòlas. 2008; 31: 183 - 191. [Sgaoileadh]
• Aponte Y, Atasoy D, Sternson SM. Tha neurons AGRP gu leòr gus giùlan biadhaidh a chuir air dòigh gu luath agus gun trèanadh. Neo-eòlas nàdair. 2011; 14: 351 - 355. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Barnes MJ, Argyropoulos G, Bray GA. Tha roghainn airson daithead àrd geir, ach chan e hyperphagia às deidh gnìomhachadh gabhadairean mu opioid air a bhacadh ann an luchagan bualadh AgRP. Rannsachadh eanchainn. 2010; 1317: 100 - 107. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Bolaños CA, Barrot M, Berton O, Wallace-Black D, Nestler EJ. Bidh làimhseachadh Methylphenidate rè ro-agus periadolescence ag atharrachadh freagairtean giùlain do bhrosnachaidhean tòcail aig ìre inbheach. Eòlas-inntinn Bith-eòlasach. 2003; 54: 1317 - 1329. [Sgaoileadh]
• Bolaños CA, Glatt SJ, Jackson D. Subsensitivity gu drogaichean dopaminergic ann am radain periadolescent: sgrùdadh giùlan agus neurochemical. Rannsachadh Brain Leasachadh Rannsachadh Brain. 1998; 111: 25 - 33. [Sgaoileadh]
• Brandon CL, Marinelli M, Baker LK, White FJ. Freagairt nas fheàrr agus so-leòntachd do chocaine às deidh làimhseachadh methylphenidate ann am radain deugaire. Neuropsychopharmacology. 2001; 25: 651 - 61. [Sgaoileadh]
• Brandon CL, Marinelli M, White FJ. Bidh foillseachadh òigearan air methylphenidate ag atharrachadh gnìomhachd neurons dopamine rat midbrain. Eòlas-inntinn Bith-eòlasach. 2003; 54: 1338 - 1344. [Sgaoileadh]
• Broberger C, Johansen J, Johansson C, Schalling M, Hokfelt T. Ciorcad eanchainn eanchainn neuropeptide Y / agouti (AGRP) ann an luchagan àbhaisteach, anorectic, agus monosodium glutamate. Imeachdan Acadamaidh Nàiseanta Saidheans. 1998; 95: 15043 - 15048. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Dleastanas orexin / hypocretin ann a bhith a ’sireadh dhuaisean agus cuir-ris: buaidh air reamhrachd. Eòlas-cuirp & Giùlan. 2010; 100: 419–428. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Dreuchd orexin-A ann am brosnachadh bìdh, giùlan biadhaidh stèidhichte air duais agus gnìomhachd neuronal air a bhrosnachadh le biadh ann am radain. Neo-eòlas. 2010; 167: 11 - 20. [Sgaoileadh]
• Cizza G, Brown RJ, Rother KI. Tricead ag èirigh agus dùbhlain tinneas an t-siùcair leanabachd. Mion-sgrùdadh. Iris de Sgrùdadh Endocrinological. 2012 epub Cèitean 8, 2012. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Coldwell SE, Oswald TK, Reed DR. Tha comharra fàis eadar-dhealaichte eadar deugairean le roghainn siùcar àrd vs ìosal. Eòlas-cuirp & Giùlan. 2009; 96: 574–580. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Davis JF, Choi DL, Benoit SC. Insulin, leptin agus duais. Gluasadan ann an Endocrinology agus Metabolism. 2010; 21: 68 - 74. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Fitzgerald MF, Clegg DJ, Lipton JW, Figlewicz DP, Benoit SC. Bidh Leptin a ’riaghladh cothromachadh lùtha agus togradh tro ghnìomh aig cuairtean neòil sònraichte. Eòlas-inntinn Bith-eòlasach. 2011a; 69: 668 - 674. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Krause EG, Fitzgerald MF, Lipton JW, Sakai RR, Benoit SC. Bidh melanocortins meadhanach ag atharrachadh gnìomhachd mesocorticolimbic agus giùlan sireadh bìdh anns an radan. Eòlas-cuirp & Giùlan. 2011b; 102: 491–495. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Clegg DJ, Benoit SC, Lipton JW. Bidh a bhith a ’nochdadh ìrean àrda de gheir daithead a’ lughdachadh duais psychostimulant agus tionndadh dopamine mesolimbic anns an radan. Neo-eòlas giùlain. 2008; 122: 1257 - 1263. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Desor JA, Beauchamp GK. Atharraichean fad-ùine ann an roghainnean milis ann an daoine. Eòlas-cuirp & Giùlan. 1987; 39: 639–641. [Sgaoileadh]
• Desor JA, Greene LS, Maller O. Roghainnean airson milis agus salainn ann an daoine 9- gu 15-bliadhna agus inbheach. Saidheans. 1975; 190: 686 - 687. [Sgaoileadh]
• Drewnowski A. Dùmhlachd lùtha, palatability, agus satiety: buaidh air smachd cuideam. Lèirmheasan beathachaidh. 1998; 56: 347 - 353. [Sgaoileadh]
• Figlewicz DP, Bennett JL, Aliakbari S, Zavosh A, Sipols AJ. Bidh insulin ag obair aig diofar làraich CNS gus lughdachadh a dhèanamh air biadhadh sucrose acrach agus fèin-rianachd sucrose ann am radain. Iris Eòlas-inntinn Ameireagaidh. 2008; 295: R388 - R394. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Figlewicz DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. Bidh insulin intraventricular agus leptin a ’lughdachadh fèin-rianachd sucrose ann am radain. Eòlas-cuirp & Giùlan. 2006; 89: 611–616. [Sgaoileadh]
• Figlewicz DP, Bennett-Jay JL, Kittleson S, Sipols AJ, Zavosh A. Sucrose fèin-rianachd agus gnìomhachadh CNS anns an radan. Am J Physiol. 2011; 300: R876 - R884. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Figlewicz DP, Ioannou G, Bennett Jay J, Kittleson S, Savard C, Roth CL. Buaidh in-ghabhail meadhanach de mhìlsearan air slàinte metabolach anns an radan. Eòlas-cuirp & Giùlan. 2009; 98: 618–624. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Figlewicz DP, Sipols AJ. Comharran riaghlaidh lùth agus duais bìdh. Pharmacology, Biochemistry, agus Giùlan. 2010; 97: 15 - 24. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Frangioudakis G, Gyte AC, Loxham SJ, Poucher SM. An deuchainn fulangas glucose intravenous ann an radain Wistar cannulated: Modh làidir airson measadh in vivo air secretion insulin air a bhrosnachadh le glucose. Iris de mhodhan Pharmacological agus Toxicological. 2008; 57: 106 - 113. [Sgaoileadh]
• Hagan MM, Rushing PA, Pritchard LM, Schwartz MW, Strack AM, Van Der Ploeg LHT, Woods SC, Seeley RJ. Tha buaidhean orexigenic fad-ùine aig AgRP- (83-132) a ’toirt a-steach uidheamachdan a bharrachd air bacadh gabhadain melanocortin. Iris Eòlas-inntinn Ameireagaidh. 2000; 279: R47 - R52. [Sgaoileadh]
• Hahn TM, Breininger JF, Baskin DG, Schwartz MW. Co-chothromachadh Agrp agus NPY ann an neurons hypothalamic a tha air an cuir an gnìomh gu luath. Neo-eòlas nàdair. 1998; 1: 271 - 272. [Sgaoileadh]
• Hodos W. Co-mheas adhartach mar thomhas de neart duais. Saidheans. 1961; 134: 943 - 944. [Sgaoileadh]
• Ikemoto S, Panksepp J. Dissociations eadar freagairtean appetitive agus consummatory le làimhseachadh pharmacologach de roinnean eanchainn a tha buntainneach ri duais. Neo-eòlas giùlain. 1996; 110: 331 - 345. [Sgaoileadh]
• Jewett DC, Cleary J, Levine AS, Schaal DW, Thompson T. Buaidhean neuropeptide Y, insulin, 2-deoxyglucose, agus bochdainn bìdh air giùlan a tha air a bhrosnachadh le biadh. Psychopharmacology. 1995; 120: 267 - 271. [Sgaoileadh]
• Bidh Kaushik S, Rodriguez-Navarro JA, Arias E, Kiffin R, Sahu S, Schwartz GJ, Cuervo AM, Singh R. Autophagy ann an neurons AgRP hypothalamic a ’riaghladh toirt a-steach biadh agus cothromachadh lùtha. Meatabolachd cealla. 2011; 14: 173 - 183. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Kelley AE, Berridge KC. Neo-eòlas dhuaisean nàdurrach: buntainneachd ri drogaichean addictive. Iris Neuroscience. 2002; 22: 3306 - 3311. [Sgaoileadh]
• Kelley SP, Nannini MA, Bratt AM, Hodge CW. Bidh neuropeptide-Y anns a ’núcleas paraventricular a’ meudachadh fèin-rianachd ethanol. Peptides. 2001; 22: 515 - 522. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Kohli R, Boyd T, Lake K, Dietrich K, Nicholas L, Balistreri WF, Ebach D, Shashidkar H, Xanthakos SA. Adhartas luath de NASH ann an leanabachd. Iris de Gastroenterology agus Beathachadh Péidiatraiceach. 2010; 50: 453 - 456. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Krashes MJ, Koda S, Ye CP, Rogan SC, Adams AC, Cusher DS, Maratos-Flier E, Roth BL, Lowell BB. Bidh gnìomhachd luath reversible de neurons AgRP a ’draibheadh ​​giùlan biadhaidh ann an luchagan. Iris de Sgrùdadh Clionaigeach. 2011; 121: 1424 - 1428. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Mennella JA, Pepino MY, Reed DR. Co-dhùnaidhean ginteil agus àrainneachdail de bheachd searbh agus roghainnean milis. Pediatrics. 2005; 115: 216 - 222. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Myers KP, Sclafani A. Leasachadh roghainnean blas ionnsaichte. Eòlas-inntinn leasachaidh. 2006; 48: 380 - 388. [Sgaoileadh]
• Prògram Rannsachaidh Gnìomhaichte Institiud Nàiseanta Ailse. Stòran calaraidhean bho shiùcairean a bharrachd am measg Àireamh-sluaigh na SA, 2005-06. 21 Dùbhlachd 2010 ùrachadh. [Air a ruigheachd 21 Sultain 2011]; 2010 Ri fhaighinn bho: http://riskfactor.cancer.gov/diet/foodsources/added_sugars/
• Nixon JP, Zhang M, Wang CF, Kuskowski MA, Novak CM, Levine JA, Billington CJ, Kotz CM. Luachadh air siostam dealbh meudachaidh magnetach cainneachdail airson mion-sgrùdadh cumadh bodhaig gu h-iomlan ann an creimich. Reamhrachd. 2010; 18: 1652 - 1659. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Ogden CL, Carroll MD. Roinn Sgrùdaidhean Sgrùdaidh Slàinte is Beathachaidh. Tricead reamhrachd am measg clann is deugairean: Na Stàitean Aonaichte, gluasadan 1963-1965 tro 2007-2008. [Air a ruigheachd 21 Sultain 2011]; E-Stat Slàinte. 2010 2010 Ri fhaighinn bho: http://www.cdc.gov/nchs/fastats/overwt.htm.
• Paxinos G, Watson C. Atlas den eanchainn radan ann an co-chomharran stereotaxic. 5th. San Diego CA: Clò Acadaimigeach Elsevier; 2005.
• Richardson NR, Roberts DC. Clàran co-mheas adhartach ann an sgrùdaidhean fèin-rianachd dhrogaichean ann am radain: dòigh gus èifeachdas ath-neartachaidh a mheasadh. Iris de mhodhan neuro-saidheans. 1996; 66: 1 - 11. [Sgaoileadh]
• Roitman MF, Stuber GD, Phillips PE, Wightman RM, Carelli RM. Tha Dopamine ag obair mar inneal-atharrachaidh subsecond de bhith a ’sireadh biadh. Iris Neuroscience. 2004; 24: 1265 - 1271. [Sgaoileadh]
• Rossi M, Kim M, Morgan D, Small C, Edwards C, Sunter D, Abusnana S, Goldstone A, Russell S, Stanley S, Smith D, Yagaloff K, Ghatei M, Bloom S. Criomag C-terminal de Agouti- bidh pròtain co-cheangailte a ’meudachadh biadhadh agus a’ toirt buaidh air buaidh hormona brosnachail alpha-melanocyte ann an vivo. Endocrinology. 1998; 139: 4428 - 4431. [Sgaoileadh]
• Stanhope KL. Dleastanas siùcar anns a bheil fructose ann an galairean reamhrachd agus syndrome metabolic. Lèirmheasan Bliadhnail air Leigheas. 2012; 63: 329 - 343. [Sgaoileadh]
• Sturman DA, Mandell DR, Moghaddam B. Tha deugairean a ’nochdadh eadar-dhealachaidhean giùlain bho inbhich rè ionnsachadh insturmetnal agus a dhol à bith. Neo-eòlas giùlain. 2010; 124: 16 - 25. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• Tracy AL, Clegg DJ, Johnson JD, Davidson TL, Woods SC. Bidh an antagonist melanocortin AgRP (83-132) a ’meudachadh freagairt appetitive airson ath-neartachadh geir, ach chan e gualaisg. Bith-cheimigeachd Pharmacology, agus Giùlan. 2008; 89: 263 - 271. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
• LR Vartanian, Schwartz MB, Brownell KD. Buaidhean caitheamh deoch bog air beathachadh agus slàinte: ath-sgrùdadh eagarach agus meta-anailis. Iris Ameireagaidh Slàinte a ’Phobaill. 2007; 97: 667 - 75. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]