Inntinnidh Aghaidh. 2018; 9: 81.
Air fhoillseachadh air-loidhne 2018 Mar 12. doi: 10.3389 / fpsyt.2018.00081
PMCID: PMC5858605
PMID: 29593587
Minho Lee,1,† Hyeyoung Cho,2,3,† Seung Hyun Jung,2,4 Seon-Hee Yim,2 Sung-Min Cho,2,3 Ji-Won Chun,5 Soo-Hyun Paik,5 Pàirc Yae Eun,6,7 Dong Huey Cheon,7,8 Ji Eun Lee,7 Jung-Seok Choi,9 Dai-Jin Kim,5,* agus Yeun-Jun Chung1,2,3,*
Abstract
Cùl-fhiosrachadh
Tha cleachdadh addictive den eadar-lìn agus geamannan air-loidhne na eas-òrdugh inntinn-inntinn ris an canar eas-òrdugh cluich eadar-lìn (IGD). Chaidh cunntas a thoirt air pròifilean abairt microRNA (miRNA) atharraichte ann am fuil agus teannachadh eanchainn euslaintich le eas-òrdugh inntinn-inntinn sònraichte agus air am moladh mar biomarkers. Ach, cha deach aithisgean sam bith a dhèanamh mu phròifilean miRNA fala ann an IGD.
Dòighean-obrach
Gus faighinn a-mach miRNAs co-cheangailte ri IGD, rinn sinn mion-sgrùdadh air pròifilean abairt miRNA de shamhlaichean 51 (smachdan 25 IGD agus 26) a ’cleachdadh an TaqMan Ìosal Dùmhlachd miRNA. Airson dearbhadh, rinn sinn PCR ath-sgrìobhadh cainneachdail cùil le sampallan neo-eisimeileach 36 (smachdan 20 IGD agus 16).
toraidhean
Tro lorg agus dearbhadh neo-eisimeileach, chomharraich sinn trì miRNA (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-652-3p) a chaidh an lughdachadh gu mòr anns a ’bhuidheann IGD. Bha cunnart mòran nas àirde aig IGD aig daoine leis na trì atharrachaidhean miRNA na an fheadhainn aig nach robh atharrachadh [co-mheas odds (OR) 22, 95% CI 2.29 - 211.11], agus mheudaich na ORs dòs an urra ri àireamh de miRNAs atharraichte. Bha na ginean targaid a bha dùil aig na trì miRNAn co-cheangailte ri slighean neòil. Rinn sinn sgrùdadh air an abairt pròtain de na trì gineachan targaid sìos an abhainn le blot an iar agus dhearbh sinn gu robh abairt GABRB2 agus DPYSL2 gu math nas àirde anns a ’bhuidheann IGD.
Co-dhùnadh
Chunnaic sinn gun deach abairtean de hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, agus hsa-miR-652-3p a lughdachadh ann an euslaintich IGD. Bidh na toraidhean againn feumail gus tuigse fhaighinn air pathophysiology IGD.
Ro-ràdh
Chan e dìreach rudeigin sòisealta a th ’ann an cleachdadh addictive den eadar-lìn agus geamannan stèidhichte air an eadar-lìn ann an dùthchannan le bun-structar ruigsinneachd eadar-lìn farsaing, ach eas-òrdugh inntinn-inntinn a dh’ fhaodadh a bhith air ainmeachadh mar eas-òrdugh cluich eadar-lìn (IGD) (1-3). A rèir aithisgean epidemio-eòlasach, tha ìrean tricead IGD ann an òigearan ag atharrachadh thar dùthchannan, bho 0.8 gu 26.7% (4). Gu sònraichte, tha sgrùdaidhean a ’sealltainn ìrean tricead os cionn 10% ann an òigearan ann an iomadh dùthaich Àisianach leithid Korea a-Deas, Sìona, Taiwan, Hong Kong, agus Singapore (4). Tha IGD co-cheangailte ri lagachadh ann an eòlas-inntinn, dàimhean psycho-shòisealta, agus beatha làitheil; mar eisimpleir, coileanadh acadaimigeach no dreuchdail a ’crìonadh (4-7). Tha IGD a-nis air a ghabhail a-steach ann an Earrann III (Cùmhnantan airson Sgrùdadh a bharrachd) den chòigeamh ath-sgrùdadh den Leabhar-làimhe Diagnostic is Staitistigeach de dhuilgheadasan inntinn (DSM-V) (8). Ach, a dh ’aindeoin cho cudromach sa tha e clinico-shòisealta, chan eil fios aig mòran mu dheidhinn an uidheamachd ginteil moileciuil air cùl IGD.
Tha sgrùdaidhean càraid mòr o chionn ghoirid air cùl-raon ginteil a mholadh do IGD (9, 10). Vink et al. rinn iad sgrùdadh air eadar-dhealachaidhean fa leth ann an cleachdadh èiginneach eadar-lìn le càraid òganach 5,247 monozygotic agus dizygotic ann an Clàr Twin na h-Òlaind agus dh ’innis iad gun deach 48% de na h-eadar-dhealachaidhean a mhìneachadh le factaran ginteil (9). Li et al. chunnaic iad paidhrichean 825 de chàraid òigearan Sìneach agus dh ’innis iad gu robh factaran ginteil a’ mìneachadh 58 - 66% de na h-eadar-dhealachaidhean (10). A rèir sin, polymorphisms de na ginean a tha an sàs ann an neurotransmission, cognition, agus aire leithid gine dopamine D2 gabhadair dopamine (DRD2), gine catecholamine-O-methyltransferase (COMT), gine còmhdhail serotonin (5HTTLPR), agus gabhadair cholinergic gine nicotinic alpha 4 (CHRNA4) chaidh aithris gu bheil ceangal mòr aca ri tràilleachd eadar-lìn (11-13). O chionn ghoirid, Kim et al. atharrachaidhean air an sgrìobadh de chòrr air ginean tagraiche 100 co-cheangailte ri cinneasachadh, gnìomh, agus metabolism neurotransmitters le mion-sgrùdadh òrdugh an ath ghinealach agus dh ’innis iad gu robh rs2229910 de NTRK3 gine ceangailte ri IGD (14).
A bharrachd air na factaran ginteil, tha fios cuideachd gu bheil phenotypes neurobehavioral air an riaghladh gu epigenetically le RNAan neo-còdadh a ’toirt a-steach microRNAs (miRNAs) (15, 16). Tha miRNAn nam moileciuil RNA aon-shreath bheag (mu 20 - 23 nucleotides de dh'fhaid), a bhios a ’riaghladh gu h-àicheil abairtean de chòdachadh pròtain le bhith a’ lughdachadh mRNAs agus a ’cluich pàirt dheatamach ann am pròiseas pathophysiologic de ghalaran eadar-mheasgte (17). Tha sreathan de fhianais air dearbhadh gu bheil miRNAn pailt ann am prìomh shiostam nèamhach an duine (CNS) agus ag obair gus ìrean faireachdainn nan gineachan targaid aca a ghleusadh, a tha an sàs ann an leasachadh agus aibidh siostam CNS (15). Gu dearbh, tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air nochdadh gu bheil pròifilean abairt miRNA air an atharrachadh ann an teannachadh eanchainn euslaintich le eas-òrdugh inntinn-inntinn, a ’moladh gum faodadh na pròifilean abairt aca a bhith nam biomarkers airson eas-òrdugh inntinn-inntinn (15, 16, 18). Mar eisimpleir, tro anailis postmortem, Lopez et al. dh ’innis iad gu robh an abairt de miR-1202, a bhios a’ riaghladh abairt gine metabotropic glutamate receptor-4 agus a tha a ’ro-innse an fhreagairt do antidepressant, air a lughdachadh ann an nèapraigean cortex prefrontal de phrìomh euslaintich eas-òrdugh trom-inntinn (19). A thaobh sgrìonadh biomarker, tha cuingealachadh soilleir air an dòigh-obrach seo oir tha e do-dhèanta a bhith a ’coileanadh biopsy de stuth CNS airson sgrìonadh. Leis gum faodar miRNAs a lorg ann am fuil (plasma no serum), tha buannachd chinnteach aig miRNAs a tha a ’cuairteachadh mar biomarkers neo-ionnsaigheach ann an eas-òrdughan neuropsychiatric. Ach, gu ruige seo, cha deach sgrùdadh sam bith a dhèanamh mu bhith a ’cuairteachadh phròifilean miRNA ann an IGD. Dh'fhaodadh tuigse nas fheàrr air a bhith a ’cuairteachadh ìomhaighean abairte miRNA cuideachadh le bhith a’ soilleireachadh uidheamachd leasachadh IGD agus eadar-theangachadh clionaigeach a dhèanamh comasach.
Anns an sgrùdadh seo, bha sinn ag amas air comharran miRNA co-cheangailte ri IGD a chomharrachadh le bhith a ’cumail sùil air miRNAan plasma a chaidh an cur an cèill gu eadar-dhealaichte eadar an IGD agus buidhnean smachd agus a’ sgrùdadh na buaidhean bith-eòlasach aca.
Stuthan agus Dòighean-obrach
Cuspairean Sgrùdaidh
Rinn sinn sgrùdadh air deugairean 3,166 (aois 12 - 18 bliadhna) a ’cleachdadh sgòradh DSM-V IGD. Nam measg, chaidh 251 (fireannaich 168 agus boireannaich 83) a dhearbhadh mar IGD a rèir slatan-tomhais DSM-V (8). Thug iomlan de dhaoine fa-leth 91 (smachdan 49 IGDs agus 42) an cead fiosraichte airson an sgrùdadh seo. Nam measg, chaidh ceathrar dhaoine a thoirmeasg a rèir nan slatan-tomhais às-dùnadh. Mu dheireadh, chaidh daoine fa leth 87 (cuspairean 45 IGD agus daoine smachd fallain 42) a chlàradh airson an sgrùdadh seo. Nam measg, chaidh com-pàirtichean 51 (euslaintich 25 IGD agus smachdan 26) fhastadh mar an lorg a chaidh a stèidheachadh bho 2014 gu 2016. Chaidh na com-pàirtichean 36 eile (euslaintich 20 IGD agus smachdan 16) fhastadh mar an seata dearbhaidh neo-eisimeileach bho 2016. Bha na com-pàirtichean uile nan daoine à Korea, clàraichte bho Ospadal Seoul St. Mary (Seoul, Korea a-Deas) agus Ospadal Boramae Oilthigh Nàiseanta Seoul (Seoul, Korea a-Deas). Chaidh a h-uile com-pàirtiche tro agallamh eagraichte le eòlaiche-inntinn stèidhichte air Clàr Kiddie Korean airson Eas-òrdughan Affective agus Schizophrenia (K-SADS-PL) (20). Chrìochnaich a h-uile com-pàirtiche na fo-thiotalan Dealbhadh Bloc agus Briathrachas de Sgèile Fiosrachaidh Korean-Wechsler airson Cloinne, deasachadh 4th (K-WISC-IV) (21). Chaidh impulsiveness a mheasadh le Sgèile Impulsiveness Barratt (BIS) (22). Chaidh lannan Siostam Toirmeasg Giùlan (BInS) agus Siostam Gnìomhachd Giùlan (BAS) a thomhas gus tomhas pearsantachd a mheasadh (23). Bha slatan-tomhais às-dùnadh a ’toirt a-steach prìomh dhuilgheadasan meidigeach a bh’ ann no a bh ’ann (me, tinneas an t-siùcair mellitus), eas-òrdugh eanchainn (me, eas-òrdugh glacaidh, leòn cinn), eas-òrdugh inntinn-inntinn (me, eas-òrdugh trom-inntinn mòr, eas-òrdugh iomagain), dàil inntinn, no ana-cleachdadh stuthan sam bith (me. , tombaca, cainb, deoch làidir). Tha geàrr-chunntas air feartan coitcheann nan cuspairean sgrùdaidh ann an Clàr Table1.1. Chaidh an sgrùdadh seo aontachadh le Bòrd Lèirmheas Institiùdail Colaiste Meidigeach Oilthigh Caitligeach Korea (MC16SISI0120). Thug a h-uile com-pàirtiche agus am pàrantan cead fiosraichte sgrìobhte.
Clàr 1
Feartan coitcheann nan cuspairean sgrùdaidh.
| Discovery | Dearbhadh | Cothlamadh | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Control | IGD | P-value | Control | IGD | P-value | Control | IGD | P-value | |
| N | 26 | 25 | 16 | 20 | 42 | 45 | |||
| Aois (bliadhnaichean) | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 13 (12 - 17) | 13 (12 - 15) | 0.759 | 15 (13 - 18) | 14.5 (12 - 18) | 0.628 | 14 (12 - 18) | 14 (12 - 18) | 0.509 |
| Uairean seachdaineach geamannan eadar-lìn (h) | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 5.25 (2 - 17) | 18 (6 - 46) | 1.27E - 6a | 5.5 (2 - 23) | 8 (1 - 112) | 0.374 | 5.5 (2 - 23) | 14 (1 - 112) | 1.63E - 5a |
| Teachd-a-steach dachaigh mìosail (millean KRW) | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 5 (1 - 9) | 3 (1 - 9) | 0.588 | 4 (4 - 4) | 2 (2 - 2) | 1.000 | 5 (1 - 9) | 3 (1 - 9) | 0.460 |
| Foghlam (bliadhnaichean) | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 8 (7 - 9) | 8 (7 - 9) | 0.584 | 12 (12 - 12) | 6 (6 - 13) | 0.305 | 8 (7 - 12) | 8 (6 - 13) | 0.269 |
| K-WISC: dealbhadh bloc | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 10.5 (4 - 17) | 10 (4 - 16) | 0.544 | 10 (3 - 16) | 12.5 (4 - 15) | 0.125 | 10 (3 - 17) | 11 (4 - 16) | 0.598 |
| K-WISC: briathrachas | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 9 (5 - 17) | 7 (5 - 13) | 0.174 | 9.5 (8 - 15) | 11.5 (5 - 15) | 0.595 | 9 (5 - 17) | 9 (5 - 15) | 0.527 |
| KS | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 24 (17 - 36) | 37 (22 - 51) | 3.81E - 6a | 29 (17 - 34) | 59 (22 - 108) | 1.2E - 5a | 25 (17 - 36) | 40 (22 - 108) | 2.05E - 10a |
| Bis | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 63 (35 - 75) | 67.5 (45 - 81) | 0.080 | 61 (45 - 79) | 63 (32 - 82) | 0.835 | 62 (35 - 79) | 65 (32 - 82) | 0.240 |
| Bas | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 31 (15 - 40) | 31 (13 - 51) | 0.558 | 36.5 (22 - 48) | 34 (27 - 52) | 1.000 | 32 (15 - 48) | 34 (13 - 52) | 0.637 |
| BInS | |||||||||
| Meadhan (min-max) | 18 (10 - 26) | 17.5 (13 - 27) | 0.642 | 18.5 (12 - 25) | 20 (13 - 21) | 0.138 | 18 (10 - 26) | 19 (13 - 27) | 0.302 |
IGD, euslaintich eas-òrdugh cluich eadar-lìn; KS, Sgèile Proneness tràilleachd eadar-lìn Korean; BIS, Sgèile Impulsivity Barratt; BAS, Siostam Gnìomhachd Giùlan; BInS, Siostam Toirmeasg Giùlan; KRW, Bhuannaich Korean.
aP <0.05 (deuchainn Mann - Whitney - Wilcoxon).
Deuchainnean TaqMan Dùmhlachd Ìosal MiRNA Array (TLDA)
Chaidh fuil iomaill a chruinneachadh bho gach com-pàirtiche agus a ghluasad chun obair-lann taobh a-staigh 4 h gus an lysis cealla fala a lughdachadh. Chaidh an sampal a tharraing sa mheadhan aig 3,000 rpm airson 10 min aig teòthachd an t-seòmair. An uairsin, chaidh supernatant (còmhdach plasma) a chruinneachadh gun a bhith a ’truailleadh na ceallan fala. Chaidh miRNAs a bha a ’cuairteachadh a thoirt a-mach a’ cleachdadh TaqMan miRNA ABC Purification Kit (Pannal Daonna A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh. Gu h-aithghearr, chaidh 50 µL de shampall plasma agus 100 µL de bufair ABC a mheasgachadh. Às deidh tar-ghintinn le grìogagan magnetach anti-miRNA a tha sònraichte do thargaidean, chaidh miRNAs a tha a ’cuairteachadh a chuairteachadh bho na grìogagan le 100 µL de bufair elution. Anns an ìre lorg, chaidh 381 miRNAs a sgrùdadh bho shamhlaichean plasma 51 (smachdan 25 IGDs agus 26) a ’cleachdadh Kit Purnaidh TaqMan miRNA ABC (Pannal Daonna A; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh. Chaidh ath-sgrìobhadh reverse mega agus ath-leudachadh ro-leudachadh a dhèanamh gus meud cDNA a mheudachadh airson mion-sgrùdadh abairt miRNA a ’cleachdadh MegaplexPreAmp Primers Human Pool A agus TaqManPreAmp Master Mix (Thermo Fisher Scientific). Chaidh am pannal TLDA A v2.0 (Thermo Fisher Scientific) a ruith air siostam PCR fìor-ùine ViiA7 (Thermo Fisher Scientific) gus measadh a dhèanamh air an abairt de na miRNAs. Chaidh dàta amh a phròiseasadh le bhith a ’cleachdadh bathar-bog ExpressionSuite v1.0.4 (Thermo Fisher Scientific) gus luachan Ct a dhearbhadh airson gach miRNA.
Mion-sgrùdadh dàta airson TLDA
Rinn sinn tomhas an toiseach air cearcallan stairsnich (luach Ct) gach miRNA. bha miRNAn le luach Ct> 35 air am meas mar neo-chinnteach agus air an dùnadh a-mach bho sgrùdadh às deidh sin. Chaidh na luachan Ct uile a dhèanamh àbhaisteach gu luach Ct de miR-374b (luach ΔCt), aon de na miRNAan as seasmhaiche a chaidh a chuairteachadh ann am plasma daonna (24). Chaidh co-mheas atharrachadh fillte log2 (luach ΔΔCt) de dhòigh-labhairt a thomhas a ’cleachdadh luachan cuibheasach de shamhlaichean smachd mar calibrator anns a’ phacaid HTqPCR ann am Bioconductor (25). Chaidh an tomhas coimeasach (RQ) de gach targaid miRNA a mhìneachadh mar 2−ΔΔCt. Airson deuchainn beachd-bharail air an eadar-dhealachadh faireachdainn eadar dà bhuidheann, chuir sinn an sàs mion-sgrùdadh caochlaideach surrogate (SVA) gus heterogeneities a ghlacadh leithid buaidhean baidse anns na deuchainnean a ’cleachdadh an sàbha pasgan ann am Bioconductor (26). miRNAs le a P-bha luach <0.05 air a mheas gu math eadar-dhealaichte eadar dà bhuidheann.
Mion-sgrùdadh beairteachadh seata Gene
Airson mion-sgrùdadh beairteachadh seata gine, chleachd sinn ToppFun ann an ToppGene Suite (27) a bhith a ’lorg Gene Ontology (GO) a tha air a bheairteachadh gu mòr (GO) (28) cumhachan, slighe, agus cumhachan galair. Mar an cur-a-steach airson an dòigh-obrach seo, chleachd sinn ginean targaid ro-innse 1,230 de na miRNAn tagraiche. Chaidh mion-sgrùdadh slighe a chleachdadh gus slighean cudromach de na ginean targaid a bha dùil a lorg a rèir KEGG, BioCarta, Reactome, GeneMAPP, agus MSigDBin na slighean ToppGene. Chaidh cudromachd cumhachan beairteachaidh gnìomh a dhearbhadh stèidhichte air an atharrachadh le Bonferroni P-value.
Dearbhadh agus Ath-sgrìobhadh Cainnteach Reverse Transcription PCR (qRT-PCR)
Gus dearbhadh a dhèanamh air na miRNAs 10 a chaidh an cur an cèill gu eadar-dhealaichte aig ìre an lorg, chaidh qRT-PCR a dhèanamh a ’cleachdadh TaqMan MicroRNA Assay (miR-15b-5p, #000390; miR-26b-5p, #000407; miR-29b, # 3; miR-000413b-125p, #5; miR-000449c-200p, #3; miR-002300-337p, #5; miR-002156-411p, #5; miR-001610-423-XNUM; -5p, #002340; agus miR-483-5p, #002338) agus an siostam ViiA652 (Life Technologies) a rèir protocol an neach-dèanamh. Chaidh deich nanogram de RNA iomlan a thionndadh gu cDNA ciad-shreath le primers sònraichte miRNA a ’cleachdadh an TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (#3, Life Technologies), air a leantainn le PCR fìor-ùine le TaqMan Probes. Chaidh RQ gach miRNA a mhìneachadh mar 002352−ΔCt, far a bheil ΔCt mar an eadar-dhealachadh ann an cearcallan stairsnich airson an sampall a tha fo cheist, air a dhèanamh àbhaisteach an aghaidh an miRNA endogenous (miR-374b-5p, #001319). Chaidh a h-uile ath-bhualadh PCR a dhèanamh trì-fhillte, agus chaidh na luachan Ct aca cuibheasach. Rinn sinn obrachadh a-mach co-mheas atharrachadh fillte log2 (ΔΔCt) de gach miRNA san aon dòigh ris a ’mhion-sgrùdadh stèidhichte air raon. Chaidh deuchainn Mann - Whitney - Wilcoxon neo-pharametric a dhèanamh gus deuchainn a dhèanamh air na h-eadar-dhealachaidhean ann an ìrean faireachdainn de miRNAs ann an dà bhuidheann le stairsneach P-value de 0.05.
Mion-sgrùdadh Blot an Iar
Chaidh a h-uile sampall serum a thoirt a-mach an toiseach de na prìomh phròtainean àrd-lìonaidh 14 (albumin, immunoglobulin G, immunoglobulin A, serotransferrin, haptoglobin, alpha-1 antitrypsin, fibrinogen, alpha-2 macroglobulin, alpha-1 acid glycoprotein, immunoglobulin M, apolipoprotein AI , apolipoprotein A-II, cuir ri C3, agus transthyretin) a ’cleachdadh colbh MARS-14 (4.6 × 50 mm, Teicneòlas Agilent, Santa Clara, CA, na SA) mus dèanar sgrùdadh blot an iar. Chaidh am bloigh neo-cheangailte a fhuaireadh bhon cholbh MARS-14 a cho-chruinneachadh le bhith a ’cleachdadh sìoltachan ceud-ghluasadach Amicon Ultracel-3 (gearradh 3 kDa), agus an uairsin chaidh an dùmhlachd pròtain a dhearbhadh a’ cleachdadh an dòigh searbhag bicinchoninic. Chaidh na h-aon suimean (bho 10 gu 30 µg) de smachd agus sampaill serum IGD a sgaradh air gel precast 4 - 20% Mini-PROTEAN TGX (Bio-Rad, CA, na SA) agus chaidh a ghluasad gu ball polyvinylidene difluoride. An ath rud, chaidh an membran a bhacadh ann an TBS-T (190 mM NaCl, 25 mM Tris - HCl, pH 7.5, agus 0.05% Tween 20) le 5% bainne tioram neo-reamhar aig teòthachd an t-seòmair airson 30 min. Chaidh na buill-bodhaig an uairsin a thoirt a-steach le antibodies bun-sgoile an aghaidh DPYSL2 (1: 500, Novus Biologicals, Littleton, CO, na SA), GABRB2 (1: 1000, Abcam, Cambridge, MA, USA), agus CNR1 (1: 100, Santa Cruz Biotechnology , Inc., Santa Cruz, CA, USA), DUSP4 (1: 500, MybioSource, San Diego, CA, na SA), agus PI15 (1: 500, MybioSource, San Diego, CA, USA) ann an TBS-T le 5 % bainne tioram neo-reamhar aig 4 ° C thar oidhche, agus an uairsin le antibodies àrd-sgoile iomchaidh an dàrna cuid an aghaidh luch bó (1: 1,000, Bith-theicneòlas Santa Cruz) no anti-coineanach gobhair (1: 1,000, Comharradh cealla, Beverly, MA, USA ) ceangailte ri horseradish peroxidase aig teòthachd an t-seòmair airson 1 h. Chaidh lorg comharran a dhèanamh a ’cleachdadh chemiluminescence le reagent ECL (cùram-slàinte GE, Piscataway, NJ, USA). Rinn sinn tomhas air toraidhean blot an iar a ’cleachdadh bathar-bog anailis TotalLab 1D (Dynamics Neo-shreathach, Newcastle upon Tyne, RA). An uairsin, chaidh luach co-mheas densitometry a thomhas le bhith a ’roinneadh luach densitometry gach sampall mar a chaidh a mhìneachadh an àite eile (29). Mar smachd airson gnàthachadh, chaidh sampall serum a thoirt còmhla bho 46 IGD agus sampaill smachd airson gach deuchainn. Chaidh cudromachd staitistigeil a dhearbhadh a ’cleachdadh deuchainn Mann-Whitney - Wilcoxon neo-pharameatrach le stairsneach P-value de 0.05.
toraidhean
Feartan nan cuspairean sgrùdaidh
Tha na feartan eòlas-sluaigh agus clionaigeach de na cuspairean sgrùdaidh air an sealltainn ann an Clàr Table1.1. Nuair a rinn sinn coimeas eadar na buidhnean IGD agus smachd a rèir Sgèile Proneness Addiction Eadar-lìn Korean (K-Scale) mar a chaidh a mhìneachadh an àite eile (20, 30), sheall a ’bhuidheann IGD luach K-Scale meadhanach gu math nas àirde na a’ bhuidheann smachd (37 vs. 24, P = 3.81 × 10-6) (Clàr (Table1) .1). Bha an ùine meadhan-ùine seachdaineil a chaidh a chaitheamh air geamannan eadar-lìn anns a ’bhuidheann IGD gu math nas fhaide na ùine nan smachdan (18 vs. 5.25 h, P = 1.27 × 10-6). Ged nach robh eadar-dhealachadh mòr eadar dà bhuidheann a thaobh aois, teachd-a-steach mìosail taigheadais, fad foghlaim, dealbhadh blocaichean, agus toraidhean fo-fhaclan briathrachais an K-WISC, BIS, BInS, agus BAS.
MiRNAn air an cur an cèill gu eadar-dhealaichte eadar IGD agus smachdan
Gus faighinn a-mach miRNAs co-cheangailte ri IGD, ghabh sinn dòigh-obrach dà-cheum (lorg agus dearbhadh neo-eisimeileach). Chithear dealbhadh an sgrùdaidh agus an ro-innleachd iomlan ann am Figear S1 ann an Stuth Leasachail. Anns an ìre lorg, rinn sinn mion-sgrùdadh air pròifilean abairt miRNA de shamhlaichean 51 (smachdan 25 IGDs agus 26) a ’cleachdadh an sreath miRNA anns a bheil miRNAs 384. Chaidh ìrean faireachdainn de 10 miRNAs a lorg gu math eadar-dhealaichte eadar an IGD agus buidhnean smachd (Clàr (Table2) .2). Tha ìrean faireachdainn reusanta de na miRNAn 10 sin air an sealltainn ann am Figear Fòram1.1. Nam measg, chaidh dà (hsa-miR-423-5p agus hsa-miR-483-5p) a riaghladh agus ochd (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-26b-5p, hsa-miR-29b-3b chaidh hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-411-5p, agus hsa-miR-652-3p) a lughdachadh sa bhuidheann IGD.
Clàr 2
MicroRNAn air an cur an cèill gu eadar-dhealaichte (miRNAs) agus atharrachaidhean fillte.
| miRNA | Discovery | Dearbhadh | Cothlamadh | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| P-value | Atharrachadh fillte | P-value | Atharrachadh fillte | P-value | Atharrachadh fillte | |
| hsa-miR-15b-5p | 0.033 | 0.829 | 0.694 | 1.119 | 0.381 | 0.947 |
| hsa-miR-26b-5pa | 0.008 | 0.871 | 0.049 | 0.841 | 0.013 | 0.857 |
| hsa-miR-29b-3p | 0.005 | 0.400 | 0.560 | 1.187 | 0.089 | 0.647 |
| hsa-miR-125b-5p | 0.021 | 0.582 | 0.290 | 0.950 | 0.069 | 0.723 |
| hsa-miR-200c-3pa | 0.011 | 0.336 | 0.003 | 0.542 | 2.93 × 10-5 | 0.415 |
| hsa-miR-337c-5p | 0.009 | 0.385 | 0.582 | 0.872 | 0.020 | 0.553 |
| hsa-miR-411-5p | 0.004 | 0.322 | 0.336 | 1.282 | 0.158 | 0.595 |
| hsa-miR-423-5p | 0.026 | 1.387 | 0.189 | 0.955 | 0.518 | 1.175 |
| hsa-miR-483-5p | 0.018 | 1.861 | 0.765 | 1.413 | 0.211 | 1.647 |
| hsa-miR-652-3pa | 0.019 | 0.715 | 0.049 | 0.877 | 0.011 | 0.782 |
aDh'atharraich miRNAs gu mòr ann an seataichean lorg agus dearbhaidh ann an dòigh chunbhalach.
Dearbhadh qRT-PCR de na miRNAan tagraiche
Gus na miRNAan tagraiche 10 a dhearbhadh, rinn sinn qRT-PCR le seata dearbhaidh neo-eisimeileach (smachdan 20 IGDs agus 16) (Clàr S1 ann an Stuth Leasachail). Chaidh trì de na miRNAn sin (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, agus hsa-miR-652-3p) a lughdachadh gu mòr anns a ’bhuidheann IGD den t-seata dearbhaidh (Clàr (Table2) .2). Chaidh trì miRNAn eile (hsa-miR-337c-5p, hsa-miR-125b, agus hsa-miR-423-5p) a lughdachadh cuideachd anns a ’bhuidheann IGD ach cha robh iad gu mòr. Chaidh ceithir miRNA a tha air fhàgail (hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-29b-3p, hsa-miR-411-5p, agus hsa-miR-423-5p) a chuir an cèill an aghaidh an t-seata dearbhaidh. Nuair a chuir sinn còmhla na seataichean lorg is dearbhaidh (iomlan de chuspairean 45 IGD agus smachdan 42), bha na trì miRNA dearbhte gu cunbhalach cudromach (Clàr (Table2) .2). Tha fiosrachadh mionaideach, àiteachan cromosomal, sreathan aibidh, agus ìrean faireachdainn anns an CNS de na trì miRNA sin rim faighinn ann an Clàr S2 ann an Stuth Leasachail.
Buaidh sineirgisteach air atharrachadh aig an aon àm de na trì miRNAn air cunnart IGD
Gus measadh a dhèanamh air buaidh aonaichte nan trì miRNAn, chunnaic sinn na co-mheasan odds (ORs) de na ceithir fo-bhuidhnean (le atharrachaidhean 0, 1, 2, no 3 miRNA). chaidh atharrachadh miRNA a mhìneachadh leis an luach RQ mar a chaidh a mhìneachadh ann an Earrann “Stuthan agus Dòighean-obrach. ”Leis gun deach na trì comharran miRNAn a lughdachadh ann am buidheann IGD, chaidh miRNA aig an robh luach RQ nas ìsle na aon atharrachadh mar aon atharrachadh. Tha fiosrachadh mionaideach mu luach RQ gach cuspair sgrùdaidh airson na trì miRNA ri fhaighinn ann an Clàr S3 ann an Stuth Leasachail. Airson gach fo-bhuidheann, chaidh odds a thomhas mar an co-mheas de àireamh de smachdan ri IGDs, an uairsin chaidh gach OR a thomhas le bhith a ’roinneadh odds de gach fo-bhuidheann le odds den fho-bhuidheann gun atharrachaidhean miRNA sam bith. Sheall daoine le trì atharrachaidhean miRNA cunnart 22 tursan nas àirde na an fheadhainn gun atharrachadh miRNA sam bith (NO 22, 95% CI 2.29 - 211.11). Sheall ORs gluasad a bha a ’sìor fhàs leis an àireamh de miRNAn atharraichte bho 0 gu 3 (r2 = 0.996) (Figear (Figure22).
GO agus Sgrùdadh Slighe air Genes Targaid nan miRNAan tagraiche
Gus tuigse fhaighinn air gnìomhan nan trì comharran miRNA a chaidh an lughdachadh gu mòr anns a ’bhuidheann IGD, chaidh na ginean targaid aca a ro-innse a’ cleachdadh stòr-dàta miRWalk 2.0 (31). Bha ceithir gineadan 1,230 gu h-iomlan air an ro-innse gu cunbhalach mar thargaidean sìos an abhainn le ceithir algorithm (miRWalk, miRanda, RNA22, agus Targetscan) a ’cleachdadh stòr-dàta miRWalk (32-34) (Clàr S4 ann an Stuth Leasachail). Sheall mion-sgrùdadh beairteas seata gine a ’cleachdadh ToppFun ann an ToppGene Suite gu robh ceangal mòr eadar ginean targaid nam miRNAn sin ri slighean leasachaidh neòil leithid“ stiùireadh Axon ”agus teirmean GO leithid“ neurogenesis ”(Clàr S5 ann an Stuth Leasachail).
Cur an cèill nan ginean targaid ro-mheasta
Am measg nan ginean targaid sìos an abhainn de na trì miRNA, chaidh 140 a ro-innse aig an aon àm airson dà miRNA no barrachd (Clàr S4 ann an Stuth Leasachail). Gus sgrùdadh a dhèanamh a bheil na h-ìrean abairtean pròtain aca de na ginean targaid sìos an abhainn eadar-dhealaichte eadar na buidhnean IGD agus smachd, thagh sinn ginean 2 (DUSP4 agus PI15), a thathar an dùil mar thargaidean shìos an abhainn de gach miRNA 3 agus ginean 3 a bharrachd (GABRB2, DPYSL2, agus CNR1) bhon fheadhainn a chaidh a ro-innse airson 2 miRNAs agus rinn iad mion-sgrùdadh blot an iar leis na sampallan plasma bho 28 IGDs agus smachdan 28 rim faighinn airson an deuchainn. Rinn sinn coimeas eadar abairtean nan còig targaidean eadar an IGD agus buidhnean smachd le bhith a ’tomhas dèinead agus farsaingeachd a’ chòmhlain mar a chaidh a mhìneachadh an àite eile (29). Nam measg, tha na h-ìrean faireachdainn de smachdan DPYSL2 (28 IGDs agus 28, P = 0.0037) agus GABBR2 (27 IGDs agus 28 smachd, P Bha = 0.0052) gu math nas àirde anns a ’bhuidheann IGD (Figear (Figure3) .3). Ach, cha b ’urrainn dhuinn abairtean eadar-dhealaichte de CNR1 (P = 0.0853), DUSP4 (P = 0.5443), agus PI15 (P = 0.6346).
Deasbaireachd
Chaidh aithris gu bheil miRNAn an sàs ann an leasachadh neuronal (35, 36), agus thathas a ’cumail sùil air eadar-dhealachadh eadar-dhealaichte de miRNAs eanchainn ann an galairean inntinn-inntinn leithid sgitsophrenia (37). Mar sin, tha e soilleir gum faodadh cuairteachadh phròifilean miRNA a bhith nan biomarkers feumail airson IGD. Chaidh miRNAs a chuairteachadh a mholadh mar biomarkers airson eas-òrdughan neuropsychiatric eadar-mheasgte (38-40); ge-tà, chan eil fios fhathast dè na h-innleachdan molecular a tha air cùl leasachadh IGD a dh ’aindeoin cho cudromach sa tha e gu clionaigeach agus gu sòisealta. Gu sònraichte, cha deach sgrùdadh sam bith a dhèanamh air miRNAs co-cheangailte ri IGD. Bha amas an sgrùdaidh seo dà-fhillte. An toiseach, dh ’fheuch sinn ri miRNAan plasma co-cheangailte ri IGD a lorg. San dàrna àite, rinn sinn measadh air buaidh bith-eòlasach nan tagraichean miRNA le bhith a ’sgrùdadh abairt pròtain agus GO de ghinean targaid sìos an abhainn. Tro sgrìonadh genome-farsaing de phròifilean abairt miRNA agus dearbhadh sìos an abhainn de na tagraichean, lorg sinn an abairt sin de thrì miRNAs (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, agus hsa-miR-652-3p) gu math nas ìsle ann an euslaintich IGD na smachdan. Ged nach deach na pàtranan abairtean de sheachd tagraichean miRNA eile ath-aithris san dearbhadh, faodaidh e a bhith meallta àicheil air sgàth meud sampall beag san sgrùdadh seo. Gu ar n-eòlas, is e seo a ’chiad aithisg air a’ chomas gum faodadh pròifilean abairt miRNA fala a bhith nan biomarkers feumail airson IGD. Dh'fhaodadh measgachadh de na trì comharran miRNA a bhith na inneal beag ionnsaigheach airson daoine a tha ann an cunnart IGD a chomharrachadh tràth.
Chaidh aithris gu bheil na miRNAn a chaidh a chomharrachadh san sgrùdadh seo an sàs ann an eas-òrdughan neuropsychiatric eadar-mheasgte. Chaidh aithris gu bheil foillseachadh hsa-miR-200c ann am fuil air a lughdachadh ann an grunn eas-òrdugh inntinn-inntinn leithid sgitsophrenia (41) agus prìomh thachartasan trom-inntinn (42). Chaidh aithris gu robh miR-200c air a chur an cèill nas motha ann am bloighean synaptic na ann am forebrain iomlan (43) agus cuideachd a bhith co-cheangailte ri bàs cealla neuronal (44). Stèidhichte air na h-aithisgean roimhe seo, tha miR-200c an sàs ann an leasachadh neurode agus faodaidh e a bhith co-cheangailte ri eas-òrdughan neuropsychiatric ma tha an abairt aige air a chuir dragh. Tha grunn sgrùdaidhean air ceangal a mholadh eadar miR-652 agus cunnart eas-òrdughan neuropsychiatric. Coltach ris an dòigh-obrach againn, gus biomarkers fala a chomharrachadh airson sgitsophrenia, Lai et al. rinn iad sgrùdadh TLDA le euslaintich sgitsophrenia agus smachdan àbhaisteach, agus lorg iad gu robh seachd miRNAn a ’toirt a-steach hsa-miR-652 air an cur an cèill gu eadar-dhealaichte ann an euslaintich sgitsophrenia (45). Anns an sgrùdadh às deidh sin, dhealbhaich iad modail ro-innse a ’cleachdadh dàta abairt miRNA agus shoirbhich iad le sgitsophrenia bho smachd àbhaisteach (46). Chaidh abairt atharraichte de hsa-miR-652 a choimhead cuideachd ann an deoch-làidir (47). Chaidh Hsa-miR-26b a lorg gu bhith air a ghnìomhachadh aig àm eadar-dhealachadh cealla neuronal (48). Perkins et al. aithris gu robh hsa-miR-26b air a lughdachadh ann an cortex prefrontal euslaintich sgitsophrenia (49).
Ged nach eil fianais dhìreach ann gus taic a thoirt don dàimh eadar an abairt iomagaineach de na miRNAn sin agus pathophysiology IGD, is urrainn dhuinn a dhearbhadh gum faodadh dysregulation de na miRNAs sin a bhith co-cheangailte ri pathophysiology de IGD stèidhichte air grunn aithisgean roimhe air na ginean sìos an abhainn a bha sinn a ’ro-innse. . Tha cuid de na gineadan sìos an abhainn de na trì miRNAn mar GABRB2, CNR1, NRXN1, agus DPYSL2 Thathas ag aithris gu bheil ceangal aca ri eas-òrdughan neuropsychiatric. Tha searbhag gamma-aminobutyric (GABA) na phrìomh neurotransmitter inhibitory anns an CNS. Tha mì-riaghladh an gabhadair GABA, an sàs ann an eas-òrdughan neuropsychiatric a ’toirt a-steach cuir-ris, iomagain, agus trom-inntinn (50), a tha cuideachd nam prìomh fheartan de IGD (8). Thathas ag aithris gu bheil polymorphisms ginteil ann an gineadan gabhadair GABA co-cheangailte ri tràilleachd deoch làidir agus sgitsophrenia (51, 52). Tha 2 (DPYSL2) coltach ri dihydropyrimidinase na bhall den teaghlach pròtain meadhain freagairt collapsin, aig a bheil pàirt ann an co-chruinneachadh microtubule, soidhneadh synaptic, agus riaghladh fàs axonal. Mar thoradh air an sin, chaidh am moileciuil seo a mholadh mar biomarker airson eas-òrdugh inntinn-inntinn (53, 54). Polymorphism anns an DPYSL2 chaidh aithris cuideachd gu robh ceangal aig gine le eas-òrdugh cleachdadh deoch làidir (55). Tha aithisgean roimhe agus an dàta againn a ’moladh gu bheil cus buaidh aig GABRB2 agus DPYSL2, targaidean shìos an abhainn de na miRNAs a tha fo smachd, air pathogenesis eas-òrdughan neuropsychiatric a’ toirt a-steach IGD. Tha seòrsa gabhadair cannabinoid 1 (CNR1) na heteroreceptor presynaptic a bhios ag atharrachadh leigeil ma sgaoil neurotransmitter agus tha buairidhean ann an comharrachadh cannabinoid co-cheangailte ri grunn eas-òrdughan neuropsychiatric (56). Polymorphism ginteil de CNR1 tha fios gu bheil gine co-cheangailte ri eisimeileachd stuthan ann an Caucasians (57). Ann am modail radan, bidh gnìomhachd hippocampus ventral CNR1 a ’cur dragh air giùlan sòisealta àbhaisteach agus eòlas (58). Tha fios gu bheil atharrachadh ginteil anns an teaghlach NRXN an sàs ann an eas-òrdughan neuropsychiatric eadar-mheasgte a ’toirt a-steach tràilleachd (59).
Gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidh bith-eòlasach nan trì tagraichean miRNA ann an dòigh nas dìriche, rinn sinn sgrùdadh air abairt pròtain de na gineadan targaid sìos an abhainn. Air sgàth cho beag de shampaill plasma a bha rim faighinn, de na tagraichean cumanta 140 (air an ro-aithris mar shìos an abhainn de 2 no barrachd miRNAs), rinn sinn sgrùdadh air targaidean 5 (GABRB2, DPYSL2, CNR1, DUSP4, agus PI15) le blot an iar agus dhearbh sinn an abairt sin de GABRB2 agus bha DPYSL2 gu math nas àirde anns a ’bhuidheann IGD. Tha aithisgean roimhe agus an dàta againn a ’moladh gum faodadh cus buaidh a bhith aig cus cuideam de GABRB2 agus DPYSL2, targaidean shìos an abhainn de na miRNAs a tha fo smachd, airson pathogenesis eas-òrdughan neuropsychiatric a’ toirt a-steach IGD. Tha toraidhean GO agus mion-sgrùdadh slighean air slighean leasachaidh neural cuideachd a ’toirt taic do bhuaidh neurobiologic nan comharran miRNA. B ’e lorg inntinneach eile a’ bhuaidh sineirgisteach a bh ’aig atharrachadh aig an aon àm air na miRNAn. Sheall daoine fa leth le ìsleachadh de gach miRNA 3 22 uair cunnart nas àirde na an fheadhainn gun ìsleachadh, agus mheudaich na ORs ann an dòigh a bha an urra ri dòsan. Ged a bha CI airson na trì atharrachaidhean sin farsaing air sgàth meud sampall cuibhrichte, bha an co-dhàimh adhartach soilleir (r2 = 0.996) a ’toirt taic do bhuaidh synergistic nan trì miRNA.
Ged a fhuair sinn a-mach na comharran miRNA co-cheangailte ri IGD agus bha cunnart 22 aig daoine fa leth leis na trì atharrachaidhean miRNA nas àirde na an fheadhainn gun atharrachaidhean miRNA, tha grunn chuingealachaidhean san sgrùdadh seo. An toiseach, mheudaich am meud sampall beag an coltas gum biodh comharran miRNA cudromach eile ann. San dàrna àite, leis nach robh an dàta againn gu leòr gus soilleireachadh a bheil na pròifilean plasma miRNA an dàrna cuid nan adhbhar no buaidh, chan urrainn dhuinn dreuchdan bith-eòlasach nan comharran neo-ionnsaigheach sin a dhearbhadh ann an suidheachadh clionaigeach. Faodaidh tuilleadh cunntasachd miRNA agus am mion-sgrùdadh gine sìos an abhainn a ’cleachdadh clò eanchainn daonna bho bhanca teannachadh eanchainn freagairt nas dìriche a thoirt seachad. Bhiodh mion-sgrùdadh teannachadh eanchainn le modail beathach eas-òrdugh gèam feumail cuideachd. San treas àite, air sgàth cho beag de shampaill plasma a bha rim faighinn, rinn sinn sgrùdadh air dìreach còig moileciuil tagraiche sìos an abhainn. Bidh e na chuideachadh ann a bhith a ’sgrùdadh barrachd thargaidean sìos an abhainn le seata sampall nas motha gus tuilleadh tuigse fhaighinn air uidheamachd moileciuil IGD.
Ann an geàrr-chunntas, tro sgrìonadh genome-farsaing de phròifilean abairt miRNA agus dearbhadh neo-eisimeileach, lorg sinn trì miRNAs co-cheangailte ri IGD (hsa-miR-200c-3p, hsa-miR-26b-5p, agus hsa-miR-652-3p). Thathas ag aithris gu bheil mòran de na ginean sìos an abhainn aca an sàs ann an eas-òrdughan neuropsychiatric eadar-mheasgte, agus tha dearbhadh deuchainneach air atharrachadh atharraichte de na ginean sìos an abhainn a ’toirt taic do bhuaidh nan miRNAn a chaidh a chomharrachadh san sgrùdadh seo. Fhuair sinn a-mach gu bheil daoine fa leth le ìsleachadh de na trì miRNA ann an cunnart àrd bho IGD. Còmhla ris na factaran cunnairt clionaigeach no àrainneachdail aithnichte agus slatan-tomhais breithneachaidh, faodaidh na co-dhùnaidhean againn eadar-theachd tràth a dhèanamh comasach gus daoine le cunnart nas àirde de IGD a chuideachadh.
Aithris Èisteachd
Chaidh an sgrùdadh seo aontachadh le Bòrd Lèirmheas Institiùdail Colaiste Meidigeach Oilthigh Caitligeach Korea (MC16SISI0120). Thug a h-uile com-pàirtiche agus am pàrantan cead fiosraichte sgrìobhte.
Cuibhreannan Ùghdar
Chuir ML agus HC gu co-ionnan ris a ’phàipear seo. Dhealbhaich ML, D-JK, agus Y-JC an sgrùdadh. Rinn SJ, S-MC, YP, DC, agus JL deuchainnean agus gineadh dàta. Chruinnich J-WC, S-HP, J-SC, agus D-JK sampallan fala agus fiosrachadh clionaigeach. Rinn ML, HC, S-HY, agus Y-JC mion-sgrùdadh air dàta. Thug ML, HC, S-HY, agus Y-JC cunntas air an làmh-sgrìobhainn. Thug Y-JC sùil air a ’phròiseact.
Aithris mu Strì eadar Com-pàirt
Tha na h-ùghdaran ag ràdh gun deach an rannsachadh a dhèanamh às aonais dàimhean malairteach no ionmhasail sam bith a ghabhadh a mhìneachadh mar strì eadar com-pàirtean.
Footnotes
Maoineachadh. Fhuair an obair seo taic bho thabhartas bhon Phrògram Rannsachaidh Brain tro Bhunait Sgrùdaidh Nàiseanta Korea (NRF), air a mhaoineachadh le Ministrealachd an Saidheans agus ICT agus Dealbhadh airson an ama ri teachd (NRF-2015M3C7A1064778).
Material a bharrachd
Gheibhear an stuth a bharrachd airson an aiste seo air-loidhne aig http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyt.2018.00081/full#supplementary-material.
iomraidhean
;