Tha innstearan aiccetylase Histone a 'comasachadh cruthachadh roghainn nan com-pàirtichean ann am praochie prairie boireann (2013)

Nat Neurosci. Làmh-sgrìobhainn ùghdar; ri fhaighinn ann am PMC Jan 1, 2014.

Air fhoillseachadh ann an cruth deasaichte deasaichte mar:

Nat Neurosci. Jul 2013; 16 (7): 10.1038 / nn.3420.

Air fhoillseachadh air-loidhne Jun 2, 2013. doi:  10.1038 / nn.3420

PMCID: PMC3703824

NIHMSID: NIHMS477621

Gheibhear an dreach deasaichte deireannach den artaigil seo den artaigil aig Nat Neurosci

Faic artaigilean eile ann am PMC Dh'ainmich an artaigil foillsichte.

Rach gu:

Abstract

Anns a ’lamhallain prairie monogamous sòisealta (Microtus sideogaster), bidh matadh a ’toirt a-steach bannan-pòsaidh maireannach air an tòiseachadh le cruthachadh roghainn com-pàirtiche agus air an riaghladh le measgachadh de neurotransmitters a’ toirt a-steach oxytocin, vasopressin, agus dopamine. An seo rinn sinn sgrùdadh air dòighean epigenetic a dh’fhaodadh a bhith a ’toirt buaidh air riaghladh dà-bhann. Bidh sinn a ’sealltainn gu bheil an histone deacetylase inhibitors sodium butyrate agus TrichoStatin A (TSA) a’ comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann às aonais briodadh. Bha seo co-cheangailte ri ùrachadh sònraichte de gabhadairean oxytocin (OTR) agus vasopressin V1a (V1aR) anns na nucleus accumbens, tro àrdachadh ann an acetylation histone aig an neach-adhartachaidh aca. A bharrachd air an sin, chaidh casg a chuir air roghainn com-pàirtiche le comas TSA le bacadh OTR no V1aR anns na nucleus accumbens. Gu cudromach, bhrosnaich roghainn com-pàirtiche brosnaichte an aon riaghladh epigenetic de luchd-adhartachaidh gine OTR agus V1aR ri TSA. Mar sin tha na beachdan sin a ’nochdadh gu bheil TSA agus mating a’ comasachadh roghainn chom-pàirtiche tro thachartasan epigenetic, a ’toirt seachad a’ chiad fhianais dhìreach airson riaghladh epigenetic de cheangal càraid.

Ro-ràdh

Tha ceangal sòisealta na fheart riatanach de ghiùlan sòisealta daonna agus tha easbhaidhean inntinneil sòisealta nam feartan cumanta ann am mòran de dhuilgheadasan neuropsychiatric a ’toirt a-steach sgitsophrenia agus eas-òrdughan speactram autism, a bharrachd air tràilleachd agus trom-inntinn1. Na lamhallain prairie monogamous gu sòisealta (Microtus sideogaster) air nochdadh mar mhodal fìor inntinneach airson sgrùdadh a dhèanamh air bunaitean neurobiologic de cheangal sòisealta, leis gu bheil gach cuid obair-lann agus daoine fa leth a tha beò gu saor a ’stèidheachadh bannan paidhir fad-ùine2-4, a tha air an tòiseachadh an toiseach le bhith a ’cruthachadh giùlan roghnach ceangailte ris a’ chom-pàirtiche, ris an canar roghainn com-pàirtiche5. Tha an cruthachadh seo de roghainn com-pàirtiche a ’toirt a-steach measgachadh de neurotransmitters agus siostaman hormonal, a’ gabhail a-steach na neuropeptides oxytocin agus vasopressin (AVP) agus dopamine mesolimbic5.

In coitcheann, tha cruthachadh roghainn com-pàirtiche air a mheadhanachadh tro AVP neurotransmission anns an pallidum ventral agus septum lateral (LS) ann an fireannaich, agus neurotransmission oxytocin anns na nucleus accumbens (NAcc) agus cortex prelimbic ann an lamhallain prairie boireann6-8.

Mar as trice an sàs ann an duais nàdurrach leithid matadh, bidh dopamine cuideachd ag obair mar eadar-mheadhanair èiginneach de roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie. Tha gnìomhachadh nan gabhadairean dopamine D2 (D2R) anns an NAcc a ’comasachadh ach tha gnìomhachd nan gabhadairean dopamine D1 (D1R) a’ cur bacadh air cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain fireann agus boireann9-11.

Gu cudromach, faodaidh atharrachaidhean ann an abairt gine de gabhadairean oxytocin agus AVP V1a, OTR agus V1aR, fa leth, buaidh mhòr a thoirt air roghainn com-pàirtiche. Ann an lamhallain prairie boireann, mar eisimpleir, tha cus cuideam air OTR anns an NAcc a ’comasachadh roghainn chom-pàirtiche às aonais matadh12-14.

Seachad air riaghladh ceangal paidhir, tha oxytocin agus AVP cuideachd an sàs ann an raon farsaing de ghiùlan sòisealta, a ’toirt a-steach aithne shòisealta, ionnsaigh, agus cùram màthaireil15, 16. Gu sònraichte, bidh briseadh den ghiùlan mu dheireadh ann an creimich a ’brosnachadh neuroadaptations maireannach tro uidheamachdan epigenetic, a’ toirt a-steach methylation DNA de alpha receptor estrogen17 agus ginean AVP18, a bharrachd air acetylation histone den neach-adhartachaidh gabhadair glucocorticoid19. A bharrachd air an sin, luchd-bacadh histone deacetylase (HDAC), ag àrdachadh faireachdainn gine tro barrachd acetylation histone anns an eanchainn creimich20, is urrainn dhaibh na h-atharrachaidhean sin a thionndadh air ais19, agus buaidh dhìreach a thoirt air giùlan sòisealta leithid gabhaltachd gnèitheasach21. Gu cudromach, ann an loidhne cealla aillse sgamhain, tha an inhibitor HDAC trichostatin A (TSA) a ’neartachadh tar-sgrìobhadh OTR gu dìreach le bhith a’ brosnachadh acetylation histone gu h-ionadail.22.

Mar sin, faodar bunait epigenetic ann an cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie a mholadh. Gus an ro-bheachd seo a dhearbhadh, rinn sinn measadh an toiseach air buaidhean dà neach-dìon HDAC, sodium butyrate (NaB) agus TSA, air cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain boireann inbheach. Às deidh sin, rinn sinn sgrùdadh air na h-uidheaman moileciuil a bha a ’meadhanachadh buaidhean TSA ann a bhith a’ brosnachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann. Mu dheireadh, dh ’fheuch sinn ri faighinn a-mach an robh na h-atharrachaidhean epigenetic a bhrosnaich TSA rè co-sheòrsachadh cuideachd air am brosnachadh le bhith a’ tighinn còmhla.

toraidhean

Tha làimhseachadh TSA a ’comasachadh roghainn chom-pàirtiche

Chaidh lamhallain boireann boireann naïve a thoirt a-steach gu intracerebroventricularly (icv.) le CSF no CSF ​​anns a bheil 0.08, 0.4 no 4 ng de TSA dìreach mus deach an co-chòmhnaidh 6-uair le fireannach gun a bhith a ’briodadh, agus chaidh roghainn a chom-pàirtiche a dhearbhadh an uairsin. Chan eil sia uairean de cho-sheòrsachadh le fireannach gun a bhith a ’briodadh a’ brosnachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain boireann4 agus mar sin chaidh am paradigm giùlain seo a chleachdadh gu mòr gus buaidh diofar dhrogaichean a mheasadh air cruthachadh roghainn roghainn chom-pàirtichean5.

Sheall beathaichean le làimhseachadh CSF conaltradh taobh ri taobh neo-roghnach leis a ’chom-pàirtiche no an srainnsear às deidh 6 uairean de cho-sheòrsachadh gun a bhith a’ tighinn còmhla (t15= 0.76, P = 0.46; Fig. 1a). Ach, bhiodh beathaichean a chaidh an làimhseachadh le TSA aig a h-uile dòs a chaidh a dhearbhadh a ’caitheamh barrachd ùine leis a’ chom-pàirtiche na leis a ’choigreach (t8= 4.35, P = 0.002 airson an TSA 0.08 ng buidheann; t15= 3.63, P = 0.002 airson an TSA 0.4 ng buidheann; agus t8= 2.58, P = 0.03 airson an TSA 4 ng buidheann). Gu cudromach, cha deach eadar-dhealachaidhean buidhne sam bith a lorg ann an gnìomhachd locomotor (F3,46 = 1.25, P= 0.30, Fig. 1b) agus cha deach giùlan ionnsaigheach sam bith leis a ’bhoireannaich deuchainn a dh’ ionnsaigh an dàrna cuid an coigreach no an com-pàirtiche, a ’sealltainn gu robh buaidhean TSA sònraichte air roghainn shòisealta, seach a bhith àrd-sgoile ri atharrachadh locomotion no aimhreit shòisealta don choigreach.

Figear 1  

Tha in-stealladh trom de trichostatin A (TSA) a ’comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann às aonais briodadh. (a) Bha an fheadhainn bhoireann le sruthan cerebrospinal (CSF) a bha fosgailte do fhireannach airson uairean 6 às aonais briodadh a ’nochdadh neo-roghnach ...

Gus sgrùdadh a dhèanamh a bheil TSA a ’neartachadh acetylation histone ann an structaran eanchainn a tha an sàs ann an cruthachadh roghainn com-pàirtiche, chaidh baidse fa leth de bhoireannaich a thoirt a-steach leis an dòs meadhanach de TSA (0.4 ng) agus a ’fuireach còmhla ri fireannach às aonais matadh rè uairean 30 min, 2 no 9. Gu sònraichte, cha b ’urrainnear eadar-dhealachadh mòr sam bith ann an ìrean acetylation histone H3 acetylation (Lys14) a lorg aig àm sam bith anns an dà chuid NAcc agus putamen caudate (P > 0.05 airson a h-uile buidheann, Fig. 1c & d). Tha seo a ’sealltainn gu bheil TSA a’ comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche às aonais matadh, a dh ’aindeoin nach toir e buaidh air acetylation histone cruinne H3 anns an NAcc no na putamen caudate.

Gu cudromach, bha sodium butyrate cuideachd a ’comasachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann às deidh co-sheòrsachadh le fireannach airson uairean 6 gun a bhith a’ briodadh, co-cheangailte ri àrdachadh ann an acetylation histone cruinne H3 (Lys14) anns an NAcc (Figear Leasachail 1). Mar sin dh'fhaodadh buaidhean TSA air cruthachadh roghainn com-pàirtiche a bhith air an ath-riochdachadh le inhibitor HDAC eile, a ’moladh gum bi casg HDAC an sàs, seach buaidh neo-shònraichte TSA ann a bhith a’ comasachadh roghainn com-pàirtiche. A ’beachdachadh gu bheil TSA na inhibitor HDAC clas I / II nas sònraichte agus nas grinne23, 24, agus gu robh buaidhean giùlain TSA nas fhollaisiche na NaB, thagh sinn TSA a chleachdadh thairis air NaB airson sgrùdadh a dhèanamh air na co-dhàimhean moileciuil sònraichte anns na pàirtean a leanas den sgrùdadh.

Càirdeas moileciuil de roghainn com-pàirtiche air a chomasachadh le TSA

Mar a tha eadar-dhealachaidhean ann an ìrean faireachdainn gine ann an lagan NAcc air a bhith co-cheangailte ri ro-innleachdan mataidh eadar lamhallain monogamous agus neo-monogamous, agus le atharrachadh ann an cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie gu sònraichte12, 13, 25, 26, rinn sinn measadh an robh ceangal eadar cruthachadh roghainn com-pàirtiche le comas TSA agus atharrachaidhean ann an abairt gine anns an NAcc.

Làimhseachadh TSA (0.4 ng, icv.) a ’toirt a-steach àrdachadh ann an ìrean OTR mRNA anns an NAcc às deidh 2 uairean de cho-sheòrsachadh an taca ri smachdan air an làimhseachadh le CSF (t10 = 2.38, P = 0.038, Fig. 2a), bha sin buailteach a bhith air a chumail suas às deidh 9 uairean de cho-sheòrsachadh (t9 = 2.17, P = 0.058, Fig. 2b). Ged a dh ’fhaodadh àrdachadh beag ach gun àrdachadh mòr ann an V1aR mRNA a bhith air fhaicinn anns na h-uairean NAcc 2 às deidh an in-stealladh TSA, cha deach eadar-dhealachaidhean buidhne sam bith eile a lorg aig aon àm airson gin de na mRNAan eile a chaidh a thomhas, nam measg D1R no D2R (P > 0.05, Fig. 2a, b). Gu cudromach, cha deach eadar-dhealachaidhean buidhne sam bith fhaicinn anns na putamen caudate aig àm sam bith agus airson mRNA sam bith air a thomhas (P > 0.05 airson a h-uile buidheann, Fig. 2c, d), a ’moladh gun robh an àrdachadh ann an OTR mRNA a chaidh fhaicinn ann am beathaichean le làimhseachadh TSA sònraichte don NAcc. A bharrachd air an sin, cha robh an ùrachadh sin an làthair ach às deidh co-sheòrsachadh le fireannach, oir dh ’fhuirich ìrean mRNA OTR agus V1aR anns an NAcc gun atharrachadh 2 uairean às deidh in-stealladh TSA gun co-sheòrsachadh (OTR: 100.0% ± 11.70 airson buidheann CSF, 86.7% ± 12.11 airson TSA buidheann, t12 = 0.79, P = 0.444; V1aR: 100.0% ± 26.24 airson buidheann CSF, 92.3% ± 13.75 airson buidheann TSA, t9 = 0.27, P = 0.791).

Figear 2  

Làimhseachadh TSA (0.4 ng) ag ath-riaghladh gabhadairean oxytocin (OTR) agus vasopressin (V1aR) ann an lamhallain prairie boireann aig àm co-sheòrsachaidh le fireannach às aonais matadh. Chaidh ìrean OTR mRNA (a, b) agus pròtain (e, f) ath-riaghladh às deidh uairean 2 (a, e) agus 9 ...

A rèir ìrean mRNA OTR nas àirde, bha beathaichean le làimhseachadh TSA cuideachd a ’taisbeanadh ìrean pròtain OTR nas àirde aig gach puing-ùine anns an NAcc (2 uairean: t10 = 2.34, P = 0.041; Uairean 9: t10 = 3.16, P = 0.01, Fig. 2e, f), ach chan e caudate putamen (t10 = 0.41, P = 0.69, Fig. 2g, h). Gu inntinneach, ged nach b ’urrainnear atharrachadh mòr sam bith air ìrean mRNA V1aR a lorg anns an NAcc aig 2 no 9 uairean às deidh an in-stealladh TSA (Fig. 2a, b), chaidh ìrean pròtain V1aR a mheudachadh gu mòr aig uairean 9, an coimeas ri beathaichean le làimhseachadh CSF, anns an NAcc (t9 = 3.46, P = 0.007, Fig. 2f) ach gun a bhith a ’caoidh putamen (t10 = 0.98, P = 0.35, Fig. 2h). Ged le cuid de dh ’atharrachaidhean, cha tug rianachd TSA buaidh mhòr air ìrean pròtain D1R agus D2R anns na NAcc agus putamen caudate (P > 0.05, Fig. 2e-h).

Bidh TSA a ’comasachadh acetylation histone de oxtr agus avpr1a

Bha an àrdachadh anns gach cuid an mRNA agus na h-ìrean pròtain airson OTR às deidh co-sheòrsachadh às deidh làimhseachadh TSA a ’moladh gum biodh e coltach gun do mheudaich TSA tar-sgrìobhadh oxtr, an còdadh gine airson OTR, seach a bhith ag atharrachadh eadar-theangachadh no tionndadh a ’phròtain. A bharrachd air an sin, bha ìrean pròtain V1aR nas àirde anns an NAcc, co-cheangailte ri àrdachadh beag ach gun àrdachadh mòr ann an ìrean mRNA às deidh làimhseachadh TSA (Fig. 2). A ’beachdachadh gu bheil TSA na neach-dìon cumhachdach clas I agus II HDAC23, 24, 27, smaoinich sinn gun do mheudaich TSA acetylation histone aig an oxtr agus avpr1a luchd-adhartachaidh anns an NAcc, às deidh sin ag adhartachadh an tar-sgrìobhadh. Chaidh baidse ùr de bheathaichean fhaighinn icv. in-stealladh TSA (0.4 ng) agus a ’fuireach còmhla ri fireannach sa bhad gun a bhith a’ tighinn còmhla airson 30 mionaidean mus deach an ìobairt. Chaidh an uinneag ùine 30-min a thaghadh stèidhichte air obair a rinneadh roimhe ag aithris air àrdachadh as motha de acetylation histone às deidh in-stealladh TSA ionadail ann am radain is luchainn28, 29. Acetylation H3K14 aig an oxtr agus avpr1a chaidh luchd-adhartachaidh an uairsin a sgrùdadh le immunoprecipitation chromatin.

A rèir an àrdachaidh ann an OTR mRNA agus ìrean pròtain a chaidh fhaicinn roimhe, bha àrdachadh mòr ann am beathaichean le làimhseachadh TSA (+ 460%) ann an acetylation histone H3 aig an oxtr neach-adhartachaidh gine, an taca ri smachdan air an làimhseachadh le CSF, anns an NAcc (t10 = 5.88, P = 0.0002), ach chan e rabhadh a th ’ann am putamen (t9= 0.31, P = 0.76, Fig. 3a). A bharrachd air an sin, acetylation histone H3 aig an avpr1a chaidh an neach-adhartachaidh àrdachadh gu mòr 30 min às deidh rianachd TSA (+ 196%) anns an NAcc (t10 = 3.12, P = 0.01) ach gun a bhith a ’caoidh putamen (t9= 0.38, P = 0.71), an taca ri smachdan air an làimhseachadh le CSF (Fig. 3b). Mar sin, mheudaich TSA làrach acetylation histone gu sònraichte anns an NAcc cho tràth ri 30 mionaidean às deidh toiseach a ’cho-chòmhnaidh le fireannach.

Figear 3  

Tha làimhseachadh TSA a ’neartachadh acetylation histone de oxtr agus avpr1a luchd-adhartachaidh aig àm co-chòmhnaidh le fireannach às aonais matadh. Acetylation histone H3 (Lys14) aig oxtr (a) agus avpr1a (b) chaidh luchd-adhartachaidh àrdachadh anns na nucleus accumbens (NAcc) ach cha robh ...

Bidh TSA a ’comasachadh roghainn chom-pàirtiche tro OTR agus V1aR

Bhon t-seata dheuchainnean roimhe, nochdaidh modal gnìomh moileciuil, far am bi co-chòmhnaidh, TSA potentiates histone acetylation aig an oxtr agus avpr1a luchd-adhartachaidh, às deidh sin ag adhartachadh an tar-sgrìobhadh agus a ’leantainn gu ìrean pròtain OTR agus V1aR nas àirde suas gu 9 uairean às deidh toiseach na h-ùine co-chòmhnaidh. Gu cudromach, tha a ’bhuaidh TSA seo sònraichte don làrach oir chan eil buaidh aig na putamen caudate air. An seo rinn sinn deuchainn a bheil an àrdachadh seo air a bhrosnachadh le TSA ann an OTR agus V1aR co-cheangailte ri bhith a ’comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche. Fhuair lamhallain prairie boireann stealladh taobh a-staigh NAcc de TSA (0.04ng gach taobh) le no às aonais in-stealladh ro-làimh (30minutes ro in-stealladh TSA, 0.5ng gach taobh) de CSF no CSF ​​anns a bheil aon de dhà antagonist OTR, OTA (B) agus OTA (T), no antagonist V1aR (V1aRA). Dìreach às deidh an in-stealladh TSA, bha na boireannaich a ’fuireach còmhla ri fireannach airson uairean 6 gun a bhith a’ tighinn còmhla, agus an uairsin deuchainn roghainn com-pàirtiche.

Cha do sheall beathaichean le làimhseachadh CSF roghainn com-pàirtiche (t5 = 0.17, P = 0.87, Fig. 4a). Ach, chaith beathaichean le làimhseachadh TSA mòran a bharrachd ùine ann an conaltradh taobh ri taobh leis an “companach” na leis an “coigreach”, a ’moladh gu bheil aon in-stealladh TSA gu dìreach a-steach don NAcc gu leòr gus cruthachadh roghainn com-pàirtiche a dhèanamh gun a bhith a’ tighinn còmhla (t5 = 7.04, P = 0.0009). Gu inntinneach, chuir bacadh air an dàrna cuid OTR no V1aR le bhith ro-làimhseachadh le OTA (B), OTA (T), no V1aRA casg air buaidhean TSA (P > 0.05 airson a h-uile buidheann). Seach nach deach eadar-dhealachaidhean buidhne sam bith a lorg ann an gnìomhachd locomotor (F4,32 = 1.89, P = 0.14, Fig. 4b), tha an dàta seo a ’moladh gu bheil TSA anns an NAcc a’ comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche tro mheadhanan OTR- agus V1aR-meadhanaichte ann an dòigh a tha sònraichte do ghiùlan.

Figear 4  

Tha roghainn com-pàirtiche air a chomasachadh le TSA a ’feumachdainn neurotransmission meadhan-ghabhadain oxytocin- (OTR) agus vasopressin (V1aR) anns na nucleus accumbens. (a) Bidh TSA a ’comasachadh roghainn chom-pàirtiche nuair a thèid a thoirt a-steach do na nucleus accumbens (0.04 ng gach taobh), ...

Bidh gintinn a ’brosnachadh neuroadaptations coltach ri TSA

Às deidh na beachdan a fhuair sinn roimhe, stèidhich sinn gu robh an comasachadh epigenetic de neurotransmission oxytocin agus vasopressin anns an NAcc boireann gu leòr gus cruthachadh roghainn com-pàirtiche a dhèanamh às aonais matadh. Gus sgrùdadh a dhèanamh a bheil na neuroadaptations sin cuideachd a ’tachairt nuair a tha an roghainn com-pàirtiche air a chruthachadh gu nàdarra, chaidh lamhallain prairie boireann a cho-fhlaitheachadh le fireannach rè uairean 24 an làthair matadh, a tha ag adhbhrachadh roghainn com-pàirtiche4, agus ìobairt. Chunnaic sinn àrdachadh anns an dà chuid OTR agus V1aR mRNA agus ìrean pròtain anns an NAcc, an taca ri boireannaich boireann naïve (OTR: + 38%, t10 = 2.68, P = 0.02 airson mRNA, agus + 58%, t8 = 3.05, P = 0.01 airson pròtain; V1aR: + 89%, t14= 2.53, P = 0.02 airson mRNA, agus + 26%, t20 = 2.23, P = 0.037 airson pròtain, Fig. 5a, b).

Figear 5  

Bidh co-sheòrsachadh le matadh a ’toirt àrdachadh ann an gabhadan oxytocin (OTR) agus vasopressin (V1aR) anns na nucleus accumbens (NAcc) de lamhallain prairie boireann. Bidh co-chòmhnaidh 24h le fireannach le matadh suas a ’riaghladh OTR (a) agus V1aR (b) mRNA agus pròtain ...

Mar a chaidh an dà chuid ìrean mRNA agus pròtain airson OTR agus V1aR a mheudachadh le bhith a ’fuireach còmhla ri bhith a’ tighinn còmhla, rinn sinn sgrùdadh a-rithist an robh an ùrachadh seo co-cheangailte ri àrdachadh epigenetic de oxtr agus avpr1a tar-sgrìobhadh genes. Mar sin chaidh baidse ùr de bhoireannaich còmhla ri fireannach airson uairean 6 le pronnadh agus acetylation H3K14 aig an oxtr agus avpr1a luchd-adhartachaidh air an tomhas le dìon-dìon chromatin. A rèir OTR agus V1aR mRNA agus ìrean pròtain, tha lamhallain prairie boireann a ’taisbeanadh acetylation H3K14 nas àirde aig an oxtr agus avpr1a luchd-adhartachaidh anns an NAcc, an taca ri boireannaich boireann naïve (oxtr: t9 = 2.64, P = 0.02; avpr1a: t9 = 2.91, P = 0.017 Fig. 5c, d). Tha an dàta seo a ’moladh gu bheil paradigms co-chòmhnaidh a bhios gu h-earbsach a’ brosnachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann a ’brosnachadh ath-riaghladh de abairt OTR agus V1aR anns an NAcc tro uidheamachdan epigenetic, mar a chaidh fhaicinn às deidh làimhseachadh TSA.

Deasbaireachd

Anns an sgrùdadh làithreach, tha sinn ag aithris airson a ’chiad uair riaghladh epigenetic de chruthachadh roghainn com-pàirtiche. An toiseach, sheall sinn gu bheil a bhith a ’sìor fhàs acetylation histone anns an NAcc le bhith a’ rianachd inhibitor HDAC a ’comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain inbheach boireann às aonais briodadh. Tcearc, nochd sinn fianais dhìreach gu bheil cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann am boireannaich air a stiùireadh gu epigenetically, mar a tha co-sheòrsachadh agus a ’tighinn còmhla ri fireannach ag àrdachadh oxtr agus avpr1a abairt gine tro acetylation histone leasaichte anns an NAcc. Bha rianachd TSA ann an roghainn com-pàirtiche brosnaichte NAcc agus lean e gu ìrean nas àirde de OTR mRNA agus proteinichean anns an NAcc. A bharrachd air an sin, ged nach robh buaidh air acetylation histone cruinne H3 ann am boireannaich a bha air an làimhseachadh le TSA, bha beairteachadh comharraichte de acetylation histone aig an oxtr chaidh neach-adhartachaidh anns an NAcc a choimhead cho tràth ri mionaidean 30 às deidh rianachd TSA. Mu dheireadh, bha bacadh air OTR anns an NAcc gu leòr gus casg a chuir air roghainn com-pàirtiche a bha air a chomasachadh le TSA. Bho chaidh mion-atharrachaidhean coltach ri epigenetically a lorg an dèidh co-sheòrsachadh le matadh, fo mhodhan a bha aithnichte airson a bhith a ’brosnachadh roghainn com-pàirtiche, chuir an dàta againn modail air adhart airson riaghladh epigenetic de ghiùlan sòisealta. Dbidh uring co-chòmhnaidh le fireannach, TSA, no mating, gu luath a ’toirt a-steach acetylation histone H3 sònraichte aig an oxtr neach-adhartachaidh anns an NAcc a leasaicheas an tar-sgrìobhadh aige, a ’leantainn gu OTR mRNA nas àirde agus ìrean pròtain, a bhios an uairsin a’ comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche.

Ann an lamhallain prairie boireann, chan eil uairean 6 de cho-sheòrsachadh le fireannach gun a bhith a ’briodadh ag adhbhrachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche4, agus chaidh am paradigm giùlain seo a chleachdadh gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean làimhseachadh cungaidh-leigheis air inntrigeadh roghainn com-pàirtiche5. Anns an sgrùdadh againn, ged nach do leasaich smachdan le làimhseachadh saline no CSF ​​roghainn com-pàirtiche, rinn lamhallain prairie boireann a chaidh an làimhseachadh le NaB no TSA. Leis nach tug NaB no TSA buaidh air an locomotaibh iomlan, bha coltas ann gu robh a ’bhuaidh aca air roghainn com-pàirtiche sònraichte airson giùlan seach buaidhean dàrnach air locomotion. Chaidh a ’bhuaidh shònraichte seo de TSA a dhearbhadh tuilleadh leis na beachdan moileciuil againn. Gu dearbh, ged a chaidh a rianachd icv., bha e comasach dhuinn atharrachadh sònraichte de dhòigh-labhairt gine a lorg anns an NAcc ach chan ann ann an structar faisg air làimh, na putamen caudate. A bharrachd air an sin, eadhon taobh a-staigh ìrean NAcc, D1R agus D2R mRNA agus pròtain fhathast gun bhuaidh. Tha e coltach gu bheil an sònrachas sin na iongnadh airson neach-dìon farsaing HDAC mar TSA a tha a ’toirt buaidh air gach cuid clas I agus II HDAC. A dh ’aindeoin sin, chaidh aithris gu bheil TSA a’ toirt buaidh air dòigh-labhairt dìreach fo-sheata bheag de ghinean anns an genoma mamaire30-32, a ’toirt a-steach ann an luchagan20.

Sheall sinn an seo gu bheil acetylation de histone H3 air Lys14 aig an oxtr neach-adhartachaidh, atharrachadh co-cheangailte ri tar-sgrìobhadh gine leasaichte a ’toirt a-steach rè plastachd cerebral33, 34, a ’daingneachadh ìrean OTR mRNA agus pròtain nas àirde. Mar fhreagairt do TSA, acetylation histone aig an oxtr neach-adhartachaidh ag àrdachadh agus a ’comasachadh tar-sgrìobhadh ann an loidhne cealla daonna22, a ’toirt taic don lorg againn air sin oxtr faodar a riaghladh gu epigenetically. Leis gu robh bacadh ionadail de OTR anns an NAcc gu leòr gus casg a chuir air buaidhean giùlain TSA, tha an dàta againn a ’moladh gun robh an abairt TSA a bha air a bhrosnachadh le OTR anns an NAcc aig àm co-chòmhnaidh a’ toirt cothrom air cruthachadh roghainn com-pàirtiche. A bharrachd air an sin, dh ’adhbhraich 24 uairean de cho-chòmhnaidh le matadh, dòigh-obrach a dh’ aithnicheadh ​​gu h-earbsach roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann, àrdachadh co-ionann ann an abairt OTR anns an NAcc boireann. Tha seo ag aontachadh gu tur leis a ’chom-pàirt aithnichte de oxytocin agus an gabhadan aige ann an neurobiology cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain boireann. Bidh gintinn a ’brosnachadh àrdachadh ann an ìrean oxytocin extracellular anns an NAcc25, agus bidh dòrtadh ionadail de oxytocin a-steach don NAcc a ’comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche às aonais matadh8. A bharrachd air an sin, tha antagonists OTR a ’cur bacadh air cruthachadh roghainn com-pàirtiche air a bhrosnachadh le rianachd oxytocin no mating8, 35. Gu cudromach, tha an overexpression viral-mediated de OTR anns an NAcc boireann gu leòr gus cruthachadh roghainn com-pàirtiche a dhèanamh comasach12, 13.

A bharrachd air a bhith a ’neartachadh àite OTR, tha na toraidhean againn cuideachd a’ toirt seachad fianais airson gnìomhachd gine OTR a ghnìomhachadh tro uidheamachdan epigenetic rè co-sheòrsachadh le fireannach às aonais matadh. Gu dearbh, ged nach eil e gu leòr airson roghainn com-pàirtiche a bhrosnachadh, bidh an leithid de cho-sheòrsachadh gun a bhith a ’tighinn còmhla airson ùine ghoirid a’ gnìomhachadh nam pròiseasan neurobio-eòlasach a tha mar bhunait ri roghainn roghainn com-pàirtiche. Mar eisimpleir, bidh dà uair a thìde de fhireannach an-asgaidh ag adhbhrachadh àrdachadh beag ach neo-chudromach ann an leigeil oxytocin anns an NAcc boireann25. Mar sin faodar a mholadh gum bi TSA no NaB a ’neartachadh nan neuroadaptations air an adhbhrachadh le co-sheòrsachadh le fireannach, a’ comasachadh leasachadh roghainn com-pàirtiche. Gu h-inntinneach, chaidh aithris a dhèanamh air a leithid de chumhachd ann an creimich far a bheil luchd-dìon HDAC clas I agus II, a ’toirt a-steach NaB agus TSA, a’ comasachadh tachartas ionnsachaidh a dhaingneachadh nach toir cruthachadh cuimhne fad-ùine ann am beathaichean smachd.36, 37. A ’toirt taic don bheachd seo, amannan nas fhaide de cho-sheòrsachadh (me., 48hours) faodaidh e roghainn com-pàirtiche a bhrosnachadh eadhon às aonais matadh4. Tha e cuideachd cudromach a bhith mothachail gu bheil co-sheòrsachadh le matadh a bhrosnaich anns an NAcc boireann ùrachadh air abairt OTR agus V1aR tro na h-aon uidheaman epigenetic ris an fheadhainn a chaidh a choimhead às deidh co-sheòrsachadh le làimhseachadh TSA, a tha a ’sealltainn gu bheil TSA agus mating a’ toirt buaidh air na h-aon shlighean gus adhartachadh. cruthachadh roghainn com-pàirtiche. Gu cudromach, chan eil TSA a ’brosnachadh àrdachadh de OTR agus V1aR anns an NAcc boireann às aonais co-sheòrsachadh le fireannach. Gu h-iomlan, tha seo a ’toirt taic don bheachd gu bheil TSA a’ comasachadh roghainn com-pàirtiche a chruthachadh tro bhith a ’neartachadh neuroadaptations endogenous a tha air am brosnachadh gu nàdarra leis a’ cho-sheòrsachadh le fireannach, seach a bhith a ’gnìomhachadh leotha fhèin no na neuroadaptations eadar-dhealaichte.

OTha an sgrùdadh ur agad cuideachd a ’soilleireachadh àite deatamach aig NAcc V1aR ann an cruthachadh roghainn companach boireann, leis gu bheil beathaichean le làimhseachadh TSA a’ taisbeanadh ìrean V1aR nas àirde, a chuir an casg aca casg air cruthachadh roghainn com-pàirtiche le comas TSA.. A bharrachd air an sin, bha na buaidhean sin co-cheangailte ri acetylation histone nas àirde aig an avpr1a neach-adhartachaidh, a dh ’aindeoin nach eil àrdachadh mòr de V1aR mRNA dualtach mar thoradh air puing-ùine neo-optamach. Ged nach urrainn dhuinn riaghladh a dhèanamh air seasmhachd pròtain le TSA tro acetylation de phròtainean neo-histone38, tha an lorg seo a ’moladh, coltach ris an oxtr neach-adhartachaidh, is dòcha gum bi TSA a ’brosnachadh avpr1a tar-sgrìobhadh tro acetylation histone ionadail. Ged a chaidh iomradh a thoirt air tabhartas AVP ann an ceangal paidhir fhireannach5, tha a pàirt ann an giùlan a ’bhoireannaich fhathast connspaideach. Air aon làimh, an icv. Bidh in-stealladh AVP a ’comasachadh cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain fireann agus boireann, a tha air a chasg le bacadh bho aon chuid V1aR no OTR39. Air an làimh eile, an icv. bidh in-stealladh den antagonist V1aR a ’blocadh roghainn com-pàirtiche brosnaichte ann an lamhallain fireann, ach chan ann ann an lamhallain prairie boireann40. Ach, chleachd na sgrùdaidhean sin uile icv. stealladh, a ’cur casg air tuilleadh lèirsinn mu na structaran a tha na lùib. An seo, tha sinn a ’toirt seachad a’ chiad fhianais gum faod neurotransmission AVP taobh a-staigh an NAcc a bhith an sàs ann an cruthachadh roghainn com-pàirtiche anns na lamhallain boireann, fhad ‘s a tha a’ mhòr-chuid den litreachas a ’toirt cunntas air a bhith an sàs ann an diofar raointean leithid am pallidum ventral, septum fadalach, niuclas leabaidh an stria terminalis, agus amygdala ann an fireannaich5. Mar sin tha e inntinneach toirt fa-near gu robh bacadh an dàrna cuid OTR no V1aR ann an NAcc boireann gu leòr gus casg a chuir air cruthachadh roghainn com-pàirtiche às deidh làimhseachadh TSA, a ’moladh gum feum cruthachadh roghainn com-pàirtiche an dà chuid V1aR agus OTR a ghnìomhachadh.S an Iar- Ttha an lorg aige a rèir, agus a ’toirt taic, do shealladh nas tràithe ann an lamhallain prairie fireann gu bheil ruigsinneachd co-aontach air an dà chuid OTR agus V1aR anns an LS deatamach airson roghainn com-pàirtiche fo stiùir AVP6. A bharrachd air an sin, tha a bhith a ’faicinn àrdachadh sònraichte ann an ìrean OTR agus V1aR ann am beathaichean le làimhseachadh TSA a’ toirt tuilleadh taic don riatanas gum bi an AVP agus neurotransmissions oxytocin aig an aon àm airson ceangal paidhir.

Ann an co-bhonn ri oxytocin agus AVP, bidh an neurotransmission dopamine anns an NAcc ag atharrachadh ann an cruthachadh roghainn com-pàirtiche anns na lamhallain boireann9. Ged a tha matadh a ’brosnachadh sgaoileadh dopamine anns an NAcc9, thathas a ’cumail sùil air atharrachaidhean ann an ìrean gabhadain dìreach às deidh ùine leudaichte - nas fhaide na 24h- ​​de cho-sheòrsachadh le pronnadh, cudromach airson cumail suas ceangal paidhir10. A rèir na beachdan sin, bha laoidhean prairie boireann a chaidh an làimhseachadh le TSA a ’nochdadh roghainn com-pàirtiche gun eadar-dhealachadh mòr anns na gabhadairean dopamine D1R agus D2R. Mar sin, tha an neo-làthaireachd seo de riaghladh gabhadair dopamine a ’toirt seachad dearbhadh eile airson sònrachas TSA.

Tha an aithisg dàta againn airson a ’chiad uair na phàirt epigenetic ann an neurobiology de cheangal càraid, agus a’ moladh gu bheil TSA a ’brosnachadh“ stàite ceadaichte ”ann an lamhallain prairie boireann, a’ neartachadh an fhreagairt mholacileach nàdurrach don cho-sheòrsachadh, agus a ’brosnachadh cruthachadh eadar-obrachaidhean sòisealta nas làidire. a ’leantainn gu roghainn com-pàirtiche. Mar sin tha e tàmailteach a bhith a ’smaoineachadh gum faodadh roghainn com-pàirtiche le comas TSA a bhith air a neartachadh tuilleadh agus leantainn gu ceangal leantainneach. Ged a tha na HDACan sònraichte a tha an sàs fhathast ri bhith air an comharrachadh, bhiodh e inntinneach mar sin tuilleadh sgrùdaidh a dhèanamh air buaidhean TSA air giùlan eile co-cheangailte ris an ro-innleachd beatha monogamous ann an lamhallain prairie, leithid ionnsaigh roghnach agus cùram dà-phàrant. A ’beachdachadh air iomchaidheachd lamhallain nan prairie ann a bhith a’ cumadh na h-innleachdan neurobio-eòlasach a tha ann an ceangal paidhir ann an daoine5, agus na luchd-dìon HDAC gealltanach a tha mar-thà ann an deuchainnean clionaigeach24, 41, 42, tha an dàta againn na dhòigh airson cothroman cungaidh-leigheis ùra buaidh a thoirt air giùlan sòisealta.

Dòighean-obrach

Cuspairean

An lamhallain boireann boireann naïve (Microtus sideogaster) bho choloinidh briodachaidh obair-lann air an toirt air falbh aig 21 làithean a dh ’aois agus air an cumail ann am paidhrichean bràthar den aon ghnè ann an cèidsichean plastaig (12 × 28 × 16 cm) le uisge agus biadh air a thoirt seachad ad libitum. Chaidh a h-uile cèidse a chumail fo chearcall aotrom-dorcha 14: 10 h, agus bha an teòthachd timcheall air 20 ° C. Chaidh a h-uile beathach a thoirt seachad air thuaiream ann am buidhnean deuchainneach nuair a ràinig iad 70 - 90 làithean a dh'aois. Bha an àireamh de bheathaichean a chaidh a chleachdadh stèidhichte air sgrùdaidhean roimhe san raon leis a ’bhuidheann againn agus feadhainn eile, còmhla ri sgrùdadh cumhachd. Chaidh modhan deuchainneach aontachadh leis a ’Chomataidh Institiùdail Cùram is Cleachdadh Bheathaichean aig Oilthigh Stàite Florida.

drogaichean

Chaidh sodium butyrate (NaB), a chaidh a sgaoileadh ann an saline, agus Trichostatin A (TSA), a chaidh a sgaoileadh ann an giùlan fuadain cerebrospinal fluid (CSF, BioFluids, Rockville, MD) le chèile bho Sigma-Aldrich (St Louis, MO). Chaidh NaB a thoirt a-steach gu intraperitoneally (ip) aig dòs de 600 mg / kg, a tha aithnichte gu bhith a ’brosnachadh acetylation histone ann an grunn structaran eanchainn ann an luchagan43, 44. San aon dòigh, bha an raon dòs a chaidh a chleachdadh airson TSA stèidhichte air obair a rinneadh roimhe a ’dearbhadh a èifeachdas ann a bhith a’ brosnachadh tachartasan acetylation histone ionadail agus atharrachaidhean ann an abairt gine ann an creimich19, 20. An antagonist receptor V1aR roghnach V1aRA, d(CH2)5[Tyr (Me)] AVP, agus an antagonist OTR OTA (B), [d(CH2)5, Tyr (Mise)2, Thr4, Tyr-NH29] -OVT), fhaighinn bho Bachem (Torrance, CA). An dàrna antagonist OTR nas roghnaiche, OTA (T), dGly-NH2-d(CH2)5 [Tyr (Mise)2, Thr4] OVT45, air a thoirt seachad gu coibhneil leis an Dr. Maurice Manning (Oilthigh Toledo, OH). Chaidh na h-antagonists agus dòsan sin a chaidh a chleachdadh a thaghadh stèidhichte air sgrùdaidhean roimhe a ’sealltainn an roghnaidheachd airson an dàrna cuid V1aR no OTR, fa leth35, 39, 46-49.

Cannulation stereotaxic agus microinjection

Chaidh an fheadhainn bhoireann a thoirt a-steach le sodium pentobarbital (cuideam bodhaig 1mg / 10g), agus chaidh cannulae treòrachaidh stàilinn stainless 26 (Plastics One, Roanoke, VA) a chuir a-steach gu stereotaxically, ag amas air an ventricle lateral (aon-thaobhach; bàr sròin aig −2.5 mm, 0.6 mm rostral, 1.0 mm lateral, agus 2.6 mm ventral gu bregma) no làrach-sònraichte don NAcc (dà-thaobhach; bàr sròin aig −2.5 mm, 1.7 mm rostral, ± 1.0 mm dà-thaobhach, agus 4.5 mm ventral gu bregma). Às deidh làithean 3 fhaighinn air ais, fhuair cuspairean meanbh-bhualaidhean an dàrna cuid CSF no CSF ​​anns an robh diofar chruinneachaidhean de TSA. Nuair a chaidh antagonists roghnach airson OTR no V1aR a chleachdadh, chaidh an toirt a-steach 30 mionaidean ro TSA. Chaidh stealladh a dhèanamh le snàthad trast-thomhas 33 a leudaich 1 mm fon cannula treòrachaidh a-steach don raon targaid, ann an tomhas stealladh de 500 nL a-steach don ventricle lateral (icv.) no 200 nL gach taobh a-steach don NAcc. Bha an t-snàthad ceangailte ri stealladair Hamilton (Hamilton, Reno, NV) tro phìoban polyethylene-20 agus chaidh ìsleachadh plunger a dhèanamh gu slaodach, a ’feumachdainn mionaid 1 gach in-stealladh. Aig deireadh an deuchainn, chaidh a h-uile cuspair a ìobairt le decapitation luath agus chaidh na brains a thoirt a-mach gus dearbhadh suidheachadh cannulae le neach-amhairc dall gu suidheachaidhean deuchainneach. Bha cuspairean le cannulae mì-chothromach air an dùnadh a-mach bho sgrùdadh dàta.

Co-chòmhnaidh agus deuchainn roghainn com-pàirtiche

Dìreach a ’leantainn ip., icv., no in-stealladh dhrogaichean taobh a-staigh NAcc, bha na boireannaich a ’fuireach còmhla ri fireannach airson uairean 6 gun a bhith a’ briodadh. Chaidh às-làthaireachd mating a dhearbhadh le bhith a ’sgrùdadh giùlan videotaped. Airson a bhith a ’sgrùdadh na neuroadaptations a th’ air an adhbhrachadh le co-sheòrsachadh le boireannaich a tha a ’briodadh, boireannaich le prìomhachd estrogen (2µg gach latha, ip., airson làithean 3) chaidh an co-sheòrsachadh le fireannach rè uairean 6 no 24, agus chaidh làthaireachd mating a dhearbhadh a posteriori air videotape (a ’dol bho 6 gu buillean 11 rè a’ chiad 6 uairean de cho-sheòrsachadh).

Chaidh an deuchainn roghainn com-pàirtiche a dhèanamh sa bhad às deidh a ’cho-chòmhnaidh 6-uair, mar a chaidh a mhìneachadh roimhe11. Ann an ùine ghoirid, bha an t-inneal deuchainn trì seòmraichean a ’gabhail a-steach cèidse neodrach ceangailte ri dà chèidse co-shìnte, gach fear le beathach brosnachaidh -“ coigreach ”fireann air nach robh iad eòlach no“ companach ”fireann eòlach a chaidh a chleachdadh aig àm a’ cho-chòmhnaidh. Bha cuspairean boireann an-asgaidh gluasad air feadh an uidheamachd rè an deuchainn 3-uair, agus bha na fireannaich brosnachaidh ceangailte taobh a-staigh nan cèidsichean aca, a ’leigeil le conaltradh dìreach ri chèile. Chaidh clàr-bhidio a dhèanamh den t-seisean gu lèir agus chaidh ùine conaltradh taobh-ri-taobh a ’chuspair leis a’ chom-pàirtiche no an coigreach a thomhas a-rithist le neach-deuchainn le eòlas nach robh mothachail air na buidhnean bith-eòlasach. Chaidh roghainn com-pàirtiche a mhìneachadh mar chuspairean a ’caitheamh mòran a bharrachd ùine ann an conaltradh bodhaig ris a’ chom-pàirtiche an aghaidh coigreach, mar a chaidh a dhearbhadh le càraid, dà-earball t-test. A bharrachd air an sin, bha an uidheamachd trì-seòmar air a uidheamachadh le mothachairean photobeam, a ’ceadachadh gnìomhachd locomotor a dhearbhadh leis an àireamh de dh’ inntrigidhean boireann a-steach do na seòmraichean brosnachaidh. Mar sin tha an sgòr locomotor seo a ’leigeil leinn smachd a chumail air buaidhean adhartach àrd-sgoile nan drogaichean air giùlan boireann, leithid gnìomhachd coitcheann, iomagain, no sgrùdadh atharraichte air àrainneachd nobhail, mar a bhios a’ bhuidheann againn agus feadhainn eile a ’cleachdadh gu cumanta.12.

RNA agus às-tharraing phròtainean

Bha an fheadhainn bhoireann air an ìobairt le comas luath, agus chaidh brains a thoirt a-mach agus a reothadh sa bhad air deigh tioram. Chaidh earrannan coronal (200 µm) a ghearradh air cryostat agus reothadh air sleamhnagan miocroscop. Chaidh punches dà-thaobhach le trast-thomhas 1 mm a thoirt bhon NAcc agus putamen caudate, leis an fhear mu dheireadh na raon smachd, agus air a stòradh aig −80 ° C gus an tèid a ghiullachd. Chaidh RNA iomlan agus pròtanan a thoirt a-mach a ’cleachdadh protocol TRI-Reagent a rèir stiùireadh an neach-dèanamh (Ionad Sgrùdaidh Molecular, Cincinnati, OH).

Mion-sgrùdadh abairt pròtain le Western-blot

Às deidh dealachadh air gel polyacrylamide 10% (15% airson histones), chaidh pròtanan a ghluasad gu membran nitrocellulose agus air an toirt a-steach leis na antibodies bun-sgoile a leanas: anti-OTR (sc-8102, 1: 1000), -V1aR (sc-18096, 1: 500), -D1R (sc-33660, 1: 1000), -D2R (sc-9113, 1: 1000, Bith-theicneòlas Santa Cruz, Santa Cruz, CA), -actin (A2066, 1: 1000, Sigma Ald. St Louis, MO), no histone anti-acetyl H3 (Lys14, # 06 - 911, 1: 1000) agus H3 iomlan (# 05 - 928, 1: 1000, Millipore, Temecula, CA). Tha gach antibodies air an dearbhadh airson an cleachdadh ann an daoine, radain, agus luchainn, leis a bheil lamhallain prairie a ’roinn ceudadan àrda de homology (a’ dol bho 81 gu 96%). Às deidh gintinneachd le antibody àrd-sgoile HRP-conjugated, chaidh buill-bodhaig fhoillseachadh le ECL (ECL SuperSignal West Dura substrate, Pierce Biotechnologies, Rockford, IL) agus nochd iad air film Fuji XAR (Fuji Film, Tokyo, Iapan). Chaidh tomhas a dhèanamh a ’cleachdadh bathar-bog Ìomhaigh AIS 6.0 (Imaging Research, St. Catharines, Ontario, Canada), agus chaidh a h-uile comharra a dhèanamh àbhaisteach taobh a-staigh an aon membran gu actin, ach a-mhàin an comharra acetyl-H3 a chaidh a dhèanamh àbhaisteach gu comharra iomlan histone H3. Tha dàta àbhaisteach an uairsin air a chuir an cèill mar cheudad de bheathaichean le làimhseachadh CSF.

Freagairt slabhraidh polymerase fìor-ùine leth-chainnteach (RT-PCR)

Chaidh 0.5 µg de RNA iomlan a phròiseasadh airson synthesis DNA co-phàirteach, agus an uairsin air a sgrùdadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe50 le gnàthachadh don ghine nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase (NADH). Chaidh a h-uile ath-bhualadh a dhèanamh ann an trì-fhillte agus chaidh an sònrachas aca a dhearbhadh le bhith a ’leaghadh mion-sgrùdadh lùb agus dealachadh air gel Agarose 2%. Bha na sreathan primers air an cleachdadh mar a leanas: 5'-TCCAAGGCCAAAATCCGCACGG-3 '(Fwd) agus 5'-GGCAGAAGCTTCCTTGGGCGC-3' (Rev) airson OTR, 5'-GAGGTGAACAATGGCACTAAAACG-XGGGGGGG (Rev) airson AVP3aR, 5'- TTAACAACAATGGGGCTGTG-3 '(Airson) agus 1'-GGCATGAGGGATCAGGTAAA-5' (Rev) airson D3R, 5'-GTGAAGGCGCTGTGTGTGG ) airson D3R, agus 1'-CTATTAATCCCCGCCTGACC-5 '(Airson) agus 3'-GGAGCTCGATTTGTTTCTGC-5' (Rev) airson NADH. Tha an dàta àbhaisteach air a chuir an cèill mar cheudad de bheathaichean le làimhseachadh CSF.

Immunoprecipitation Chromatin

Chaidh acetylation histone H3 (Lys14) ann an NAcc agus punnd teannas putamen caudate a sgrùdadh le bhith a ’cleachdadh Kit Measgachadh pròtain G Magna ChIP (Millipore, Temecula, CA) a’ leantainn stiùireadh an neach-dèanamh. Goirid, às deidh a bhith a ’dol thairis le 1% formaldehyde, chaidh cromatin a rùsgadh le bhith a’ cleachdadh Misonix XL-2000 gu mìrean de 200 - 600 bp. Chaidh immunoprecipitation de acetylated histone H3 (Lys14) a thoirt gu buil an uairsin le 10µg de antibody anti acetyl-H3 (Lys14) (Millipore) thar oidhche aig 4 ° C. Às deidh washes, elution bho grìogagan agus tionndadh air ais tar-cheangal, chaidh DNA immunoprecipitated a ghlanadh agus a sgrùdadh ann an trì-fhillte le RT-PCR air àrd-ùrlar iCycler (faic gu h-àrd) le lùb àbhaisteach a-staigh air a dhèanamh bho shamhlaichean INPUT cruinnichte. Chaidh na primers a dhealbhadh gus leudachadh a dhèanamh air sgìre 236 bp-long suidhichte 128 bp suas an abhainn den chiad chòdachadh exon airson lamhallan prairie OTR (oxtr, Inntrigeadh Genbank #AF079980), no sgìre 192 bp-long suidhichte 141 bp suas an abhainn den chiad chòdachadh exon airson lamhallain prairie V1aR (avpr1a, Inntrigeadh Genbank #AF069304). Bha na sreathan mar a leanas: 5'-CTCCGGAGCCGGGGCTAAGT-3 '(Fwd) agus 5'-ACCGCTTCCCCGAGAGTAGGG-3' (Rev) airson oxtr, agus 5'-GGTGGACCAGCCAGACCCCA-3 '(Fwd) agus 5'-TGCAGAGCCAGGCGCTTTCC-3' (Rev) airson avpr1a. Chaidh gach sampall a dhèanamh àbhaisteach leis an luach INPUT fa leth, agus tha dàta an uairsin air a chuir an cèill mar cheudad de bheathaichean le làimhseachadh CSF.

Mion-sgrùdaidhean staitistigeil agus giullachd dàta

Airson mion-sgrùdaidhean air roghainn com-pàirtiche, chaidh beathaichean a bha a ’nochdadh giùlan suirghe rè na h-ùine co-chòmhnaidh no le cannulae mì-chothromach a thoirmeasg. Airson a h-uile mion-sgrùdadh molecol eile, chaidh aon phuing dàta aig a ’char as àirde airson gach buidheann bith-eòlasach a thoirmeasg nuair a chaidh a chomharrachadh mar outlier. Chaidh a ’mhòr-chuid de na deuchainnean ath-aithris, ach a-mhàin nuair a bha na toraidhean gu math soilleir. Chaidh an ùine a chaidh a chaitheamh ann an conaltradh taobh ri taobh le gach beathach brosnachaidh rè an deuchainn roghainn com-pàirtiche a sgrùdadh le paidhir dà-earbaill t-test. Chaidh na sgòran locomotion a sgrùdadh le bhith a ’cleachdadh dà-earball t-test (airson dà bhuidheann) no ANOVA aon-shligheach (airson barrachd air dà bhuidheann), agus nuair a tha e iomchaidh, Fischer's PLSD iar-hoc chaidh deuchainnean a dhèanamh le stairsneach brìgh de P <0.05. Às deidh dearbhadh a dhèanamh air riaghailteachd, chaidh a h-uile dàta eile a sgrùdadh le dà-earball t-test a ’gabhail ris eadar-dhealachaidhean co-ionann no neo-ionann a chaidh a dhearbhadh ro-làimh. Chaidh na mion-sgrùdaidhean staitistigeil uile a dhèanamh a ’cleachdadh bathar-bog StatView (Institiud SAS). Nuair a bhios dàta air a riaghailteachadh a rèir na smachdan aca (% de bhuidhnean CSF, Saline no Mating), chaidh na mion-sgrùdaidhean staitistigeil a dhèanamh air an dàta amh.

Material a bharrachd

Acknowledgments

Fhuair an obair seo taic bho thabhartasan Institiud Nàiseanta Slàinte Inntinn (NIMH) MHR21-083128 gu MK agus ZW, agus MHR01-058616 gu ZW Tha sinn cuideachd a ’toirt taing don Dr Maurice Manning airson tiodhlac fialaidh an antagonist OTR OTA (T).

Footnotes

 

Strì eadar com-pàirtean: Chan eil na h-ùghdaran a 'nochdadh strì eadar com-pàirtean

Obair an ùghdair

Rinn HW, FD agus YL na deuchainnean. Rinn HW agus FD mion-sgrùdadh air an dàta. Dhealbhaich HW, FD, ZW agus MK an sgrùdadh. Sgrìobh FD, ZW agus MK am pàipear. Bheachdaich na h-ùghdaran air fad air na toraidhean agus thug iad iomradh air an làmh-sgrìobhainn.

iomraidhean

1. Bora E, Yucel M, Allen NB. Neurobiology giùlan giùlan daonna: buaidh air eas-òrdugh inntinn-inntinn. Beachd gnàthach ann an inntinn-inntinn. 2009; 22: 320 - 325. [Sgaoileadh]
2. Tòmas JA, Birney EC. Siostam cùraim phàrantan agus suirghe an lamhallain, (Microtus sideogaster) Eag-eòlas Giùlan agus Sociobio-eòlas. 1979; 5: 171 - 186.
3. Getz LL, Hofmann JE. Eagrachadh sòisealta ann an lamhallain prairie a tha beò gu saor, (Microtus sideogaster) Eag-eòlas Giùlan agus Sociobio-eòlas. 1986; 18: 275 - 282.
4. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Leasachadh roghainnean com-pàirtiche ann an lamhallain prairie boireann (Microtus gysogaster): Dreuchd eòlas sòisealta is feise. Hormones agus Giùlan. 1992; 26: 339 - 349. [Sgaoileadh]
5. KA òg, Gobrogge KL, Liu Y, Wang Z. Neurobiology de cheangal paidhir: Seallaidhean bho chreimire sòisealta monogamous. Crìochan ann an Neuroendocrinology. 2011; 32: 53 - 69. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
6. Liu Y, Curtis JT, Wang Z. Bidh Vasopressin anns an septum fadalach a ’riaghladh cruthachadh bannan paidhir ann an lamhallain prairie fireann (Microtus gysogaster) Neo-eòlas giùlain. 2001; 115: 910 - 919. [Sgaoileadh]
7. Lim MM, Young LJ. Cuairtean neòil Vasopressin-eisimeil mar bhunait air cruthachadh bannan paidhir anns an lamhalinn monogamous prairie. Neo-eòlas. 2004; 125: 35 - 45. [Sgaoileadh]
8. Liu Y, Wang ZX. Bidh niuclas accumbens oxytocin agus dopamine ag eadar-obrachadh gus cruthachadh bannan paidhir a riaghladh ann an lamhallain prairie boireann. Neo-eòlas. 2003; 121: 537 - 544. [Sgaoileadh]
9. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Tha gabhadairean dopamine D2 anns na nucleus accumbens cudromach airson ceangal sòisealta ann an lamhallain prairie boireann (Microtus gysogaster) Neo-eòlas giùlain. 2000; 114: 173 - 183. [Sgaoileadh]
10. Aragona BJ, et al. Nucleus accumbens dopamine gu eadar-dhealaichte a ’toirt cruth agus cumail suas na ceangalan paidhir monogamous. Nat Neurosci. 2006; 9: 133 – 139. [Sgaoileadh]
11. Liu Y, et al. Bidh niuclas accumbens dopamine a ’dèanamh eadar-mheadhanachadh air adhbhrachadh le amphetamine ann an ceangal sòisealta ann an gnè creimich monogamous. Imeachdan Acadamaidh Nàiseanta nan Saidheansan. 2010; 107: 1217 - 1222. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
12. Keebaugh AC, Young LJ. Tha àrdachadh ann an abairt gabhadair oxytocin anns na nucleus accumbens de lamhallain prairie boireann ro-pubertal a ’neartachadh freagairteachd alloparental agus cruthachadh roghainn com-pàirtiche mar inbhich. Hormones agus Giùlan. 2011; 60: 498 - 504. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
13. Ross HE, et al. Tha buaidhean diofraichte aig eadar-dhealachadh ann an dùmhlachd gabhadair Oxytocin anns na nucleus Accumbens air giùlan ceangailte ann an lamhaichean monogamous agus polygamous. The Journal of Neuroscience. 2009; 29: 1312 - 1318. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
14. Pitkow LJ, et al. A ’comasachadh cumadh ceangail agus paidhir paidhir le Vasopressin Receptor Gene Transfer a-steach don Forebrain Ventral de Vole Monogamous. The Journal of Neuroscience. 2001; 21: 7392 - 7396. [Sgaoileadh]
15. Veenema AH. Gus tuigse fhaighinn air mar a bhios eòlasan sòisealta tràth-beatha ag atharrachadh giùlan sòisealta riaghlaichte oxytocin- agus vasopressin. Hormones agus Giùlan. 2012; 61: 304 - 312. [Sgaoileadh]
16. Francis DD, Young LJ, Meaney MJ, Insel TR. Tha eadar-dhealachaidhean a tha a ’tachairt gu nàdarra ann an cùram màthaireil co-cheangailte ri bhith a’ cur an cèill gabhadairean Oxytocin agus Vasopressin (V1a): Eadar-dhealachaidhean gnè. Iris Neuroendocrinology. 2002; 14: 349 - 353. [Sgaoileadh]
17. Champagne FA, et al. Cùram Màthaireil Co-cheangailte ri Methylation an Neach-adhartachaidh Estrogen Receptor-α1b agus Mìneachadh Glacadair-α estrogen ann an raon preoptic medial de shliochd boireann. Endocrinology. 2006; 147: 2909 - 2915. [Sgaoileadh]
18. Murgatroyd C, et al. Bidh prògraman methylation DNA dinamach a ’leantainn droch bhuaidh leantainneach air cuideam tràth-beatha. Nat Neurosci. 2009; 12: 1559 - 1566. [Sgaoileadh]
19. Breabadair ICG, et al. Prògramadh epigenetic le giùlan màthaireil. Nat Neurosci. 2004; 7: 847 - 854. [Sgaoileadh]
20. Breabadair ICG, Meaney MJ, Szyf M. Buaidh cùram màthaireil air an tar-sgrìobhadh hippocampal agus giùlan meadhan-imcheist anns a ’chlann a tha so-atharraichte nan inbhich. Imeachdan Acadamaidh Nàiseanta Saidheansan Stàitean Aonaichte Ameireagaidh. 2006; 103: 3480 - 3485. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
21. Bonthuis PJ, Patteson JK, Rissman EF. Togail Glacadh Feise: Dreuchdan Acetylation Chromatin, Estrogen Receptor-α, agus Hormones Ovarian. Endocrinology. 2011; 152: 3172 - 3181. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
22. Zhong S, Fields CR, Su N, Pan YX, Robertson KD. Tha casg Pharmacologic air atharrachaidhean epigenetic, còmhla ri pròifil abairt gine, a ’nochdadh targaidean nobhail de methylation DNA neo-sheasmhach agus deacetylation histone ann an aillse sgamhain. Oncogene. 2007; 26: 2621 - 2634. [Sgaoileadh]
23. Yoshida M, Horinouchi S, Beppu T. Trichostatin A agus trapoxin: probes ceimigeach nobhail airson àite acetylation histone ann an structar agus gnìomh chromatin. Bioessays. 1995; 17: 423 - 430. [Sgaoileadh]
24. Luchd-bacadh Monneret C. Histone deacetylase. Iris Eòrpach de Cheimigeachd Leigheasach. 2005; 40: 1 - 13. [Sgaoileadh]
25. Ross HE, et al. Caractar an t-siostam oxytocin a ’riaghladh giùlan ceangailte ann an lamhallain boireann. Neo-eòlas. 2009; 162: 892 - 903. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
26. Young LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Eadar-dhealachaidhean gnè ann an abairt gine receptor Oxytocin Central: Mion-sgrùdadh Coimeasach de sreathan brosnachaidh. Iris Neuroendocrinology. 1996; 8: 777 - 783. [Sgaoileadh]
27. Teaghlach Witt O, Deubzer HE, Milde T, & Oehme I. HDAC: Dè na targaidean a tha buntainneach ri aillse? Litrichean aillse. 2009; 277: 8–21. [Sgaoileadh]
28. Vecsey CG, et al. Bidh luchd-bacadh histone deacetylase ag àrdachadh cuimhne agus plastachd synaptic tro CREB: Gnìomhachadh tar-sgrìobhaidh a tha an urra ri CBP. The Journal of Neuroscience. 2007; 27: 6128 - 6140. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
29. Monsey MS, Ota KT, Akingbade IF, Hong ES, Schafe GE. Tha atharrachaidhean epigenetic deatamach airson daingneachadh cuimhne eagal agus plastachd synaptic anns an Amygdala lateral. PLoS AON. 2011; 6: e19958. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
30. Van Lint C, Emiliani S, Verdin E. Tha an abairt de bloigh bheag de ghinean ceallaichte air atharrachadh mar fhreagairt air hyperacetylation histone. Mìneachadh gine. 1996; 5: 245 - 253. [Sgaoileadh]
31. Mariadason JM, Oisean GA, Augenlicht LH. Ath-chlàradh ginteil ann an slighean de dh ’aibidh cealla cealla air a bhrosnachadh le searbhagan geir slabhraidh ghoirid: Coimeas le Trichostatin A, Sulindac, agus Curcumin agus Buaidh airson Chemoprevention de aillse coloin. Rannsachadh aillse. 2000; 60: 4561 - 4572. [Sgaoileadh]
32. Halsall J, Gupta V, O'Neill LP, Turner BM, Nightingale KP. Gu tric bidh ginean a ’faighinn fasgadh bho Hyperacetylation Global Histone air a bhrosnachadh le Luchd-bacadh HDAC. PLoS AON. 2012; 7: e33453. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
33. Ito K, Adcock I. Acetylation histone agus deacetylation histone. Bith-theicneòlas molecular. 2002; 20: 99 - 106. [Sgaoileadh]
34. DL Molfese. A ’toirt air adhart Neo-eòlas tro Epigenetics: Innealan Molecular airson Ionnsachadh agus Cuimhne. Neuropsychology leasachaidh. 2011; 36: 810 - 827. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
35. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Innealan ceallach de cheangal sòisealta. Hormones agus Giùlan. 2001; 40: 133 - 138. [Sgaoileadh]
36. Hawk JD, Florian C, Abel T. Bidh casg air inrahippocampal iar-thrèanadh de deacetylases histone clas I ag adhartachadh cuimhne àite-àite fad-ùine. Ionnsachadh & Cuimhne. 2011; 18: 367–370. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
37. Stefanko DP, Barrett RM, Ly AR, Reolon GK, Wood MA. Mion-atharrachadh cuimhne fad-ùine airson aithneachadh stuth tro bhacadh HDAC. Imeachdan Acadamaidh Nàiseanta nan Saidheansan. 2009; 106: 9447 - 9452. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
38. Yang XJ, Seto E. Lysine Acetylation: Crosstalk air a chòdachadh le atharrachaidhean posttranslational eile. Cell molecular. 2008; 31: 449 - 461. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
39. Cho MM, DeVries AC, Williams JR, Carter CS. A ’bhuaidh a th’ aig oxytocin agus vasopressin air roghainnean com-pàirtiche ann an lamhallain prairie fireann is boireann (Microtus gysogaster) Neo-eòlas giùlain. 1999; 113: 1071 - 1079. [Sgaoileadh]
40. Insel TR, Hulihan TJ. Uidheam sònraichte gnè airson ceangal paidhir: Oxytocin agus cruthachadh roghainn com-pàirtiche ann an lamhallain monogamous. Neo-eòlas giùlain. 1995; 109: 782 - 789. [Sgaoileadh]
41. Stimson L, La Thangue NB. Biomarcadairean airson ro-innse freagairtean clionaigeach do luchd-dìon HDAC. Litrichean aillse. 2009; 280: 177 - 183. [Sgaoileadh]
42. Iannitti T, Palmieri B. Tagraidhean Clionaigeach agus Deuchainneach Sòidiam Phenylbutyrate. Drogaichean ann an R&D. 2011; 11: 227–249. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
43. Kumar A, et al. Tha ath-dhealbhadh Chromatin na phrìomh inneal a tha mar bhunait air plastachd air a bhrosnachadh le cocaine ann an Striatum. Neuron. 2005; 48: 303 - 314. [Sgaoileadh]
44. Schroeder FA, Lin CL, Crusio WE, Akbarian S. Buaidhean coltach ri antidepressant an neach-dìon histone deacetylase, sodium Butyrate, anns an luchag. Eòlas-inntinn Bith-eòlasach. 2007; 62: 55 - 64. [Sgaoileadh]
45. Manning M, et al. Agonists peptide agus neo-peptide agus antagonists airson na gabhadairean vasopressin agus oxytocin V1a, V1b, V2 agus OT: innealan rannsachaidh agus riochdairean teirpeach a dh’fhaodadh a bhith ann. Ann an: Inga DN, Rainer L, luchd-deasachaidh. Adhartas ann an Rannsachadh Brain. Elsevier; 2008. pp. 473 - 512. [Sgaoileadh]
46. Witt DM, Insel TR. Bidh Antagonist Oxytocin Selective a ’daingneachadh cuideachadh le Progesterone airson giùlan feise boireann. Endocrinology. 1991; 128: 3269 - 3276. [Sgaoileadh]
47. Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. Dreuchd ann an vasopressin sa mheadhan le bhith a ’ceangal paidhrichean ann am famhalan prairieous monogamous. Nàdar. 1993; 365: 545 – 548. [Sgaoileadh]
48. Insel T. Oxytocin - neuropeptide airson ballrachd: fianais bho ghiùlan, autoradiographic gabhadain, agus sgrùdaidhean coimeasach. Psychoneuroendocrinology. 1992; 17: 3–35. [Sgaoileadh]
49. Insel T, Wang Z, Ferris C. Pàtrain de chuairteachadh gabhadain vasopressin eanchainn co-cheangailte ri eagrachadh sòisealta ann an creimich microtine. The Journal of Neuroscience. 1994; 14: 5381 - 5392. [Sgaoileadh]
50. Hollis F, Duclot F, Gunjan A, Kabbaj M. Eadar-dhealachaidhean fa leth ann am buaidh call sòisealta air anhedonia agus acetylation histone anns an radan hippocampus. Hormones agus Giùlan. 2011; 59: 331 - 337. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]