ડેલ્ટાફોસબી પરોક્ષ રીતે Cck પ્રમોટર્સ પ્રવૃત્તિને નિયંત્રિત કરે છે (2010)

મગજ રિઝ. 2010 મે 6; 1329: 10-20.

ઑનલાઇન 2010 માર્ચ 11 પ્રકાશિત. ડોઇ:  10.1016 / j.brainres.2010.02.081

પી.એમ.સી.આઈ.ડી.

જોહ્ન એફ. એનવાઈટ, III,1 મેગન વૉલ્ડ,1 મેડિસન પેડૉક,1 એલિઝાબેથ હોફમેન,1 રશેલ એરેય,2 સ્કોટ એડવર્ડ્સ,2 સેડ સ્પેન્સર,2 એરિક જે. નેસ્લેર,3 અને કોલીન એ. મેકક્લુંગ2, *

લેખકની માહિતી ► કૉપિરાઇટ અને લાઇસન્સની માહિતી ►

આ લેખના પ્રકાશકનું અંતિમ સંપાદિત સંસ્કરણ ઉપલબ્ધ છે મગજનો અનાદર

PMC માં અન્ય લેખો જુઓ ટાંકે પ્રકાશિત લેખ.

પર જાઓ:

અમૂર્ત

દુરુપયોગની દવાઓના લાંબા સમય સુધીના સંપર્ક દ્વારા પ્રેરિત કેટલાક મહત્વપૂર્ણ બાયોકેમિકલ, માળખાગત અને વર્તણૂકીય ફેરફારો, અત્યંત સ્થિર ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળ ΔFosB દ્વારા મધ્યસ્થી થાય છે. પાછલા કાર્યમાં દર્શાવવામાં આવ્યું છે કે 2 અઠવાડિયા માટે ઉંદરમાં os FosB overexpression સ્ટ્રાઇટમમાં અસંખ્ય જનીનોની અભિવ્યક્તિમાં વધારો તરફ દોરી જાય છે, જેમાંથી મોટાભાગના પછી ΔFosB અભિવ્યક્તિના 8 અઠવાડિયા પછી ડાઉનરેગ્યુલેટેડ થાય છે. રસપ્રદ વાત એ છે કે, મોટી સંખ્યામાં આ જનીનો પણ ચિકિત્સા પરિબળ સીઆરબીના ઓવરએક્સપ્રેસિંગને ઉંદરમાં અપregulated કરવામાં આવ્યા હતા. આ અભ્યાસમાંથી તે અસ્પષ્ટ હતું, જો કે ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB એ આ જનીનોને CREB દ્વારા નિયંત્રિત કરે છે. અહીં આપણે શોધી કાઢીએ છીએ કે ΔFosB overexpression ના 2 અઠવાડિયા સ્ટ્રાઇટમમાં CREB અભિવ્યક્તિ વધે છે, તે પ્રભાવ જે 8 અઠવાડિયા દ્વારા વિખેરી નાખે છે. પ્રારંભિક ઇન્ડક્શન એ મગજના પ્રદેશમાં ચોક્કસ લક્ષ્યાંક જીન પ્રમોટરોને વધારી શકાય તેવું સીઆરબી સાથે સંકળાયેલું છે. આશ્ચર્યજનક રીતે, એક જનીન કે જે અગાઉના અહેવાલોના આધારે શંકાસ્પદ CREB લક્ષ્ય હતું, cholecystokinin (Cck), સ્ટ્રેટમ માં સીઆરબી દ્વારા નિયંત્રિત ન હતી. ની નિયમન વધુ તપાસ કરવા માટે સીક ΔFOSB overexpression ને અનુસરીને, અમે પુષ્ટિ કરી છે કે ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB overexpression બન્નેમાં વધારો કરે છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ અને જનીન અભિવ્યક્તિ. તે એક પેટેરેટિવ સીઆરબી બાઇન્ડિંગ સાઇટ (CRE) માં બંધનકર્તા પ્રવૃત્તિને પણ વધારે છે સીક પ્રમોટર જો કે, સામાન્ય બેઝલ અભિવ્યક્તિ માટે જ્યારે CRE સાઇટ આવશ્યક છે સીક, ΔFOSB ઇન્ડક્શન માટે તે જરૂરી નથી સીક. એકસાથે લેવામાં આવે છે, આ પરિણામો સૂચવે છે કે ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB ઇન્ડક્શનમાં જી.ઈ.બી. અભિવ્યક્તિ અને ચોક્કસ જીન પ્રમોટર્સ પર પ્રવૃત્તિ વધે છે, આ એકમાત્ર પદ્ધતિ નથી, જેના દ્વારા આ શરતો હેઠળ જીન્સને અપregulated કરવામાં આવે છે.

કીવર્ડ્સ: ન્યુક્લિયસ accumbens, ટ્રાન્સક્રિપ્શન, વ્યસન

પર જાઓ:

પરિચય

દુરુપયોગની દવાઓના ક્રોનિક એક્સપોઝરથી ઘણા મગજ વિસ્તારોમાં બાયોકેમિકલ અને માળખાગત ફેરફારો થાય છે. આ ફેરફારો મેસોલિમ્બિક સિસ્ટમમાં જનીન અભિવ્યક્તિ પ્રોફાઇલ્સમાં ફેરફારને સમાવવાનું માનવામાં આવે છે. આ સિસ્ટમ ડોપામિનેર્જિક ન્યુરોન્સથી બનેલી છે જે ન્યુક્લિયસ ઍક્યુમ્બન્સ (એનએસી) (વેન્ટ્રલ સ્ટ્રાઇટમ) માં મધ્યવર્તીથી મધ્યમ સ્પાઇની ચેતાકોષમાં વેન્ટ્રલ ટેગમેન્ટલ એરિયા (વીટીએ) અને અન્ય ઘણા મગજના પ્રદેશોમાંથી પ્રોજેક્ટ કરે છે. બે ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળોની પ્રવૃત્તિમાં ફેરફાર, સીએએમપી રિસ્પોન્સ એલિમેન્ટ બાઈન્ડીંગ પ્રોટીન (સીઆરબી) અને Δફોસબી (એક ફૉસ ફેમિલી પ્રોટીન), દુરુપયોગની દવાઓના લાંબા સમયથી સંપર્કમાં આવતા બાયોકેમિકલ, માળખાકીય અને વર્તણૂંકના ફેરફારોમાં મધ્યસ્થી કરવા મધ્યસ્થી કરવામાં આવે છે. દ્વારા ચકાસાયેલ નેસ્લેર, 2005).

CREB એક સર્વવ્યાપી રીતે વ્યક્ત થયેલ ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળ છે જે CREB / ATF કુટુંબના સભ્ય છે. સીઆરબી હોમોડિઅર્સ ઘણા બધા જનીનોના પ્રમોટર્સમાં મળી રહેલા એક સીઆર ક્રમ (સર્વસંમતિ: ટીજીએસીજીટીસીએ) ની વિવિધતાને જોડે છે. સીઆરબીનું ફોસ્ફોરેલેશન (મુખ્યત્વે સેરીન 133 પર, જોકે અન્ય સાઇટ્સને ઓળખી કાઢવામાં આવી છે) ઘણા સિગ્નલિંગ કેસ્કેડ્સ દ્વારા ઉત્તેજિત કરી શકાય છે જેમાં ડોપામાઇન રીસેપ્ટર્સની ડાઉનસ્ટ્રીમ (કોલ એટ અલ., 1995). સેરેન 133 પર ફોસ્ફોરિલેશન પર, CREB એ સહ-સક્રિયકર્તા CREB બાઇન્ડિંગ પ્રોટીન (સીબીપી) અથવા સંબંધિત પ્રોટીનની ભરતી કરે છે જે જીન અભિવ્યક્તિમાં વધારો કરે છે (સમીક્ષા દ્વારા જોહાનસેનેસ એટ અલ., 2004). દુરુપયોગની દવા અથવા મનોવૈજ્ઞાનિક દવાઓના ક્રોનિક એક્સ્પોઝરથી ન્યૂક્લિયસ એસેમ્બન્સમાં સીઆરબી પ્રવૃત્તિમાં ક્ષણિક વધારો થાય છે. (બેરોટ એટ અલ., 2002; શો-લચમેન એટ અલ., 2002, 2003), અનુકૂલન એ આ દવાઓના લાભદાયી ગુણધર્મો ઘટાડવા અને ડ્રગ ઉપાડના નકારાત્મક લાગણીશીલ સ્થિતિમાં ફાળો આપવાનું વિચાર્યું (નેસ્લેર, 2005).

Lદુર્વ્યવહારની દવાઓ પર ઓન્જર-કાયમી અનુકૂલન એ આંશિક રીતે ΔFOSB દ્વારા મધ્યસ્થી માનવામાં આવે છે, FOSB નું અત્યંત સ્થિર સ્પ્લિસ વેરિઅન્ટ (નેસ્લેર એટ અલ., 1999; મેકક્લુંગ એટ અલ., 2004; નેસ્લેર, 2008). ફૉસ પરિવારના સભ્યો જુન કુટુંબના સભ્યો સાથે સક્રિયકરણ પ્રોટીન 1 (એપી-એક્સએનએનએક્સ) સંકુલ રચવા માટે ઘટાડે છે. એપી-એક્સ્યુએનએક્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન સંકુલ એપી-એક્સ્યુએનએક્સ રિસ્પોન્સ તત્વ (સર્વસંમતિ: TGACTCA) ની ભિન્નતાને ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનને નિયમન કરવા માટે જોડે છે (સમીક્ષા દ્વારા ચીનનોવ અને કેર્પોલા, 2001). જ્યારે દુર્વ્યવહારની દવાઓના તીવ્ર સંપર્કમાં પરિણમે છે ત્યારે ફૉસ-પારિવારિક સભ્યો (તેમજ વધેલી CREB પ્રવૃત્તિ) ના ટૂંકાગાળાના ઇન્ડક્શન (કલાક) તરફ દોરી જાય છે, વારંવાર ડ્રગનો સંપર્ક અત્યંત સ્થિર ΔFOSB () ની સંચય તરફ દોરી જાય છે.આશા અને અલ., 1994; પેરોટ્ટી એટ અલ., 2008), જે અભિવ્યક્તિ અઠવાડિયા સુધી ચાલે છે.

પુખ્ત સ્ટ્રાઇટમમાં ΔFOSB અથવા CREB એ બાય-ટ્રાંજેજેનિક ઉંદર ક્યાંક અતિશયોક્તિયુક્ત કરે છે, પ્રાણીઓમાં જોવા મળતા બાયોકેમિકલ અને વર્તણૂકલક્ષી ફેનોટાઇપ્સમાં ઘણીવાર મનોચિકિત્સકો અથવા દુરુપયોગની અન્ય દવાઓ પર પ્રદર્શિત થાય છે. એઆ ટ્રાન્સજેનિક પ્રાણીઓમાં જીન અભિવ્યક્તિના બદલાવને નાબૂદ કરવાથી ટૂંકા ગાળા (2 અઠવાડિયા) oFosB ના ઑવરએક્સપ્રેસન દ્વારા અપ્રગટ અસંખ્ય જનીનો ઓળખાય છે, જે ડ્રગ પુરસ્કારમાં સંમિશ્રિત ઘટાડો સાથે સંકળાયેલા ફેરફારોને ઓળખે છે. ટૂંકા ગાળાના ΔFosB સાથે જીન અભિવ્યક્તિ અને વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિભાવમાં થયેલા ફેરફારો એ 2 અથવા 8 અઠવાડિયા માટે ક્રિયાવિશેષણ કરતી વખતે પ્રાણીઓમાં જોવા મળતા પ્રાણીઓની સરખામણીમાં નોંધપાત્ર હતા.મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003). આક્રમક વિપરીત, ΔFosB ના લાંબા ગાળાના ઓવેરેક્સપ્રેસ (8 અઠવાડિયા) એ આ જ જીનોમાંની ઘણી અભિવ્યક્તિમાં ઘટાડો કર્યો છે અને ડ્રગ પુરસ્કારમાં વધારો થયો છે (કેલ્ઝ એટ અલ., 1999; મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003).

આ અભ્યાસમાં એક જીન ઓળખાય છે cholecystokinin (સીક), સ્ટ્રેટમ સહિત અનેક મગજ પ્રદેશોમાં ઉત્પન્ન થયેલ ન્યુરોપ્પ્ટાઇડ (હોકફેલ એટ અલ., 1980). સીસીકે ડોપામિનેર્જિક ટ્રાન્સમિશન મોડ્યુલેટ કરી શકે છે (વેકરિનો, 1992), ડ્રગ પુરસ્કાર અને મજબૂતીકરણમાં સામેલ છે (જોસેલીન એટ અલ., 1996; જોસેલીન એટ અલ., 1997; હેમિલ્ટન, એટ અલ., 2000; બીનફેલ્ડ એટ અલ., 2002; રોટઝીંગર એટ અલ., 2002), અને ક્રોનિક કોકેઈન દ્વારા સ્ટ્રાઇટમમાં પ્રેરિત છે (ડિંગ અને મોચેટી, 1992). આ ઉપરાંત સીક પ્રમોટર્સને સીઆરબી અને એપી-એક્સએનટીએક્સ બંને સંકલન માટે જવાબદાર હોવાનું દર્શાવવામાં આવ્યું છે (હન અને ડિકસન, 1990; ડેવલ, એટ અલ., 2000; હંસેન, 2001). ઘણા જનીનો (શામેલ છે સીક) જેણે સીઆરબી અને ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB અભિવ્યક્તિને પગલે વધેલી અભિવ્યક્તિ દર્શાવી હતી, તે સીઆરબી લક્ષ્યાંક જીન્સને જાણીતા અથવા શંકાસ્પદ હતા (મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003), અમે નિર્ધારિત કરવા માંગીએ છીએ કે શોર્ટ ટર્મ ΔFOSB અભિવ્યક્તિ આ જીન્સના નિયમન તરફ દોરી જાય છે (ધ્યાન કેન્દ્રિત કરીને સીક) સીઆરબીના નિયમન દ્વારા અથવા જનીન નિયમનની વધુ જટિલ પદ્ધતિઓ દ્વારા.

પર જાઓ:

પરિણામો

ΔFOSB overexpression એ CRB સ્તરોને ધીરે ધીરે વધે છે

Western FosB overexpression ઉંદરના સ્ટ્રાઇટમમાં CREB પ્રોટીન સ્તરો વધારે છે કે કેમ તે તપાસવા માટે અમે પશ્ચિમી બ્લેટિંગનો ઉપયોગ કર્યો છે. આ અભ્યાસ માટે, અમે બાય ટ્રાન્સજેનિક મીસ (લાઇન 11A) નો ઉપયોગ કર્યો છે જે એનએસઈ-ટીટીએ ટ્રાન્સજેન અને ટેટૉપ-ΔFOSB ટ્રાન્સજેન બંને ધરાવે છે. ડોક્સાયસિક્લાઇનની ગેરહાજરીમાં, આ ઉંદર સ્ટ્રાઇટમના ડાયનોર્ફિન પોઝિટિવ ચેતાકોષમાં ΔFOSB અભિવ્યક્તિમાં મજબૂત વધારો દર્શાવે છે.કેલ્ઝ એટ અલ., 1999). Overexpressing methodFOSB ની આ પદ્ધતિ વ્યાપક રીતે દસ્તાવેજીકૃત કરવામાં આવી છે અને પ્રદેશ-વિશિષ્ટ ઓવેરક્સપ્રેસન માટે પરવાનગી આપે છે, જે ક્રોનિક કોકેનથી સંબંધિત પ્રાણીઓમાં જોવા મળતા ΔFOSB ઇન્ડક્શનને સમાન બનાવે છે (આશા અને અલ., 1994; કેલ્ઝ એટ અલ., 1999). અમે શોધી કાઢ્યું છે કે 11A ઉંદર overexpressing ΔFosB માં, XBRX અઠવાડિયાના અભિવ્યક્તિ પછી સીઆરબી પ્રોટીન સ્તરો નોંધપાત્ર રીતે અપregulated કરવામાં આવ્યા હતા અને આ સ્તરો 2 અઠવાડિયાના અભિવ્યક્તિ પછી બેઝલાઇનમાં પરત આવ્યા હતા (આકૃતિ 1A, એન = 8). ટૂંકા ગાળાના osફોસબી ઓવરએક્સપ્રેસન સાથે સીઆરઇબી સ્તરોમાં થયેલા ફેરફારને બીજી સિસ્ટમમાં નકલ કરી શકાય છે કે કેમ તે નિર્ધારિત કરવા માટે, અમે પીસી 12 કોષોમાં ક્ષણિક રૂપે xpફોસબીને ઓળખી કા andી અને શોધી કા found્યું કે નિયંત્રણોની તુલનામાં સીઆરઇબીનું સ્તર નોંધપાત્ર રીતે વધ્યું (પી <0.05)આકૃતિ 1B, એન = 4). આ પરિણામો દર્શાવે છે કે ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB અભિવ્યક્તિમાં CREB પ્રોટીન સ્તર વધે છે.

આકૃતિ 1

આકૃતિ 1

ΔFOSB overexpression સાથે CREB સ્તર વધે છે. માંથી lysates પશ્ચિમી સંશોધન વિશ્લેષણ (એ) 11 અથવા 2 અઠવાડિયા માટે ડોક્સથી 8A ઉંદરથી માઉસ સ્ટ્રાઇટા અથવા (બી) PC12 કોષો overexpressing ΔFOSB. માહિતી A સરખામણીમાં ડક્સ માં બંધ ટકાવારી તરીકે બતાવવામાં આવે છે ...

ΔFOSB અને CREB બંને ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB overexpression પછી સ્ટ્રાઇટમમાં વિશિષ્ટ લક્ષ્ય જીન્સના પ્રમોટરો સાથે જોડાયેલા છે.

અમે ચોક્કસ લક્ષ્ય જનીન પ્રમોટરો પર ΔFOSB અથવા CREB બંધનકર્તા બન્યું કે નહીં તે નિર્ધારિત કરવા માટે અમે સ્ટ્રાઇટલ ટીશ્યુના ચિપ (ક્રોમેટિન ઇમ્યુનોપ્ર્રેઇઅર) એસેસનો ઉપયોગ કર્યો છે અને જો આ બંધન ટૂંકા ગાળાની ΔFOSB overexpression પછી વધારવામાં આવ્યું હતું. અમે પર બંધનકર્તા વિશ્લેષણ બીડીએનએફ અને સીક પ્રમોટરો, કારણ કે બંને જનીનો ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB ઓવરેક્સપ્રેસન, સીઆરબી ઓવેરક્સપ્રેસન, અથવા ક્રોનિક કોકેઈન ટ્રીટમેન્ટ પછી અત્યંત અપregulated છે.મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003). અમે પણ બંધનકર્તા વિશ્લેષણ કર્યું CDK5 પ્રમોટર, કારણ કે તે ΔFOSB ના જાણીતા સીધા લક્ષ્ય છે (ચેન એટ અલ., 2000; બીબીબી એટ અલ., 2001; કુમાર એટ અલ., 2005). અંતે, અમે બાઇન્ડિંગ માપ્યું પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર્સ, અગાઉના અભ્યાસોથી જાણવા મળ્યું છે કે તે conditionsએફએસબી અને સીઆરબી બંને દ્વારા વિવિધ શરતો હેઠળ બંધાયેલ હોઈ શકે છે (એન્ડરસન એટ અલ., 2001; ઝાચારીઉ એટ અલ., 2006).

ચિપ વિશ્લેષણ 11A ઉંદર ઓવરેક્સપ્રેસિંગ striFOSB થી સ્ટ્રેટા પર કરવામાં આવ્યું હતું XNTX અઠવાડિયા માટે એન્ટીબોડીઝનો ઉપયોગ કરીને જે CREB અથવા ΔFosB ને ઓળખે છે. સામાન્ય પરિસ્થિતિઓમાં, અમે જોયું કે ΔFOSB એ બંધાયેલું છે CDK5 અને પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર્સ, જ્યારે ત્યાં કોઈ શોધી શકાય તેવા બંધનકર્તા નથી બીડીએનએફ or સીક પ્રમોટર્સ (કોષ્ટક 1). વધુમાં, ΔFOSB overexpression એ ΔFOSB નાં બંધનને વધારી દીધું CDK5 પ્રમોટર, પરંતુ નથી પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર અમે પછી આ પ્રમોટરો પર CREB ને બંધનકર્તા માપી અને શોધી કાઢ્યું કે CREB એ બંધાયેલ છે સીડીકેક્સ્યુએનએક્સ, બીડીએનએફ અને પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર્સ, પરંતુ નહીં સીક પ્રમોટર્સ, સામાન્ય સ્ટ્રાઇટમમાં, અને તે 2 અઠવાડિયા માટે ΔFOSB ઑવેર એક્સપ્રેસન વધે છે તેવું CREB બંધનકર્તા બીડીએનએફ અને પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર્સ, પરંતુ નહીં CDK5 પ્રમોટર એક સાથે લેવામાં આવે છે, આ પરિણામો દર્શાવે છે કે osFOSB અને CREB બંને ચોક્કસ જીન પ્રોમોટર્સને બાંધી શકે છે જેમ કે પ્રોડિયોનોર્ફિન અને CDK5જો કે, સીઆરબી બંધન અન્ય પ્રમોટરો માટે વિશિષ્ટ છે બીડીએનએફ. વધુમાં, ΔFOSB overexpression એ ચોક્કસ પ્રમોટર્સ પર ΔFOSB માં વધવાની તરફ દોરી જાય છે, જે અપેક્ષિત છે, પરંતુ ચોક્કસ પ્રમોટર્સને સીઆરબીને બંધનકર્તા પણ બનાવે છે, આ સમયે આ observedFOSB-mediated CREB ઇન્ડક્શનને ધ્યાનમાં રાખીને સુસંગત છે.

કોષ્ટક 1

કોષ્ટક 1

Weeksફોસબી બે અઠવાડિયા માટે ઉંદર overexpressing વિવિધ પ્રમોટર્સ માટે મૂકે નિયમનકારી પ્રોટીન બંધન.

પાછલા કાર્યમાં દર્શાવવામાં આવ્યું છે કે લાંબા ગાળાના ΔFosB overexpression દ્વારા પ્રેરિત જીન અભિવ્યક્તિમાં ફેરફારો ક્રોમેટીન ફેરફારો સાથે સંકળાયેલા છે, ખાસ કરીને, ચોક્કસ જીન પ્રમોટરો પર, ખાસ કરીને, હિસ્ટોન H3 નું એસિટલેશન (કુમાર એટ અલ., 2005). ટૂંકા ગાળાની ΔFOSB overexpression પર જીન અભિવ્યક્તિમાં ફેરફારો માટે જવાબદાર હોઈ શકે છે તે નક્કી કરવા માટે, અમે એસેટીલેટેડ હિસ્ટોન H3 (ટ્રાન્સક્રિપ્શનલી સક્રિય ક્રોમૉટીન સાથે સંકળાયેલ હિસ્ટોન ફેરફાર), અથવા મીથિલેટેડ હિસ્ટન H3 (લિઝક્સ્યુએક્સએક્સ, ટ્રાન્સસ્ટ્રક્શનલી સાથે સંકળાયેલ હિસ્ટન ફેરફાર) નું બંધન માપ્યું છે. નિષ્ક્રિય ક્રોમેટીન). અમે શોધી કાઢ્યું છે કે 9 અઠવાડિયા માટે ΔFosB ના ઑવરએક્સપ્રેસન પરિણામે અભ્યાસમાંના કોઈપણ જનીન પ્રમોટરોમાં એસિટાઇલેટેડ H2 ના બંધનકર્તામાં કોઈ ફેરફાર થયો નથી.કોષ્ટક 1). અમને મેથિલેટેડ હિસ્ટોન H3 ના બંધનકર્તામાં નોંધપાત્ર ઘટાડો થયો હતો પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર, પરંતુ કોઈ બંધનકર્તા સીક પ્રમોટર અને બંધનકર્તામાં કોઈ ફેરફાર નથી CDK5 અને બીડીએનએફ પ્રમોટરો, સૂચવે છે કે આ સામાન્ય પદ્ધતિ નથી જેના દ્વારા ટૂંકા ગાળાની Δ FOSB, જનીન અભિવ્યક્તિને નિયંત્રિત કરે છે. અમને આશ્ચર્ય થયું અને અમને રસ હતો કે અમને અમારા ચિપ એસેસમાં કોઈ તફાવત મળ્યો નથી જે વધવા માટે જવાબદાર હોઈ શકે છે સીક NUMFOSB અભિવ્યક્તિના 11 અઠવાડિયા પછી 2A ઉંદરમાં એમઆરએનએ અભિવ્યક્તિ અને આ પદ્ધતિને વધુ તપાસ કરવાનો નિર્ણય લીધો.

ટૂંકા ગાળાના FOSB વધે છે સીક બહુવિધ સિસ્ટમોમાં અભિવ્યક્તિ

સ્ટ્રાઇટેમમાં -FOSB એ બાય ટ્રાન્સજેનિક 11A ઉંદર overexpressing માઇક્રોએરે પાત્રતા સીક અભિવ્યક્તિ સ્તર overexpression ના 2 અઠવાડિયા પછી વધે છે અને પછી ધીમે ધીમે ΔFOSB અભિવ્યક્તિની લાંબી અવધિમાં ઘટાડો કરે છે (આકૃતિ 2A, એન = 3). અમે આ અસર માટે માન્ય સીક 2 અને 8 અઠવાડિયામાં પ્રાણીઓના જુદા જુદા જૂથ પર રીઅલ ટાઇમ પીસીઆરનો ઉપયોગ કરીને માઇક્રોએરે વિશ્લેષણ (ડેટા બતાવવામાં આવતો નથી) સમાન હોય તે માટે બે સમયના મુદ્દા પર પરિણામો મળ્યાં.

આકૃતિ 2

આકૃતિ 2

ΔFOSB ના ટૂંકા ગાળાના ઓવરેક્સપ્રેસન વધે છે સીક જનીન અભિવ્યક્તિ. (A) સીક 11, 1, 2, અથવા 4 અઠવાડિયા માટે 8A ઉંદરમાં ΔFOSB overexpression પછી સ્ટ્રાઇટમમાં એમઆરએનએ અભિવ્યક્તિ. માઇક્રોએરે વિશ્લેષણ સ્ટ્રાઇટલ નમૂના પર કરવામાં આવ્યું હતું સીક સ્તરો ...

નિયમન કરવા માટે ΔFOSB ની ક્ષમતાની વધુ તપાસ કરવા સીક અભિવ્યક્તિ, અમે પીસીએક્સયુએનએક્સ સેલ્સનો ઉપયોગ સંક્રમિત રીતે A સાથે સંક્રમિત કર્યો સીક-લ્યુસિફેરેઝ રિપોર્ટર પ્લાઝમીડ અને ક્યાં તો Δફોસબી અભિવ્યક્તિ પ્લાઝમીડ અથવા સમાન પીસીડીએનએન. ΔFosB overexpression ના બે (n = 5-9) અને ત્રણ (n = 11-13) દિવસોમાં નોંધપાત્ર વધારો થયો છે સીક-લિસિફેરેઝ અભિવ્યક્તિ. વધુમાં, ΔFOSB overexpression ના ત્રણ દિવસમાં નોંધપાત્ર રીતે વધુ પરિણામ આવ્યું છે સીકઓવરેક્સપ્રેસનના બે દિવસોની તુલનામાં -લિસિફેરેઝ ઇન્ડક્શનઆકૃતિ 2B). ΔFOSB ના ઑવરએક્સપ્રેસનએ પ્રમોટરલેસ લ્યુસિફેરેઝ રચના (અભિવ્યક્ત ન કરાયેલ ડેટા) ની અભિવ્યક્તિને પ્રેરણા આપી નથી. કોઈ સારવારની શરતોમાં ઘટાડો થયો ન હતો સીક-લ્યુસિફેરેઝ પ્રવૃત્તિ સ્પષ્ટ. આ પરિણામો બતાવે છે કે ટૂંકા ગાળાના Δ FosB અભિવ્યક્તિમાં પ્રવૃત્તિ વધે છે સીક પ્રમોટર, અને પાંદડાઓએ યંત્રરચનાને લાંબા ગાળાના ΔFOSB overexpression દબાવી દીધી છે તે પ્રતિભાવ આપ્યો નથી સીક અભિવ્યક્તિ

ΔFOSB overexpression એ મૂર્તિમંત CREB બંધનકર્તા સાઇટ પર બંધનકર્તા વધે છે સીક પ્રમોટર્સ

અમારા વિશ્લેષણો મળ્યા છે સીક શોર્ટ ટર્મ ΔFOSB અભિવ્યક્તિ પછી અભિવ્યક્તિ વધી છે, જો કે, અમારા ચિપ એસેસને જાણવા મળ્યું છે કે ન તો CREB અને ΔFosB પણ બંધાયેલા છે. સીક પ્રમોટર પ્રોટીનમાં કોઈ ફેરફાર છે કે નહીં તે નિર્ધારિત કરવા માટે સીક પ્રમોટર ΔFOSB overexpression ને અનુસરતા, અમે ઇલેક્ટ્રોફોરેટીક ગતિશીલતા શિફ્ટ એસેસ (ઇએમએસએ) નો ઉપયોગ એક તપાસ સાથે કર્યો જેમાં સમાવિષ્ટ CRE-like સાઇટની અંદર હાજર છે સીક પ્રમોટર 11A ઉંદરની સ્ટ્રાઇટાથી પરમાણુ અર્કનો ઉપયોગ કરીને 2 અઠવાડિયા માટે vereFosB overexpressing, અમે જોયેલી CRE સાઇટ પર બંધનકર્તા વધારો થયો છે. સીક પ્રમોટર (આકૃતિ 3 એ, સી, એન = 4). રસપ્રદ વાત એ છે કે, 11A ઉંદર vereFOSB 8 અઠવાડિયા માટે ઓવેરેક્સપ્રેસિંગ કરે છે, જેમાં ઘટાડો દર્શાવે છે. સીક અભિવ્યક્તિ, પણ આ સાઇટ પર બંધન વધારો દર્શાવે છે (આકૃતિ 3B, સી, એન = 4). સરખામણી તરીકે, અમે 2 અઠવાડિયા માટે iceFosB ને ઉંદર ઓવેર એક્સપ્રેસમાં સર્વસંમતિ CRE સાઇટ પર બંધનકર્તા તપાસ કરી અને સ્ટ્રાઇટલ અર્કમાં મજબુત સીઆર બાઇન્ડિંગ મળી, પરંતુ ΔFOSB ઇન્ડક્શન પછી બંધનકર્તામાં કોઈ વધારો થયો નહીં.આકૃતિ 3F, એન = 4). આમ, આ સમયે સમયે જોવા મળતા કુલ સીઆરબી સ્તરોમાં ΔFosB- પ્રેરિત વધારો હોવા છતાં, આ પરિણામો અમારી ચિપ એસેસ સાથે સુસંગત છે કે જે findFosB overexpression પછી પ્રમોટર્સ પર વધેલી CREB ને વધારીને માત્ર ચોક્કસ જનીનો માટે વિશિષ્ટ છે અને વૈશ્વિક ઘટના નથી . નિર્ધારિત કરવા માટે કે શું સીઆરબી બંધાયેલ છે સીક અમારા ઇએમએસએ વિશ્લેષણમાં પ્રમોટર્સ, અમે એક સીઆરબી ચોક્કસ એન્ટિબોડી સાથે સુપરસ્ફિફ્ટ assays ભજવી હતી. અમારા ચિપ assays સાથે કરાર માં, અમે એક માટે સીઆરબી કોઈ બંધનતા મળી નથી સીક તપાસમાં ઇએમએસએ એસેસમાં મૂકેલી સીઆર સાઇટ સામેલ છે, જ્યારે સીઆરબીએ સર્વસંમતિ સીઆર સાઇટ (સીઆરટી) ને નોંધપાત્ર રીતે બંધ કરી દીધી અને સુપરચેફ્ટ કરી હતી.આકૃતિ 3D, ઇ, એન = 4). ડીએનએ બંધનકર્તા પ્રવૃત્તિ સીક પ્રમોટર્સ એફો-બીબીએનએક્સ સાઇટ્સ (હોપ એટ અલ, 1a, 1994b) ને bFOSB ને અવરોધિત કરવા માટે ઘણા પૂર્વ અભ્યાસોમાં બતાવેલ શરતો હેઠળ, ΔFOSB (ડેટા બતાવવામાં આવ્યો નથી) પ્રત્યે એન્ટિબોડીથી પણ પ્રભાવિત થયો નથી. ચેન એટ અલ., 1995, હિરોઈ એટ અલ., 1998). અમે NUMFOSB અભિવ્યક્તિના 11 અઠવાડિયા પછી 8A પ્રાણીઓના સ્ટ્રાઇટા પર ચિપ એસેસ પણ કર્યું અને હજી પણ CREB અથવા ΔFosB પર કોઈ બંધન નથી મળ્યું સીક પ્રમોટર (ડેટા બતાવ્યો નથી). આમ, ΔFOSB અભિવ્યક્તિ એ પ્રોટીનને બંધનકર્તામાં વધારો તરફ દોરી જાય છે સીક અભિવ્યક્તિના 2 અને 8 અઠવાડિયા પછી પ્રમોટર્સ; જો કે, આ પરિબળોની ઓળખ અજાણ છે.

આકૃતિ 3

આકૃતિ 3

પ્રોટીન બંધનકર્તા સીક પ્રમોટર (એ, બી) ઇલેક્ટ્રોફોરેટીક ગતિશીલતા શિફ્ટ એસે મદદથી સીક પ્રાણીઓમાંથી સ્ટ્રેટલ પેશીઓવાળી CRE-like સાઇટ overexpressing ΔFOSB 2 અઠવાડિયા (એ) અથવા 8 અઠવાડિયા (બી) માટે. માં (એ), વધુ અનલેબલ્ડ સ્પર્ધક સાથે સ્પર્ધા ...

માં મૂર્તિમંત સીઆર સાઇટ સીક પ્રમોટર્સ પ્રમોટર્સ પ્રવૃત્તિમાં વધારો કરવા માટે જવાબદાર નથી

કારણ કે આપણે પ્રોગ્રેશનમાં પ્રોટીન બંધનમાં વધારો થયો છે સીક પ્રમોટર્સ, જેમાં putFOSB overexpression ને અનુસરતા, ક્રૂર CRE સાઇટ શામેલ છે, અમે નિર્ધારિત કરવા માંગીએ છીએ કે આ સાઇટ વધારવા માટે જરૂરી છે કે નહીં સીક ΔFOSB overexpression ને અનુસરતા અભિવ્યક્તિ. આ શક્યતા ચકાસવા માટે, અમે એક સાથે PC12 કોશિકાઓ સંક્રમિત કરી સીક-લ્યુસિફેરેઝ પ્લાઝમીડ તેની સંપૂર્ણ સીઆર જેવી સાઇટ ધરાવે છે અથવા સાઇટમાં પરિવર્તન શામેલ છે જે CREB સાથેની કોઈપણ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાને સમાપ્ત કરશે. રસપ્રદ વાત એ છે કે, સીઆર જેવા સાઇટનું પરિવર્તન બેઝલ ઘટ્યું સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ 32% દ્વારા (આકૃતિ 4A, n = 9), પરંતુ તેનાથી પ્રભાવિત થયો નથી સીક osફોસબી ઓવરએક્સપ્રેસન દ્વારા પ્રમોટર્સનો સમાવેશઆકૃતિ 4B, એન = 11-13). આ સૂચવે છે કે, જોકે સીક પ્રમોટર્સને પૂર્ણ બેઝલ પ્રવૃત્તિ માટે એકદમ સીઆર જેવી સાઇટની આવશ્યકતા છે, ΔFosB overexpression દ્વારા પ્રેરિત પ્રમોટર પ્રવૃત્તિમાં CRE-like અનુક્રમણિકાની આવશ્યકતા નથી.

આકૃતિ 4

આકૃતિ 4

આ સીકજેમ સીઆર સાઇટ માટે જરૂરી નથી સીક ΔFOSB દ્વારા રજૂઆત. (A) સીક-લ્યુસિફેરેઝ પ્રવૃત્તિને સામાન્ય સાથે સંક્રમણ પછી 2 દિવસ માપવામાં આવી હતી સીક-લુસિફેરેઝ અથવા એક જેમાં સીઆરઈ જેવી સાઇટ પરિવર્તિત થઈ હતી. * પી <0.05 (B) સીક-લિસિફેરેઝ ...

સીએફઓ સાથે જોડાય છે સીક પ્રમોટર્સ

પાછલા અભ્યાસોએ તે શોધી કાઢ્યું છે સીએફઓએસ શોર્ટ-ટર્મ ΔFOSB અભિવ્યક્તિ સાથે mRNA વધે છે, જો કે, લાંબા સમય સુધી ΔFOSB અભિવ્યક્તિ પછી, સ્ટ્રેટમમાં સીએફઓને પ્રેરિત કરવા માટે કોકેઈન સારવારની ક્ષમતામાં ઘટાડો થયો છે (મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003; રેન્થલ એટ અલ., 2008). તેથી, શક્ય છે કે CFos માં વધારો થાય છે સીક ટૂંકી-અવધિ ΔFOSB અભિવ્યક્તિ પછી અભિવ્યક્તિ. અમે સી.એફ.ઓ.એસ. માટે વિશિષ્ટ એન્ટિબોડી સાથે ચિપ એસેસ અને માપિત સીએફઓ પર બંધનકર્તા રજૂ કર્યું સીક પ્રમોટર્સ ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB અભિવ્યક્તિ સાથે અને વગર. જ્યારે અમે જોયું કે સીએફઓ આ સાથે જોડાયેલું છે સીક પ્રમોટર, આ બંધનકર્તા ΔFOSB overexpression પછી નોંધપાત્ર રીતે વધારો થયો નથી (આકૃતિ 5, એન = 5). આ સૂચવે છે કે કેમ કે સીએફઓએ જોડાયેલું છે સીક પ્રમોટર, તે સામાન્ય નિયમનમાં ફાળો આપી શકે છે સીક અભિવ્યક્તિ, પરંતુ તે સંભવતઃ નિયમનમાં સામેલ નથી સીક Δફોસ દ્વારા પ્રમોટર્સ.

આકૃતિ 5

આકૃતિ 5

સીએફઓ સાથે જોડાય છે સીક પ્રમોટર Chromatin immunoprecipitation assays ΔFOSB overexpressing ઉંદરમાંથી ડોક્સ પર અથવા પછી ડોક્સ દૂર કરવાના 2 અઠવાડિયા પછી સ્ટ્રાઇટલ પેશીનો ઉપયોગ કરીને સીએફઓ માટે ચોક્કસ એન્ટિબોડી સાથે કરવામાં આવ્યા હતા. રીઅલ ટાઇમ પીસીઆર વિશ્લેષણ હતું ...

પર જાઓ:

ચર્ચા

આ અભ્યાસ અગાઉના સંશોધનોને સમર્થન આપે છે અને વિસ્તૃત કરે છે જે દર્શાવે છે કે ΔFosB સ્ટ્રાઇટમમાં જીન અભિવ્યક્તિને નિયંત્રિત કરે છે અને અમને લાગે છે કે ટૂંકા ગાળાના અભિવ્યક્તિ પછી તે ઘણી પદ્ધતિઓ દ્વારા આમ કરે છે. અમે બતાવીએ છીએ કે, Overexpression ના 2 અઠવાડિયા પછી, ΔFosB સીધા જ પ્રદૂષકોને અમુક ચોક્કસ જીન્સમાં જોડે છે જે અભિવ્યક્તિમાં ફેરફાર તરફ દોરી જાય છે (એટલે ​​કે CDK5). વધુમાં, તે સીઆરબીબી પ્રોટીન સ્તરો વધે છે, જે સંસ્કારી કોશિકાઓ તેમજ સ્ટ્રાઇટમમાં જોવા મળતી અસર છે, જે અન્ય જીન પ્રમોટરો (એટલે ​​કે, જીએન પ્રમોટરોમાં વધેલી CREB) ને વધારી દે છે. ડાયનોર્ફિન અને બીડીએનએફ). અગાઉના અભ્યાસમાં, અમે જોયું કે સ્ટ્રાઇટમમાં ΔFOSB ના ટૂંકા ગાળાના ઓવેરેક્સપ્રેસન એ જ જીન અભિવ્યક્તિના ઘણા ફેરફારો તરફ દોરી જાય છે જે સીઆરબી ઓવેરેક્સપ્રેસ હોવા પર જોવા મળે છે, અને કોકેન પસંદગીના પગલાંઓમાં સમાન વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિભાવ તરફ દોરી જાય છે (મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003). આમ, વર્તમાન શોધ એ છે કે ΔFOSB એ સીઆરબીના ઇન્ડક્શન તરફ દોરી જાય છે, તેમજ કેટલાક જનીન પ્રમોટરોને સીઆરબીના બંધન તરફ દોરી જાય છે, જે આ બે ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળો દ્વારા શા માટે ઘણા જનીન અભિવ્યક્તિ પરિવર્તનોને શા માટે શેર કરવામાં આવ્યા તે સમજાવવામાં મદદ કરે છે.

ΔFosB દ્વારા CREB નો સમાવેશ રસપ્રદ છે, કારણ કે તે બતાવવામાં આવ્યું છે કે દુરુપયોગની દવાઓ સેરેન 133-phosphorylated CREB સ્તરમાં ફેરફારને પ્રેરિત કરે છે (માટસન એટ અલ., 2005) અને CRE-mediated ટ્રાન્સક્રિપ્શનને વધારો (બેરોટ એટ અલ., 2002; શો-લચમેન એટ અલ., 2002, 2003), સીઆરબીના એકંદર સ્તરોને બદલ્યાં વિના. તે શક્ય છે કે CREB સ્તરોમાં ફેરફાર ક્ષણિક હોઈ શકે છે, અને તેથી, અન્ય અભ્યાસોમાં સહેલાઈથી ચૂકી શકાય છે. અમારા હાથમાં, આપણે ખાસ પ્રયોગોમાં CREB એમઆરએનએમાં કોકેઈન પ્રેરિત વધારો જોયો છે, જો કે, આ અસર અત્યંત ચલ (અપ્રકાશિત અવલોકન) છે. ટૂંકા ગાળાની ΔFOSB overexpression પછી 11A ટ્રાન્સજેનિક ઉંદર અને પીસી-એક્સNUMએક્સ કોષો CREB ઇન્ડક્શન દર્શાવે છે, આ સૂચવે છે કે CREB ખરેખર ΔFosB (અથવા ΔFOSB નો લક્ષ્યાંક) દ્વારા પ્રેરિત છે, જેણે જીનમાં ડ્રગ-પ્રેરિત ફેરફારોને સમજાવવા માટે હજુ સુધી બીજી પદ્ધતિ પ્રદાન કરી છે. અભિવ્યક્તિ

આશ્ચર્યજનક રીતે, અમે શોધી કાઢ્યું કે ન તો CREB અને ΔFOSB એ બંધાયેલા છે સીક જોકે પ્રમોટર્સ સીક ટૂંકી-અવધિ ΔFOSB અભિવ્યક્તિ પછી અભિવ્યક્તિ સ્પષ્ટ રીતે અપગ્રેટેડ છે. સીક એ વીટીએ અને એનએસી (એમટીએ) બંનેમાં વ્યક્ત કરાયેલ વિપુલ ન્યુરોપ્પ્ટાઇડ છે.હોકફેલ એટ અલ., 1980) અને દુરુપયોગની દવાઓ માટે વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિસાદો (જોસેલીન એટ અલ., 1996; જોસેલીન એટ અલ., 1997; હેમિલ્ટન, એટ અલ., 2000; બીનફેલ્ડ એટ અલ., 2002; રોટઝીંગર એટ અલ., 2002). સેલ સંસ્કૃતિ assays માં, આ સીક પ્રમોટરને વ્યાપક રીતે વર્ગીકૃત કરવામાં આવી છે અને તે સીઆરબી અને એપી-એક્સએનટીએક્સ પરિવારના સભ્યોને પ્રતિભાવ આપવા માટે દર્શાવવામાં આવી છે (દ્વારા સમીક્ષા કરાઈ છે હંસેન, 2001). હન અને ડિકસન (1990) દર્શાવે છે કે એપી-એક્સએનટીએક્સ સંકલન આને બંધ કરી શકે છે સીક સીઆર જેવા સાઇટ ઈન વિટ્રો સ્થિતિએ, અને તે બાદમાં બતાવવામાં આવ્યું હતું, એસકે-એન-એમસી ન્યુરોબ્લાસ્ટોમા કોશિકાઓનો ઉપયોગ કરીને, જે સીઆર-જેવી સાઇટના પરિવર્તનને પ્રમોટર પ્રતિસાદ ઘટાડે છે તે ઓવરવ્રેસ્ડ CFO / cJun (રોર્કે એટ અલ., 1999). ખરેખર, અમે પણ વધારો જોવા મળે છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ (આકૃતિ 2) અને CRE-like તત્વ પર અથવા તેની આસપાસ બંધનકર્તા (આકૃતિ 3) ΔFOSB ના ઑવેર એક્સપ્રેસન પર, એપી- 1 પરિવારના બીજા સભ્ય, પરંતુ અમને ΔFOSB ના સીધો બંધન મળ્યા નથી સીક પ્રમોટર્સ વિવો માં or ઈન વિટ્રો સ્થિતિએ, તેના ઓવરેક્સપ્રેસન પર પણ.

મોટાભાગના કામોએ નિયમનમાં CREB માટે ભૂમિકા ભજવી છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ. આ સીક CRE-like સાઇટ કરોડરજ્જુમાં સુરક્ષિત છે (હંસેન, 2001) અને, કેટલાક સેલ કલ્ચર એસેસમાં, સીઆરબી અને એપી-એક્સએનટીએક્સ બંને સંકલનો આ સાઇટ સાથે જોડાયેલા છે અને તે માટે જરૂરી છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ (હન અને ડિકસન, 1990; ડેવલ, એટ અલ., 2000; હંસેન, 2001). વધુમાં, કેટલાક જાણીતા સક્રિયકર્તાઓ સીક અભિવ્યક્તિ (બીએફજીએફ, પીએસીએપી, પેપટોન્સ અને વિધ્રુવીકરણ સહિત) એ સીઆરબી દ્વારા કાર્યવાહી બતાવવામાં આવી છે (હંસેન, એટ અલ., 1999; ડેવલ, એટ અલ, 2000; બર્નાર્ડ, એટ અલ., 2001; ગેવ્રે, એટ અલ., 2002; હંસેન, એટ અલ., 2004). અમારું સીક-લિસીફેરેઝ રિપોર્ટર જીન ડેટા નિયમનમાં CRE-like સાઇટ માટે આવશ્યક ભૂમિકાને ટેકો આપે છે સીક પ્રમોટર્સ પ્રવૃત્તિ, કારણ કે આ સાઇટનું પરિવર્તન બેસલ ઘટાડે છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ અને સીકVP16-CREB દ્વારા પ્રેરિત -લિસિફ્રેઝ અભિવ્યક્તિ, જે સીઆરબીનું એક રચનાત્મક રીતે સક્રિય સ્વરૂપ છે, જ્યારે આ સાઇટ પરિવર્તિત થાય છે (અપ્રકાશિત અવલોકન). આથી, અમને એ જોવાથી આશ્ચર્ય થયું કે સીઆરબી આ સાથે બંધાયેલા નથી સીક સીઆરએલબીના સ્તરોમાં વધારો થાય ત્યારે અથવા તો ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB ઓવેરેક્સપ્રેસ પર સ્ટ્રાઇટલ અર્કમાં પ્રમોટર્સ. આ દલીલ કરે છે કે CREB ના સ્તરો સે દીઠ આ સાઇટ પર બંધનકર્તા જથ્થો નક્કી કરવામાં એકમાત્ર પરિબળ નથી, અને તે અન્યના કાર્ય દ્વારા સપોર્ટેડ છે (ચા-મોલ્સ્ટાડ, એટ અલ., 2004). અન્યના પ્રમોટર્સ હોવાથી, અગાઉ ઓળખાયેલી સીઆરબી લક્ષ્યાંક જીન્સ, જેમ કે બીડીએનએફ અને પ્રોડિયોનોર્ફિન, સીઆરબીબીને બાંધ્યું, અમે અમારા શોધમાં વિશ્વાસ ધરાવીએ છીએ કે CREB એ બંધનકર્તા નથી સીક પ્રાણઘાતક અણુ અર્કમાં પ્રમોટર્સ. વધુમાં, ની રજૂઆત સીકΔFOSB દ્વારા -લિસીફેરેઝ પ્રવૃત્તિ એ સીઆર જેવી સાઇટ પર આધારિત નથી, સૂચવે છે કે ΔFOSB નિયમન કરતું નથી સીક સીઆરબીની સીધી બંધન નિયમન દ્વારા અભિવ્યક્તિ સીક પ્રમોટર

અમારી સાથે સીઆરબીબી સાથે વાતચીત કરવામાં અસમર્થતા સીક પ્રમોટર દ્વારા આધારભૂત છે Renthal એટ અલ. (2009), જે ક્રોસ-ચિપ અભિગમનો ઉપયોગ ફોસ્ફ્રોરિલેટેડ સીઆરબી (પીસીઆરબીબી) માં વૈશ્વિક ફેરફારો અને ક્રોનિક કોકેઈન એક્સપોઝર પછી સ્ટ્રાઇટમમાં ΔFOSB બંધન માટે જુએ છે. આ પ્રયોગોમાં, ડી.એન.એ.-પ્રોટીન સંકુલને Δફોસબી અથવા પીસીઆરઇબી એન્ટિબોડીઝ સાથે ઇમ્યુનોપ્રિસિપિટેડ કરવામાં આવ્યું હતું અને લેબલિંગ પછી ઉપજાવી કાઢેલ ડીએનએ પ્રમોટર માઇક્રોરેયમાં સંક્રમિત થયું હતું. અગાઉ ઘણા વર્ણવાયેલ સીઆરબી લક્ષ્યાંક જીન્સને આ અભિગમ (જેમ કે, બીડીએનએફ, પ્રોડિયોનોર્ફિન), સીક ઓળખી ન હતી. વધુમાં, તે દર્શાવવામાં આવ્યું છે કે સર્વસંમતિ CRE સાઇટ પર CREB નું બંધન સંસ્કારી સેલ રેખાઓ વચ્ચે ખૂબ બદલાય છે (ચા-મોલ્સ્ટાડ, એટ અલ., 2004). અગાઉના તમામ અભ્યાસો કે જેણે સીઆરબી સાથેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ શોધી સીક પ્રમોટર્સ સેલ કલ્ચરમાં હાથ ધરવામાં આવ્યા હતા (મગજ નહીં કે જેનાથી અમારા ઇએમએસએ અને ચિપ નમૂનાઓ બનાવવામાં આવ્યા હતા) અને પ્રોટીન-ડી.એન.એ. ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓની તપાસ કરવા માટે જેલ શિફ્ટ એસેસનો ઉપયોગ કર્યો હતો. જ્યારે ઇએમએસએ ડીએનએ અનુક્રમણિકા સાથે જોડાયેલા પરિબળની સંભવિતતાને આકારણી કરી શકે છે, ત્યારે ચિપ એસેસ આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ પર નવલકથા દેખાવ પ્રદાન કરે છે. વિવો માં. આ ઉપરાંત, મોટાભાગના ડેટામાં ઇન્ડક્શનની રજૂઆત કરવામાં આવી છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ અથવા સીઆરબીને બંધનકર્તા સીક પ્રમોટર્સ એવા કોષોમાંથી મેળવ્યા હતા જે પેપ્ટોન્સ જેવા પરિબળો દ્વારા ઉત્તેજિત કરવામાં આવ્યા હતા (બર્નાર્ડ એટ અલ., 2001), વિધ્રુવીકરણ (હંસેન, એટ અલ., 2004), અથવા ઇન્ટ્રાસેસ્યુલર સિગ્નલિંગ કેસ્કેડ્સના વિવિધ સક્રિયકર્તાઓ જેમ કે સીએએમપી અને ઇઆરકે (હેન્સેન એટ અલ., 1999). આપણા પ્રયોગોમાં, ફક્ત "ઉત્તેજના" નો ઉપયોગ ΔFosB ના ઓવરવેરક્સિશન હતો, જે પ્રેરણા માટે પૂરતો છે. સીક અભિવ્યક્તિ એક સાથે લેવામાં, આ સૂચવે છે કે CREB ની ક્ષમતા (અને સંભવિત રૂપે નિયમન) કરવાની ક્ષમતા સીક પ્રમોટર્સ સેલ પ્રકાર અને ચોક્કસ સિગ્નલોંગ માર્ગોની સક્રિયકરણ પર ખૂબ આધારિત છે. વધુમાં, આ સીક CRE-like પ્રમોટર્સ ઘટક (ઓછામાં ઓછું નિર્દેશિત PC12 કોશિકાઓ અને માઉસ સ્ટ્રાઇટમમાં) સીઆરબી અથવા ΔFosB નો સીધો લક્ષ્યાંક નથી. રસપ્રદ રીતે, ની નિયમન FOSB સીઆરબી દ્વારા અભિવ્યક્તિ પણ સેલ પ્રકાર અને ઉત્તેજનાના પ્રકાર માટે વિશિષ્ટ છે. એન્ડરસન દ્વારા એક અભ્યાસ એટ અલ. શોધી કાઢ્યું કે માઉસ સ્ટ્રાઇટમમાં સીઆરબી એન્ટિસેન્સ ઓલિગોન્યુક્લોટાઇટ્સનું ઇન્જેક્શન અંશતઃ ઇન્ડક્શનને અવરોધિત કરે છે. FOSB નીચે કોકેઈન વહીવટ (એન્ડરસન એટ અલ., 2001). જો કે, તેઓએ એમ પણ જોયું કે એલ-દોપાને પ્રેરિત કરવાની ક્ષમતા FOSB 6-OHDA-lesioned સ્ટ્રાઇટમમાં અભિવ્યક્તિ એ સીઆરબી એન્ટિન્સેન ઓલિગોન્યુક્લિઓટાઇડ્સની હાજરીથી પ્રભાવિત ન હતી.

કારણ કે સીઆરબી અને Δફોસ બી પરોક્ષ રીતે નિયમન કરે છે સીક પ્રમોટર, અને ક્રોમેટીન માળખામાં ફેરફારોને ofFosB (જે indFosB ને પ્રેરણા આપે છે)તાંકોવા એટ અલ., 2004; કુમાર એટ અલ., 2005; રેન્થલ એટ અલ., 2008), અમે દલીલ કરી હતી કે ΔFOSB આડકતરી રીતે ક્રોમેટીન સ્ટ્રક્ચરને બદલીને પ્રમોટર્સ પ્રવૃત્તિમાં ફેરફાર કરી શકે છે. જો કે, 2 અઠવાડિયા માટે ઉંદર ઓવરેક્સપ્રેસિંગ ΔFOSB માં, હિસ્ટોન H3 એસીટીલેશનમાં કોઈ ફેરફાર થયો ન હતો. સીક પ્રમોટર (કોષ્ટક 1). આની ચિપ-ચિપ માહિતી દ્વારા સપોર્ટેડ છે Renthal એટ અલ. (2009), જેમણે એસેટીલેટેડ H3 માં બંધનકર્તામાં કોઈ ફેરફારની જાણ કરી નથી સીક ક્રોનિક કોકેનથી ઉદ્ભવેલ ઉંદરમાં પ્રમોટર. ત્યારથી સીક સ્ટ્રેટમમાં પ્રમોટર્સ સક્રિય છે, દમન કરનાર મીથોલેટેડ હિસ્ટોન H3 બંધનની અપેક્ષિત અથવા અવલોકન કરવામાં આવી હતી. રસપ્રદ વાત એ છે કે, એસેટીલેટેડ એચએક્સ્યુએનએક્સએક્સ બંધનમાં ΔFOSB overexpression ને કારણે અમને કોઈ ફેરફાર થયો નથી. બીડીએનએફ પ્રમોટર્સ (જેણે CREB બાઇન્ડિંગ વધારવાનું બતાવ્યું હતું) અથવા CDK5 અને પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટરો (જે ΔFOSB બાઇન્ડિંગમાં વધારો દર્શાવે છે). પ્રમોટર પ્રવૃત્તિમાં ફેરફારો સાથે સંકળાયેલા હિસ્ટોન ફેરફારો અસંખ્ય છે કારણ કે (દ્વારા સમીક્ષા રાન્ડો અને ચાંગ, 2009), સંભવિત અન્ય ક્રાટોમેટિન ફેરફારો છે જે આ જનીનોના ઇન્ડક્શન સાથે જોડાય છે. કોઈપણ એક ક્રાટોમેટિન ફેરફાર, પ્રમોટર પ્રવૃત્તિના સ્તરની આગાહી કરતી હોવા છતાં, ચોક્કસ જીનની સક્રિયકરણ દરમિયાન બદલાતી નથી. ભવિષ્યના કામમાં, આજુબાજુના ક્રોમેટીન માળખામાં અન્ય સંભવિત ફેરફારોને જોવાનું રસપ્રદ રહેશે સીક પ્રમોટર ΔFOSB overexpression ને અનુસરે છે. રસપ્રદ રીતે, ક્રોનિક કોકેન (સંભવિત દ્વારા ΔFOSB ઇન્ડક્શન) એ સિર્ટ્યુઇન 1 અને 2, વર્ગ III હિસ્ટોન ડેસેટીલેઝની અભિવ્યક્તિને પ્રેરિત કરવામાં આવી છે જે ન્યુરોનલ ફિઝિયોલોજી, ઇઆરકે સિગ્નલિંગ અને કોકેઈનને વર્તણૂકના પ્રતિસાદમાં ફેરફાર કરવા લાગે છે.રેન્થલ એટ અલ., 2009). હિસ્ટોન ડેકેટીલેઝના ઇન્ડક્શનમાં એક સાથે મોટી સંખ્યામાં જીન્સની અભિવ્યક્તિને નિયંત્રિત કરવાની ક્ષમતા હશે. દ્વારા ક્રોમેટીન માળખું માં વૈશ્વિક ફેરફારો.

એક શક્ય ઉમેદવાર સામેલ સીક ΔFOSB overexpression ને અનુસરતા નિયમન એ એપી- 1 કુટુંબના સભ્ય સીએફઓએસ હતું. સી.એફ.ઓ.નું અભિવ્યક્તિ એ સીઆરબી દ્વારા નિયંત્રિત છે (શેન્ગ એટ અલ., 1990; ઇમ્પી એટ અલ., 2004), અને સીએફઓએસ ઓવેરેક્સપ્રેસન (તેના બંધનકર્તા ભાગીદાર સીજેનનું ઓવરવેક્સપ્રેસન સાથે સુસંગત) વધે છે સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ (રોર્કે એટ અલ., 1999). તેથી, ટૂંકા ગાળાના ΔFOSB overexpression કારણે વધેલા CREB સ્તરો સીએફઓએસ સ્તરમાં વધારો કરી શકે છે અને તેના પરિણામે આમાં વધારો થાય છે સીક સીઆર જેવા સાઇટ. cfos RFOSB overexpression ના બે અઠવાડિયા પછી એમઆરએન (MRNA) ઉંદરમાં પ્રેરિત છે.મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003) અને ક્રોનિક કોકેન અથવા લાંબા ગાળાના mફોસબી ઓવેરેક્સપ્રેસન (ચિકિત્સા)રેન્થલ એટ અલ., 2008). અહીં આપણે શોધી કાઢીએ છીએ કે સીએફઓ સીધી સીધી જોડે છે સીક પ્રાણઘાતક પેશીઓમાં પ્રમોટર, જો કે, osFOSB overexpression નોંધપાત્ર રીતે બંધનકર્તા વધારો કરતું નથી. આ સૂચવે છે કે જ્યારે કેએફઓ નિયમનમાં સામેલ થઈ શકે છે સીક સામાન્ય રીતે અભિવ્યક્તિ, એકલા સીએફઓના બંધનકર્તામાં ફેરફાર એ સંભવિત એવી પ્રક્રિયા નથી કે જેના દ્વારા ΔFOSB નિયમન કરે છે સીક અભિવ્યક્તિ જો કે, સંભવ છે કે, ΔFOSB, સીએફઓ (દા.ત. બદલી ફોસ્ફોરિલેશન) માં પોસ્ટ-ટ્રાન્સલેશનલ ફેરફારો અથવા પ્રેરણાદાયક ભાગીદાર (જેમ કે સીજેન) અથવા સહ-સક્રિયકર્તા પ્રોટીનની અભિવ્યક્તિને પ્રેરિત કરી શકે છે. જો કે, આત્યંતિક CRE-like સાઇટ (જે અગાઉ એપી-એક્સએનટીએક્સ સંકુલ માટે બંધનકર્તા સાઇટ તરીકે બતાવવામાં આવી છે, જુઓ) હન અને ડિકસન, 1990) વધારવા માટે જરૂરી નથી સીક પ્રમોટર પ્રવૃત્તિ ΔFOSB overexpression (જેમ કે અમારા રિપોર્ટર જીન પ્રયોગોમાં આકારણી કરેલ) સાથે જોવામાં આવે છે, તે કારણ છે કે અન્ય ટ્રાં-એક્ટિંગ પરિબળો પણ ΔFOSB દ્વારા નિયમન કરવામાં આવે છે.

આ સીક અમારા લ્યુસિફેરેઝ રિપોર્ટર જીન પ્રયોગોમાં ઉપયોગમાં લેવાતા પ્રમોટર્સ ફ્રેગમેન્ટમાં સાચવેલ SP1 બાઇન્ડિંગ સાઇટ અને ઇ-બૉક્સ (હેન્સન, 2002 દ્વારા સમીક્ષા કરાયેલ) શામેલ છે. ખાસ કરીને, ઇ-બૉક્સ સિક્વન્સ અસંખ્ય ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળોને જોડવા માટે દર્શાવવામાં આવ્યા છે (દ્વારા સમીક્ષા કરાઈ ફોરેસ્ટ અને મેકનામરા, 2004). પીસીએક્સયુએનએક્સ સેલ્સનો ઉપયોગ કરીને, આપણે જોયું છે કે ઇ-બોક્સનું પરિવર્તન ઘટશે સીક પ્રમોટર્સ પ્રવૃત્તિ, પરંતુ પ્રમોટરની પ્રતિક્રિયા ΔFosB (ડેટા બતાવ્યો નથી) ને બદલતા નથી. રસપ્રદ રીતે, એ સીક-એલવાયસીફેરેઝ રિપોર્ટર, જેમાં CRE સાઇટ અને ઇ-બૉક્સ બંનેમાં પરિવર્તન શામેલ છે તેની પાસે કોઈ શોધી શકાય તેવી મૂળ પ્રવૃત્તિ નથી અને તે ΔFOSB overexpression (અપ્રકાશિત અવલોકન) ને પ્રતિભાવ આપતું નથી. ΔFOSB ક્રિયાના અન્ય સંભવિત મધ્યસ્થી સીક પ્રમોટર્સ એટીએફ છે, જેનો કેટલાક પ્રકારો ક્રોનિક મનોવિશ્લેષક સંપર્ક દ્વારા સ્ટ્રાઇટમમાં પ્રેરિત થવા માટે જાણીતા છે (ગ્રીન એટ અલ., 2008). જો કે, અમને આ એટીએફ (ડેટા બતાવવામાં આવ્યો નથી) ના ΔFosB ઇન્ડક્શન માટે કોઈ પુરાવા મળ્યા નથી, અને એટીએફને પરિવર્તિત સીઆર જેવી સાઇટ સાથે જોડવાની અપેક્ષા નથી. સીક પ્રમોટર

આ અભ્યાસની એક ચેતવણી એ છે કે અમે ΔFosB overexpress માટે અવિશ્વાસને દ્વિ-ટ્રાન્સજેનિક સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરી રહ્યા છીએ અને આમ આ પરિભાષા અને ક્રોનિક કોકેનની વ્યવસ્થા વચ્ચે સમાંતર ચિત્રકામમાં રૂઢિચુસ્ત હોવા જોઈએ. જો કે, 11A ટ્રાન્સજેનિક ઉંદર સ્ટ્રાઇટમમાં ΔFOSB ની ચોક્કસ અસરોને જોવા માટેની અનન્ય તક પૂરી પાડે છે, કારણ કે ઓવેરેક્સપ્રેસ આ મગજ ક્ષેત્ર સુધી મર્યાદિત છે (ચેન એટ અલ., 1998), જ્યારે કોકેનનું વહીવટ અન્ય મગજ વિસ્તારોમાં વિવિધ પ્રકારના પરિવર્તન લાવે છે જે પછીથી આડકતરી રીતે સ્ટ્રાઇટમને અસર કરે છે. આ ઉપરાંત, ક્રોનિક કોકેઈન સાથે સારવાર કરાયેલા બિન-ટ્રાન્સજેનિક પ્રાણીઓની તુલનામાં, જ્યારે કેટલાક અભ્યાસોએ 11A ઉંદરમાં સમાન વર્તણૂંક અને પરમાણુ ફેનોટાઇપ્સનું દસ્તાવેજીકરણ કર્યું છે (કેલ્ઝ એટ અલ., 1999; મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003; રેન્થલ એટ અલ., 2009). વધુમાં, બીબીબી એટ અલ. (2001) સ્ટ્રાઇટલ સમાન સ્તરો અહેવાલ સીડીકેક્સ્યુએક્સએક્સ કોકેન-ચિકિત્સા, બિન-ટ્રાન્સજેનિક કર્કરોગની સરખામણીમાં, તેમજ સીડીકેક્સટીએક્સ લક્ષ્યાંકો, પીએક્સNUMએક્સ અને ડીએઆરપીપી-એક્સ્યુએનએક્સમાં સમાન ફેરફારો સાથે સરખામણી કરવામાં આવતી આ જ 11A સ્ટ્રેનમાં એમઆરએનએ અને પ્રોટીન ઇન્ડક્શન.

નિષ્કર્ષમાં, આપણે શોધી કાઢીએ છીએ કે ટૂંકા ગાળાના ΔFosB અભિવ્યક્તિ સ્ટ્રાઇટમમાં વિવિધ મિકેનિઝમ્સ દ્વારા જનીનોની રજૂઆત તરફ દોરી જાય છે. આ સીધી પ્રમોટર્સ બંધનકર્તા છે, સીઆરબી પ્રોટીન અને પ્રવૃત્તિનો સમાવેશ, ક્રાયોમેટિન ફેરફાર, હજુ સુધી નિર્ધારિત માર્ગો ઉપરાંત.

પર જાઓ:

પ્રાયોગિક પ્રક્રિયાઓ

પ્રાણીઓ

આ બાય-ટ્રાન્સજેનિક 11A પ્રાણીઓ (એનએસઈ-ટીટીએ એક્સ ટેટોપ-Δફોસબી) નો ઉપયોગ આ અભ્યાસમાં કરવામાં આવ્યો હતો અને તેમાં લાક્ષણિકતા છે કેલ્ઝ એટ અલ., 1999. ΔFosB ને ઓવરવેરપ્રેસ કરવા માટે, XIXX અને 3 અઠવાડિયાના વય વચ્ચે ડોક્સાયસીલાઇનમાંથી ઉંદર દૂર કરવામાં આવ્યું હતું, જ્યારે ડોક્સાયસીકલ પર નિયંત્રણ ઉંદર રાખવામાં આવ્યું હતું. બધા ઉંદરો જૂથમાં રાખવામાં આવ્યા હતા અને 6: 12 પ્રકાશ / શ્યામ ચક્ર પર રાખવામાં આવ્યા હતા, 12 AM વાગ્યે લાઇટ્સ અને 7 વાગ્યે લાઇટ બંધ હતા. જાહેરાત lib ખોરાક અને પાણીની પહોંચ બધા માઉસ પ્રયોગો ડલ્લાસમાં યુનિવર્સિટી ઓફ ટેક્સાસ સાઉથવેસ્ટર્ન મેડિકલ સેન્ટરની પ્રાણી સંભાળ અને ઉપયોગ સમિતિ દ્વારા મંજૂર પ્રોટોકોલ્સને અનુસરતા હતા.

રિપોર્ટર અને અભિવ્યક્તિ પ્લાસ્મિડ્સ

જંગલી પ્રકાર (ડબલ્યુટી) સીક પ્રમોટર-લ્યુસિફેરેઝ રિપોર્ટરને લગભગ PGL200-luc વેક્ટર (પ્રોમેગા) માં લગભગ 3 બીપી પીસીઆર ફ્રેગમેન્ટ શામેલ કરીને તૈયાર કરવામાં આવ્યું હતું. આ ટુકડો માઉસ જીની ડીએનએ મેળવી હતી (પ્રાઈમરો: 5 'TATCCTCATTCACTGGGACGC 3' અપસ્ટ્રીમ અને 5 'TACCTTTGGATGGGGAAATCG 3' ડાઉનસ્ટ્રીમ) અને શરૂઆતમાં pGEM-ટી સરળ વેક્ટર (Promega, #A1360) માં શામેલ કર્યા. પ્રમોટર્સ ફ્રેગમેન્ટ પછી પીજીએલએક્સએક્સએક્સ-લુકના કેપ્નએક્સએનએક્સ / એક્સએક્સએક્સએનએક્સએક્સ પ્રતિબંધ એન્ઝાઇમ સાઇટ્સમાં ક્લોન કરવામાં આવ્યું હતું.

માં ક્રાઇસ્ટ પોઇન્ટ પરિવર્તન બનાવવા માટે સીક પ્રમોટર, અગાઉ અહેવાલ કરેલી સીઆરઇ-જેવી સાઇટ (ઇન્દ્રિય પ્રાઇમર: 5'CGTGTCCTGCTCTGGCTCGCACTGGGTAAACA 3 ', એન્ટિસેન્સ પ્રાઇમર: 5'CTGTTTACCCAGTGCGCGCGGGCCGGACACCIGCGGCGGGCCGGACACnes ઇન્સ્ટ્રક્શન કાઇટેજ ઇન્સ્ટ્રકશન કિટની સાથે ક્યુટેકસ ઇન્સ્ટ્રકશન કિટ) માં સંયુક્ત રીતે બનાવવામાં આવ્યું હતું. . આ રિપોર્ટ કરેલી સીઆરઈ જેવી સાઇટ (ACTGCGTCAGC) ને ACTGAGCTCC માં રૂપાંતરિત કરે છે. બધા રિપોર્ટર પ્લાઝમિડની પુષ્ટિ ડીએનએ અનુક્રમ દ્વારા કરવામાં આવી હતી. Osફોસબી અભિવ્યક્તિ પ્લાઝમિડમાં પીસીડીએનએ 3.૧ ની બહુવિધ ક્લોનીંગ સાઇટમાં દાખલ કરેલ સંપૂર્ણ લંબાઈ -ફોસબી ક્રમ છે અને અગાઉ વર્ણવેલ છે (અલેરી અને નેસ્લેર, 2007).

સેલ સંસ્કૃતિ અને ડીએનએ ટ્રાન્સફેક્શન

ડલ્બેક્કોના સંશોધિત ઇગલના માધ્યમ એફ -12 માં ઉંદર ફીયોક્રોમાસાયટોમા (પીસી 12) કોષો જાળવવામાં આવ્યા હતા, જેમાં 10% ઘોડો સીરમ, 5% ગર્ભના બોવાઇન સીરમ, અને 1% પેનિસિલિન / સ્ટ્રેપ્ટોમિસીન 37 ° સે અને 5% સીઓ સાથે પૂરક છે.2. કોષોને ઇલેક્ટ્રોપોરેશન દ્વારા બીટીએક્સ 360 ઇલેક્ટ્રોપોરેટર (350 વી, 0 ઓહ્મ અને 850 μ એફ) નો ઉપયોગ કરીને 800 μL ડલ્બેક્કોની ફોસ્ફેટ બફર બારામાં 4 મીમી ગેપ ક્યુવેટ્સમાં 10 μg રિપોર્ટર અને 5 μg અભિવ્યક્તિના બાંધકામ સાથે. ખાલી વેક્ટર પ્લાઝમિડ (પીસીડીએનએ) નો ઉપયોગ ડીએનએના કુલ જથ્થાને સામાન્ય બનાવવા માટે કરવામાં આવ્યો હતો. સ્થાનાંતર પછી, સૂચવેલ સમય માટે કોશિકાઓ 35 મીમીની કોલેજન-કોટેડ ડીશ પર ઉગાડવામાં આવતી હતી.

લ્યુસિફેરેઝ એસોઝ

સ્થાનાંતરિત થયાના બે કે ત્રણ દિવસ પછી, ડલ્બેક્કોની ફોસ્ફેટ બફર બારામાં ખારમાં કોષો 3 વખત ધોવાયા, લિસ્ડ (25 એમએમ ગ્લાયસિલિગ્લાસીનનો ઉપયોગ કરીને, 15 એમએમ એમજીએસઓ)4, 4 એમએમ ઇજીટીએ, 1% ટ્રીટોન X-100, પીએચ 7.8, 1 એમએમ ડીટીટી), એકત્રિત અને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા સાફ થાય છે. લ્યુસેટના 30 μL ને 140 μL લ્યુસિફેરેઝ પરસ બફર સાથે જોડવામાં આવ્યું હતું (25 એમએમ ગ્લાયસીગ્ગ્લાયસીન, 15 એમએમ એમજીએસઓ4, 4 એમએમ ઇજીટીએ, 1 એમએમ ડીટીટી, 1 એમએમ એટીપી, 1 એમએમ પોટેશિયમ ફોસ્ફેટ, 1 એમએમ Coenzyme એ, પીએચ 7.8). લ્યુમિનિસન્સ પ્રવૃત્તિને 800 μL 40 એમએમ લ્યુસિફેરીન દીઠ સ્વયંસંચાલિત ઇન્જેક્શન પછી FLX-1 માઇક્રોપ્લેટ ફ્લોરોસેન્સ રીડરનો ઉપયોગ કરીને માપી શકાય છે. બાયોઆરેડ પ્રોટીન પરોક્ષ દ્વારા નિર્ધારિત કુલ પ્રોટીન સામગ્રીને લ્યુસિફેરેઝ પ્રવૃત્તિ સામાન્ય કરવામાં આવી હતી.

ઇલેક્ટ્રોફોરેટીક ગતિશીલતા પાળી પરસેવો

દ્વિ-ટ્રાન્સજેનિક 11A ઉંદર (જે જ્યાં 2 અથવા 8 અઠવાડિયા માટે ડોક્સાઇસીકલ પર અથવા બંધ રાખવામાં આવે છે) માંથી સ્ટ્રાઇટમના દ્વિપક્ષીય કાપીને પરમાણુ અર્ક. (મેકક્લુંગ અને નેસ્લેર, 2003) અનુસાર તૈયાર કરવામાં આવી હતી હુઆંગ અને વોલ્ટર્સ (1996). 32પ્રોમેગા જેલ શિફ્ટ એસે સિસ્ટમ સિસ્ટમ પ્રોટોકોલ (#E3300) નો ઉપયોગ કરીને ડબલ-સ્ટ્રેન્ડેડ ઓલિગોન્યુક્લિઓટાઇડ પ્રોબ્સ તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા અને રોશે ક્વિક સ્પિન કોલમ્સનો ઉપયોગ કરીને પ્રોબ્સ શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા હતા. સર્વસંમતિ CRE અને AP-1 ચકાસણી ક્રમ પ્રોમેગા (#E328A અને E320B, અનુક્રમે) માંથી હતા અને સીક સીઆર સીક્વન્સ હતા (Cck-CRE અર્થ: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; Cck-CRE એન્ટિસેન્સ: CCCAGTGCTGACGCAGTCCAGCTCTGCTAGCTTT).

બંધબેસતા પ્રતિક્રિયાઓ અને ઇલેક્ટ્રોફોરેસીસ પ્રોમેગા જેલ શિફ્ટ એસે સિસ્ટમ પદ્ધતિ (#E3300) ના ફેરફારોનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યા હતા. લેબલ થયેલ ચકાસણીના 50,000 CPM ને ​​10 μg સ્ટ્રાઇટલ પરમાણુ અર્ક સાથે જોડવામાં આવ્યું હતું. રેડિઓલેબલ્ડ પ્રોબ્સની રજૂઆત પહેલાં શીત પ્રતિસ્પર્ધી ડીએનએ અથવા એન્ટિબોડીઝ ઉમેરવામાં આવ્યા હતા. સુપરસ્ફિફ્ટ પ્રયોગો માટે, CREB એન્ટિબોડી (અપસ્ટેટ બાયોટેકનોલોજી # 2-06) ની 083 μg નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. પ્રતિક્રિયાઓ 4% પોલીક્રીમાલાઇડ જેલ, સૂકા, અને ફિલ્મમાં ખુલ્લી (ઇલેક્ટ્રોનિફાઈંગ સ્ક્રીનો 1 કલાકથી 2 દિવસોનો ઉપયોગ કરીને) પર ઇલેક્ટ્રોફોર્સેડ કરવામાં આવી હતી.

ઇમ્યુનોબ્લોટિંગ

પીસી 12 કોષો માટે, ટ્રાંફેક્ટેડ કોષોની 35 મીમી પ્લેટો બરફના ઠંડામાં ધોવાઇ હતી ડલ્બેક્કોની ફોસ્ફેટ-બફર ખારા અને લાઇસેટ્સ આઇસ કોલ્ડ આરઆઇપીએ લિસીસ બફરમાં તૈયાર કરવામાં આવી હતી (50 એમએમ ટ્રિસ પીએચ 7.4, 5 એમએમ એનએસીએલ, 5 એમએમ ઇડીટીએ, 1% ડિઓક્સાયલોટ, 1 % ટ્રાઇટોન એક્સ -100, 0.1% સોડિયમ ડોડિસિલ સલ્ફેટ) જેમાં પ્રોટીઝ અવરોધકો હોય છે. સોનિકેક્શન, ક્લિયરિંગ અને બ્રેડફોર્ડ પ્રોટીન એસે પછી, લાઇસેટ્સને સંપૂર્ણ રીતે ડિએચ્યુરેશન કરવામાં આવ્યું હતું અને દરેક નમૂનાના 50 μg 10% એસડીએસ પોલિઆક્રિલામાઇડ જેલ્સ પર ઇલેક્ટ્રોફોરેસ કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રોટીનને પીવીડીએફ પટલમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવી હતી, જેમાં ટ્રિસ-બફરવાળા ખારામાં 1% ટ્યુન -3 (ટીબીએસ-ટી દૂધ) ધરાવતા 0.1% ન -ટ-ફેટ ડ્રાય દૂધમાં 20 કલાક માટે અવરોધિત કરવામાં આવ્યો હતો, અને પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ (સીઆરઇબી-) સાથે 4 vern સે ઉપર રાતોરાત તપાસ કરવામાં આવશે. અપસ્ટેટ બાયોટેકનોલોજી # 06-083, 1: 1,000 પર વપરાય છે; GAPDH- સિગ્મા # G8795, 1: 80,000 પર વપરાય છે) ટીબીએસ-ટી દૂધમાં ભળી જાય છે. ટીબીએસ-ટીમાં બહુવિધ વોશ કર્યા પછી, ક્ષારયુક્ત ફોસ્ફેટ-કન્જુગેટેડ ગૌણ એન્ટિબોડીઝ (સિગ્મા) નો ઉપયોગ કરીને ઓરડાના તાપમાને એક કલાક માટે ફોલ્લોની તપાસ કરવામાં આવી હતી, જેમાં ટીબીએસ-ટી દૂધમાં 1: 5,000 પાતળા કરવામાં આવ્યા હતા. ટ્રિસ-બફર કરેલ ખારામાં બહુવિધ વોશ કર્યા પછી, રંગ પ્રતિક્રિયા બાયોરેડ (# 170-6432) સૂચનાઓ અનુસાર કરવામાં આવી હતી. મેમ્બ્રેન રાતોરાત સૂકાઈ ગયા, ફ્લેટબેડ સ્કેનર પર સ્કેન કર્યાં અને ઇમેજજે (નીચે જુઓ) નો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવેલી ડેન્સિટોમેટ્રી.

સ્ટ્રાઇટલ અર્ક માટે, પશ્ચિમી બ્લોટ assays અગાઉ પ્રકાશિત તરીકે હાથ ધરવામાં આવ્યા હતા (આશા અને અલ., 1994). ટીશ્યુને ડીકેપિએટેડ મીસમાંથી દૂર કરવામાં આવ્યું હતું, બરફ પર મૂકવામાં આવ્યું હતું અને 1 મીમીની જાડાઇ પર મગજના મેટ્રિક્સ પર વિભાજિત કર્યું હતું. ત્યારબાદ પેશીને પંચ લેવામાં આવે છે અને તેનો ઉપયોગ ન થાય ત્યાં સુધી -80 ° C પર સ્થિર થાય છે. ટિસ્યુને બરફ પર સોફટાઇટેડ ડિટરજન્ટ આધારિત બફરમાં સોસાયટી આપવામાં આવી હતી, જેમાં ફોસ્ફેટેસ અને પ્રોટીઝ ઇનહિબિટર (રોશે, સિગ્મા) બંને શામેલ છે. Sonication પછી, નમૂનાઓ ઉકળતા પાણીમાં denatured અને 15,000xg પર 15 મિનિટ માટે centrifuged હતા; સુપરરેટન્ટને ત્યારબાદ એકત્રિત અને પ્રક્રિયા કરવામાં આવી હતી; પ્રોટીન સાંદ્રતા જથ્થો પછી બ્રેડફોર્ડ પરોપયોગ (બાયો-રેડ) નો ઉપયોગ કરીને પ્રમાણિત કરવામાં આવતો હતો. નમૂનાઓ 10% એક્રાઇમાઇડ / બિસેક્રાઇમાઇડ જેલ પર ચલાવવામાં આવ્યા હતા, એક પીવીડીએફ પટલમાં સ્થાનાંતરિત, 5% દૂધમાં અવરોધિત અને પ્રાથમિક એન્ટિબોડીઝ (એન્ટિ-સીઆરબી, અપસ્ટેટ, લેક પ્લાસિડ, એનવાય) સાથે ઉકળતા હતા. બ્લેટ્સને પાછળથી કેમેઇલ્યુમાઇન્સન્સ સિસ્ટમ (પીઅર્સ) નો ઉપયોગ કરીને કલ્પના કરવામાં આવી હતી. બધા નમૂનાઓ GAPDH (ફિટ્ઝગેરાલ્ડ, કોનકોર્ડ, એમએ) ને સામાન્ય કરવામાં આવ્યા હતા. અમે ખીલની રેખીય શ્રેણીમાં છીએ તે સુનિશ્ચિત કરવા માટે માનક વળાંક ચલાવવામાં આવ્યા હતા.

ડેન્સિટૉમેટ્રી વિશ્લેષણ

પીસીએક્સ્યુએનએક્સ ઇમ્યુનોબ્લોટ્સ માટે, ડેન્સિટૉમેટ્રી વિશ્લેષણ, ImageJ નો ઉપયોગ કરીને રોડબર્ડ કેલિબ્રેશન સાથે કરવામાં આવ્યો હતો. સરેરાશ માપનો સંકેત દરેક માપથી ઘટાડવામાં આવ્યો હતો અને સીઆરબીના ગુણોત્તરને GAPDH સિગ્નલમાં દરેક નમૂના માટે ગણતરી કરવામાં આવી હતી. સ્ટ્રેઅલ ઇમ્યુનોબ્લોટ્સ અને ઇએમએસએ વિશ્લેષણ માટે, સ્કિયોન ઇમેજ 12c પૃષ્ઠભૂમિ બાદબાકી સાથે ઉપયોગમાં લેવાય છે.

Chromatin ઇમ્યુનોપેરેઇગ (ચિપ)

ચિપ assays ની પદ્ધતિઓ અનુસાર કરવામાં આવી હતી Tsankova એટ અલ. (2004) અને કુમાર એટ અલ. (2005). સંક્ષિપ્તમાં, ડોસીસીક્લાઇન પર અથવા બંધ રાખેલા 11 એ ઉંદરના દ્વિપક્ષીય સ્ટ્રિએટલ નમૂનાઓ 1% ફોર્માલ્ડીહાઇડ સાથે ક્રોસલિંક કરવામાં આવી હતી અને ક્રોસલિંકિંગ ગ્લાયસીન (0.125 એમની અંતિમ સાંદ્રતા) સાથે શણગારેલી હતી. આ નમૂનાઓ કોર્ટેક્સને હટાવતા મધ્યવર્તી કેન્દ્રના સ્તર પર લેવામાં આવતી મગજની આખી ટુકડાઓમાંથી હતા. ક્રોમેટિન સોનીકેશન દ્વારા આશરે 0.2 થી 1 કેબી ટુકડા કરવામાં આવતું હતું, તેને પ્રોટીન જી માળા (થર્મો સાયન્ટિફિક # 22852) થી સાફ કરવામાં આવ્યું હતું, અને ઇનપુટ નમૂનાઓ -80 ° સે થી વધુ સ્થિર કરવામાં આવ્યા હતા. દરેક વરસાદ માટે ક્રોમ 60ટિનનો 100 અને 5 μg ની વચ્ચે ઉપયોગ થતો હતો. દરેક પ્રાથમિક એન્ટિબોડીના 10-06 μg નો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો (સીઆરઇબી: અપસ્ટેટ બાયોટેકનોલોજી # 863-48, Δફોસબી: સાન્ટા ક્રુઝ બાયોટેકનોલોજી # એસસી -3 એક્સ, એસિટિલેટેડ એચ 06: અપસ્ટેટ બાયોટેકનોલોજી # 599-3, મેથિલેટેડ એચ 9 (એલવાયએસ 7202): સેલ સિગ્નલિંગ ટેકનોલોજી, સીએફઓએસ: સાન્ટા ક્રુઝ બાયોટેકનોલોજી # એસસી-22852x). એન્ટિબોડી-ક્રોમેટીન સંકુલને નિર્માણની સૂચનાઓ અનુસાર (પ્રોટીન જી વત્તા મણકા સાથે) રોગપ્રતિકારક શક્તિ આપવામાં આવી હતી (થર્મો સાયન્ટિફિક # XNUMX). ઇનપુટ અને અવ્યવસ્થિત નમૂનાઓના વિપરીત ક્રોસલિંકિંગને પગલે, દરેક નમૂનાને માત્રાત્મક પીસીઆર (ક્યુપીસીઆર) ને આધિન હતા. ચિપ માટે આ તમામ એન્ટિબોડીઝનો ઉપયોગ વ્યાપકપણે માન્ય કરવામાં આવ્યો છે (તાંકોવા એટ અલ., 2004; કુમાર એટ અલ., 2005; રેન્થલ એટ અલ., 2009).

રસના પ્રત્યેક જનીન પ્રમોટર પર પ્રોટીનના સ્તરને નિર્ધારિત કરવામાં આવતું હતું, જે ક્વીપીએન (એપ્લાય્ડ બાયોસિસમ્સ (એબીઆઇ) પ્રિઝમ એક્સ્યુએક્સએક્સ, ફોસ્ટર સિટી, સીએ દ્વારા સંકળાયેલ ડીએનએની માત્રાને માપવા દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું. ઇનપુટ અથવા કુલ ડીએનએ (નોનિમ્યુનપ્રોપ્રિટેટિટેડ) અને ઇમ્યુનોપ્રિસિપિટેડ ડીએનએ (એસઆઇબીઆર ગ્રીન) (એપ્લાય્ડ બાયોસિસ્ટમ, સીએ) ની હાજરીમાં ત્રિજ્યામાં વધારો થયો હતો. સીક્વેન્સ ડિટેક્ટર 7700 સૉફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને પ્રત્યેક નમૂનામાંથી સીટી મૂલ્યો મેળવવામાં આવ્યા હતા. ટેમ્પલેટ ડીએનએનો સંબંધિત જથ્થો ΔΔ સીટી પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યો હતો (તાંકોવા એટ અલ., 2004). પ્રાઇમર્સનો ઉપયોગ: બીડીએનએફ પ્રમોટર 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA CDK5 પ્રમોટર્સ: જીસીટીએજીએજીજીટીજીટીસીએજીજીએજીજીટીસી; જીટીજીસીસીસીસીસીટીસીટીટીટીટીટીટીએટીકે પ્રમોટર્સ: સીટીટીજીજીજીસીટીએજીસીસીસીટીટીસીએસીટીજી; ટીટીએએએટીએટીએજીટીસીસીસીસીસીસીસીસીજીજીટીટીસીજી પ્રોડિયોનોર્ફિન પ્રમોટર: જીજીસીટીસીસીટીટીજીટીજીસીટીસીએસીએસીએસી; જીસીજીસીટીટીટીટીટીટીટીસીએસીટીટીટીએસીએ.

આંકડાકીય વિશ્લેષણ

બધા ડેટા અર્થ તરીકે રજૂ કરવામાં આવે છે ± સરેરાશની ધોરણની ભૂલ. આંકડાકીય તફાવત વિદ્યાર્થીની બે પૂંછડીવાળું ટી-ટેસ્ટ (પી <0.05) દ્વારા નક્કી કરવામાં આવ્યું હતું. જ્યારે બહુવિધ તુલના કરવામાં આવી ત્યારે, પી-વેલ્યુઝને બોનફરોની કરેક્શનનો ઉપયોગ કરીને સમાયોજિત કરવામાં આવી હતી.

પર જાઓ:

સ્વીકાર

મદદરૂપ ચર્ચાઓ માટે અમે વીલ રંથલ અને અરવિંદ કુમારનો આભાર માનીએ છીએ. અમે આ પ્રયોગોને ભંડોળ પૂરું પાડવા માટે એનઆઈડીએનો આભાર માગીએ છીએ.

પર જાઓ:

ફૂટનોટ્સ

પ્રકાશકની અસ્વીકરણ: આ યુનાઈટેડ હસ્તપ્રતની પીડીએફ ફાઇલ છે જે પ્રકાશન માટે સ્વીકારવામાં આવી છે. અમારા ગ્રાહકોની સેવા તરીકે અમે હસ્તપ્રતનો આ પ્રારંભિક સંસ્કરણ પ્રદાન કરીએ છીએ. આ હસ્તપ્રત તેના અંતિમ સંક્ષિપ્ત સ્વરૂપમાં પ્રકાશિત થાય તે પહેલાં, પરિણામરૂપ સાબિતીની કૉપિડિટિંગ, ટાઇપસેટીંગ અને સમીક્ષાની રહેશે. કૃપા કરીને નોંધો કે ઉત્પાદન પ્રક્રિયા દરમિયાન ભૂલો શોધી શકાય છે જે સામગ્રીને પ્રભાવિત કરી શકે છે, અને જર્નલ પર લાગુ થતાં તમામ કાનૂની દાવાઓ.

વર્ગીકરણ શરતો:

વિભાગ: # એક્સએનટીએક્સ સેલ્યુલર અને ચેતાતંત્રની પરમાણુ જીવવિજ્ઞાન

પર જાઓ:

સંદર્ભ

  1. એન્ડરસન એમ, કોનરાડી સી, ​​સેન્સી એમએ. CAMP રિસ્પોન્સ એલિમેન્ટ-બાઇન્ડિંગ પ્રોટીન ડોપામાઇન-આશ્રિત જનીન અભિવ્યક્તિ માટે અખંડમાં જરૂરી છે પરંતુ ડોપામાઇન-ડેનર્વેટેડ સ્ટ્રાઇટમ નથી. જે ન્યુરોસી. 2001; 21: 9930-43. [પબમેડ]
  2. બેરોટ એમ, ઓલિવિયર જેડી, પેરોટી લિ, ડિલેન આરજે, બર્ટન ઓ, ઇશ એજે, ઇમ્પી એસ, સ્ટ્રોમ ડીઆર, નેવ આરએલ, યિન જેસી, ઝાચારીઉ વી, નેસ્લેર ઇજે. ન્યુક્લિયસમાં CREB પ્રવૃત્તિ ભાવનાત્મક ઉત્તેજનાને વર્તણૂકલક્ષી પ્રતિસાદોના ગેટિંગ શેલ નિયંત્રણોને જોડે છે. પ્રો નેટ નેટ એકેડ સાયન્સ યુએસ એ. 2002; 99: 11435-40. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  3. બીનફેલ્ડ એમસી, કોનોલી કેજે, પીઅર્સ આરસી. કોકેઈનની સારવારમાં ન્યુક્લિયસ એક્મ્બમ્બન્સની જાગૃતતાના શેલમાં ઉદ્ભવતા કોલેસિસ્ટોકિનિન (સીસીકે) વધે છે, મુક્ત રીતે ચલિત થતા ઉંદરો, તે અસર જે ઉંદરોમાં વધારીને અસર કરે છે જે કોકેઈનને વ્યવહારિક રીતે સંવેદનાત્મક બનાવે છે. જે ન્યુરોકેમ. 2002; 81: 1021-7. [પબમેડ]
  4. બર્નાર્ડ સી, સુટર એ, વિન્સન સી, રેટિનાઉ સી, ચાયવિઆલ જે, કોર્ડિઅર-બુસાત એમ. પેપટોન્સ ચિકિત્સા એડેનોસિન મોનોફોસ્ફેટ પ્રતિક્રિયા તત્વ-બંધનકર્તા પરિબળો દ્વારા આંતરડાના cholecystokinin જીન ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન ઉત્તેજીત કરે છે. એન્ડ્રોક્રિનોલોજી. 2001; 142: 721-9. [પબમેડ]
  5. બીબીબી જેએ, ચેન જે, ટેલર જેઆર, સ્વેનિંગ્સિંગ પી, નિશી એ, સ્નાઇડર જીએલ, યાન ઝેડ, સાગવા ઝેડકે, વાઇમ સીસી, નાયર એસી, નેસ્લેર ઇજે, ગ્રેન્ગાર્ડ પી. કોકેઈનના લાંબા સમય સુધીના સંપર્કના પ્રભાવો ન્યુરોનલ પ્રોટીન સીડીકેક્સ્યુએક્સએક્સ દ્વારા નિયંત્રિત છે. કુદરત 5; 2001: 410-376. [પબમેડ]
  6. ચા-મોલ્સ્ટાડ એચ, કેલર ડીએમ, યોચમ જીએસ, ઇમ્પી એસ, ગુડમેન આર.એચ. ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળની સીઆર-ટાઇપ-વિશિષ્ટ બંધન સીઆરએપી-રિસ્પોન્સ તત્વ પર CREB. પ્રો નેટ નેટ એકેડ સાયન્સ યુએસ એ. 2004; 101: 13572-7. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  7. ચેન જે, નાઇ હે, કેલ્ઝ એમબી, હિરોઇ એન, નાકાબેપુ વાય, હોપ બીટી, નેસ્લેર ઇજે. ઇલેક્ટ્રોકોનવુલિવ જપ્તી અને કોકેઈન સારવાર દ્વારા ડેલ્ટા એફઓએસબી અને ફોસબી જેવા પ્રોટીનનું નિયમન. મોલ ફાર્માકોલ. 1995; 48: 880-9. [પબમેડ]
  8. ચેન જે, કેલ્ઝ એમબી, ઝેંગ જી, સાકાઇ એન, સ્ટીફન સી, શોકેટ પીઇ, પિસીસટોટો એમઆર, ડુમન આરએસ, નેસ્લેર ઇજે. ટ્રાન્સજેનિક પ્રાણીઓ મગજમાં અવિચારી, લક્ષિત જનીન અભિવ્યક્તિ. મોલ ફાર્માકોલ. 1998; 54: 495-503. [પબમેડ]
  9. ચેન જે, ઝાંગ વાય, કેલ્ઝ એમબી, સ્ટેફન સી, એંગ ઇએસ, ઝેંગ એલ, નેસ્લેર ઇજે. હિપ્કોકેમ્પસમાં ક્રોનિક ઇલેક્ટ્રોકોન્સલિસિવ હુમલાઓ દ્વારા સાયકલિન-આશ્રિત કિનેઝ 5 નું ઇન્ડક્શન: ΔFOSB ની ભૂમિકા. જે ન્યુરોસી. 2000; 20: 8965-71. [પબમેડ]
  10. ચિનનોવ વાય, કેર્પોલા ટીકે. ઘણા પ્રકારના એન્કાઉન્ટર બંધ કરો: ફૉસ-જૂન ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ કે જે ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન નિયમનકારી વિશિષ્ટતા મધ્યસ્થી કરે છે. ઓન્કોજેન. 2001; 20: 2438-52. [પબમેડ]
  11. કોલ આરએલ, કોનરાડી સી, ​​ડગ્લાસ જે, હાયમેન એસ. એમ્ફેટામાઇન અને ડોપામાઇન માટે ન્યુરોનલ અનુકૂલન: ઉંદર સ્ટ્રાઇટમમાં પ્રોડિનોર્ફિન જનીન નિયમનનું પરમાણુ મિકેનિઝમ્સ. ન્યુરોન. 1995; 14: 813-23. [પબમેડ]
  12. દાવલ ડીજી, રાયચૌધરી આર, ડોકરે જીજે, ડીમાલીન આર. એસસીસી-એક્સ્યુએનએક્સ સેલ્સમાં પીએસીએપી દ્વારા સીસીકે જીન ટ્રાન્સક્રિપ્શનનું નિયંત્રણ. એમ જે ફિઝિઓલ ગેસ્ટ્રોઇન્ટેસ્ટ લિવર ફિઝિઓલ. 1; 2000: G279-605. [પબમેડ]
  13. ડિંગ ઝેડઝેડ, મોચેટી આઇ. ઉંદર સ્ટ્રાઇટમમાં cholecystokinin એમઆરએનએ સામગ્રીની ડોપામિનેર્જિક નિયમન. બ્રેઇન રેઝ મોલ બ્રેઇન રેઝ. 1992; 12: 77-83. [પબમેડ]
  14. ફોરેસ્ટ એસ, મેકનામરા સી. આઇડી ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળો અને વેટસ્ક્યુલર વેરિયેશન રચનાનું કુટુંબ. Arterioscler થ્રોમ્બ વાસ્ક Biol. 2004; 24: 2014-20. [પબમેડ]
  15. ગેવ્રે જેસી, કોર્ડિઅર-બુસાત એમ, નિમોઝ-ગિલાર્ડ ઇ, ચેવિઆલલ જેએ, એબેલો જે. કો-આવશ્યકતા સાયક્લિક એએમપી- અને કેલ્શિયમ-આધારીત પ્રોટીન કેનાસ પ્રોટીન હાઇડ્રોલિએટ્સ દ્વારા cholecystokinin જીનની ટ્રાન્સક્રિપ્શન સક્રિયકરણ માટે. જે બાયોલ કેમ. 2002; 277: 22407-13. [પબમેડ]
  16. ગ્રીન ટીએ, અલીભાઈ આઈ, અનન્ટરબર્ગ એસ, નેવ આરએલ, ઘોસ એસ, તમિંગા સીએ, નેસ્લેર ઇજે. ન્યૂક્લિયસ સંક્ષિપ્તમાં ATF2, ATF3, અને ATF4 સક્રિય ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળો (એટીએફ) નું સંકલન અને લાગણીશીલ વર્તણૂકના તેમના નિયમન. જે ન્યુરોસી. 2008; 28: 2025-32. [પબમેડ]
  17. હેમિલ્ટન એમઈ, રેડૉન્ડો જેએલ, ફ્રીમેન એએસ. તીવ્ર ડ્રગ વહીવટના જવાબમાં ઉંદર ન્યુક્લિયસમાં ડોપામાઇન અને cholecystokinin નું ઓવરફ્લો. સમાપ્ત કરો. 2000; 38: 238-42. [પબમેડ]
  18. હેનસેન ટીવી, રેફેલ્ડ જે.એફ., નીલ્સન એફ.સી. મિટgenજેન-સક્રિયકૃત પ્રોટીન કિનેઝ અને પ્રોટીન કિનેઝ સિગ્નલિંગ માર્ગો સાયકલ એડેનોસિન 3 ′, 5′-મોનોફોસ્ફેટ રિસ્પ્શન એલિમેન્ટ-બાઈન્ડિંગ પ્રોટીનના સક્રિયકરણ દ્વારા ચોલેસિસ્ટોકિનિન ટ્રાંસ્ક્રિપ્શનને ઉત્તેજિત કરે છે. મોલ એન્ડોક્રિનોલ. 1999; 13: 466–75. [પબમેડ]
  19. હેન્સન ટીવી, નીલસન એફસી. ન્યુરોનલ cholecystokinin જીન ટ્રાન્સક્રિપ્શન નિયમન. સ્કેન્ડ જે ક્લિન લેબ ઇન્વેસ્ટમેન્ટ સપ્લાય. 2001; 234: 61-7. [પબમેડ]
  20. હંસેન ટીવી. Cholecystokinin જીન ટ્રાન્સક્રિપ્શન: પ્રમોટર્સ તત્વો, ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળો અને સિગ્નલિંગ માર્ગો. પેપ્ટાઇડ્સ. 2001; 22: 1201-11. [પબમેડ]
  21. હેન્સન ટીવી, રેહફેલ્ડ જેએફ, નીલસન એફસી. કે.સી.એલ. અને ફોર્સ્કોલિન સીઆરબી અને સહ-સક્રિયકર્તા સીબીપીના સંકલન સક્રિયકરણ દ્વારા cholecystokinin જીન અભિવ્યક્તિને સહજ રીતે નિયંત્રિત કરે છે. જે ન્યુરોકેમ. 2004; 89: 15-23. [પબમેડ]
  22. હાન આરએસ, ડિક્સન જે. ઉંદર cholecystokinin જીનની અભિવ્યક્તિ માટે આવશ્યક ટ્રાન્સક્રિપ્શનલ એન્હેન્સર માનવ સી-ફોસ જીનની -296 તત્વની સમાન ક્રમ ધરાવે છે. જે બાયોલ કેમ. 1990; 265: 15455-63. [પબમેડ]
  23. હિરો એન, મરેક જીજે, બ્રાઉન જેઆર, યે એચ, સાઉદો એફ, વૈદ્ય વી, ડુમન આરએસ, ગ્રીનબર્ગ એમઇ, નેસ્લેર ઇજે. કાલ્પનિક, સેલ્યુલર, અને ક્રોનિક ઇલેક્ટ્રોકોવ્વાલિવ હુમલાના વર્તણૂક ક્રિયાઓમાં એફઓએસબી જનીનની આવશ્યક ભૂમિકા. જે ન્યુરોસી 1998. 1998; 18: 6952-62. [પબમેડ]
  24. હોકફટેલ ટી, રેહફેલ્ડ જેએફ, સ્કીર્બોલ એલ, આઇવર્ક બી, ગોલ્ડસ્ટેઇન એમ, માર્ક કે કે. મેસો-લિંબિક ન્યુરોન્સમાં ડોપામાઇન અને સીસીકેની સહઅસ્તિત્વ માટેનો પુરાવો. કુદરત 1980; 285: 476-8. [પબમેડ]
  25. આશા છે બીટી, કેલ્ઝ એમબી, ડુમન આરએસ, નેસ્લેર ઇજે. ક્રોનિક ઇલેક્ટ્રોકોવ્વાલિવ જપ્તી (ઇસીએસ) સારવારમાં મગજમાં લાંબા સમયથી ચાલતા એપી-એક્સ્યુએટીએક્સ સંકુલના અભિવ્યક્તમાં પરિણામ અને રચનાઓનો સમાવેશ થાય છે. જે ન્યુરોસી. 1; 1994: 14-4318. [પબમેડ]
  26. આશા છે બીટી, નયે હે, કેલ્ઝ એમબી, સ્વ ડીડબ્લ્યુ, ઇડારોલા એમજે, નકબેપુ વાય, ડુમન આરએસ, નેસ્લેર ઇજે. ક્રોનિક કોકેઈન અને અન્ય ક્રોનિક સારવાર દ્વારા મગજમાં બદલાયેલી ફોસ જેવા પ્રોટીનથી બનેલા લાંબા સમયથી ચાલતા એપી-એક્સ્યુએનએક્સ સંકલનનો સમાવેશ. ન્યુરોન. 1; 1994: 13-1235. [પબમેડ]
  27. હુઆંગ કેએક્સ, વોલ્ટર્સ જેઆર. એપી-એક્સ્યુએનએક્સ ટ્રાન્સક્રિપ્શન પરિબળનો ડૅપામિનેર્જિક નિયમન ઉંદર સ્ટ્રાઇટમમાં ડીએનએ બંધનકર્તા પ્રવૃત્તિ. ન્યુરોસાયન્સ. 1; 1996: 75-757. [પબમેડ]
  28. ઇમ્પી એસ, મેકકોર્લે એસઆર, ચા-મોલ્સ્ટાડ એચ, ડ્વાયર જેએમ, યોચમ જીએસ, બોસ જેએમ, મેકવિની એસ, ડન જેજે, મંડેલ જી, ગુડમેન આર.એચ. સીઆરબી નિયમન વ્યાખ્યાયિત કરે છે: ટ્રાન્સ્ક્રિપ્શન પરિબળ નિયમનકારી પ્રદેશોની જીનોમ-વાઇડ વિશ્લેષણ. સેલ 2004; 119: 1041-54. [પબમેડ]
  29. જોહનસેન એમ, ડેલઘંડી એમપી, મોન્સ યુ. શું સીઆરબી ચાલુ કરે છે? સેલ સિગ્નલ. 2004; 16: 1211-27. [પબમેડ]
  30. જોસેલીન એસએ, વેકેરિનો એફજે. ઉંદરોમાં શરતી પ્રવૃત્તિના વિકાસ પર સીસીકે (એ) અને સીસીકે (બી) વિરોધી વિરોધી અસરોની સામે. બિહાર ફાર્માકોલ. 1996; 7: 505-512. [પબમેડ]
  31. જોસેલીન એસએ, ડી ક્રિસ્ટોફોરો એ, વેકેરિનો એફજે. ઉંદરોમાં કોકેન દ્વારા ઉત્પાદિત શરતી પ્રવૃત્તિના હસ્તાંતરણમાં સીસીકે (એ) રીસેપ્ટર સામેલગીરીનો પુરાવો. મગજ રિઝ. 1997; 763: 93-102. [પબમેડ]
  32. કેલ્ઝ એમબી, ચેન જે, કાર્લેઝન ડબલ્યુએ, જુનિયર, વ્હિસલર કે, ગીલ્ડન એલ, બેકમેન એએમ, સ્ટીફન સી, ઝાંગ વાયજે, મૉરૉટી એલ, સ્વ ડીડબ્લ્યુ, ટેચેચ ટી, બારાનોઉસ્કાસ જી, સર્મેયર ડીજે, નેવ આરએલ, ડુમન આરએસ, પિસિકોટો એમઆર નેસ્લેર ઇજે. મગજમાં ટ્રાંસ્ક્રિપ્શન પરિબળ ડેલ્ટાફોસબીનું અભિવ્યક્તિ કોકેન પ્રત્યે સંવેદનશીલતાને નિયંત્રિત કરે છે. કુદરત 1999; 401: 272-6. [પબમેડ]
  33. કુમાર એ, ચોઈ કે.એચ., રાંથલ ડબ્લ્યુ, ત્સાનોકો એનએમ, થિયોડ્બલ ડી, ટ્રૂંગ એચટી, રુસો એસજે, લેપ્લન્ટ ક્યૂ, સાસાકી ટીએસ, વ્હિસલર કે.એન., નેવ આરએલ, સ્વ ડીડબ્લ્યુ, નેસ્લેર ઇજે. ક્રોટોમેટિન રિમોડેલિંગ એ સ્ટ્રેટમમાં કોકેઈન-પ્રેરિત પ્લાસ્ટિકિટીની અંતર્ગત એક મુખ્ય મિકેનિઝમ છે. ન્યુરોન. 2005; 48: 303-14. [પબમેડ]
  34. માત્સસન બીજે, બોસર્ટ જેએમ, સિમોન્સ ડે, નોઝકી એન, નાગકર ડી, ક્ર્યુઅરટર જેડી, હોપ બીટી. કોકેઈન-સેન્સિટાઇઝ્ડ ઉંદરોના ન્યુક્લિયસ સંક્ષિપ્તમાં કોકેન-પ્રેરિત સીઆરબી ફોસ્ફોરિલેશન એક્સ્ટ્રા સેલ્યુલર સિગ્નલ-સંબંધિત કિનાઝના વિસ્તૃત સક્રિયકરણ દ્વારા સક્ષમ છે, પરંતુ પ્રોટીન કિનેઝ એ. જે ન્યુરોકેમ નથી. 2005; 95: 1481-94. [પબમેડ]
  35. મેકક્લુંગ સીએ, નેસ્લેર ઇજે. સીઆરબી અને ડેલ્ટાફોસબી દ્વારા જીન અભિવ્યક્તિ અને કોકેઈન પુરસ્કારનું નિયમન. નેટ ન્યુરોસી. 2003; 6: 1208-15. [પબમેડ]
  36. મેકક્લુંગ સીએ, ઉલરી પીજી, પેરોટી લિ, ઝેચારીઉ વી, બર્ટન ઓ, નેસ્લેર ઇજે. ડેલ્ટાફોસબી: મગજમાં લાંબા ગાળાના અનુકૂલન માટેના પરમાણુ સ્વિચ. બ્રેઇન રેઝ મોલ બ્રેઇન રેઝ. 2004; 132: 146-54. [પબમેડ]
  37. નેસ્લેર ઇજે, કેલ્ઝ એમબી, ચેન જેએસ. Δફોસબી: લાંબા ગાળાના ન્યુરલ અને વર્તણૂકીય પ્લાસ્ટિસિટીના પરમાણુ મધ્યસ્થી. મગજ રિઝ. 1999; 835: 10-17. [પબમેડ]
  38. નેસ્લેર ઇજે. વ્યસન માટે એક સામાન્ય પરમાણુ માર્ગ છે? નેટ ન્યુરોસી. 2005; 8: 1445-9. [પબમેડ]
  39. નેસ્લેર ઇજે. વ્યસનની ટ્રાન્સક્રિપ્શન પદ્ધતિઓ: ડેલ્ટાફોસબીની ભૂમિકા. ફિલોસ ટ્રાન્સ આર સોસ લોન્ડ બી બાયોલ સાયન્સ. 2008; 363: 3245-55. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  40. પેરોટીઆઈ એલઆઇ, વીવર આરઆર, રોબિસન બી, રેન્થલ ડબલ્યુ, મેઝ આઇ, યાઝદાની એસ, ઍલ્મોર આરજી, નપ્પ ડીજે, સેલલી ડી, માર્ટિન બીઆર, સિમ-સેલલી એલ, બેચેલ આરકે, સ્વ ડીડબ્લ્યુ, નેસ્લેર ઇજે. દુરુપયોગની દવાઓ દ્વારા મગજમાં ડેલ્ટાફોસબી ઇન્ડક્શનની જુદી જુદી પેટર્ન. સમાપ્ત કરો. 2008; 62: 358-69. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  41. રેન્ડો ઓજે, ચાંગ એચવાય. વર્ણનાત્મક માળખાના જીનોમ-પહોળા વિચારો. Annu રેવ બાયોકેમ. 2009; 78: 245-71. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  42. રેન્થલ ડબલ્યુ, કાર્લે ટીએલ, મેઝ 1, કોવિંગ્ટન HE, 3rd., ટ્રૂંગ એચટી, અલીભાઈ આઇ, કુમાર એ, મોન્ટગોમરી આરએલ, ઓલ્સન એન, નેસ્લેર ઇજે. ડેલ્ટા ફોસબી ક્રોનિક એમ્ફેટામાઇન એક્સપોઝર પછી સી-ફોસ જનીનનું ઇપિજેનેટિક ડિસેન્સિટાઇઝેશન મધ્યસ્થી કરે છે. જે ન્યુરોસી. 2008; 28: 7344-9. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  43. રેન્થલ ડબ્લ્યુ, કુમાર એ, ઝિયાઓ જી, વિલ્કિન્સન એમ, કોવિંગ્ટન હે, 3rd, મેઝ આઈ, સિકડર ડી, રોબિસન એજે, લાપ્લન્ટ ક્યૂ, ડાયટ્ઝ ડીએમ, રસુસો એસજે, વિઆલૌ વી, ચક્રવર્તી એસ, કોડાડેક ટીજે, સ્ટેક એ, કબબ્જે એમ, નેસ્લેર ઇજે. કોકેઈન દ્વારા ક્રોમેટિન નિયમનનું જીનોમ-વાઇડ વિશ્લેષણ, સિર્ટ્યુઇન્સ માટે ભૂમિકા દર્શાવે છે. ન્યુરોન. 2009; 62: 335-48. [પી.એમ.સી. મફત લેખ] [પબમેડ]
  44. રોટઝીંગર એસ, બુશ ડે, વેકેરિનો એફજે. મેસોલિમ્બિક ડોપામાઇન કાર્યનું ચોલેસિસ્ટોકિનિન મોડ્યુલેશન: પ્રેરિત વર્તનનું નિયમન. ફાર્માકોલ ટોક્સીકોલ. 2002; 91: 404-13. [પબમેડ]
  45. રૉર્કે આઇજે, હેન્સન ટીવી, નેરોલોવ સી, રેહફેલ્ડ જેએફ, નીલસન એફસી. Cholecystokinin જનીન પ્રમોટર્સમાં juxtaposed ઇ બોક્સ અને CAMP / TPA પ્રતિભાવ તત્વો વચ્ચે નકારાત્મક સહકાર. FEBS લેટ. 1999; 448: 15-8. [પબમેડ]
  46. શો-લચમેન ટીઝ, બારોટ એમ, વોલેસ ટી, ગિલ્ડેન એલ, ઝાચારીઉ વી, ઇમ્પી એસ, ડુમન આરએસ, સ્ટોર્મ ડી, નેસ્લેર ઇજે. Naltrexone-precipitated મોર્ફિન ઉપાડ દરમિયાન CRE-mediated ટ્રાન્સક્રિપ્શનનો પ્રાદેશિક અને સેલ્યુલર મેપિંગ. જે ન્યુરોસી. 2002; 22: 3663-3672. [પબમેડ]
  47. શો-લચમેન ટીઝેડ, ઇમ્પી એસ, સ્ટોર્મ ડી, નેસ્લેર ઇજે. એમ્ફેટેમાઇન દ્વારા માઉસ મગજમાં CRE-mediated ટ્રાન્સક્રિપ્શનનું નિયમન. સમાપ્ત કરો. 2003; 48: 10-7. [પબમેડ]
  48. શેન એમ, મેકફેડેન જી, ગ્રીનબર્ગ એમ. ટ્રાન્સબ્રીક્શન પરિબળ સીઆરબીના ફોસ્ફોરીલેશન દ્વારા ઝાડ વિધ્રુવીકરણ અને કેલ્શિયમ પ્રેરિત સી-ફોસ ટ્રાન્સક્રિપ્શન. ન્યુરોન. 1990; 4: 571-82. [પબમેડ]
  49. તાંકોવા એનએમ, કુમાર એ, નેસ્લેર ઇજે. તીવ્ર અને દીર્ઘકાલીન ઇલેક્ટ્રોકોવ્વાલિવ હુમલાઓ પછી ઉંદર હિપ્પોકેમ્પસમાં જીન પ્રમોટર વિસ્તારોમાં હિસ્ટોન ફેરફાર. જે ન્યુરોસી. 2004; 24: 5603-10. [પબમેડ]
  50. ઉલેરી પીજી, નેસ્લેર ઇજે. સેરેક્સ્યુએક્સ ફોસ્ફોરિલેશન દ્વારા ડેલ્ટાફોસબી ટ્રાન્સક્રિપ્શન પ્રવૃત્તિનું નિયમન. યુઆર જે ન્યુરોસી. 27; 2007: 25-224. [પબમેડ]
  51. Vaccarino એફજે. ન્યુક્લિયસ મનોવિશ્લેષક પુરસ્કાર અને સંબંધિત વર્તણૂંકમાં ડોપામાઇન-સીસીકે ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓને સંમિશ્રિત કરે છે. ન્યુરોસી બાયોબહેવ રેવ. 1992; 18: 207-14. [પબમેડ]
  52. ઝાચારીઉ વી, બોલોનોસ સીએ, સેલેલી ડી, થિયોલોબલ ડી, કેસિડી એમપી, કેલ્ઝ એમબી, શો-લચમેન ટી, બર્ટન ઓ, સિમ-સેલલી એલજે, ડાયલોન આરજે, કુમાર એ, નેસ્લેર ઇજે. Δ ફોસબી: મોર્ફાઇન ક્રિયામાં ન્યુક્લિયસમાં ΔFOSB માટે આવશ્યક ભૂમિકા. કુદરત ન્યુરોસી. 2006; 9: 205-11. [પબમેડ]