જે ન્યુરોકેમ. 2014 જાન્યુ; 128 (1): 173-85. ડોઇ: 10.1111 / jnc.12381. ઇપુબ 2013 ઓગસ્ટ 21.
લિયુ ક્યુઆર1, રૂબી એફજે, બોસર્ટ જેએમ, માર્ચન્ટ એનજે, ફાનસ એસ, હોઉ એક્સ, શાહમ વાય, આશા છે બીટી.
અમૂર્ત
મેથામ્ફેટામાઇન અને અન્ય દવાઓ મગજમાં તમામ ચેતાકોષોના નાના પ્રમાણને સક્રિય કરે છે. અમે અગાઉ ન્યુરોઅલ પ્રવૃત્તિ માર્કર વ્યક્ત કરતા સક્રિય ચેતાકોષમાં પસંદ કરાયેલા પરમાણુ ફેરફારોને આકાર આપવા માટે ફ્લોરસેન્સ-સક્રિય સેલ સૉર્ટિંગ (એફએસીએસ) આધારિત પદ્ધતિ વિકસિત કરી હતી. જો કે, આ પધ્ધતિને ઘણા ઉંદરોમાંથી નમૂના પૂરા પાડવાની જરૂર છે. મલ્ટીપ્લેક્સ પ્રિ-એમ્પ્લિફિકેશન વ્યૂહરચનાનો ઉપયોગ કરીને એક ઉંદરમાંથી ફોસ-એક્સપ્રેસિંગ ડોર્સલ સ્ટ્રેટલ ચેતાકોષમાં આણ્વિક ફેરફારોને વર્ણવવા માટે અમે હવે સુધારેલ FACS- આધારિત પદ્ધતિનું વર્ણન કરીએ છીએ.
ફોસ અને ન્યુન (ન્યુરોનલ માર્કર) ઇમ્યુનોહિસ્ટૉકેમિસ્ટ્રી સૂચવે છે કે XORX-5% ડોર્સલ સ્ટ્રાઇટમ ચેતાકોષ તીવ્ર મેથેમ્ફેટેમાઇન ઇંજેક્શન (6 મિલિગ્રામ / કિલોગ્રામ, આઈપી) પછી 90 મિનિટ સક્રિય થયા હતા જ્યારે 5% કરતા ઓછા ન્યૂરોન્સ સોલિન ઈન્જેક્શન દ્વારા સક્રિય કરવામાં આવ્યા હતા.
અમે ફૉસ-પોઝિટિવ અને ફોસ-નેગેટિવ ચેતાકોષો અને નિયત એમઆરએનએ અભિવ્યક્તિમાં ન્યુ-લેબલવાળા ચેતાકોષોને પાંચ ફૉઝ-પોઝિટિવ ચેતાકોષોથી ઓછાથી અલગ કરવા માટે એફએસીએસનો ઉપયોગ કર્યો. મેથામ્ફેથેમાઇન પ્રેરિત પ્રારંભિક પ્રારંભિક જનીનો આર્ક, હોમર-એક્સ્યુએનએક્સ, સી-ફોસ, ફોસબી, અને તેના આઇસોમર્મ્સના 3-20-ΔfosB અને નવલકથા આઇસોફોર્મ ΔfosB-2) ફોસ પોઝિટિવમાં પરંતુ ફૉસ-નેગેટિવ ચેતાકોષો નહીં. એક જ ડોર્સલ સ્ટ્રાઇટમ હોમોજેનેટસમાંથી અનૉર્ટ કરેલા નમૂનામાં આકારણી કરતી વખતે તરત પ્રારંભિક જનીન એમઆરએનએ ઇન્ડેક્શન 10-fold ઓછું અથવા ગેરહાજર હતું. અમારી સુધારેલી પદ્ધતિ જટિલ વ્યસન મોડલ્સમાં દવાઓ અથવા ડ્રગ-સંબંધિત સંકેતો દ્વારા સક્રિય ચેતાકોષમાં અનન્ય પરમાણુ ફેરફારને અભ્યાસ કરવાનું શક્ય બનાવે છે.
મેથામ્ફેટામાઇન અને અન્ય દવાઓ મગજમાં તમામ ચેતાકોષોના નાના પ્રમાણને સક્રિય કરે છે. અમે ન્યુરલ પ્રવૃત્તિ માર્કર ફોસને વ્યક્ત કરતા સક્રિય ચેતાકોષમાં પસંદ કરેલા પરમાણુ ફેરફારોને વર્ણવવા માટે એક સુધારેલી પદ્ધતિની જાણ કરીએ છીએ. અમે એક ઉંદર ડોર્સલ સ્ટ્રાઇટમમાંથી 5 ફોસ-એક્સપ્રેસિંગ ચેતાકોષો જેટલા થોડા ઓછા તીવ્ર મેથેમ્ફેટેમાઇન-પ્રેરિત જીન અભિવ્યક્તિના મૂલ્યાંકન માટે લક્ષિત પીસીઆર પ્રિ-એમ્પ્લિફિકેશન સાથે એફએસીએસનો ઉપયોગ કર્યો. મેથેમ્ફેમામાઇન ફોસ-પોઝિટિવમાં તાત્કાલિક પ્રારંભિક જનીનો (આઇઇજી) ની 3-20-fold વધારીને પરંતુ ફોસ-નેગેટિવ ચેતાકોષો નહીં. લક્ષિત પીસીઆર પ્રી-એમ્પિફિકેશન એ જટિલ વ્યસન મોડેલ્સમાં ડ્રગ અથવા ડ્રગ-સંબંધિત સંકેતો દ્વારા સક્રિય ચેતાકોષમાં અનન્ય પરમાણુ પરિવર્તનોનો અભ્યાસ કરવાનું શક્ય બનાવે છે.
પ્રકાશિત 2013. આ લેખ યુએસ સરકારનો કાર્ય છે અને તે યુએસએમાં જાહેર ડોમેનમાં છે.